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UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL FACULDADE DE VETERINRIA

PATOLOGIA CLNICA VETERINRIA: TEXTO


INTRODUTRIO
TEXTO DE APOIO AO CURSO DE ESPECIALIZAO EM ANLISES CLINICAS VETERINRIAS

Flix H. Diaz Gonzlez Srgio Ceroni da Silva (Editores)

Porto Alegre Rio Grande do Sul Brasil

2008

P312

Patologia clnica veterinria: texto introdutrio / Flix H. Diaz Gonzlez, Srgio Ceroni da Silva (editores). Porto Alegre: Universidade Federal do Rio Grande do Sul, 2008. 342 p. Vrios autores Bibliografia
1. Patologia clnica veterinria 2. Clnica veterinria I. Diaz Gonzlez, Flix H. II. Silva, Srgio Ceroni da CDD 636.089607

Catalogao na publicao: Biblioteca da Faculdade de Medicina Veterinria da UFRGS

Prefcio
O presente texto apresentado comunidade mdico-veterinria como contribuio para aqueles profissionais que atuam na rea de Patologia Clnica. Ele nasceu como um texto de apoio para os alunos da Especializao em Anlises Clnicas Veterinrias, curso de psgraduao lato sensu organizado pela Faculdade de Veterinria da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, desde 2006. Nele contribuem professores desta instituio, bem como docentes e pesquisadores de outras Instituies de Ensino Superior ou de pesquisa do Brasil. A eles nosso sincero agradecimento. As reas que envolvem o presente texto introdutrio incluem hematologia, bioqumica clnica, urinlise, mielograma, toxicologia, anlises micolgicas e helmintologia. Sendo um material de apoio na especializao includo um captulo de metodologia de pesquisa que orienta os alunos na elaborao de um projeto de pesquisa e de um documento de monografia ou dissertao. Agradecemos tambm aos alunos que tm participado nas diferentes edies desse curso de especializao, aos bolsistas, estagirios, ps-graduandos e residentes do Laboratrio de Anlises Clnicas Veterinrias por seu apoio nas aulas prticas e ao pessoal da Grfica da UFRGS por sua dedicao na editorao e publicao desta obra.

Porto Alegre, Rio Grande do Sul, Brasil, maio de 2008.

Os editores

Autores colaboradores
Alexander Welker Biondo - MV, MSc, PhD Departamento de Medicina Veterinria, Universidade Federal do Paran, Curitiba PR Ana Vera Finardi Rodrigues - Mestre em Biblioteconomia Faculdade de Veterinria, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre Andrea Pires dos Santos - MV, MSc Programa de Ps-Graduao em Cincias Veterinrias da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre Angela Patricia Medeiros Veiga - MV, MSc, DrSc Pesquisadora visitante da Universidade de Quebec (Canad) Csar Augusto M. Avancini - MV, MSc, DrSc Faculdade de Veterinria, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre Eliane Dallegrave - MV, MSc, DrSc Centro de Informao Toxicolgica do Rio Grande do Sul CIT/RS Flix H. Diaz Gonzlez - MV, MSc, DrSc Faculdade de Veterinria, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre Jos Maria Wiest - MV, Doutor em Higiene Veterinria Instituto de Cincia e Tecnologia de Alimentos, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre Laerte Ferreiro - MV, MSc, DrSc Faculdade de Veterinria, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre Luciana de Almeida Lacerda - MV, MSc Laboratrio de Anlises Clnicas Veterinrias, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre Mary Jane Tweedie de Mattos - MV, MSc, DrSc Faculdade de Veterinria, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre Ndia Almosny - MV, MSc, DrSc Faculdade de Medicina Veterinria, Universidade Federal Fluminense, Niteri - RJ Nayro Xavier de Alencar - MV, MSc, DrSc Faculdade de Medicina Veterinria, Universidade Federal Fluminense, Niteri - RJ Rita Pato Hoffmann - MV, MSc, DrSc Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre - RS Snia Terezinha dos Anjos Lopes - MV, MSc, DrSc Departamento de Clnica de Pequenos Animais, Universidade Federal de Santa Maria Viviane Cristina Sebben Biloga, MSc Centro de Informao Toxicolgica do Rio Grande do Sul CIT/RS

ndice
1. Hematologia clnica ......................................................................................................... 1 2. Avaliao da hemostasia e distrbios da coagulao .................................................... 58 3. Transfuso sangnea em veterinria ............................................................................ 73 4. Mielograma ................................................................................................................... 95 5. Urinlise ...................................................................................................................... 107 6. Bioqumica clnica ....................................................................................................... 140 7. Equilbrio cido-bsico em medicina veterinria ........................................................ 197 8. Toxicologia clnica: aspectos terico-prticos ............................................................ 206 9. Anlises clnicas micolgicas ...................................................................................... 290 10. Helmintologia: diagnstico e interpretao de resultados parasitolgicos ................. 318 11. Metodologia de pesquisa ............................................................................................. 325

1. HEMATOLOGIA CLNICA
Snia Terezinha dos Anjos Lopes Alexander Welker Biondo Andrea Pires dos Santos

Introduo O sangue composto de uma parte lquida e outra celular. A parte lquida, denominada plasma quando com anticoagulante, contm o fibrinognio e o soro quando sem anticoagulante, contm os mais variados solutos orgnicos, como minerais, enzimas, hormnios, etc. A parte celular composta pelos eritrcitos, leuccitos e trombcitos (plaquetas, nos mamferos, que no so clulas). A principal funo do sangue o transporte, quer de substncias essenciais para a vida das clulas do corpo, tais como oxignio, dixido de carbono, nutrientes e hormnios, quer de produtos oriundos do metabolismo, indesejveis ao organismo, os quais so levados aos rgos de excreo. O exame de sangue mais solicitado na rotina laboratorial o hemograma, devido sua praticidade, economia e utilidade na prtica clnica. Est dividido em duas partes: o eritrograma que compreende a contagem total de eritrcitos, dosagem de hemoglobina e hematcrito e o leucograma. O hemograma solicitado por vrias razes: como um procedimento de screening para avaliar a sade do animal, como auxlio na avaliao do paciente ou do diagnstico, para verificar a habilidade corporal s infeces e para avaliar o progresso de certas doenas. No entanto, a histria e o exame fsico so essenciais para a interpretao dos dados hematolgicos e outros testes laboratoriais que so objetos de investigao. Resultados anormais em um hemograma so inespecficos, podendo estar associados com vrias doenas ou condies que provoquem uma resposta similar. Infreqentemente, no entanto, podem ser diagnsticos, como nas leucemias ou hemoparasitismos. O volume sangneo normal nas espcies domsticas em torno de 6-10% do peso corpreo, com grande variedade intra e interespcies. Entre os pequenos animais, o co possui aproximadamente 10% e o gato 7% de volume sangneo em relao ao peso corpreo, portanto a anemia no gato mais severa.

Hematopoiese A hematopoiese ocorre extravascularmente na medula ssea dos mamferos, entretanto nas aves a granulopoiese ocorre em locais extravasculares, mas a eritropoiese e os trombcitos so produzidos intravascularmente. Na vida embrionria a hematopoiese inicia-se no saco vitelino, estgio em que h o incio da formao vascular. Com o desenvolvimento fetal o fgado, o bao e a medula ssea so os maiores rgos hematopoiticos (Figura 1). Durante a segunda metade do desenvolvimento do feto a medula ssea e os rgos linfides perifricos so os maiores locais de produo de clulas sangneas.

120 100 80

60 40 20 0 0 10 20 30 40 50 60 70

dias ps concepo
saco vitelnico fgado bao medula ssea

Figura 1. Contribuio da produo sangnea no gato

Aps o nascimento a hematopoiese passa a ocorrer somente na medula ssea. Inicialmente todos os ossos participam desta atividade, mas com a idade esta funo vai limitando-se medula dos ossos chatos e s extremidades dos ossos longos. No animal adulto, os principais ossos envolvidos no processo so o esterno, o crnio, o lio, as costelas e as extremidades do fmur e do mero. A medula ativa, tambm chamada de medula vermelha, com o tempo vai desaparecendo e deixa de ser hematopoitica, sendo substituda por tecido gorduroso, o qual forma a medula inativa ou amarela. Em casos de necessidade ocorre regenerao e a medula amarela passa a ser vermelha. Nestes casos, a hematopoiese pode voltar a ser realizada pelo fgado, bao e linfonodos. A fase de crescimento rpido do jovem esta associada expanso do volume sanguneo, com pesada demanda na medula por eritrcitos. Como a demanda por eritrcitos decresce com a aproximao da maturidade, a hematopoiese regride para apenas parte dos ossos do corpo. Nos

demais locais a medula vermelha hematopoieticamente ativa substituida pela medula amarela. A atividade hematopoitica continua atravs da vida nos ossos chatos, como esterno, costelas, vrtebras e crnio, e nas epfises de ossos longos como mero e fmur. A medula amarela, quando h demanda eritrocitria, pode ser ativada novamente; no entanto na fase senil a medula ssea amarela fibrosada e de difcil e vagarosa expanso.

rgos envolvidos na hematopoiese O bao armazena e elimina hemcias (hemocaterese) e plaquetas, alm de estar envolvido na hematopoiese inicial, produz linfcitos e plasmcitos, degrada hemoglobina, estoca o ferro, remove corpsculos de Howell-Jolly, corpsculos de Heinz e parasitas dos eritrcitos. O fgado, responsvel pelo estoque de vitamina B12, folato e ferro, produz muitos dos fatores de coagulao, albumina e algumas globulinas, converte a bilirrubina livre conjugada para excret-la pela bile, participa da circulao entero-heptica do urobilinognio, produz um precursor (-globulina) da eritropoietina ou alguma eritropoietina e retm seu potencial embrionrio para hematopoiese. O estmago produz HCl para liberao do ferro do complexo de molculas orgnicas e o fator intrnseco para facilitar a absoro da vitamina B12. A mucosa intestinal est envolvida na absoro da vitamina B12 e folato e controla a taxa de absoro de ferro entre a relao das necessidades corporais. Os rins produzem eritropoietina tambm trombopoietina e degrada excessivamente a

hemoglobina filtrada do ferro e bilirrubina para excreo na urina. O timo consiste em um rgo linfide central responsvel pela diferenciao das clulas precursoras derivadas da medula ssea entre linfcitos T imunologicamente competentes envolvidos na imunidade celular e produo de linfocinas. Os linfonodos e folculos produzem linfcitos e plasmcitos esto engajados ativamente na sntese de anticorpos. O sistema monoctico-fagocitrio (sistema reticuloendotelial) consiste no maior sistema fagoctico do organismo encarregado da defesa celular na infeco microbiana, destri vrias clulas sangneas, degrada hemoglobina em ferro, globina e bilirrubina livre, estoca o ferro e secreta macromolculas de importncia biolgica, por exemplo, fatores estimulantes de colnia e complemento.

Eritropoiese A eritropoiese formada na medula ssea a partir de uma clula pluripotencial de origem mesenquimal chamada clula tronco ou clula me que estimulada a proliferar e diferenciar-se

em burst de unidade formadora eritride (BUF-E) pela IL-3 e fator estimulante de colnia granuloctica-monoctica na presena da eritropoietina (EPO). Esta diferenciao ocorre sob influncia do microambiente medular local e por citocinas produzidas por macrfagos e linfcitos T ativados. A proliferao e diferenciao da BUF-E para unidade formadora de colnia eritride (UFC-E) resulta da presena destes mesmos fatores e pode ser potencializado por fatores de crescimento adicional. A EPO o fator de crescimento primrio envolvido na proliferao e diferenciao de UFC-E para rubriblasto, a primeira clula morfologicamente reconhecvel das clulas eritrides. A seguir seguem as divises/maturaes em que sero formados: pr-rubrcito, rubrcito, metarrubrcito, reticulcito e eritrcito. A eritropoiese normal envolve um mnimo de quatro mitoses: uma na fase de rubriblasto, outra no estgio de pr-rubrcito e duas no estgio de rubrcito basoflico. O rubrcito basoflico matura-se em rubrcito policromtico, que se transformar em metarrubrcito. Ocasionalmente o rubrcito policromtico pode se dividir. A denucleao do metarrubrcito leva formao de reticulcito, o qual finalmente matura-se, dando origem ao eritrcito. O processo de eritrognese que resulta na formao de eritrcitos maduros conhecido como eritropoiese, levando em torno de sete a oito dias para se completar. O ncleo expulso fagocitado por macrfagos locais. At a fase de metarrubrcito, as clulas estaro na medula ssea, j o reticulcito pode ser encontrado no sangue perifrico em at 2%. Nas espcies eqina, bovina, suna e caprina os reticulcitos no so encontrados no sangue em condies de normalidade. A fase de proliferao, compreendida entre a clula pluripotencial at o metarrubrcito leva de dois a trs dias, enquanto o restante consiste na fase de maturao, levando em torno de cinco dias. A nomenclatura mais aconselhvel para as clulas eritrides morfologicamente identificvel : rubriblasto > pr-rubrcito > rubrcito basoflico > rubrcito policromtico > metarrubrcito > reticulcito > eritrcito (Figura 2). Os eritrcitos so clulas encarregadas de transportar oxignio dos pulmes aos tecidos e dixido de carbono no sentido inverso. Reticulcitos Os reticulcitos apresentam um grau varivel de dobras membranosas e invaginaes de superfcie. Eles contm ribossomos, polirribossomos e mitocndrias, que os capacitam a sintetizar mais de 20% do contedo final de hemoglobina. Estas estruturas contribuem para a policromasia dos reticulcitos. Aps colorao com corantes supravitais, como o novo azul de metileno ou azul cresil brilhante, utilizado na contagem de reticulcitos, um arroxeado de ribossomos, mitocndrias e outras organelas citoplasmticas aparecem nos reticulcitos como precipitados em forma de cordes (reticulcitos agregados) ou esparsos (pontilhados).

Os reticulcitos podem permanecer na medula ssea por dois a trs dias antes de entrar no sangue por diapedese atravs de clulas endoteliais que contornam os sinusides medulares. A sua liberao para o sangue controlada por um nmero de fatores que agem em conjunto, incluindo a concentrao de eritropoietina e deformabilidade capilar e carga de superfcie. Variaes interespcies podem ocorrer em considerao ao nmero de reticulcitos liberado no sangue sob condies fisiolgicas e patolgicas. Por exemplo, o eqino no libera reticulcitos para o sangue perifrico, mesmo em anemia severa. Ces e gatos respondem vigorosamente com reticulocitose no sangue durante anemia regenerativa, porm os ruminantes geralmente tm uma leve resposta (Tabela 1). Os reticulcitos maturam-se em eritrcitos 24-48 horas na circulao ou no bao, onde podem ser seqestrados temporariamente. O processo de maturao envolve a perda de algumas superfcies de membranas, receptores para transferrina e fibronectina, ribossomos e outras organelas, obteno da concentrao normal de hemoglobina, organizao final do esqueleto submembranoso, reduo do tamanho celular e mudana de forma para o aspecto bicncavo.

