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hemoglobina glicada

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Procedimento Operacional Padrão

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HEMOGLOBINA GLICADA

HEMOGLOBINA GLICADA
INDICAÇÃO MÉDICA DO EXAME A determinação da hemoglobina glicada em amostras de sangue é útil no controle do diabetes. PRINCÍPIO A resina de troca iônica, carregada negativamente, exibe uma afinidade para molécula com carga positiva. Em força iônica e pH selecionados, a hemoglobina glicada (Hb-G) tem carga positiva menor que a hemoglobina A e se liga mais fracamente à resina. A aplicação do tampão Hb-Rápida (nº 1) promove a eluição da hemoglobina glicada, ficando as outras hemoglobinas retidas na resina. A medida espectrofotométrica do eluato (Hb-G) e da hemoglobina total (Hg-total) permite o cálculo da percentagem de Hb-G na amostra. AMOSTRA Preparo do paciente Recomenda-se jejum mínimo de 8 horas. Tipos de amostra Usar sangue total colhido com EDTA. Pode-se obter resultado falsamente elevado quando a amostra é colhida em heparina. Armazenamento e estabilidade da amostra O analito é estável no sangue total por 5 dias entre 2 – 8 ºC. Volume mínimo (Definir o volume mínimo a ser encaminhado para análise) Volume ideal (Definir o volume ideal a ser encaminhado para análise) Fazer referência ao manual ou POP de colheita, separação e distribuição de material. PRODUTO UTILIZADO Hemoglobina Glicada, Catálogo 17 Labtest Diagnóstica Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 Lagoa Santa, MG, 33400-000 ANVISA - 10009010016

Tampão Hb-Rápida: Armazenar entre 15 – 25 ºC. Contém tampão fosfato 36 mmol/L pH 6,7 e biocida não tóxico. Hemolisante: Armazenar entre 15 – 25 ºC. Contém íons borato e azida sódica 14,6 mmol/L. Colunas para cromatografia: Armazenar entre 15 – 25 ºC. Contém resina de troca iônica equilibrada com tampão fosfato pH 6,7. Precauções e cuidados especiais 1. Os cuidados habituais de segurança devem ser aplicados na manipulação do reagente. Fazer referência ao manual ou POP de segurança. 2. Os reagentes não abertos, quando armazenados nas condições indicadas são estáveis até a data de expiração impressa no rótulo. Durante o manuseio, os reagentes estão sujeitos à contaminação de natureza química e microbiana que podem provocar redução da estabilidade. O laboratório deve estabelecer a estabilidade em suas condições operacionais. 3. O hemolisante contêm azida sódica, que é tóxica. Deve-se tomar cuidado para evitar a ingestão e, no caso de contato com os olhos, lavá-los imediatamente com grande quantidade de água e procurar auxílio médico. A azida pode formar compostos altamente explosivos com tubulações de chumbo e cobre. Utilizar grandes volumes de água para descartar o reagente. Fazer referência ao manual ou POP de segurança. 4. Não misturar reagentes de lotes diferentes. EQUIPAMENTOS 1. Fotômetro capaz de medir com exatidão a absorbância em 415 nm ou filtro azul (405 a 430). 2. Pipetas para medir amostras e reagentes. 3. Termômetro.

Medir a temperatura do líquido que drenou da coluna para correção do resultado.Inserir o nome do Laboratório Procedimento Operacional Padrão Página 2 de 4 POPBIO xxx/xx HEMOGLOBINA GLICADA CONTROLE DA QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante. Para um tubo limpo e seco. instruções de preparo e frequência da utilização dos mesmos. Preparo da coluna A presença de bolhas de ar no filtro ou na resina interfere na drenagem do tampão. Remover imediatamente a tampa inferior. Pipetar em um tubo 1. Jamais iniciar a cromatografia em temperatura inferior a 16 ºC ou superior a 30 ºC. Homogeneizar bem e utilizar para preparar o hemolisado. Limites de tolerância Descrever o procedimento para definição dos limites de tolerância. Nunca realizar a cromatografia se o hemolisado. o tampão e as colunas tenham a mesma temperatura ambiente.1 mL da amostra. 1. Acertar o volume para a marca de 1. com a ponta da pipeta tocando a parede da coluna. 3. Marcar o nível de 1. colocar a coluna em um tubo de ensaio e esperar que todo o líquido penetre na resina. A cor é estável por 4 horas. número de catálogo). retirando o excesso do sobrenadante.85%). Preparo do hemolisado Em um tubo 12 x 75 adicionar 0.0 mL de NaCl 150 mmol/L (0. introduzir o bastão fazendo movimentos giratórios descendentes a ascendentes para ressuspender a resina. marcado com o número 2 (Hb-total) pipetar 7.0 mL. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle da qualidade são arquivados e gerenciados.5 mL de Tampão Hb-Rápida (nº 1). A eluição da Hb-G se completa quando todo o tampão penetra na resina. Retirar a tampa superior da coluna. a coluna estará pronta para uso e a cromatografia deverá ser iniciada imediatamente. Transferir a coluna para um tubo de ensaio limpo e seco.0 mL da amostra bem homogeneizada. Se a hemólise for incompleta (o líquido no tubo se mostra turvo). Agitar fortemente por 20 segundos e esperar 5 minutos.4 mL de hemolisante (nº 2) e 0. A partir daí. Colorimetria Homogeneizar o conteúdo do tubo número 1 (Hb-G) e usá-lo para a colorimetria sem qualquer tratamento adicional. evitando a formação de bolhas de ar. o sistema adotado para utilização do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providências a serem tomadas diante de valores que ultrapassem tais limites. 2.total) em 415 nm ou filtro azul (405 a 430 nm) acertando o zero com água destilada. Determinar as absorbâncias dos tubos número 1 (Hb-G) e número 2 (Hb. Precauções e cuidados especiais 1. Esperar que o hemolisado penetre na resina. Desprezar a coluna. . lipêmica ou ictérica. Antes de iniciar a cromatografia.05 mL do hemolisado sobre a resina. centrifugar e usar o sobrenadante. Fazer referência ao manual ou POP de segurança. adicionar 0. Adicionar 3. Cromatografia Adicionar 0.02 mL do hemolisado e misturar. Centrifugar. assegurar-se de que o hemolisado. 4. Verificação de novo lote de controles e/ou reagentes Descrever o procedimento de verificação de novos lotes de controles e de reagentes. de modo que não haja ressuspensão da mesma. tampão e coluna tiverem temperaturas diferentes do ambiente no qual se realizará a cromatografia. aumentando o tempo de eluição da hemoglobina glicada. aplicar as normas estabelecidas de segurança.0 mL no tubo. 3. marcado com o número 1 e adicionar lentamente. PROCEDIMENTO Minimização da ação de interferentes Este procedimento deve ser aplicado somente quando a amostra estiver turva. Fazer referência ao manual ou POP de garantia da qualidade. Centrifugar a 2000 rpm por 5 minutos. Para manusear e descartar reagentes e material biológico.0 mL de água destilada. Retirar o plasma sem ressuspender as hemácias. Fazer referência ao manual ou POP para utilização dos materiais de controle.

95 0. A água utilizada no laboratório deve ter a qualidade adequada a cada aplicação.10 1.88 0. Fazer referência ao manual ou POP de água reagente.Inserir o nome do Laboratório Procedimento Operacional Padrão Página 3 de 4 POPBIO xxx/xx HEMOGLOBINA GLICADA A limpeza e secagem adequadas do material são fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obtenção de resultados corretos. Se for realizada em temperatura diferente. Assim.84 0. No enxágüe final utilizar água tipo II. Fazer referência ao manual ou POP de limpeza e verificação da qualidade da limpeza dos materiais.Em amostras lipêmicas ou ictéricas obtêm-se resultados falsamente elevados.98 0. A1 Hemoglobina Glicada (%) = 5 x A2 A1 = Absorbância do tubo número 1 (Hb-G) A2 = Absorbância do tubo número 2 (Hb-Total) Efeito da temperatura A cromatografia deve ser realizada a 22 °C.90 0. Para o enxágüe da vidraria a água pode ser do tipo III.08 1. alterando os resultados de modo imprevisível. Quando a coluna deionizadora está com sua capacidade saturada ocorre a produção de água alcalina com liberação de vários íons. CÁLCULOS Ver linearidade. silicatos e substâncias com grande poder de oxidação ou redução que deterioram os reagentes em poucos dias ou mesmo horas.1 mg/L (água tipo II). deve ter resistividade ≥ 1 megaohm ou condutividade ≤ 1 microsiemens e concentração de silicatos < 0. 2.03 1.16 1.13 1. multiplicando-se o resultado encontrado pelo fator de correção correspondente à temperatura de trabalho. 2. para preparar reagentes e usar nas medições. Valor superior a 30% não foi relatado na literatura.86 0. Assim. corrigir o resultado para a temperatura de 22 °C.05 1. Temperatura de trabalho (ºC) 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 RESULTADOS Unidade de medida % Valores de referência Hemoglobina Glicada: 5.3 a 8. enquanto a presença das hemoglobinas S e C produzem resultados falsamente diminuídos.82 x 100 ou A2 A1 x 20 .1 megaohms ou condutividade ≤ 10 microsiemens. Interferências 1. A anemia Fator de correção 1.00 0.93 0. com resistividade ≥ 0.0% LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO Linearidade O sistema é linear até 30%.A presença de hemoglobina F na amostra leva à obtenção de resultados falsamente elevados. é fundamental estabelecer um programa de controle da qualidade da água.

Diabetes 1976. Barry PL. aceitáveis e comprometidos. Ranney HÁ. 25: 230-232. 3. em um método com LSR igual a 8. obesidade. Bunn HF et al. um diabético com níveis ótimos de controle metabólico terá resultados de Hb-G menores que 8. 7. The Endocrinologist 1994. 67: 103-109. Um resultado de Hb-G próximo ao valor superior referente indica que o paciente diabético tem estado sob controle metabólico adequado por várias semanas e exclui uma perda temporária do controle durante o período avaliado.8%. o conceito de que uma determinação de Hb-G reflete os níveis glicêmicos da sexta ou oitava semana precedente ao teste está definitivamente comprovado. as tentativas de se obter estes valores esbarram em uma complicação bastante grave: a hipoglicemia. 5. Quando pacientes diabéticos em estado de descontrole são submetidos ao tratamento e passam a apresentar valores da glicemia em níveis ótimos. 284: 353-357. Lai HT. Em todas as condições onde a meia-vida das hemácias está modificada. 9. É bastante razoável admitir que os valores da Hb-G em diabéticos bem controlados devem estar o mais próximo possível dos valores de referência.0%. Existem muitas dúvidas sobre os níveis de controle metabólico adequado relacionados aos valores de HbG. observa-se redução progressiva da Hb-G que atinge o ponto de equilíbrio depois de 6 – 8 semanas. Trivelli LA. podem ocorrer alterações nos valores da hemoglobina glicada. Pequenas elevações dos valores da glicose em reduzidos intervalos de tempo não são capazes de produzir modificações significativas na Hb-G. a Hb-G se eleva com a deterioração da tolerância à glicose e com todos os fatores de risco como idade. Instruções de Uso. 27: 493-501. Portanto. Assim. Rahbar S. Gabbay KH et al. 44: 859-864. Hunt MR. Biochem Biophys Res Commum 1975. Portanto. 12. J Am Chem Soc 1961. Clin Chem Acta 1968. enquanto um valor maior que 11. 4: 33-43. Koenig RJ et al. 6. 27: 94-99. Estudos recentes do DCCT (Diabetes Control and Clinical Trial) demonstram que a morbidade ou mortalidade do diabetes estão diminuídos quando ocorre um controle adequado da glicemia e que a dosagem de Hb-G é muito importante para informar o estado de controle da glicemia. Hemoglobina Glicada. Paulsen EP. 22: 269-271. 11. REFERÊNCIAS 1.2% significa estado metabólico comprometido. Koenig RJ et al. e os valores da Hb-G são expressos em termos percentuais do limite superior de referência do método (LSR). história familiar e história de recém nascido de grande peso. Clin Chem 1981. Entretanto. . Metabolism 1973. Assim. SIGNIFICADO CLÍNICO Um número importante de trabalhos confirma a utilidade da determinação da Hb-G na avaliação do estado de controle da glicemia em pacientes diabéticos e está definitivamente provado que a elevação da Hb-G é influenciado somente por fatores ligados ao diabetes. 2. 22: 296-298. 8. um resultado elevado de Hb-G pode ocorrer na presença de um controle metabólico adequado quando a Hb-G ainda não atingiu o novo ponto de equilíbrio. 4. Labtest Diagnóstica. Schellekens APM et al. Clin Chem 1981. New Engl J Med 1976. Os níveis metabólicos alvo foram definidos como ótimos. New Engl J Med 1971. Os estudos da cinética da glicosilação da hemoglobina têm demonstrado que quando há perda do controle glicêmico os valores da Hb-G começam a se elevar logo na primeira semana de descontrole e a velocidade do aumento é muito maior que a velocidade de queda quando um paciente diabético é colocado em níveis desejáveis de glicemia. Daneman D. J Cli Endocrinol Metab 1977. Westgard JO.Inserir o nome do Laboratório Procedimento Operacional Padrão Página 4 de 4 POPBIO xxx/xx HEMOGLOBINA GLICADA ferropriva produz resultados falsamente elevados. O grau de glicosilação é diretamente proporcional ao valor da glicemia e sua duração varia também de paciente a paciente. Schnek AG and Schroeder WA. 10. 83: 1472-1478. A tabela abaixo mostra um sumário de alguns dos valores alvo recomendados. 295: 417-419.

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