Biologia Celular y Molecular

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.m
m
o
c
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Mapas conceptuales
e y tablas
t
u
.g sintticas
w
Maestro en w
Ciencias Bioqumicas
wGenaro Matus Ortega
n
e
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n
t a
s
i
v
Autor: Maestro en Ciencias Bioqumicas Genaro Matus Ortega. Asesor del grupo GUTE: www.gute.com.mx
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c
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u
Primera parte
n
e DESARROLLO DE
HISTORIA Y
s
LA BIOLOGA
MOLECULAR
o
n
t a
s
i
v
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HISTORIA
m
o
c
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e
.g
t
u
Genes ligados,
Genes auto y gonosmicos,
Herencia citoplsmica,
s
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e
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Segunda parte
n
e DE ADN Y ARN:
ESTRUCTURA
s
PROPIEDADES
DERIVADAS
o
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s
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v
Estructura de la doble hlice
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Purinas
m
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Adenina
c
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Guanina
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s
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Purinas
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Pirimidinas
m
o
Adenina
Guanina
Timina
Citosina
.g
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u
c
.
e
Uracilo
Timina = uracilo metilado

Citosina = uracilo aminado
Timina uracilo citosina
s
o
n
n
e
t a
s
i
v
Purinas
x
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Pirimidinas
m
o
Adenina
Guanina
Timina
Citosina
Pentosa
.g
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c
.
e
Uracilo
Ribosa
RNA
s
o
n
n
e
2-Desoxiribosa
s
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v
t a
DNA
Aldopentosa
x
.m
ESTRUCTURA
Estructura del ADN
m
o
Caractersticas del modelo de Watson y Crick (1953)
c
.
e
1.- El DNA est formado por 2

cadenas de polinucleotidos
2.- cada cadena consiste de un
grupo fosfato unido a un residuo
de -D-desoxirribosa y una
base nitrogenada
3.- las cadenas forman una

doble hlice antiparalela
4.- Cada cadena se encuentra
de forma perpendicular al eje.
5.- la doble hlice tiene un
dimetro de 20 A (2nm)
s
o
n
6.- la doble hlice gira hacia la

derecha del eje siguiendo la
orientain de los azucares.
t a
s
i
v
n
e
.g
t
u
7.- por cada 10 pares de bases, la

doble hlice da una vuelta
completa con una dimensin
lineal de 34 A.
8.- las bases nitrogenadas se
orientan hacia el interior y las
pentosas y fosfatos al exterior
9.- la complementaridad de las
bases cumple las leyes de
Chargaff (pares purina-pirimidina)
10.- las cadenas de polinucleotidos se unen por puentes de H.
11. Los enlaces fosfatodesoxirribosa estn polarizados en

sentido opuesto 5-3 y 3-5
x
.m
ESTRUCTURA
Estructura del ARN
3 tipos de RNA
participan en la sntesis
de protenas.
Contenido de RNA
en la clula
BACTERIAS: 0.5-0.10 pg de
RNA, 6% de su peso total
tRNA
Existen 4 tipos en
eucariontes: 18SrRNA,
28SrRNA, 5.8S y 5SrRNA
t a
s
o
n
t
u
mRNA.
Contiene al mansaje
gentico que determina la
secuencia de amino cidos
en la sntesis de protenas.
.g
c
.
e
Existen diversas copias

para cada gen de tRNA
(redundancia de genes).
EUCARIOTAS: 20-30 pg de
RNA, 1% de su peso total
n
e
Existen 32 tipos de tRNA en clulas

eucariontes, son pequeos (-4S)
rRNA
Presenta cerca del 70% del

RNA total.
m
o
Procesamiento de los
preRNA---- RNAm.
Cada tipo de tRNA

transporta (en su
extremo 3) uno de
los 20 aminocidos
Splicing:
remocin de
intrones.
Eventos de corte:
procesamiento de
rRNA y tRNA
Modificaciones
qumicas: adicin
de grupos
qumicos.
Edicin del RNA:
Modificaciones
quimicas *citidin
desaminasaconvierte una C a U
Small interfering RNAs (siRNAs)
is
2 fuentes principales de RNA antisentido
Micro RNAs (miRNAs)
Desnaturalizacin del ADN
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Desnaturalizacin del ADN
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Tasas de reasociacin del DNA
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n
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s
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v
Segn su grado de asociacin existen

diferentes fracciones genmicas:
A) Componente rpido. Primera fraccin

de reasociacin. Que representa el 25
% del genoma.
B)
Componente intermedio. Segunda

fraccin que corresponde al 30 % del
genoma total.
C) Componente lento. La ltima fraccin

en renaturalizarse y supone el 45 %
restante del genoma total.
Esto significar algo?
x
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Secuencias repetidas y no repetidas
m
o
c
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s
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n
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v
Las secuencias de renaturalizacin lenta generalmente son regiones de DNA

no repetitivas y casi todas las veces codificantes.
Segn el grado de repeticin las secuencias de DNA se clasifican en:
A) DNA repetitivo: si estn presentes en ms de una copia.
B) DNA moderadamente repetitivo: si tienen un rango de reasociacin moderado
C) DNA altamente repetitivo: Representa la fraccin de reasociacin rpida y son

producto de la reasociacin de secuencias cortas localizadas en tandem en
frecuencias de repeticin mltiple.
En este grupo tambin se encuentra el DNA satlite que consiste de regiones cromosmicas
centromricas inertes (no se transcriben).
El DNA microsatelite corresponde a fragmentos ms cortos de DNA de alta asociacin.
El DNA minisatlite o VTNR y las secuencias cortas forman parte de este DNA.
Genes y genomas
Concepto fundamental:
Definicin:
Gen
Secuencia de DNA que codifica

para un RNA funcional.
Genoma
Conjunto de genes codificados

en el DNA.
Secuencias no codificantes
Secuencias regulatorias de la
duplicacin, transcripcin o
control epigentico.
.g
Cistron
Unidad monognica.
Policistron
Unidad polignica dependiente

de un promotor.
s
o
n
Valor C
c
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n
e
m
o
Complementario:
Densidad gnica y genmica
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.m
Contiene informacin
extrnseca e intrnseca.
OriC, ARS, ACS, Intron,

Promotor, Terminador,
DNA espaciador
Cis-trans (un promotor controla

la expresin de un gen).
Cantidad total de DNA en el

genoma
Paradoja del valor C
t a
s
i
v
No correspondencia entre el
tamao del genoma y el nmero
de genes.
x
.m
On the fate of duplicated genes
m
o
c
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e
Nonfunctionalization
t a
s
o
n
90% loose function
9% subfunctionalizatin
s
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Neofunctionalization
n
e
deletereous mutagenesis
Subfunctionalization
conservation
Lynch et al. (2001) Genetics
1% neofunctionalization
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Familias gnicas
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Tercera parte
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CONTROL eDE LA CROMATINA
s
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.m
Organizacin del DNA

en clulas eucariontes
Modelos de
interaccin
nucleosoma - DNA
El DNA se asocia a
protenas llamadas
HISTONAS
.g
c
.
e
t
u
*ricos en hlices
*formacin de
heterodmeros:
H3-H4. H2A-H2B.
Es la unidad mnima de
construccin de cromatina,
involucra todas las histonas
excepto la H1.
Histonas H1
Histonas
nucleosomicas:
Estructura
de la
cromatina
H2A, H2B, H3, H4
s
o
n
t a
Eucromatina (A)
is
CROMOSOMA
m
o
El bloque de construccin de la
cromatina es el nucleosoma
n
e
Heterocromatina
*residuos de fosfato
interaccionan con las
histonas.
*interacciones
electrostaticas y
puentes de H.
Los extremos amino de

las histonas pueden ser
modificadas por enzimas:
Acetilacin, Metilacin, Fosforilacin.
Regiones de cromatina en metafase
dimeros
Octameros
(nucleosoma)
Cubre 200 pares de bases.
Collar de cuentas
solenoide
Asas de cromatina
x
m
La subunidad que se repite en la estructura
.
de la cromatina es el nucleosoma m
o
c
.
e
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.g
w
w
w
n
e
s
o
n
t a
s
i
v
DNA
espaciador
165pb
Los trabajos de A. Klug y colaboradores (1980) sobre la disposicin de

las histonas en el nucleosoma le valieron el Premio Nobel de Qumica
(1982).
x
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m
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s
o
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n
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s
i
v
x
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DNA
m
o
Nucleosoma
c
.
e
Fibra de 30 nm (300 ) o
solenoide
Asas o Bucles radiales de

DNA
s
o
n
t a
s
i
v
n
e
.g
t
u
Las fibras de 30 nm se unen a

un
armazn
proteco
en
regiones especificas llamadas
SAR [regiones asociadas con el
armazn o regiones de unin a
la matriz (MAR)].
x
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m
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v
CONCEPTO
CONCEPTO NECESARIO
CROMATINA
(solo presente en Eucariotas)
Conjunto de ADN, histonas y

protenas.
HISTONAS
Principal protena presente en las

cromatinas.
.g
Conjunto de octamero de histonas

que involucran todas menos la H1
EUCROMATINA
Representa la forma activa de la

cromatina.
HETEROCROMATINA
Representa la forma inactiva de la

cromatina.
s
o
n
REGIONES Y TERRITORIOS NUCLEARES
t a
s
i
v
n
e
m
o
CONCEPTO COMPLEMENTARIO
Se encuentran en el ncleo de
clulas eucariontes y constituyen el
cromosoma eucarionta.
NUCLEOSOMA
x
.m
c
.
e
t
u
Tienen carga positiva.