Multiplicao (2 a 3 dias)

MEDULA SSEA
Maturao (5 dias)

SANGUE
24 a 48 horas

Fase de Clula pluripotencial Metarrubrcito hemoglobinizao

Metarrubrcitos

Reticulcito Rubriblasto Rubrcito basoflico Pr-rubrcito Rubrcito basoflico Figura 2. Desenvolvimento da eritropoiese na medula ssea. Rubrcito policromtico Eritrcito Rubrcito policromtico Metarrubrcito s

A contagem de reticulcitos o melhor indicativo semiquantitativo da atividade efetiva da eritropoiese medular, mas sua contagem deve ser interpretada em relao s diferentes espcies. A contagem de reticulcitos ento calculada pelo percentual de reticulcitos contados em esfregao sangneo obtido com um corante supravital e multiplicado seu resultado pela contagem global de eritrcitos. A percentagem de reticulcitos pode ser corrigida para o grau de anemia pela seguinte frmula: VG paciente Reticulcitos corrigidos (%) = % reticulcitos x VG mdio normal* *37% para o gato e 45% para o co Contagem de reticulcitos absoluta/ l = % de reticulcitos x contagem de eritrcitos do paciente. Por exemplo: Um co tem um VG de 28%, contagem de eritrcitos de 4,4 x 10 6 / l e contagem de reticulcitos de 15%, aplicando a frmula teramos: % de reticulcitos corrigida = 15% x 28 = 9,3 45 Uma contagem corrigida de reticulcitos acima de 1% em ces e gatos indica eritropoiese ativa (anemia regenerativa). Usualmente h necessidade de um perodo de 3 a 4 dias para que uma significante reticulocitose, seja encontrada no sangue perifrico aps uma hemorragia aguda e a resposta mxima pode levar de 1 a 2 semanas ou mais. Em uma anemia hemoltica severa, entretanto, uma rpida liberao de reticulcitos pode levar somente 1 ou 2 dias e ser seguida de uma intensa eritropoiese. Aps hemorragia a resposta da medula ssea pode ser avaliada a partir do 3 dias aps a perda de sangue, pois este o tempo mnimo necessrio para a liberao de clulas jovens aps a hipxia. Em quadros agudos a avaliao clnica do grau de anemia e estimativa de perdas muito mais til que os parmetros laboratoriais isolados; deve-se, inicialmente estabilizar o paciente com transfuso e fluidoterapia.

Tabela 1. Grau de resposta da medula na produo de reticulcitos (%) Grau de resposta Normal Leve Moderada Intensa % de reticulcitos (canino) 0-1,5 1-4 5-20 21-50 % de reticulcitos (felino) 0-0,4 0,5-2,0 3,0-4,0 >50 % de reticulcitos (ruminantes e eqinos) ausentes 1 sinal regenerativo

Reticulcitos e eritrcitos jovens ocasionalmente podem manifestar uma morfologia adicional. A fragmentao nuclear ou extruso incompleta dos ncleos dos metarrubrcitos resultam na reteno de ncleo pequeno remanescente chamado corpsculo de Howell-Jolly. O corpsculo de Howell- Jolly removido do reticulcito quando este passa no bao e muitas vezes encontrado em indivduos esplenectomizados ou quando a funo do bao est comprometida.

Controle da eritropoiese Eritropoietina O estmulo fundamental para a eritropoiese a tenso tecidual de oxignio (PO2). A hipxia tecidual desencadeia a produo de eritropoietina, um fator humoral especificamente responsvel pela produo de eritrcitos. produzida pelos rins (clulas corticais endoteliais, glomerulares e intersticiais) e em menor proporo pelo fgado (clulas de Kupffer, hepatcitos e clulas endoteliais). O rim considerado a nica fonte de eritropoietina no co e o fgado o stio predominante no feto. A eritropoietina gerada pela ativao do eritropoietinognio, uma alfa-globulina, pelo fator eritropoitico renal ou eritrogenina, ou pela ativao da proeritropoietina produzida no rim por um fator plasmtico (Figura 3). A eritropoietina estimula a eritropoiese em vrias etapas, pela induo da diferenciao de progenitores eritrides (UFC-E) at rubriblastos, estimulando a mitose de clulas eritrides e reduzindo seu tempo de maturao e aumentando a liberao de reticulcitos e eritrcitos jovens ao sangue perifrico.

Figura 3. Produo da eritropoietina.

Vrios rgos endcrinos influenciam a eritropoiese, atravs de seus efeitos na sntese de eritropoietina. A pituitria media estes efeitos atravs da produo de TSH, ACTH e hormnio do crescimento; as adrenais atravs da produo de corticosterides; as glndulas tireides atravs da produo de tiroxina; e as gnadas atravs da produo de andrgenos e estrgenos. A nica influncia negativa a de estrgenos. Em conjunto com a eritropoietina a IL-3 produzida por linfcitos T; o FEC-GM por linfcitos T, clulas endoteliais e fibroblastos; e o FEC-G por macrfagos, granulcitos, clulas endoteliais e fibroblastos estimulam a multiplicao de uma clula progenitora eritride jovem, a unidade formadora de exploso eritride (UFE-E) e sua diferenciao na clula progenitora da UFC-E. A UFE-E relativamente insensvel a eritropoietina sozinha. Doses farmacolgicas

de andrgenos aumentam a taxa de glbulos vermelhos, estimulando a produo de eritropoietina ou potencializando sua ao, por isso, machos apresentam maior nmero de eritrcitos que as fmeas. Os estrgenos, por sua vez, apresentam efeito inibitrio sobre a eritropoiese. Hormnios tireoidianos, hipofisrios e adrenocorticais alteram a demanda de oxignio nos tecidos, alterando a necessidade de eritropoiese. Para que ocorra a adequada multiplicao eritrocitria, h necessidade tambm de substrato para possibilitar a diviso celular, principalmente material nuclico. Os substratos que constituem maior importncia so a vitamina B12, o cido flico, o cobalto e o cido nicotnico. Na fase de maturao eritrocitria, o RNA mensageiro encarrega-se da hemoglobinizao citoplasmtica. Nesta fase so importantes o ferro na forma ferrosa, o cobre e a piridoxina. Nutrientes essenciais para eritropoiese Para uma adequada eritropoiese h o requerimento de suprimento continuado de nutrientes como vitaminas e minerais. A deficincia destes fatores por qualquer causa levar a anemia. Uma causa comum de anemia a deficincia de ferro. Anemias nutricionais no homem e nos animais so aquelas causadas por deficincias de protenas, vitamina B12, folato, niacina, vitamina E, selnio, cobre e cobalto. Destruio eritrocitria A durao mdia da vida do eritrcito varia com a espcie animal. Abaixo esto representados o nmero, o tamanho e a vida mdia das hemcias, de acordo com a espcie animal (Tabela 2).

Tabela 2. Nmero, tamanho e meia-vida das hemcias nas diferentes espcies animais*. Nmero Dimetro Meia-vida Espcie (milhes/l) (m) (dias) Canino 6-8 7 120 Felino 5-10 5,8 70 Eqino 9-12 5,7 150 Bovino 5-10 5,5 160 Ovino 9-15 4,5 100 Caprino 8-18 4,0 100 Suno 5-8 6,0 65 * Duncan & Prasse (1982)

No estado de sade normal, o eritrcito deixa a circulao por duas vias, quais sejam: fagocitose por macrfagos, que a principal e a lise intravascular, com liberao de hemoglobina. A deformabilidade importante na sobrevida da hemcia e depende da manuteno da sua forma, fluidez normal interna da hemoglobina e propriedades visco-elsticas intrnsecas da membrana. Qualquer mudana nestas caractersticas pode ativar a destruio fagocitria por macrfagos, o que ocorre primariamente no bao e fgado, podendo tambm ocorrer na medula ssea. Os macrfagos iniciam a fagocitose aps reconhecerem anticorpos IgG aderidos a antgenos de membrana em eritrcitos danificados e/ou envelhecidos. A perda de eritrcitos continuamente balanceada por uma liberao de reticulcitos ou clulas jovens da medula ssea para o sangue perifrico. Neste caso, os reticulcitos so importantes em casos de anemia, para que se classifiquem as anemias em regenerativa ou arregenerativa. Em casos de babesiose, no quarto ou quinto dia estas clulas comeam a aparecer no sangue perifrico. Morfologia dos eritrcitos Tamanho Normal: clula grande em caninos, sendo que os caprinos apresentam a menor hemcia das espcies domsticas. Anisocitose: a diferena de tamanho entre as hemcias. Quanto mais grave a anemia, maior a ocorrn Macrocitose: predominncia de hemcias grandes, geralmente jovens, recm-produzidas. Presente em reticulocitose, metarrubrcitos, hipertireoidismo, deficincia de fatores de multiplicao, determinadas raas, animais jovens. Microcitose: predominncia de hemcias pequenas. Ocorre em anemias crnicas, principalmente ferropriva. Quanto maior a quantidade, mais grave. fisiolgica em animais idosos e algumas raas.

Forma Normal: bicncava Esfercitos: hemcias com formas esfricas, com intensa colorao pela perda de contedo de membrana sem perda de hemoglobina devido a eritrofagocitose parcial dos anticorpos e/ ou complemento dos eritrcitos pelos macrfagos do sistema fagocitrio mononuclear. Presente em anemia hemoltica auto-imune primria ou induzida por drogas ou transfuso incompatvel. Poiquilcitos: so alteraes na forma das hemcias. No bao, devido a microcirculao esplnica, a hemcia muda de forma o que ocorre pela existncia de glicoprotenas na membrana do eritrcito. Podem ser removidos prematuramente da circulao, levando a uma anemia hemoltica. Existem vrios tipos de poiquilcitos: Equincitos: so hemcias espiculadas, com vrias projees regulares. Ocorrem em amostras velhas, uremia, excesso de EDTA, coagulao intravascular disseminada (CID). Acantcitos: projees irregulares e variadas. Ocorrem em ces com hiperbilirrubinemia, associados a hemangiossarcoma ou hemangioma esplnico e doena heptica difusa, shunts porto-cava e dietas altas em colesterol. Esquiscitos: fragmentos irregulares das hemcias. Ocorrem em falha renal, mielofibrose, glomerulonefrite, deficincia crnica de ferro, fluxo sangneo turbulento. Leptcitos: aumento do dimetro e reduo na espessura. Quando hipocrmicos ocorre por produo reduzida de hemoglobina (anemia ferropriva); quando h policromasia, consistem em reticulcitos (indica regenerao); quando h ortocromia, indicam anemia arregenerativa. O mais comum a aparncia em alvo. Dacricitos: hemcias em forma de gota. Aparecem em mielofibrose ou desordens mieloproliferativas. Crenao: hemcias em forma de engrenagem. Comum em bovinos, artefato de tcnica ou desidratao em outras espcies. Colorao Normal: vermelho-claro ao microscpio. Policromasia: algumas hemcias apresentam-se mais coradas que outras (RNA residual), representando os reticulcitos. O aumento est associado a atividade eritropoitica aumentada e resposta anemia regenerativa. A ocorrncia de algumas clulas policromticas comum no co e no gato. Hipocromia: hemcias com intensidade de colorao reduzida e rea central plida aumentada, causada por insuficiente hemoglobina na clula, sendo a etiologia mais comum deficincia de ferro.

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Outras alteraes das hemcias Corpsculos de Howell-Jolly: incluses esfricas de restos celulares. Consiste em uma resposta da medula ssea ao estado anmico, funo esplnica reduzida ou uso de glicocorticides em ces. Metarrubrcitos: eritrcitos imaturos nucleados. Indicam anemia regenerativa, doenas mieloproliferativas ou hemangiossarcomas. Corpsculos de Heinz: estruturas redondas na membrana interna do eritrcito, devido desnaturao oxidativa da hemoglobina. Normal em felinos at 50% e incomum em ces. Nesta espcie, ocorre em animais esplenectomizados e em uso de glicocorticides. Reticulcitos: hemcias jovens, indicando reposta medular anemia. Ponteado basoflico: hemcias que apresentam pequenos pontos basoflicos no citoplasma (RNA residual). Ocorre em intensa eritropoiese, intoxicao por chumbo quando acompanhada de metarrubrcitos sem anemia e nas anemias em bovinos e ovinos. Rouleaux: hemcias empilhadas. Ocorrncia normal em eqinos sadios, desidratao ou inflamao nas demais espcies. Em eqinos severamente anmicos ou caquticos, pode estar ausente. Em ruminantes, raro, tanto em animais sadios quanto em doentes Aglutinao: aglomerao espontnea dos eritrcitos. Ocorrem em doenas auto-imunes ou transfuses incompatveis, devido presena de anticorpos contra hemcias. Parasitas: Podem ocorrer dentro dos eritrcitos ou na superfcie da clula. Os mais comumente encontrados so: Haemobartonella felis, H. canis, Anaplasma marginalis, Babesia equi, B. caballi, B. canis, Eperythrozoon suis e Cytauxzoon felis (Figura 4).

Hemoglobina Trata-se de uma protena conjugada formada de 96% de protenas (globinas) e por um grupo prosttico de colorao vermelha chamado heme (4%), o qual formado por ferro e grupamentos porfirnicos.

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Policromasia

Hipocromia

Esfercito

Crenao

Reticulcito

Rouleaux

Corpsculo de Heinz

Corp. Howell-Jolly

Metarrubrcitos

Babesia canis

Anaplasma marginale

Haemobartonella canis

Corpsculo de Lentz

Microfilria

Figura 4. Alteraes nas hemcias, hematozorios e outras incluses.

A produo hemoglobnica ocorre no citoplasma das clulas nucleadas precursoras de eritrcitos. O ferro obtido pelas clulas eritrides no processo normal de eritropoiese provm dos macrfagos adjacentes que, por sua vez, recebem o ferro por endocitose da ferritina, uma protena transportadora, por meio de um processo chamado rofeocitose. As molculas de ferritina consistem em milhares de tomos de ferro envolvidos por uma protena (apoferritina). A ferritina pode ser visualizada como partculas densas, localizadas na membrana celular ou no citoplasma de clulas eritrides e macrfagos. A degradao da ferritina por enzimas lisossomais intracelulares nos macrfagos converte-a em hemossiderina. A ferritina hidrossolvel enquanto que a hemossiderina, no, porm ambas servem como estoques de ferro que so mobilizados para a sntese da heme. Em anemias ocasionadas por doenas crnicas, os estoques de ferro esto aumentados, pois h um seqestro nos macrfagos do SMF. Na formao deficiente de hemoglobina, intervm fundamentalmente trs fatores: a) deficincia de ferro por ingesto deficiente ou absoro anormal deste elemento;

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b) interferncia na atividade normal das clulas macrofgicas (SRE) que produzem normalmente a hemoglobina. Isto ocorre nos envenenamentos por metais, toxemias, neoplasias e nefrites, entre outras causas; c) anormalidades renais que interferem na formao da eritropoietina. A hemoglobina liberada na forma livre quando ocorre hemlise, onde a unio entre a hemoglobina e os estromas eritrocitrio quebram-se pela ao do agente hemoltico. A hemoglobina livre no plasma rapidamente decomposta por oxidao, liga-se a haptoglobina e rapidamente excretada pelos rins, observando-se hemoglobinria, ou ainda destruda pelo sistema fagocitrio mononuclear (SFM). A hemoglobina confere a cor avermelhada do plasma e esta condio chamada de hemoglobinemia. O excesso livre oxidado em meta-hemoglobina, que se dissocia, liberando hematina. A hematina liga-se a hemopexina e albumina sucessivamente e estes complexos so removidos pelos hepatcitos (Figura 6). Nos macrfagos, o ferro da frao heme e os aminocidos da frao globina so reciclados para uso. A protoporfirina degradada em biliverdina pela heme microssomal oxigenase; a biliverdina ento convertida a bilirrubina pela bilirrubina redutase. As aves excretam somente biliverdina, pois no possuem bilirrubina redutase. A bilirrubina liberada no plasma ligada albumina para o transporte at as clulas hepticas, onde conjugada em cido glicurnico pela enzima UDP-glucuronil transferase. A bilirrubina conjugada normalmente secretada atravs dos canalculos biliares e excretada pela bile na luz intestinal. No trato intestinal a bilirrubina degrada a urobilinognio para a sua excreo nas fezes, com reabsoro parcial para a circulao geral e re-excreo biliar no ciclo entero-heptico da bile. Uma pequena quantidade de bilirrubina conjugada e urobilinognio normalmente escapa re-excreo heptica e so eliminados na urina (Figura 5) e quantidades aumentadas so muitas vezes excretadas naqueles animais com doena heptica. As duas formas de bilirrubina no plasma so chamadas de: bilirrubina livre, ligada albumina, ou bilirrubina indireta e a bilirrubina conjugada ou direta. A bilirrubina no conjugada no filtrada pelo rim, somente a conjugada. O acmulo de bilirrubina no sangue leva a ictercia. Na anemia hemoltica a maioria da bilirrubina no sangue est na forma no conjugada, sendo que, na obstruo extra-heptica do ducto biliar esta amplamente conjugada e, ambas as formas em doena hepatocelular. A concentrao de bilirrubina no plasma do cavalo alta, comparada com outras espcies, e maior parte est na forma no conjugada. A concentrao de bilirrubina, no cavalo, aumenta durante anorexia e condies febris por causa da estrutura heptica.

