Extrao de clulas tronco mesenquimais

- Extrair o fmur do camundongo e deixar 1 minuto no lcool 70 - Passar no PBS e colocar no DMEM incompleto - Fazer o flushing da medula ssea com DMEM incompleto com antibiticos at o osso ficar branco - Centrifugar por 10 minutos a 1500 rpm, 4 C - Descartar o sobrenadante e ressuspender com movimentos suaves - Ressuspender em 10 mL de DMEM low glicose 15% de SBF com antibiticos - Colocar em uma garrafa de 25 cm2 - Aps trs dias trocar todo o meio da garrafa e colocar meio novo - Quando atingir confluncia dividir as clulas em duas garrafas (tripsina-EDTA) - Aps trs passagens as clulas podem ser utilizadas

FENOTIPAGEM: CD45 (PE-Cy5) e CD34 (FITC) negativas CD44 (APC) e CD73(PE) positivas