Ricas en lisina y Argina
Consecuencia de genomas grandes
Protenas mas conservadas en
eucariontes
Cubre 200 pares de base
Esta diseminada por el resto del
ncleo y aqu se encuentran la
mayora de genes activos.
Se localiza en la periferia del ncleo
y puede ser de dos tipos:
constitutiva y facultativa.
Nuclelos,
Dominios OPT,
Cuerpo PcG
Cuerpo PML,
Cuerpos de Cajal,
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c
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Estructura del nucleonema
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c
.
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u
.g
w
w
w
n
e
s
o
n
t a
is
Nucleolo
No tiene membranas
delimitantes.
Es la estructura subnuclear
ms prominente.
Produccin y ensamblaje de las
subunidades ribosomales.
Precursor de 45S
Usa protenas importadas del
citosol = RNP
FC: Centro Fibrilar
DFC: Componente denso fibrilar

GC: Componente granular
x
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m
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c
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n
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Cuerpos nucleares
m
o
c
.
e
Cuerpos de Cajal:
Orgnulos esfricos nucleares presentes en clulas en alta proliferacin
(tumorales), o metablicamente activas con alta tasa transcripcional
(neuronas).
.g
t
u
Ramn y Cajal las denomin cuerpos accesorios nucleolares, debido a su

asociacin con el nuclolo en las neuronas.
Su tamao se sita entre 0.1 - 2.0 micrometros y su nmero es de entre
uno a cinco por cada ncleo, variando a lo largo del ciclo celular y entre los
diferentes tipos celulares.
Los cuerpos celulares son posibles lugares de ensamblaje o modificacin
de la maquinaria de transcripcin del ncleo.
Se encuentran nicamente en los ncleos de plantas, animales y
levaduras.
s
o
n
n
e
t a
s
i
v
x
.m
Cuerpos nucleares
m
o
c
.
e
Los dominios OPT se relacionan con nuevas sntesis de RNA polimerasa

II y dominios que contienen protenas relacionadas con la transcripcin y
factores de transcripcin TFIIH, Oct1, BRG1, E2F-1, estos pueden
representar complejos de iniciacin de transcripcin incompletos, complejos
inhibitorios, o sitios del almacenamiento.
.g
t
u
El complejo grupo Polycomb (PcG, o cuerpo PcG) es una asociacin

cromatina multiproteica relacionada con la represin estable de mutaciones
hometicas, adems de ser un complejo de represin transcripcional.
s
o
n
n
e
t a
s
i
v
x
.m
Cuerpos nucleares
m
o
c
.
e
Las manchas -nuclear speckles- son estructuras intranucleares

caracterizadas por concentraciones altas de pre-mRNA, aunque su funcin
es polmica, existe evidencia fuerte de que son sitios que unen piezas de
almacenaje o ensamblaje.
.g
t
u
Cuerpos PML. Cuerpos nucleares promielocticos, donde se sintetiza la

protena PML (882 residuos de aa, 97,5 kDa), cuya su funcin principales la
supresin del crecimiento celular.
n
e
Posee otras funciones relacionadas con la regulacin de genes e

implicacin en las vas de supresin tumoral y, por tanto, de la inhibicin del
crecimiento celular.
s
o
n
t a
s
i
v
x
.m
Cuerpos nucleares
Control de la expresin gnica
m
o
c
.
e
MEMORIA CELULAR: modificacin qumica de la

cromatina
Mediante acetilacin, fosforilacin, que permiten

encender y apagar diferentes genes para formar un
tejido especfico
DIFERENCIACI
DIFERENCIACIN Y ESPECIALIZACI
ESPECIALIZACIN CELULAR:
proceso de remodelacin de la cromatina
Determina caractersticas estructurales y funcionales

distintas
ENVEJECIMIENTO CELULAR: mediado por genes
Lleva a 2 tipos de muerte: apoptosis y necrosis
CELULAS TOTIPOTENCIALES
CELULAS MULTIPOTENCIALES
CELULAS OLIGOPOTENCIALES
CELULAS DIFERENCIADAS
CELULAS ESPECIALIZADAS
s
o
n
INSULATOR
ENHANCER
n
e
t a
SILENCER
LCR
.g
t
u
s
i
v
x
.m
m
o
c
.
e
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u
Cuarta parte
n
e Y REPARACIN
DUPLICACIN
s
DEL DNA
o
n
t a
s
i
v
x
m
.
Cmo es la replicacin del DNA?
m
o
c
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e
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w
w
w
n
e
s
o
n
t a
s
i
v
x
.m
El oriC
m
o
c
.
e
El origen de replicacin bacteriano se denomina OriC y corresponde a 245

pb.
Tiene las siguientes caractersticas:
Es una secuencia rica en A y T.
.g
t
u
Presenta 4 cajas de reconocimiento a DnaA (R1-R4 nonmeros repetidos).
n
e
Tiene 3 repeticiones de trecemeros que permiten la disociacin del DNA.
s
o
n
Posee secuencias palindrmicas GATC de reconocimiento para las

metilasas de Adenina (DAM)
t a
s
i
v
x
.m
m
o
Proteina DnaA
- multicomplejo (10-20)
- ATP
- se une a los repetidos de 9 pb del
OriC
- provoca la separacin de las
cadenas de los repetidos de 13 pb
c
.
e
s
o
n
t a
s
i
v
n
e
.g
t
u
Proteina DnaC
- escolta la DnaB a las DnaA
Proteina DnaB (Helicasa)
- hexamero
- ATP
- abrazadora alrededor de cad.
sencillas
- se desplaza a lo largo del DNA para
separar las cadenas en el sentido 5-3
Inicio de la replicacin
x
.m
m
o
c
.
e
Protena:
Funciones:
DnaA:
1.- Reconocimiento de OriC,

2.- Curvatura, desestabilizacin y apertura del DNA,
3.- Reclutamiento de DnaB y DnaC.
DnaB, DnaC
.g
t
u
1.- Helicasas que impiden la reasociacin del DNA,

2.- Permiten el reclutamiento de SSB y de la DnaG
(primasa).
SSB
n
e
1.- Impide la reasociacin de las hebras de DNA,

2.- Permite la liberacin de DnaA (pre-primosoma)
s
o
n
DnaG
t a
s
i
v
1.- Slo se integra si DnaC ha sido retirado.

2.- Coloca el cebador de RNA. Define la formacin
del primosoma.
primosoma
x
m
.
Crecimiento de DNA y RNA 53
m
o
c
.
e
t
u
.g
w
w
w
n
e
s
o
n
t a
s
i
v
Se requiere un extremo 3-OH
libre para que ocurra el ataque
electroflico sobre el alcohol.
El crecimiento de cada cadena

es unidireccional.
La doble hlice crece de
manera bidireccional
x
m
.
Elongacin de la replicacin
m
o
c
.
e
t
u
.g
w
w
w
n
e
s
o
n
t a
s
i
v
Protena:
Funciones:
Hda/Ida:
Permiten que se retire las DnaA
DnaG
Coloca el primer (iniciador, cebador, prmero) de 10-12

nucletidos de RNA sobre el molde de DNA.
Se requiere para dejar un extremo 3-OH.
Dnapol III
Toma el extremo 3-OH dejado por la primasa y

polimeriza DNA en ambas cadenas (lder continua,
retrasada discontinua F. Okazaki).
Okazaki
F y x permiten la retirada de SSB.
Dnapol I (Rnasa)
Retira los fragmentos de RNA.
Dnapol I (polimerasa)
Rellena los huecos dejados por la actividad de RNAsa.
Dna Ligasa
Sella los fragmentos de Okazaki.
x
.m
Hay dos propiedades importantes de las DNA POLIMERASAS:
m
o
FIDELIDAD Y PROCESIVIDAD
c
.
e
FIDELIDAD:
El seguimiento exacto de la secuencia
que sirve como molde.
La actividad de exonucleasa
3 5 de
la DNA polimerasa contribuye a la
fidelidad pues tiene actividad correctora
(proofreading).
.g
t
u
PROCESIVIDAD:
s
o
n
n
e
La capacidad de una DNA polimerasa de elongar una cadena de DNA por

muchos nucletidos antes de disociarse del complejo que forma con el sustrato.
La DNA polimerasa I tiene una procesividad baja. Es distributiva.
t a
La DNA polimerasa III tiene una procesividad alta.
s
i
v
La DNA polimerasa III est compuesta por varias subunidades
x
.m
Subunidad : 129 kDa, tiene actividad de DNA polimerasa

Subunidad : 27.5 kDa, tiene actividad de exonucleasa 3 5
m
o
c
.
e
Subunidad : 41 kDa, se une al DNA. Es el factor de procesividad

Subunidad : Factor de dimerizacin
Subnidad : cargado de la hebra de DNA.
.g
t
u
s
o
n
n
e
Permiten que
se retire SSB
t a
En ausencia de la subunidad , la DNA Pol III tiene muy baja procesividad, pues se
disocia del molde
s
i
v
x
m
.
Termino de la replicacin
m
o
c
El fin de la replicacin es mediada por secuencias
TerC
.
ricas en A y T que pueden retrasar
e el avance los
t
replisomas debido a la unin de protenas
Ter y Tus
T que
u
muestran una unin cooperativa.g
al DNA.
w
La metilacin-desmetilaciw
n del OriC permite controlar
w cada replicacin del DNA
los ciclos de inicio de
procarionte.
n
e
s
La disponibilidad
de las DnaA y los dems factores que
o
forman el pre-primosoma
constituyen un mecanismo de
n
regulacin.
t a
s
i
v
x
.m
Eucariotas = ms genoma (DNA + protena)
m
o
c
.
e
.g
t
u
s
o
n
t a
s
i
v
n
e
oriC
Ter
x
.m
m
o
Tres caractersticas comunes de los orgenes de

replicacin de procariontes y eucariontes
c
.
e
.g
t
u
1) Son segmentos de DNA singulares que contienen mltiples secuencias

repetidas cortas
2) Estas unidades repetitivas cortas son reconocidas por protenas

multimricas ORC (origin recognition complex) que reconocen regiones ARS
(Autonomously Replicating Sequence) que se unen al origen para iniciar la
replicacin
s
o
n
n
e
3) Las orgenes de replicacin suelen ser regiones ricas en AT, lo que facilita
la desnaturalizacin del duplex de DNA (menos energa).
t a
s
i
v
Eucariontes Inferiores - Secuencia de replicacin autnoma

de S. cerevisiae: ARS (Autonomously Replicating Sequence)
B1
m
o
c
.
e
5- (A/T)TTTAT(A/G)TTT(A/T) -3
x
.m
.g
B2
t
u
B3
ARS consensus sequence (ACS)
n
e
- mutaciones puntuales inhiben el inicio de la replicacin

- Sitio de unin del ORC (Origin Recognition Complex), 6
s
o
n
protenas que forman la maquinaria de iniciacin de la replicacin)
t a
- cada 40 kb
- aprox. 400 orgenes de replicacin en los 17 cromosomas de S. cerevisiae
s
i
v
- activacin sucesiva de las diferentes ARS: regulacin

x
.m
Cdc6 + Cdt1
Xenopus
ORC (6 protenas)
m
o
origen
Degradacin
ciclinas
Ciclina E/Cdk2 >> Inhibe unin de M/G2