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Figura 5. Esquema do catabolismo normal da hemoglobina.

HEMOGLOBINA Complexo Hemoglobina Haptoglobina SER Fgado 70% Medula 20% Bao 8% Complexo Hematina-Hemopexina FGADO Ferro Bilirrubina Metahemoglobina

Sistema Fagoctico Mononuclear SRE Clulas Tubulares Renais Globina Ferro hemossiderinria Bilirrubina

Hematina

Meta-Hemalbumina

Excretada na bile

Figura 6. Esquema do catabolismo da hemoglobina livre no plasma.

Tambm alta a concentrao de bilirrubina, nesta espcie, ao nascimento, assim permanecendo nos potros. No entanto, a causa precisa da hiperbilirrubinemia neonatal em animais desconhecida, observao semelhante em neonato humano indica que vrios

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mecanismos esto envolvidos. Estes incluem a perda do mecanismo excretrio placentrio da bilirrubina, um nvel baixo da atividade de UDP-glucoroniltransferase no fgado do neonato e uma maior concentrao de -glucuronidase no intestino, o qual degrada a bilirrubina conjugada bilirrubina livre que reabsorvida.

ANEMIAS A anemia definida como a presena de eritrcitos, concentrao de hemoglobina e/ou hematcrito abaixo dos valores normais de referncia. Constitui-se raramente em uma doena primria; geralmente o resultado de um processo (doena) generalizado. Portanto, necessrio que se saiba a causa da anemia para que o tratamento racional seja empregado, pois ele no direcionado, por si s, para a anemia, exceto como uma medida de emergncia.

Sinais clnicos Os sinais clnicos da anemia resultam da reduzida capacidade de o sangue carrear oxignio e de certos ajustes fisiolgicos para aumentar a eficincia da reduzida massa de eritrcitos circulantes e reduzido trabalho do corao. Assim, o desenvolvimento de vrios sinais clnicos depende do grau e da causa da anemia. Os mais comuns so dispnia, intolerncia ao exerccio, palidez das mucosas, aumento da freqncia cardaca, algumas vezes acompanhada de murmrios (sopro sistlico), aumento da freqncia respiratria e depresso. Na anemia hemoltica aguda incluem-se ainda ictercia, hemoglobinemia, hemoglobinria e febre. Na perda crnica de sangue, o organismo consegue manter a homeostase circulatria e em alguns casos, mesmo com menos de 50% da hemoglobina normal, o animal pode no apresentar sinais clnicos.

Classificao das anemias A anemia pode ser classificada como relativa ou absoluta, em termos de massa total de eritrcitos. A anemia relativa pode se desenvolver pela expanso do volume plasmtico, como em fmeas gestantes e neonatos ou aps fluidoterapia. A anemia absoluta clinicamente importante e merece ampla investigao. Trata-se da forma mais comum de anemia, e classificada de acordo com a morfologia dos eritrcitos, mecanismos patognicos e resposta eritride da medula ssea. Embora nenhum destes fatores seja completamente satisfatrio quando considerado isoladamente, eles so complementares, e juntos proporcionam meios lgicos de se analisar a anemia. O objetivo de se classificar as anemias em vrios tipos determinar possveis mecanismos patofisiolgicos e causas provveis. Anemia por uma causa particular pode envolver mais de um mecanismo patognico (por exemplo, componente

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hemoltico como supresso da eritropoiese). Uma prtica comum avaliar inicialmente um hemograma para se classificar a anemia morfologicamente com base no VCM (volume corpuscular mdio) e no CHCM (concentrao de hemoglobina corpuscular mdia). Evidncia de reposta medular anemia ento obtida atravs da determinao do grau de reticulocitose ou policromasia no sangue. Classificao etiolgica ou mecanismo patognico A anemia pode ocorrer por perda de sangue (hemorragias), destruio acelerada dos eritrcitos ou diminuio na produo eritrocitria que a hipoplasia ou aplasia da medula ssea, incluindo a utilizao deficiente de nutrientes essenciais para a produo de eritrcitos. A hemorragia pode ser aguda ou crnica. A hemorragia aguda pode ser causada por traumas, lceras gastro-intestinais, cirurgias, defeitos na hemostasia (intoxicao por Warfarina, samambaia e outros), enquanto que as causas de hemorragia crnica podem ser: parasitismo, lceras gastro-intestinais, hematria, neoplasias, etc. Os achados laboratoriais nas anemias por perda de sangue incluem: resposta regenerativa, a qual ocorre aps dois a trs dias; reduo na concentrao de protena plasmtica total, se a hemorragia for externa, pois deste modo no h reutilizao de certos componentes (ferro e protena plasmtica), os quais podem ser reabsorvidos na hemorragia interna. Poucas horas aps a perda de sangue os valores do eritrograma permanecem normais, embora ocorra o movimento intravascular de fluido para o espao extravascular, assim a anemia no evidente nos primeiros momentos da perda aguda de sangue. A expanso do volume plasmtico para um nvel normal indicada devido diminuio da concentrao de protenas plasmticas, seguida pela diminuio dos parmetros do eritrograma. Esta reduo da protena evidente em uma hora aps a perda aguda. Se continuar a hemodiluio, h uma significante queda nos valores do eritrograma e protenas plasmticas em quatro horas. A amostra de sangue colhida um ou dois dias aps hemorragia revela anemia normoctica normocrmica acompanhada por hipoproteinemia. A resposta dos reticulcitos ocorre aps trs dias. A concentrao de protena tende a aumentar em dois a trs dias e geralmente retorna ao normal em cinco a sete dias, antes dos parmetros dos eritrcitos terem sido restaurados. Persistindo a protena reduzida, sugere uma continuidade da perda de sangue. A anemia por destruio acelerada dos eritrcitos causada pela hemlise, que pode ser intra ou extravascular (fagocitose). A hemlise intravascular pode ser causada por bactrias como Clostridium perfringens tipo A ou C, Clostridium hemolyticum, Leptospira sp; produtos qumicos como a fenotiazina, cebola, azul de metileno, cobre; imunomediada, causada por transfuso incompatvel ou isoeritrlise neonatal. A hemlise extravascular causada por parasitas de eritrcitos, como por exemplo, Haemobartonella sp, Anaplasma sp, Eperythrozoon

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sp; imunomediada, como AHAI (anemia hemoltica auto-imune), lupus eritematoso, anemia infecciosa eqina; defeitos eritrocticos intrnsecos, como deficincia da enzima piruvato quinase. Os achados laboratoriais presuntivos de anemia hemoltica so: resposta regenerativa, se o tempo for suficiente para apresentar esta resposta da medula ssea; concentrao normal de protena; leucocitose neutroflica com desvio esquerda, devido ao estmulo da medula ssea; hiperbilirrubinemia, hemoglobinria e hemoglobinemia (na hemlise intravascular); colorao vermelha do plasma; hiperbilirrubinemia (cor amarela do plasma) associada com uma diminuio do VG sugere uma fagocitose aumentada dos eritrcitos. Observa-se a lmina, buscando-se evidncias de parasitas eritrocitrios, eritrcitos fragmentados, esfercitos e corpsculos de Heinz. Classificao patofisiolgica das anemias Perda sangunea ou anemias hemorrgicas - Aguda Procedimento cirrgico ou traumas; Leses hemostticas, desordens da coagulao, deficincia de vitamina K (dicumarol, warfarin), CID. - Crnica Leses gastrointestinais (neoplasias, lceras, parasitismo); Neoplasias com sangramento cavitrio (hemangiossarcoma no co); Trombocitopenias; Parasitas (carrapatos, pulgas, parasitas gastrointestinais). Destruio acelerada dos eritrcitos 1. Parasitas sanguneos, agentes virais, bacterianos e riqutsias - podem ter um componente imuno-mediado - Anasplasma, Babesia, Haemobartonella ,Ehrlichia, Clostridium spp, Cytauxzoon felis, Leptospira, mastite estafiloccica, Anemia Infecciosa Eqina. 2. Drogas e qumicos - muitos so oxidantes fenotiazina; acetominofen, em gatos e ces; azul de metileno, em gatos e ces; vitamina K, em ces; cobre, chumbo, zinco 3. Plantas txicas (muitas so oxidantes) e acidentes ofdicos 4. Doenas metablicas - falha heptica, no cavalo, hiperesplenismo, toro esplnica, no co. 5. Defeitos intraeritrocitrios - deficincia da piruvato quinase em ces e gatos, deficincia da fosfofruto quinase, em ces, deficincia da glicose-6-fosfatase dehidrogenase, no cavalo. 6. Destruio imunomediada do eritrcito - AHAI, primariamente em ces, isoeritrlise neonatal, primariamente em cavalos e gatos, lupus eritematoso, primariamente em ces, reao transfusional, penicilina e cefalosporina. 7. Outras causas - intoxicao por gua em bovinos, administrao de fludo hipotnico em grandes animais. Diminuio da produo dos eritrcitos Eritropoiese reduzida Doena renal crnica (falta de eritropoietina)

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Deficincia de protenas, minerais (Fe, Cu, Co, Se), vitaminas (A, E, B12, cido flico, niacina, piridoxina, tiamina, cido ascrbico). Anemia por doena inflamatria Inflamao e neoplasia Deficincias endcrinas Hipotireoidismo, hipoadrenocorticismo, hipoandrogenismo. Dano citotxico da medula Drogas anticncer citotxica, toxicidade por estrgeno, cloranfenicol, em gatos, usualmente no anmicos, fenilbutazona, trimetroprim-sulfadiazina, radiao em ces. Agentes infecciosos Ehrlichia spp, em ces, cavalos e gatos, FeLV, tricostrongiloides, parasitas no sugadores de sangue nos ruminantes Mielopatias Leucemias mielgenas, leucemias linfides, mieloma mltiplo, linfoma metasttico e mastocitoma Imunomediada Aplasia seletiva eritride em ces. Eritropoiese ineficaz Desordem da sntese do heme Deficincia do ferro, cobre e piridoxina. Desordem da sntese do cido nuclico Deficincia de folato e vitamina B12 Classificao morfolgica das anemias As anemias podem ser classificadas com base nos ndices eritrocitrios, levando-se em considerao o tamanho e a morfologia das hemcias. Os termos usados para o tamanho so: normoctica (normal), macroctica (maior) ou microctica (pequena) e para as propriedades tintoriais da hemoglobina normocrmica (normal) e hipocrmica (diminuda). Os ndices eritrocitrios so: volume corpuscular mdio (VCM) e a concentrao de hemoglobina corpuscular mdia (CHCM). Esta classificao pode ser confirmada pelo exame microscpico da populao eritrocitria. Esta classificao no especfica para a causa da anemia, mas til quanto ao mecanismo patofisiolgico o que ajuda na seleo do protocolo de tratamento. A anemia macroctica normocrmica em humanos caracterstica de deficincia de vitamina B12 e cido flico e em bovinos, na deficincia de cobalto ou pastagem rica em molibdnio. A anemia resulta de uma assincronia da eritropoiese causada por alteraes na maturao no estgio de pr-rubrcito a rubrcito basoflico, produzindo eritrcitos megaloblsticos na medula ssea. Em ces poodle os eritrcitos macrocticos normocrmicos no so acompanhados por anemia. A anemia macroctica hipocrmica tipicamente observada durante remisso em perda aguda de sangue ou hemlise aguda. O grau de macrocitose e hipocromia depende da severidade da anemia, associada intensidade da resposta eritropoitica medular, o que leva a reticulocitose sangnea. A reticulocitose em resposta anemia aumenta o VCM e reduz o

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CHCM. Entretanto, muitos dias devem passar desde a manifestao da anemia antes da alterao da morfologia eritroctica se mostrar aparente. A anemia normoctica normocrmica ocorre pela depresso seletiva da eritropoiese em doenas crnicas como infeces, doena renal crnica, malignidades e certas desordens endcrinas. Nestes casos, a resposta de reticulcitos est ausente ou insignificante. Os esforos devem ser direcionados mais para o diagnstico da doena primria do que para o tratamento da anemia, uma vez que o uso de hematnicos est contra-indicado, pois o tecido eritropoitico no pode fazer uso destas substncias. A anemia microctica hipocrmica resulta de deficincia de ferro ou incapacidade de utilizao do ferro para a sntese da hemoglobina. Alteraes na morfologia dos eritrcitos dependem da durao e severidade da anemia. Na anemia microctica a diviso celular normal, mas a sntese da hemoglobina demorada com anormalidades na sntese do heme e da globina, ocorrendo uma ou mais divises extras, durante o desenvolvimento das clulas eritrides, resultando na formao de micrcitos. Outras causas de anemia microctica so: doenas inflamatrias, devido aos mediadores inflamatrios que, direta ou indiretamente, inibem a eritropoiese, reduzem o ferro no soro e encurtam a expanso de vida dos eritrcitos; deficincia de piridoxina; deficincia de cobre, o que resulta em uma deficincia funcional de ferro devido mobilizao inadequada dos estoques de ferro, causada pela diminuio na concentrao de ceruloplasmina circulante, a maior protena que contm ferro no plasma; toxicidade por drogas (cloranfenicol) ou qumicos (chumbo), pois estes agentes bloqueiam a sntese do heme, formando eritrcitos microcticos. Nas Tabelas 3 e 4 esto representadas as classificaes morfolgicas dos eritrcitos e nas Tabelas 5 e 6 a frmula e exemplos.

Tabela 3. Classificao morfolgica das anemias. Tamanho (VCM) Normoctica Macroctica Microctica Cor (CHCM) Normocrmica Hipocrmica (Hipercrmica)

Tabela 4. Valores normais de ndices hematimtricos para as espcies domsticas. Caninos Felinos Bovinos Eqinos VCM (fl) Es 60 - 77 39 - 55 40 - 60 34 - 58 CHCM (g%) 32 - 36 30 - 36 30 - 36 31 - 37

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Tabela 5. Frmulas para calcular os valores de VCM e CHCM. VCM (fL) = VG (%) x 10 hemcias (milhes/mm3) CHCM (%) = hemoglobina (g/dl) x 100 VG (%)

Tabela 6. Classificao das anemias considerando a morfologia. VCM CHCM Hipocrmica Macroctica Normocrmica Caractersticas Sempre regenerativas Perda aguda de sangue/anemia hemoltica aguda Anemias no regenerativas (diminuio do CHCM ainda no est presente), deficincia de cido flico, FeLV (sem nenhuma reticulocitose), eritroleucemia Deficincia de ferro por perda: - Perda crnica de sangue: tumores, lceras. - Parasitas: Ancylostoma, Haemonchus Deficincia de ferro por fatores que atuam no seu uso - piridoxina, riboflavina, cobre Doena crnica Hemorragia e hemlises aguda sem tempo para a resposta, deficincia de ferro (antes de predominar micrcitos), inflamao e neoplasias crnicas, transtornos endcrinos, aplasia eritride seletiva, hipoplasia e aplasia da medula ssea, intoxicao por chumbo e deficincia de vitamina B12

Microctica

Hipocrmica

Microctica

Normocrmica

Normoctica

Normocrmica

Classificao baseada na resposta medular A eritropoiese regulada pela eritropoietina, que produzida primariamente pelos rins em resposta a hipxia tecidual. A sntese de eritropoietina inversamente proporcional massa de eritrcitos e concentrao de hemoglobina. A eritropoiese estimulada pelo recrutamento de clulas progenitoras, mitose acelerada e maturao de clulas eritrides e rpida entrada de reticulcitos ou clulas jovens para a circulao. A liberao de grandesreticulcitos (stress) no sangue pode estar acompanhada pela liberao de um pequeno nmero de clulas vermelhas nucleadas. Baseado na resposta eritropoitica medular evidente no sangue perifrico, as anemias podem ser classificadas como regenerativas ou arregenerativas. Esta til na diferenciao

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de perda sanginea e anemias hemolticas (geralmente regenerativas) de anemias por depresso (arregenerativas) (Tabela 7). Na anemia regenerativa o eritrograma apresenta elementos que revelam regenerao ou resposta medular, que so: reticulocitose, anisocitose e policromasia, podendo encontrar-se muitas vezes presena de metarrubrcitos, principalmente no co e no gato. So necessrios dois a trs dias para uma resposta regenerativa tornar-se evidente no sangue. A anemia arregenerativa, por sua vez, causada por leses na medula ssea ou ausncia de elementos necessrios para a produo de eritrcitos. Este tipo de anemia apresenta curso clnico crnico e incio lento, acompanhada de neutropenia e trombocitopenia. Pode ser causada por eritropoiese reduzida (medula ssea hipoproliferativa), como na ausncia de eritropoietina (insuficincia renal crnica), na doena endcrina (hipoadrenocorticismo, hiperestrogenismo, hipoandrogenismo), na inflamao crnica, leso txica da medula (radiao, qumicos, intoxicao por samambaia, infeco por vrus e ricketsias como a Ehrlichia canis). So anemias normocticas normocrmicas. Na anemia arregenerativa no existem reticulcitos e nem policromasia. Principais sinais de boa resposta medular: A. Policromasia B. Reticulocitose C. Presena de corpsculos de Howell-Jolly D. Metarrubrcitos
Tabela 7. Exemplos de anemias quanto resposta medular. Regenerativa - Perda sangunea Traumas ou cirurgias Intoxicao por dicumarol CID - Hemlise Hemoparasitas:tristeza parasitria Anemia auto-imune Reao transfusional Arregenerativa Doena renal crnica Neoplasias crnicas e/ou metastticas Leucemias Erlichiose:destroem cel. pluripotencial Panleucopenia felina Hiperestrogenismo Hipoadrenocorticismo Hipoandrogenismo Linfossarcoma

Policitemia o aumento do nmero de eritrcitos circulantes acima dos valores normais. Est classificada em policitemia absoluta (primria ou secundria) e relativa (Figura 7). Quando o hematcrito alcana 60%, suspeita-se de policitemia absoluta ou relativa. Quando alcana 70%, suspeita-se de policitemia primria.

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Policitemia absoluta Ocorre uma elevao do nmero de eritrcitos circulantes, causado pelo aumento da massa total de eritrcitos, mas a concentrao de protena plasmtica est normal. A cianose e a congesto caractersticas das membranas mucosas so causadas pelo fluxo lento de sangue desoxigenado que exorbitantemente rico em clulas vermelhas. O excesso de massa de eritrcitos aumenta a viscosidade sangnea e a resistncia vascular pulmonar e diminui o dbito cardaco. Estas anormalidades levam a um fluxo sangneo reduzido, oxigenao tecidual reduzida, distrbios neurolgicos e aumento do risco de trombose. A viscosidade sangnea e o grau de transporte de oxignio alteram-se desproporcionalmente com aumentos do hematcrito acima de 50%. A policitemia absoluta est classificada em primria e secundria. A policitemia primria, verdadeira ou Vera consiste em uma desordem mieloproliferativa, caracterizada por uma proliferao anormal das clulas eritrides, dos granulcitos e dos megacaricitos, levando a um aumento absoluto da massa de eritrcitos, contagem de leuccitos e de plaquetas. A policitemia secundria ocorre pelo aumento da taxa de eritropoietina, no acompanhada de aumento nas contagens de leuccitos e plaquetas nem de reduo significante no volume plasmtico. Os nveis de eritropoietina aumentam como uma resposta fisiolgica compensatria pelos rins hipxia tecidual, ou como resultado de produo autnoma independente de suprimento de oxignio tecidual. vista em animais levados a grandes altitudes, doena cardaca e pulmonar crnica, tetralogia de Fallot (provoca mistura dos sangues arterial e venoso, diminuindo a oxigenao dos tecidos). Pode ocorrer tambm devido elaborao inadequada de eritropoietina, encontrada em alguns casos de hidronefrose, cistos renais, tumores secretantes de eritropoietina (nefroma embrionrio) e certas doenas endcrinas como o hiperadrenocorticismo. Policitemia relativa comumente encontrada nos animais como resultado da reduo do volume plasmtico causado pela desidratao. O consumo hdrico, por animais enfermos, geralmente inadequado para manter o contedo de gua corporal normal. Doenas acompanhadas por excessiva perda de gua (diarria, vmito, poliria) podem rapidamente produzir desidratao. A hemoconcentrao aumenta o hematcrito e a protena plasmtica devido diminuio do volume de plasma. A policitemia relativa ocorre em animais facilmente excitveis, como certas raas de ces e cavalos, tendo como resultado o aumento da massa de eritrcitos na circulao devido

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contrao esplnica. A contrao esplnica tambm pode ocorrer em condies de severa dor, como por exemplo, na sndrome clica.

Testes laboratoriais para estabelecer o diagnstico do tipo de policitemia 1. Determinao da PO2 arterial 2. Mensurao da eritropoietina no soro.
Na vigncia de policitemia secundria, a PO2 estar reduzida e a eritropoietina aumentada; quando se trata de uma policitemia primria, a PO2 estar normal, enquanto que a eritropoietina poder encontrar-se diminuda ou normal; em ocorrncia de policitemia relativa, todos os parmetros encontram-se dentro da normalidade.

Massa de Clulas Vermelhas

Volume de Plasma

VG (%)

NORMAL

NORMAL

ANEMIA Relativa Absoluta POLICITEMIA Relativa

DIMINUDO DIMINUDO

AUMENTADO

Absoluta AUMENTADO Figura 7. Mudanas relativas ocasionadas na massa do eritrcito e volume de plasma nas anemias e policitemias (JAIN, 1993).

Tabela 8. Interpretao clnica associada ao volume globular (VG) e as protenas plasmticas totais (PT). VG PT Interpretao

Hiper-hidratao, perda crnica de hemcias

Doenas crnicas: anemia e doenas linfoproliferativas Perda trato gastro-intestinal, proteinria, problema heptico

Anemia mascarada, hipergamaglobulinemia

N N= normal; = aumento; = diminulo Hipoproteinemia N Contrao esplnica, policitemia absoluta

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Desidratao

AULA PRTICA - Hemograma

Introduo
O hemograma o exame realizado com o sangue perifrico colhido com anticoagulante, com o objetivo de obter-se informaes a cerca do que est se passando no organismo do animal no momento da colheita. Ele composto de duas partes: o Eritrograma e o Leucograma. Na solicitao do exame necessitamos observar os seguintes aspectos: Identificao: rtulo no frasco de colheita, ficha contendo nome do proprietrio, data, espcie animal, raa, sexo, idade, hora da colheita, diagnstico provisrio, tratamento, histria clnica resumida, nome, assinatura e CRMV do requisitante e do examinador.

Eritrograma
O eritrograma compreende: O nmero total de hemcias/ l, concentrao de hemoglobina (g/dl), volume globular (%), VCM (fl), CHCM (%), protenas plasmticas (g/dl), reticulcitos (%), metarrubrcitos/100 leuccitos. Observaes no esfregao sangneo: anisocitose, policromasia, hemoparasitas, etc.

Valores normais
H que se entender que os valores de tabela ou de referncia so frutos da mdia de exames realizados numa populao clinicamente sadia e, portanto obedecem a uma curva normal de distribuio. Deste modo pode existir um pequeno percentual de animais da populao sadia com resultados laboratoriais prximos aos extremos (border line), ou fora deles; e o inverso tambm, ou seja, animais doentes com valores dentro da faixa de referncia. Por isso estes exames devem ser interpretados clinicamente (Figura 8).

c r an r a d d t i u uv oml e i rb i o s 9 8 7 6 5 % 4 3 2 1 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 0 1 2 3 4 5 5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 vl r s aoe

Figura 8. Curva normal de distribuio.

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Hematcrito ou Volume Globular (%) O hematcrito a percentagem de eritrcitos no sangue (Tabela 9). Os mtodos de centrifugao do um volume de clulas sedimentadas, que corresponde a uma mensurao muito exata. um dos exames mais teis no estudo da srie vermelha e com ele podemos obter inmeras informaes como: a colorao do plasma, a capa leucocitria e microfilrias. O plasma obtido por este mtodo pode ser empregado em outros exames, como concentrao de protenas plasmticas totais e concentrao de fibrinognio plasmtico, utilizando-se a precipitao pelo calor e refratometria.
Tabela 9. Hematcrito e a relao dos constituintes sangineos. cor normal incolor : co /gato/ homem amarela : herbvoros (caroteno) amarela : ictrico no co/ gato/ homem branca : - fisiolgico: lipemia ps-prandial - patolgico: diabetes, hipotireoidismo, outros vermelho : - artefato de tcnica: hemlise - anemia hemoltica: Lupus, Babesia, intoxicao

Plasma cor anormal

Leuccitos

quando avermelhado significa leptcitos (so + leves) noo da contagem leucocitria fibrinognio aps banho-maria a 57 C leitura do volume globular eritrocitrio noo da contagem global de eritrcitos

Hemcias

Cor e transparncia do plasma


O plasma normal lmpido e incolor (caninos e felinos) ou ligeiramente amarelado nos eqinos e bovinos, devido ao caroteno e xantofila presentes na alimentao dos herbvoros. Plasma ictrico amarelo e lmpido; plasma hemoglobinmico lmpido, variando de rosa a vermelho; plasma lipmico esbranquiado e turvo. Ao exame microscpico do plasma, podemos observar as microfilrias, logo acima da camada branca (capa flogstica).

Modificaes eritrocitrias Tamanho


Anisocitose: diferena patolgica de tamanho das hemcias. Quanto mais grave a anemia, maior a ocorrncia de anisocitose. Macrocitose: predominncia de hemcias grandes. Geralmente hemcias jovens, recm produzidas. Ocorrem nas reticulocitose, hipertireoidismo, deficincia de fatores de

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multiplicao (vit. B12, cido flico e cobalto), em ces da raa poodle, mas sem anemia e ces jovens. Microcitose: predominncia de hemcias pequenas. Ocorre em anemia crnica, principalmente ferropriva. fisiolgica em animais idosos e ces da raa Akita.

Forma
Normal: bicncava Poiquilcitos: so alteraes morfolgicas indistintas da forma das hemcias. Concentrao de hemoglobina O mtodo mais usado para determinar a concentrao de hemoglobina o cianometahemoglobina, onde a margem de erro est prxima dos 5%. Para que esta tcnica seja realizada, necessrio um fotocolormetro ou espectrofotmetro. Aparelhos automticos medem diretamente a densidade tica da oxi-hemoglobina, sendo bastante utilizados. Outro mtodo existente o da hematina cida, bastante simples e barato, porm a margem de erro est dentro dos 12%. Para a sua realizao utiliza-se o hemoglobinmetro de Sahli. A hemoglobina corresponde, em mdia a 1/3 do hematcrito. Contagem de eritrcitos A contagem de eritrcitos pode ser feita por hemocitmetro, mas tem valor limitado em virtude da grande possibilidade de erros. A contagem por contadores automticos permite valores mais exatos. Fatores que afetam o hematcrito, hemoglobina e contagem de eritrcitos. Alteraes na massa do eritrcito afetam os trs parmetros. A anemia produz valores baixos que podem ser desproporcionais se o tamanho celular e/ou o contedo de hemoglobina tambm estiverem alterados; A policitemia absoluta produz valores altos; A contrao esplnica produz valores altos e especialmente comum em cavalos excitados.

Alteraes na hidratao (volume plasmtico) afetam os trs parmetros. Portanto o exame deve ser interpretado conhecendo-se o estado de hidratao do animal, atravs do exame fsico e anlise de protenas plasmticas totais. Desidratao produz valores altos. Hidratao excessiva causa reduo no volume, o que pode estimular anemia. ROTEIRO DE AULAS PRTICAS Colheita de sangue venoso perifrico Conter o animal adequadamente proporcionando o mnimo de estresse, para obter-se um resultado hematolgico representativo.

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Aps antissepsia introduzir agulha percutaneamente atravs da veia distendida por prvio garrote manual abaixo do ponto de colheita. A colheita pela veia jugular o local mais adequado para anlises hematolgicas na maioria das espcies (Quadro 8). Conectar seringa descartvel graduada e colher lentamente o sangue, correspondente quantidade de anticoagulante contido no frasco de acondicionamento. Aps completar o volume desejado, retirar a seringa. Desfazer o garrote antes de remover a agulha e comprimir manualmente o local de puno com algodo embebido em lcool iodado. Colocar o sangue colhido na seringa, com suave compresso do mbolo para evitar hemlise, dentro de vidro estril contendo anticoagulante EDTA (etilenodiaminotetractico) na concentrao de 2,0 mg / ml de sangue. Este anticoagulante o mais indicado ao estudo da morfologia sangunea, e ser utilizado diludo a 10 % na proporo de 0,1 ml para cada 5 ml de sangue. Esta amostra ser utilizada para a realizao do hemograma completo, fibrinognio e contagem de plaquetas.
Tabela 10. Locais e agulhas mais utilizados na colheita de sangue. Espcie animal Local de venopuno Tamanho da agulha Co ceflica, jugular, safena 25x7*, 25x8, 25x9, 40x12 Gato ceflica, jugular, safena 25x7, 25x8 Bovino jugular, caudal, mamria 40x12, 40x16 Eqino jugular 40x12, 40x16 Ovinos e caprinos jugular 40x10, 40x12, 40x16 Sunos cava anterior, marginal da orelha 40x12, 40x16 Coelhos marginal da orelha, cardaca 25x7, 40x12 *25x7 (22 Gauge): 25 mm de comprimento e 0,7 mm de calibre

Importantes causas de hemlise: seringas e agulhas molhadas e/ou quentes. descarga violenta da seringa no frasco, ou feita com a agulha. homogeneizao violenta com o anticoagulante. calor excessivo.

Anticoagulantes EDTA (Etileno diamino tetra acetato de sdio ou de potssio) Modo de ao: reage atravs de seus dois radicais cidos com clcio plasmtico, formando um quelato com os elementos alcalino-terrosos, tornando-se insolvel. Uso: Recomendado para a rotina hematolgica porque no interfere na morfologia celular, preservando-a por at 24 horas quando refrigerado adequadamente. pouco solvel, e o sal de potssio o mais solvel e mais caro. A diluio realizada a 10%, e toma-se 0,1ml de EDTA para 5ml de sangue. Fluoreto de sdio Modo de ao: quelante de clcio, com a formao de sais insolveis.

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Uso: Como impede a gliclise sangunea, realizada in vitro principalmente pelos eritrcitos, indicado para determinao da glicose. H produto comercial pronto para uso, na medida de 1 gota para cada 3ml de sangue.

Heparina Modo de ao: atividade como inibidor da trombina e tromboplastina Uso: Alguns bioqumicos. Como interfere na colorao do esfregao sanguneo, no recomendado para hemograma. A diluio de 0,1ml de soluo a 1% para no coagular 5,0ml de sangue. A heparina retarda a coagulao do sangue por apenas 8 horas. Citrato de sdio Modo de ao: quelante de clcio, com a formao de sais insolveis. Uso: Provas de coagulao (tempo de protrombina, tempo de tromboplastina parcial ativada). Seu emprego se faz em solues 1,34 g%, na proporo de 10%, ou seja, 0,5ml para 4,5ml de sangue. Preparo do esfregao e colorao Esfregao
Preparar duas lminas novas e desengorduradas, sendo uma com os cantos arredondados. Homogeneizar o sangue no frasco de colheita fechado, por inverso, e colocar com o capilar do microhematcrito, antes de fech-lo, uma gota de sangue na lmina. Colocar a outra lmina (recortada) a frente da gota de sangue, num ngulo de 45. Fazer um ligeiro movimento para trs at o sangue espalhar -se pela lmina. Com um movimento uniforme, para frente, fazer esta lmina deslizar sobre a outra. O sangue se estender por sobre a lmina, formando o esfregao (Figura 9). Agitar a lmina at secar o esfregao completamente e identific-lo com lpis na borda mais espessa do esfregao.

Gota de sangue Aproximar 30 - 40 Adeso

Avanar

Figura 9. Elaborao correta do esfregao de sangue.

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Corantes
Leishman Colocar 20 gotas do corante e deixar agir por 3 minutos. Acrescentar 20 a 25 gotas de gua destilada tamponada (pH 7,2). Deixar agir por 15 minutos. Lavar em gua corrente e secar. Preparo Diluir 1,5 g de Eosina-Azul de Metileno segundo Leishmann em 1 litro de metanol. Colocar em banho-maria a 37 C por 24 horas.Acondicionar em frasco mbar. Maturar o corante deixando-o em repouso por 1 semana, ao abrigo da luz. Corrigir o pH, se necessrio, para 7,6 Filtrar e usar. Pantico Soluo comercial pronta para uso com trs corantes em srie

Determinao do nmero total de hemcias Tomar o frasco com sangue mais anticoagulante e homogeneizar Com a pipeta de Thoma para glbulos vermelhos aspirar o sangue at a marca 0,5 Limpar o sangue da parte externa da pipeta com gaze. Diluir em seguida com soluo fisiolgica at a marca 101 Agitar, desprezar as primeiras gotas e encher a cmara de Neubauer por capilaridade. Contar as hemcias de cinco quadrados mdios, multiplicar o resultado por 10.000/ l Outras solues diluentes que podem ser utilizadas em substituio soluo fisiolgica para contagem de hemcias (Figura 10).

Diluente de Gower (mais utilizado para ruminantes) Sulfato de sdio 12,5g cido actico glacial 33,3ml gua destilada q.s.p. 200ml Diluente de Marcano Sulfato de sdio 50g Formol 40% 10ml gua destilada q.s.p. 1000ml

L
H H H H H

L L
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Figura 10. Esquema da cmara de Neubauer para contagem de hemcias.

Clculo rea central: 1mm2 Volume da rea central: 1/10mm2 Profundidade: 1/10mm Volume de cada quadrado mdio central: 1/250mm 2 Nmeros de quadrados mdios centrais contados: 5 Diluio da pipeta: 1/200 Portanto:___5___ x ___1___ = ___5___ = ___1____ 250 200 50.000 10.000 Ou seja, o fator 10.000. N total de hemcias contadas x 10.000 = n total de hemcias/ l

Determinao de hemoglobina
Mtodo da cianometahemoglobina Princpio Diluio do sangue em soluo contendo cianeto de potssio e ferrocianeto de potssio (Reativo de Drabkin), que convertem a hemoglobina em cianometahemoglobina. Soluo de Drabkin Ferrocianeto de Potssio Cianeto de Potssio

20 mg 50 mg

gua (destilada ou deionizada) 1000 ml Tomar o frasco com sangue mais anticoagulante e homogeneizar. Preencher pipeta de Sahli com 20 l do sangue. Limpar o sangue da parte externa da pipeta com gaze, adicionar a 4 ml de reativo de Drabkin e agitar por inverso. Repousar por um mnimo de 10 minutos temperatura ambiente. Ler em espectrofotmetro a 546 nanmetros, usando-se tubos especficos. Obtm-se o resultado visualmente no aparelho na unidade de g %.

Determinao do volume globular pela tcnica do micro-hematcrito


Princpio Sedimentao dos elementos figurados do sangue, obtendo-se a proporo destes elementos em relao ao plasma. Tomar o frasco com sangue mais anticoagulante e homogeneizar Pegar o tubo capilar (75 mm x 1 mm ) e por capilaridade deixar o sangue preencher 2/3 do tubo. Fechar a extremidade seca em chama de bico de Bunsen, girando-se o tubo. Centrifugar o tubo a 1.200 rpm (aproximadamente 1580 G) por 5 minutos. Ler em tabela que acompanha centrfuga, obtendo-se o resultado em %.

Reticulcitos pelo mtodo supravital com Azul de Cresil Brilhante


Amostra de sangue com anticoagulante EDTA, homogeneizar. Colocar em tubo de hemlise 0,5ml de sangue. Acrescentar ao tubo 0,5ml corante Azul de Cresil Brilhante ou Novo Azul de Metileno. Homogeneizar a soluo. Levar ao banho-maria por 15 minutos (37C). Retirar o tubo do banho-maria, agitar e fazer o esfregao em lmina. Fixar em lamnula,contar os reticulcitos em no mnimo dez campos e realizar a leitura em % dos demais eritrcitos. Pode-se contra-corar a lmina com corantes de rotina, se no obter uma boa visualizao dos reticulcitos.

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LEUCCITOS Os leuccitos ou glbulos brancos so clulas produzidas na medula ssea que fazem parte do sangue juntamente com os eritrcitos e as plaquetas. Origem Os leuccitos so produzidos na medula ssea a partir de uma clula pluripotencial, tambm chamada clula tronco ou stem cell que vai repopular a medula ssea. A capacidade proliferativa da clula tronco depende de estmulos apropriados de hormnios estimuladores da leucopoiese. Classificao dos leuccitos Os leuccitos ou glbulos brancos so classificados como polimorfonucleares e mononucleares. Os leuccitos polimorfonucleares tm ncleo condensado e segmentado. So clulas comumente referidas como granulcitos porque elas contm grande nmero de grnulos citoplasmticos que so lisossomas, contendo enzimas hidrolticas, agentes antibacterianos e outros compostos. Os grnulos presentes no citoplasma dos neutrfilos so grnulos primrios e secundrios. Os grnulos primrios so sintetizados no citoplasma do mieloblasto ou no prmielcito precoce. Os grnulos secundrios aparecem no estgio de mielcitos.Trs tipos de granulcitos (neutrfilos, eosinfilos e basfilos) so identificados pelas caractersticas de colorao de seus grnulos secundrios. Os leuccitos mononucleares no sangue so classificados como linfcitos e moncitos. Estas clulas no so destitudas de grnulos, mas certamente tm menor nmero de grnulos citoplasmticos que os granulcitos.

Granulopoiese e granulocintica
Granulopoiese A granulopoiese ou granulocitopoiese envolve a produo de neutrfilos, eosinfilos e basfilos, atravs de um processo ordenado. O tradicional conceito de granulopoiese determina a formao de neutrfilos, eosinfilos e basfilos com origem em um precursor celular, o prmielcito. Recentes estudos, no entanto, tm demonstrado que cada um destes trs tipos de granulcitos possui um pr-mielcito jovem especfico e com caractersticas ultra-estruturais e citoqumicas prprias. Na medula ssea, sob estmulos apropriados, a clula pluripotencial origina clulas progenitoras confinadas que produzem os vrios granulcitos. Esta clula com potencial de produo de neutrfilos e moncitos conhecida como Unidade Formadora de Colnia

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Granuloctica-Monoctica (UFC-GM), pois em seu estgio inicial bipotencial. Em seguida, sob estmulo apropriado, a UFC-GM diferencia-se em clulas unipotenciais, UFC-G e UFC-M. Similarmente h tambm a existncia de progenitores celulares distintos para eosinfilos (UFCEos) e basfilos (UFC-Bas). As clulas unipotenciais so morfologicamente identificveis e so precursores conhecidos como mieloblastos, que dividem-se, diferenciam-se e maturam-se nos granulcitos sanguneos especficos.

CLULA PLURIPOTENCIAL
UFC-GM UFC-Eos UFC-G Mieloblasto Mieloblasto Pr-mielcito Pr-mielcito Mielcito Eosinfilo Mielcito Neutrfilo Metamielcito Eosinfilo Metamielcito Neutrfilo Bastonete Eosinfilo Bastonete Neutrfilo EOSINFILO NEUTRFILO Figura 10. Esquema da granulopoiese. UFC-Bas Mieloblasto Pr-mielcito Mielcito Basfilo Metamielcito Basfilo Bastonete Basfilo BASFILO

Regulao da granulopoiese O nmero de leuccitos especficos que adentram e deixam o sangue mantido constante mediante diversos mecanismos e condies (Tabela 11).

Granulocintica a informao quantitativa sobre a produo de granulcitos na medula ssea e suas fases intravascular e tecidual. Em estudos dos granulcitos, no sangue e medula ssea, marcados com radioistopos, foi possvel determinar os compartimentos dos neutrfilos em humanos. Tambm alguns estudos foram realizados em animais.

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Tabela 11. Estimuladores e inibidores da granulopoiese. Processo Granulopoiese Estimuladores UFC-GM, UFC-G Granulopoietina Linfocinas (IL-3) Eosinofilopoietina Basofilopoietina Interleucina - Interferon Inibidores Fator Inibidor de Colnia Lactoferrina, Transferrinas Linfocinas PGE1 e PGE2 Fator esplnico Ferro em diferentes quantias Corticide

Linfopoiese

Compartimentos funcionais de granulcitos na medula ssea Trs compartimentos funcionais de granulcitos so reconhecidos na medula ssea 1. Compartimento proliferativo ou mittico, consistindo de mieloblastos, prmielcitos e mielcitos; 2. Compartimento de maturao ou ps-mittico, consistindo de metamielcitos e bastonetes; 3. Compartimento de estoque ou reserva, primariamente composto de neutrfilos maturo e alguns bastonetes. Um precursor neutroflico no compartimento de multiplicao geralmente sofre 4 mitoses, uma no estgio de mieloblasto, outra no de pr-mielcito e duas na fase de mielcito. Sob certas circunstncias, a mitose pode se manter ou mitoses adicionais podem ocorrer, numa taxa de 3 a 7 mitoses (Tabela 12).
Tabela 12. Principais compartimentos de granulcitos. Compartimento de Granulcitos Medula ssea (5 a 7 dias) Reserva Multiplicao Mieloblasto Maturao Metamielcito Armazenamento Marginal Bastonete Tecidual (5 a 6 horas) Bastonete Segmentado Circulante Circulao (24 a 48 horas) Tecido

Pr-mielcito

Mielcito

Neutrfilos Liberao de neutrfilos da medula ssea para o sangue Neutrfilos maturos normalmente emergem corrente sangunea em torno de 3 a 5 dias no co, 4 a 6 dias no bovino e 7-11 dias no homem. O compartimento de reserva geralmente

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extenso e pode suprir de neutrfilos o co por 4 a 8 dias. Estas clulas do compartimento de reserva podem ser rapidamente mobilizadas na demanda corprea, e a depleo dos estoques reflete-se numa neutropenia e desvio esquerda da medula ssea e provavelmente tambm no sangue perifrico. A expanso do compartimento de multiplicao com acrscimo da granulopoiese efetiva ocorre em resposta ao consumo, gerando uma neutrofilia; no entanto este fato leva em torno de 3 a 4 dias no co, e um pouco mais nos bovinos. Fatores que influenciam a liberao de neutrfilos A liberao de neutrfilos no sangue influenciada por vrios fatores, incluindo microambiente medular, localizao anatmica, propriedades celulares como a deformabilidade, fluxo nos sinusides medulares, fatores de liberao celular e fatores neuro-hormonais. Os neutrfilos maturos so os primeiros a migrar atravs das junes intercelulares dos sinusides medulares, pois possui maior capacidade de deformabilidade e motilidade. Compartimentos funcionais de neutrfilos O compartimento marginal primariamente localizado no bao e pulmes, e consiste de leuccitos aderidos transitoriamente na parede de capilares e pequenos vasos sanguneos. A capacidade deste compartimento varia com a espcie, sendo que o co, bovino e eqino possui no marginal metade dos neutrfilos vasculares, enquanto que no gato esta reserva chega a 2,5 vezes o compartimento circulante. Bezerros de 8 a 16 dias de idade tm um maior compartimento de granulcitos que bovinos de 6 meses a um ano de idade. Os neutrfilos no sangue permanecem em um equilbrio dinmico. O compartimento marginal pode ser mobilizado rapidamente sob a influncia de epinefrina e corticides endgenos liberados por estmulos fisiolgicos ou patolgicos como estresse, exerccio, traumas e infeces. Fatores envolvidos na marginao dos neutrfilos Os fatores que esto envolvidos na marginao dos neutrfilos incluem: C5a, prostaciclina (PGI2) produzidas pelas clulas endoteliais das paredes dos vasos e, com maior importncia, alguns componentes dos grnulos dos neutrfilos, incluindo molculas de adeso dos leuccitos. A adrenalina diminui a aderncia dos neutrfilos por aumentar a produo de AMP cclico. Expanso de vida intravascular dos neutrfilos O compartimento circulante composto dos neutrfilos que livremente circulam pelo sangue, estes possuindo uma meia vida em torno de 7 a 14 horas. Os neutrfilos aleatoriamente saem da circulao para os tecidos e cavidades corpreas, normalmente sem retorno, onde

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podem permanecer por 2 a 3 dias fisiologicamente ou menos quando em processos patolgicos. A exceo para os neurfilos leucmicos. Funo dos neutrfilos A funo primria dos neutrfilos fagocitose e morte de microorganismos. Os neutrfilos tambm podem causar dano tecidual e exercer efeito citotxico, como atividade parasiticida mediada por anticorpo e atividade tumoricida. A liberao de substncias bioativas ou sua produo pelos neutrfilos tem sido reconhecida, como exemplo: liberao de pirgenos endgenos e molculas de adeso. Os neutrfilos ativados secretam citocinas como o fator de necrose tumoral (TNF), FEC-G e FEC-M. O papel do neutrfilo para a manuteno da sade pode ser melhor entendido pela seqncia de eventos que podem ocorrer aps uma infeco local com estafilococos ou coliformes. Inicialmente as toxinas bacterianas elaboradas localmente e substncias qumicas, liberadas dos tecidos lesados, aumentam a permeabilidade vascular, principalmente liberao de protenas do plasma e acumulao de leuccitos, predominantemente neutrfilos, na rea inflamada. Subseqentemente, a liberao de substncias qumicas dos neutrfilos danificados ou mortos, assim como a gerao de componentes complementos ativados, acentua o processo inflamatrio. Com o tempo, a atividade fagoctica e bactericida dos neutrfilos e moncitos infiltrantes, a ao de anticorpos e componente complemento ativado controlam o crescimento bacteriano. Vrios passos esto envolvidos na resposta funcional dos neutrfilos para o controle da infeco. Alguns eventos geralmente ocorrem quando os moncitos atuam similarmente. Estes passos incluem adeso, quimiotaxia, opsonizao, fagocitose, degranulao, ao microbicida e exocitose. As funes caractersticas dos neutrfilos so: Aderncia: extravasamento de neutrfilos (diapedese) que se inicia logo aps a infeco microbiana e normalmente seguida por atrao quimiottica at o microorganismo e sua destruio fagoctica. Durante a diapedese, os neutrfilos circulantes primeiro aderem-se ou margeiam ao redor da superfcie endotelial venular alterada, emigrando atravs das junes intracelulares, pela membrana basal, at penetrar no tecido. A adeso de neutrfilos ao endotlio vascular e extravasamento so muito influenciados pelas molculas de adeso da superfcie da clula. Quimiotaxia: definida como um movimento direcionado dos leuccitos a um alvo em particular (bactrias principalmente), sob influncia do gradiente de concentrao de substncias quimiotticas no local. A quimiotaxia um processo ativo e envolve a participao de componentes citoesquelticos e outras protenas de mobilidade, como a miosina.

