Você está na página 1de 73

Qumica Biolgica Espetacular

Vero em Projeto
Prof. Dr. Joaquim C. G. Esteves da Silva Dr. Snia de Jesus Rocha Faculdade de Cincias Universidade do Porto | Junho 2012

Qumica Biolgica Espetacular 2012

ndice
Introduo -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------Parte I MICROSCPIO PTICO -------------------------------------------------------------------------------Parte II ATIVIDADES EXPERIMENTAIS --------------------------------------------------------------------1 Clulas da epiderme do bolbo da cebola -----------------------------------------------------------------------2 Observao de bactrias de iogurte -----------------------------------------------------------------------------3 Osmose ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------4 Simulao da desinfeo da gua -------------------------------------------------------------------------------5 Observao lupa de Daphnia magna Straus. ---------------------------------------------------------------6 Catlise enzimtica ---------------------------------------------------------------------------------------------------7 Fatores que influenciam a atividade enzimtica --------------------------------------------------------------8 Propriedades das enzimas -----------------------------------------------------------------------------------------9 Extrao de protenas -----------------------------------------------------------------------------------------------10 Identificao de aminocidos ------------------------------------------------------------------------------------11 Composio qumica dos alimentos ----------------------------------------------------------------------------12 Passagem de substncias atravs de uma membrana biolgica ---------------------------------------13 Nutrio e transporte de vertebrados --------------------------------------------------------------------------14 Extrao de ADN ----------------------------------------------------------------------------------------------------15 Sntese do cido acetilsaliclico (aspirina) --------------------------------------------------------------------16 Extrao da cafena ------------------------------------------------------------------------------------------------17 Isolamento do licopeno --------------------------------------------------------------------------------------------18 Extrao de lpidos e identificao do colesterol ------------------------------------------------------------19 Extrao de pigmentos fotossintticos ------------------------------------------------------------------------2 3 6 7 9 11 13 16 20 25 29 31 34 37 41 42 47 50 53 57 60 66 68 70 71 72

Bibliografia ----------------------------------------------------------------------------------------------------------------Anexos ----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Anexo A Blogue ------------------------------------------------------------------------------------------------Anexo B Pictogramas de perigo ----------------------------------------------------------------------------

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

Qumica Biolgica Espetacular 2012

Introduo
As reaes qumicas esto na base do funcionamento dos sistemas biolgicos (reaes bioqumicas) e o seu conhecimento, bem como do efeito que as substncias qumicas tm neles, permite uma melhor compreenso do seu bom ou mau funcionamento e, portanto, da origem das doenas. Este um dos objetivos de uma nova rea de investigao, a Qumica Biolgica, que est na base do desenvolvimento de meios de diagnstico mdico, vacinas e terapias inovadoras. Assim, este projeto uma oportunidade para compreender a interdisciplinaridade entre a qumica e a biologia. Sero realizadas experincias espetaculares de observao e manipulao do funcionamento biolgico das Daphnias, microrganismos e plantas e, do efeito que certas substncias tm no seu funcionamento. Ser tambm efetuada a extrao e sntese de biomolculas como o ADN, protenas, colesterol, entre outras, que permitir aprofundar o conhecimento dos mecanismos biolgicos. Ao longo do projeto ser construdo um blogue (http://quimicabiologicaespetacular.blogspot.com/) que permitir a divulgao dos resultados obtidos pelos participantes neste projeto (os seus comentrios, fotografias, vdeos, desenhos, etc.).

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

Qumica Biolgica Espetacular 2012

Parte I
Legendar as figuras relativas ao microscpio ptico.

Figura 1

1 2 3 4 5 6

7 8 9 10 11

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

Qumica Biolgica Espetacular 2012

Figura 2

1 2 3 4 5

6 7 8 9 10

Figura 3

1 2

3 4

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

Qumica Biolgica Espetacular 2012


1

2 3
Figura 4

1 2

Figura 5

1 2 3

4 5 6

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

Qumica Biolgica Espetacular 2012

Parte II
Atividades experimentais

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

Qumica Biolgica Espetacular 2012 1 Clulas da epiderme do bolbo da cebola


Notas introdutrias
Uma das tcnicas citolgicas usadas na obteno de preparaes a tcnica de colorao. A tcnica de colorao permite uma maior diferenciao dos constituintes celulares. Podem ser usados os seguintes corantes: soluo de Ringer, soluo de vermelho neutro, gua iodada, soluo de azul-demetileno. Corantes distintos coram estruturas diferentes.

Material
Microscpio ptico Pina Vidro de relgio Pipeta conta-gotas Tesoura Garrafa de esguicho Lmina Lamela

Reagentes
Bolbo de cebola gua desionizada () gua iodada ou soluo de Lugol Soluo aquosa de azul-de-metileno a 1% (m/V) Soluo de Ringer Soluo de vermelho neutro

Tabela 1.1 Informaes sobre azul-de-metileno.

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo

Azul-de-metileno C16H18CN3S 3H2O 373,90 g/mol GHS07 Ateno H302 Nocivo por ingesto H315 Provoca irritao cutnea. H319 Provoca irritao ocular grave H335 Pode provocar irritao das vias respiratrias. P261 Evitar respirar as poeiras/ fumos/ gases/ nvoas/ vapores/ aerossis. P305 + P351 + P338 SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente com gua durante vrios minutos. Se usar lentes de contacto, retire-as, se tal lhe for possvel. Continuar a enxaguar.

Recomendaes de prudncia

Tabela 1.2 Informaes sobre vermelho neutro.

Nome Frmula qumica Massa molar

Vermelho neutro C15H17CN4 288,78 g/mol Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

Qumica Biolgica Espetacular 2012


Procedimento experimental
A Preparao da soluo aquosa de azul-de-metileno Usar como solvente gua desionizada.

B Preparao da soluo de Ringer Dissolver cloreto de clcio no estado slido, cloreto de potssio no estado slido, hidrogenocarbonato de sdio no estado slido e cloreto de sdio no estado slido em gua desionizada. C Preparao de soluo de vermelho neutro Soluo de vermelho neutro 1,0 g/L Usar como solvente soluo aquosa de cido actico 2 mL/L

D Preparao de gua iodada ou soluo de Lugol Dissolver iodeto de potssio (s) e iodo (s) em gua desionizada.

E Observao das clulas da epiderme do bolbo da cebola 1. Colocar gua desionizada no interior de um vidro de relgio. 2. Destacar um fragmento da epiderme da face cncava de uma tnica do bolbo da cebola, usando uma pina. 3. Mergulhar, o mais rapidamente possvel, o fragmento da epiderme do bolbo da cebola no vidro de relgio contendo gua desionizada. Ter o cuidado de colocar a face externa do fragmento da epiderme do bolbo de cebola virada para cima. 4. Com o auxlio de uma tesoura e mantendo o fragmento da epiderme do bolbo de cebola mergulhado em gua desionizada, dividir o fragmento em quatro partes. 5. Colocar sobre uma lmina uma gota da soluo de Ringer. 6. Com o auxlio de uma pina, transferir uma das pores do fragmento da epiderme inicial do bolbo da cebola, para a lmina contendo a soluo de Ringer. Ter o cuidado de manter a face externa voltada para cima. Colocar a poro distentida sobre o corante que se encontra na lmina. 7. Cobrir a preparao com uma lamela. 8. Observar a preparao ao microscpio, inicialmente com uma pequena ampliao. 9. Esquematizar uma pequena rea e legendar. 10. Aumentar, sucessivamente, o valor da ampliao e observar. 11. Observar uma s clula e identificar as estruturas observadas. 12. Repetir os procedimentos anteriores, mas usando os corantes: gua iodada, soluo de vermelho neutro e soluo de azul-de-metileno.

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

Qumica Biolgica Espetacular 2012 2 Observao de bactrias de iogurte


Material
Microscpio ptico Agulha de disseco Garrafa de esguicho Pipeta conta-gotas Mola de madeira Lamparina de lcool Gobel Lminas de vidro Vareta de vidro

Reagentes
lcool etlico ou etanol () gua desionizada () Soluo de azul-de-metileno a 1% (m/V) Iogurte

Tabela 2.1 Informaes sobre azul-de-metileno.

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo

Azul-de-metileno C16H18CN3S 3H2O 373,90 g/mol GHS07 Ateno H302 Nocivo por ingesto H315 Provoca irritao cutnea. H319 Provoca irritao ocular grave H335 Pode provocar irritao das vias respiratrias. P261 Evitar respirar as poeiras/ fumos/ gases/ nvoas/ vapores/ aerossis. P305 + P351 + P338 SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente com gua durante vrios minutos. Se usar lentes de contacto, retire-as, se tal lhe for possvel. Continuar a enxaguar.

Recomendaes de prudncia

Tabela 2.2 Informaes sobre etanol.

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo Recomendaes de prudncia

Etanol CH3CH2OH 46,07 g/mol GHS02 Perigo H225 Lquido e vapor facilmente inflamveis. P210 Manter afastado do calor/fasca/chama aberta/superfcies quentes. - No fumar. Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

Qumica Biolgica Espetacular 2012


Procedimento experimental
1. Colocar uma gota de gua na extremidade de uma lmina de vidro. 2. Com o auxlio de uma agulha de disseco, juntar uma pequena poro de iogurte e mistur-lo com a gua. 3. Fazer um esfregao. [Explicao da tcnica de esfregao: Colocar na extremidade de uma lmina uma gota do material a observar. Seguidamente, deslocar outra lmina sobre a anterior, de forma a espalhar bem o material. Depois de seco, o material pode ento ser fixado e corado.] 4. Secar levemente chama da lamparina, para fixar. 5. Deitar umas gotas de lcool etlico para retirar o excesso de gordura, deixando secar ao ar. 6. Corar com a soluo de azul-de-metileno durante 3 a 5 minutos. 7. Lavar com gua desionizada e deixar secar ao ar. 8. Observar ao microscpio.

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

10

Qumica Biolgica Espetacular 2012 3 Osmose


Notas introdutrias
Esta atividade experimental pretende explorar o sentido em que ocorre o fluxo de gua na membrana celular. Todas as clulas encontram-se envolvidas por uma estrutura membranar, designada por membrana plasmtica ou membrana celular. A membrana celular delimita a fronteira entre o meio intracelular e o meio extracelular e funciona como barreira seletiva, permitindo trocas, nos dois sentidos, de substncias e de energia entre a clula e o meio exterior. Assim, uma das propriedades da membrana plasmtica a permeabilidade seletiva, dado que permite a passagem de certas substncia e dificulta e/ou impede a passagem de outras substncias. A passagem de substncias atravs da membrana celular pode ocorrer atravs de vrios mecanismos. Um dos mecanismos a osmose.

Material
Microscpio ptico Lminas Lamelas Papel de filtro ou papel absorvente Pina Agulha de disseco Pipeta conta-gotas Marcador

Reagentes
gua desionizada () Soluo aquosa de cloreto de sdio 12% (m/V) Ptalas vermelhas de sardinheira, tulipa, violetaafricana, folha de couve-vermelha, rosas,

Tabela 3.1 Informaes sobre cloreto de sdio.

Nome Frmula qumica Massa molar

Cloreto de sdio NaC 58,44 g/mol

Procedimento experimental
1. Com o auxlio de uma pina, destacar dois fragmentos da epiderme superficial das ptalas. 2. Identificar duas lminas com as letras A e B, com um marcador. 3. Colocar uma gota de gua desionizada sobre a lmina A. 4. Colocar sobre a gota de gua, um dos fragmentos da epiderme de ptala. 5. Cobrir com uma lamela. 6. Colocar uma gota de soluo aquosa de cloreto de sdio a 12% na lmina B.
Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

11

Qumica Biolgica Espetacular 2012


7. Colocar sobre a gota de soluo aquosa de cloreto de sdio a 12% o outro fragmento de epiderme da ptala. 8. Cobrir com uma lamela. 9. Observar ao microscpio. 10. Esquematizar as observaes. 11. Com uma pipeta conta-gotas, colocar uma gota de gua desionizada num dos bordos da lamela da lmina B. 12. Colocar um pedao de um papel absorvente na extremidade oposta da lamela, de modo a absorver o meio de montagem. Deste modo, pretende-se substituir a soluo de cloreto de sdio pela gua desionizada. 13. Observar novamente a lmina B ao microscpio. 14. Registar as alteraes que forem observadas ao longo do tempo.

Tpicos de reflexo
As clulas da epiderme das ptalas possuem um ncleo, citoplasma, parede celular e um vacolo. O vacolo contm pigmentos dissolvidos em gua, que conferem a cor caraterstica das ptalas. O que acontece clula quando colocada num meio contendo gua? Qual a substncia que vai entrar ou sair do vacolo? O que acontece concentrao dos pigmentos quando a clula colocada num meio contendo gua? Relaciona a colorao da clula com a concentrao dos pigmentos. Compara o volume da clula antes e aps de esta estar num meio contendo gua. Compara o volume do vacolo antes e aps de esta estar num meio contendo gua. O que acontece clula quando colocada num meio contendo uma soluo concentrada de cloreto de sdio? Qual a substncia que vai entrar ou sair do vacolo? O que acontece concentrao dos pigmentos quando a clula colocada num meio contendo uma soluo concentrada de cloreto de sdio? Relaciona a colorao da clula com a concentrao dos pigmentos. Compara o volume da clula antes e aps de esta estar num meio contendo soluo concentrada de cloreto de sdio. Compara o volume do vacolo antes e aps de esta estar num meio contendo soluo concentrada de cloreto de sdio. Nesta experincia, a membrana celular foi permevel a que substncia? E foi pouco permevel ou impermevel a que substncia? Explica como se faz o fluxo de gua, considerando a situao em que h meios com diferentes valores de concentrao. O que acontece quando os valores de concentrao em ambos os meios so iguais?

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

12

Qumica Biolgica Espetacular 2012 4 Simulao da desinfeo da gua


Preparao de infuses para observao ao microscpio e desinfeo
Material
Gobel Pipeta conta-gotas Proveta de 100 mL Proveta de 10 mL Microscpio Lminas Lamelas Placa de aquecimento com agitao magntica Barra magntica Matrz Papel de filtro Funil Suporte universal Anel adaptado a um funil

Reagentes
Amostra: gua da torneira Amostra: gua de rio ou de poo Amostra: gua desionizada Amostra: gua do lago Soluo aquosa de lixvia comercial (20 g/L ou 5%) Palha ou erva Gros de arroz Gros de cereais

Procedimento experimental A Preparao de infuses para observao ao microscpio


Amostra 1 1. Colocar um pouco de palha ou erva em gua no desinfectada (no usar gua da torneira). 2. Observar ao microscpio ptico um pouco da amostra de gua e verificar a presena de microorganismos. Amostra 2 1. Num gobel, colocar alguns gros de cereais e caules herbceos e gua no desinfectada (no usar gua da torneira). 2. Filtrar, por gravidade, aps dois dias. 3. Recolher o filtrado. 4. Observar ao microscpio uma gota do filtrado. A observao da gota ao microscpio pode ser repetida ao longo da semana.
Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

13

Qumica Biolgica Espetacular 2012


Amostra 3 1. Recolher gua de um lago. Amostra 4 1. Colocar num gobel, durante alguns dias, folhas de plantas em gua no desinfectada (no usar gua da torneira). 2. Observar ao microscpio um pouco da amostra de gua e verificar a presena de microorganismos. Amostra 5 1. Colocar alguns gros de arroz num gobel com gua no desinfectada (no usar gua da torneira). 2. Aquecer a mistura e deixar ferver durante alguns minutos. 3. Guardar a mistura temperatura ambiente. 4. Retirar uma poro da mistura anterior e adicionar gua do mar. 5. Observar ao microscpio as duas misturas.

Usar as amostras de gua nas experincias de desinfeco que se seguem e observar o efeito dos agentes desinfetantes nos microorganismos.

B Desinfeco da gua com lixvia.


A lixvia comercial uma soluo aquosa de hipoclorito de sdio e hidrxido de sdio pelo que o seu valor de pH maior do que 10. Como se pode observar no seguinte diagrama de equilbrio cido-base do sistema cido hipocloroso/hipoclorito a espcie desinfectante o anio hipoclorito.

Figura 4.1 Diagrama de equilbrio cido-base do sistema cido hipocloroso/hipoclorito.

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

14

Qumica Biolgica Espetacular 2012


B.1 Preparao da soluo desinfectante:
Colocar num gobel cerca de 100 mL de gua desionizada. Adicionar cerca de 1 mL da soluo aquosa de lixvia comercial (20 g/L ou 5%).

B.2 Desinfeco das amostras de gua


Em 10 mL das amostras de gua onde foram detectados microorganismos por observao ao microscpio adicionar 1 gota da soluo desinfectante. Comparar as observaes ao microscpico da populao microbiana antes e aps a desinfeco.

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

15

Qumica Biolgica Espetacular 2012 5 Observao lupa de Daphnia magna Straus.


Estudo do efeito de certas substncias no seu batimento cardaco.

Material
Lupa ou microscpio Caixas de Petri Pipeta conta-gotas Papel de filtro Gobel Papel absorvente Suporte universal Anel adaptado a um funil Funil Matrz

Reagentes
Frasco contendo Dfnias e gua Amostras de gua para consumo humano Cigarro Caf com cafena Caf sem cafena Saquetas de ch preto lcool etlico 96% gua da torneira gua desionizada () Coca-cola com cafena Coca-cola sem cafena Bebida energtica

Tabela 5.1 Informaes sobre etanol.

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo Recomendaes de prudncia

Etanol CH3CH2OH 46,07 g/mol GHS02 Perigo H225 Lquido e vapor facilmente inflamveis. P210 Manter afastado do calor/fasca/chama aberta/superfcies quentes. - No fumar.

Procedimento experimental A Ensaio de controlo


1. Colocar numa caixa de Petri, uma a duas gotas de gua do recipiente que contm as Dfnias. 2. Transferir, cuidadosamente, com a mesma pipeta conta-gotas uma dfnia para a zona da caixa de Petri onde foram colocadas as gotas de gua. (Nota: No exceder as duas gotas de gua.)

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

16

Qumica Biolgica Espetacular 2012


3. Observar lupa ou ao microscpio o batimento cardaco da Daphnia magna Straus. (Nota: Se a Dfnia se deslocar do campo de viso, repetir a preparao colocando alguns fios de algodo no incio da preparao para a aprisionar.) a. Colocar a preparao na platina e acender a luz (menor intensidade possvel). b. Mover o parafuso macromtrico e, observando atravs da(s) ocular(es), focar a preparao. c. Utilizando apenas o parafuso micromtrico, corrigir a focagem at obter uma imagem ntida. d. Observar a Dfnia, prestando particular ateno localizao do corao. 4. Fazer a contagem dos batimentos cardacos, durante 10 segundos. (Nota: Para contar o batimento cardaco, pode-se usar um lpis, uma folha de papel e um cronmetro. Um aluno faz um ponto com o bico de um lpis numa folha de papel por cada batimento cardaco que observar, enquanto outro aluno controla o tempo. Se repetir a contagem, ou demorar mais tempo, adicionar mais uma ou duas gotas de gua preparao.) 5. Calcular o ritmo cardaco por minuto (BPM) multiplicando o valor obtido por 6. (Nota: O valor do ritmo cardaco das Dfnias deve estar compreendido entre 200 e 300 batimentos cardacos por minuto. Caso o valor obtido esteja fora deste intervalo repetir a contagem dos batimentos cardacos.) 6. Se optar por realizar trs ensaios, preencher a tabela 5.2. (Nota: As contagens devem ser sempre realizadas pela mesma pessoa.) 7. Determinar o valor mdio do ritmo cardaco por minuto (BPM). (tabela 5.3) 8. Desenhar e legendar a Daphnia magna Straus. 9. Desligar a luz do microscpio, caso no esteja a observar a Dfnia ou a efectuar contagens. 10. Selecionar dfnias com tamanho e idade diferente e comparar o batimento cardaco.
Tabela 5.2 Ritmo cardaco por minuto nos ensaios.

Ensaio 1 2 3

Ritmo cardaco por 10 segundos

Ritmo cardaco por minuto (BPM)

Tabela 5.3 Ritmo cardaco por minuto.

Mdia do ritmo cardaco por minuto (BPM)

B Alteraes no batimento cardaco na presena de amostras de gua


1. Observar, lupa ou ao microscpio, o que acontece quando a Daphnia est na presena de amostras de gua usada para consumo humano. 2. Determinar o ritmo cardaco por minuto (BPM). 3. Observar, lupa ou ao microscpio, o que acontece quando a Daphnia est na presena de amostras de gua da torneira. 4. Determinar o ritmo cardaco por minuto (BPM).
Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

17

Qumica Biolgica Espetacular 2012


Nota: Para substituir a gua da preparao, pode-se colocar no lado direito da dfnia uma a duas gotas da amostra de gua e colocar posteriormente papel absorvente ou apel de filtro do lado esquerdo para absorver a gua que estava inicialmente na preparao. Difundir a amostra de gua, para que a dfnia entre em contacto com ela. Voltar a colocar a preparao no microscpio e observar a Dfnia com baixa intensidade luminosa.

C Alteraes no batimento cardaco na presena de determinadas drogas


Verificar as alteraes no batimento cardaco na presena de determinadas substncias como: nicotina, cafena, lcool. 1. Preparar as solues de cafena a 10%, 20% e 30% a partir de uma soluo preparada com um caf (caf expresso, caf solvel com cafena, caf solvel descafeinado). 2. Preparar as solues de cafena a 10%, 20% e 30% a partir de ch preto. 3. Preparar as solues de cafena a 10%, 20% e 30% a partir de refrigerantes (coca-cola com cafena e coca-cola sem cafena). (Nota: deixar o recipiente aberto durante a noite para que o gs se liberte.) Nota: As solues de cafena apenas tm a durao de 2 a 3 dias. 4. Preparar solues de nicotina. 4.1 Macerar o contedo de um cigarro em 100 ml de gua destilada durante 12h, agitando algumas vezes. 4.2 Filtrar por gravidade. 4.3 Diluir o filtrado, conforme a concentrao de nicotina no cigarro. (Nota: A concentrao de nicotina nos cigarros depende da marca e do tipo.)

Nota: As solues de nicotina apenas tm a durao de 2 a 3 dias.

5. Preparar solues aquosas de lcool etlico, para simular bebidas alcolicas, de acordo com a tabela 5.4.
Tabela 5.4 Preparao de solues aquosas de lcool etlico.

Bebida Cerveja sem lcool Cerveja Vinho Vodka

% lcool 0,5% 5,6 % 12 % 40 %

V (lcool etlico 96%) (mL) 0,52 5,83 12,50 41,6

V (gua destilada) (mL) 99,48 94,17 87,50 58,33

6. Observar, lupa ou ao microscpio, o que acontece quando a Daphnia est na presena de determinadas substncias como: nicotina, cafena, lcool. 7. Determinar o ritmo cardaco por minuto (BPM).
Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

18

Qumica Biolgica Espetacular 2012


Tpicos de reflexo
Pesquisar na internet a utilizao de Daphnia magna Straus em ensaios toxicolgicos. Importncia da utilizao do controlo. Explicar a vantagem em utilizar trs ensaios para a determinao do BPM. Prever, testar e analisar a influncia de algumas drogas, como por exemplo: cafena, nicotina e lcool no ritmo cardaco da Dfnia. As previses e as observaes devem conter um dos seguintes registos: (a) grande aumento do ritmo cardaco, (b) aumento do ritmo cardaco, (c) pequeno aumento do ritmo cardaco, (d) ritmo cardaco sem alterao, (e) pequena diminuio do ritmo cardaco, (f) diminuio do ritmo cardaco, (g) grande diminuio do ritmo cardaco, (h) paragem do corao. Testar uma das drogas, fazendo variar o tempo de exposio s mesmas, por exemplo 1 e 5 minutos. Classificar as drogas em estimulantes ou depressoras, comparando os resultados obtidos do BPM na presena e na ausncia de drogas (Nota: Comparar o BPM na presena de drogas com o ensaio de controlo.) Pode-se usar a seguinte expresso matemtica para classificar as drogas: Variao BPM = mdia BPM (soluo experimental) mdia BPM (controlo) Valor negativo, significa que ocorreu uma diminuio do ritmo cardaco droga depressora Valor positivo, significa que ocorreu um aumento do ritmo cardaco droga estimulante Explicar a necessidade de utilizar solues diludas das solues experimentais testadas (drogas). Refletir sobre o modo como as drogas afetam um organismo vivo e inclusive o ser humano. Pesquisar sobre os possveis efeitos destas drogas no ser humano. Planear uma experincia que permita avaliar a influncia de diferentes concentraes de detergentes domsticos na sobrevivncia da dfnia, usando uma soluo de hipoclorito de sdio 0,16%; uma soluo de amonaco a 1% e tripolifosfato de sdio no estado slido. Explicar a seleo dos reagentes: soluo de hipoclorito de sdio 0,16%; soluo de amonaco a 1% e tripolifosfato de sdio no estado slido. Realizar a atividade experimental planeada. Vantagens em utilizar as dfnias no estudo.

Cada grupo de trabalho faz o ensaio de controlo e estuda o efeito de uma das substncias no batimento cardaco nas dfnias.

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

19

Qumica Biolgica Espetacular 2012 6 Catlise enzimtica


Efeito da temperatura e de um inibidor sobre a reaco bioqumica
Notas introdutrias Questo:
A velocidade de uma reaco qumica catalisada por uma enzima pode ser alterada por aco da temperatura ou de um inibidor?

Objecto de ensino
Determinar experimentalmente a variao da velocidade de uma reaco qumica catalisada por variao da temperatura; Determinar experimentalmente a variao da velocidade de uma reaco qumica catalisada por adio de um inibidor;

Objectivos de aprendizagem
Traar um grfico de velocidade da reaco qumica em funo da temperatura; Traar um grfico de velocidade da reaco qumica em funo da quantidade de inibidor; Interpretar os grficos obtidos; Elaborar tabelas para registo de resultados.

Material

Suporte Universal Rolha furada Tina Pipetas de 3 e 5 mL Placa de aquecimento Pipeta conta-gotas Tubos de ensaio Cronmetro

Balo redondo Tubo de vidro dobrado Bureta de gases Pompete Tina de vidro Termmetro Gobels

Reagentes
gua desionizada () Batatas Inibidor: CuSO4 (aq) 0,1 mol dm-3 H2O2 3% (10 volumes) ou superior (30%)

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

20

Qumica Biolgica Espetacular 2012


Tabela 6.1 Informaes sobre perxido de hidrognio.

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo

Perxido de hidrognio H2O2 34,01 g/mol GHS05, GHS07 Perigo H302 Nocivo por ingesto. H318 Provoca leses oculares graves. P280 Usar luvas de proteco/ proteco ocular/ proteco facial. P305 + P351 + P338 SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente com gua durante vrios minutos. Se usar lentes de contacto, retire-as, se tal lhe for possvel. Continuar a enxaguar.

Recomendaes de prudncia

Tabela 6.2 Informaes sobre sulfato de cobre(II) pentahidratado.

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo

Sulfato de cobre(II) pentahidratado CuSO4 5H2O 249,69 g/mol HS07, GHS09 Ateno H302 Nocivo por ingesto. H315 Provoca irritao cutnea. H319 Provoca irritao ocular grave. H410 Muito txico para os organismos aquticos com efeitos duradouros. P273 Evitar a libertao para o ambiente. P305 + P351 + P338 SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente com gua durante vrios minutos. Se usar lentes de contacto, retire-as, se tal lhe for possvel. Continuar a enxaguar. P501 Eliminar o contedo/ recipiente em instalao aprovada de destruio de resduos.

Recomendaes de prudncia

Procedimento experimental A Preparao do extracto de catalase


1. Descascar e triturar duas ou trs batatas grandes. 2. Adicionar 25 a 30 mL de gua desionizada s batatas j trituradas. 3. Agitar de vez em quando e deixar em repouso durante cerca de 10 minutos. 4. Filtrar esta mistura com gaze ou um pano fino, de modo a obter uma soluo lmpida. Nota: Descasque 1 batata e pese 5 g. Triture a batata e coloque-a dentro do balo.

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

21

Qumica Biolgica Espetacular 2012


1 Parte: Efeito de temperatura sobre a actividade da catalase
1. Preparar a montagem para a recolha de oxignio. 2. Encher completamente com gua a bureta de gases. 3. Colocar a bureta de gases, tapada com um dedo, invertida sobre a extremidade do tubo de vidro que se encontra imerso na gua da tina. 4. Retirar o dedo depois de ter a certeza que no existe ar no interior da bureta de gases. 5. Colocar, temperatura ambiente, 5 mL de perxido de hidrognio no balo. 6. Registar a temperatura ambiente a que a experincia se vai efectuar. 7. Adicionar rapidamente, com o auxlio de uma pipeta, 3 mL de soluo de catalase ao perxido de hidrognio. 8. Fechar o balo. 9. Registar o tempo necessrio para recolher 5 mL de oxignio na bureta de gases. 10. Registar de novo o tempo necessrio para recolher mais 5 mL de oxignio (10 mL no total). 11. Repetir sucessivamente o procedimento anterior, at que toda a bureta de gases esteja cheia de gases. 12. Desmontar a experincia e lave convenientemente o balo e a bureta de gases. 13. Preparar a montagem para a recolha de oxignio. 14. Encher completamente com gua a bureta de gases. 15. Colocar a bureta de gases, tapada com um dedo, invertida sobre a extremidade do tubo de vidro que se encontra imerso na gua da tina. 16. Retirar o dedo depois de ter a certeza que no existe ar no interior da bureta de gases. 17. Colocar, temperatura ambiente, 5 mL de perxido de hidrognio no balo. 18. Registar a temperatura ambiente a que a experincia se vai efectuar. 19. Repetir os procedimentos de 1. a 6., mas colocando agora o balo numa tina de vidro com gua e gelo. 20. Registar, ao fim de 5 minutos, a temperatura do banho de gua e gelo. 21. Medir e registar os intervalos de tempo necessrios para recolher sucessivamente 5 mL de oxignio e at que toda a bureta de gases esteja cheia de gases. 22. Desmontar de novo a experincia e repetir os procedimentos de 1. a 11., mas colocando agora o balo numa tina de vidro com gua a cerca de 50C.

2 Parte: Efeito de um inibidor sobre a actividade da catalase


1. Fazer uma montagem idntica das experincias anteriores. 2. Deitar 5 mL de perxido de hidrognio num tubo de ensaio e 5 mL de soluo de catalase com 5 a 10 gotas de soluo aquosa de sulfato de cobre noutro tubo de ensaio. 3. Colocar estes dois tubos de ensaio num gobel que contenha gua a 20C, durante 5 minutos.
Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

22

Qumica Biolgica Espetacular 2012


4. Deitar ao mesmo tempo o contedo dos tubos no balo e fech-lo. 5. Repetir os procedimentos 9. a 11., efectuados na 1 parte desta actividade.

Resultados
Temperatura ambiente = _________________C

Tabela 6.3 1 Parte: Experincia referente reaco entre o perxido de hidrognio e a soluo de catalase, temperatura ambiente.

Volume de O2 produzido (mL) 0-5 5-10

Intervalo de tempo (s)

Tabela 6.4 1 Parte: Experincia referente reaco entre o perxido de hidrognio e a soluo de catalase, quando o balo se encontra num banho de gua e gelo.

Volume de O2 produzido (mL) 0-5 5-10

Intervalo de tempo (s)

Tabela 6.5 1 Parte: Experincia referente reaco entre o perxido de hidrognio e a soluo de catalase, a 50C

Volume de O2 produzido (mL) 0-5 5-10

Intervalo de tempo (s)

Tabela 6.6 2 Parte: Experincia referente reaco entre o perxido de hidrognio e a soluo de catalase, qual se adicionaram gotas de soluo de sulfato de cobre, temperatura ambiente

Volume de O2 produzido (mL) 0-5 5-10

Intervalo de tempo (s)

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

23

Qumica Biolgica Espetacular 2012


Tratamento dos resultados
Clculo da velocidade mdia de produo de O2, em mL/s
Tabela 6.7 1 Parte: Experincia referente reaco entre o perxido de hidrognio e a soluo de catalase, temperatura ambiente.

Volume de O2 produzido (mL) 0-5 5-10

Intervalo de tempo (s)

Velocidade mdia de produo de O2, (mL/s)

Tabela 6.8 1 Parte: Experincia referente reaco entre o perxido de hidrognio e a soluo de catalase, quando o balo se encontra num banho de gua e gelo.

Volume de O2 produzido (mL) 0-5 5-10

Intervalo de tempo (s)

Velocidade mdia de produo de O2, (mL/s)

Tabela 6.9 1 Parte: Experincia referente reaco entre o perxido de hidrognio e a soluo de catalase, a 50C

Volume de O2 produzido (mL) 0-5 5-10

Intervalo de tempo (s)

Velocidade mdia de produo de O2, (mL/s)

Tabela 6.10 2 Parte: Experincia referente reaco entre o perxido de hidrognio e a soluo de catalase, qual se adicionaram gotas de soluo de sulfato de cobre, temperatura ambiente

Volume de O2 produzido (mL) 0-5 5-10

Intervalo de tempo (s)

Velocidade mdia de produo de O2, (mL/s)

Tpicos de reflexo
Traar um grfico, para cada situao de temperatura, com base nos valores registados nas respectivas tabelas; Variao da velocidade de uma reaco em funo da temperatura; Previso do valor ideal de temperatura para que a velocidade de reaco seja mxima; Variao da velocidade de uma reaco em funo de um inibidor.

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

24

Qumica Biolgica Espetacular 2012 7 Fatores que influenciam a atividade enzimtica


Temperatura e pH
Notas introdutrias
A catalase uma enzima que capaz de transformar o perxido de hidrognio (H2O2) em oxignio (O2) e gua (H2O). A ao da catalase pode ser verificada atravs da libertao do oxignio. O avivar de uma chama permite identificar a formao de oxignio.

Material
Tubos tipo Falcon Suporte para tubos de ensaio Pipeta graduada 5,00 mL Pompete Termmetro digital Placa de aquecimento Areia Almofariz Esptula Bisturi ou faca Palitos Fsforos Gobel Pipeta conta-gotas

Reagentes
Fgado fresco Fgado cozido Fgado congelado Perxido de hidrognio (aq), H2O2 (aq) Soluo aquosa de cido clordrico 0,1 mol/dm3 Soluo aquosa de hidrxido de sdio 0,1 mol/dm3 gua desionizada () Indicador universal em papel

Tabela 7.1 Informaes sobre perxido de hidrognio.

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo

Perxido de hidrognio H2O2 34,01 g/mol GHS05, GHS07 Perigo H302 Nocivo por ingesto. H318 Provoca leses oculares graves. P280 Usar luvas de proteco/ proteco ocular/ proteco facial. P305 + P351 + P338 SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente com gua durante vrios minutos. Se usar lentes de contacto, retire-as, se tal lhe for possvel. Continuar a enxaguar.

Recomendaes de prudncia

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

25

Qumica Biolgica Espetacular 2012


Tabela 7.2 Informaes sobre cido clordrico concentrado.

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo

cido clordrico concentrado HC 36,46 g/mol GHS05, GHS07 Perigo H314 Provoca queimaduras na pele e leses oculares graves H335 Pode provocar irritao das vias respiratrias. P261 Evitar respirar as poeiras/ fumos/ gases/ nvoas/ vapores/ aerossis. P280 Usar luvas de proteco/ vesturio de proteco/ proteco ocular/ proteco facial. P305 + P351 + P338 SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente com gua durante vrios minutos. Se usar lentes de contacto, retire-as, se tal lhe for possvel. Continuar a enxaguar. P310 Contacte imediatamente um CENTRO DE INFORMAO ANTIVENENOS ou um mdico.

Recomendaes de prudncia

Tabela 7.3 Informaes sobre hidrxido de sdio.

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo Recomendaes de prudncia

Hidrxido de sdio NaHO 40,00 g/mol GHS05 Perigo H314 Provoca queimaduras na pele e leses oculares graves. P280 Usar luvas de proteco/ vesturio de proteco/ proteco ocular/ proteco facial. P305 + P351 + P338 SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente com gua durante vrios minutos. Se usar lentes de contacto, retire-as, se tal lhe for possvel. Continuar a enxaguar. P310 Contacte imediatamente um CENTRO DE INFORMAO ANTIVENENOS ou um mdico.

Procedimento experimental
1. Identificar 6 tubos tipo Falcon. 2. Adicionar a cada um dos tubos 2 mL de perxido de hidrognio. 3. Rolhar imediatamente cada um dos tubos tipo Falcon. 4. Colocar num almofariz uma pequena quantidade de fgado fresco. 5. Adicionar areia ao contedo do almofariz.
Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

26

Qumica Biolgica Espetacular 2012


6. Triturar o fgado fresco. 7. Transferir uma pequena quantidade de fgado fresco triturado para o tubo tipo Falcon 2. Tapar imediatamente o tubo tipo Falcon. (Nota: No conveniente que rolhe bem o tubo.) 8. Adicionar ao tubo tipo Falcon 3 uma pequena quantidade de fgado cozido. Tapar imediatamente o tubo tipo Falcon. 9. Adicionar ao tubo tipo Falcon 4 uma pequena quantidade de fgado congelado. Tapar imediatamente o tubo tipo Falcon. 10. Aproximar da extremidade dos tubos tipo Falcon 1, 2, 3 e 4 um palito com a ponta incandescente. 11. Observar o que acontece ao palito. (Nota: A formao de oxignio pode ser visvel se a chama do palito se avivar.) 12. Colocar os tubos tipo Falcon 3 e 4 em banho-maria, a 37C, durante aproximadamente 10 minutos. 13. Aproximar, novamente, da extremidade dos tubos tipo Falcon 3 e 4, um palito com a ponta incandescente. 14. Observar o que acontece ao palito. 15. Colocar uma pequena quantidade de fgado fresco triturado nos tubos tipo Falcon 5 e 6. Tapar imediatamente os tubos tipo Falcon. (Nota: No conveniente que rolhe bem o tubo.) 16. Adicionar ao tubo tipo Falcon 5 algumas gotas de soluo aquosa de cido clordrico, de modo a que o valor de pH seja inferior a 4. Verificar o valor de pH com o indicador universal em papel. 17. Adicionar ao tubo tipo Falcon 6 algumas gotas de soluo aquosa de hidrxido de sdio, de modo a que o valor de pH seja superior a 10. Usar o indicador universal em papel, para verificar o valor de pH. 18. Aproximar da extremidade dos tubos tipo Falcon 5 e 6 um palito com a ponta incandescente. 19. Observar o que acontece ao palito. 20. Comparar a quantidade de oxignio libertada em cada um dos tubos tipo Falcon.

Tpicos de reflexo
Compara os resultados obtidos nos tubos tipo Falcon 2, 5 e 6, considerando a informao da tabela 7.4.

Tabela 7.4 Contedo dos tubos tipo Falcon 2, 5 e 6.

Tubo tipo Falcon 2 Fgado fresco gua oxigenada -

Tubo tipo Falcon 5 Fgado fresco gua oxigenada Soluo aquosa de cido clordrico

Tubo tipo Falcon 6 Fgado fresco gua oxigenada Soluo aquosa de hidrxido de sdio

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

27

Qumica Biolgica Espetacular 2012


Indica qual o fator que influenciou a atividade enzimtica. Refere para cada um dos tubos tipo Falcon se a enzima, neste caso a catalase, se encontra ativa ou inativa. Valores elevados de acidez torna a catalase ativa ou inativa? Valores elevados de basicidade torna a catalase ativa ou inativa?

Compara os resultados obtidos nos tubos tipo Falcon 1, 2, 3 e 4, considerando a informao da tabela 7.5.
Tabela 7.5 Contedo dos tubos tipo Falcon 1, 2, 3 e 4.

Tubo tipo Falcon 1 gua oxigenada

Tubo tipo Falcon 2 gua oxigenada Fgado fresco

Tubo tipo Falcon 3 gua oxigenada Fgado cozido

Tubo tipo Falcon 4 gua oxigenada Fgado congelado

Indica qual o fator que influenciou a atividade enzimtica. Refere para cada um dos tubos tipo Falcon se a enzima, neste caso a catalase, se encontra ativa ou inativa.

Compara os resultados obtidos nos tubos tipo Falcon 1, 2, 3 e 4, considerando a informao da tabela 7.6.

Tabela 7.6 Contedo dos tubos tipo Falcon 1, 2, 3 e 4.

Tubo tipo Falcon 1 gua oxigenada

Tubo tipo Falcon 2 gua oxigenada Fgado fresco

Tubo tipo Falcon 3 gua oxigenada Fgado cozido Aquecimento banho-maria

Tubo tipo Falcon 4 gua oxigenada Fgado congelado Aquecimento banho-maria

O que aconteceu quando os tubos tipo Falcon foram colocados em banho-maria? A inativao das enzimas pode ser reversvel? Em que condies? Em qual dos tubos tipo Falcon foi possvel observar a reversibilidade nos tubos tipo Falcon? Em qual dos tubos tipo Falcon a enzima se tornou permanentemente inativa?

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

28

Qumica Biolgica Espetacular 2012 8 Propriedades das enzimas


Material
Areia Almofariz Pipeta graduada 2,00 mL Pompete Bisturi Suporte para tubos de ensaio Tubos tipo Falcon Palitos Fsforos Esptula

Reagentes
Fgado fresco
Tabela 8.1 Informaes sobre perxido de hidrognio.

gua oxigenada (aq), H2O2(aq) 10% Dixido de mangansio (s), MnO2(s)

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo

Perxido de hidrognio H2O2 34,01 g/mol GHS05, GHS07 Perigo H302 Nocivo por ingesto. H318 Provoca leses oculares graves. P280 Usar luvas de proteco/ proteco ocular/ proteco facial. P305 + P351 + P338 SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente com gua durante vrios minutos. Se usar lentes de contacto, retire-as, se tal lhe for possvel. Continuar a enxaguar.

Recomendaes de prudncia

Tabela 8.2 Informaes sobre dixido de mangans

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo

xido de mangans (IV) MnO2 86,94 g/mol GHS07 Ateno H302 Nocivo por ingesto H332 Nocivo por inalao.

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

29

Qumica Biolgica Espetacular 2012


Procedimento experimental
1. Colocar num almofariz uma pequena quantidade de fgado fresco. 2. Adicionar areia ao contedo do almofariz. 3. Triturar o fgado fresco. 4. Identificar 4 tubos tipo Falcon. 5. Adicionar a cada um dos tubos tipo Falcon 2 mL de perxido de hidrognio. 6. Rolhar imediatamente cada um dos tubos tipo Falcon. 7. Adicionar ao tubo tipo Falcon 2, uma pequena quantidade de dixido de mangansio slido. Tapar imediatamente o tubo tipo Falcon. (Nota: No conveniente que rolhe bem o tubo.) 8. Transferir uma pequena quantidade de fgado fresco triturado para o tubo tipo Falcon 3. Tapar imediatamente o tubo tipo Falcon. (Nota: No conveniente que rolhe bem o tubo.) 9. Aproximar da extremidade dos tubos tipo Falcon 1, 2 e 3 um palito com a ponta incandescente. 10. Observar o que acontece ao palito. 11. Quando a reao terminar no tubo tipo Falcon 3, retirar o fgado do tubo de ensaio. 12. Transferir o pedao de fgado do tubo tipo Falcon 3 para o tubo tipo Falcon 4, que contm perxido de hidrognio. 13. Aproximar da extremidade do tubo tipo Falcon 4 um palito com a ponta incandescente. 14. Observar o que acontece ao palito.

Tpicos de reflexo
Tabela 8.3 Contedo dos tubos tipo Falcon 1, 2 e 3.

Tubo tipo Falcon 1 gua oxigenada

Tubo tipo Falcon 2 gua oxigenada Dixido de mangansio

Tubo tipo Falcon 3 gua oxigenada Fgado fresco

Indica qual a funo do tubo tipo Falcon 1. Compara os resultados obtidos nos tubos tipo Falcon 1, 2 e 3. A presena da catalase afeta a velocidade das reaes? Funciona como catalisador ou inibidor? A presena do dixido de mangansio afeta a velocidade das reaes? Funciona como catalisador ou inibidor?

Compara os resultados obtidos nos tubos tipo Falcon 3 e 4. A enzima foi consumida durante a reao qumica?

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

30

Qumica Biolgica Espetacular 2012 9 Extrao de protenas


Extrao da casena do leite
Material
Gobel Esptula Pipeta conta-gotas Caixa de Petri Suporte universal Tubo de ensaio Suporte para tubos de ensaio Vareta de vidro Placa de aquecimento Termmetro digital Papel de filtro Anel adaptado a um funil Funil

Reagentes
Leite em p magro Vinagre gua desionizada () Sulfato de cobre(II) pentahidratado (s) Hidrxido de sdio (s) Tartarato duplo de sdio e potssio (s)

Tabela 9.1 Informaes sobre sulfato de cobre(II) pentahidratado

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo

Sulfato de cobre(II) pentahidratado CuSO4 5H2O 249,69 g/mol GHS07, GHS09 Ateno H302 Nocivo por ingesto. H315 Provoca irritao cutnea. H319 Provoca irritao ocular grave. H410 Muito txico para os organismos aquticos com efeitos duradouros. P273 Evitar a libertao para o ambiente. P305 + P351 + P338 SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente com gua durante vrios minutos. Se usar lentes de contacto, retire-as, se tal lhe for possvel. Continuar a enxaguar. P501 Eliminar o contedo/ recipiente em instalao aprovada de destruio de resduos.

Recomendaes de prudncia

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

31

Qumica Biolgica Espetacular 2012


Tabela 9.2 Informaes sobre hidrxido de sdio.

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo Recomendaes de prudncia

Hidrxido de sdio NaHO 40,00 g/mol GHS05 Perigo H314 Provoca queimaduras na pele e leses oculares graves. P280 Usar luvas de proteco/ vesturio de proteco/ proteco ocular/ proteco facial. P305 + P351 + P338 SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente com gua durante vrios minutos. Se usar lentes de contacto, retire-as, se tal lhe for possvel. Continuar a enxaguar. P310 Contacte imediatamente um CENTRO DE INFORMAO ANTIVENENOS ou um mdico.

Tabela 9.3 Informaes sobre tartarato duplo de sdio e potssio tetrahidratado.

Nome Frmula qumica Massa molar

Tartarato duplo de sdio e potssio tetrahidratado KOCOCH(OH)CH(OH)COONa 4H2O 282,22 g/mol

Procedimento experimental A Preparao da soluo aquosa de hidrxido de sdio 10% (m/V)


Volume de soluo de 300 mL Usar como solvente gua desionizada

B Preparao do reagente do teste do biureto


1. Medir 1,5 g de sulfato de cobre pentahidratado. 2. Medir 6,0 g de tartarato duplo de sdio e potssio. 3. Dissolver em 500 mL de gua desionizada. 4. Medir 300 mL de soluo aquosa de hidrxido de sdio 10% (m/V). 5. Adicionar, sob agitao constante, a soluo aquosa de hidrxido de sdio. 6. Perfazer com gua desionizada at um volume de 1 L. 7. Guardar o reagente num frasco de vidro.

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

32

Qumica Biolgica Espetacular 2012


C Extrao de casena
1. Dissolver uma pequena quantidade de leite em p magro em gua desionizada (gobel 1). 2. Aquecer o leite a uma temperatura de 40C. (Nota: No exceder este valor de temperatura.) 3. Mantendo o leite temperatura de 40C, adicionar gota a gota vinagre at ao aparecimento de um precipitado. Agitar lentamente ao longo da adio do vinagre. (Nota: No colocar vinagre em excesso.) 4. Remover o precipitado, com auxlio de uma esptula para um gobel (gobel 2). 5. Deixar repousar o contedo do gobel 2. Se algum lquido se formar, retir-lo com auxlio de uma pipeta conta-gotas e transferi-lo novamente para o gobel 1. 6. Continuar a adicionar algumas gotas de vinagre, ao gobel 1, at precipitao completa da casena. 7. Remover o precipitado, com auxlio de uma esptula para o gobel 2. 8. Filtrar por gravidade o contedo do gobel 2. 9. Guardar o precipitado numa caixa de Petri. 10. Deixar secar temperatura ambiente.

Notas: (1) Opcional Se usar leite com gordura, pode proceder lavagem do precipitado com lcool etlico, dado que a casena insolvel em lcool etlico. Este procedimento serve para remover alguma gordura. (2) O vinagre pode ser substitudo por uma soluo aquosa de cido actico a 10%. (3) A filtrao por gravidade pode ser substituda por uma filtrao por vcuo, caso seja difcil secar o precipitado.

D Presena de casena
1. Transferir uma pequena poro de casena para um tubo de ensaio. 2. Testar o contedo do tubo de ensaio, com o teste do biureto.

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

33

Qumica Biolgica Espetacular 2012 10 Identificao de aminocidos


por teste de solubilidade e reao xantoproteica

Material
Tubos de ensaio Suporte para tubos de ensaio Esptula Vareta de vidro Pipeta graduada 1,00 mL Pompete Pipeta conta-gotas Mola de madeira Balana Vidro de relgio Proveta Esptula Placa de aquecimento

Reagentes
Aminocidos: cistena, glicina, metionina, tirosina, triptofano Hidrxido de sdio (s) Indicador universal em papel gua desionizada () cido ntrico concentrado ()

Tabela 10.1 Informaes sobre hidrxido de sdio.

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo Recomendaes de prudncia

Hidrxido de sdio NaHO 40,00 g/mol GHS05 Perigo H314 Provoca queimaduras na pele e leses oculares graves. P280 Usar luvas de proteco/ vesturio de proteco/ proteco ocular/ proteco facial. P305 + P351 + P338 SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente com gua durante vrios minutos. Se usar lentes de contacto, retire-as, se tal lhe for possvel. Continuar a enxaguar. P310 Contacte imediatamente um CENTRO DE INFORMAO ANTIVENENOS ou um mdico.

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

34

Qumica Biolgica Espetacular 2012


Tabela 10.2 Informaes sobre cido ntrico concentrado.

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo

cido ntrico concentrado HNO3 63,01 g/mol GHS03, GHS05 Perigo H272 Pode agravar incndios; comburente H314 Provoca queimaduras na pele e leses oculares graves.

Recomendaes de prudncia

P220 Manter/guardar afastado de roupa/matrias combustveis. P280

Usar luvas de proteco/ vesturio de proteco/ proteco ocular/ SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS OLHOS:

proteco facial. P305 + P351 + P338

enxaguar cuidadosamente com gua durante vrios minutos. Se usar lentes de contacto, retire-as, se tal lhe for possvel. Continuar a enxaguar. P310

Contacte

imediatamente

um

CENTRO

DE

INFORMAO

ANTIVENENOS ou um mdico.

Procedimento experimental A Preparao da soluo aquosa de hidrxido de sdio 10% (m/V)


Usar como solvente gua desionizada

B TESTE DE SOLUBILIDADE 1. Colocar 2 mL de gua desionizada em 5 tubos de ensaio. 2. Numerar os tubos de ensaio. 3. Adicionar, em seguida, uma pequena quantidade de cada aminocido nos respetivos tubos de ensaio, de acordo com a tabela 10.3. 4. Agitar cada um dos tubos de ensaio. 5. Verificar a respetiva solubilidade.
Tabela 10.3 Teste de solubilidade. Tubo de ensaio Aminocido Teste de solubilidade 1 Cistena * 2 Glicina * 3 Metionina * 4 Tirosina * 5 Triptofano *

*Nota: solvel ou no solvel em gua

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

35

Qumica Biolgica Espetacular 2012


C REAO XANTOPROTEICA, para identificar a tirosina e triptofano 1. Medir 5 mg de cada um dos aminocidos. 2. Identificar cinco tubos de ensaio (limpos e secos). 3. Transferir cada um dos aminocidos para o respetivo tubo de ensaio. 4. Adicionar a cada um dos tubos de ensaio 1 mL de cido ntrico concentrado. 5. Aquecer no interior da hotte, cuidadosamente, cada um dos tubos de ensaio. 6. Deixar arrefecer. 7. Observar a cor da soluo. (O aparecimento de uma colorao amarela ou a formao de um precipitado indicador de uma reao positiva). 8. Adicionar, gota a gota, uma soluo aquosa de hidrxido de sdio, at reao alcalina. Retirar esporadicamente uma gota da amostra e verificar o valor de pH, usando papel indicador universal. 9. Observar a cor da soluo. (O aparecimento de cor laranja intensa corresponde a uma reao positiva.)
Tabela 10.4 Reao xantoproteica. Gobel/tubo de ensaio Aminocido Reao xantoproteica
*

1 Cistena *

2 Glicina *

3 Metionina *

4 Tirosina *

5 Triptofano *

Nota: reao positiva ou negativa

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

36

Qumica Biolgica Espetacular 2012 11 Composio qumica dos alimentos

Notas introdutrias
A presena de protenas pode ser detetada a partir da reao do biureto, quando ocorre a formao de flocos azuis que precipitam, ficando a soluo com um anel violeta. A presena de acares redutores pode ser visvel a partir do teste de Fehling, quando se forma um precipitado cor de tijolo. O aparecimento de um precipitado de xido de cobre(I) (Cu2O) de cor tijolo permite comprovar a presena de glicose. O soluto de Lugol, na presena de amido, toma a cor azul.

Material
Balana Esptula Tubos de ensaio Suporte para tubos de ensaio Lamparina com lcool Mola de madeira Funil Matrz Almofariz Pipeta conta-gotas Papel de filtro Pipeta graduada 5,00 mL Proveta de plstico de 5 mL Pipeta graduada 2,00 mL Suporte universal Anel adaptado a um funil

Reagentes
Hidrxido de sdio (s) Sulfato de cobre(II) pentahidratado (s) Tartarato de sdio e potssio tetrahidratado (s) Iodeto de potssio (s) Iodo (s) Leite Azeite Refrigerante Iogurte lquido magro Ma

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

37

Qumica Biolgica Espetacular 2012


Tabela 11.1 Informaes sobre hidrxido de sdio.

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo Recomendaes de prudncia

Hidrxido de sdio NaHO 40,00 g/mol GHS05 Perigo H314 Provoca queimaduras na pele e leses oculares graves. P280 Usar luvas de proteco/ vesturio de proteco/ proteco ocular/ proteco facial. P305 + P351 + P338 SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente com gua durante vrios minutos. Se usar lentes de contacto, retire-as, se tal lhe for possvel. Continuar a enxaguar. P310 Contacte imediatamente um CENTRO DE INFORMAO ANTIVENENOS ou um mdico.

Tabela 11.2 Informaes sobre sulfato de cobre(II) pentahidratado.

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo

Sulfato de cobre(II) pentahidratado CuSO4 5H2O 249,69 g/mol GHS07, GHS09 Ateno H302 Nocivo por ingesto. H315 Provoca irritao cutnea. H319 Provoca irritao ocular grave. H410 Muito txico para os organismos aquticos com efeitos duradouros. P273 Evitar a libertao para o ambiente. P305 + P351 + P338 SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente com gua durante vrios minutos. Se usar lentes de contacto, retire-as, se tal lhe for possvel. Continuar a enxaguar. P501 Eliminar o contedo/ recipiente em instalao aprovada de destruio de resduos.

Recomendaes de prudncia

Tabela 11.3 Informaes sobre tartarato duplo de sdio e potssio tetrahidratado.

Nome Frmula qumica Massa molar

Tartarato duplo de sdio e potssio tetrahidratado KOCOCH(OH)CH(OH)COONa 4H2O 282,22 g/mol

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

38

Qumica Biolgica Espetacular 2012


Tabela 11.4 Informaes sobre iodo.

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo

Iodo I2 253,81 g/mol GHS07, GHS09 Ateno H312 Nocivo em contacto com a pele. H332 Nocivo por inalao. H400 Muito txico para os organismos aquticos. P273 Evitar a libertao para o ambiente. P280 Usar luvas de proteco/ vesturio de proteco.

Recomendaes de prudncia

Tabela 11.5 Informaes sobre iodeto de potssio.

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo

Iodeto de potssio KI 166,00 g/mol GHS07 Ateno H302 Nocivo por ingesto H315 Provoca irritao cutnea H319 Provoca irritao ocular grave. P305 + P351 + P338 SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente com gua durante vrios minutos. Se usar lentes de contacto, retire-as, se tal lhe for possvel. Continuar a enxaguar.

Recomendaes de prudncia

Procedimento experimental A Preparao da soluo A de Licor de Fehling


1. Dissolver 6,9 g sulfato de cobre(II) pentahidratado em 100 mL de gua desionizada. 2. Guardar a soluo num frasco devidamente identificado.

B Preparao da soluo B de Licor de Fehling


1. Dissolver cerca de 35 g tartarato de sdio e potssio e 5 g hidrxido de sdio em 100 mL de gua desionizada. 2. Guardar a soluo num frasco de plstico, devidamente identificado.

Nota: As solues de licor de Fehling A e B devem ser guardadas em frascos separados e usadas na proporo de 1:1.

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

39

Qumica Biolgica Espetacular 2012


C Preparao de gua iodada
1. Dissolver iodeto de potssio slido em gua desionizada. 2. Adicionar iodo, no estado slido. 3. Agitar a mistura. 4. Guardar num frasco de vidro escuro, devidamente identificado.

D Preparao de soluo aquosa de hidrxido de sdio a 10% (m/V)


Usar como solvente gua desionizada.

E Preparao de soluo aquosa de sulfato de cobre a 1% (m/V)


Usar como solvente gua desionizada.

F Anlise da composio qumica dos alimentos


1. Selecionar um dos alimentos. 2. Se o alimento estiver no estado slido, macerar o alimento com o auxlio de um almofariz. 3. Medir 10 g do alimento selecionado. 4. Identificar os quatro tubos de ensaio. 5. Colocar no tubo de ensaio A uma pequena quantidade de amostra. 6. Retirar do tubo de ensaio, umas gotas de amostra e coloc-las sobre papel de filtro. 7. Deixar evaporar temperatura ambiente o papel de filtro contendo a amostra. 8. Observar o papel de filtro seco. 9. Colocar no tubo de ensaio B, aproximadamente 2 mL de amostra. 10. Adicionar 2 gotas de soluo aquosa de sulfato de cobre. 11. Adicionar, posteriormente, 4 mL de soluo aquosa de hidrxido de sdio. 12. Agitar o contedo do tubo de ensaio. 13. Observar a cor. 14. Transferir cerca de 2 mL de amostra para o tubo de ensaio C. 15. Adicionar 1 mL de soluo A de licor de Fehling. 16. Posteriormente adicionar 1 mL de soluo B de licor de Fehling. 17. Acender a lamparina. 18. Com uma mola de madeira, segurar o tubo de ensaio e aquecer a mistura. 19. Observar a mudana de cor e o aparecimento de um precipitado cor de tijolo. 20. Apagar a lamparina. 21. Colocar o tubo de ensaio no suporte para tubos de ensaio. 22. Colocar no tubo de ensaio D a amostra. 23. Adicionar 10 gotas de gua iodada. 24. Observar a cor.
Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

40

Qumica Biolgica Espetacular 2012 12 Passagem de substncias atravs de uma membrana biolgica
Material
Pipeta conta-gotas Gobel Pina

Reagentes
Ovo gua iodada gua desionizada () Soluo de amido

Procedimento experimental A Preparao da soluo de amido


1. Medir 1,25g de amido. 2. Adicionar uma pouco de gua fria at formar uma pasta. 3. Acrescentar gua desionizada quente (sem ter entrado em ebulio) at perfazer um volume de 50 mL. 4. Agitar bem.

B Difuso
1. Partir o ovo em duas metades. 2. Retirar o contedo. (Nota: Guardar o contedo para outra atividade experimental. Pretende-se usar apenas a casca do ovo.) 3. Usar apenas uma das metades do ovo e guardar a outra metade. 4. Bater a extremidade da metade do ovo mais afastada dos bordos, ao de leve na bancada de trabalho, de modo a rachar a casca. 5. Cuidadosamente, retirar com o auxlio de uma pina os fragmentos da casca, de modo a no romper a membrana interna e a deixar uma pequena parte desta membrana a nu. 6. Verificar que no houve ruptura da membrana, por adio de uma pequena quantidade de gua no fundo da casca. 7. Colocar a soluo de amido previamente preparada num gobel. O dimetro do gobel tem que ser inferior ao dimetro da casca do ovo. 8. Introduzir a metade do ovo no gobel contendo a soluo de amido. A zona onde a membrana ficou exposta (fundo da casca do ovo) deve estar em contacto com a soluo de amido. 9. Colocar algumas gotas de soluo de Lugol ou gua iodada dentro da casca do ovo. 10. Observar o que acontece.

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

41

Qumica Biolgica Espetacular 2012 13 Nutrio e transporte de vertebrados

Material
Gobel Fio Molas Pompete Lamparina com lcool corado Mola de madeira Suporte para tubos de ensaio Tubos de ensaio Proveta graduada 20 mL Pipeta graduada 5,00 mL Fsforos

Reagentes
Tripa de porco ou membrana de dilise (fragmentos de 10 a 15 cm) gua desionizada () Clara de ovo Vitamina C /cido ascrbico (s) Glicose (s) Amido (s) Cloreto de sdio (s)
Tabela 13.1 Informaes sobre indofenol.

Sal duplo de tartarato de sdio e potssio (s) Sulfato de cobre pentahidratado (s) Soluo aquosa de hidrxido de sdio 10% (m/V) Soluo de indofenol a 1% Soluo A e B de Licor de Fehling gua iodada Soluo de nitrato de prata

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo

Indofenol C12H9NO2 199,21 g/mol GHS07 Ateno H315 Provoca irritao cutnea. H319 Provoca irritao ocular grave. H335 Pode provocar irritao das vias respiratrias. P261 Evitar respirar as poeiras/ fumos/ gases/ nvoas/ vapores/ aerossis P305 + P351 + P338 SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente com gua durante vrios minutos. Se usar lentes de contacto, retire-as, se tal lhe for possvel. Continuar a enxaguar.

Recomendaes de prudncia

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

42

Qumica Biolgica Espetacular 2012


Tabela 13.2 Informaes sobre cloreto de sdio.

Nome Frmula qumica Massa molar

Cloreto de sdio NaC 58,44 g/mol

Tabela 13.3 Informaes sobre nitrato de prata.

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo

Nitrato de prata AgNO3 169,87 g/mol GHS03, GHS05, GHS09 Perigo H272 Pode agravar incndios; comburente. H314 Provoca queimaduras na pele e leses oculares graves. H410 Muito txico para os organismos aquticos com efeitos duradouros. P220 Manter/guardar afastado de roupa/matrias combustveis. P280 Usar luvas de proteco/ vesturio de proteco/ proteco ocular/ proteco facial. P305 + P351 + P338 SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente com gua durante vrios minutos. Se usar lentes de contacto, retire-as, se tal lhe for possvel. Continuar a enxaguar. P310 Contacte imediatamente um CENTRO DE INFORMAO ANTIVENENOS ou um mdico. P501 Eliminar o contedo/ recipiente em instalao aprovada de destruio de resduos.

Recomendaes de prudncia

Tabela 13.4 Informaes sobre sulfato de cobre(II) pentahidratado.

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo

Sulfato de cobre pentahidratado CuSO4 5H2O 249,69 g/mol GHS07, GHS09 Ateno H302 Nocivo por ingesto. H315 Provoca irritao cutnea. H319 Provoca irritao ocular grave. H410 Muito txico para os organismos aquticos com efeitos duradouros. P273 Evitar a libertao para o ambiente. P305 + P351 + P338 SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente com gua durante vrios minutos. Se usar lentes de contacto, retire-as, se tal lhe for possvel. Continuar a enxaguar. P501 Eliminar o contedo/ recipiente em instalao aprovada de destruio de resduos. Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

Recomendaes de prudncia

43

Qumica Biolgica Espetacular 2012


Tabela 13.5 Informaes sobre hidrxido de sdio.

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo Recomendaes de prudncia

Hidrxido de sdio NaHO 40,00 g/mol GHS05 Perigo H314 Provoca queimaduras na pele e leses oculares graves. P280 Usar luvas de proteco/ vesturio de proteco/ proteco ocular/ proteco facial. P305 + P351 + P338 SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente com gua durante vrios minutos. Se usar lentes de contacto, retire-as, se tal lhe for possvel. Continuar a enxaguar. P310 Contacte imediatamente um CENTRO DE INFORMAO ANTIVENENOS ou um mdico.

Tabela 13.6 Informaes sobre cido ascrbico.

Nome Frmula qumica Massa molar

cido ascrbico C6H8O6 176,12 g/mol

Tabela 13.7 Informaes sobre glicose.

Nome Frmula qumica Massa molar

Glicose C6H12O6 180,16 g/mol

Procedimento experimental A Preparao da soluo aquosa de nitrato de prata


Usar como solvente gua desionizada.

B Preparao do reagente do teste do biureto


1. Medir 1,5 g de sulfato de cobre pentahidratado. 2. Medir 6,0 g de tartarato duplo de sdio e potssio 3. Dissolver em 500 mL de gua desionizada. 4. Medir 300 mL de soluo aquosa de hidrxido de sdio 10% (m/V). 5. Adicionar, sob agitao constante, a soluo aquosa de hidrxido de sdio. 6. Perfazer com gua desionizada at um volume de 1 L. 7. Guardar o reagente num frasco de vidro.

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

44

Qumica Biolgica Espetacular 2012


C Preparao de amostras para posterior identificao de substncias
1. Preparar a soluo aquosa de glicose 20%. 2. Preparar a soluo de amido 1%. 3. Preparar a soluo diluda de clara de ovo (1:5). 4. Preparar a soluo aquosa de vitamina C 0,5%. 5. Preparar a soluo aquosa de cloreto de sdio 5% 6. Mergulhar a tripa num gobel com gua desionizada at se tornar malevel. 7. Retirar a tripa do gobel. 8. Fechar uma das extremidades a tripla. 9. Introduzir no interior da tripa, cerca de 5 ml das solues, preparadas nos pontos 1, 2, 3 e 4 e 5. 10. Fechar a outra extremidade da tripa. 11. Mergulhar a tripa em 250 mL gua desionizada. Utilizar molas para prender as extremidades da tripa ao gobel ou um fio para atar cada uma das extremidades da tripa. 12. Identificar 5 tubos de ensaio. 13. Aps 5 minutos, retirar cerca de 5 mL do contedo do gobel, onde se encontra mergulhada a tripa, numa zona prxima da tripa. 14. Transferir para o tubo de ensaio 1. 15. Aps 15 minutos retirar uma nova amostra do contedo do gobel. 16. Transferir a amostra para o tubo de ensaio 2. 17. Aps 25 minutos retirar nova amostra do contedo do gobel. 18. Transferir para o tubo de ensaio 3. 19. Aps 35 minutos retirar a ltima amostra do contedo do gobel. 20. Transferir para o tubo de ensaio 4. 21. Aps 40 minutos retirar a ltima amostra do contedo do gobel. 22. Transferir para o tubo de ensaio 5.

D Identificao de substncias
1. Identificar as substncias presentes em cada um dos tubos de ensaio, de acordo com a tabela 13.8.

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

45

Qumica Biolgica Espetacular 2012


Tabela 13.8 Identificao de glicose, protenas, vitamina C, amido e cloreto de sdio. Amostra Tubo de ensaio A Tubo de ensaio B Tubo de ensaio 1 Tubo de ensaio C Tubo de ensaio D Tubo de ensaio E Tubo de ensaio A Tubo de ensaio B Tubo de ensaio 2 Tubo de ensaio C Tubo de ensaio D Tubo de ensaio E Tubo de ensaio A Tubo de ensaio B Tubo de ensaio 3 Tubo de ensaio C Tubo de ensaio D Tubo de ensaio E Tubo de ensaio A Tubo de ensaio B Tubo de ensaio 4 Tubo de ensaio C Tubo de ensaio D Tubo de ensaio E Tubo de ensaio A Tubo de ensaio B Tubo de ensaio 5 Tubo de ensaio C Tubo de ensaio D Tubo de ensaio E Substncia a identificar Glicose Protenas Vitamina C Amido Cloreto de sdio Glicose Protenas Vitamina C Amido Cloreto de sdio Glicose Protenas Vitamina C Amido Cloreto de sdio Glicose Protenas Vitamina C Amido Cloreto de sdio Glicose Protenas Vitamina C Amido Cloreto de sdio Teste Teste do licor de Fehling Reao do biureto Soluo de indofenol Lugol ou gua iodada Soluo aquosa de nitrato de prata Teste do licor de Fehling Reao do biureto Soluo de indofenol Lugol ou gua iodada Soluo aquosa de nitrato de prata Teste do licor de Fehling Reao do biureto Soluo de indofenol Lugol ou gua iodada Soluo aquosa de nitrato de prata Teste do licor de Fehling Reao do biureto Soluo de indofenol Lugol ou gua iodada Soluo aquosa de nitrato de prata Teste do licor de Fehling Reao do biureto Soluo de indofenol Lugol ou gua iodada Soluo aquosa de nitrato de prata

Tpicos de reflexo
De entre as substncias (glicose, protenas, vitamina C, cloreto de sdio e amido) indicar quais as que conseguiram atravessar a tripa de porco Papel do intestino delgado na digesto Funo do intestino Uso da membrana de dilise Esquema representativo do intestino delgado e o sangue Processo de absoro imediato ou no?

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

46

Qumica Biolgica Espetacular 2012 14 Extrao de ADN


Notas introdutrias
O significado da sigla ADN cido desoxirribonucleico. Em ingls, representa-se por DNA, deoxyribonucleic acid. A molcula de ADN est presente em todos os seres vivos, vegetais e animais.

Material
Almofariz Bisturi Banho de gelo Papel de filtro Proveta 10 mL Balana Suporte para tubos de ensaio Pipeta conta-gotas Placa de aquecimento Sacos Proveta 50 mL Tubo de ensaio Esptula Vareta de vidro Anel adaptado a um funil Funil Suporte universal Matrz Gobel

Reagentes
Detergente da loia gua desionizada () Sal de cozinha Kiwi, cebola, ervilha, morango, banana Etanol 96% frio

Tabela 14.1 Informaes sobre o etanol.

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo Recomendaes de prudncia

Etanol CH3CH2OH 46,07 g/mol GHS02 Perigo H225 Lquido e vapor facilmente inflamveis. P210 Manter afastado do calor/fasca/chama aberta/superfcies quentes. - No fumar.

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

47

Qumica Biolgica Espetacular 2012


Procedimento experimental A Preparao da soluo de extrao de ADN
1. Preparar uma mistura contendo 50 mL de gua desionizada, 5 mL de detergente da loia e 1,5 g de sal de cozinha. 2. Agitar lentamente para evitar a formao de espuma.

B Extrao de ADN
1. Descascar a amostra e cort-la em pedaos. 2. Transferir os pedaos da amostra para um almofariz e com o auxlio de um pilo, triturar. 3. Adicionar a soluo de extrao de ADN amostra triturada. 4. Continuar a triturar a mistura no almofariz, de modo a obter um lquido espesso e homogneo. 5. Colocar a mistura em banho-maria, durante cerca de 15 minutos. 6. Arrefecer a mistura, temperatura ambiente ou em banho de gelo. 7. Filtrar, atravs de uma filtrao por gravidade, o preparado. 8. Retirar uma pequena quantidade de filtrado para um tubo de ensaio (cerca de da capacidade do tubo de ensaio. 9. Adicionar, lentamente, uma pequena quantidade (cerca de 5 mL) de etanol 96% frio (proveniente do frigorfico ou congelador) at se observar duas fases. A adio de etanol pode ser feita com uma pipeta conta-gotas. O etanol deve escorrer lenta e cuidadosamente atravs das paredes do tubo de ensaio. No deve ocorrer mistura do etanol com o lquido que se encontra na fase inferior. 10. Colocar o tubo de ensaio num banho de gelo durante aproximadamente 2 a 3 minutos. 11. Deixar repousar. 12. Observar a interface entre as duas fases. 13. Com o auxlio de uma vareta de vidro, retirar com cuidado uma amostra de ADN.

Nota: Observar cuidadosamente a consistncia da camada. O ADN precipita com o lcool e fica na parte inferior da fase alcolica, logo acima da fase aquosa. A pectina fica na superfcie da fase alcolica, apresenta consistncia gelatinosa e abundante com abundantes bolhas de ar.

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

48

Qumica Biolgica Espetacular 2012


Tpicos de reflexo
Funo de cada um dos reagentes, sal das cozinhas, detergente da loia e do etanol. Motivo pelo qual se filtra a mistura. Temperatura do lcool etlico Extrao de ADN a partir de clulas vegetais e animais Uso de diferentes fontes de ADN: morango, kiwi, banana, ervilhas (demolhadas) Modo de procedimento de triturao da amostra: almofariz, liquificadora, varinha mgica ou esmagamento num saco de plstico Quantidade de soluo de extrao de ADN Uso de diferentes detergentes ou sabes: sabo, detergentes em p, detergentes lquidos, champo, gel de banho, sabonete lquido Uso de lcool isoproplico em vez de lcool etlico Uso de lcool etlico 70% Necessidade do banho-maria Utilidade da centrifugao aps a precipitao do ADN O mtodo usado permite extrair exclusivamente ADN? Vantagens da extrao de ADN vegetal Problemas na identificao do ADN aps a concluso da atividade experimental Dificuldades em discernir entre ADN e pectinas Elencar um conjunto de vegetais onde seja mais fcil identificar o ADN Elencar um conjunto de vegetais onde seja mais difcil identificar o ADN

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

49

Qumica Biolgica Espetacular 2012 15 Sntese do cido acetilsaliclico (aspirina)


Material
Balana Matrz Proveta 10,0 mL Suporte universal Garra Noz Proveta 100 mL Funil de bckner Aparelho para medir ponto de fuso Tubos capilares Argola de borracha Placa de aquecimento Gobel Vareta de vidro Esptula Pipeta graduada 1,00 mL Pompete Papel de filtro kitasato Termmetro digital Garrafa de esguicho

Reagentes
cido saliclico (s) gua desionizada () Anidrido actico () Soluo aquosa de hidrxido de brio cido sulfrico concentrado ()

Tabela 15.1 Informaes sobre hidrxido de brio.

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo

Hidrxido de brio octohidratado Ba(OH)2 8H2O 315,46 g/mol GHS05, GHS07 Perigo H302 Nocivo por ingesto. H314 Provoca queimaduras na pele e leses oculares graves. H332 Nocivo por inalao. P280 Usar luvas de proteco/ vesturio de proteco/ proteco ocular/ proteco facial. P305 + P351 + P338 SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente com gua durante vrios minutos. Se usar lentes de contacto, retire-as, se tal lhe for possvel. Continuar a enxaguar. P310 Contacte imediatamente um CENTRO DE INFORMAO ANTIVENENOS ou um mdico.

Recomendaes de prudncia

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

50

Qumica Biolgica Espetacular 2012


Tabela 15.2 Informaes sobre cido sulfrico.

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo Recomendaes de prudncia

cido sulfrico concentrado H2SO4 98,08 g/mol GHS05 Perigo H314 Provoca queimaduras na pele e leses oculares graves. P280 Usar luvas de proteco/ vesturio de proteco/ proteco ocular/ proteco facial. P305 + P351 + P338 SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente com gua durante vrios minutos. Se usar lentes de contacto, retire-as, se tal lhe for possvel. Continuar a enxaguar. P310 Contacte imediatamente um CENTRO DE INFORMAO ANTIVENENOS ou um mdico.

Tabela 15.3 Informaes sobre cido saliclico.

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo

cido saliclico C7H6O3 138,12 g/mol GHS05, GHS07 Perigo H302 Nocivo por ingesto. H318 Provoca leses oculares graves P280 Usar luvas de proteco/ proteco ocular/ proteco facial. P305 + P351 + P338 SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente com gua durante vrios minutos. Se usar lentes de contacto, retire-as, se tal lhe for possvel. Continuar a enxaguar.

Recomendaes de prudncia

Tabela 15.4 Informaes sobre anidrido actico.

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo

Anidrido actico (CH3CO)2O 102,09 g/mol GHS02, GHS05, GHS07 Perigo H226 Lquido e vapor inflamveis. H302 Nocivo por ingesto. H314 Provoca queimaduras na pele e leses oculares graves. H332 Nocivo por inalao. P280 Usar luvas de proteco/ vesturio de proteco/ proteco ocular/ proteco facial. Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

Recomendaes de prudncia

51

Qumica Biolgica Espetacular 2012


Procedimento experimental
1. Medir, 5,00 g de cido saliclico no estado slido, para um matrz. 2. Adicionar 10 mL de anidrido actico. 3. Agitar vigorosamente at formar uma mistura homognea. 4. Preparar um banho de gua na hotte: colocar um gobel com gua em cima de uma placa de aquecimento. 5. Colocar o matrz no interior do gobel, usando um suporte universal para o fixar. 6. Acoplar montagem um termmetro digital, para medir a temperatura do contedo do matrz. 7. Adicionar 8-10 gotas de cido sulfrico concentrado. 8. Aquecer durante alguns minutos a cerca de 45C, com agitao manual, at que a reaco cesse. 9. Adicionar, cuidadosamente, 10 mL de gua desionizada ao matrz, agitando at que no haja libertao de vapores de cido actico. 10. Retirar o matrz do banho-maria. 11. Adicionar 100 mL de gua desionizada e deixar arrefecer em repouso. Observar a formao de cristais de cido acetilsaliclico. 12. Filtrar por vcuo, em papel de filtro previamente pesado. 13. Lavar os cristais com uma pequena quantidade de gua fria, at que o filtrado no apresente formao de precipitado com soluo de hidrxido de brio. 14. Secar ao mximo. 15. Secar ao ar. 16. Determinar a massa de composto obtida. 17. Determinar o ponto de fuso, usando um aparelho automtico.

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

52

Qumica Biolgica Espetacular 2012 16 Extrao da cafena


a partir de ch preto
Notas introdutrias
Nesta atividade experimental, a fonte da cafena o ch preto. A frmula qumica molecular da cafena C8H10N4O2. A figura 16.1 apresenta a respetiva frmula de estrutura.

Fig. 16.1 Frmula de estrutura da cafena.

Esta atividade experimental deve ser realizada na hotte, sendo o uso de luvas e de culos de proteo obrigatrio. Deve manter os reagentes afastados de fontes de ignio.

Material
Suporte universl Noz Anel adaptado a um funil Funil de decantao Balana Esptula Vareta de vidro Gobel Matrz Kitasato Garra Papel de filtro Proveta graduada 100 mL Placa de aquecimento com agitao magntica Barras magnticas Garrafa de esguicho Caixa de Petri Proveta graduada 25 mL Anel de borracha Funil de bckner

Reagentes
gua desionizada () Carbonato de sdio (s) Cloreto de sdio (s) Sulfato de sdio anidro (s) Saquetas de ch preto 1-propanol NaHO (aq) 10%

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

53

Qumica Biolgica Espetacular 2012


Tabela 16.1 Informaes sobre carbonato de sdio.

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo Recomendaes de prudncia

Carbonato de sdio Na2CO3 105,99 g/mol GHS07 Ateno H319 Provoca irritao ocular grave. P305 + P351 + P338 SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente com gua durante vrios minutos. Se usar lentes de contacto, retire-as, se tal lhe for possvel. Continuar a enxaguar.

Tabela 16.2 Informaes sobre cloreto de sdio.

Nome Frmula qumica Massa molar

Cloreto de sdio NaC 58,44 g/mol

Tabela 16.3 Informaes sobre sulfato de sdio anidro.

Nome Frmula qumica Massa molar

Sulfato de sdio anidro Na2SO4 142,04 g/mol

Tabela 16.4 Informaes sobre hidrxido de sdio.

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo Recomendaes de prudncia

Hidrxido de sdio NaHO 40,00 g/mol GHS05 Perigo H314 Provoca queimaduras na pele e leses oculares graves. P280 Usar luvas de proteco/ vesturio de proteco/ proteco ocular/ proteco facial. P305 + P351 + P338 SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente com gua durante vrios minutos. Se usar lentes de contacto, retire-as, se tal lhe for possvel. Continuar a enxaguar. P310 Contacte imediatamente um CENTRO DE INFORMAO ANTIVENENOS ou um mdico.

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

54

Qumica Biolgica Espetacular 2012


Tabela 16.5 Informaes sobre 1-propanol.

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo

1-propanol CH3CH2CH2OH 60,10 g/mol GHS02, GHS05, GHS07 Perigo H225 Lquido e vapor facilmente inflamveis. H318 Provoca leses oculares graves. H336 Pode provocar sonolncia ou vertigens. P210 Manter afastado do calor/fasca/chama aberta/superfcies quentes. No fumar. P261 Evitar respirar as poeiras/ fumos/ gases/ nvoas/ vapores/ aerossis. P280 Usar luvas de proteco/ proteco ocular/ proteco facial. P305 + P351 + P338 SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente com gua durante vrios minutos. Se usar lentes de contacto, retire-as, se tal lhe for possvel. Continuar a enxaguar.

Recomendaes de prudncia

Procedimento experimental
1. Colocar 2 saquetas de ch preto num gobel de 250 mL. 2. Adicionar 75 mL gua desionizada. 3. Colocar uma barra magntica no interior do gobel. 4. Ligar o modo de agitao magntica da placa. 5. Agitar moderadamente, de modo a evitar salpicos ou transbordo do contedo do gobel. 6. Tapar a parte superior do gobel, usando uma caixa de Petri. 7. Ligar o modo de aquecimento da placa de aquecimento com agitao magntica. 8. Manter o aquecimento. Deixar ferver a gua durante cerca de 10 min. Adicionar gua desionizada para substituir as perdas por evaporao. 9. Deixar arrefecer a mistura at atingir a temperatura ambiente. 10. Adicionar 26 g de cloreto de sdio e 1 g de carbonato de sdio mistura. 11. Agitar a mistura. 12. Filtrar por vcuo a mistura. 13. Recolher o filtrado, que contm o extrato de cafena. 14. Transferir o filtrado para o interior de um funil de decantao. 15. Adicionar 15 mL de 1-propanol.

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

55

Qumica Biolgica Espetacular 2012


16. Agitar vigorosamente o funil de decantao. No esquecer de abrir a torneira do funil de decantao, quando este estiver invertido, para libertar quaisquer gases que se tenham formado entretanto. Ter o cuidado de no agitar demasiado para evitar a formao de uma emulso. 17. Repetir procedimento anterior at deixar de ouvir a libertao de gases. 18. Deixar repousar o contedo do funil de decantao, aps remover a tampa do funil de decantao. 19. Observar o aparecimento de duas fases lquidas distintas. 20. Recolher a fase aquosa, que a mais densa, para um matrz. 21. Recolher a fase orgnica, que a menos densa, para um gobel. 22. Transferir o contedo do matrz (fase aquosa) para um funil de decantao. 23. Adicionar 15 mL de 1-propanol. 24. Agitar vigorosamente o funil de decantao. No esquecer de abrir a torneira do funil de decantao, quando este estiver invertido, para libertar quaisquer gases que se tenham formado entretanto. Ter o cuidado de no agitar demasiado para evitar a formao de uma emulso. 25. Repetir procedimento anterior at deixar de ouvir a libertao de gases. 26. Deixar repousar o contedo do funil de decantao, aps remover a tampa do funil de decantao. 27. Observar o aparecimento de duas fases lquidas distintas. 28. Recolher a fase aquosa, que a mais densa, para um gobel. 29. Recolher a fase orgnica, que a menos densa, para um gobel. 30. Transferir para um funil de decantao a fase orgnica de ambos os gobels. 31. Adicionar 25 mL de soluo aquosa de hidrxido de sdio a 10% ao contedo do funil de decantao. 32. Agitar vigorosamente o funil de decantao. No esquecer de abrir a torneira do funil de decantao, quando este estiver invertido, para libertar quaisquer gases que se tenham formado entretanto. 33. Repetir procedimento anterior at deixar de ouvir a libertao de gases. 34. Remover a fase aquosa. 35. Recolher a fase orgnica para um gobel. 36. Adicionar uma pequena quantidade de sulfato de sdio anidro (para ocorrer a secagem da fase orgnica) e agitar.

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

56

Qumica Biolgica Espetacular 2012 17 Isolamento do licopeno


a partir do tomate ou da pasta de tomate
Material
Almofariz Balana Esptula Frasco com rolha Placa com agitao magntica Espectrofotmetro Proveta 25,0 mL Vidro de relgio Pipeta Pasteur Papel de alumnio Barra de magntica Cubas

Reagentes
Acetona () Etanol () n-hexano () Tomate ou pasta de tomate gua desionizada ()

Tabela 17.1 Informaes sobre acetona.

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo

Acetona CH3COCH3 58,08 g/mol GHS02, GHS07 Perigo H225 Lquido e vapor facilmente inflamveis. H319 Provoca irritao ocular grave. H336 Pode provocar sonolncia ou vertigens. P210 Manter afastado do calor/fasca/chama aberta/superfcies quentes. - No fumar. P261 Evitar respirar as poeiras/ fumos/ gases/ nvoas/ vapores/ aerossis. P305 + P351 + P338 SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente com gua durante vrios minutos. Se usar lentes de contacto, retire-as, se tal lhe for possvel. Continuar a enxaguar.

Recomendaes de prudncia

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

57

Qumica Biolgica Espetacular 2012


Tabela 17.2 Informaes sobre etanol.

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo Recomendaes de prudncia

Etanol ou lcool etlico CH3CH2OH 46,07 g/mol GHS02 Perigo H225 Lquido e vapor facilmente inflamveis. P210 Manter afastado do calor/fasca/chama aberta/superfcies quentes. - No fumar.

Tabela 17.3 Informaes sobre hexano.

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo

n-hexano CH3(CH2)4CH3 86,18 g/mol GHS02, GHS07, GHS08, GHS09 Perigo H225 Lquido e vapor facilmente inflamveis. H304 Pode ser mortal por ingesto e penetrao nas vias respiratrias. H315 Provoca irritao cutnea. H336 Pode provocar sonolncia ou vertigens. H361f Suspeito de afectar a fertilidade. H373 Pode afectar os rgos aps exposio prolongada ou repetida. H411 Txico para os organismos aquticos com efeitos duradouros. P210 Manter afastado do calor/fasca/chama aberta/superfcies quentes. - No fumar. P261 Evitar respirar as poeiras/ fumos/ gases/ nvoas/ vapores/ aerossis. P273 Evitar a libertao para o ambiente. P281 Usar o equipamento de proteco individual exigido. P301 + P310 EM CASO DE INGESTO: contacte imediatamente um CENTRO DE INFORMAO ANTIVENENOS ou um mdico. P331 NO provocar o vmito.

Recomendaes de prudncia

Procedimento experimental
1. Descascar um tomate e retirar as sementes. 2. Colocar o tomate num almofariz e triturar, de modo a obter uma amostra homognea. (Nota: Pode optar por usar pasta de tomate e omitir os pontos 1 e 2.) 3. Retirar cerca de 2,5 g da amostra homognea. 4. Transferir a amostra para um frasco.
Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

58

Qumica Biolgica Espetacular 2012


5. Usar papel de alumnio para tapar o frasco para impedir que a amostra fique exposta luz.

6. Registar o valor da massa do frasco contendo a amostra. 7. Transferir o frasco para a hotte e realizar os restantes procedimentos na hotte. 8. Preparar uma mistura de hexano/acetona/etanol (2:1:1 V/V/V), 9. Medir 25 mL de mistura de hexano/acetona/etanol. 10. Transferir o volume medido para o interior do frasco. 11. Colocar uma barra magntica no interior do frasco. 12. Tapar com a rolha. 13. Colocar o frasco em cima de uma placa com agitao magntica colocada na hotte. 14. Manter o contedo do frasco sob agitao durante 30 minutos. 15. Ao fim desse tempo parar a agitao e adicionar 5 mL de gua desionizada. 16. Deixar separar as fases durante cerca de 5 a 10 minutos. 17. Com uma pipeta de Pasteur, retirar o pigmento, que fica localizado na fase orgnica, para um tubo com rolha preta, envolto em papel de alumnio. 18. Traar o espectro de absoro no espectrofotmetro entre 400 e 600 nm, depois de fazer a linha de base com n-hexano. (Se estiver muito concentrado - absorvncia mxima superior a 1, diluir com nhexano. ) 19. Ler o valor da absorvncia da soluo ao mximo de absoro Nota: Os resduos devem ser colocados no frasco marcado resduos n-hexano.

Tpicos de reflexo
Importncia do licopeno do tomate na sade humana

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

59

Qumica Biolgica Espetacular 2012 18 Extrao de lpidos e identificao do colesterol


a partir de gema de ovo
Notas introdutrias
Nesta atividade experimental, a fonte do colesterol a gema de ovo. Uma gema de ovo contm cerca de 200 mg de colesterol. A frmula qumica molecular do colesterol C27H46O. A figura 18.1 apresenta a respetiva frmula de estrutura.

Fig. 18.1 Frmula de estrutura do colesterol.

Esta atividade experimental deve ser realizada na hotte, sendo o uso de luvas e de culos de proteo obrigatrio. Deve manter os reagentes afastados de fontes de ignio.

Material
Balana Vrtex Tubo de vidro com rolha Vareta de vidro Proveta graduada 5,0 mL Proveta graduada 10,0 mL Proveta graduada 50,00 mL Proveta graduada 100,00 mL Pipeta conta-gotas Esptula Gobel Matrz Placa de aquecimento Placa com agitao magntica Barras magnticas Tubo graduado com rolha Funil Anel adaptado a um funil Noz Suporte universal Papel de filtro Tubo de ensaio Suporte para tubos de ensaio Garrafa de esguicho Garra Frasco de vidro Termmetro digital Papel parafilme Banho de gelo

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

60

Qumica Biolgica Espetacular 2012


Reagentes
Cloreto de clcio (s), CaC2 (s) Clorofrmio (), CHC3 () Metanol (), CH3OH () cido actico glacial (), CH3COOH () Sulfato de sdio anidro (s), Na2SO4 (s) gua desionizada (), H2O () Anidrido actico (), (CH3CO)2O () cido sulfrico concentrado (), H2SO4 () Gema de ovo

Tabela 18.1 Informaes sobre cloreto de clcio

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo Recomendaes de prudncia

Cloreto de clcio CaC2 110,98 g/mol GHS07 Ateno H319 P305 + P351 + P338

Tabela 18.2 Informaes sobre clorofrmio

Nome Frmula qumica Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo Recomendaes de prudncia

Clorofrmio CHC3 GHS02, GHS07, GHS08 Perigo H225-H319-H336-H351 P210-P261-P281-P305 + P351 + P338

Tabela 18.3 Informaes sobre metanol

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo Recomendaes de prudncia

Metanol CH3OH 32,04 g/mol GHS02, GHS06, GHS08 Perigo H225-H301-H311-H331-H370 P210-P260-P280-P301 + P310-P311

Tabela 18.4 Informaes sobre sulfato de sdio anidro

Nome Frmula qumica Massa molar

Sulfato de sdio anidro Na2SO4 142,04 g/mol

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

61

Qumica Biolgica Espetacular 2012


Tabela 18.5 Informaes sobre anidrido actico

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo Recomendaes de prudncia

Anidrido actico (CH3CO)2O 102,09 g/mol GHS02, GHS05, GHS07 Perigo H226-H302-H314-H332 P280-P305 + P351 + P338-P310

Tabela 18.6 Informaes sobre cido sulfrico concentrado

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo Recomendaes de prudncia

cido sulfrico concentrado H2SO4 98,08 g/mol GHS05 Perigo H314 P280-P305 + P351 + P338-P310

Tabela 18.7 Informaes sobre cido actico glacial

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo

cido actico glacial CH3COOH 60,05 g/mol GHS02, GHS05 Perigo H226H314

Recomendaes de prudncia

P280-P305 + P351 + P338-P310

Procedimento experimental A - Preparao do reagente Liebermann-Buchard


Nota: O reagente estvel durante 1 a 2 semanas, mas pode deteriorar-se se guardado por um perodo maior. Preparar 100 mL do reagente Liebermann-Buchard na hotte e num banho de gelo, dado que a reao exotrmica. 1. Colocar um gobel com um banho de gelo em cima de uma placa com agitao magntica. 2. Colocar um matrz no interior do banho de gelo. 3. Colocar uma barra magntica no interior do matrz.
Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

62

Qumica Biolgica Espetacular 2012


4. Adicionar lentamente e com agitao contnua os reagentes, pela seguinte ordem: 60 mL de anidrido actico, 10 mL de cido sulfrico concentrado, 30 mL de cido actico glacial, 0,6 g de sulfato de sdio anidro. 5. Transferir a mistura para um frasco de vidro. 6. Rotular o frasco de cidro contendo o reagente de Liebermann-Buchard.

B - Preparao da mistura clorofrmio:metanol 2:1 (V/V)


1. Medir 100 mL de clorofrmio. 2. Medir 50 mL de metanol. 3. Transferir o clorofrmio e o metanol para um frasco de vidro. 4. Rotular o frasco de vidro contendo a mistura clorofrmio:metanol.

C Preparao de uma soluo aquosa de cloreto de clcio 0,02% (m/V)


Preparar 100 mL de uma soluo aquosa de cloreto de clcio. 1. Medir 0,02 g de cloreto de clcio slido, para o interior de um gobel. 2. Dissolver o cloreto de clcio numa pequena quantidade de gua desionizada. 3. Adicionar gua desionizada at perfazer um volume de 100 mL.

D Preparao de uma soluo clorofrmio:metanol:gua 2:50:50 (V/V/V)


Preparar 100 mL da soluo clorofrmio:metanol:gua na hotte. 1. Medir, com o auxlio de provetas graduadas, 2 mL de clorofrmio, 50 mL de metanol e 50 mL de gua desionizada. 2. Misturar num gobel o clorofrmio, o metanol e a gua desionizada, medidos anteriormente.

E - Extrao de lpidos a partir de gema de ovo


1. Medir, cerca de 1g de gema de ovo, directamente para um tubo de vidro, com rolha. 2. Registar o valor da massa da gema de ovo. 3. Adicionar 10 mL de mistura clorofrmio:metanol 2:1 (V/V). 4. Colocar a rolha no tubo de vidro. 5. Homogeneizar bem o contedo do tubo de vidro no vrtex. 6. Medir o valor da massa de um tubo graduado com rolha. 7. Filtrar o extrato anterior para um tubo graduado com rolha. 8. Registar o volume do filtrado. 9. Adicionar ao filtrado um volume de soluo aquosa de cloreto de clcio 0,02% (m/V) correspondente a 0,2 vezes o volume do filtrado. 10. Colocar a rolha no tubo graduado.
Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

63

Qumica Biolgica Espetacular 2012


11. Homogeneizar o contedo do tubo graduado no vrtex. Observar a distino entre as duas fases. 12. Retirar a fase superior com o auxlio de uma pipeta conta-gotas. Eliminar o contedo da pipeta contagotas. 13. Adicionar ao contedo do tubo graduado uma soluo de clorofrmio:metanol:gua 2:50:50 (V/V/V). O volume da soluo de clorofrmio:metanol:gua 2:50:50 (V/V/V) igual ao volume usado de soluo de cloreto de clcio 0,02% (m/V). 14. Colocar a rolha no tubo graduado. 15. Misturar brevemente no vrtex. 16. Preparar um banho de gelo. 17. Colocar o tubo graduado no banho de gelo, at se observar a separao das duas fases. 18. Retirar, com o auxlio de uma pipeta conta-gotas, a fase aquosa. Eliminar o contedo da pipeta contagotas. 19. Colocar a rolha no tubo graduado. 20. Medir o volume total da fase orgnica, ou seja, o volume do extrato lipdico, que se encontra no tubo graduado. 21. Retirar 1 mL da fase orgnica, ou seja, do extrato lipdico, com o auxlio de uma pipeta conta-gotas, para um tubo de ensaio. 22. Identificar o tubo de ensaio contendo o extrato lipdico. 23. Colocar o tubo graduado, contendo a fase orgnica, na hotte para o dia seguinte, at evaporar o solvente at secura. (Nota: Deixar o tubo graduado destapado.) 24. Medir o valor da massa do tubo graduado contendo o extrato lipdico seco, ou seja, do conjunto tubo graduado + lpidos totais. 25. Determinar a quantidade de lpidos totais por grama de gema de ovo. 26. Identificar e guardar o extrato lipdico.

F Identificao do colesterol total


1. Colocar o tubo de ensaio contendo o extrato lipdico, na hotte. 2. Adicionar, lentamente, 5 mL do reagente de Liebermann-Buchard, homogeneizando simultaneamente o contedo do tubo de ensaio. 3. Tapar o tubo de ensaio com papel parafilme. 4. Colocar o tubo de ensaio em banho-maria a 35C, durante aproximadamente 10 a 15 min. (Nota: O teste pode ser realizado temperatura ambiente, contudo se o tubo de ensaio for colocado em banhomaria a reao ser mais rpida.) 5. Observar a cor do contedo do tubo de ensaio. (Nota: O mtodo Liebermann-Buchard permite identificar o colesterol total, atravs do aparecimento do complexo corado de azul esverdeado.)

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

64

Qumica Biolgica Espetacular 2012


Tpicos de reflexo
Importncia do estudo dos lpidos no diagnstico mdico. A influncia dos hbitos alimentares sobre a sade. O que o colesterol Anlise dos nveis de colesterol no sangue Valores de colesterol no sangue desejveis Gorduras saturadas versus gorduras insaturadas Alimentao e exerccio fsico na preveno e tratamento de hipercolesterolemia

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

65

Qumica Biolgica Espetacular 2012 19 Extrao de pigmentos fotossintticos


a partir de folhas de espinafres
Material
Suporte universal Funil Vareta de vidro Almofariz Caixa de Petri Anel adaptado a um funil Papel de filtro Matrz Areia

Reagentes
lcool etlico a 90% Folhas de espinafres

Tabela 19.1 Informaes sobre etanol.

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo Recomendaes de prudncia

Etanol ou lcool etlico CH3CH2OH 46,07 g/mol GHS02 Perigo H225 Lquido e vapor facilmente inflamveis. P210 Manter afastado do calor/fasca/chama aberta/superfcies quentes. - No fumar.

Tabela 19.2 Informaes sobre acetona.

Nome Frmula qumica Massa molar Pictograma de perigo Palavra-sinal Advertncias de perigo

Acetona CH3COCH3 58,08 g/mol GHS02, GHS07 Perigo H225 Lquido e vapor facilmente inflamveis. H319 Provoca irritao ocular grave. H336 Pode provocar sonolncia ou vertigens. P210 Manter afastado do calor/fasca/chama aberta/superfcies quentes. - No fumar. P261 Evitar respirar as poeiras/ fumos/ gases/ nvoas/ vapores/ aerossis. P305 + P351 + P338 SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente com gua durante vrios minutos. Se usar lentes de contacto, retire-as, se tal lhe for possvel. Continuar a enxaguar. Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

Recomendaes de prudncia

66

Qumica Biolgica Espetacular 2012


Procedimento experimental
1. Cortar em pedaos folhas de espinafes. 2. Colocar as folhas de espinafres num almofariz. 3. Triturar as folhas de espinafres, adicionando areia. 4. Adicionar uma pequena quantidade de lcool etlico. 5. Agitar com o auxlio de uma vareta de vidro. 6. Filtrar por gravidade a mistura. 7. Transferir o filtrado para o interior de uma caixa de Petri. 8. Cortar um pedao de papel de filtro, com o formato de um retngulo. 9. Dobrar o papel de filtro a meio. 10. Mergulhar a extremidade inferior do papel de filtro no filtrado. 11. Aguardar alguns minutos. 12. Observar o que acontece ao papel de filtro.

Tpicos de reflexo
Em que consiste o processo de macerao? Qual a funo do solvente orgnico usado? Como ocorre a separao de pigmentos fotossintticos? Como se designa a tcnica de separao usada na parte final do processo? Identifica os pigmentos fotossintticos pela colorao.

Nota: Substituir o lcool etlico por acetona.

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

67

Qumica Biolgica Espetacular 2012

Bibliografia
Martins, Isabel e outros; Programa de Qumica de 12 Ano do Curso Cientfico-Humanstico de Cincias e Tecnologias; Direco Geral de Inovao e de Desenvolvimento Curricular; Ministrio da Educao; 2004. Dantas, Maria e Ramalho, Marta; Caderno de Actividades Laboratoriais Jogo de partculas Qumica 12 ano; Texto Editores; Lisboa; 2005. Gil, Victor e outros; 12 Q Qumica 12ano; Texto Editores; Lisboa; 2005. Matias, Osrio; Martins, Pedro; Biologia e Geologia, ano 1, Biologia 10/11, Ensino Secundrio; Areal Editores; Maia; 2007. Matias, Osrio; Martins, Pedro; Dias, A. Guerner; Guimares, Paula; Rocha, Paulo; Biologia e Geologia 10/11 Caderno de actividades, ano 1, Ensino Secundrio; Areal Editores; Maia; 2007. Matias, Osrio; Martins, Pedro; Biologia 11 - Biologia e Geologia 11ano, Ensino Secundrio; 1 edio; Areal Editores; Maia; 2008. Matias, Osrio; Martins, Pedro; Biologia 12 parte 1, Ensino Secundrio; 1 edio; Areal Editores; Maia; 2009. Matias, Osrio; Martins, Pedro; Biologia 12 parte 2, Ensino Secundrio; 1 edio; Areal Editores; Maia; 2009. Silva, Amparo Dias; Mesquita, Almira Fernandes; Gramaxo, Fernanda; Santos, Maria Ermelinda; Baldaia, Ludovina; Flix, Jos Mrio; Terra, Universo de Vida 2 parte Biologia, Biologia e Geologia 10 ou 11 (Ano 1); Porto Editora; Porto; 2007. Simes, Teresa Sobrinho; Queirs, Maria Alexandra; Simes, Maria Otilde; Tcnicas Laboratoriais de Qumica bloco II; Porto Editora; Porto; 2003. Pinto, Ana Maria; Fialho, Elisa; Mascarenhas, Maria Alice; Incio, Maria Jos; Tcnicas Laboratoriais de Biologia I; 1 edio; Texto Editora; Lisboa; 1994. Visionarium Centro de Cincia do Europarque; Modelo Biolgico para Testar os Efeitos das Drogas no Ritmo Cardaco - Manual do Kit escolar do Projecto Daphnia. http://visionarium-daphnia1.blogspot.pt/p/outros-recursos.html (consultado a 27 de junho de 2012) http://visionarium-daphnia2.blogspot.pt/p/outros-recursos.html (consultado a 27 de junho de 2012) https://sites.google.com/site/clubedasciencias/Home/fotos (consultado a 27 de junho de 2012) https://docs.google.com/viewer?a=v&pid=sites&srcid=ZGVmYXVsdGRvbWFpbnxjbHViZWRhc2NpZW5 jaWFzfGd4OjM4OWJlMGIwNWYwNGQ3Mg&pli=1 (consultado a 27 de junho de 2012) http://www.infopedia.pt/$extraccao-e-identificacao-da-cafeina-do-cha (consultado a 26 de junho de 2012) http://homepages.ius.edu/dspurloc/c122/casein.htm (consultado a 28 de junho de 2012)
Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

68

Qumica Biolgica Espetacular 2012


http://courses.chem.psu.edu/chem36/Web%20Syn06/Exp112Syn06.pdf (consultado a 28 de junho de 2012) http://www.fcfar.unesp.br/alimentos/bioquimica/praticas_proteinas/ponto_isoeletrico.htm (consultado a 28 de junho de 2012) http://www.apsu.edu/sites/apsu.edu/files/chemistry/SP11_1021_ISOLATION_OF_PROTEINS_FROM_ MILK.pdf (consultado a 28 de junho de 2012) http://www.anaseca.uac.pt/pdf_bioquimica/guia_trabalhos_praticos1.pdf (consultado a 28 de junho de 2012) http://www.barreto.uac.pt/bqm_prat/prot04bExt_Llipidos.pdf (consultado em 18/06/2012). https://docs.google.com/viewer?a=v&q=cache:6KKIJ9GAZogJ:www.ib.usp.br/index.php%3Foption%3D com_docman%26task%3Ddoc_download%26gid%3D47%26Itemid%3D98+&hl=ptPT&pid=bl&srcid=ADGEESifq9Cfq6ZKLAHhWcFhtdB5ciaaZfDo1lV_R8bJo2zMQjZWjA_7WMKjWhiBWV7W1rFTtzvt4o7N-KZJzZQId2cobaq8KSBv2r3ZQr-_GxEiRX1ZNieThiR4yUcL-kfEb6dIZ3&sig=AHIEtbQ1WoIf8XbCFC_fQ01C-4aKx2EZYA (consultado a 28 de junho de 2012) http://www.ib.usp.br/index.php?option=com_docman&task=cat_view&gid=93&Itemid=98 (consultado a 28 de junho de 2012) Barreto, M.C. "Lipid Extraction and Cholesterol Quantification: A Simple Protocol." J.Chem. Educ. 2005, 82, 103-104. http://employees.oneonta.edu/helsertl/CholesterolLab.html (consultado em 18/06/2012). http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1198067/pdf/biochemj00899-0098.pdf 15/1/2009). (consultado em

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

69

Qumica Biolgica Espetacular 2012

Anexos

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

70

Qumica Biolgica Espetacular 2012


Anexo A Blogue
O blogue do projecto j est criado.

Os participantes podem incluir textos, fotografias, desenhos, vdeos, apresentaes e outros documentos. Endereo do blogue http://quimicabiologicaespetacular.blogspot.pt/

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

71

Qumica Biolgica Espetacular 2012


Anexo B Pictogramas de perigo GHS01 GHS02 GHS03

BOMBA A EXPLODIR

CHAMA

CHAMA SOBRE CRCULO

GHS04

GHS05

GHS06

GARRAFA DE GS

CORROSO

CAVEIRA SOBRE TBIAS CRUZADAS

GHS07

GHS08

GHS09

PONTO DE EXCLAMAO

PERIGO PARA A SADE

AMBIENTE

Departamento de Qumica e Bioqumica da Faculdade de Cincias da Universidade do Porto

72