Mcm2-7 (Cdc6)
Germinina >> secuestra Cdt1
s
o
n
t a
s
i
v
n
e
t
u
sntesis
ciclinas y
activacin
Cdk
G1
.g
c
.
e
Helicasas Mcm2-7
S
- Fosforilacin Cdc6
y liberacin
- Fosforilacin ORC y
Mcm2-7
-Associacin Cdc45
P
P
P
Cdc45
P
1.-
x
Control positivo de la replicacin en eucariontes m
.
m
o
c
.
e
t
u
.g
w
w
w
n
e
s
o
n
t a
s
i
v
Acumulacin
de
protenas
permisivas en el ncleo en G1:
- CDC-6 y CDT-1, las cuales se unen al

ORC y reclutan las helicasas MCM
- helicasas MCM se unen al DNA y

catalizan su desenrollamiento
2.- Una vez que empieza la replicacin

en la fase S:
- CDC-6 y CDT-1 se despegan del ORC

(por fosforilacin)
- MCM progresan con el avance de la

horquilla de replicacin
x
Control negativo de la replicacin en eucariontesm
.
m
o
c
.
e
t
u
.g
w
w
w
n
e
s
o
n
t a
s
i
v
En la clula en fase M/G2 se impide la activacion del ORC, a travs de ctd1 y el

reclutamiento de las helicasas MCM a las nuevas cadenas de DNA.
Por tanto no se puede iniciar la replicacin.
Complejo
pre-replicativo
- Ciclina Cdc6, regulador

positivo no fosforilado
(Expresin alta en G1)
- Ctd1
Helicasa Mcm2-7
En G1, la germinina es degradada, de tal manera que el DNA de la clula

pueda responder al control positivo por las protenas permisivas y iniciar su
replicacin
x
.m
cadena en extensin, incompleta

AACCCC-5
TTGGGGTTGGGGTTGGGGTTG-3
Cromosoma
telomero
cadena molde
TELOMERASA
c
.
e
m
o
Telomerasa con
templado
3
5 de RNA
AACCCC-5
ACCCCAAC
TTGGGGTTGGGGTTGGGGTTG-3
.g
t
u
3
5
AACCCC-5
ACCCCAAC
TTGGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGGTTG-3
n
e
Elongacin
extremo 3
por la
telomerasa
Primer RNA
CCAAC
AACCCC-5
Adicin primer RNA
TTGGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGGTTG-3
s
o
n
t a
Extensin
DNA polimerasa
cadena
AACCCC-5
CCCAACCCCAACCCCCAAC-5
retrasada por
TTGGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGGTTG-3 la polimerasa
s
i
v
x
.m
m
o
c
.
e
.g
t
u
n
e DNA
DAO EN EL
s
o
n
t a
s
i
v
x
.m
m
o
c
.
e
.g
t
u
s
o
n
n
e
t a
s
i
v
x
m
.
AGENTES INDUCTORES DE DAO
m
o
Fsicos:
c
.
Radiacin ultravioleta
e
t
u
Radiacin ionizante
g
.
Radiacin nuclear
w
Qumicos:
w
w
Agentes qumicos
n
e
Hidrocarburos
s
Quimioteraputicos
o
n
Radicales libres
t a
s
i
v
x
Radiacin ultravioleta (200-300nm)
.m
m
o
c
.
e
t
u
.g
w
w
w
n
e
s
o
n
t a
s
i
v
Entrecruzamiento covalente de
pirimidinas adyacentes en la
misma cadena de DNA.
Generalmente son timinas.
Tambin se puede generar el

fotoproducto 6-4
Radiaciones ionizantes: Rayos X y rayos gamma.
x
.m
m
o
c
.
e
Ionizan molculas que rodean al DNA
radicales
libres
.g
t
u
algunos contienen oxgeno que tienen un electrn desapareado. Son especies

altamente reactivas y pueden atacar la molcula del DNA causando rupturas en
una o en las dos cadenas.
Tambin
pueden
qumicamente una base,
guanina.
s
o
n
modificar
como la
n
e
Generacin de 8-oxo-guanina.
Causa transversiones: GC -> TA
t a
s
i
v
Radiacin nuclear
x
.m
m
o
c
.
e
.g
t
u
n
e
Enlaces covalentes
O-P
s
o
n
Extremos
t aromos Translocaciones
s
i
v
Cncer
x
Modificacin de bases en el DNA
.m
m
o
c
.
e
t
u
.g
w
w
w
n
e
s
o
n
t a
is
Las desaminaciones pueden ser espontneas o inducidas.
x
.m
Modificacin de bases en el DNA: Desaminacin por cido nitroso.
m
o
c
.
e
.g
t
u
s
o
n
t a
Desaminacin de citosina
genera uracilo
s
i
v
n
e
Desaminacin de 5-metil
citosina genera timina
x
.m
m
o
c
.
e
.g
t
u
Tipos de Dao al
DNA. Alquilacin.
n
e
Metilacin o acetilacin de las bases en los tomos (O/N) que

participan en la formacin de puentes de H, desestabiliza la doble
hlice de DNA y hace esa zona susceptible a mutacin.
s
o
n
La presencia de estas regiones daadas puede causar detencin

de la replicacin, o si sta contina, est sujeta a errores.
t a
s
i
v
x
.m
Efectos del dao al DNA
m
o
c
.
e
.g
t
u
s
o
n
n
e
t a
Veamos la contraparte al dao
s
i
v
Dao en el DNA
CONCEPTO
CONCEPTO NECESARIO
Causados por:
Errores durante los procesos de
replicacin,
recombinacin
o
reparacin del DNA.
Cambios qumicos espontneos
Alteraciones Espontneas
c
.
e
Alteracin Espontnea: se producen de forma

natural o normal en las poblaciones
Alteracin Inducida: surgen como consecuencia
de la exposicin a mutgenos qumicos o fisicos
.g
t
u
Cambios tautomricos - Formas alternativas

isomricas de las bases nitrogenadas que
cambian el patrn de apareamiento normal.
depurinacin, desaminacin y oxidacin de
Bases.
Causados por:
Modificacin
de
Bases
en
DNA
Agentes qumicos
(desaminantes, alquilantes)
Agentes fsicos
Rayos UV (dimeros de T), Ionizante (radicales

libres), Nuclear (extremos romos)
Es un proceso constante en la
Mecanismos de Reparacin:
clula,
esencial
para
su
Directa
supervivencia ya que protege al
Apareamiento
genoma de daos y mutaciones
NER - Reparacin por Escisin de Nucletido
dainas.
Recombinacin
VER Reparacin por Escisin de Base
Alteraciones Inducidas
Reparacin del DNA
s
o
n
t a
s
i
v
m
o
CONCEPTO COMPLEMENTARIO
Alteracin o cambio en la informacin

gentica (genotipo) de un ser vivo.
Mutacin
x
.m
n
e
x
.m
m
o
c
.
e
.g
t
u
n
e DEL DNA
REPARACIN
s
o
n
t a
s
i
v
x
Mecanismos de Reparacin m
.
m
o
c
.
e
t
u
.g
w
w
w
n
e
s
o
n
a
Glucosilasas
RnasaH, Dnapol I,
Dnapol ligasa
u.v.rABC
RecA, RAD51
Glucosilasas
i
v
x
1. Reparacin directa: Fotorreactivacin
.m
m
o
c
.
e
t
u
.g
Fotoliasas
w
w
w
n
e
s
o
n
t a
s
i
v
x
1. Reparacin directa: Fotorreactivacin
.m
m
o
c
.
e
t
u
.g
Fotoliasas
w
w
w
n
e
s
o
n
t a
s
i
v
x
m
.
2. Actividad de las Glucosilasas (BER)
m
o
c
.
e
t
u
.g
w
w
w
n
e
s
o
n
t a
s
i
v
Cul OH es?
1, 2, 3, 5?
Esto lo responden
hasta los que no
son masters.
x
3. Reparacin de apareamientos errneos (MMR)
.m
m
o
c
.
e
t
u
.g
w
w
w
n
e
s
o
n
t a
s
i
v
1
1. Reconocimiento de la lesin
MutSalfa: AE, ins/del (2-8)
MutSbeta: ins/del (1-16)
2. Act. ATPasa MutSalfa libera el AE
PCNA
3. Discriminacin de la hebra (Okazaki)
RPA- SSDNA
4. Excisin y sntesis de reparacin
x
.m
4. Reparacin de excisin de nucletidos
m
o
NER-TCR
c
. Acoplada a
NER
Genmica Global
1.Reconocimiento XPC/HR23B
2. Entrada del factor TFIIH a la
Lesin
3. Ensamblaje del complejo NER
4. Helicasas actan y XPA-RPA
Interactan con la lesin
5. Endonucleasas:XPG y F
6. Remocin 25-32 n
7. Liberacin complejo
8. Sntesis y ligacin
s
o
n
.g
e
t
u
transcripcin
n
e
t a
s
i
v
x
.m
m
o
5. uvrABC
c
.
e
Mecanismo resumido:
1.- UvrA se une al DNA en la regin

daada.
2.- UvrB/UvrC tienen actividad de
endonucleasa y corta en los lados
adyacentes de la cadena liberando un
oligonucletido de unos 12-13 nts de
largo.
s
o
n
n
e
.g
t
u
3.- La regin vaca es rellenada por

una DNA polimerasa I y
t a
4.- Sellada por una DNA ligasa.
s
i
v
Eucariontes
Libre de error
Fase S y G2
x
6. Recombinacin Homloga
.m
m
o
c
.
e
t
u
.g
w
w
w
n
e
s
o
n
a
i
v
x
Intercambio de cadenas mediado
m
.
por REC A O RAD51 (sistema SOS)
m
o
c
.
e
t
u
.g
w
w
w
n
e
s
o
n
t a
s
i
v
x
.m
Ruptura
m
o
c
.
e
.g
t
u
s
o
n
n
e
t a
s
i
v
x
.m
7. Reunin de extremos no homlogos
m
o
c
.
e
Mamferos
Predispone al error
Fase GO/G1
.g
t
u
Exonucleasa ssDNA
s
o
n
n
e
t a
s
i
v
Rescata lo ms importante:
x
.m
m
o
c
.
e
.g
t
u
s
o
n
n
e
t a
s
i
v
Reparacin del DNA

Agente causal
Dao producido
U. V.
Dmeros de pirimidina (timina- timina,

citosina-timina, citosina-cistosina).
Fotoproducto 6-4.
Bultos y aductos.
8-oxo-guannina.
Transversin GC-TA.
Ruptura de cadenas (1 y 2),
Intercruzamiento.
Radiacin nuclear
Ruptura de cadenas de DNA.