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Fagocitose e Degranulao: a fagocitose um processo ativo de ingesto de uma partcula microscpica pelo leuccito por meio da extenso de pseudpodes citoplasmticos ao redor do alvo. A pinocitose refere-se a internalizao da vescula fluda por clulas especficas. Clulas imaturas como bastonetes e metamielcitos possuem menor capacidade fagocitria, enquanto que mielcitos e precursores imaturos so geralmente afuncionais na defesa do hospedeiro. A fagocitose influenciada por vrios fatores fsicos e qumicos, tanto do fagcito como da partcula, e tambm pelas condies micro-ambientais. aderncia de opsoninas na superfcie da bactria e outras partculas estranhas alteram as suas caractersticas superficiais e atuam como receptores para a fagocitose. Atividade antimicrobiana: grnulos lisossomais no interior dos vacolos fagocticos fundem-se com a membrana vacuolar para formar um fagolisossomo e liberar seus componentes para matar e digerir a bactria (Tabela 13). Exocitose: refere-se descarga extracelular de contedo celular atravs da fuso dos vacolos fagocticos com a membrana celular. Bactrias mortas, produtos de bactrias degradadas ou grnulos do neutrfilos e seus componentes podem ser exocitados.
Tabela 13. Mecanismos microbicidas dos neutrfilos. Oxignio dependente Mieloperoxidase Principais mecanismos microbicidas Mieloperoxidase independente Oxignio independente H 2O 2 Acidez fagossomal nion superxido Lisozima / lactoferrina Radical hidroxila Proteases / Fosfol.A2

Anormalidades funcionais e morfolgicas dos neutrfilos Marcadas mudanas qualitativas e quantitativas nos neutrfilos podem predispor infeco. Alguns fatores contribuem para a diminuio da resistncia s infeces, o qual podem ser fatais, como: defeito de aderncia, migrao, quimiotaxia, degranulao, ingesto e atividade antimicrobiana.

Anormalidades morfolgica
As anormalidades morfolgicas nos neutrfilos geralmente incluem aberraes de maturao, tamanho da clula, forma nuclear, caractersticas dos grnulos e citoplasma. Estas anormalidades so chamadas como mudanas txicas. So vistas em pacientes com severa infeco bacteriana, septicemia, condio inflamatria aguda e extensiva destruio tecidual. Os efeitos txicos durante a granulopoiese so refletidos como basofilia citoplasmtica, presena de grnulos txicos e corpsculo de Dhle, ncleo hipersegmentado e a produo de neutrfilos gigantes e bizarros. A basofilia o resultado da reteno de ribossomos e RER. Os grnulos

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txicos tornam-se visveis nos neutrfilos mielcitos txicos e entre os neutrfilos maduros pela reteno do cido mucopolissacardeo. Corpsculo de Dhle so incluses citoplasmticas que resultam da agregao lamelar do RER. So mais comuns em gatos do que em outras espcies animais.

Eosinfilos Local de produo O maior stio de produo de eosinfilos a medula ssea, embora tambm ocorra em menor grau em outros tecidos como bao, timo e linfonodos cervicais. Em geral, os eosinfilos so produzidos em torno de 2 a 6 dias e adentram no sangue perifrico aproximadamente 2 dias aps. Sua meia vida intravascular de 4 a 6 horas em humanos e menos de 1 hora nos ces; a seguir entram tecidualmente e normalmente no retornam para a circulao sangunea. A entrada de eosinfilos para os tecidos influenciada por quimiotticos locais e especficos. Vrias substncias so quimiotticas para eosinfilos, incluindo complexos antgeno-anticorpo envolvendo primariamente IgE, produtos de mastcitos como histamina e fator quimiottico a eosinfilos (FQE), componentes da ativao do complemento (C5a, C567), metablitos do cido aracdnico, linfocinas, fibrinognio e fibrina, e alguns produtos resultantes do dano tecidual. Os eosinfilos tm participao na regulao alrgica e resposta aguda inflamatria e pode induzir dano tecidual. Podem ainda participar na coagulao e fibrinlise atravs da ativao do fator XII e plasminognio. Principais funes dos eosinfilos Fagocitose e atividade bactericida Atividade parasiticida Regulao das respostas alrgicas e inflamatrias Injria tecidual

Regulao da resposta alrgica e inflamatria O papel regulatrio dos eosinfilos na resposta alrgica tem sido sugerido pelas seguintes observaes: Os eosinfilos podem fagocitar complexos imunes e grnulos dos mastcitos; As prostaglandinas (PGE1 e PGE2) e zinco dos eosinfilos inibem a liberao de histamina, serotonina e FAP dos mastcitos; Os eosinfilos contm fatores que inibem o fornecimento de histamina pelos mastcitos; A histaminase dos eosinfilos inativa a histamina livre; A fosfolipase C dos eosinfilos inibe a liberao FAP pelos mastcitos.

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O papel regulatrio dos eosinfilos na inflamao aguda tem sido inferido s propriedades anti-histamnica e anti-inflamatria dos eosinfilos. Alm disso, os grnulos dos eosinfilos contm substncias que inibem as propriedades de induo do edema como a serotonina e bradicinina.

Tabela 14. Principais funes dos grnulos dos eosinfilos. Tipo de grnulo Protenas catinicas (PBM e PCE) Fator de Hageman Histaminase Quininase Enzimas lisossomais Peroxidase Fagocitose Fosfolipase C Ativador de plasminognio Prostaglandinas PGE1 e 2 Zinco Funo Neutralizam a heparina, destruio de parasitas, citotoxicidade. Promovem coagulao e fibrinlise. Ativa a sequncia de coagulao. Inativa a histamina. Regula a produo das cininas e atividade destrutiva. Ao proteoltica. Parasiticida, antibacteriano, atividade citotxica Engloba microorganismos e outras partculas Degrada fator de ativao plaquetria dos mastcitos Ativa fibrinlise Inibe a ressntese de histamina Inibe a liberao de histamina, serotonina e Fator de ativao plaquetria dos mastcitos

Atividade parasiticida dos eosinfilos As aes parasiticidas dos eosinfilos ocorrem por intermdio da interao com os mastcitos e os linfcitos que esto representados na figura 11. A infeco pelo parasita estimula a resposta humoral e celular. Os anticorpos IgG especficos produzidos pode se ligar ao parasita, fixar complemento, iniciar a reao inflamatria e provavelmente infligir algum dano ao parasita. Enquanto, os anticorpos IgE especficos iro ligar-se aos mastcitos tecidual e causar a degranulao e liberao de substncias bioativas como histamina, fator de anafilaxia quimiottico para eosinfilos (FQE-A) e fator de ativao plaquetria (FAP). As linfocinas (IL-3, IL5, FEC-Eos, FECrescimento-Eos.), produzidos pelos linfcitos T ativados pelos antgenos dos parasitas, podem estimular a produo e liberao de eosinfilos, sendo refletido no sangue como eosinofilia. O influxo de eosinfilo da medula para o sangue tambm influenciado pelos nveis circulantes de histamina, que resulta da degranulao dos mastcitos nos tecidos. A eosinofilia tecidual resulta da resposta a quimioatraentes como a histamina, componente complemento ativado que so gerados no local da infeco parasitria.

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Moncitos Cintica dos moncitos O moncito um descendente da clula progenitora bipotencial, a UFC - GM, que pode produzir tanto neutrfilos como moncitos. A diferenciao de UFC - GM em UFC - M e a proliferao dos precursores monocticos (monoblastos e pr-moncitos) em moncitos so influenciados por um fator especfico chamado fator estimulador de colnia monoctica (FEC M) (Figura 12).

Cel. B

IgG Parasito

Mastcito

Estimulao antignica Cel.T

IgE

Interao Antignica

FEG-Eos FEC-Eos

Eosinfilo

Liberao de substncias bioativas como histaminas

Eosinofilia tecidual Linfocinas FEC-N Eosinofilia sangunea

Eosinofilopoiese Medula ssea Figura 11. Esquema da ao parasiticida dos eosinfilos (Jain, 1993).

O monoblasto divide-se uma vez e o pr-moncito uma ou duas, mas o moncito normalmente no se divide na medula ssea. Os moncitos aparecem em pequena quantidade na medula ssea, mas os monoblastos e pr-moncitos so raros de se observar. O tempo mdio de liberao dos moncitos na medula ssea em torno de 2 a 2,5 dias. No h reserva de moncitos na medula ssea, como para os neutrfilos; no entanto moncitos jovens so rapidamente liberados, num perodo de at 6 horas. Os moncitos so distribudos no sistema vascular entre os compartimentos circulatrio e marginal na proporo de 1 : 3,5. A meia vida

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de sobrevida na circulao sangunea estimada em torno de 8 a 71 horas. Os moncitos geralmente deixam o sangue para adentrar aos tecidos. Os macrfagos teciduais so originados dos moncitos, mas so mais numerosos que os moncitos circulantes; aproximadamente uma proporo de 50:1. Os moncitos migram para os tecidos atravs de regies interendoteliais das paredes vasculares; no entanto a demanda mais suprida pela proliferao local de macrfagos que se dividem que pelos moncitos sanguneos.

CLULA PLURIPOTENCIAL UFC - GM UFC - M

Fagocitose Endotoxinas Imuno-complexos Interleucina 1 Fator de Necrose Tumoral (TNF)

Macrfagos

Monoblasto Pr - moncito Fator Estim. colnia-GM Fator Estim. colnia-M Moncito Macrfagos Teciduais Figura 12. Esquema da formao de moncitos.

Clulas endoteliais Fibroblastos

Principais produtos secretados pelo Sistema Fagoctico Mononuclear Componentes do sistema complemento Substncias citotxicas e antimicrobianas Produtos do metabolismo do cido aracdnico Enzimas lisossomais Fatores moduladores de outras clulas incluindo interleucinas Fatores fibrinolticos e pr-coagulantes Outros fatores

Funes dos moncitos Transformao de moncitos em clulas efetoras teciduais Ao fagoctica e microbicida Regulao da resposta imune Remoo fagocitria de debris e outros restos celulares Secreo de monocinas, enzimas lisossomais, e outros Efeito citotxico contra clulas tumorais e eritrcitos Regulao da hematopoiese: granulo, mono, linfo e eritro Regulao da inflamao e reparo tecidual Coagulao e fibrinlise

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Linfcitos Linfopoiese e cintica linfocitria Os linfcitos representam um grupo heterogneo de clulas tanto morfolgica como funcionalmente. Eles so a base no desencadeamento e execuo da resposta imune. Os linfcitos so produzidos na medula ssea, nos rgos linfides como o timo, linfonodos e bao, alm dos tecidos linfides viscerais, que incluem as placas de Peyer, tonsilas e apndices. A medula ssea nos mamferos o maior rgo linfopoitico; no entanto exceto no suprimento de precursores linfides para colonizao dos rgos linfides perifricos, a linfopoiese na medula ssea e timo ineficaz. Durante a vida intra-uterina clula tronco pluripotencial indiferenciada origina-se primeiro do saco vitelno e depois do fgado, bao e medula ssea fetais. Sob influncia de apropriado micro-ambiente e outros estmulos, estes progenitores linfides originados na medula ssea continuamente colonizam os rgos linfides primrios - Bursa de Fabrcius nas aves ou medula ssea nos mamferos, e o timo. Nestes stios duas populaes funcionais e fenotipicamente distintas de precursores linfocticos desenvolvem-se. Estas clulas ento migram para os rgos linfides secundrios ou perifricos (como linfonodos e bao), onde se tornam preferencialmente localizadas em pores tpicas e do incio, em resposta a estmulo antignico apropriado, proliferao de subsries imunocompetentes de linfcitos T ou B. Os linfcitos que suprem o sangue so produzidos de maneira passo a passo, primariamente nos linfonodos e, em extenso limitada, em outros tecidos linfides. Linfoblastos, pr-linfcitos e linfcitos podem ser identificados morfologicamente, mas sua linhagem T e B no. O tempo de produo dos linfcitos estimada entre 6 e 8 horas, e em alguns casos podem levar menos de 2 horas. O nmero de mitoses envolvido varia com o tipo celular (6 a 8 h para clulas T e 2 a 3 h para B). A linfopoiese (Figura 13) estimulada por exposio antignica e deprimida por corticides, hormnios sexuais e m nutrio. Subpopulaes de linfcitos A populao total de clulas B e T no sangue da maioria das espcies animais est em torno de 70% de clulas T, 20% de clulas B e o restante provavelmente composto por clulas nulas, de funo e origem desconhecidas. Dentre os tecidos linfides, as clulas T predominam no timo, linfonodos e ducto linftico torcico; as clulas B predominam na medula ssea e bao. No sangue e vrios tecidos a maior parte das clulas T so de vida longa, e a maioria dos linfcitos B so de vida curta; as clulas T e B de memria so de vida longa. A mdia de meia vida dos linfcitos humanos de vida longa estimada em 4,3 anos e em torno de

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1% sobrevivem at 20 anos. A sobrevida de linfcitos de vida curta se situa entre poucas horas a 5 dias. Recirculao de linfcitos Em contraste com os granulcitos, em torno de 70% dos linfcitos do sangue perifrico que saem atravs do tecido retornam ao sistema vascular para recirculao. Esta propriedade dos linfcitos torna difcil e imprecisa a estimativa da meia vida dos linfcitos. A populao recirculante demora em torno de 15 a 48 horas para recircular e consiste primariamente de linfcitos T e linfcitos B, exceto os de memria que so considerados no circulantes. O fenmeno de recirculao de suma importncia biolgica porque proporciona um mecanismo de distribuio generalizada de clulas linfides ocupadas com a resposta imune sistmica. Como resultado, um grande nmero de linfcitos podem ser expostos a um antgeno depositado localmente no tecido. Estas clulas antigenicamente expostas podem ser transportadas por vrios lugares no corpo para propagar e montar uma vigorosa resposta imune. Os linfcitos recirculam do bao, timo e medula ssea para o sangue perifrico da vo aos tecidos, dos tecidos linfa, linfonodos e assim sucessivamente. Funes Os linfcitos T e B exercem diferentes funes e possuem receptores de membrana para o reconhecimento de antgeno. Existe uma terceira populao de linfcitos que no expressam receptores de antgenos em suas membranas, as clulas exterminadoras naturais (Natural Killer), so derivadas da medula ssea e so funcionalmente distintas das clulas T e B pela sua habilidade de lisar certas linhagens de clulas tumorais sem prvia sensibilizao. Do ponto de vista morfolgico estas clulas so linfcitos grandes granulares. Estes linfcitos apresentam grnulos no seu citoplasma que constituem os lisossomas primrios e aparelho de Golgi bem desenvolvidos.

Principais funes linfocitrias Imunidade humoral Imunidade celular Regulao imune Atividade citotxica Vigilncia imune e Secreo de linfocinas

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CLULA TRONCO PLURIPOTENCIAL CLULA TRONCO LINFIDE Clula Pr - B Clula B Imatura Clula B Matura Plasmcito Clula Pr - T Clula Precursora Jovem Clula Precursora Intermediria Clula Precursora Imediata Clula T Matura Figura 13. Esquema da linfopoiese.

Basfilos So clulas pouco estudadas porque so raras no sangue e medula ssea. Os basfilos so freqentemente comparados com os mastcitos por causa de algumas similaridades morfolgicas e funcionais. A produo dos basfilos na medula ssea semelhante aos demais granulcitos, no entanto os mastcitos so produzidos de clulas mesenquimais indiferenciadas no tecido conectivo da medula ssea. Os basfilos e os mastcitos contm vrias substncias de importncias biolgicas, e podem sintetizar inmeras substncias imunolgicas e no imunolgicas. A composio dos grnulos varia entre espcies. Seus grnulos so particularmente ricos em histamina, heparina e em algumas espcies serotonina. Quando estimulado antigenicamente sintetiza importantes fatores como Fator ativador plaquetrio (FAP), 0substncias de reao anafilaxia (SRA) e tromboxano A2 (TxA2 ). Os mastcitos contm um fator chamado Fator quimiottico

eosinoflico de anafilaxia (FQE-A) e os basfilos sintetiza-os na estimulao. A basofilia e eosinofilia algumas vezes ocorrem simultaneamente, devido a interao dos dois tipos de clulas. Interpretao dos parmetros leucocitrios A interpretao dos parmetros leucocitrios requer um conhecimento dos fatores que podem influenciar os valores hematolgicos. Informaes sobre a coleta da amostra, morfologia normal das clulas, caractersticas espcie especficas e variaes fisiolgicas so necessrias para o reconhecimento de anormalidades hematolgicas. A histria e o exame clnico do paciente complementam os resultados laboratoriais para o diagnstico das doenas. A contagem diferencial e total de leuccitos, o qual compreendem o leucograma, so de ajuda valiosa na avaliao hematolgica da resposta do hospedeiro a infeco bacteriana e no diagnstico de leucemias e outras doenas. Na interpretao do leucograma necessrio conhecer no somente a contagem total e diferencial dos leuccitos, mas reconhecer que,

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mudanas morfolgicas pertinentes aos leuccitos e informaes sobre outros componentes sangneos devem ser obtidos, como protena plasmtica total, concentrao de fibrinognio. Tambm so importantes informaes sobre o eritrograma, a contagem de reticulcitos e clulas nucleadas.

Fibrinognio O fibrinognio uma protena de fase aguda produzida no fgado. Nos processos inflamatrios de vrias causas , a concentrao do fibrognio pode elevar-se entre 3-4 dias e permanecer alto por vrios dias ou semanas como nas doenas crnicas. Geralmente a resposta do fibrinognio inicia-se com a resposta dos leuccitos, persistindo por mais tempo que os leuccitos. Em bovinos o fibrinognio um importante parmetro a ser avaliado, porque pode ser a nica indicao de uma resposta inflamatria ativa. Nas doenas que ocorrem excessivo depsito de fibrinognio tecidual sua concentrao no sangue pode no estar elevada, ficando entre os valores de referncia ou at mesmo abaixo destes valores. Contagem total de leuccitos A contagem total de leuccitos varia com a espcie animal e tambm influenciada pela idade. Esta alta ao nascimento e diminui gradualmente para atingir valores de adulto entre 2 a 12 meses de idade. A contagem total de leuccitos avaliada pelo aumento, acima dos valores de referncia, como leucocitose ou diminuio leucopenia. Os sufixos citose e filia denotam um aumento na contagem de leuccitos, entretanto, penia indica uma diminuio comparada com os valores de referncia. As leucocitoses so muito mais comuns que as leucopenias e no so um sinal de mau prognsticos como a leucopenia.

Tipos de leucocitose Fisiolgica Reativa Proliferativa (autnoma) As mudanas na contagem total de leuccitos podem envolver anormalidades de produo,

liberao, distribuio intravascular, vida mdia e ingresso tecidual de vrios leuccitos. Por exemplo: os neutrfilos circulantes esto num equilbrio dinmico com os neutrfilos no compartimento marginal e reserva da medula ssea. Uma demanda funcional imediata de neutrfilos feita primeiro pela mobilizao das clulas do pool marginal e circulante, seguida pela reserva da medula ssea e finalmente pelo aumento da granulopoiese e liberao acelerada. O aumento de liberao de clulas observado no sangue perifrico como um desvio

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esquerda. Assim o tamanho dos compartimentos marginal, circulante, reserva e capacidade proliferativa da medula ssea, so determinantes importantes na resposta dos leuccitos s doenas.

Leucocitose fisiolgica
A leucocitose fisiolgica ocorre como uma resposta a adrenalina, no qual o compartimento marginal de neutrfilos e/ou linfcitos so mobilizados para a circulao geral, aumentando a contagem total de leuccitos e o nmero de neutrfilo absoluto e/ou linfcitos. Assim uma neutrofilia ou linfocitose transitria, ou ambas, podem se manifestar. Esta condio comum em animais jovens e geralmente desencadeada por distrbios emocional e fsico. Raramente o nmero de moncitos e eosinfilos aumentam. Leucocitose induzida por corticosteride ou estresse a leucocitose pode ocorrer em condio de sade ou nas doenas, sendo assim ela pode ser: fisiolgica ou patolgica. A liberao de glicocorticide endgeno ou administrado terapeuticamente causa considerveis mudanas hematolgicas. Tipicamente produz leucocitose causada por neutrofilia, usualmente sem desvio esquerda, linfopenia e eosinopenia. Monocitose ocorre no co. A neutrofilia ocorre pela mobilizao dos neutrfilos segmentados do compartimento de reserva da medula ssea e pela diminuio da diapedese das clulas para os tecidos. A linfopenia ocorre principalmente pela linflise dos linfcitos T sensveis a esterides no sangue e tecido linfide, ou pela marginao e seqestro dos linfcitos nos locais extravasculares. Eosinopenia ocorre principalmente pela diminuio da sada destas clulas da medula ssea, devido interferncia com o efeito quimiottico da histamina nos eosinfilos. A causa de monocitose permanece desconhecida. A resposta dos basfilos, ao corticide, similar a dos eosinfilos, mas no reconhecida usualmente, porque os basfilos so raros no sangue.

Leucocitose reativa
A leucocitose reativa ocorre em resposta s doenas. Certas doenas podem induzir uma resposta especfica, mas usualmente um padro geral de resposta dos leuccitos evidente, indiferente da doena. A leucocitose reativa pode ocorrer com ou sem desvio esquerda. O grau de leucocitose varia com as espcies e usualmente relativa para a relao neutrfilos: linfcitos (N:L). Animais com alta relao N:L, como o co e o gato, apresentam uma maior resposta que animais com baixa relao N:L como eqinos e bovinos. Uma resposta induzida por corticosteride ou, menos comumente, por adrenalina pode ocorrer simultaneamente com uma leucocitose reativa. Diferenciao da leucocitose reativa da leucocitose por corticosteride ou epinefrina. A leucocitose considerada reativa quando um ou mais dos seguintes itens so encontrados:

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Leucocitose com desvio esquerda; Hiperfibrinogenemia; Monocitose em outras espcies que no o co; Ausncia de linfopenia ou eosinopenia. No co a monocitose acompanhada de um ou mais dos outros quatro critrios, ou o valor da contagem absoluta de moncitos deve ser duas vezes maior que o normal.

Leucocitose proliferativa
A leucocitose proliferativa ou autnoma resulta de uma mudana neoplstica da clula pluripotencial. As formas mais comuns de leucemias so: linfocticas, mielgenas, mielomonoctica e monoctica. As leucemias eosinoflicas e basoflicas so raras. importante observar que muitas vezes o cncer das clulas sangneas no manifesta uma leucocitose, portanto, a contagem de leuccitos pode estar normal ou mesmo diminuda e a populao de clulas na medula ssea pode estar alterada com pequena ou nenhuma evidncia no sangue perifrico. Leucopenia A leucopenia, em muitos animais, ocorre por neutropenia e linfopenia. A neutropenia causa primria de leucopenia em animais com uma relao N:L maior que 1, e linfopenia em animais que a relao N:L menor que 1. A neutropenia mais comum em infeces bacterianas e linfopenia em infeces virais. Severas infeces bacterianas e virais podem causar leucopenia associada com neutropenia e linfopenia, ou ambas e tambm podem reduzir o nmero de outros leuccitos. Salmonelose no cavalo e mastitis coliformes so exemplos clssicos de infeco bacteriana que leva a neutropenia e linfopenia e a infeco do vrus da panleucopenia felina um exemplo de infeco viral. O retorno dos linfcitos e dos eosinfilos no sangue, determinado por hemograma sequenciais, indica convalescncia e geralmente um sinal de bom prognstico. A leucopenia ocorre freqentemente durante o estgio precoce da cinomose e seguida de leucocitose por uma infeco bacteriana secundria. Uma marcada linfopenia um quadro consistente na cinomose, devido a atrofia e necrose do tecido linfide, produzido pelo vrus. Ambos os linfcitos T e B esto reduzidos e a imunidade humoral e celular esto suprimidas em animais sobreviventes. Em ces sobreviventes, o nmero de linfcitos no sangue permanecem baixos por um perodo prolongado. As neutropenias podem ser agrupadas: Sobrevivncia reduzida de neutrfilos maturos Produo reduzida pela medula ssea Produo ineficaz de neutrfilo Sequestrao

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Sobrevivncia reduzida de neutrfilos maturos


Ocorre quando h uma demanda tecidual aguda e macia que esgota rapidamente o compartimento de neutrfilos no sangue. Uma demanda excessiva, continuada, leva a exausto da medula ssea (estoque) e excede a produo, resultando em um desvio esquerda degenerativo, h mais neutrfilos imaturos que maturos. A contagem total de neutrfilos pode estar normal ou diminuda. Desvio esquerda degenerativo indica uma situao sistmica desfavorvel. Mudanas morfolgicas txicas so muitas vezes observadas nos neutrfilos. Estas mudanas incluem: basofilia citoplasmtica, vacuolizao e corpsculo de Dhle.

Produo reduzida pela medula ssea


associada com a falncia primria da medula ssea. Outras linhas de clulas podem tambm ser afetadas. A neutropenia no acompanhada por desvio para a esquerda. Causas conhecidas incluem: infeco (parvovirose canina e felina, Ehrlichia sp, vrus da leucemia felina, vrus imunossupressivo felino), drogas (trimetoprim fenilbutazona, estrgeno, agentes quimioterpicos) e hematopoiese cclica dos collies cinzas.

Produo ineficaz
Neutropenia imuno-mediada, resultando em sobrevivncia reduzida. Ocorre em animais, mas no tem sido bem documentada. No h desvio para a esquerda e o compartimento de estoque na medula ssea aparece normal no exame.

Neutropenia por seqestrao


Ocorre com o choque anafiltico e endotoxemia, causando um rpido desvio para compartimento marginal. As endotoxinas causam efeito via ativao complemento, resultando na agregao e sequestrao dos neutrfilos e plaquetas nos capilares pulmonares.

Leucograma
Introduo O leucograma a parte do hemograma que pesquisa alteraes quantitativas e/ou morfolgicas das sries leucocitrias. Ele composto da contagem global de leuccitos e suas contagens diferenciais, consideradas em seu nmero relativo e absoluto. Alm disso, devem ser registradas as observaes sobre as alteraes morfolgicas encontradas no esfregao sanguneo; defeitos funcionais somente sero notados quando acompanhados de morfologia alterada.

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Contagem total de leuccitos


A contagem dos leuccitos pode ser estimada indiretamente no esfregao sanguneo. Na interpretao do leucograma deve ser utilizado o resultado absoluto da contagem leucocitria, pois o resultado relativo no expressa a realidade leucocitria. Um caminho adicional na avaliao de um leucograma examinar rapidamente a proporo neutrfilos maturos para linfcitos, usando a seguinte proporo normal (%): Co: 2,5 a 3,5:1 Gato: 1,8:1 Cavalo: 1,5:1 Bovino: 0,5: 1 Suino: 0,7:1

Exemplo: Se um diferencial revela 95% de neutrfilos e 5% de linfcitos em um co, h uma linfopenia ou uma neutrofilia ou a combinao de ambas? Se a contagem de leuccitos for 20000 teria uma neutrofilia (3000-12000) e linfcitos normais (1000-4900) ao passo que, se a contagem de leuccitos for 8 000 o que evidente uma linfopenia. Observao: necessrio fazer a correo da contagem de clulas nucleadas que so contadas nos contadores automticos. Correo da contagem total de leuccitos: Contagem corrigida = N de clulas nucleadas X 100 100 + n de eritrcitos nuclucleados em 100 leuccitos Exemplo: Se a contagem de leuccitos for 20 000/ l. Diferencial revelar 80% neutrfilos segmentados, 20% linfcitos, mas tambm 40 eritrcitos nucleados. Aplicar a frmula de correo: X = 20.000 x 100 = 14 285 clulas/ l. 100+40

Alteraes quantitativas dos leuccitos


As alteraes quantitativas dos leuccitos so a leucocitose e a leucopenia (Tabela 15). Para avaliar estas alteraes fundamental ter em mente os valores normais da espcie considerada, visto que normalmente a leucocitose no co devido neutrofilia, e nos bovinos pode ser pela linfocitose (Tabela 16).
Tabela 15. Causas de leucocitoses e leucopenias. Causas de Leucocitose Infeco bacteriana Efeito de esterides Desordens linfoproliferativas Peritonite Infecciosa Felina Necrose tecidual Severa inflamao Prenhez e pario em cadelas Desordens mieloproliferativas Hipertireoidismo em gatos Causas de Leucopenia Doenas virais Severa infeco bacteriana Anafilaxia Drogas e qumicos txicos Neoplasias de Medula ssea Toxemias endgenas: uremia Toxoplasmose / Ehrlichiose / Leishmaniose

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Diferencial de Leuccitos O diferencial leucocitrio realizado no exame do esfregao sanguneo, em contagem percentual de 100 leuccitos. H uma tcnica padro para a confeco do esfregao sanguneo e leitura diferencial leucocitria, para que se tenha homogeneidade dos resultados. Um esfregao com sangue mal homogeneizado, principalmente em cavalos, poder trazer diferenas diagnsticas pela desuniformidade na distribuio dos leuccitos na lmina. Desvio esquerda Normalmente o sangue perifrico contm pequeno nmero de neutrfilos imaturos. Em muitas espcies este consiste de menos de 300 bastonetes/l de sangue. O aumento da liberao da medula ssea de neutrfilos imaturos para o sangue ocorre quando aumenta a demanda funcional de neutrfilos para os tecidos ou em casos de leucemias mielgenas ou mielomonocticas agudas ou crnicas. A presena de neutrfilos imaturos no sangue, acima do nmero normal para a espcie, constitui um desvio esquerda. A extenso do desvio esquerda indica a severidade da doena, entretanto a magnitude da contagem de clulas reflete a habilidade da medula ssea para suprir a demanda. Classificao do desvio esquerda Desvio esquerda regenerativo: A contagem total de leuccitos moderadamente ou marcadamente elevada por causa da neutrofilia e o nmero de neutrfilos imaturos (bastonetes) encontra-se abaixo do nmero de neutrfilos maturos (segmentados). Isto indica uma boa resposta do hospedeiro, e ocorre quando a medula ssea tem tempo suficiente (usualmente 3-5 dias) para responder demanda tecidual aumentada de neutrfilos.

Desvio esquerda degenerativo: A contagem total de leuccitos varia, podendo ser normal, abaixo do normal ou moderadamente elevada. A resposta principal a presena de neutrfilos imaturos acima dos neutrfilos maturos. O desvio degenerativo esquerda indica que a medula ssea, para o momento, tem um esgotamento no compartimento de reserva de neutrfilos segmentados e conseqentemente ocorre a liberao de clulas imaturas, ultrapassando os neutrfilos maturos. Em muitas espcies isso um sinal de prognstico desfavorvel que requer um rigoroso protocolo teraputico. No entanto, em bovinos o desvio esquerda degenerativo comum durante o estgio inicial de doenas infecciosas ou inflamatrias hiperagudas a agudas. Isso ocorre, provavelmente, devido ao compartimento de reserva da medula ssea de bovinos ter um suprimento limitado de neutrfilos maturos. Sendo assim, o desvio esquerda degenerativo

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em bovinos no deve ser considerado como um sinal srio no prognstico, a no ser que este tenha persistido por vrios dias.

Desvio direita
a presena no sangue circulante de vrios neutrfilos hipersegmentados, isto ; neutrfilos com mais de 5 lbulos. A hipersegmentao nuclear ocorre devido a presena circulante de corticosterides, tanto endgenos como exgenos. A deficincia da Vitamina B12 tambm pode levar a hipersegmentao, mas uma condio muito rara. Reao leucemide A reao leucemide geralmente uma leucocitose reativa, consistindo de uma alta contagem de leuccitos com uma contagem absoluta de um tipo de leuccito, ou tambm um marcado a extremo desvio esquerda sugestivo de leucemia. Portanto, um processo patolgico benigno, embora se assemelhe a leucemia granuloctica. Geralmente a reao leucemide envolvendo os neutrfilos similar ao desvio esquerda regenerativo e, infreqentemente, um severo desvio esquerda degenerativo pode dar esta indicao. Ocasionalmente, o quadro sangneo leucemide pode envolver outros tipos de leuccitos, como os linfcitos ou eosinfilos. Os resultados laboratoriais e a avaliao do paciente revelam que a doena no uma leucemia. Exemplos de reaes leucemides: um extremo desvio esquerda regenerativo visto na piometra e peritonite ativa crnica em ces; marcada linfocitose em condies supurativas crnicas como, por exemplo, reticulite traumtica.

Neutrfilos Normal do co: ausncia de mielcitos e metamielcitos, bastonetes: 0-3% (0-300/ l), neutrfilos: 60-77% (3 a 11.500/ l).

Tabela 16. Alteraes orgnicas que levam a neutrofilia e neutropenia. Leucocitose associada a Leucopenia associada a neutrofilia neutropenia Infeces locais ou Degenerao generalizadas Depresso Intoxicaes Depleo ou exausto Reabsoro tecidual Destruio Leucemias Corticides

A leucopenia por neutropenia pode ser causada por:

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Degenerao: o agente ou toxina compromete o compartimento de maturao, causando, portanto predominncia de clulas jovens. Depresso: principalmente doenas crnicas, comprometendo o compartimento de multiplicao, causando predominncia de clulas adultas. Depleo ou exausto: causada geralmente por consumo agudo, pelo grande afluxo de neutrfilos para o local de inflamao. Ocorre na mastite bovina e clica eqina. A leucopenia geralmente transitria, com neutrofilia responsiva em 2 a 4 dias. Destruio: caracterizada por pancitopenia, isto , diminuio de todas as clulas sanguneas. Causado por drogas, infeco bacteriana grave, etc.

Tabela 17. Causas de neutrofilias e neutropenias. Causas de Neutrofilia a) Fisiolgica Adrenalina Medo, excitao Glicocorticides endgenos e exgenos Trauma, dor Hiperadrenocorticismo Stress crnico severo b) Reativa Infeces estabelecida local ou sistmica Bacteriana Viral Fungos Parasitas Necrose tecidual Doenas imuno-mediadas Inflamatrias: artrite reumatide No inflamatria: anemia hemoltica autoimune Tumores Toxicidade por estrgeno (estgio inicial) c) Proliferativas Leucemias mielide aguda ou crnica Causas de Neutropenia a) Sobrevivncia diminuda Infeco bacteriana aguda Septicemia Toxemia Anafilaxia Hiperesplenismo b) Produo diminuda Infeces agudas: Bacteriana, viral e riqutsias (Ehrlichia) Drogas e qumicos txicos: ex. estrgeno Radiao Leucemia mielide ou linfide Hematopoiese cclica canina c) Granulopoiese ineficaz aumentada Vrus da leucemia felina Mieloptise Leucemia mielide ou linfide

O corticide atua na neutrofilia de diversas formas, como: Prolongando a meia vida dos neutrfilos Retendo mais tempo os neutrfilos na circulao, impedindo-os de sair para os tecidos Liberando os neutrfilos da parede vascular (Compartimento marginal) Liberando neutrfilos da medula ssea (Compartimento de armazenamento)

Eosinfilos Normal do co: 2 - 10 % (100 a 1.250/ l)

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Tabela 18. Doenas que levam a eosinofilia e eosinopenia. Causas de Eosinofilia Causas de Eosinopenia Perda tecidual crnica, especialmente Stress agudo (adrenalina) reaes alrgicas Stress crnico: glicocorticides endgenos Parasitismo: migrao / respiratrios / Hiperadrenocorticismo hipersensibilidade cutnea / microfilria Administrao de Esterides Hipoadrenocorticismo Inflamaes / Infeco agudas Terapia por drogas Estro em cadelas Predisposio racial Desordens purulentas Eosinofilia reacional

Linfcitos Normal do co: 12 - 30 % (1.000 a 4.800/ l) Os corticides (endgenos e exgenos) atuam de vrias formas na linfopenia e conseqente imunodepresso, tais como : Inibindo a mitose linfocitria Lisando linfcitos circulantes Reduzindo a liberao de histamina Estimulando o catabolismo protico, reduzindo formao de anticorpos Recirculao (circulao sangnea para a circulao linftica)
Tabela 19. Causas que levam a linfocitose e linfopenia. Causas de Linfocitose Idade : animais jovens Fisiolgico : medo / excitao / esforo Leucemia linfoctica ou linfossarcoma Vrus da imunodeficincia felina Estimulao antignica prolongada Infeco crnica Hipersensibilidade Doenas auto-imunes Ps-vacinao Hipoadrenocorticismo Terapia com drogas Causas de Linfopenia Efeitos esterides Hiperadenocorticismo Administrao de corticides / ACTH Estresse severo Infeco Sistmica Aguda Viral recente - cinomose Bacteriana severa ou incomum Toxoplasmose / Ehrlichiose / Leishmaniose Perda de linfcitos Leso de linfonodos Neoplasias Inflamao crnica Deficincia adquirida de linfcitos T (raro) Quimioterapia imunossupressiva Radiao Imunodeficincia hereditria (raro) Atrofia linfide Demodicose generalizada

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Basfilos Causas de basofilia Dermatites alrgicas Eczemas Reaes de hipersensibilidade

Moncitos Normal: co: 3 - 10 (150 a 1.350/ l)

gato: 1 - 4 (0 a 850/ l)

Causas de monocitose Efeitos esterides Hiperadrenocorticismo Administrao de esterides/ACTH Estresse severo piometra Inflamao/ infeco aguda ou crnica Doenas imunomediadas Outras doenas causando dano e necrose tecidual Produo reduzida de granulcitos Animais idosos. Leucemia monoctica ou mielomonoctica Alteraes morfolgicas e Incluses leucocitrias Muito embora haja os contadores automticos para facilitar a confeco do leucograma, a tecnologia eletrnica falha na identificao de anomalias, clulas imaturas da linhagem mielide e hemoparasitas; isto significa menos de 50% dos casos, mas tende a se agravar quando so utilizados laboratrios de anlises humanas. Deste modo torna-se indispensvel a experincia citolgica leitura do esfregao sanguneo. O Corpsculo de Baar um

prolongamento caracterstico do ncleo dos neutrfilos e representa a cromatina sexual da fmea, sendo de ocorrncia normal e de grande auxlio na conferncia do exame. Mudanas txicas dos neutrfilos Granulao txica e/ou difusa basofilia citoplasmtica Quando h continuado estmulo granulopoiese, pela extenso e/ou durao de um processo inflamatrio, h diminuio dos prazos de maturao das clulas precursoras, e os neutrfilos chegam ao sangue com persistncia da granulao primria, prpria dos pr-mielcitos, normalmente substituda pela granulao secundria, tnue e caracterstica. Os grnulos primrios so ricos em enzimas e coram-se em pardo escuro com os corantes usuais, e impropriamente denominados de granulaes txicas. A verdade que a presena destes grnulos exprime a durao e gravidade de um processo inflamatrio, mas exagero atribuir a esta ocorrncia um significado prognstico.

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Corpsculos de Dhle So reas, na periferia dos neutrfilos, nas quais houve liquefao do retculo endoplasmtico. So de rara ocorrncia, mas possuem interesse diagnstico por refletirem infeces graves e/ou sistmicas. Outras alteraes morfolgicas de neutrfilos Um defeito na granulocitopoiese pode levar formao de neutrfilos com morfologias anormais, como neutrfilos gigantes, bizarros, degenerados, com o ncleo em forma de rosca ou bilobado. Alteraes leucocitrias

Neutrfilos multisegmentados
No sangue normalmente predominam os neutrfilos com 2 a 4 lbulos nucleares, havendo poucos com cinco ou mais. O aumento ou predomnio de neutrfilos com mais de cinco lbulos -multisegmentados- visto quando h uma maior permanncia destes na circulao. Esta sobrevida intravascular prolongada caracteriza o desvio direita. Isto acontece em: Insuficincia renal crnica Neutrofilias de longa durao Tratamentos com corticides ou estresse Defeitos genticos raros ou em sndromes mieloproliferativas Degenerao em amostras envelhecidas

Plasmcitos
A ocorrncia de plasmcitos rara na circulao. A ativao de linfcitos na circulao deve-se principalmente a uma exacerbada resposta humoral ou a uma leucemia de clulas plasmocitrias (Mieloma Mltiplo). Corpsculo de Lentz: Corpsculo eosinoflico no citoplasma de leuccitos patognomnico da Cinomose canina. Ehrlichia canis: Mrula basoflica no interior de leuccitos caracteristica da erliquiose.

Fungos e protozorios:
Tabela 20. Fungos e protozorios no interor dos macrfagos. Leuccitos Trypanossoma Toxoplasma Hepatozoon Leishmania (raro) Histoplasma: fungo

Microfilrias Dirofilria imitis Diptalonema 54

Corpsculo de Baar

Bastonete e neutrfilo

Hipersegmentado

Moncito

Linfcito

Eosinfilo

Basfilo

Granulao txica

Linfcito reativo e atpico Corpsculo de Dohle

Leishmania

Corpsculo de Lentz

Ehrlichia canis

Trypanossoma

Hepatozoon

Histoplasma

Figura 14. Diferentes tipos de leuccitos, incluses, protozorios, riqutsias e fungos.

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AULA PRTICA - Leucograma


Determinao do nmero total de leuccitos Tomar o frasco com sangue mais anticoagulante e homogeneizar Com a pipeta de Thoma para glbulos brancos aspirar o sangue at a marca 0,5 Limpar o sangue da parte externa da pipeta com gaze. Diluir em seguida com soluo fisiolgica at a marca 11 Agitar, desprezar as primeiras gotas e encher a cmara de Neubauer por capilaridade. Contar os leuccitos dos quatro quadrados grande-angulares e multiplicar por 50 / l.
Clculo Lquido em cada quadrado primrio: 1/10mm3 4 quadrados primrios : 4/10mm3 Diluio da pipeta: 1/20 Profundidade: 1/10mm Portanto: 4/10 x 1/20 = 4/200 = 1/50 o fator 50 N total de leuccitos contados x 50 = N total de leuccitos / l Observao: 1 l = 1mm3

Diferencial leucocitrio

Esfregao
Preparar duas lminas novas e desengorduradas, sendo uma com os cantos arredondados. Homogeneizar o sangue no frasco de colheita fechado, por inverso, e colocar com o capilar do micro-hematcrito, antes de fech-lo, uma gota de sangue na lmina. Colocar a outra lmina (recortada) frente da gota de sangue, num ngulo de 45. Fazer um ligeiro movimento para trs at o sangue espalhar -se pela lmina. Com um movimento uniforme, para frente, fazer esta lmina deslizar sobre a outra. O sangue se estender por sobre a lmina, formando o esfregao. Agitar o esfregao at sec-lo completamente e identific-lo com lpis na borda mais espessa do esfregao.

Corantes
Leishman Colocar 20 gotas do corante e deixar agir por 3 minutos. Acrescentar 20 a 25 gotas de gua destilada tamponada (pH 7,2). Deixar agir por 15 minutos. Lavar em gua corrente e secar. Corante: Diluir 1,5 g de Eosina-Azul de Metileno segundo Leishmann em 1 litro de metanol. Colocar em banho-maria a 37 C por 24 horas.Acondicionar em frasco mbar. Maturar o corante deixando-o em repouso por 1 semana, ao abrigo da luz. Corrigir o pH, se necessrio, para 7,6. Filtrar e usar.

Contagem Observar o esfregao sanguneo corado em objetiva de 40x (aumento de 400x), verificando a contagem global aproximada por estimativa de leuccitos / campo. Visualizar tambm homogeneidade na distribuio leucocitria. Colocar em objetiva de imerso (aumento de 1000x) e realizar observao minuciosa da morfologia e colorao dos leuccitos e demais estruturas. Realizar contagem diferencial de leuccitos em forma de torre a cada 3 ou 4 campos, at atingir o total de 100 leuccitos (Figura 15).

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Transformar os dados relativos obtidos nesta contagem em dados absolutos, atravs da multiplicao dos percentuais parciais pelo nmero total de leuccitos.

Figura 14. Esfregao sangneo: contagem em torre.

BIBLIOGRAFIA
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2. AVALIAO DA HEMOSTASIA E DISTRBIOS DA COAGULAO


Andrea Pires dos Santos

Introduo A hemostasia o mecanismo que mantm a fluidez do sangue pelos vasos. Inclui o controle da hemorragia e a dissoluo do cogulo, por meio de eventos mecnicos e bioqumicos. Didaticamente pode-se dividir a hemostasia em primria, secundria e terciria, embora os trs processos estejam inter-relacionados. Na hemostasia primria, tem-se vasoconstrio local, adeso e agregao plaquetria com conseqente formao de um tampo plaquetrio inicial. A hemostasia secundria compreende uma srie de reaes em cascata cujo resultado final a formao de fibrina a partir do fibrinognio que confere estabilidade ao cogulo. A hemostasia terciria ou fibrinlise ativada na mesma ocasio da coagulao, existindo um equilbrio fisiolgico entre as mesmas, onde a plasmina atua degradando a fibrina e desfazendo o cogulo formado. Os vasos sanguneos tambm participam ativamente no processo de coagulao. Hemostasia primria Na hemostasia primria, tem-se vasoconstrio local, adeso e agregao plaquetria com conseqente formao de um tampo plaquetrio inicial. Por agregao plaquetria entende-se a fixao de uma plaqueta em outra e por adeso entende-se a fixao de uma plaqueta no vaso sanguneo. