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Orientadores:
Professor Doutor Jorge Ventura Ferreira Cardoso Professor Doutor Dario Loureiro dos Santos
Nenhum ser vivo igual a outro. Mas, todos eles possuem algo em
comum.
Evans, Ifer
AGRADECIMENTOS
Meus agradecimentos especiais:
Esta dissertao dedicada aos meus Pais Alcino e Rosa e ao meu marido Srgio pela confiana e apoio e por toda a compreenso dada e tornar menos rdua esta longa caminhada.
Aos meus orientadores, Professor Doutor Jorge Ventura e Professor Doutor Dario Santos, pelo incentivo e apoio no decorrer da orientao, confiana, dedicao, amizade e disponibilidade mostrada em todos os momentos.
minha amiga Cludia pela amizade, ajuda e apoio nos momentos mais difceis ao longo desta e de outras caminhadas.
A todas as pessoas envolvidas na realizao desta dissertao, em particular todo o grupo de trabalho dos Laboratrios do DEBA, pela disponibilidade e cooperao, sem as quais no poderia ter concretizado este trabalho.
RESUMO
A clula representa a menor poro de matria viva dotada da capacidade de auto-duplicao independente. So as unidades estruturais e funcionais dos organismos vivos. Podem ser comparadas aos tijolos de uma casa. Cada tijolo seria como uma clula. Alguns organismos, tais como as bactrias, so unicelulares (consistem em uma nica clula). Outros organismos, tais como os seres humanos, so multicelulares. A teoria da clula, desenvolvida primeiramente em 1839 por Matthias Jakob Schleiden e por Theodor Schwann, indica que todos os organismos so compostos por uma ou mais clulas. Todas as clulas provm de clulas preexistentes. As funes vitais de um organismo ocorrem dentro das clulas, e todas elas contm informao gentica necessria para funes de regulao e transmisso da informao para a gerao seguinte. Com a elaborao desta tese de dissertao pretendeu-se aprender um pouco mais sobre a clula e a sua importncia na constituio de todos os seres vivos. Procurou-se numa parte inicial, reunir de forma sinttica e selectiva informao sobre a clula a nvel estrutural e funcional. Numa parte intermdia, dedicada ao estudo da microscopia, fez-se uma breve abordagem da sua histria e descreveu-se de forma mais detalhada a constituio e funcionamento do microscpio ptico comum, dado ser o utilizado nos laboratrios das Escolas Preparatrias em Portugal e ao qual os professores de Cincias da Natureza recorrem nas aulas dedicadas unidade didctica sobre a clula. No final foram reunidos alguns protocolos prticos de simples realizao e adequados a este nvel de ensino, de modo a que as aulas prticas da disciplina de Cincias da Natureza possam gerar um maior interesse e motivao, tanto para os alunos como para o professor.
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ABSTRACT
The cell represents the lower portion of living matter given the ability of independent self-duplication. They are the structural and functional units of living organisms. They can be compared to the bricks of a house. Each brick would be like a cell. Some organisms, such as bacteria, are unicellular (consisting of a single cell). Other organisms, such as humans, are multicellular. The theory of the cell, first developed in 1839 by Jakob Matthias Schleiden and Theodor Schwann, indicates that all organisms are composed of one or more cells. All cells come from existing cells. The vital functions of an organism happen within the cells and they all contain genetic information required for functions of regulation and transmission of information to the next generation. It was the purpose of this dissertation to learn a little more about the cell and its importance in the formation of all living beings. In a first step, there has been an effort to briefly and selectively gather information about the structure and function of the cell. In an intermediate stage, dedicated to the study of microscopy, it was made a brief approach on its history and also a detailed description of the optical common microscopes constitution and functioning, once it is the one being used at the Portuguese Schools laboratories and the one which teachers of Science use in class when teaching about the cell. Finally, some practical protocols of simple achievement and appropriate for this level of education were gathered, so that the practical Science lessons can generate greater interest and motivation, both for students and for the teacher.
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NDICE GERAL
AGRADECIMENTOS
RESUMO
ii
ABSTRACT
iii
I ENQUADRAMENTO PEDAGGICO
1.1 Introduo geral 1.2 A cincia como agente de mudana 1.3 Objectivos do estudo 1.4 Contextualizao da clula no ensino preparatrio 1.5 Importncia do estudo
2 3 4 5 7
2.1 A clula Unidade na constituio dos seres vivos 2.2 Clulas Procariticas e Eucariticas 2.3 - Uma viso panormica de Clulas Eucariticas O ncleo a livraria gentica da clula. Ribossomas fbrica de protenas na clula. Retculo Endoplasmtico
9 10 14 17 19 21
iv
Complexo de Golgi Lisossomas Cloroplastos e Mitocndrias Vacolos Peroxissomas Citosqueleto Parede Celular
23 25 26 30 32 33 34
III A MICROSCOPIA
35
3.1 Um pouco de histria 3.2 O microscpio 3.3 Tipos de microscpios Microscpio fotnico Microscpio electrnico Microscpio protnico
36 38 38 38 38 38
3.4 Constituio do microscpio ptico comum Parte mecnica Parte ptica 3.5 Ampliao do microscpio 3.6 Funcionamento do microscpio ptico Cuidados a ter com o microscpio Recomendaes a seguir depois da utilizao do microscpio
42 42 43 44 45 45
45
IV EXPERINCIAS LABORATORIAIS
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4.1 Importncia das experincias laboratoriais 4.2 Lista de material de laboratrio mais usual 4.3 Protocolos experimentais Protocolo I Observao de clulas da epiderme do bolbo da cebola
47 48 49 49
54
57
58
61
V CONCLUSO
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VI BIBLIOGRAFIA
66
vi
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I ______________________________
ENQUADRAMENTO PEDAGGICO
Captulo1EnquadramentoPedaggico
Captulo1EnquadramentoPedaggico
contemporneas. Transforma as nossas maneiras de viver. Tem, por vezes, efeitos perversos, especialmente quando destri tecidos sociais ancestrais ou destabiliza fraces importantes da sociedade que a vem ento como uma ameaa. Sobretudo, deixa indiferentes sectores inteiros da populao que se contentam com o desfrutar das suas contribuies no domnio do conforto material, da sade, do nmero e diversidade dos prazeres aos quais permite aceder. Ao entrarmos num novo sculo, torna-se cada vez mais evidente a nossa dependncia dos avanos da cincia e da tecnologia, a que constantemente recorremos para tomar decises, quer individuais, quer colectivas. A cincia e a tecnologia deixaram de fazer parte do discurso acadmico de alguns, para serem vistos como uma coisa pblica, de construo social, que deve fazer parte dos conhecimentos bsicos de todos os cidados. Se, por um lado, a cincia elucidativa, enriquecedora, libertadora do esprito, por outro, comporta potencialidades de subjugao, numa
ambivalncia que tem de ser compreendida e estudada. Paradoxalmente, a cincia por si uma fonte de poder e tambm ela prpria dominada pelos outros poderes, o que lhe confere uma profunda ambiguidade. Porm, estas realidades s podem ser geridas e analisadas por um pblico cada vez mais alfabetizado cientificamente, e onde a escola ser chamada a desempenhar um papel indiscutvel. So estas ideias consensuais que inspiram e enquadram a grande maioria dos trabalhos de investigao. Durante vrias dcadas muitos foram os cientistas que tentaram descobrir o cerne da vida. 3
Captulo1EnquadramentoPedaggico O mundo das clulas foi ignorado at meados do sculo XVIII, poca em que os espritos curiosos comearam a utilizar o microscpio. Entre os pioneiros na observao de clulas ao microscpio ptico destaca-se Robert Hooke (1637 1703), astrnomo, fsico e naturalista ingls. Os trabalhos de Hooke no estudo da clula encorajaram outros cientistas na observao de material biolgico muito variado. A ideia de que todos os seres vivos so constitudos por clulas e de que cada clula provm da diviso de uma clula preexistente relativamente recente e foi somente apresentada na segunda metade do sculo XIX. O aperfeioamento dos microscpios e a constante evoluo de tcnicas de preparao do material a observar permitiram um notvel progresso no conhecimento da clula.
Numa primeira etapa, o presente estudo aborda os principais aspectos relacionados com os constituintes da clula, tanto em clulas procariticas como em clulas eucariticas. As clulas eucariticas so maiores e mais complexas; o seu genoma maior e possuem mecanismos muito mais elaborados de regulao da expresso gentica. O ADN das clulas eucariticas encontra-se confinado num compartimento prprio, delimitado por membranas, o ncleo. No citoplasma existem tambm vrios compartimentos (organelos) delimitados por membranas e especializados em funes especficas. Dois destes organelos, as mitocndrias (especializadas na produo de energia) e os cloroplastos (especializados na fotossntese), so, muito provavelmente, descendentes de organismos procariticos ancestrais que se estabeleceram como simbiontes de clulas maiores, anaerbicas. Outra caracterstica das clulas eucariticas a presena, no citoplasma, de redes filamentosas (citosqueleto) que servem tanto de apoio estrutural como desempenham funes de trilhos e motores responsveis pelos movimentos celulares.
Captulo1EnquadramentoPedaggico Neste contexto, esta importante distino entre os dois tipos de clulas vai permitir uma anlise mais precisa dos seus componentes e das funes desempenhadas pelos mesmos. Por ltimo, a componente prtica centra a sua ateno na realizao de protocolos de fcil execuo e adaptados ao desenvolvimento intelectual da faixa etria correspondente ao 2 ciclo do Ensino Bsico. Deste modo, a concretizao destes protocolos permitiro a observao dos diferentes constituintes de clulas de distintos seres vivos e por em prtica os conhecimentos adquiridos sobre o tema em questo. Com base nos pressupostos mencionados, desenvolveu-se um trabalho de pesquisa orientado pelos seguintes objectivos: Actualizao cientfica relativa aos contedos descritos. Definio de protocolos experimentais que tratem o tema abordado.
Unidade III Unidade na diversidade dos seres vivos 1 A clula Unidade na constituio dos seres vivos. - Constituintes, forma e dimenses da clula. - Seres unicelulares e seres pluricelulares. 2 Classificao dos seres vivos - Importncia da classificao. - Como classificar os seres vivos.
Numa anlise concisa a vrios manuais de 5 ano de escolaridade facilmente se comprova que o tema da clula exposto de forma sucinta e com recurso a poucas actividades experimentais, sendo estas constantemente repetitivas.
Captulo1EnquadramentoPedaggico Assim, esta tese visa ser uma mais valia para o ensino e aprendizagem das cincias apresentando inicialmente uma reviso terica dos contedos inerentes ao conhecimento do conceito de clula e seguidamente so apresentados protocolos experimentais que visam a aquisio de novos conhecimentos. A componente experimental nesta rea (o estudo da clula) um pouco restrita nas escolas do 2 ciclo, o que se traduz, na maior parte dos casos, em protocolos experimentais a nvel das clulas vegetais. Contudo, estes apresentam um cariz laboratorial/experimental apresentando vrios objectivos a serem alcanados pelos alunos, tais como: 1 Identificar os constituintes fundamentais da clula. 2 Fazer esquemas de observaes efectuadas no microscpio ptico. 3 Reconhecer a diversidade da forma e dimenso das clulas. 4 Reconhecer a existncia de uma estrutura bsica nos seres vivos. 5 Distinguir seres unicelulares de seres pluricelulares. 6 Dar exemplos de seres unicelulares de seres pluricelulares. 7 Identificar a importncia do microscpio no estudo dos seres vivos. 8 Identificar as partes constituintes do microscpio ptico. 9 Promover uma slida formao de base, no domnio tecnolgico /cientfico. 10 Desenvolver as capacidades, competncias e atitudes do aluno. Na elaborao dos protocolos experimentais foi tido em conta a adequao dos mesmos aos laboratrios escolares do 2 ciclo. Assim, foram sugeridos materiais de baixo custo ou mesmo materiais que se utilizam no nosso quotidiano. Estes protocolos permitiro tornar as aulas mais apelativas para os alunos, motivando-os para a unidade em questo. Foram ainda elaborados alguns protocolos que no se adequam ao 2 ciclo devido sua complexidade. Estes podero ser utilizados em aces de formao de professores de cincias do 1 e 2 ciclos, onde podero contactar com novas tcnicas e metodologias do trabalho de investigao.
Captulo1EnquadramentoPedaggico
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II ______________________________
gentica da clula. Ribossomas fbrica de protenas na clula. Retculo Endoplasmtico Complexo de Golgi Lisossomas Cloroplastos e Mitocndrias Vacolos Peroxissomas Citosqueleto Parede Celular
Captulo2AClula:UnidadenaconstituiodosSeresVivos
investigao, pois as clulas eram individualizadas e havia que descobrir a importncia biolgica dos contedos celulares. Schleiden e Schwann, em 1838, estabeleceram claramente a ideia de que as clulas so a unidades estruturais bsicas dos seres vivos, desde os unicelulares at aos pluricelulares mais complexos. Esta generalizao bastante importante passou a constituir uma teoria que a pedra basilar da Biologia teoria celular: cada animal representa o somatrio de unidades vitais, cada uma das quais rene por completo todas as propriedades da vida. Esta teoria foi adquirindo progressivamente significados mais amplos medida que os investigadores chegavam a novas concluses sobre os fenmenos que se processam a nvel da clula. Em 1958 Rudolf Virchow postulou que a clula no s a unidade estrutural dos seres vivos mas tambm a unidade fisiolgica. Mais tarde este investigador faz outra generalizao ao afirmar que as clulas tm sempre origem noutras prexistentes. Mais recentemente foi acrescentada teoria celular uma outra generalizao as clulas contm material hereditrio atravs do qual as caractersticas especficas passam de uma clula me para outras clulas clulas filhas.
Captulo2AClula:UnidadenaconstituiodosSeresVivos Actualmente sabemos que cada clula possui uma organizao molecular que lhe permite desempenhar as funes que caracterizam a vida: crescer, reproduzir-se e adaptar-se ao meio exterior. A vida a nvel celular emana da ordem estrutural, reforando a ideia de que existe uma correlao entre estrutura e funo. Por exemplo, o movimento de uma clula animal depende de uma inter-relao entre as estruturas que constituem um esqueleto celular. Um outro tema recorrente na Biologia a interaco do organismo com o seu meio ambiente. As clulas sentem e respondem ao ambiente que as rodeia. Contudo, as clulas podem diferir substancialmente uma das outras, mas partilham algumas caractersticas em comum. Todas as clulas possuem organizao interna comum, baseada no princpio da compartimentao funcional. Tal como nas sociedades humanas, nas clulas ocorre uma diviso de tarefas, e cada tarefa ou funo suportada por uma determinada estrutura.
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Captulo2AClula:UnidadenaconstituiodosSeresVivos
Tabela 1. Comparao entre clula procaritica e eucaritica (Adaptado de Campbell e Reece, 2005).
CLULA PROCARITICA
CLULA EUCARITICA
material
gentico
no
est
O material gentico est envolvido por uma membrana nuclear. Cromossomas constitudos por ADN e histonas (protenas). Possuem sistemas membranosos
envolvido por membrana nuclear. Cromossomas constitudos por ADN. No possuem cloroplastos, mesmo quando realizam a fotossntese, mas sim vesculas fotossintticas. No possuem mitocndrias, mas sim invaginaes da membrana plasmtica, com uma funo equivalente mitocndria mesossoma. No possuem aparelho de Golgi, nem retculo endoplasmtico. No processo mittico no se forma fuso acromtico. Os organelos envolvidos na
intracelulares. - Cloroplastos - Mitocndrias - Aparelho de Golgi - Retculo endoplasmtico No processo mittico forma-se o fuso cromtico. Os organelos envolvidos na mobilidade so geralmente numerosos e mais complexos.
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Captulo2AClula:UnidadenaconstituiodosSeresVivos Nas clulas eucariticas observa-se internamente, o citoplasma, caracterizado por um meio opticamente inerte, no seio do qual se podem observar dispersas algumas estruturas internas da clula. Destas estruturas internas particularmente evidente uma formao globulosa o ncleo. No interior deste muitas vezes visvel uma outra estrutura sensivelmente esfrica de pequenas dimenses o nuclolo. Na clula eucaritica, os cromossomas constitudos pelos genes encontram-se no ncleo, enquanto numa clula procaritica localizam-se numa regio chamada nucleide, sendo estas clulas designadas por clulas anucleadas (Tabela1). Toda a regio entre o ncleo e a membrana plasmtica chamada de citoplasma, termo tambm utilizado para definir o interior de uma clula procaritica. Enquanto o citoplasma de uma clula eucaritica tem uma grande variedade de membranas rodeando organelos com formas e funes especializadas, estes esto ausentes em clulas procariticas. A verdade, que a presena ou ausncia de um verdadeiro ncleo s um exemplo da disparidade na complexa estrutura entre os dois tipos de clulas.
Complementarmente, nas clulas eucariticas vegetais observam-se diversas estruturas de contorno arredondado ou elptico, apresentando diversas coloraes os plastos. Nestas clulas observa-se ainda a presena 12
Captulo2AClula:UnidadenaconstituiodosSeresVivos de cavidades no citoplasma limitadas por uma membrana, por vezes de dimenses considerveis os vacolos. Atravs do microscpio possvel verificar a presena de diversos tipos de estruturas na clula animal e vegetal. Na periferia das clulas nota-se a existncia de uma membrana limitante membrana plasmtica (Fig.2.). Na clula vegetal a periferia muito mais espessa, em virtude de exteriormente membrana plasmtica existir uma parede celular de natureza celulsica. A funo da membrana plasmtica de funcionar como barreira selectiva que permite a passagem suficiente de oxignio, nutrientes e resduos para manter todo o volume da clula.
A velocidade das trocas de substncias entre o interior da clula (citoplasma) e o seu exterior, em que participa a membrana plasmtica, tanto mais reduzida quanto mais pequena for a superfcie exterior. As trocas com o meio extra-celular podem ser particularmente inadequadas para manter uma clula que apresenta um citoplasma de grande volume. A necessidade de uma rea suficientemente grande para acomodar o volume ajuda a explicar o tamanho microscpico da maior parte das clulas. Uma razo suficientemente elevada de rea superficial/volume especialmente importante nas clulas que trocam material com o seu meio envolvente, tais como as clulas intestinais. Essas clulas podem ter muitas projeces extensas e finas da sua superfcie, chamadas microvilosidades, que aumentam a rea superficial sem alterao significativa do volume. 13
Captulo2AClula:UnidadenaconstituiodosSeresVivos Os requerimentos metablicos impem limites tericos para o tamanho de uma nica clula. medida que um objecto com uma forma particular aumenta de tamanho, o seu volume aumenta de forma proporcional sua rea superficial (a rea proporcional a uma dimenso linear quadrada, enquanto que o volume proporcional a uma dimenso linear cbica). No entanto, quanto mais pequeno for o objecto, maior a razo entre a rea superficial e o volume (Fig.3).
Fig.3 Relao geomtrica entre rea superficial e volume (Campbell e Reece, 2005).
inmeras especializaes funcionais. Provavelmente, foi o desenvolvimento de caractersticas predadoras por parte das clulas eucariticas que tornou possvel a captura de clulas procariticas e sua subsequente domesticao dando origem a organelos tais como as mitocndrias e os cloroplastos. Uma clula eucaritica tem extensos e elaborados arranjos inter-membranares, que
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Captulo2AClula:UnidadenaconstituiodosSeresVivos dividem a clula em compartimentos os organelos membranares mencionados anteriormente. Entre as clulas eucariticas de maior importncia destacam-se as de origem animal e vegetal. Na clula animal (Fig 4), o mais proeminente organelo normalmente o ncleo.
Por seu lado, a clula vegetal (Fig.5) apresenta um conjunto de organelos designados por plastdeos. O mais importante tipo de plastdeos o cloroplasto no seio do qual se realiza a fotossntese. Muitas clulas vegetais apresentam um grande vacolo central; algumas podem ter um ou mais vacolos pequenos. Do lado de fora da membrana plasmtica das clulas vegetais existe uma espessa parede celular perfurada por canais chamados de plasmodesmata. 15
Captulo2AClula:UnidadenaconstituiodosSeresVivos Em qualquer um deste tipo de clulas, a informao gentica est armazenada no ncleo e transportada para o exterior deste atravs de ribossomas.
Num primeiro momento iremos abordar dois dos organelos envolvidos no controle gentico da clula: o ncleo que contm a maior parte do ADN das clulas, e os ribossomas, que utilizam a informao do ADN para a sntese de protenas. Posteriormente, num segundo momento, sero abordados os outros organelos, no menos importantes, observveis numa clula.
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estudo
da
ultra-estrutura
funes
dos
vrios
organelos
citoplasmticos evidencia claramente que as actividades celulares esto compartimentadas em vrias estruturas que realizam funes especficas e muito complexas, mas extraordinariamente organizadas. Ao considerarmos a clula como um sistema de elevada complexidade estrutural e funcional, imediatamente somos conduzidos a pensar que esta tem de dispor de um sistema coordenador, ou melhor dizendo, um centro de controlo da sua actividade. Tal centro contm instrues que especificam a estrutura celular e comandam as suas funes. Nas clulas eucariticas o centro de controlo onde se localiza a informao gentica o organelo designado por ncleo (Fig.6). O ncleo contm a maior parte dos genes das clulas eucariticas (alguns genes esto localizados nas mitocndrias e cloroplastos). Nele encontramos o patrimnio gentico da clula, sob a forma de molculas de ADN. Sendo o ncleo uma esfera com aproximadamente10 m de dimetro, o ADN s poder l caber enrolado, uma vez que mede cerca de 2 m de comprimento. Na verdade, o ADN empacotado com a ajuda de um conjunto de protenas denominadas histonas. O ADN e histonas formam a cromatina, que se espalha pelo interior do ncleo. Estudos revelam que a cromatina constituda por longos e finssimos filamentos enovelados as fibras cromatdicas ou nucleofilamentos constitudas quimicamente por ADN e protenas. Como so muito longas, finas e se encontram enoveladas, estas fibras no do a impresso de serem entidades individuais. Na realidade, elas esto individualizadas formando uma entidade designada cromossoma, que se torna claramente visvel durante a mitose. Para alm da cromatina, identifica-se no ncleo uma outra estrutura, denominada nuclolo. Os nuclolos so densos, com forma mais ou menos esfrica e constitudos por grandes quantidades de ARN do tipo ribossmico e protenas. Esses nuclolos so estruturas dinmicas. Numa zona especfica designada regio organizadora do nuclolo, normalmente associada cromatina, produzem continuamente ARNr (ribossmico) que transportado 17
O ncleo encontra-se separado do citoplasma por um sistema membranar denominado invlucro nuclear. Esta membrana a estrutura que separa os componentes nucleares dos citoplasmticos, conferindo
individualidade ao ncleo como organelo celular. Deste modo, os fenmenos da expresso gentica, para alm de separao temporal, passam a estar segregados espacilamente. O invlucro nuclear tem uma organizao estrutural complexa que sofre modificaes ao longo do ciclo celular. formado por duas membranas, ambas de natureza lipoproteica semelhante ao plasmalema. Entre as duas membranas existe um espao perinuclear.
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Captulo2AClula:UnidadenaconstituiodosSeresVivos Do ponto de vida funcional o invlucro nuclear est, inequivocamente, envolvido no transporte ncleo-citoplasmtico, sendo-lhe ainda atribudas funes na organizao espacial da cromatina e na replicao de ADN. O ncleo assim o centro que assegura a transmisso do material hereditrio, sendo no hialoplasma que so recebidas e executadas as informaes emanadas do ncleo, que se traduzem em reaces das quais dependem estruturas, formas e funes particulares, conforme os diferentes modelos dessas informaes.
No citoplasma so sintetizadas todas as molculas que permitem clula crescer, multiplicar-se, diferenciar-se e comunicar com as outras clulas de um organismo pluricelular. Estas molculas so maioritariamente protenas, cuja estrutura (e, consequentemente, funo) determinada pela sequncia de pares de bases do respectivo gene. Cada gene que codifica uma protena inicialmente copiado no ncleo por um mecanismo denominado transcrio, dando origem a uma molcula de ARN mensageiro (ARNm). As molculas de ARNm so transportadas para o citoplasma, onde se associam a ribossomas. Com o auxlio de molculas adaptadoras, denominadas ARN de transferncia (ARNt), a sequncia de nucletidos de cada ARNm traduzida numa sequncia de aminocidos, ou seja, numa protena. As protenas desempenham um papel fundamental na
compartimentao funcional das clulas eucariticas. So protenas as enzimas que catalisam as reaces especficas de cada organelo, e so protenas as molculas que controlam o transporte de componentes entre os vrios compartimentos. Numa clula humana existem cerca de dez mil tipos distintos de protenas, rigorosamente distribudas pelos diversos
compartimentos onde exercem as suas funes. Parte das protenas celulares sintetizada por ribossomas (Fig.7) localizados no citosol, enquanto outras so sintetizadas por ribossomas associados ao retculo endoplasmtico. As protenas de localizao nas membranas celulares, bem como as protenas destinadas aos lisossomas e as protenas de secreo so todas sintetizadas com uma sequncia-sinal que 19
Captulo2AClula:UnidadenaconstituiodosSeresVivos indica que devem ser conduzidas para o retculo endoplasmtico. As restantes protenas, desprovidas deste sinal, so sintetizadas por ribossomas e polissomas (conjunto de vrios ribossomas que, num determinado momento, se encontram a traduzir a mesma molcula de ARNm) livres no citosol.
Cada ribossoma composto por duas subunidades, cada uma das quais constituda por molculas de ARN ribossomal (ARNr) associadas a protenas. A subunidade maior contm uma molcula de RNAr maior, e a subunidade menor contm uma molcula de ARNr mais pequena. As subunidades ribossomais, bem como as molculas de ARNr que as constituem, so normalmente identificadas em termos de coeficiente de sedimentao medido em unidades de Svedberg (S). Os tamanhos das molculas de ARNr, a quantidade de protenas em cada subunidade e, consequentemente, os tamanhos das subunidades, so diferentes entre as clulas eucariticas e procariticas. Uma consequncia importante desta diferena que certos compostos de natureza qumica (frmacos) interagem especificamente com os ribossomas procariticos, sem interferir com os ribossomas eucariticos. Muitos dos antibiticos usados em medicina actuam por este mecanismo. No entanto, os ribossomas das mitocndrias e dos cloroplastos, cujas
caractersticas so semelhantes aos ribossomas procariticos, podem ser sensveis a estes frmacos. Por esta razo alguns antibiticos, ao penetrar nas
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Captulo2AClula:UnidadenaconstituiodosSeresVivos mitocndrias ou cloroplastos, podem causar efeitos txicos graves sobre as clulas eucariticas.
O retculo endoplasmtico (Fig.8) constitudo por um labirinto intracelular de cisternas, delimitadas por membranas. Parte destas cisternas esto revestidas por ribossomas e denomina-se retculo endoplasmtico rugoso. Outra parte no se associa a ribossomas e denomina-se retculo endoplasmtico liso. O retculo endoplasmtico rugoso responsvel pela sntese de todas as protenas secretadas para o exterior da clula., bem como de todas as protenas transmembranares e das enzimas lisossmicas. Na verdade, a sntese destas protenas inicia-se em ribossomas localizados no citosol. No entanto, estas protenas distinguem-se das restantes por possurem uma molcula-sinal que consiste numa sequncia especfica de aminocidos. No citosol existe um complexo macromolecular denominado SRP (Sinal de Reconhecimento de Partculas) que se liga especificamente a estes aminocidos, bloqueando a traduo do resto da protena. O bloqueio s termina quando o conjunto ribossoma-ARNm-protena nascente-SRP encontra uma cisterna do retculo endoplasmtico rugoso. A, a SRP interage com um receptor especfico localizado na membrana do retculo e desliga-se da cadeia de aminocidos. Deste modo, a traduo reinicia-se, ao mesmo tempo que a protena transportada para o interior da cisterna (lmen). No lmen do retculo endoplasmtico as protenas recebem um conjunto de acares (glcidos), transformando-se em glicoprotenas. Ao contrrio do retculo endoplasmtico rugoso, o retculo
endoplasmtico liso escasso na maioria das clulas. No entanto, este compartimento encontra-se particularmente desenvolvido em certos tipos especializados de clulas. o caso das clulas do fgado, clulas musculares e clulas produtoras de hormonas esterides. Nas clulas do fgado, o retculo liso acumula, por um lado, as enzimas que degradam frmacos e compostos txicos para o organismo. O retculo tambm o local de acumulao das enzimas responsveis pela sntese de hormonas esterides a partir do 21
Captulo2AClula:UnidadenaconstituiodosSeresVivos colesterol e, por isso, encontra-se muito desenvolvido nas clulas produtoras deste tipo de hormonas. Finalmente, o retculo liso contm protenas de transporte e armazenamento de clcio e, por isso, muito abundante nas clulas musculares.
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O complexo de Golgi (Fig.9) localiza-se, geralmente, perto do ncleo e constitudo por uma srie de cisternas empilhadas, rodeadas por inmeras vesculas. Em cada pilha de cisternas distingue-se uma face cis (ou face de entrada), mais prxima do ncleo e uma face trans (ou face de sada), mais afastada do ncleo. Junto face cis, as vesculas representam um sistema de vaivm entre o Golgi e o retculo endoplasmtico rugoso: das cisternas do retculo destacam-se, continuamente, vesculas que se fundem com as cisternas do complexo de Golgi, transportando as protenas destinadas via de secreo. Em sentido inverso, destacam-se vesculas das cisternas do complexo de Golgi que retornam ao retculo transportando protenas que no entram na via de secreo (denominadas protenas residentes no retculo). Da face trans destacam-se vesculas destinadas ou via de secreo ou aos lisossomas. Ao atravessar o complexo de Golgi as protenas sofrem uma srie de modificaes que incluem a remoo de alguns acares (geralmente resduos de manose), a adio de outros (por exemplo, galactose, e cido silico). O complexo de Golgi , portanto, o local da clula onde se produzem as glicoprotenas e os proteoglicanos.
23
Captulo2AClula:UnidadenaconstituiodosSeresVivos Da face trans do complexo de Golgi destacam-se, permanentemente, vesculas que acabam por fundir com a membrana plasmtica num processo denominado de exocitose. Em consequncia, as protenas transportadas no lmen da vescula so lanadas para o meio extracelular, enquanto as protenas transportadas na membrana da vescula ficam localizadas na membrana plasmtica. Para alm desta via (denominada via de secreo constitutiva), algumas clulas especializadas possuem, adicionalmente, um mecanismo de secreo regulada que permite o armazenamento das protenas de secreo em vesculas ou grnulos de secreo, cuja exocitose ocorre apenas por resposta a um sinal vindo do exterior. Para compensar o aumento de superfcie decorrente da exocitose, a membrana plasmtica sofre, continuamente, um processo de internalizao atravs de invaginaes que acabam por dar origem a vesculas de endocitose. Mediante este processo as clulas ingerem passivamente pequenos volumes do fludo e solutos presentes no meio extracelular. Adicionalmente, as clulas possuem meios de internalizar preferencialmente determinadas molculas do meio extracelular. Este mecanismo denominado de endocitose mediada por receptores, baseia-se na existncia de receptores especficos na membrana plasmtica. Um exemplo bem conhecido o da internalizao de colesterol transportado no sangue e meio extracelular sob a forma de lipoprotenas (LDL). Na membrana plasmtica existem receptores proteicos especficos para as LDL. Os receptores so protenas transmembranares que interagem, no interior da clula, com uma protena denominada clatrina. A ligao de LDL ao receptor desencadeia neste uma modificao que facilita a associao de vrias molculas de clatrina entre si. Em consequncia, forma-se um revestimento de clatrina que favorece a internalizao da membrana, dando origem a uma vescula. No interior do citoplasma, a vescula perde o revestimento de clatrina e adquire transportadores transmembranares de protes, transformando-se num endossoma. Com o transporte de protes para o interior do endossoma e consequente acidificao do meio interno, as LDL desligam-se dos receptores. Os receptores livres concentram-se numa pequena zona da membrana do endossoma que se destaca sob a forma de uma pequena vescula e que acaba por se fundir com a membrana plasmtica. Entretanto, o endossoma funde-se 24
Captulo2AClula:UnidadenaconstituiodosSeresVivos com um lisossoma onde as LDL so digeridas e o colesterol libertado para ser usado como nutriente pela clula.
2.3.5 LISOSSOMAS
Os lisossomas (Fig.10) so vesculas intracelulares delimitados por uma membrana e contendo enzimas hidrolticas, capazes de digerir todas as macromolculas da clula. Conhecem-se cerca de 40 tipos de enzimas lisossmicas, que incluem proteases, nucleases, glicosidases, lipases, fosfatases e sulfatases. Todas estas enzimas tm uma particularidade: so preferencialmente activas em meio cido e, para acidificar o seu meio interno, os lisossomas possuem na membrana uma bomba de protes. Por outro lado, a membrana impede o acesso das enzimas ao citoplasma. E, no caso de eventual fuga, as enzimas no so activas a um pH neutro do citoplasma.
Na clula, os lisossomas exercem fundamentalmente trs funes: 1. Os lisossomas digerem macromolculas provenientes do exterior
pela via da endocitose, fornecendo nutrientes para o metabolismo da clula. o caso, por exemplo, das partculas de lipoprotenas que so internalizadas por 25
Captulo2AClula:UnidadenaconstituiodosSeresVivos endocitose mediada por receptores e incorporadas em endossomas que se fundem com os lisossomas. No lisossoma as lipoprotenas so digeridas, libertando o colesterol que utilizado pela clula na biosntese de membranas. 2. Os lisossomas desempenham, adicionalmente, um papel
fundamental na destruio de componentes celulares obsoletos. Neste processo, denominado autofagia, os organelos que atingiram o limite do seu tempo de vida ou que deixaram de ser necessrios clula, so incorporados em vesculas (autofagossomas) que se fundem com os lisossomas. 3. Finalmente, os lisossomas participam na degradao de
microrganismos ou partculas nocivas clula atravs do mecanismo de fagocitose. As clulas humanas especializadas neste mecanismo so os macrfagos e os neutrfilos. Os corpos reconhecidos como estranhos so fagocitados pela clula e incorporados em fagossomas que se fundem com lisossomas. Todas as hidrolases cidas destinadas aos lisossomas so sintetizadas no retculo endoplasmtico e transportadas para o complexo de Golgi. A recebem um sinal especfico, que consiste numa manose fosforilada na posio 6 (M-6-P). Ao atingirem a face trans do Golgi, estas enzimas so incorporadas em vesculas, que possuem na membrana receptores para M-6-P e que se fundem, especificamente, com lisossomas pr-existentes. Deste modo, as enzimas hidrolticas marcadas pelo sinal M-6-P separam-se, sada do complexo de Golgi, das protenas destinadas via da secreo.
As mitocndrias e os cloroplastos so constituintes essenciais das clulas eucariticas, pois so estes organelos que fornecem clula a energia necessria para todas as reaces do metabolismo. Os cloroplastos (Fig.11) existem nas clulas fotossintticas (clulas vegetais), sendo o seu nmero muito varivel nas plantas superiores. Em corte, apresentam a forma de discos lenticulares de cor verde com 3-10 m de dimetro e 1-2 m de espessura. As clorofilas a e b e os carotenides (carotenos e xantofilas) so os pigmentos mais importantes.
26
Captulo2AClula:UnidadenaconstituiodosSeresVivos Do ponto de vista ultrastrutural, os cloroplastos possuem invlucros constitudos por uma membrana externa e uma membrana interna, as quais delimitam o espao intermembranar. Em alguns casos, como por exemplo no milho, a membrana interna invagina-se e origina uma rede complexa de tbulos, o retculo perifrico.
O invlucro delimita o estroma no seio do qual se encontram os tilacides. Estes so sculos achatados de natureza membranosa que, regra geral, se dispem segundo o eixo maior do cloroplasto. Os tilacides podem agrupar-se, constituindo empilhamento de discos achatados uns sobre os outros, designam-se, neste caso, tilacides dos grana. Os tilacides do estroma so sculos polimrficos no empilhados que aparecem, muitas vezes, a ligarem entre si tilacides de grana diferentes. O estroma constitudo por uma substncia, fundamentalmente granular, onde se encontram glbulos osmifilos ou plastoglbulos,
ribossomas, gros de amido e ADN cloroplastidial formando nucleides. De todos os constituintes do estroma s os gros de amido so observveis ao microscpio ptico, surgindo como estruturas refringentes quando corados com soluto de lugol. Na fase inicial da diferenciao dos cloroplastos, a membrana interna do invlucro do proplasto invagina-se, formando vesculas e lamelas que, mais 27
Captulo2AClula:UnidadenaconstituiodosSeresVivos tarde, originaro os tilacides. No decurso da ontogenia cloroplastidial, as invaginaes da membrana interna podem originar vesculas que se acumulam em locais definidos do proplasto, formando o corpo prolamelar. Nalguns casos, o corpo prolamelar forma arranjos cristalinos. Se a planta for mantida em condies de iluminao adequada, o corpo prolamelar e/ou as lamelas formadas a partir da membrana interna organizam-se para formar um sistema tilacoidal funcional (fotossintetizante). Ao mesmo tempo que se diferenciam as membranas tilacoides, tem lugar a converso do protoclorofildeo em clorofildeo e este em clorofila. As mitocndrias (Fig.12) so organelos celulares presentes na maioria das clulas eucariticas e responsveis, em condies aerbias, pela obteno de energia necessria s clulas que as possuem. Tm aspecto morfolgico muito varivel, podendo ocorrer, contrariamente ao que o seu nome indica (grnulo fusiforme), sob diversas formas, como redonda, oval e em bastonete ou filamento, e apresentando variaes no seu tamanho, nmero e distribuio, no s segundo os diferentes tipos de clulas como tambm durante o ciclo de vida de uma mesma clula. Uma clula humana contm, em mdia, cerca de 3000 a 5000 destes organelos citoplasmticos.
28
Captulo2AClula:UnidadenaconstituiodosSeresVivos O termo mitocndria, introduzido em finais do sculo XIX por Benda, deriva das palavras gregas mitos e chondros. At essa altura, esses organelos subcelulares foram designados por diversos nomes, ficando o de bioblastos como o mais conhecido. Altman, em finais do sc. XIX, considerava que as mitocndrias eram as unidades bsicas da actividade celular e, baseando-se nas semelhanas de forma e tamanho que encontrou entre bioblastos e bactrias, sugeriu que aqueles organelos deveriam ser capazes de existncia independente e que as clulas eucariticas que as possuam adquiriram, por isso, capacidade de vida. interessante notar que essas ideias tornaram a surgir, embora sob diferente forma, na actual teoria endossimbitica da origem evolutiva da mitocndria. Ainda em finais do sculo XIX, Michaelis desenvolveu uma tcnica para corar selectivamente mitocndrias. Este facto foi de grande importncia pois, alm de ter sido a primeira indicao de que a mitocndria tem a capacidade de reduzir um corante, forneceu um critrio definitivo para a sua identificao citolgica. Em 1940, tinha-se progredido o suficiente para formular um esboo da cadeia de transporte de electres. Antes disso, tinham j sido descritas as reaces enzimticas do ciclo do cido ctrico, tendo-se tambm demonstrado que a oxidao de vrios intermedirios do ciclo estava ligada formao de ATP. Na dcada seguinte (1940 1950), as mitocndrias foram identificadas como locais de metabolismo energtico. Nos anos 50, o melhoramento de tcnicas de microscopia permitiu uma descrio das principais caractersticas morfolgicas da mitocndria. Tambm nessa altura os investigadores (particularmente Hatefi e colaboradores) tiveram sucesso no isolamento de pores da cadeia respiratria enzimaticamente activas. Em 1961, Mitchell props a hiptese quimiosmtica para explicar a produo de energia na forma de ATP, em que basicamente sugere que, durante a transferncia de electres, formado um gradiente de ies hidrognio atravs da membrana interna, posteriormente utilizado para a sntese de ATP. Vrias descobertas, como a de que as mitocndrias possuem uma maquinaria para sintetizar algumas protenas, dirigiram a investigao para o problema da biognese mitocondrial. Os estudos de gentica mitocondrial tambm evoluram bastante desde que Ephrussi descobriu uma mutao no cromossomal (citoplasmtica), que causava deficincias respiratrias em 29
Captulo2AClula:UnidadenaconstituiodosSeresVivos leveduras e Schatz, em 1964, descreveu a existncia de ADN mitocondrial nesse organismo. Mais recentemente, tem vindo a ser descrita a associao entre defeitos mitocondriais e uma grande variedade de doenas humanas. So doenas ainda raras que se podem manifestar com diversos sintomas, mais ou menos severos, que incluem: problemas de crescimento e aprendizagem, problemas respiratrios, neurolgicos, cardacos, visuais e/ou auditivos, enfraquecimento muscular, e outros. As doenas afectam particularmente rgos com maiores necessidades energticas, como o crebro, corao e msculos, e esto a ser alvo de investigao intensa.
2.3.7 VACOLOS
Nas clulas vegetais diferenciadas, uma parte significativa do seu volume ocupado pelo vacolo (Fig.13). Este aparece como um espao delimitado por uma membrana denominada tonoplasto. O tonoplasto tem a capacidade de manter constante o pH cido do fluido vacuolar. Dependendo do tipo de clula, o volume ocupado pelo vacolo ou conjunto de vacolos Vacuma varia entre 5 e 95%. A biognese do vacolo assunto de relativa controvrsia. Os vacolos podem formar-se nas clulas meristemticas por dilatao de tbulos do retculo endoplasmtico ou por fuso de vesculas derivadas, quer do retculo endoplasmtico, quer dos dictiossomas. Nestas clulas, o vacuoma formado por pequenos e numerosos vacolos globulares ou filamentosos. Durante a diferenciao celular, os vacolos so, de entre os organelos celulares, os que apresentam alteraes mais notrias. Os vacolos das clulas vegetais podem assemelhar-se aos lisossomas das clulas animais por armazenarem grande nmero de enzimas hidrolticas. Na clula vegetal desempenham, porm, funes muito diversas. O vacolo funciona, predominantemente, como uma estrutura de hidratao da clula com a consequente ocupao de espao e manuteno da forma celular. A formao de clulas de grandes dimenses, como o caso das clulas vegetais definitivas, preenchidas unicamente por citoplasma, exigiria grande dispndio de energia, quer em termos de sntese inicial, quer em termos de 30
Captulo2AClula:UnidadenaconstituiodosSeresVivos manuteno. Embora num processo de diferenciao normal as clulas renovem os seus contedos citoplasmticos e produzam algum citoplasma adicional, o facto que a diferenciao se traduz, na maioria dos casos, na acumulao de gua em pequenos vacolos que progressivamente coalescem, originando o vacolo nico, de grandes dimenses, das clulas definitivas.
O vacolo pode ainda armazenar compostos de natureza diversa, muitos dos quais so txicos para a clula se acumulados no citoplasma. Entre os produtos armazenados no vacolo encontram-se alguns de utilizao metablica imediata. Tal o caso das plantas que fixam o dixido de carbono durante a noite e o convertem em malato, que armazenado no vacolo at ser utilizado na sntese de acares, sntese esta que ocorre na presena de luz. Muitos dos compostos acumulados no vacolo tm papel importante na interaco animal/planta, nomeadamente as antocianinas das ptalas, que so importantes na atraco de polinizadores. No entanto, nem todos os compostos tm papel to inofensivo. Muitas plantas acumulam, no vacolo, alcalides extremamente txicos, que impedem os herbvoros de as utilizar na sua dieta. O vacolo pode ainda acumular protenas, como acontece com as sementes das gramneas, que so mobilizadas durante a germinao. 31
Captulo2AClula:UnidadenaconstituiodosSeresVivos 2.3.8 PEROXISSOMAS Os peroxissomas (Fig.14) foram descritos, pela primeira vez, por Rodhin, em 1954, no citoplasma das clulas dos tubos contornados proximais do rim de ratinho e designados com o nome de microcorpos. Em 1960, De Duve e colaboradores, caracterizaram-nos bioquimicamente e, em 1966, De Duve e Baudhuin introduziram a designao de peroxissoma para definir o organelo que continha uma oxidase que formava perxido de hidrognio (H2O2), e catalase que decompunha esta substncia. Mais tarde, os peroxissomas foram observados em numerosas clulas animais e vegetais e designados por peroxissomas, microperoxissomas, microcorpos e glixissomas. Estes termos assinalam diferenas estruturais e funcionais do organelo peroxissoma nas vrias espcies animais e vegetais e at entre os rgos e tecidos da mesma espcie.
Os peroxissomas so organelos citoplasmticos rodeados de membrana simples com matriz moderadamente densa, por vezes com uma estrutura cristalina no seu interior. Observam-se em quase todas as clulas animais (exceptuam-se os eritrcitos) em numerosas clulas vegetais e at em protozorios, leveduras e algumas bactrias. Contm numerosas enzimas que catalisam reaces importantes para o metabolismo celular, intervm na 32
Captulo2AClula:UnidadenaconstituiodosSeresVivos produo e degradao de H2O2, na oxidao dos cidos gordos de cadeia muito longa, prostaglandinas, purinas e poliaminas, na biossntese dos cidos biliares e plasmalognios, no catabolismo dos cidos fitnicos, pipeclico e glioxlico e desempenham importantes funes metablicas e de regulao hormonal. Recentemente comearam a caracterizar-se doenas doenas peroxissmicas (ou peroxissomais) originadas por deficincia de uma ou mais funes peroxissmicas, consequncia da ausncia de uma ou outra enzima habitualmente presentes nestes organelos.
2.3.9 CITOSQUELETO As clulas eucariticas possuem uma extraordinria plasticidade, flexibilidade e mobilidade, e a estrutura responsvel por tais propriedades o citosqueleto. O citosqueleto desempenha, simultaneamente, o papel de ossos e msculos da clula, e representa um passo fundamental na evoluo das clulas procariticas e eucariticas. As vrias propriedades do citosqueleto devem-se existncia de trs grandes tipos de estruturas proteicas com propriedades distintas: os filamentos intermedirios, os microfilamentos de actina e os microtbulos. Os filamentos intermedirios (com cerca de 10 nm de dimetro) so constitudos por agregados de protenas filamentosas que variam consoante o tipo de clula. Por exemplo, nas clulas epiteliais as protenas constituintes dos filamentos intermedirios denominam-se ceratinas e desempenham um papel fundamental na coeso intercelular. Os microfilamentos de actina tm um dimetro individual de cerca de 7nm e associam-se geralmente em feixes ou redes de localizao submembranar. Estes feixes ou redes so responsveis pela forma e plasticidade da membrana plasmtica. Os microtbulos so constitudos por cilindros ocos de 25 nm de dimetro, cujas paredes so formadas por agregados de protenas globulares denominadas tubulinas. Nas clulas em interfase, os microtbulos emanam de uma estrutura perinuclear denominada centrossoma. Daqui os microtbulos espalham-se por todo o citoplasma onde servem de trilhos para o movimento 33
Captulo2AClula:UnidadenaconstituiodosSeresVivos de vrios organelos. Por exemplo, o transporte de vesculas envolvidas quer na via de secreo, quer na via de endocitose, ocorre ao longo dos microtbulos. Estes so, tambm, os principais constituintes dos clios e flagelos, contribuindo assim para o movimento celular. Durante a diviso celular, os microtbulos desempenham ainda um papel fundamental, pois so os responsveis pela separao equitativa dos cromatdeos pelas duas clulas-filhas.
2.3.10 PAREDE CELULAR A diferena entre animais e plantas no est nos processos moleculares fundamentais, como a replicao de ADN, sntese proteica ou mesmo na arquitectura molecular das membranas protoplasmticas. A diferena mais significativa entre estes dois grupos de seres vivos reside nas plantas possurem uma parede celular rgida, que confere s clulas caractersticas peculiares, e de fixarem o dixido de carbono atmosfrico durante a fotossntese. A parede celular uma estrutura fundamental para o desenvolvimento das plantas. Nas zonas da planta onde o crescimento mais intenso, a parede celular desempenha um papel preponderante na regulao do alongamento celular e na definio da forma final das clulas. O grau de especializao da parede, que uma consequncia do processo de maturao celular, contribui para a definio da funo especfica da clula no tecido e no rgo. Enquanto algumas das clulas definitivas mantm a sua parede celular primria, por vezes consideravelmente espessa, como o caso das clulas do colnquima, outras h que desenvolvem parede celular secundria, formada por novas camadas de parede de composio diversa. A parede celular uma estrutura particular de matriz extracelular da clula vegetal, intimamente associada face exoplsmica do plasmalema. Embora esta estrutura desempenhe muitas das funes atribudas matriz extracelular das clulas animais, ela normalmente mais espessa, mais organizada e mais rgida, sendo constituda por macromolculas
completamente diferentes das que constituem a matriz extracelular das clulas animais. 34
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III _____________________________
A MICROSCOPIA
3.1 Um pouco de histria 3.2 O microscpio 3.3 Tipos de microscpios Microscpio fotnico Microscpio electrnico Microscpio protnico 3.4 Constituio do microscpio ptico comum Parte mecnica Parte ptica 3.5 Ampliao do microscpio 3.6 Funcionamento do microscpio ptico Cuidados a microscpio ter com o
Captulo3AMicroscopia
Captulo3AMicroscopia muito fundos, e sim constitudos por um grande nmero de pequenas caixas. Pode-se assinalar que foi perante esta descrio que Hooke cunhou o termo clula (pequena cela) para designar as pequenas cavidades que ele observou na cortia. Aps essas primeiras descobertas, os estudos microscpicos avanaram muito pouco. Nenhuma descoberta importante foi feita no decorrer dos 200 anos que se seguiram descoberta da clula, por Robert Hooke. O agente limitante, neste caso, foi sem dvida a qualidade dos microscpios, dado continuarem a apresentar anomalias cromticas. Globo condensador Fonte de luz Ocular Tubo
Objectiva
Porta-objecto
Fig.15 Microscpio utilizado por Hooke e desenhos da estrutura microscpica da cortia em dois planos de corte perpendiculares entre si.
(Adaptado de http://images.google.pt/images?q=primeiro+microscopio&ndsp=18&um=1&hl=pt-
PT&start=0&sa=N)
Finalmente, a partir de 1830 comearam a ser produzidas as chamadas lentes acromticas, as quais no produziam anomalias. Esta inovao resultou num enorme progresso da indstria de microscpios, que culminou com a inveno, pelo fsico Ernest Abb, do microscpio acromtico com condensador, praticamente idntico aos utilizados actualmente. Essas inovaes tecnolgicas abriram uma nova era para as Cincias Biolgicas.
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Captulo3AMicroscopia
3.2 O MICROSCPIO
O microscpio um instrumento que se destina a observar objectos de reduzidas dimenses, impossveis de observar vista desarmada. um instrumento auxiliar de observao que permite aumentar o poder de separao linear do globo ocular, facultando a observao de pontos, que divergem entre si por valores muito reduzidos, como dois pontos distintos. Em suma, um aparelho amplificador que produz uma imagem ampliada do objecto em estudo.
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Captulo3AMicroscopia De entre os microscpios fotnicos, podemos ainda considerar os seguintes sub-tipos: Microscpio comum Utilizado para ampliar, com uma srie de lentes, estruturas pequenas impossveis de visualizar a olho nu. constitudo por um componente mecnico que suporta e permite controlar um componente ptico que amplia as imagens. (http://pt.wikipedia.org)
Microscpio ultravioleta A radiao utilizada o ultravioleta que tem um comprimento de onda () perto de 0,2 a 0,3 m, inferior aos valores de para a luz visvel, o que permite melhorar o limite de resoluo comparativamente ao microscpio de campo luminoso/claro. A ptica constituda por lentes de quartzo, j que o vidro no transmite este tipo de radiao. (http://docentes.esa.ipcb.pt)
Microscpio de fluorescncia
Permite observar microrganismos capazes de fixar substncias fluorescentes (fluorocromos). A luz UV, ao incidir nessas partculas, provoca a emisso de luz visvel e observa-se os microrganismos a brilhar em fundo escuro. (http://pt.wikipedia.org)
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Captulo3AMicroscopia Microscpio de campo escuro Os corpsculos a examinar so fortemente iluminados por feixes luminosos que penetram lateralmente, o que conseguido com condensadores especiais. Deste modo, a nica luz que penetra na objectiva a difractada pelas partculas presentes na preparao, pelo que passam a ser visveis em fundo escuro. (http://pt.wikipedia.org) Microscpio de contraste de fase Permite a observao de microrganismos vivos, sem colorao, atravs do contraste devido diferena de fase dos raios luminosos que atravessam o fundo relativamente fase da luz que atravessa os microrganismos. (http://pt.wikipedia.org) Microscpio de polarizao O microscpio de polarizao possui dois prismas: um polarizador e outro analisador. A luz ao penetrar em estruturas como msculo, ossos, celulose, fibras, cabelos, etc., desdobra-se em dois feixes. O prisma deixa passar uma das vibraes luminosas mas no a outra, de modo que as estruturas que forem isotrpicas sero anuladas e no seu lugar surgir uma imagem escura. As estruturas birrefringentes (anisotrpicas) produziro um tipo de vibrao luminosa que ser emitida, ficando brilhante. Somente as estruturas birrefringentes aparecero brilhantes, ficando o restante material escuro. (Adaptado de http://monografias.brasilescola.com)
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Captulo3AMicroscopia Relativamente aos microscpios electrnicos podemos considerar os seguintes sub-tipos: Microscpio electrnico de varrimento (SEM) Cria uma imagem ampliada da superfcie do objecto. No necessrio cortar o objecto para se observar; este pode ser colocado no microscpio sem grandes preparativos. Pode ampliar os objectos 100 mil vezes ou mais, sendo muito til dado que permite obter imagens tridimensionais da superfcie do objecto. (Adaptado de http://www.geocites.com) Microscpio electrnico de transmisso (TEM) Dirige o feixe de electres para o objecto, cuja imagem se deseja aumentar. Uma parte dos electres atravessa o objecto, formando uma imagem aumentada. Exige uma cuidada preparao do objecto, que necessita ser cortado em camadas muito finas. Permite ampliaes do objecto at um milho de vezes. (Adaptado de http://www.geocites.com) De todos os microscpios referidos anteriormente, apenas ser referenciado com maior relevncia o microscpio ptimo comum, uma vez tratar-se do microscpio utilizado nas aulas prticas de Cincias da Natureza no 2 ciclo do Ensino Bsico.
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Captulo3AMicroscopia
Parte Mecnica constitudo por uma srie de peas que variam na forma e no tamanho consoante o tipo de microscpio. P/Base Assegura a estabilidade do objecto de observao sobre a mesa.
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Captulo3AMicroscopia Coluna/Brao Pea que se levanta verticalmente do p. Pode ser rgida ou articulada, rectilnea ou dobrada. a regio que suporta o tubo ou canho do microscpio e destina-se ao transporte deste instrumento de observao. Tubo ou canho Tubo cilndrico que suporta nas suas extremidades a lente ocular e a lente objectiva. Na extremidade inferior encontra-se um revolver que suporta as vrias objectivas e que por rotao permite a rpida troca de lentes. Platina ou mesa Placa com forma variada (quadrangular ou circular) fixa ou rotativa. horizontal e est fixa a meio da coluna ou articulada com esta. Destina-se a suportar a preparao do objecto a observar apresentando duas pinas para fixar o objecto. No centro tem a janela atravs da qual passam os raios luminosos que vo incidir no objecto. Revlver Dispositivo que permite a rpida substituio de uma objectiva por outra. O parafuso macromtrico utilizado na pr-focagem para movimentos de grande amplitude. O parafuso micromtrico utilizado na focagem de pequena amplitude. Estes movimentos podem ser transmitidos ao canho ou platina.
Parte ptica o sistema funcional do microscpio, tendo como funes iluminar o objecto e fornecer deste uma imagem ampliada. Fonte luminosa Feixe de raios luminosos fornecido pelo filamento incandescente de uma lmpada, existente num suporte ajustado base do microscpio. Condensador A sua funo essencial projectar no plano da preparao a imagem da fonte luminosa.
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Captulo3AMicroscopia Diafragma O diafragma limita o feixe de raios que passa pelo sistema ptico. Situa-se acima do foco inferior do condensador e permite a variao da incidncia da luz que chega preparao e passa pelo condensador. Permite a observao do campo iluminado e do campo observado. Objectiva Uma objectiva um sistema de lentes centradas. Esse recebe a luz do objecto e projecta uma imagem deste que fornecida ocular imagem intermdia real, ampliada e invertida. Ocular O sistema ocular suspenso pela extremidade superior do tubo e constitudo pela lente ocular propriamente dita (situada superiormente junto do globo ocular do observador) e pela lente colectora (situada prximo do objecto). A lente ocular a nica deste sistema responsvel pela ampliao da imagem, enquanto a lente colectora conduz a imagem at ao plano focal da lente ocular.
Captulo3AMicroscopia
Recomendaes a seguir depois da utilizao do microscpio Baixar a platina. Colocar a objectiva de menor ampliao no prolongamento do tubo. Retirar a preparao e arrum-la no lugar que lhe destinado. Abrir o diafragma e subir o condensador. Verificar se a platina e as lentes ficaram limpas. Apagar a luz do microscpio. Cobrir o microscpio com a proteco e guard-lo na respectiva caixa e local.
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IV _____________________________
EXPERINCIAS LABORATORIAIS
Captulo4ExperinciasLaboratoriais
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Captulo4ExperinciasLaboratoriais
MATERIAL DE DISSECO Agulha de ponta fina Bisturi Pina de pontas finas Tesoura de pontas finas Tina de disseco
MATERIAL DE VIDRO o Balo de vidro o Balo volumtrico o Bureta o Caixa de Petri o Copo de p (graduado) o Balo de Erlenmeyer o Funil o Gobel o Lmina e lamela de vidro o Pipeta o Proveta o Termmetro o Tina de vidro o Tubos de ensaio o Vareta o Vidro de relgio
OUTRO MATERIAL Almofariz Balana Esguicho Esptulas Lamparina de lcool Pinas de tubos de ensaio Placa elctrica Rolhas Seringa Suporte para tubos de ensaio Suporte universal
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Captulo4ExperinciasLaboratoriais
PROCEDIMENTO 1 Cortar o bolbo da cebola em quatro partes. 2 Separar duas das escamas carnudas que formam o bolbo, e com a ajuda da pina retirar da epiderme que recobre a parte cncava que ficou a descoberto. 3 Introduzir rapidamente o fragmento da epiderme num vidro de relgio com gua, evitando tanto quanto possvel o enrolamento e procurando distend-lo o mais que puder com a ajuda de duas agulhas de dissecao.
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Captulo4ExperinciasLaboratoriais 4 Cortar com a tesoura um fragmento dessa pelcula epidrmica e mont-lo entre a lmina e lamela, utilizando a gua como meio de montagem. 5 Observar ao microscpio a preparao que acabou de montar, primeiro com a objectiva de menor ampliao e depois com a de maior ampliao. 6 Deitar uma a duas gotas de soluo de azul-de-metileno ao longo de uma das margens da lamela e aspirar, na margem oposta, com papel de filtro, at o corante ter penetrado entre a lmina e lamela.
7 Observar novamente a preparao ao microscpio. Registar o que se observou e fazer um esquema. 8 Deitar algumas gotas de soluo de vermelho neutro na gua do vidro do relgio. Introduzir um fragmento da epiderme das escamas da cebola nesse soluto durante alguns segundos.
9 Retirar o fragmento e mont-lo entre a lmina e lamela, numa gota de gua. 10 Observar novamente a preparao ao microscpio e registar o que se observou num esquema.
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Captulo4ExperinciasLaboratoriais
OBSERVAES EFECTUADAS
O bolbo da cebola constitudo por vrias folhas carnudas e imbricadas tnicas. Cada tnica recoberta por duas epidermes uma na face cncava e outra na face convexa, sendo cada uma delas formada por uma nica camada de clulas. Cada clula limitada por uma parede celular incolor constituda por celulose. Nas observaes efectuadas foi possvel observar o ncleo (a), o citoplasma (b) e a parede celular (c).
Observao
de
clulas
vegetais obtidas do bolbo da cebola utilizando a gua como meio de montagem (Aobj 20x).
Observao
de
clulas
Observao
de
clulas
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PROTOCOLO II OBSERVAO
TOMATE
MATERIAL 1 Microscpio 2 Bisturi 3 Lminas e lamelas 4 Tomate 5 Agulha de disseco 6 Vidro de relgio
PROCEDIMENTO
1 Cortar transversalmente um tomate e com o auxlio do bisturi retirar uma pequena poro da polpa carnuda.
2 Colocar o fragmento da polpa sobre uma lmina e esmague-o com o auxlio do bisturi.
3 Cobrir com a lamela e observar ao microscpio utilizando, como usualmente, primeiro a objectiva de menor ampliao e, seguidamente, a de maior ampliao. 4 Fazer um esquema legendado da sua observao.
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OBSERVAES EFECTUADAS
O tomate um fruto, uma vez que o produto do desenvolvimento do ovrio e do vulo da flor, formando o pericarpo e as sementes, respectivamente, aps a fecundao. Foi possvel observar cromoplastos, isto , constituintes celulares ricos em pigmentos (carotenides) vermelhos, amarelos ou cor-de-laranja. Devido fraca qualidade das imagens obtidas durante a observao dos resultados da actividade experimental, foi necessrio recorrer aos manuais escolares para obteno dessas imagens com uma certa qualidade.
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Captulo4ExperinciasLaboratoriais
PROCEDIMENTO
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OBSERVAES EFECTUADAS
A batata um tubrculo subterrneo da batateira, muito empregue na alimentao. As clulas que o constituem formam um tecido o parnquima amilceo com forma arredondada em que o citoplasma (a) apresenta inmeros corpsculos ovides ou elpticos: os amiloplastos (b). Estes organelos tm como principal funo o armazenamento de uma substncia de reserva, o amido, sob a forma de gros de amido (c). Foi tambm possvel observar a parede celular (d).
Observao de clulas do tubrculo da batateira utilizando gua destilada como meio de montagem (Aobj 40x).
Observao de clulas do tubrculo da batateira utilizando soluto de Lugol como meio de montagem (Aobj 40x).
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PROCEDIMENTO 1 Destacar, com o auxlio de uma pina, uma folha de Elodea e mont-la, entre lmina e lamela, numa gota de gua destilada.
OBSERVAES EFECTUADAS
Embora no se tivesse procedido realizao desta actividade experimental, achou-se indispensvel descrev-la, devido importncia destes organelos os cloroplastos (a) os quais apresentam cor verde devido existncia de um pigmento, a clorofila, essencial realizao da fotossntese.
Cloroplastos da Elodea
(http://azolla.fc.ul.pt/aulas/images/Aloe1_001.jpg)
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PROCEDIMENTO
A Preparao da infuso
1. Numa tina de vidro deitar 730 cm de gua da torneira e 25 cm de gua do charco. Colocar, superfcie da gua, uma mo cheia de feno, deixando um espao de cerca de 4 cm at aos bordos da tina.
2. Tapar a tina com uma placa de vidro e deixar num local iluminado temperatura ambiente, para ser observado periodicamente.
B Observao da infuso
Fazer preparaes extemporneas em diferentes fases da infuso ao 5, 10 e 20 dias. Para cada uma delas realizar as seguintes operaes:
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Captulo4ExperinciasLaboratoriais 1. Com uma pipeta, retirar uma gota sempre mesma profundidade.
2. Colocar a gota numa lmina e cobrir com uma lamela. 3. Observar a preparao ao microscpio. 4. Elaborar um relatrio referindo os microrganismos observados durante as trs fases da experincia.
OBSERVAES EFECTUADAS
Devido fraca qualidade das imagens obtidas durante a observao dos resultados da actividade experimental, foi necessrio recorrer a imagens divulgadas na internet, uma vez que os manuais apresentam
fundamentalmente esquemas e muito poucas imagens. Nesse sentido, optou-se por seleccionar os seres vivos (protozorios) mais frequentes em observaes de uma infuso.
Paramecium aurelia
(http://en.wikipedia.org/wiki/Paramecium)
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Euglena sp.
(http://pt.wikipedia.org/wiki/Euglena)
Vorticella (http://en.wikipedia.org/wiki/Vorticella)
Amoeba
(http://en.wikipedia.org/wiki/Amoeba)
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MATERIAL Microscpio ptico composto Sangue Humano Lminas e lamelas Caixas de Petri Pipeta gua destilada Corante de Giemsa Corante de May-Grnwald
PROCEDIMENTO 1. Colocar na extremidade de uma lmina uma gota de sangue, seguidamente fazer deslocar outra lmina sobre a anterior de forma a espalhar bem o sangue.
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Captulo4ExperinciasLaboratoriais 4. Cobrir a lmina com 20 gotas de corante de May-Grnwald e aguardar cerca de 5 minutos. Durante este tempo misturar 20 gotas de Giemsa com 20ml de gua destilada e deitar numa caixa de Petri.
7. Colocar a lmina com o esfregao para baixo na caixa de Petri que contm o corante de Giemsa e aguardar 5 minutos.
9. Observar ao microscpio.
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OBSERVAES EFECTUADAS
O sangue um tecido conjuntivo lquido que circula pelo sistema vascular sanguneo dos animais vertebrados. O sangue produzido na medula ssea e tem como funo a manuteno da vida do organismo, assegurando a realizao das trocas gasosas (hemcias, eritrcitos ou glbulos vermelhos), de processos imunitrios (leuccitos ou glbulos brancos) e do mecanismo de coagulao sangunea (plaquetas ou trombcitos).
Observao
de
clulas
Observao sanguneas
de
clulas (a),
leuccito
Observao sanguneas
de
clulas (b),
hemcias
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V _____________________________
CONCLUSO
Captulo6Bibliografia Ao longo dos ltimos anos tem sido consensual a ideia de que h uma disparidade crescente entre a educao nas nossas escolas e as necessidades e interesses dos alunos. A Cincia transformou no s o ambiente natural, mas tambm o modo como pensamos sobre ns prprios e sobre o mundo no qual habitamos. Aprender a ensinar uma tarefa para a vida toda de um professor. Com base neste lema e sendo eu uma professora em incio de carreira, ao observar a realidade do meu trabalho constatei que ao nvel das Cincias da Natureza, nomeadamente nos domnios da Citologia e da Microscopia, no reunia os conhecimentos essenciais para ensinar aos meus alunos qualquer contedo no qual as actividades experimentais estivessem patentes. Assim sendo, o trabalho desenvolvido nesta dissertao serviu para aumentar os meus conhecimentos sobre a clula a nvel estrutural e funcional, e a entrar em contacto com um mundo totalmente diferente do contexto sala de aula que o laboratrio. Aprendi a manipular o material, a manusear o microscpio, a fazer preparaes para observao microscpica e a efectuar as prprias observaes e registos. Tudo isto contribuiu para que me sinta hoje mais capaz de exercer a funo de professora e mais preparada para leccionar os contedos que se enquadram no programa de Cincias da Natureza e que foram objecto de estudo desta dissertao. O conhecimento cientfico no se adquire simplesmente pela vivncia de situaes quotidianas. H necessidade de uma interveno planeada do professor, a quem cabe a responsabilidade de sistematizar o conhecimento, de acordo com o nvel etrio dos alunos e dos contextos escolares. Foi nessa perspectiva que parti para esta aprendizagem, segura de que agora reno mais condies para poder ensinar, mas sempre consciente que ainda tenho muito para descobrir e aprender
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