Manual de Procedimientos de Laboratorio Clinico Veterinario 2

Facultad de Bioanálisis, Veracruz Manual de Procedimientos de Laboratorio
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE
LABORATORIO CLINICO VETERINARIO
INDICE
I. La Historia Clínica y su uso en el Diagnóstico Clínico Veterinario.
II. Métodos de sujeción y obtención de muestras para diagnostico de

laboratorio en animales domésticos.
III. El método de flotación para la identificación de huevecillos de

Nematodos en cánidos y felinos.
IV. El método de sedimentación para la identificación de huevecillos

de Trematodos en heces.
V. El método de Harada Mori para cultivo larvario de Ancylostoma y

Uncinaria en perros y gatos.
VI. Identificación de larvas de nematodos pulmonares por el método

de Baerman
VII. Técnicas Hematológicas en medicina veterinaria.
VIII. Diagnóstico de Mastitis mediante las pruebas de Hotis y del Azul

de Bromotimol
IX. Elaboración de autovacuna en la terapéutica de la Papilomatosis

bucal canina.
X. Tinción de esporos de Bacillus anthracis
XI. Prueba de intradermo-reacción para detección de Fasciola y

Tuberculosis
XII. Determinación de copto antígenos
XIII. Reacciones de aglutinación pruebas serológicas y lácteas para la

determinación de Brucelosis.
Laboratorio Clínico Veterinario www.quimicaclinicauv.blogspot.com

METODOS DE SUJECION Y OBTENCION DE

MUESTRAS PARA DIAGNOSTICO DE
LABORATORIO EN ANIMALES DOMESTICOS.
1. INTRODUCCION
Los veterinarios tienen la necesidad de consultar laboratorios para
resolver determinados problemas de diagnóstico. Sin embargo, este
esfuerzo puede verse mermado por una selección, preparación, manejo y
envío inadecuado de las muestras. Esta situación puede ser evitada
mediante el seguimiento cuidadoso de algunos principios generales:
 La muestra seleccionada deberá ser representativa del padecimiento.

 Suele ser preferible el envío de varios especimenes del mismo lugar.
 Las muestras deberán ser perfectamente identificadas.
 Deberá incluirse la Historia Clínica del individuo.
 Para cada caso se elegirá el tipo de recolección, manejo, conservación y
envío más adecuado, a la especie y tipo de padecimiento presentado.
 Cuidar en lo posible, el manejo estéril de la muestra y en una cantidad
adecuada.
 En caso de envío Postal, especificar en la envoltura el tipo de muestra,
forma de manejo y verificar que se lleve a cabo en el menor tiempo
posible.
En esta práctica se llevarán a cabo las técnicas de Punción venosa en

distintas especies domésticas, así como la toma de Muestra de orina y
Recolección de heces.
2. PRINCIPIO Y METODOLOGIA DE LA DETERMINACIÓN

TECNICA DE PUNCION VENOSA
En la práctica veterinaria los exámenes hematológicos se realizan

más satisfactoriamente con la sangre venosa. La punción venosa, se realiza
con aguja y jeringa de distintas medidas según el caso, ejecutándola sobre
cualquiera de las venas superficiales del individuo: Por ejemplo en el
caballo, la vaca y la oveja se emplea la vena yugular; Las venas safena y
radial, pueden sugerirse para el perro y gato; El cerdo es sangrado
normalmente en la vena cava anterior y en algunas razas en la auricular; Los
animales de laboratorio como el cobayo, ratón, rata y conejo son
desangrados fácilmente en el corazón, vena caudal o auricular.
Laboratorio Clínico Veterinario

3. LISTA DE REQUERIMIENTOS
3.1 Reactivos
NUM. CLAVE NOMBRE DEL REACTIVO CONC. CANTIDAD
Alcohol 70° 1L
Benzal 1L
Xilol 50 ml
Vaselina pura 100% 500 gr
Xilocaina 10% 100ml
Ketamina 50% 100 ml
3.2 Equipos de Laboratorio

1. Microscopio
3.3 Materiales de laboratorio

NUM. CANTIDAD DESCRIPCION
7 Guantes desechables
7 Jeringas desechables de 3 ml
4 Agujas desechables del No 21
3 Jeringas de insulina
1 Sonda de alimentación infantil
1 Cinta adhesiva opaca, tela adhesiva de 2-3 cm.
5 m. Cordón de algodón de 0.5 cm de diámetro
1 Tijeras
5 Gradillas
5 Tubos de ensaye 13 x 100
10 Porta objetos de vidrio
10 Cubreobjetos de vidrio
1 lanceta o bisturí
3 Hojas de bisturí
1 paquete Algodón
5 Ligas
10 abate lenguas
10 Cucharillas rectales o tubos de vidrio
10 frascos de vidrio
3.4 Material biológico
1 Perro macho de talla mediana o grande
2 Conejo adulto
3 Gallina o pollo grande

4 Gato adulto
5 Rata blanca o ratón.
4. TECNICA O PROCEDIMIENTO
4.1 TECNICAS DE SANGRADO EN ANIMALES DE LABORATORIO.
 PUNCIÓN INTRACARDIACA. Se coloca al individuo en posición dorsal,

se palpa entre la 2a y 3a costilla del lado izquierdo, se coloca la aguja
entre las citadas costillas, se presiona ligeramente sobre la zona y se jala
él embolo de la jeringa para obtener la muestra (Es necesario cuidar la
introducción de aire para evitar producir embolia gaseosa).
 PUNCIÓN EN LA VENA MARGINAL DE OREJA. Se coloca una torunda
dentro del conducto auditivo del conejo, se limpia con alcohol y se
recorta el pelo de la oreja con una tijera. Se pasa un algodón con xilol
para irritar la zona, con una lanceta o bisturí se podrá obtener la muestra.
 PUNCIÓN DE VENAS CAUDALES.
 RESERCION DE COLA Y DEDOS.
 SANGRADO EXHAUSTIVO Y DECAPITACION.
4.2 TECNICAS DE SANGRADO EN PERRO Y GATO.
El sangrado en perro y gato se lleva a cabo principalmente en las

venas safena y radial. Lo más importante para una correcta obtención de
muestra será la adecuada sujeción del individuo. Posteriormente se deberá
ocluir la vena por presión digital o torniquete. La piel sobre la vena es móvil,
por lo cual se deberá inmovilizar con los dedos de la mano que sujeta el
miembro. La aguja deberá insertarse con el bisel hacia arriba (No 21 para
perros y 22 al 25 para gatos). Se deberá evitar interrumpir la circulación por
tiempos prolongados para evitar hemoconcentración. La cantidad a obtener
será de 5 a 10 ml. evitando colapsar la vena. Al final se retirará la aguja y se
vaciará cuidadosamente en un tubo previamente preparado.
4.3 TOMA DE MUESTRA DE ORINA.
El análisis de orina es uno de los procedimientos de laboratorio más

comunes aplicados a la practica veterinaria, es de gran ayuda para el
diagnóstico diferencial tanto de padecimientos generalizados como del
aparato genitourinario.

Para su recolección es necesario emplear recipientes limpios,

preferentemente estériles. La muestra se recogerá durante la micción o por
sondeo, siendo este último más adecuado por estar libre de detritus uretral o
vaginal. Es difícil cateterizar a un perro más de una o dos veces al día
puesto que la reacción tisular al traumatismo, causa un estrechamiento del
lumen uretral a través del os penis.
4.4 RECOLECCION DE MUESTRA DE HECES.
Es indispensable la aplicación de medidas higiénicas estrictas como

medida de protección en la toma de muestras de heces, así como seguir las
indicaciones especificas para cada tipo de animal, utilizando recipientes
limpios o estériles para la recolección de la muestra.
En las especies de talla grande es más práctico e higiénico obtener

muestras directamente del recto del animal, con un guante de plástico. Una
vez obtenida una muestra adecuada, el guante es reversado hacia adentro,
sirviendo de esta forma como recipiente de recolección, una vez colectado
se sella, se identifica y se envía refrigerada al laboratorio. En los animales
pequeños, las muestras fecales son obtenidas por medio del termómetro o
una varilla de vidrio, aunque esta pequeña cantidad será apenas suficiente
para un examen directo.
En caso de no ser posible la recolección directa se procederá a tomar

la muestra directamente del recto, se cuidara que la defecación ocurra sobre
un piso previamente lavado. En este caso la muestra se recogerá con
guante plástico, espátula de madera, tomando solo la capa superior que no
entró en contacto con el suelo.
5. PROCESAMIENTO DE RESULTADOS
RESULTADOS Y OBSERVACIONES

CONCLUSIONES
6. BIBLIOGRAFÍA
De la Puente G. José. Manual de Exterior y manejo y Técnicas de sujeción

de los animales domésticos. UNAM. México.
Oteiza Fernández, José. Manejo de Animales. Editorial Textos Universitarios.