Extremos romos y adhesivos.
Traslocaciones.
Alquilaciones,
metilaciones,
s
o
n
s
i
v
.g
t
u
c
.
e
Fotoreactivation (UvrABC)
NER
Recombination Repair.
BER
NER
Recombinacin
Missmatch repair (MSH,
MLH, PMS).
Recombination repair (DSB,
RPA,RAD52, RAD51).
O6-Etilguanina
Cambio en la informacin
(apareamientos errneos).
Timina -Uracilo
Direct Reversal.
Citosina Uracilo
Cambio en la informacin
(apareamientos errneos).
BER (glicosilasas)
t a
Desaminaciones
Despurinaciones
Despirimidaciones
m
o
Mecanismo de reparacin:
Radiacin ionizante
(rayos X y )
n
e
x
.m
x
m
.
Tipos de mutaciones de pares de bases
m
o
c
.
CATTCACCTGTACCA
e
t
u
GTAAGTGGACATGGT
.g
Sustitucin/ Transicin w
o Transversin
w
CATCCACCTGTACCA
w
GTAGGTGGACATGGT
n
e
s
CATCACCTGTACCA
CATATCACCTGTACCA
o
GTAGTGGACATGGT
n
GTATAGTGGACATGGT
t a
s
i
v
Secuencia silvestre
Delecin o eliminacin
Insercin
x
EFECTO DE SUSTITUCIONES EN UN GEN
.m
m
o
c
.
e
t
u
.g
w
w
w
n
e
s
o
n
t a
s
i
v
DNA molde :
RNAm
5----T A C---3
3----A T G ---5
Mutacin con
sentido errneo
Mutacin
sin sentido
Mutacin
silenciosa
Replicacin
normal
AAC
TAG
TAT
TAC
TTG
ATC
ATA
ATG
AAC
UAG
UAU
UAC
Codn de
asparagina
Codn de
terminacin
Codn de
tirosina
Codn de
tirosina
PROTENA
DIFERENTE
PROTENA
INCOMPLETA
PROTENA
NORMAL
PROTENA
NORMAL
Carcter conservativo vs no conservativo
x
.m
m
o
c
.
e
.g
t
u
n
e
LA TRANSCRIPCIN
s
o
n
t a
s
i
v
x
.m
La Transcripcin m
o
c
.
e
Proceso celular por el cual

los RNAm (y los dems
tipos
de
RNA)
son
sintetizados a partir de
una secuencia de DNA
que sirve como molde.
.g
t
u
Es el primer paso de la
expresin gnica? R =
NO.
s
o
n
n
e
Es el punto principal de
control celular de la
expresin gnica.
t a
s
i
v
La Transcripcin
DNA
t
u
(mensajero II).
Hebra molde 3-5
.g
m
o
c
.
e
Se requiere:
La enzima RNA polimerasa
x
.m
Seales de iniciacin (promotor) y de terminacin
Secuencias regulatorias.
n
e
Ribonucletidos (trifosfatados) ATP, GTP, CTP, UTP.
s
o
n
Protenas nucleares o factores de transcripcin.

-factores generales o basales de transcripcin
-protenas activadoras o represoras
t a
interaccionan con secuencias especficas de DNA (secuencias consenso)
s
i
v
x
m
.
Caractersticas de la transcripcin
m
o
c
.
e
t
u
.g
w
w
w
n
e
s
o
n
t a
s
i
v
Se copia slo una de las hebras del DNA.

La discriminacin o seleccin de la hebra a copiar est dada por los
promotores.
El super-enrollamiento negativo incrementa la potencia de los promotores.
La actividad de la Rna pol de Procariontes y Eucariontes NO requiere de un
cebador.
El transcrito resultante es idntico a la cadena complementaria a la molde
excepto en T-U.
Se requieren nucletidos trifosfatados para catalizar la reaccin de
polimerizacin en sentido 5-3.
La transcripcin es selectiva. Slo ocurre bajo control temporal en genes
especficos.
Nomenclatura: nucletido de inicio (n+1), curso abajo (+), curso arriba ().
x
.m
m
o
c
.
e
.g
t
u
n
e
LA TRANSCRIPCIN
s
o
n
t a
s
i
v
Elementos de control transcripcional en procariotes:
x
.m
m
o
Elementos Cis (Cis-acting regulatory sequences):

Secuencias de DNA con un determinado arreglo de bases. Tienen
funcin reguladora positiva o negativa.
Promotor Mnimo*
Promotor proximal*
c
.
e
.g
t
u
- Genes constitutivos (Housekeepinkg)

- Genes inducibles
Protenas Reguladoras Transactivadoras

o Factores de Transcripcin
Trans
(Trans-acting regulatory proteins)
s
o
n
n
e
Proteinas activadores o represores
t a
s
i
v
Elementos de control transcripcional en eucariotes:
x
.m
m
o
Elementos Cis (Cis-acting regulatory sequences):

Secuencias de DNA con un determinado arreglo de bases. Tienen
funcin reguladora positiva o negativa.
Promotor Mnimo*
Promotor proximal*
Potenciadores (Enhancers)*
Silenciadores*
Elementos de Respuesta*
c
.
e
.g
t
u
Protenas Reguladoras Transactivadoras

o Factores de Transcripcin
Trans
(Trans-acting regulatory proteins)
s
o
n
n
e
Factores Generales de transcripcin*

Proteinas activadores o represores
t a
* Slo presentes en eucariotas.
s
i
v
x
.m
La enzima que sintetiza RNA es la RNA POLIMERASA

(Samuel Weiss y Jerard Huwitz, 1960)
m
o
La enzima de E. coli tiene 4 tipos de subunidades
c
.
e
Holoenzima formado por:

: Reconocimiento del promotor
especfico
n
e
.g
t
u
: ensamblaje de las unidades y unin al

promotor
s
o
n
: Se une al DNA
: Sintetiza el RNA
: estabiliza la unin de con 2-
t a
s
i
v
Es susceptible a inhibicin por: RIFAMPICINA y ACTINOMICINA D

x
m
.
Inhibidores de las RNA polimerasas
m
o
c
.
e
t
u
.g
w
w
w
n
e
s
o
n
t a
s
i
v
Derivado de la rifamicina
B
ojo
Anticancergeno-Quimioterapia
Precursor de amatoxinas
x
Inicio de la transcripcin.m
m
o
c
.
e
t
u
.g
w
w
w
n
e
s
o
n
a
La subunidad sigma reconoce la caja de Pribnow en el promotor

procarionte.
Alfa permite el ensamblaje de las otras subunidades de la Rna pol.
Se une la subunidad b al DNA y b aade 9-10 nt.
Elementos de la regin promotora:
promotora
Regin -10 TAT AAT (caja de Pribnow)

Regin -35 TCT TGA CAT
Separacin de ambas cajas (16-19 pb).
Velocidad 20-50 nt
Error 10-4 a 37.
RNA
pol
i
v
x
.m
Elongacin:
m
o
1.- Se disocia la subunidad de la RNA polimerasa.

2.- Comienza la adicin de ppp G o ppp A, en el extremo 5
del RNA naciente.
ATP
GTP
UTP
CTP
DNA
(como molde)
Polimerasa del RNA

dirigida por DNA
(Mg++)
nPPi
Sustratos
s
o
n
n
e
c
.
e
t
u
5
3
pppApUpCpCpCpGpU
.g
RNA
(tipo, longitud y
secuencia de este RNA
dependen del gen de
DNA que se est
transcribiendo)
3.- Se aaden ribonucletidos polimerizndose la cadena a

travs de enlaces fosfodister (la cadena va creciendo en la
direccin 5 3)
t a
El RNA que se va copiando del DNA se llama transcrito
s
i
v
x
.m
4.- La burbuja de transcripcin va avanzando, por un lado

se abre el DNA duplex y por el otro se re-bobina.
5.- El RNA sintetizado va formando un hbrido (transitorio),
con la cadena 3 5 del DNA
m
o
c
.
e
RNA polimerasa
Rebobinado
t
u
Desenrollado
Hebra codificadora
Hebra molde
Hlice hbrida
RNA - DNA
5 ppp
n
e
RNA
naciente
.g
3
Punto de
elongacin
Desplazamiento de
la polimerasa
s
o
n
BURBUJA
DE TRANSCRIPCIN
t a
s
i
v
x
m
.
Termino de la transcripcin:
m
o
c
.
e
t
u
.g
w
w
w
n
e
s
o
n
t a
s
i
v
La Rna pol deja de aadir RNA

La Rna pol se disocia del DNA
Secuencias de terminacin en 5 respecto al sitio de

terminacin.
Dos tipos de terminadores respecto al DNA:
Intrnsecos:
Extrnsecos:
x
m
.
Terminacin en procariontes
m
o
c
.
e
t
u
.g
w
w
w
n
e
s
o
n
t a
s
i
v
Terminadores intrnsecos:
Serie de 4-10 nt AT consecutivos en 5.
Estructura secundaria en forma de horquilla (harpin)
Sucesin de 6 U al final de la horquilla.
Generalmente regin rica en GC (palindrmica) en la base del tallo.
Terminadores dependientes de Rho:

Rho acta como hexmero y tiene actividad de helicasa dependiente de
ATP.
Se une a regiones de 50-90 pb en posicin 5 respecto al terminador ricas
en C y pobres en G.
Rho avanza en direccin 3 y desestabiliza la unin de la RNApol cuando
llega a la regin terminadora.
La desestabilizacin se debe a la disociacin del hbrido DNA:RNA
Es apoyada por NusA que reconoce a box A.
Independiente de Rho
x
.m
m
o
c
.
e
.g
t
u
s
o
n
n
e
Tramo de uridinas
contiguas
t a
s
i
v
x
.m
Terminacin dependiente de Rho:
m
o
1.- La RNA polimerasa encuentra seales de terminacin en el DNA

