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Disciplina: Tpicos Avanados de Bioqumica e Biologia Celular Mdulo: Biomolculas

Docente: Luzimar Fernandez

Grupo 2 : Guillermo Lopez Lilian Campos Marcela Costa Marcos Oliveira Victor Pestana

Aplicaes da Biologia Molecular Patologia Renal


No Brasil Estados Unidos Europa
Doena Renal Terminal (DRT)

380, 336 e 135 indivduos afetados a cada 1.000.000 HAB.


Estima-se que 5 pases do mundo (EEUU, Alemanha, Itlia, Japo e Brasil), tratem de mais de 50% dos portadores de DRT do mundo.

Hamer, et al. 2006

A DRT consequentemente a uma mirade de doenas renais.

Fatores genticos tem um papel determinante na evoluo para DRT. O advento da Biologia Molecular acrescenta novas abordagens ao diagnstico e a compreenso da patognese das doenas renais, com a participao de suas trs reas: Genmica, Protemica e Metabolmica.
Eikmans, Schmid, et al 2006

A Genmica se subdivide em:

Genmica Estrutural

Genmica Funcional

Genmica Estrutural:
Ocupa-se da determinao das sequencias de nucleotdeos (adenina, citosina, timina, guanina), que compem os genes.

O genoma pode apresentar variaes das sequncias de nucleotdeos de um alelo sob a forma de inseres/delees (I/Ds), mini e microssatlites e polimorfismos de um nico nucleotdeo (SNPs).

Nordfors, L ; et al. 2002

Os SNPs (polimorfismo de um nico nucleotdeo), so as mais comum das variaes do genoma humano, ocorrendo numa frequncia de um SNP a cada 1.000 pares de bases. Um SNP presente em uma sequncia codificadora capaz de alterar a funo biolgica de uma protena, o que combinado a fatores ambientais, confere ao indivduo o potencial de desenvolver ou no uma doena, diferentes habilidades em metabolizar ou absorver uma determinada droga ou apresentar um efeito favorvel ou adverso a um tratamento.
Nordfors, L ; et al. 2002

A genmica estrutural no da informaes imediatas sobre relaes entre os genes e seu papel no funcionamento de uma unidade biolgica.

Genmica Funcional

Vem de encontro a essa necessidade, ao analisar em larga escala a expresso dos RNAs mesageiros (mRNAs) e os efeitos dos polimorfismos.

DNA

Sntese de RNA- Transcrio

RNA

Sntese de protena -traduo Sequncia de aminocido

Alteraes epigenticas: dobramento, ligaes e modificaes covalentes Protena funcional

No campo da genmica funcional, a introduo de reaes em cadeia de polimerase (PCR) por transcriptase reversa e dos microarranjos de DNA permitiu o conhecimento e a descrio dos perfis transcriptmicos de vrias doenas.

Overbergh, L et al. 2003

A protemica complementa o estudo da Genmica, ao identificar e caracterizar as protenas codificadas pelo genoma de um determinado organismo.

N NCBI Education, http://www.ncbi.nim.nih.gov/education

A metabolmica estabelece o status biolgico dos organismos, atravs da descrio das micromolculas exgenas ou endgenas e metablitos (lipdeos, aminocidos, carboidratos, cofatores e outros), fundamentais para o funcionamento da unidade biolgica em questo.

Schmid, L et al. 2006

Fatores genticos em doenas renais


Doenas renais terminais (DRT)

Glomeruloesclerose Segmentar e focal (GESF)

Nefropatia por IgA (IgAN)

GLOMERULOESCLEROSE SEGMENTAR E FOCAL (GESF)

GESF: 5 a 20% dos casos de DRT em adultos e crianas.

GESF: at 64% das glomerulopatias diagnosticadas em afrodescendentes e 15 a 20% em caucasianos e asiticos.

Winn, MP, et al. 2003

Recentes evidncias moleculares apontam que que o desenvolvimento da GESF so a perda ou o dano integridade estrutural e funo dos podcitos. Alvos de dano so: Protenas componentes do diafragma da fenda podocitria, como a nefrina , a podocina e a protena associada ao CD2 Protenas do citoesqueleto podocitrio, como a aactinina-4 Protenas de canais inicos, como a TRCP6.
Winn, MP, et al. 2005

PODCITOS
clulas epiteliais altamente diferenciadas na camada visceral da cpsula de bowman no rim. So formadas por um corpo celular, com extenses da superfcie celular e extenses digitiformes secundrias (pedicelos). Com aquelas, envolvem os capilares do GLOMRULO RENAL, formando uma estrutura de filtrao. Os pedicelos dos podcitos vizinhos interdigitam, deixando aberturas de filtrao (ligadas a estruturas extracelulares, impermeveis a grandes macromolculas) denominadas diafragma de fenda (slit diaphragm), a ltima barreira no rim contra perda de protenas.
http://www.lookfor diagnosis.com

NEFROPATIA POR IgA


Nefropatia de maior prevalncia no mundo.
A mutao em um gene, com herana autossmica dominante, situado no lcus IGAN do cromossomo 6q22-23.

A nefropata IgA (IgAN) define-se por depsitos difusos predominantemente de imunoglobulina A (IgA) no mesangio glomerular

Gharavi, AG; et al. 2000

Polimorfismos identificados nos doadores e receptores tambm podem desempenhar importante papel na evoluo do transplante renal. Respostas imunes dependentes e independentes de aloantgenos so mediadas por citocinas e quimiocinas, que so altamente polimrficas.

Tal polimorfismo est associado a diferenas na produo, atividade, expresso e afinidade aos seus receptores.
Polimorfismo , por definio, uma variao fenotpica que pode ser separada em classes distintas e bem definidas. O controle gentico se d por um ou poucos loci, sendo a caracterstica pouco suscetvel a fatores ambientais.

A importncia do Estudo do mRNA:


Melhora da acurcia diagnstica Avaliao prognstica Avaliao de possvel resposta teraputica Avaliao de possveis efeitos adversos a drogas Estudo etiopatognico

Eikmans,M; et al, 2005

Anlise protemica urinria: Espectrometria de massa (MS) Ionizao por eletrospray (ESI) Dessoro a laser assistida por matriz (MALDI)

Espectrometria de massa:
Separa os ons de uma amostra por suas diferentes velocidades de difuso num gs inerte.

Os espectrmetros de massas constam de quatro partes bsicas: um sistema de manipulao para introduzir a amostra desconhecida no equipamento; uma fonte de on, na qual produzido um feixe de partculas proveniente da amostra; um analisador que separa partculas de acordo com a massa; um detector, no qual os ons separados so recolhidos e caracterizados. Gonzlez-Buitrago, JM; 2007

Ionizao por eletrospray:


Em ESI todo o processo de ionizao ocorre presso e temperatura atmosfrica. Uma soluo levemente acida (ou bsica) contendo a amostra bombeada a uma vazo de alguns microlitros por minuto atravs de um tubo capilar metlico submetido a uma alta diferena de potencial (3-5 kV) em relao ao eltrodo cilndrico que circunda a sada do capilar (ARDREY, 2003). Assim, forma-se um spray com gotculas carregadas que passam a travs de um gs secante, ocorrendo evaporao do solvente as gotculas carregadas tornam-se cada vez menores de modo que a densidade de carga torna-se to alta que as molculas carregadas aprisionadas nas gotculas so ejetadas para a fase gasosa seguindo para o analisador de ons.

ARDREY, 2003; DE SOUSA et al., 2003

Na ionizao do tipo MALDI, a soluo contendo a amostra misturada a uma soluo supersaturada de matriz orgnica, a qual absorve fortemente radiao eletromagntica em um determinado comprimento de onda. A soluo resultante dessa mistura ento aplicada a uma placa metlica de MALDI (volumes da ordem em poucos microlitros). Aps alguns minutos o solvente ter evaporado e ocorrera a cristalizao da amostra juntamente com o excesso de matriz. A placa ento transferida para dentro do espectrmetro e o cristal formado bombardeado por um feixe de laser de alta potencia com comprimento de onda correspondente ao mximo de absoro de matriz. Essa energia adsorvida em grande parte pela matriz, a qual esta em excesso, e transferida de maneira branda para a amostra, de modo que ocorre a sublimao e da matriz, resultando em ons em fase gasosa que seguiro para o analisador de massas. (ZENOBI & KNOCHENMUSS; 1998).

Quadro 1. Resumo dos principais marcadores genmicos e protemicos em doenas renais

SITUAO Nefropatias Sd. Nefrtica congnita tipo finlands Forma autossmica recessiva da sd. nefrtica esteroido-resistente Forma autossmica dominante de GESF IgAN Nefropatia diabtica Polimorfismo Nefrite lpica ativa NGA

MARCADORES DNA E mRNA NPHS1 NPHS2 ACTN4

MARCADORES PROTEMICOS Nefrina Podocina - -actinina-4 Perfil protemico Perfil protemico Biomarcadores com carga/massa de 3340 e 3980

Mutao lcus IGAN em 6q22-23 CNDP1 (maior forma allica

Transplante renal Rejeio Resistncia infeco viral Proteo ao dano tecidual Resposta teraputica Fibrognese Leso tubular / NTA

expresso de TGF- expresso de IL-10 expresso de promotor do HO-1 expresso de PRLR expresso de CD20 e Fas-l = m resposta expresso de colgenos I e II - 2-microglobulina IL-18 NGAL KIM-1

REFERNCIAS
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