México.
El Manual Merck de Veterinaria. Merck & CO. INC. USA.

EL METODO DE FLOTACION PARA LA

IDENTIFICACION DE HUEVECILLOS DE
NEMATODOS EN CANIDEOS Y FELINOS.
1. INTRODUCCION
La parasitología estudia los seres que viven momentánea y/o

permanentemente, sobre o dentro de otros organismos vivientes, obteniendo
de los mismos su subsistencia. Las enfermedades parasitarias son la
interrelación entre el agente etiológico (parásito), el hospedero y el medio
ambiente, en donde al romperse la relación de equilibrio se produce
sintomatología y se origina la enfermedad.
Existen algunos parámetros que nos sirven para destacar la

importancia que guardan en Medicina Veterinaria, por ejemplo: la incidencia
en animales domésticos, la mortalidad por parasitosis, las erogaciones
económicas producidas a los productores, así como la repercusión social y
económica.
Todo ello nos lleva a considerar la importancia de conocer no solo a

las enfermedades parasitarias, sus agentes etiológicos, patología,
sintomatología, y la forma de combatirla, sin lograr su control mediante el
diagnóstico e identificación que permita el control de las infestaciones
subsecuentes.
La presente práctica consiste en la determinación de parásitos

mediante técnicas de frotis directo y flotación. Consiste en dispersar una
suspensión de material fecal en solución de mayor densidad que los
huevecillos de parásitos, la diferencia en la gravedad específica hace que
los huevos se eleven a la superficie. Cuando los huevos permanecen
demasiado tiempo en la solución de concentración, pueden deformarse.
Esta técnica es recomendada para la identificación de quistes de

protozoarios y huevos de helmintos, ya que son capaces de flotar en pesos
específicos de 1,000 a 1,200. Los huevecillos de tremátodos son mucho
más pesados, por tanto solo flotarán en líquidos con pesos específicos
superiores a los 1,300.

3.1 Reactivos (soluciones de enriquecimiento)

Solución saturada de sal 1.190 a 20°C 5L
Solución saturada de azúcar 1. 120 a 15°C 5 L
Solución cloruro de zinc 1.890 a 20°C 5 L
3.2 Equipo de Laboratorio

1. Microscopio
2. Centrífuga (opcional)

5 Vasos de precipitado 100 ml
10 Tubos de ensaye
10 Portaobjetos
10 Cubreobjetos
5 Gradillas
5 Pinzas
5 Coladeras de malla fina de plástico 6 a 7 cm
diámetro
10 Abatelenguas o varillas de vidrio
10 Gasas
5 Lazos de alambre
5 Espátulas
3.4 Material Biológico

1. heces de perro
2. heces de gato
3. heces de aves
4. heces de cerdo
5. heces de bovino u ovino
4.1 FROTIS DIRECTO

Se emulsifica una pequeña cantidad de heces en agua y se aplica una

pequeña capa sobre el portaobjetos. Se coloca el cubreobjetos y se
examina el frotis en el objetivo de menor aumento, investigando la presencia
de huevos, quistes y larvas. Este método es valioso cuando se sospecha de
la presencia de larvas de nemátodos o protozoarios móviles.
4.2 MÉTODO DE FLOTACION
En un vaso de precipitado de 100 ml se mezclan 2 g de heces con

algo de solución de enriquecimiento utilizando para ello una espátula. Luego
se agregan 90 ml de solución de enriquecimiento agitando vigorosamente
para obtener una mezcla bien homogénea. Si las heces contienen muchas
partículas grandes se cuela la mezcla en colador fino. Se debe recordar que
algunos huevos quedan en el residuo detenido por la malla del colador. Lugo
se deja reposar la mezcla por unos minutos hasta que las burbujas de aire
hayan salido y dejar flotar cuidadosamente un cubreobjetos sobre la
superficie del líquido. Los huevos de parásitos flotarán hacia la superficie y
se adherirán al cubreobjeto. Después de media hora el cubreobjeto es
cuidadosamente tomado con una pinza y colocado sobre el portaobjetos. La
preparación es observada al microscopio.
La flotación de los huevos en la solución de enriquecimiento se puede

acelerar por medio de la centrifugación. El tubo para centrífuga debe ser lo
suficientemente ancho que permita colocar el cubreobjetos sobre la
superficie del líquido. La suspensión se centrifuga con el cubreobjeto sobre
la superficie del líquido. Si ello no es posible, la capa superficial del líquido
puede ser sacada con un lazo de alambre y luego colocada sobre el
portaobjetos.

CONCLUSIONES
6. BIBLIOGRAFÍA
THIENPONT, D; ROCHETTE, F; VANPARIJS, O.F.J. Diagnóstico de las

Helmintiasis por medio del examen coprológico. Janssen Research
Foundation. Beerse Belgica. 1979.
QUIROZ, R. H. Parasitología y Enfermedades parasitarias de los animales

domésticos. Ed Limusa. México.
LAPAGE, G. Parasitología Animal. Logia. Ed. Continental. México.

EL METODO DE SEDIMENTACION PARA LA

IDENTIFICACION DE HUEVECILLOS DE
TREMATODOS EN HECES.
1. INTRODUCCION
La Fasciolasis, Distomatosis hepática, Palomilla o Mariposa del
hígado, es una enfermedad que afecta comúnmente a las ovejas, así como
a las cabras, bovinos, cerdos, equinos, eventualmente al hombre y a
algunos animales silvestres, presentando una amplia distribución mundial.
Es una enfermedad parasitaria debida a la presencia y acción del

Tremátodo Fasciola hepática . Presenta un proceso inflamatorio crónico
del hígado y conductos biliares, causando trastornos digestivos y
nutricionales
Los huevecillos de tremátodo son fácilmente identificables en frotis

directo o por la técnica de sedimentación, debido a la presencia de un
opérculo polar, el cual puede ser destruido en soluciones hipertónicas, por lo
cual no se recomiendan las técnicas de flotación.
3.1 Reactivos
Solución Salina Fisiológica 1L
Éter 1L
Ácido acético 5% 100 ml
Azul de metileno 1% 100 ml
3.2 Equipo de Laboratorio

3. Centrífuga
4. Microscopio


10 Vasos de precipitado 100 ml

20 Tubos para centrífuga (cónicos)
20 Portaobjetos
20 Cubreobjetos
10 Gradillas
10 Pipetas Pasteur
10 Coladeras de malla fina de plástico
10 palillos finos de madera
10 Gasas
10 Goteros de cristal
10 Espátulas

• heces de ovino
• heces de bovino
4.1 METODO DE SEDIMENTACION SIMPLE
Como se mencionó anteriormente, esta técnica se utiliza únicamente

cuando se sospecha la presencia de huevecillos de tremátodo u otra clase
de huevecillos operculados.
1. Se coloca una suspensión de heces en agua (puede utilizarse solución

salina) en un tubo de ensaye cónico, colada a través de una malla fina.
2. Se deja el tubo en reposo por un mínimo de 15 minutos o a centrifugación
a baja velocidad.
3. Se extrae el sedimento mediante una pipeta Pasteur o gotero.
4. Se examina al microscopio en un portaobjetos.
4.2 METODO DE TELEMAN.
1. En 5 ml. de solución de ácido acético al 5% se suspende 1 gr. de heces

agitándolo.
2. Se deja reposar por un minuto y se coloca dentro de un tubo de
centrifugación.
3. Se le agrega igual cantidad de éter y se agita vigorosamente.
4. Se centrifuga durante un minuto a 1500 RPM.

5. El sedimento que se forma contiene los huevecillos de tremátodo, y

presenta encima una capa de ácido acético y una capa de éter, con una
capa de restos de heces entre ambas.
6. Con un palillo fino y largo se afloja el sobrenadante de las paredes del
tubo y se decanta, debiendo quedar solo el sedimento.
7. Se agregan unas gotas de agua al sedimento y se mezcla vigorosamente
8. Se toman unas gotas de esta suspensión y se colocan sobre el
portaobjetos, examinándolo bajo el pequeño aumento.
Con este método es posible evaluar la intensidad de la infestación.
CONCLUSIONES

6. BIBLIOGRAFÍA



EL METODO DE HARADA MORI PARA CULTIVO

LARVARIO DE ANCYLOSTOMA Y UNCINARIA EN
PERROS Y GATOS.
1. INTRODUCCION
La Anquilostomiasis o Uncinariasis es la Infestación causada por la
presencia ya acción de larvas y adultos de varias especies de Ancylostoma
y Uncinaria en intestino delgado y otros tejidos en perros y gatos,
Clínicamente se caracteriza por anemia ferropénica, adelgazamiento,
diarrea sanguinolenta y en algunos casos edema en patas. Es común en
cachorros posterior al destete, pudiéndose observar también en perros
confinados.
El cuadro clínico por tanto es característico en zonas con problemas

enzooticos. Su diagnostico se debe apoyar con la observación de huevos en
heces, en relación con u cuadro anémico (hematocrito).
Para el diagnostico de larvas se recomienda el método de Harada

Mori, ya que las larvas son muy sensibles a la sequedad.
3. 1 Reactivos
Agua destilada 1L

1. Estufa de cultivo
2. Lupa
3. Microscopio

50 cm Papel filtro. (13 x 120 mm)

10 tubos de centrífuga cónico de 15 ml

10 Tapones para los tubos de centrífuga de 15 ml
10 Pipetas

1. heces de Perro parasitado o sospechosos
4. TECNICAS Y PROCEDIMIENTOS
El cultivo de larvas en heces de perro o gato infectado, se lleva a cabo

por el Método de Harada Mori dentro de un tubo de ensaye .
1. Se toma una delgada capa de heces de 1 a 2 mm, y se extiende sobre el

papel filtro, colocándola en el tercio medio.
2. Se agregan 3 ml de agua destilada en el tubo de ensaya.
3. Se coloca el papel filtro con la muestra dentro del tubo, de tal modo, que
el extremo inferior haga contacto con el agua (un cm aproximadamente)
sin que haga contacto el agua con las heces.
4. En el extremo superior del tubo se coloca un tapón de algodón,
sosteniendo el otro extremo del papel.
5. Este cultivo se lleva de 7 a 10 días en la estufa a temperatura promedio
de 24 a 28 C.
6. Cada día se deberá verificar que el agua contacte con la superficie de
papel, en caso necesario se agregará más agua destilada.
7. Las heces se mantendrán húmedas gracias al papel filtro y tan pronto
como las larvas se hallen libres, emigrarán hacia el agua.
8. Las larvas son sacadas con una pipeta y examinadas al microscopio con
el menor aumento.

CONCLUSIONES
6. BIBLIOGRAFIA



IDENTIFICACIÓN DE LARVAS DE NEMATODOS

PULMONARES POR EL METODO DE BAERMAN
1. INTRODUCCION
Los huevos de nemátodos y larvas en heces de bovinos, son casi los
mismos que se encuentran en pequeños rumiantes domésticos y salvajes,
en medicina veterinaria, el aparato de Baerman ha sido de gran ayuda para
la identificación de parásitos pulmonares de la familia Protostrongylidae
principalmente.
Cuando se usan heces recién extraídas siempre que se

encuentren larvas, estas serán identificadas como nemátodos pulmonares,
puesto que solo estas son vivíparas. Si por ejemplo se utilizan heces de más
tiempo de recolectadas, las larvas de Strongyloides, Trichostrongylídeos y
otros nemátodos pueden ser encontradas, tras la eclosión de los
huevecillos, lo que obviamente interferirá en el diagnóstico.
Cualquier infección por pequeña que sea, puede ser detectada por
medio de este aparato y puede ser utilizado cuantitativamente, siempre que
se pese con exactitud la cantidad de heces a utilizar.
El aparato de Baerman consiste en un embudo de vidrio sostenido por

un soporte y en su parte inferior tiene colocado un tubo de goma de 10 cm
de largo que termina en una pequeña pipeta (gotero). El tubo de goma es
cerrado por un clip. La boca del embudo es cubierta con una malla coladora
de gasa o alambre cuya abertura sea de 0.6 a 0.7 mm, la que se empuja un
poco en la mitad de manera que se sumerja principalmente en el embudo,
ésta se cubre por debajo con doble capa de gasas.
3.1 Reactivos
Agua destilada 2L

1. Microscopio
2. Centrífuga (opcional)
3.3 Material de laboratorio

10 Embudos de vidrio
10 Soporte universal con pinza
5m Tubo de goma
10 goteros
10 Clips
20 Gasas
10 Mallas coladoras de alambre con abertura de 0.6
a 0.7 mm
20 Portaobjetos
20 Cubre objetos
3.4 material Biológico

1. Heces de bovino u ovino sospechoso a parásitos pulmonares
Colocar sobre las gasas 20 g de heces frescas. Llenar el embudo con

agua tibia (max. 30°C) en la cual deben sumergirse completamente las
heces. Si las heces son muy líquidas se deben usar varias capas de gasas.
Colocar todo el aparato a temperatura ambiente durante 24 hrs. las larvas
saldrán de las heces ya remojadas y pasando a través del colador, irán a
depositarse en el cuello del embudo concentrándose en el fondo. Cuando el
clip es abierto se deben recolectar las primeras 3 a 4 gotas (no más) en un
portaobjetos de vidrio y sin cubreobjetos deberán ser examinadas al
microscopio bajo el aumento menor. Las larvas de nemátodos se verán
mover activamente. También se podrá recolectar dentro de un tubo para
centrífuga de 5 a 10 ml, procediendo al centrifugado, tras la decantación del
sobrenadante, larvas obtenidas deberán estar en el sedimento del tubo.
5. PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS

CONCLUSIONES
6. BIBLIOGRAFÍA



TECNICAS HEMATOLOGICAS EN
MEDICINA VETERINARIA.
1. INTRODUCCION
En la práctica veterinaria los exámenes hematológicos se realizan

mas satisfactoriamente con la sangre venosa prefiriéndose como se indicó
en la primera práctica : la vena yugular para caballos, bovinos, ovejas y
cabras; el corazón en conejos, cobayos y ratones, y la vena cava para el
cerdo.
2. PRINCIPIO Y METODOLOGIA DE LA DETERMINACION
Las técnicas empleadas en medicina veterinaria son similares a las

utilizadas en hematología humana, sin embargo existen algunas
consideraciones que serán necesarias indicar.
En primer lugar los eritrocitos de perro son especialmente

susceptibles a la hemólisis, por lo cual se deberá evitar el exceso de presión
negativa sobre la jeringa, así como la formación de espuma que la favorezca
(utilizar jeringas de 5 a 10 c.c. con émbolo bien ajustado).
Es importante recordar que para las determinaciones de hemoglobina

y la cuenta globular, se requiere un anticoagulante y refrigeración (solución
al 10% con 4 partes de oxalato de potasio y 6 de oxalato de amonio,
colocando 0.15 c.c. en tubos de 5 c.c. para perro y gato o 0.3 para tubo de
10 c.c. en especies mayores. También podrán utilizarse de 2 a 4 mg de
cristales de oxalato de sodio y citrato de sodio en solución evaporando a
sequedad en tubo de ensaye inclinado).
3.1 Reactivos
Cianometa
Standard para cianometa

1. Microcentrífuga
2. Microscopio
3. Espectofotómetro
4. Disco lector

10 Tubos de vacutainer con EDTA
10 Tubos de ensaye de 13 x 100
50 Portaobjetos
10 Capilares
5 Lámparas de alcohol
5 Pipetas de sahli
5 Boquillas
5 Gradillas
3.4. Material biológico

1. Muestras de sangre de diferentes especies animales
a. Bovino
b. Ovino
c. Perro
d. Gato
e. Pollo
Una vez recibida la muestra se mezcla por inversión, se preparan 4 frotis de

sangre y se dejan secar, y se llenan dos pipetas: una para determinación de
hemoglobina y otra para conteo de leucocitos. Se procederá a la verificación
de la cuenta leucocitaria, a la tinción de frotis para el estudio microscópico y
la cuenta diferencial (fórmula blanca) y la determinación de hemoglobina.
4.1 PREPARACION DEL FROTIS DE SANGRE.
1. Este procedimiento requiere sangre fresca.

2. Para extender la preparación serán necesarias varias láminas limpias,
sobre las cuales se colocará una gota de sangre en el extremo de la
lámina.
3. Con otra lámina se procede a extender la sangre, deslizándola mediante
un movimiento rápido, al poner en contacto el borde de la lámina con la
gota, en un ángulo agudo.

4. Secar mediante calor o aire, evitando la fragmentación y crenación de los

eritrocitos.
5. La laminilla deberá ser identificada y teñida con los procedimientos
usuales (Wright).
6. Una vez seca, se observará al microscopio tanto los eritrocitos como los
núcleos de los leucocitos.
4.2 DETERMINACION DE HEMOGLOBINA
Existen dos tipos de procedimientos para la determinación de hemoglobina,

ambos son colorimétricos, el directo es el método de Tallqvist en donde el
color de la sangre total expuesto en un papel secante se compara con un
patrón, este es utilizado en campo, y dentro de los métodos indirectos se
utilizan el hemaglobinómetro de Shali o el de Handen - Hausser, en el cual
la hemoglobina es convertida primero en hematina ácida y entonces se
compara con un patrón (escala graduada).
4.3 CUENTA DE LEUCOCITOS
Para esta prueba se requiere sangre venosa oxalatada, extraída en las 24

horas previas al examen.
1. La muestra de sangre se vierte sobre un frasco pequeño con ácido

clorhídrico 1-10 normal, mezclándola cuidadosamente por inversión
repetida.
2. Se procede al llenado de la pipeta de glóbulos blancos hasta 0.5 3.
3. La punta de la pipeta deberá introducirse en el frasco que contiene
diluyente y se aspira cuidadosamente, mezclando el contenido mediante
movimientos de rotación, hasta la marca 11.
4. Una vez lleno deberá ser agitado manual o eléctricamente hasta asegurar
la homogeneización de la mezcla.
5. El siguiente paso consiste en el llenado de la cámara contadora, la cual
deberá estar limpia y libre de grasa.
6. Se procede a colocar el cubreobjetos sobre la cámara.
7. Nuevamente se agita la pipeta, y se desechan dos o tres gotas del capilar
graduado de la pipeta.
8. Posteriormente, se procede al llenado por capilaridad, de la cámara sobre
las dos hendiduras que separa al borde del cubreobjetos con la misma.
9. Una vez llena, se procede a la observación al microscopio para el conteo
de los leucocitos existentes en cuatro de los cuadros grandes del campo,
la suma de su contenido, se multiplica por 50 para dar el total.

10. Cada cuadro grande posee 16 cuadros secundarios y presenta un área

de 1 milímetro cuadrado y su profundidad es de 0.1 mm (cuatro décimas
de milímetro cubico a una dilución de 1 a 20).
4.4 CUENTA DE ERITROCITOS.
Para el llenado de la pipeta se sigue una técnica semejante a la anterior,

sustituyendo el liquido de dilución (Hayem), se llena hasta la marca 101 y
se procede al llenado de la cámara contadora.
1. la cuanta de los eritrocitos se lleva a cabo en el área central finamente

graduada de la cámara.
2. Se cuentan los cuadros secundarios de las esquinas y el cuadro central
(cinco en total).
3. Para el cálculo de la cifra total, la suma de los eritrocitos de los 5 cuadros
es multiplicada por 10,000 y da la cifra total.
CONCLUSIONES

6. BIBLIOGRAFIA
BENJAMÍN M. M. Manual de Patología Clínica Veterinaria. 4ª Edición. Ed.

Limusa. México. 1990
COLES, E. H. Diagnóstico y Patología Veterinaria. 5ª Edición. Ed.

Interamericana. México. 1998
El Manual Merck de Veterinaria. Merck &CO. Centrum España 1988

DIAGNOSTICO DE MASTITIS MEDIANTE LAS

PRUEBAS DE HOTIS
Y DEL AZUL DE BROMOTIMOL
1. INTRODUCCION
La mastitis es una enfermedad aguda o crónica de tipo bacteriano que

afecta la glándula mamaria de diversas especies animales siendo de
importancia económica significativa en el caso del ganado bovino, el agente
causal puede ser variado entre los que tenemos a los Staphylococcus spp.,
Corynebacterium pyogenes, E. coli, Pseudomonas spp.
Para el diagnóstico de la mastitis se han aconsejado un sinnúmero de

procedimientos clasificándose de la siguiente manera:
1. Examen físico del animal (palpación e inspección).

2. Examen físico de la leche.
3. Examen químico de la leche (con indicadores como el azul de
bromotimol).
4. Examen microscópico de la leche investigando la presencia de leucocitos
y bacterias (directo o en muestra incubada).
5. Pruebas presuncionales de cultivo encaminadas a identificar al
microorganismo, así como la prueba de Hotis.
6. Procedimientos específicos de cultivo para el aislamiento e identificación
del germen.
El éxito en el resultado de la prueba dependerá en gran medida de un

estricto procedimiento de recolección que evite la contaminación de la
muestra.
Estas precauciones no serán tan estrictas en caso de que las pruebas

sean de carácter físico y químico.

3.1 Reactivos
Solución clorada 200 ppm 10 L
Alcohol 70% 5L
Azul de bromotimol 1L
Púrpura de bromocresol 1 - 300 1L
Tinción de Gram

2. Microscopio

20 Lienzos de tela estéril (magitel)
5 Paletas para prueba de mastitis
20 Frascos de vidrio estériles
30 Tubos de ensaye 13 x 100
30 Tubos de ensaye 20 cc con tapón de rosca
10 Pipetas pasteur
20 Portaobjetos
1. Vacas en etapa de lactación
2. Muestras de leche directa de la ordeña
4.1 PROCEDIMIENTO DE TOMA DE MUESTRA
1. Limpieza de la ubre.
2. Lavado con solución clorada (200 ppm).
3. Secar con lienzo limpio.
4. Secar y esterilizar el pezón con alcohol al 70%.
5. Despuntar para la prueba de paño negro, en su caso.
6. Ordeñar directamente sobre el recipiente evitando el contacto con el
pezón.
7. Las muestras de cada cuarto deberá ser tomadas por separado,
identificando el cuarto a que corresponden.
8. lavar y desinfectar las manos del ordeñador antes y entre la toma de cada
cuarto.

4.2 PRUEBA DE AZUL DE BROMOTIMOL.
1. Extraer con cuidado 5cc de leche de cada cuarto y colocar en los tubos
dispuestos.
2. Agregar 0.5 a 1.0 cc de solución de azul de bromotimol en cada tubo.
3. Proceder a la lectura apoyado con iluminación natural preferentemente.
• Reacción amarillo verdoso equivale a un pH normal.
• Reacción verde a verde oscuro o azul, presencia de exudado inflamatorio.
4. Vaciar las soluciones de las pruebas después de cada examen, y lavar
con agua neutra.
Esta prueba no es exacta al comienzo ni en la fecha cercana al final de la

lactancia. Los papeles indicadores pueden suplir a la solución con menor
exactitud en los resultados.
4.3 PRUEBA DE HOTIS
1. Preparar cada tubo agregando 1cc de solución estéril de púrpura de

bromocresol al 1-300.
2. Marcar los tubos a 16 cc.
3. extraer suficiente leche mediante la técnica estéril, para llenar el tubo
hasta la marca.
4. Tapar y mezclar el contenido por inversión.
5. Incubar por espacio de 24 Hrs a 37 C y observar los cambios físicos que
experimente.
6. Interpretación de la prueba : esta prueba esta destinada a revelar la
presencia de Streptococcus agalactiae.
• Cuando el color vire a amarillo, revela la presencia de gérmenes que
fermentan la lactosa debido a la baja del pH de la solución.
• Reacción negativa. cuando no hay cambios o adquiere una coloración
grisácea con o sin sedimento.
• Reacción positiva. el color de la solución varia del gris al amarillo
brillanteñ se presentan los flóculos amarillentos, observandose desde
unos cuantos en el fondo y los lados del tubo hasta un sedimento denso.
La prueba de Hotis puede ser asociada al examen microscópico directo,

para lo cual se procederá a incubar los tubos de ensaye invertidos, para
que, en caso de muestras positivas, el sedimento adherido al tapón sea
observado al microscopio preparando los frotis necesario

CONCLUSIONES
6. BIBLIOGRAFIA



ELABORACION DE AUTOVACUNA EN LA
TERAPEUTICA DE LA
PAPILOMATOSIS BUCAL CANINA.
1. INTRODUCCION
La papilomatosis en una enfermedad viral (Papovavirus) en perros

jóvenes, que se manifiesta con tumefacciones epiteliales benignas (verrugas
blanquecinas y rugosas) en hocico, boca, lengua, paladar y garganta.
Pudiendo causar muchas molestias y ser altamente contagioso. La práctica
señala que los perros se recuperan de manera espontánea después de 6 o 7
meses adquiriendo inmunidad permanente, sin embargo se recomienda la
aplicación de autovacuna para estimular la velocidad de la respuesta.
La presente práctica tiene como objeto provocar la respuesta inmune

en un canideo con papilomatosis bucal, utilizando como antígeno el virus de
las lesiones neoplásicas, para obtener anticuerpos específicos contra el
mismo.
Los antígenos son sustancias que al ser introducidas en el organismo,

inducen una respuesta inmune detectable y que puede reaccionar los
mecanismos efectores humorales o celulares de la respuesta. Cualquier
sustancia o célula que es reconocida como extraña por el sistema inmune
puede ser un antígeno (bacterias, virus, glóbulos rojos, células de
transplante, etc.)
Dentro de las características químicas que debe poseer un antígeno

están:
1. Composición química. Preferentemente proteínas, o bien polisacáridos,
lípidos complejos, o ácidos nucleicos.
2. Carácter extraño. Alejados filogenéticamente del sistema inmune
receptor.
3. Peso molecular. Superior a 10,000.
4. Rigidez estructural. La complejidad estructural eleva la inmunogenicidad.
Para una adecuada respuesta inmune se requiere alto grado de pureza e

integridad para facilitar la reacción. Los antígenos pueden ser moleculares

o celulares, y al encontrarse intracelularmente deberán ser liberados para

provocar una mejor estimulación. Los métodos empleados para la ruptura de
tejidos o células pueden ser: congelación y descongelación simultánea,
maceración en mortero, licuadora, sonicación, prensas, Bombas y crío
impactación entre otras.
3. LISTA DE REQUERIMINETOS
3.1 Reactivos
Solución salina fisiológica 5L
Formaldehído 1% 1L
Penicilina sódica 800 UI 1 fco
Anestesal 1 fco
Estreptomicina 1 fco
3.2 Equipos de laboratorio

1. Balanza.
2. Centrífuga

3 Mortero estéril
3 pistilo estéril
3 Tijeras
3 Pinzas de disección
3 Caja de petri
3 Embudo de cristal
3 Soporte universal
3 Gradillas
10 Gasa estéril
3 Pipetas de 1ml
3 Pipetas de 10 ml
6 Tubos de centrífuga
9 Jeringas de 3 ml
3 Jeringas de 5 ml
3 Jeringas de insulina
1 Kg Arena estéril
Tubos de ensaye estériles de 13 x 100 con tapón

1. Papilomas bovinos
2. Papilomas bucales caninos
1. Para la obtención de la muestra se procederá a tranquilizar al animal (con

Anestesal), se pinza la base del papiloma (pedúnculo) y se corta con
bisturí, (colocando la muestra en una caja de petri estéril, conservándola
con solución salina fisiológica en refrigeración) se procede a cauterizar la
base de la lesión. Dependiendo del tamaño de la lesión se deberán tomar
5 o 6 gramos de muestra.
2. Una vez obtenida la muestra, se troceará con tijeras lo mas pequeño
posible colocándola sobre una caja de petri para poder pesarla,
obteniendo 4 gr .
3. Se colocan sobre el mortero y se procede a macerar con el pistilo, hasta
obtener la destrucción celular, en caso necesario utilizar arena estéril
(muestras muy grandes y duras)
4. Agregar solución salina fisiológica hasta lograr una suspensión al 20%
(4ml se SSF por cada gramo de tejido).
5. Filtrar el macerado con gasa estéril y centrifugar a 2,000 rpm durante 10 a
15 min.
6. Titular el sobrenadante, por cada ml agregar 500 U.I. de penicilina y 500m
g de estreptomicina como conservador
7. Como inactivador del virus se utilizará Formaldehido al 1%.
8. Incubar a 37 C durante 24 hrs.
9. Refrigerar hasta su uso.
10. Aplicar 5 ml subcutáneos en tres aplicaciones cada 8 días.

CONCLUSIONES
6. BIBLIOGRAFIA


CARTER, G. R. Bacteriología y Microbiología Veterinaria. Ed. M.M.M.

México. 1990

TINCION DE ESPOROS DE Bacillus anthracis
1. INTRODUCCION
La formación del esporo es un mecanismo especializado para la

supervivencia bacteriana en circunstancias difíciles. Su función es encerrar
un genoma o paquete genético, en un vehículo aislante que le permita la
germinación subsiguiente en un medio adecuado. Los esporos, que son
células en el sentido estricto de la palabra, se encuentran en un estado de
criptobiosis o vida latente, sin actividad metabólica y muestran un aumento
marcado en la resistencia a diversos agentes químicos o físicos como por
ejemplo la desecación, congelación y resistencia al calor y a las radiaciones.
El efecto que las condiciones ambientales tienen sobre la formación

del esporo varía de un tipo de bacteria a otra. Ejemplo; el bacilo de la Fiebre
carbonosa (Bacillus anthracis), solamente forma esporos en condiciones de
aerobiosis y estas no pueden encontrarse en impresiones de órganos como
el bazo de animales muertos de Antrax, en donde la insuficiencia de
aerobiosis del tejido impide la formación del esporo.
3.1 Reactivos
Cepa vacunal de Bacillus 1 fco
anthracis.
Verde de malaquita 1 fco
Solución acuosa de safranina 1 fco

1. Microscopio


5 Portaobjetos
5 Lápiz graso
5 Asa bacteriológica
5 Platina
1 Jeringa desechable de 3 ml
1. Con ayuda de una jeringa, depositar una gota de Cepa vacunal en el

centro de un portaobjetos y fijar.
2. Aplicar verde de malaquita y calentar hasta la emisión de vapores,
durante 1 minuto.
3. Lavar con agua corriente.
4. Contrastar con solución acuosa de Safranina, durante 15 segundos.
5. Lavar, secar y observar al microscopio.
Resultados a observar: Los esporos se tiñen en verde claro y las

formas vegetativas en rojo.

CONCLUSIONES
6. BIBLIOGRAFIA



México. 1990
MERCHAT, I. A. y PARCKER, R. A. Bacteriología y Virología Veterinaria. Ed.

Acribia. México.

PRUEBA DE INTRADERMO-REACCION PARA

DETECCIÓN DE FASCIOLA Y TUBERCULOSIS
1. INTRODUCCION
La práctica se basa en la posibilidad de diagnosticar en condiciones

de campo a algunas enfermedades crónicas de los animales, mediante la
inoculación de antígenos conocidos y demostrando una respuesta inmune
previa, denominada Hipersensibilidad.
Siendo la tuberculosis bovina una zoonosis muy importante en el

campo de la Salud Pública, además de la campaña nacional de control y
erradicación de este problema, es para nosotros conocer perfectamente la
técnica de detección, así como saber dictar las políticas a seguir en el
momento de encontrar uno o más animales afectados (reactores), evitando
así mayores problemas debido a su alta transmisibilidad.
La observación de la reacción de la tuberculina, es una

hipersensibilidad de tipo IV (Gell-Coombs), debido a que en ella participan
linfocitos T y macrófagos, esto es, se precisa que haya una infección
primaria de tuberculosis que pudiera ser clínica o subclínica y que se
hubiese implementado una respuesta inmune y que ahora estaremos en
posibilidad de demostrarlo y que estas células al momento del contacto con
la tuberculina liberen unas substancias denominadas genéricamente como
"linfocinas" y otras substancias como las amino-vaso activas; Esto dar por
resultado que en el sitio de la inoculación o de contacto se forme un proceso
inflamatorio con infiltración de linfocitos, monocitos y polimorfonucleres
"neutrófilos", así como las aminas vaso activas e interleucinas que
promueven la salida de líquidos del torrente sanguíneo, provocando el
edema.
Aunque generalmente existe un elevado grado de resistencia del

hospedador, en numerosas ocasiones se han registrado casos de inmuno
supresión en enfermedades crónicas, lo que hace que el microorganismo
prolifere de manera relativamente incontrolada en los tejidos del individuo y
al mismo tiempo se podría observar una reactividad negativa a la prueba de
la tuberculina; también se han registrado casos de resistencia familiar baja a

la tuberculina, lo cual indica que existe una gran capacidad para producir
diversos grados de inmunidad celular a un organismo infectante
determinado, esto es bajo control genético en los antígenos del complejo
mayor de histocompatibilidad (MHC).
Aparte de la tuberculosis existen otras enfermedades que pueden ser

diagnosticadas mediante el mismo tipo de prueba, obviamente cada una
requiere de su antígeno específico, estas son, como: lepra (lepromina),
brucelosis (brucelina), paratuberculosis (johnnina), muermo equino
(maleína), histoplasmosis (histoplasminina), coccidioidomicosis
(coccidioidina), hidatidosis (líquido del quiste hidatídico, prueba de Cazzoni),
linfogranuloma venéreo (macerado de neoplasias, prueba de Frei), y con
algunos virus inactivados (rinotraqueítis infecciosa bovina, Aujezsky, rabia,
etc.).
En la prueba diagnóstica de la tuberculosis hay dos tipos de antígenos

según la bacteria de donde se originen: aviar o mamífero (bovino), estas
substancias se conocen como Derivado Proteico Purificado de la
tuberculina. Debiéndose aplicar por vía intradérmica 1/10 de mililitro (0.1 ml
ó 100 ml), en el pliegue caudal o en la tabla del cuello del bovino,
registrándose las lecturas a las 72 horas; los resultados deben anotarse
como: REACTORES O NO REACTORES (positivos o negativos,
respectivamente). Es necesario conocer la Norma Oficial Mexicana para el
control y erradicación de la tuberculosis bovina.
También como pruebas intradérmicas podemos manejar algunos

diagnósticos de parasitosis, pero estas reacciones no las podemos ubicar
como hipersensibilidad tipo IV, sino como del tipo III puesto que en ellas
participan complejos inmunes (Ag-Ab-C'), y su reactividad puede ser
observada en unos cuantos minutos, permaneciendo hasta 6 u 8 horas.
Un problema parasitario común en nuestra zona y diagnosticable por

este método es la fasciolasis; para ello necesitaremos un extracto proteico
de Fasciola hepática en una concentración final de 0.03%. Esta prueba se
considera muy útil cuando se trata de determinar el estado de salud de un
hato muy grande y que para el cual en el laboratorio de parasitología no
habría suficiente tiempo ni lugar; se pueden elaborar antígenos parasitarios
de Strongylus sp., Metastrongylus sp., Áscaris sp., Stephanurus sp.,
Cisticercus sp., Aunque en muchos de ellos existir el problema de
reacciones cruzadas, principalmente entre las familias afines.

3.1 Reactivos
Tuberculina PPD Aviar y 1 fco
mamífero
Solución Salina Fisiológica 5L
Método de Biuret o Kendall

1. Báscula
2. Centrífuga
3. Espectrofotómetro

20 Jeringas de tuberculina c/agujas cal. 25-27
5 Jeringas de 5 ml con aguja del 21
5 Vernier (pie de Rey, nonio, cutímetro)
6 Mortero estéril
6 Vasos de precipitado de 500 ml
6 Pistilo estéril
6 Cajas de petri
15 Gasas
6 Embudo de cristal
12 Tubos para centrífuga

1. Fasciolas vivas
2. Bovinos
4.1 ELABORACION DE ANTIGENO PARA DIAGNÓSTICO DE FASCIOLA
Para la elaboración de un antígeno para el diagnóstico de una

parasitosis, los parásitos frescos son lavados repetidas veces en SSF, hasta
que se liberen de toda la materia orgánica que les rodea, se secan y taran,

luego son macerados y se suspende la papilla al 10% son SSF, centrifugar y

titular la proteína del sobrenadante (SN) son un método apropiado ( Biuret
y/o Kjelldal), ajustar a 0.3 % de proteína. Para conservarlo se congela a -20°
C, liofiliza o refrigera a 4-6°C.
4.2 METODOLOGÍA DE LA PRUEBA DE INTRADERMOREACCION
Se realiza antisepsia en el pliegue caudal del bovino sospechoso

(base de la cola) y se aplica INTRADERMICAMENTE 0.1 ml de la
tuberculina (PPD). Ser positivo (reactor) cualquier manifestación
inflamatoria que se observe en las próximas 72 horas. Si un animal resulta
reactor se le deber realizar una prueba doble comparativa en la tabla del
cuello, en donde se le rasurará y medirá el grosor de la piel previo a la
aplicación y se le aplicarán sendas dosis de PPD aviar y mamífero, (siendo
el PPD aviar en la parte anterior del sitio afeitado), leyéndose a las 72
horas. Para realizar la interpretación final se deber restar la medida de los
pliegues cutáneos de las 72 horas a la medida inicial de ellos.
5.1 REGISTRO DE RESULTADOS
Prueba caudal
Bovino No. Sexo Edad Raza RESULTADO Observaciones
Prueba doble comparativa

Bovino No. Sexo Edad Raza Lectura RESULTADO
Inicial final
Mam Av Mam Av

Parasitosis
Bovino No. Sexo Edad Raza RESULTADO Observaciones
CONCLUSIONES

6. BIBLIOGRAFIA



México. 1990
MERCHAT, I. A. y PARCKER, R. A. Bacteriología y Virología Veterinaria. Ed.

Acribia. México.

DETERMINACION DE COPTOANTIGENOS
1. INTRODUCCION
El objetivo de la práctica es determinar mediante reacciones de

precipitación la identidad de productos cárnicos en los cuales se haya
podido sospechar algún fraude.
En el área de la chacinería es frecuente encontrar que los embutidos

no correspondan sus contenidos a lo especificado en la etiqueta, o que en la
carnicería nos entreguen una carne de una especie animal diferente a la
solicitada.
Los copto anticuerpos se emplean para la identificación de estos

productos, para ello se pueden preparar los antisueros como lo realizado en
la práctica 1, y obtener antisueros específicos y muy potentes que sean
capaces de dar resultados positivos aún en diluciones ó a 1: 10,000.
3.1 Reactivos
Solución salina fisiológica 5 L
Merthiolate 1:100 000 1 fco
Azida sódica 0.02 % 1 Fco
Melox 1 Fco
Cloroformo 1 fco
Ketamina 50% 1 fco
Xilacina 5% 1 fco

1. Báscula
2. Centrífuga


6 Morteros estériles
6 Pistilos estériles
6 Tijeras
25 Gasas estériles
12 Tubos para centrífuga
6 Pipetas pasteur de 1 ml
6 250 gr. carne de
20 Jeringas de 3ml
6 Jeringas de 5 ml
1. Muestras cárnicas:250 gr. carne de bovino

2. 250 gr. carne de pollo
3. 250 gr. carne de caballo
4. 250 gr. carne de cerdo
5. 250 gr. de Embutido (salchicha, jamón, etc)
6. 6 Conejos adultos
Se pesan unos cuantos gramos de la muestra cárnica y se maceran en el

mortero, luego se diluyen hasta quedar en una concentración del 20% con
SSF; enseguida se filtran por gasa y se centrifuga a 2000 rpm por diez
minutos.
Posteriormente el sobrenadante se debe enfrentar a los diferentes

antisueros para as¡ poder identificar al producto. Para hacerlo se colocar un
ml del antígeno en el fondo de un tubo de ensayo y el suero de conejo
diluido (10, 100, 1000, 10000, 100000 veces) se resbalar suavemente por la
pared del tubo con una pipeta, intentando formar dos fases y una interfase
(no deben mezclarse), en dicha interfase se deber formar un anillo de
precipitación en unos minutos a horas. También puede hacerse utilizando
gel.
ANTISUERO MUESTRA NÚMERO

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
EQUINO______________________________________________________

CERDO ______________________________________________________
PERRO ______________________________________________________
BOVINO______________________________________________________
______________________________________________________
MUESTRA
1. _________________ 2. _________________ 3._________________
4. _________________ 5. _________________ 6._________________
7. _________________ 8. _________________ 9._________________
10. ________________ 11. _________________ 12.________________
CONCLUSIONES

6. BIBLIOGRAFIA
CARPENTER, P.H. Inmunología y Serología. Prensa Médica. México
HERNANDEZ-BELTRAN, A. y LOPEZ-YÁNEZ, B. Reacciones

serológicas en la inspección de carnes y embutidos. 1977. Tesis
recepcional. FMVZ-UV.
NORMA OFICIAL MEXICANA. NOM-023-ZOO-1995 identificación de

especie animal en músculo de bovinos, ovinos, equinos, porcinos y aves,
por la prueba de inmuno difusión en gel. Diario Oficial de la Federación el
14 de septiembre de 1995. edición a cargo de la "Comisión Nacional de
Sanidad Agropecuaria". México, DF.

REACCIONES DE AGLUTINACIÓN PRUEBAS

SEROLOGICAS Y LACTEAS PARA LA
DETERMINACION DE BRUCELOSIS.
1. INTRODUCCION
Las pruebas de aglutinación son la base del conocimiento sero

epidemiológico de las campañas de control y erradicación de diversos
problemas sanitarios de los animales, como: brucelosis y salmonelosis
aviar.
Las reacciones de aglutinación, al igual que las de precipitación,

tienen como componentes: antígeno, anticuerpo y electrolitos; pero en la
aglutinación el antígeno es forme, esto quiere decir que son células o
partículas de éstas.
El fenómeno de aglutinación se lleva a cabo en dos etapas, siendo la

primera la formación de complejos inmunes, o sea la unión de antígenos y
anticuerpos, conformando lo que se conoce como complejos primarios, esta
parte es inmediata, específica e invisible; luego pasa a conformar los
denominados complejos secundarios, o sean las uniones de los complejos
primarios entre sí, esta fase es mediata, específica y visible.
La brucelosis es una zoonosis que incapacita al humano y causa

mermas económicas considerables en la ganadería nacional mediante
abortos, esterilidad, decomisos y muerte. Existe cierta dificultad para
diferenciarla clínicamente de otras afecciones del aparato reproductor de los
bovinos como son: vibriosis (campylobacteriosis), tricomoniasis,
desnutrición, disfunciones hormonales, etc. Esto ha originado la creación de
diversos métodos de laboratorio para diagnosticarla en los animales
sospechosos. Estos métodos utilizan suero sanguíneo, leche, líquido
seminal, desde el punto de vista sero epidemiológico, además de que
dichas pruebas difieren en sensibilidad y especificidad. Desde el punto de
vista bacteriológico se intentará el aislamiento a partir del moco vaginal,
cotiledones, contenido gástrico del producto abortado, etc.

Las pruebas sero epidemiológicas son:

Especie
1.- Huddleson (placa) Bovino, cerdo y hombre
2.- Lenta en tubo (SAT) Bovino
3.- Tarjeta (Ag tamponado y con rosa de bengala)Bovino y hombre
4.- Anillo en leche (Bang). Bovino
5.- Fijación del complemento. Bovino
6.- 2-∝-Mercapto-etanol * Bovino
7.- Rivanol * Bovino
8.- Inactivación por calor (56 °C por 30 minutos) Bovino, cerdo
9.- Coombs. Bovino, cerdo
* Estas dos pruebas son capaces de detectar anticuerpos no vacunales

(IgG), destruyendo o precipitando a los anticuerpos de origen vacunal (IgM).
Para funciones de campaña para el control y erradición de la brucelosis se
están empleando las pruebas de tarjeta, rivanol y fijación del complemento,
como rutina y para el control permanente de los hatos lecheros libres de la
enfermedad se está empleando la prueba de anillo en leche (Bang); así
como el aislamiento bacteriológico para la confirmación de los casos.
3.1 Reactivos
Antígeno Brucella abortus pH 3.65 1 fco
aba-test-tarjeta coloreado
con rosa de bengala
Antígeno Brucella abortus 1% 1 fco
aba-test-rivanol
Antígeno Brucella abortus 1 fco
aba-test-leche
1. Caja de iluminación o Negatoscopio
3.3 Materiales de Laboratorio

15 Agujas para punción calibre 18 o 20
15 Tubos vacutainers
1 Marcador

5 Placas de vidrio con cuadrícula 2.5 x 2.5 cm

5 Gradilla
1 caja Palillos de dientes
5 Pipetas de Bang .02 ml
5 Pipetas serológicas de 0.2 mL
5 Pipetas automáticas graduables
1 Caja aislante con refrigerantes
5 frascos de vidrio con tapa
1 Lámpara de alcohol

1. Bovinos hembras sin vacunaciones contra Brucella
2. Leche de vaca de reciente ordeño
Para la obtención de la sangre se deberá hacer una punción en la

vena caudal colectándose esta en el tubo al vacío (vacutainer), rotularlo
(identificación definitiva del animal) y dejarlo en posición HORIZONTAL
hasta que alcance la perfecta coagulación, posteriormente colocarlo en
forma vertical en la gradilla, así cuando el coágulo se retraiga soltará mayor
cantidad de suero. es importante que la colección de las muestras se hagan
con DIFERENTE aguja (siempre estéril).
La muestra de leche puede ser individual o colectiva, esta se utilizará

para la prueba de Bang, aunque es preferible como muestra de hato pues es
capaz de detectar a una vaca reactor entre la leche de 60 animales.
4.1 PRUEBA DEL ANTIGENO TAMPONADO (tarjeta).- (Pietz 1968). La

prueba es cualitativa, se utilizan 30 µL (microlitros, 0.03 ml) de suero
sanguíneo y la misma cantidad del Abatest-tarjeta, coloreado con rosa de
bengala y un pH de 3.65. Se colocan los reactivos sobre una placa de vidrio
, de plástico o cartón satinado y mezclar con palillos de dientes, rotar la
mezcla y esperar hasta 4 cuatro minutos a la aparición de la reacción.
Debido al pH bajo, las IgM muchas veces no establecen perfectamente la
aglutinación, mientras que en presencia de IgG, esta sí se realiza mejor.
4.2 PRUEBA DE ANILLO EN LECHE (prueba de Bang).- (Fleishaver 1937).

Esta prueba detecta aglutininas en la leche, se utiliza para inspeccionar
hatos que han sido declarados libres de la infección. Se debe homogeneizar

la leche (perol, tanque de enfriamiento, bote, etc.), se toman unos mililitros y

se lleva al laboratorio en donde se deberá refrigerar de 12-72 horas. Luego
calentar al ambiente por 30-60 minutos los reactivos (antígeno y muestras),
colocar en tubos de ensaye un ml de la muestra y agregarle 30 µL de
antígeno, mezclarlo e incubar en estufa de laboratorio a 37 °C durante 30-60
minutos, la lectura se hará según el cuadro anexo en resultados:
4.3 RIVANOL.- (Anderson, 1964). El rivanol (lactato 2-etoxi-6,9 diamino-

acridina) es un colorante derivado de la acridina y tiene la particularidad de
precipitar a proteínas del suero de los bovinos. Mediante el uso de
cantidades iguales de suero y una solución de rivanol al 1%, queda un
precipitado y un sobrenadante después de 30 minutos de incubación y
centrifugación a 2000 rpm por 10 minutos en este sobrenadante se detectan
exclusivamente las IgG. Además debe emplearse un antígeno
especialmente elaborado para esta prueba con un pH de 5.8-6.2, pues debe
compensarse el efecto de la dilución de los anticuerpos.
Se requiere una placa de vidrio cuadriculada, pipetas de Bang o de
0.02 ml, en donde se colocarán formando una columna, diversas cantidades
de la muestra (0.08, 0.04, 0.02, 0.01 y 0.005 ml que significarán títulos de
1.25, 1:50, 1:100, 1.200 y 1.400 respectivamente), luego se les añadirán 30
µL de antígeno a cada cuadro y se agitarán con un palillo de dientes, desde
la mayor hasta la menor dilución del suero sanguíneo, aglutinación igual o
mayor que el título de 1:50 se considera positivo.
Para la elaboración de cada uno de los reactivos se utiliza la misma

semilla de B. abortus cepa 1119-3 que Cepanzoo proporciona al laboratorio
productor. estas bacterias se cultivan en cubas de fermentación en PBS,
peptona y dextrosa, adicionado un perfecto aireado para obtener un
adecuado incremento celular; manteniendo el control de calidad en cuanto
se refiere a la:
 Disociación: mantenimiento de la cepa en su fase lisa
 Pureza: contener solamente B. abortus
 Esterilidad: que no haya contaminación con hongos, virus y otras
bacterias.
Las diferencias entre los reactivos además de la coloración, estriba en

la concentración celular bacteriana:
Placa 10-12%
Tubo 4.5%
Leche 4.0%
Tarjeta 8.0%

Rivanol 4.0%
RELACIONES ANTIGENICAS ENTRE BRUCELAS

BACTERIA SUERO MONOESPECIFICO AGLUTINACION
Br. abortus anti-abortus si
Br. abortus anti-melitensis no
Br. melitensis anti-melitensis si
Br. melitensis anti- abortus no
Br. suis anti-abortus si
Br. suis anti.suis si
Br. suis anti-melitensis no
También se detectado reactividad cruzada entre bacterias del género

Brucella y Pasteurella, Campylobacter y Yersinia.
CONCLUSIONES

6. BIBLIOGRAFIA
AGUIRRE, M. R. A. Brucelosis bovina, diagnóstico comparativo por medio

de las pruebas serológicas de fijación de superficie, aglutinación en placa y
en tubo. Tesis recepcional. FMVZ-UV. 1969.
GONZALEZ, P.V. Porciente de reactores serológicos positivos a brucelosis.

Tesis recepcional. FMVZ-UV. 1971.
LOPEZ, A. C. Investigación serológica de brucelosis canina por los métodos

de Huddleson y Brewer diagnostic kits (card test) en la ciudad de Veracruz.
Tesis recepcional. FMVZ-UV. 1971.
MORILLA, G.A. y cols. Manual de inmunología. Ed. Diana-técnico. 1986.

1a. Ed. México.
TIZARD. Inmunología Veterinaria. 1998

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE
LABORATORIO CLINICO VETERINARIO
Elaborado por:
MVZ Elsa Ariadna Villanueva Jiménez

Manual de Procedimientos de Laboratorio Clinico Veterinario 2

Enviado por

Dados do documento

Direitos autorais

Formatos disponíveis

Compartilhar este documento

Compartilhar ou incorporar documento

Opções de compartilhamento

Você considera este documento útil?

Este conteúdo é inapropriado?

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

Manual de Procedimientos de Laboratorio Clinico Veterinario 2

Enviado por

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

Facultad de Bioanálisis, Veracruz Manual de Procedimientos de Laboratorio

II. Métodos de sujeción y obtención de muestras para diagnostico de

III. El método de flotación para la identificación de huevecillos de

IV. El método de sedimentación para la identificación de huevecillos

V. El método de Harada Mori para cultivo larvario de Ancylostoma y

VI. Identificación de larvas de nematodos pulmonares por el método

VII. Técnicas Hematológicas en medicina veterinaria.

VIII. Diagnóstico de Mastitis mediante las pruebas de Hotis y del Azul

IX. Elaboración de autovacuna en la terapéutica de la Papilomatosis

X. Tinción de esporos de Bacillus anthracis

XI. Prueba de intradermo-reacción para detección de Fasciola y

XII. Determinación de copto antígenos

XIII. Reacciones de aglutinación pruebas serológicas y lácteas para la

Laboratorio Clínico Veterinario www.quimicaclinicauv.blogspot.com

METODOS DE SUJECION Y OBTENCION DE

 La muestra seleccionada deberá ser representativa del padecimiento.

En esta práctica se llevarán a cabo las técnicas de Punción venosa en

2. PRINCIPIO Y METODOLOGIA DE LA DETERMINACIÓN

En la práctica veterinaria los exámenes hematológicos se realizan

Laboratorio Clínico Veterinario

3.2 Equipos de Laboratorio

3.3 Materiales de laboratorio

Laboratorio Clínico Veterinario

4.1 TECNICAS DE SANGRADO EN ANIMALES DE LABORATORIO.

 PUNCIÓN INTRACARDIACA. Se coloca al individuo en posición dorsal,

4.2 TECNICAS DE SANGRADO EN PERRO Y GATO.

El sangrado en perro y gato se lleva a cabo principalmente en las

4.3 TOMA DE MUESTRA DE ORINA.

El análisis de orina es uno de los procedimientos de laboratorio más

Laboratorio Clínico Veterinario

Para su recolección es necesario emplear recipientes limpios,

4.4 RECOLECCION DE MUESTRA DE HECES.

Es indispensable la aplicación de medidas higiénicas estrictas como

En las especies de talla grande es más práctico e higiénico obtener

En caso de no ser posible la recolección directa se procederá a tomar

Laboratorio Clínico Veterinario

De la Puente G. José. Manual de Exterior y manejo y Técnicas de sujeción

Oteiza Fernández, José. Manejo de Animales. Editorial Textos Universitarios.

El Manual Merck de Veterinaria. Merck & CO. INC. USA.

Laboratorio Clínico Veterinario

EL METODO DE FLOTACION PARA LA

La parasitología estudia los seres que viven momentánea y/o

Existen algunos parámetros que nos sirven para destacar la

Todo ello nos lleva a considerar la importancia de conocer no solo a

2. PRINCIPIO Y METODOLOGIA DE LA DETERMINACIÓN

La presente práctica consiste en la determinación de parásitos

Esta técnica es recomendada para la identificación de quistes de

Laboratorio Clínico Veterinario

3.1 Reactivos (soluciones de enriquecimiento)

3.2 Equipo de Laboratorio

3.3 Materiales de laboratorio

3.4 Material Biológico

4.1 FROTIS DIRECTO

Laboratorio Clínico Veterinario

Se emulsifica una pequeña cantidad de heces en agua y se aplica una

4.2 MÉTODO DE FLOTACION

En un vaso de precipitado de 100 ml se mezclan 2 g de heces con

La flotación de los huevos en la solución de enriquecimiento se puede

Laboratorio Clínico Veterinario

THIENPONT, D; ROCHETTE, F; VANPARIJS, O.F.J. Diagnóstico de las

QUIROZ, R. H. Parasitología y Enfermedades parasitarias de los animales

LAPAGE, G. Parasitología Animal. Logia. Ed. Continental. México.

Laboratorio Clínico Veterinario

EL METODO DE SEDIMENTACION PARA LA