(regin Palindrmica rica en GC y luego en AT).
2.- El RNA se disocia del molde.
3.- La RNA polimerasa se disocia del DNA.
4.- La protena rho, hidroliza ATP en presencia de RNA o DNA de una
sola hebra, rompiendo el DNA del RNA
c
.
e
.g
t
u
s
o
n
n
e
t a
s
i
v
x
.m
Independiente de Rho
m
o
Palndrome
rico en GC:
horquilla
c
.
e
Informacin
estructuraldesestabilizacin.
Secuencia rica
en (T): lineal
Informacin
posicional
El ITP (anlogo
del GTP) impide
la
terminacin!
Generando
un
cambio
conformacional.
Pregntame!
.g
t
u
s
o
n
n
e
t a
s
i
v
Antiterminacin
x
.m
m
o
c
.
e
La RNA pol lee ms all de los sitios de terminacin.
t
u
Es utilizada por los fagos para regular la transicin de una

etapa de expresin gnica a otra.
.g
Protena antiterminadora (pN, pQ) que reconoce la secuencia

antiterminadora en DNA (Box B),
n
e
La protena antiterminadora interacciona con la Rna pol a

travs de protenas intermediarias.
s
o
n
t a
El complejo estabiliza a la Rna pol unida Nus A y evita la

terminacin de la transcripcin.
s
i
v
TRANSCRIPCIN EN EUCARIOTES
x
.m
m
o
En procariotes casi todos los RNAm que se van sintetizando se van

copiando en protenas (traduccin). Pero los RNA, los RNAt y todos los
RNAm de eucariontes sufren modificaciones antes de ser usados o ledos.
c
.
e
.g
t
u
s
o
n
n
e
t a
s
i
v
Anota en tu cuaderno esto:
x
.m
m
o
c
.
e
En Eucariontes hay tres tipos de RNA polimerasas
TIPO DE
POLIMERASA
t
u
GENES QUE TRANSCRIBE
.g
RNA polimerasa I
Genes de rRNA 5.8S, 18S y 28S
RNA polimerasa II
Todos los genes que codifican protenas, los Usn

RNA (1-5), los genes plus snoRNA y algunos
genes snRNA
RNA polimerasa III
Genes de tRNA, 5S-rRNA, algunos genes snRNA

y genes para otros RNAs pequeos (UsnRNA).
s
o
n
n
e
t a
s
i
v
x
.m
m
o
En Eucariontes hay tres tipos de RNA polimerasas
c
.
e
.g
t
u
s
o
n
n
e
t a
s
i
v
x
.m
Cada tipo de RNA lleva una forma diferente de PROCESAMIENTO

POST-TRANSCRIPCIONAL o MADURACIN
m
o
c
.
e
Remocin de los extremos

Modificacin de la ribosa
Modificacin de las bases
RNAt
RNAm
Euc.
PROCESAMIENTO
o MADURACIN
DIFERENCIAL
RNAr
s
o
n
n
e
.g
t
u
Empalme o splicing
Adicin del CAP en el extremo 5
Adicin del poliA en el extremo 3
Metilacin de la ribosa
Remocin de partes intermedias de un preRNAr largo que origina
varios RNAr ms cortos
t a
s
i
v
x
.m
Rna pol I
Rna pol II
Rna pol III
RNA sintetizado
RNAr (5.8, 18 y 28S)
RNAm
UsnRNA (1-5)
RNAt
RNAr
UsnRNA (6)
Localizacin
Nucleolo
Nucleoplasma
Sensibilidad a amanitina
No sensible
Muy sensible
Subunidades
comunes
2 subunidades grandes similares a y de E. coli

2 subunidades similares a de E. coli
5 subunidades comunes pero sin homlogos con E. coli
Subunidades totales
14 subunidades
s
o
n
t a
s
i
v
n
e
t
u
12 subunidades
Subunidad grande
con repeticiones en
COO- terminal.
Secuencias CTD
(carboxi teminal
domain): TSP
TS
26 repeticiones en
levaduras,
56 repeticiones en
mamferos.
.g
c
.
e
m
o
Nucleoplasma
Sensible
17 subunidades
Promotor
Rna pol II
Rna pol III
Dos regiones de
control:
Core element: -40 a
+20
Rico en GC
Elemento alrededor
del sitio de unin
(especie especfico).
Upstream control
element (UCE):
-180 a -107.
Tiene variedad de
elementos cortos en
cis:
Promotor de tRNAs:
Dentro de la
secuencia transcrita
(interna):
Caja A
Caja B
Promotor de 5s
rRNAs:
Caja A
Caja C
Promotor de
UsnRNA6
Caja TATA
PSE
OCT-1
n
e
UBF1, SL1, TBP
t a
s
o
n
s
i
v
m
o
c
.
e
Promotor mnimo.
TATA-like (-30) caja
de Golberg-Hogness.
.g
t
u
Promotor proximal:
CAAT (-80)
GGGCGG (-90) caja
GC de genes
constitutivos
Factores de
transcripcin:
x
.m
Rna pol I
Enhancers.(increment
adores,
potenciadores,
intensificadores)
TBP, TFIIB, TFIIF,
TFIIE, TFIIH, TFIIA
Pregunta:
Si se quita el
promotor mnimo
habr transcripcin?
Promotor de tRNAs:
TFIIBn (incluye TBP)
TFIIC
Promotor de 5s-rRNAs:
TFIIA, TFIIB, TFIIIC.
Inicio de la
transcripcin:
Rna pol II
Rna pol III
No requiere hidrlisis de
ATP.
1. Unin de UBF1 a
UCE y en el core.
2. SL1 (TBP-TAF
complex) se une a
UBF1 de forma
cooperativa para
extender la regin de
ADN que es cubierta.
3. Se disoscia hRRN3.
4. Se une la Rna pol I.
5. Se requiere la TIF
para iniciar la adicin
del primer nt.
1. Unin de TBP a la
caja
de
GoldbergHogneess.
TBP interacta con el
surco menor del Dna en
las TATA y curba la
doble hlice.
2. Unin de TFIIB.
El
C-terminal
interacciona con TBP y
DNA. El N-terminal se
extiende hacia el sitio
de
inicio
de
la
transcripcin.
3. Unin de TFIIF.
Provoca
el
reclutamiento
de
la
RNApol II.
4. Unin de TFIIE:
Permite reclutar TFIIH.
5. Unin de TFIIH:
TFIIH tiene actividad de
helicasa y ATPasa,
comienza la sntesis de
RNA.
6. La RNA pol se libera
de casi todos los TFs.
No requiere hidrlisis de
ATP.
tRNAs:
1. TFIIC reconoce los
elementos control.
2. TFIIB se une a TFIIC
y dirige a la Rna pol III
al sitio correcto.
TFIIB contiene a TBP
que se une al DNA pese
a no existir cajas TATA.
s
o
n
s
i
v
n
e
m
o
c
.
e
t a
x
.m
Rna pol I
.g
t
u
5s-rRNAs:
TFIIA se une a la caja
C,
TFIIC se une a TFIIA
TFIIIB se une y coloca a
la RNA pol en el sitio
correcto.
Rna pol I
Elongacin
Termino de la
transcripcin
Regin reconocida
pro la polimerasa
(10-12 pb ricos en
T).
Regin reconocido
por elementos
terminadores Reb1p
(10 pb) en S.
cerevisiae
TTF-1(18 pb) en
ratn.
s
o
n
n
e
x
.m
Rna pol II
Rna pol III
Requiere factores de
elongacin DSIF,
ELONGATOR,
FACT, Spt6, ELL
etc.
No clara
c
.
e
m
o
.g
t
u
t a
s
i
v
x
.m
m
o
c
.
e
.g
t
u
s
o
n
n
e
t a
s
i
v
x
.m
m
o
c
.
e
.g
t
u
n
e
MODIFICACIONES
s
POSTRANSCRIPCIONALES
o
n
t a
s
i
v
x
.m
m
o
RNAm Eucarionte:
Adicin del CAP
o capuchn
c
.
e
.g
t
u
s
o
n
n
e
t a
7-metil guanosina
s
i
v
x
.m
RNAm Eucarionte:
Metilacin del CAP
m
o
c
.
e
Ocurre antes que la cadena tenga 20

nucleotidos de largo.
Se aade un residuo 7-metil guanosina,
por una guanililtransferasa en forma reversa.
Se forma un puente 5-5 trifosfato
.g
t
u
El capuchn o capping puede estar

metilada en O(2) (1 o dos nucleosidos
terminales) o no (cap-0).
s
o
n
n
e
t a
s
i
v
x
RNAm eucarionte: Adicin de la cola dem
poliA
.
m
o
c
.
e
t
u
.g
w
w
w
n
e
s
o
n
t a
s
i
v
Secuencias consenso
PABP
x
.m
m
o
RNAm eucarionte:
Slo despus de la modificacin en 5 y 3
ocurre el corte y empalme/ splicing de exones
c
.
e
.g
t
u
s
o
n
n
e
Este proceso de remocin de exones es llevado a cabo por un cuerpo de

splicing con snRNA catalticos (Joan Steitz, 1960).
t a
s
i
v
x
m
.
RNAm eucarionte: Corte y empalme o splicing
m
o
c
.
e
t
u
.g
w
w
w
n
e
s
o
n
t a
s
i
v
x
.m
m
o
c
.
e
t
u
.g
w
w
w
n
e
s
o
n
t a
s
i
v
Esta conduccin (transporte y
arrastre de RNA) es llevado a
cabo por apareamiento de
bases formando heteroduplex
RNAm-snRNA
x
.m
m
o
c
.
e
t
u
.g
w
w
w
n
e
s
o
n
t a
s
i
v
Ex1
Ex2
x
m
.
m
o
c
.
e
t
u
.g
w
w
w
n
e
s
o
n
t a
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x
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m
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c
.
e
.g
t
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s
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n
n
e
t a
s
i
v
x
Functional roles for each snRNP
.m
m
o
c
.
e
t
u
.g
w
w
w
n
e
s
o
n
t a
s
i
v
U1 Initially bound to 5'-splice site. Determines which 5'-splice site is used

Released on recruitment of U4/U5/U6 ?
U2 Initially binds branchpoint sequence.
Brings intron 5'-splice site close to the branchpoint
U4 Initially complexed with U5 and U6 Keeps U6 in an unfolded conformation

Released after delivering U6 to the 5'-splice site
U5 Initially complexed with U4 and U6 Binds exon sequences Location
Upstream of 5'-splice site Downstream of 3'-splice site ?
U6 Initially complexed with U4 and U5 Displaces U1 from 5'-splice site Forms

duplex with intron sequences Complexes with U2. Brings intron 5'-splice site
close to branchpoint
Cromatina y Regulacin Transcripcional
x
.m
m
o
c
.
e
.g
t
u
s
o
n
n
e
t a
s
i
v
x
.m
Los genes tienen dos regiones distintas funcionalmente:
m
o
c
.
e
Regin Codificante
5 Regin Reguladora
PROMOTOR
exn 1
intrn
Controla la tasa a la cual la RNApol

Transcribe la regin codificante
del gen.
n
e
5
mRNA m7Gppp
s
o
n
.g
t
u
exn 2
transcripcin
AAAAAA
La mayora de los cambios en los niveles de mRNA ocurren

por variaciones en la transcripcin.
t a
s
i
v
x
.m
m
o
Componentes de la Regin Reguladora de un gen
c
.
e
.g
t
u
s
o
n
n
e
t a
s
i
v
Promotores y la Maquinaria basal de transcripcin
x
.m
m
o
c
.
e
.g
t
u
n
e
Funciones del Promotor Mnimo:
s
o
n
Sitio de unin de la RNApolII, factores generales de transcripcin y coactivadores.
Controla el sitio de inicio de la transcripcin y la direccionalidad.
t a
Responde a elementos activadores o silenciadores.
s
i
v
Necesarios para la transcripcin basal
x
.m
Promotores y Potenciadores
m
o
c
.
e
.g
t
u
Promotor Proximal: Se encuentran muy cercanos al sitio de inicio de la transcripcin

aprox. de 50 a 200 pb. A estas
regiones se unen protenas activadoras.
s
o
n
n
e
Potenciador: Potenciadores (Enhancers) son secuencias capaces de inducir un

incremento en la transcripcin de un gen. Se encuentran localizados ro arriba o abajo
a distancia del sitio de inicio de la transcripcin o en Intrones.
t a
Activadores/ Represores
Enhancers / Silencenciadores
s
i
v
x
.m
Organizacin y Funcin de un
Potenciador:
m
o
Diferentes combinaciones de protenas

activadoras los reconocen.
c
.
e
Pueden funcionar de manera tejidoespecifica

Funcionan a distancia e
independientemente de la orientacin.
Pueden estar compuestos por mdulos
con diferentes secuencias
consenso (cooperatividad).
n
e
.g
t
u
QuickTime and a
GIF decompressor
are needed to see this picture.
A los enhancers se unen activadores y

otras protenas con actividad
remodeladora
s
o
n
QuickTime and a
GIF decompressor
are needed to see this picture.
t a
s
i
v
x
.m
m
o
c
.
e
.g
t
u
s
o
n
n
e
t a
s
i
v
x
Formacin del complejo de inicio de transcripcin
.m
m
o
c
.
e
t
u
.g
w
w
w
n
e
s
o
n
t a
s
i
v
Ensamblaje
Inicio de la
transcripcin
x
m
.
Formacin del complejo de inicio de transcripcin
m
o
c
.
e
t
u
.g
w
w
w
n
e
s
o
n
t a
s
i
v
Se abre la doble hlice del DNA (17pb) y se forma la burbuja de
transcripcin
DNA desenrollado
(17 pb abiertos)
DNA de doble hlice
RNA polimerasa
x
.m
Transcripcin en Eucariotas.
m
o
c
.
e
.g
t
u
s
o
n
n
e
t a
s
i
v
x
.m
m
o
c
.
e
.g
t
u
n
e
REGULACIN
s
POSTRANSCRIPCIONAL
o
n
t a
s
i
v
x
.m
Levels of gene expression regulation

in bacteria
m
o
Postranscriptional
control
Transcriptional
control
c
.
e
DNA
mRNA
s
o
n
t a
Degradation
of RNA
Policistronic transcription
s
i
v
.g
mRNA stability
(half life)
t
u
n
e
translation
protein
Celular
functions
Translational
control
degradation
Postranscriptional regulation
x
.m
m
o
c
.
e
.g
mRNA stability
(half life)
mRNA
s
o
n
n
e
t
u
Degradation
of RNA
mRNA
steady-state levels
t a
s
i
v
x
.m
Eucariotes
m
o
c
.
e
pre-mRNA
processing
mRNA
stability &
degradation
control
protein
stability &
degradation
control
.g
t
u
s
o
n
n
e
s
i
v
t a
x
.m
Significado biolgico de
la estabilidad del mRNA
m
o
c
.
e
t
u
La expresin gentica es modulada por los niveles

estacionarios del mRNA disponibles para la produccin
de protenas, los cuales son producto del equilibrio
entre la sntesis (transcripcin) y la degradacin
(estabilidad) de los transcritos.
.g
s
o
n
n
e
t a
Mayor estabilidad mRNA = Mayor expresin gentica
s
i
v
x
.m
Caractersticas importantes de la abundancia del mRNA

en bacterias:
m
o
c
.
e
Qu determina la
estabilidad de un mRNA en
la clula?
.g
t
u
n
e
1. La estructura del RNA !
s
o
n
2. La tasa de degradacin del RNA !

Actividad de protenas que degradan el mRNA
(Degradosoma y otras ribonucleasas)
t a
s
i
v
Toma nota:
x
.m
m
o
La estabilidad y la tasa de degradacin del mRNA
regulan la
c
.
expresin gentica de dos maneras:
e
t
u
.g en el cual un mRNA
1. La estabilidad determina el tiempo
puede estar presente para w
ser traducido
w
w regulada as misma por
2. La estabilidad del mRNA
estmulos del ambiente
celular, provee un medio de
n
e el control de la capacidad
respuesta mediante
traduccional s
o
n
t a
s
i
v
x
.m
Elementos estructurales del 3 UTR que regulan la

estabilidad del mRNA en eucariontes
m
o
mRNA
Elemento estructural
c
.
e
3 UTR
AUUUA
Algunos
PyBP
AUBP
Histonas
p70
c-myc, c-fos
s
o
n
Todos
s
i
v
t a
n
e
t
u
Elementos ricos en AU y tractos de Py
An
Py
An
.g
Tallo-burbuja del 3 terminal
Elementos en la regin codificante
PABP
AAAAAAAAn
Tracto de poli (A)

Jeff Ross 1995
x
En eucariontes la degradacin del tracto de poli
(A)
m
inicia el decaimiento del mRNA .
m
o
AUG
UAA .c
e
t
u
g
.
AUG
UAA
w
w
w
AUG
UAA
n
e
s
o
n
t a
s
i
v
3 UTR
7mGpppG
AAAAAAAAA250
Desadenilacin
7mGpppG
AAAAAAAAA250
Decapping
pG
A-10
Degradacin
3 5
Jeff Ross 1995
x
.m
RNases involved in mRNA degradation

in bacteria
RNase E
DEGRADOSOME PNPase
m
o
c
.
e
Poly(A) ribonuclease
Endonuclease
.g
t
u
Poly(A) ribonuclease
Poly(A) polymerase
Exonuclease 3to 5
n
RNasee
II, III
s
o
n
a
i
v
x
.m
m
o
c
.
e
Ojo:
Siempre ocurre una
hidrlisis espontnea
de los enlaces 5-5 y
5-5 en ambos
extremos.
.g
Degradacin 3-5
t
u
La disminucin de la
poliA y del CAP
s
o
n
n
e
t a
s
i
v
x
.m
Differences in mRNA degradation mechanisms

bacteria
eukayotes
m
o
mRNAs are unstable with half

lives of minutes to 1 hr
c
.
e
Endonucleolytic cleavage is the

first step in degradation
Major via: 3to 5. Has not been
detected 5to 3exoRNases
mRNA decay is not linked to
3end formation
n
e
Poly(A) tract destabilize RNAs
s
o
n
Poly(A) tail length control in

importance in mRNA stability ?
t a
s
i
v
mRNAs are more stable hours to

days
Endocleavage is less important
Deadenylation 3- 5 is the first
step
Major via: 5to 3degradation
Degradation mechanisms are linked
to 3end formation and
transcription of mRNA
.g
t
u
Poly(A) tract, PABs stabilizes

mRNAs
Poly(A) tail length control is
important in mRNA stability
CAP-dependent decay mechanisms
(decapping enzymes)
x
.m
Funciones asociadas a cada componente del degradosoma
m
o
c
.
e
1.- Polinucletido fosforilasa (PNPasa): Actividad 3 a 5 procesativa
t
u
2.- RNasa II: No son especficas y son procesativas 3 a 5 exoribonucleasa
.g
3.- RNasa D: 3 a 5 exoribonucleasa, participa en la maduracin de pequeos

RNAs estables.
4.- RNasa BN: Esencial en la maduracin del extremo 3 de ciertos tRNAs de fagos.
5.- RNasa T: Maduracin del 3 de pequeos RNAs estables,tRNA y rRNA, reciclamiento

de tRNAs
6.- RNasa PH: 3 a 5 distributiva
s
o
n
7.- RNasa R: 3 a 5 procesativa
n
e
8.- Oligoribonucleasa: Actividad 3 a 5 exonucleasa especfica para pequeos

oligonucletidos .
t a
s
i
v
x
.m
m
o
c
.
e
.g
t
u
n
e
LA TRADUCCIN
s
o
n
t a
s
i
v
x
.m
La traduccin
m
o
c
.
e
protena
La traduccin corresponde a la
sntesis proteica que se lleva a
cabo en los ribosomas.
Una vez traducida la informacin
contenida en los RNAm para
generar
las
cadenas
de
aminocidos, no hay vuelta
atrs en el flujo informativo.
s
o
n
n
e
.g
t
u
mRNA
El flujo de informacin hacia los

polipptidos
constituye
un
proceso irreversible.
t a
s
i
v
x
.m
Estructura de Ribosomas
Eucariontes
Procariontes
rRNA
23S
(2900 bases)
5S
(120 bases)
16S
(1500 bases)
s
o
n
t a
is
c
.
e
Protenas
(31)
.g
t
u
50S
Protenas
(21)
28S:5.8S
(4800+160 bases)
18S
(1900 bases)
m
o
28S
n
e
70S
30S
Protenas
5S
(50)
(120 bases)
60S
5.8S
Protenas
(33)
80S
40S
Anatoma de los ribosomas
x
.m
m
o
c
.
e
.g
t
u
s
o
n
n
e
t a
s
i
v
x
.m
Traten de no verlo en 2D
m
o
c
.
e
.g
t
u
s
o
n
n
e
t a
s
i
v
x
.m
TRADUCCIN
m
o
El ensamblado de una
protena requiere los 3 tipos
principales de RNA y
elementos accesorios:
c
.
e
Ribosomas (RNAr +
protena)
Aminoacil-RNAt
RNAm
protenas
cationes
s
o
n
GTP
.g
t
u
n
e
s
i
v
t a
x
.m
TRADUCCIN
m
o
LA SNTESIS DE UNA CADENA POLIPEPTDICA PUEDE

DIVIDIRSE EN TRES ETAPAS DISTINTAS
c
.
e
Inicio de la
cadena
Elongacin
n
Terminacin e
s
o
n
t a
s
i
v
Met
.g
t
u
50S
30S
PASOS GENERALES DE LA
TRADUCCIN
Iniciacin:
Alargamiento:
Terminacin:s
o
n
x
.m
m
o
c
.
e
t
u
Formacin del complejo de iniciacin

Colocacin del ribosoma en el codn AUG
Posicionamiento de la primera metionina
.g
Adicin de todos los aminocidos

con enlace peptdico entre ellos
n
e
Reconocimiento de codn de
terminacin y liberacin del peptido y del
ribosoma
t a
s
i
v
INICIO
30S
m
o
AUG
Paso 0.
Reconocimiento de la
secuencia seal Shine-Dalgarno
por la subunidad menor del
ribosoma.
PASO 1. Traslado de la
subunidad pequea al
codn de inicio
x
.m
c
.
e
t
u
.g 2
PASO 2. Traslado del

primer aa-tRNA (f-met)
al ribosoma
n
e
s
o
PASO 3. ensamblado
del
n
complejo
de
inicio
completo.
t a
s
i
v
x
.m
INICIO
m
o
c
.
e
unin de los factores de

iniciacin IF-3 e IF-1
unin del RNAm Secuencia
Shine Dalgarno.
unin de la subunidad 30S con
el RNAm en el codn de inicio
AUG, se requiere de IF1 e IF3
30S
s
o
n
AUG
t a
s
i
v
n
e
.g
t
u
5-10
nucletidos
El ribosoma se
une al DNA en
un sitio preciso
La interaccin entre estas secuencias
La
unin a este codn
pone
al y el
Complementarias
en el
mRNA
ribosoma
enaelunin
marco
rRNA lleva
dede
la lectura=
subunidad
lectura
correcta
mensaje
30S al codn
dedel
inicio
x
.m
ELONGACIN
m
o
c
.
e
PASO 1. Seleccin del

aminoacil tRNA
PASO 2. FORMACIN DEL
ENLACE PEPTDICO
(liberacin de EF-Tu GDP)
PASO 3. TRASLOCACIN
(dependiente de EF-G e
hidrlisis de GTP)
s
o
n
n
e
.g
t
u
PASO 4. LIBERACIN DEL

tRNA DESACILADO
t a
s
i
v
x
.m
TERMINACIN
La terminacin requiere factores
de liberacin (RF) que reconocen
los codones de terminacin.
Codones de terminacin.
UAA, UAG, UGA
RF1=> UAA y UAG /
RF2 => UAA y UGA
s
o
n
n
e
.g
m
o
c
.
e
t
u
Ruptura del enlace ester entre el aa y

su RNAt del ltimo aminoacil-RNAt.
t a
s
i
v
x
.m
m
o
c
.
e
.g
t
u
s
o
n
n
e
t a
s
i
v
Antibitico
x
Inhibidores de la traduccin (antalos) .m
m
o
c
.
e
t
u
.g
w
w
w
n
e
s
o
n
t a
is
Accin:
Estreptomicina
Tetraciclina
Provoca una mala lectura del cdigo gentico en las bacterias a concentraciones
relativamente bajas e inhibe la iniciacin a concentraciones mayores, enlazndose a
la subunidad ribosmica 30s.
Se une a la subunidad 30S del ribosoma e inhibe la elongacin impidiendo la unin
del aminoacil-RNAt (Procariontes) que bloquea el sitio A.
Cloramfenicol
Inhibe a la peptidil transferasa (Procariontes). Bloquea la fase de la transferencia

peptdica de la elongacin en la subunidad ribosmica 50s, tanto en las bacterias
como en las mitocondrias.
Cicloheximida
Impide la elongacin bloqueando a la peptidil transferasa de Eucariontes (txico,

espermicida y mutagnico).
Eritromicina,
macrlidos y
lincosamidas
Se enlazan a las subunidades ribosmicas 50s, inhibiendo la reaccin de la

peptidiltransferasa o la traslacin, o ambas cosas.
Puromicina
Causa terminacin prematura de la traduccin. Acta como anlogo estructural del

aminoacil-RNAt. Se enlaza al sitio A del ribosoma y participa en la formacin de
enlaces peptdicos, produciendo peptidil-puromicina.
Toxina diftrica
Aminoglucsidos
Inhibe a la translocasa eEF-2 (eucariote). Es un pptido de 535 residuos de a.a.

unidos por S-S.
La tobramicina y la kanamicina evitan la asociacin ribosmica al final de la fase de
iniciacin y provocan una mala lectura del cdigo gentico.
x
.m
m
o
c
.
e
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t
u
s
o
n
n
e
t a
s
i
v
x
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t
u
s
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n
n
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t a
s
i
v
Complejo de iniciacin
x
.m
m
o
c
.
e
60 S
.g
t
u
eIF 4B
eIF 6
Espontneo?
40 S
s
o
n
n
e
eIF 3
eIF-4C
t a
s
i
v
x
Interaccin del complejo ternario con la subunidad
m
.
40 S para formar el complejo de preiniciacin
m
o
c
.
e
t
u
.g
w
w
w
n
e
s
o
n
t a
s
i
v
complejo ternario
eIF4C
eIF 3
complejo43-45S
de preiniciacin
x
.m
m
o
c
.
e
4B
4G
eIF4C eIF 3
4A
4E 5 Cap
s
o
n
n
e
.g
t
u
AUG
t a
s
i
v
x
.m
m
o
4A
c
.
e
4B
4G
eIF4C
eIF 3
5 Cap
4E
s
o
n
n
e
.g
t
u
eIF5
AUG
t a
s
i
v
x
.m
m
o
Factores de la iniciacin de la traduccin (eIFs)
eIF 4F
Ayuda a la union del ribosoma

40 S
4G
4E
c
.
e
5 Cap
4A helicasa 60 S
AUG
40AUG
S
Reconocimiento
y unin al Cap
s
o
n
t a
s
i
v
n
e
.g
t
u
Alargamiento
Estimula a la helicasa
eIF-4B Se una al eIF-3
Factores de reconocimiento al Cap
x
.m
m
o
c
.
e
.g
AU
G
NN
N
5 Cap
s
o
n
n
e
w
E
t
u
EF-1 .GTP. aatRNA

3
t a
s
i
v
x
.m
m
o
c
.
e
.g
AU
G
NN
N
5 Cap
s
o
n
n
e
w
E
t
u
.GTP. aatRNA
EF-1 .GDP.
3
t a
s
i
v
x
.m
Translocacin
m
o
c
.
e
5 Cap
s
o
n
n
e
.g
t
u
AU
G
NNN NN
N
t a
s
i
v
x
.m
Translocacin
m
o
c
.
e
5 Cap
s
o
n
n
e
.g
t
u
EF-1a.GTP.aatRNA
AU
G
NNN NN
N
t a
s
i
v
x
.m
Terminacin
m
o
c
.
e
.g
t
u
eRF 3
eRF1.GT
P
5 Cap
s
o
n
n
e
AUG
NNN NN
N
NN
N
UAG
t a
Cuando los RFs reconocen a los codones de terminacin, activan al ribosoma

para que se hidrolice el peptidil tRNA mediante una reaccin semejante a la de
transferencia del peptidil, solo que el aceptor es H2O en vez del aa-tRNA.
s
i
v
x
.m
m
o
c
.
e
Protena
s
o
n
n
e
t
u
RF.GT
P
5 Cap
.g
RF 3
AU
G
NN
N
UAG
t a
s
i
v
x
.m
Terminacin
Factor de liberacin o de
terminacin (RF)
m
o
Ruptura del enlace

ster
c
.
e
.g
t
u
s
o
n
n
e
Los codones UAA, UAG y UGA

no son reconocidos por ningn
RNAt
t a
s
i
v
UAA (codn de trmino)

STOP
RF1=> UAA y UAG / RF2 => UAA y UGA

x
.m
m
o
c
.
e
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t
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s
o
n
n
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s
i
v
x
.m
IRES: regin de unin interna del ribosoma
m
o
c
.
e
t
u
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w
w
w
n
e
s
o
n
t a
s
i
v
Complejo ternario
eIF2
Met
GTP
eIF 3
ITAFs
IRES
AUG
AUG
AUG
pNp
Traduccin
RNT 5
AUG
AUG
ALTO
RNT 3Poli A
UAA
UAG
UGA
x
Historia: Traduccin de Poliovirus.m
m
o
c
.
e
t
u
.g
w
w
wPoliprotena
X
IRES n
e
s
o
n
t a
s
i
v
RNT 5`
Protenas celularesPTB
PCBP2
Cap 5
1
II
III
A
U
G
AUG
La
IV
eIFs
RNT 3
V
VI
ORF
3 AAAAA
AUG AUG
743
7441
RNA ribosomal 28 S
x
.m
m
o
Peptidil-transferasa
c
.
e
.g
t
u
s
o
n
n
e
La resolucin atmica de cristales de estructuras de la subunidad ribosomal 60S

prueban que la peptidil transferasa, localizada en el centro del ribosoma, esta compuesta
en su totalidad por RNA; el ribosoma es una ribozima.
t a
s
i
v
x
mS
RNA ribosomales pequeos 5 y 5.8
.
Papel estructural
m
o
c
.
e
t
u
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w
w
w
n
e
s
o
n
t a
s
i
v
Se doblan en formas tridimensionales y forman las plataformas en las que

se ensamblan las proteinas ribosomales.
x
.m
RNA de transferencia
A
C
C
Brazo aceptor
5
7pb no Watson
mG
dihidrouridina
Brazo D
s
o
n
t a
Aadido despus
de la sntesis y
procesamiento del
tRNA
c
.
e
.g
t
u
El uridilato metilado es
timidilato
Pseudo uridina
Brazo T C
n
e
m
o
La ribosa se une
al carbn 5 en vez
de al N 1 del
uracilo.
Brazo extra
ANTICODON
is
NNN
CODON
Aminoacil tRNA sintetasa
x
.m
m
o
c
.
e
.g
t
u
s
o
n
n
e
The Aminoacyl Synthetase binds both the anticodon (top) and the amino acid acceptor
(bottom) and attaches the appropriate amino acid according to the Genetic Code.
t a
The exact mechanism by which this recognition takes place is uncertain, and has
sometimes been described as a "second genetic code".
s
i
v
x
.m
m
o
RNA mensajero (mRNA)

5
c
.
e
AUG
Cap
RNT 5
s
o
n
.g
t
u
UAG- mbar
UGA- palo
UAA- ocre
3
AAAAAAA
RNT 3
n
e ORF
t a
s
i
v
x
.m
m
o
c
.
e
.g
t
u
n
e GENTICO
EL CDIGO
s
o
n
t a
s
i
v
x
.m
Extrcto Bacteriano
(mezcla de aa y uno radiactivo cada vez)
+ UUU
UUU
UUU
Phe
Phe
+ AAA
AAA
AAA
Lys
CCC
CCC
CCC
RNAm sinttico
ACA
Thr
ACA
ACA
t a
s
i
v
Thr
s
o
n
Thr
CAC
n
e
His
.g
Lys
c
.
e
Lys
Pro
Pro
t
u
Pro
ACA
CAC
Thr
His
ACA
ACA
CAC
Thr
Thr
His
m
o
Phe
Polipeptido
CAC
His
CAC
His
CAC
His
El Cdigo Gentico Estndar
x
.m
m
o
1. Es una regla de correspondencia entre los codones (F. Crick y Sidney Brenner,
1961) y anticodones que permite el acoplamiento o ensamble de los residuos
de aminocidos cargados por la aminoacil-t-RNA sintetasa.
2.
c
.
e
El codn es un triplete de nucletidos,
.g
t
u
3. El codn constituye una palabra en el lenguaje de los cidos nuclicos que es

traducida para codificar un aminocido.
4.
5.
El cdigo es universal, desde las bacterias hasta el hombre *.
La interpretacin de los codones por aminocidos es igual en todas las clulas,

todas "leen" de la misma manera los genes.
s
o
n
n
e
t a
s
i
v
El Cdigo Gentico Estndar
x
.m
m
o
c
.
e
5. El cdigo esta basado en tripletes, sin puntuaciones ni sobrelapamientos.
t
u
6. Posee un codn de inicio* y tres codones de trmino (UAA, UAG, UGA).
.g
7. Todos los tripletes tienen un sentido y marco de lectura.
8. Es un cdigo degenerado (sinonmica o redundancia no uniforme).
9. No es ambiguo (es inequvoco)*.
n
e
10. Tiene un carcter altamente conservativo (atenuador) de mutaciones..

11. Requiere un adaptador para traducir la informacin gentica en protena
(tRNA).
s
o
n
12. La disponibilidad de los tRNA redundantes (sinonmias) genera la

aparicin de dialectos o ndices de uso preferencial de codones (Ichi
Ikemura). CAI (codon adaptation index).
t a
s
i
v
x
El Cdigo Gentico Estndar .m
m
o
c
.
e
t
u
.g
w
w
w
n
e
s
o
n
a
i
v
x
El Cdigo Gentico Estndar .m
m
o
c
.
e
t
u
.g
w
w
w
n
e
s
o
n
a
Aminocidos hidrofbicos ---hidroflicos
i
v
Mxima amortiguacin en cambios puntuales
x
m
.
La hiptesis del balanceo de Crick
m
o
c
.
e
t
u
.g
w
w
w
n
e
s
o
n
t a
s
i
v
La wobble hypothesis de Crick
propona que las dos primeras bases
del codn deben poseer pares
geomtricos Watson-Crick normales,
mientras la tercera poda ser
solapada.
Slo existen limitaciones estructurales

en los dos primeros apareamientos y la
tercera base permite flexibilidad y
ajustes conformacionales.
De esta forma se necesitaran al
menos 31 tRNA aminoacil cargados
para leer los 61 codones posibles.
S. cerevisiae slo tiene 25 aminoaciltRNA para leer el cdigo del mensajero
segn su ICA.
x
.m
Selenocysteine
Selenocysteine is an aminoacid
that is present in several enzymes
(for
example
gluthatione,
peroxidases, tetraiodothyronine 5'
deiodinases,
thioredoxin
reductases,
formatedehydrogenases,
glycinereductases
and
some
hydrogenases).
m
o
c
.
e
.g
t
u
Selenocysteine has a structure similar

to cysteine, but with an atom of
selenium taking the place of the usual
sulfur.
s
o
n
n
e
Proteins that include a selenocysteine

residue are called selenoproteins.
t a
s
i
v
x
.m
Selenocysteine
m
o
c
.
e
Selenocysteine is encoded in a
special way by a UGA codon,
which is normally a stop codon.
The UGA codon is made to
encode selenocysteine by the
presence of a SECIS (SEleno
Cysteine Insertion Sequence)
in the mRNA.
.g
t
u
n
e
The SECIS element is defined

by characteristic nucleotide
sequences and secondary
structure base-pairing patterns.
s
o
n
t a
s
i
v
x
.m
Selenocysteine tRNA
m
o
c
.
e
.g
t
u
The primary and secondary structure

of selenocysteine tRNA, tRNA(Sec),
differ from those of standard tRNAs in
several respects, most notably in:
An 8-base (bacteria) or 9-base
(eukaryotes) pair acceptor stem.
A long variable region arm,
Substitutions at several well-conserved
base positions.
s
o
n
n
e
t a
s
i
v
x
.m
m
o
c
.
e
.g
t
u
n
e
MODIFICACIONES
s
POSTRADUCCIONALES
o
n
t a
s
i
v
x
Porqu las protenas son modificadas
m
.
postraduccionalmente?
m
o
c
Regulacin de la actividad
.
e
t
u
g
.
Propiciar interacciones protena-protena
w
w
Localizacin subcelularw
n
e
s
Envejecimiento
o
n
t a
s
i
v
Activar funcin
Apagar funcin
Generar una funcin diferente
El sitio modificado puede ser una interface de unin.
El sitio modificado puede ser una seal de localizacin.
El sitio modificado puede ser un anclador a la membrana.
La modificacin puede identificar a la protena para ser degradada.

La modificacin puede marcar a una protena para ser procesada.
x
.m
Ejemplos
m
o
c
.
e
Apropiado plegamiento y propiedades mecnicas mejoradas (ej. Triple hlice del

Colgeno)
Solubilidad de las protenas (carbohidratos)
.g
t
u
Estabilidad o inestabilidad de las protenas (carbohidratos, ubiquitinacin,

fosforilacin)
Procesamiento proteoltico (remocin de secuencia lder)
Localizacin de protenas ( anclaje a lpidos de membrana, destino a lisosomas

por la presencia de Manosa-6P)
n
e
Regulacin de interacciones moleculares (fosforilacin, acetilacin, acilacin,

glicosilacin).
s
o
n
t a
s
i
v
x
.m
Modificaciones postraduccionales
m
o
c
.
e
.g
t
u
s
o
n
n
e
t a
s
i
v
Mann and Jensen, Nature Biotech. 21, 255 (2003)

x
.m
m
o
c
.
e
.g
t
u
n
e DE OPERONES
EL SISTEMA
s
o
n
t a
s
i
v
x
.m
m
o
c
.
e
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u
s
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v
n
e
PIPOZYA
x
.m
Sistemas de opern
m
o
c
.
e
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s
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n
n
e
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s
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v
x
.m
m
o
c
.
e
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t
u
s
o
n
n
e
t a
s
i
v

Biologia Celular y Molecular

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Biologia Celular y Molecular

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Estructura de la doble hlice

Timina = uracilo metilado

Timina uracilo citosina

Estructura del ADN

Caractersticas del modelo de Watson y Crick (1953)

1.- El DNA est formado por 2

3.- las cadenas forman una

6.- la doble hlice gira hacia la

7.- por cada 10 pares de bases, la

11. Los enlaces fosfatodesoxirribosa estn polarizados en

Estructura del ARN

Existen diversas copias

Existen 32 tipos de tRNA en clulas

Presenta cerca del 70% del

Cada tipo de tRNA

Small interfering RNAs (siRNAs)

2 fuentes principales de RNA antisentido

Micro RNAs (miRNAs)

Desnaturalizacin del ADN

Desnaturalizacin del ADN

Segn su grado de asociacin existen

A) Componente rpido. Primera fraccin

Componente intermedio. Segunda

C) Componente lento. La ltima fraccin

Las secuencias de renaturalizacin lenta generalmente son regiones de DNA

B) DNA moderadamente repetitivo: si tienen un rango de reasociacin moderado

C) DNA altamente repetitivo: Representa la fraccin de reasociacin rpida y son

Secuencia de DNA que codifica

Conjunto de genes codificados

Unidad polignica dependiente

Densidad gnica y genmica

OriC, ARS, ACS, Intron,

Cis-trans (un promotor controla

Cantidad total de DNA en el

Paradoja del valor C

On the fate of duplicated genes

90% loose function

Lynch et al. (2001) Genetics

Organizacin del DNA

H2A, H2B, H3, H4

Los extremos amino de

Regiones de cromatina en metafase

Los trabajos de A. Klug y colaboradores (1980) sobre la disposicin de

Asas o Bucles radiales de

Las fibras de 30 nm se unen a

Conjunto de ADN, histonas y

Principal protena presente en las

Conjunto de octamero de histonas

Representa la forma activa de la

Representa la forma inactiva de la

REGIONES Y TERRITORIOS NUCLEARES

Tienen carga positiva.

FC: Centro Fibrilar

DFC: Componente denso fibrilar

Ramn y Cajal las denomin cuerpos accesorios nucleolares, debido a su

Los dominios OPT se relacionan con nuevas sntesis de RNA polimerasa

El complejo grupo Polycomb (PcG, o cuerpo PcG) es una asociacin

Las manchas -nuclear speckles- son estructuras intranucleares

Cuerpos PML. Cuerpos nucleares promielocticos, donde se sintetiza la

Posee otras funciones relacionadas con la regulacin de genes e

MEMORIA CELULAR: modificacin qumica de la

Mediante acetilacin, fosforilacin, que permiten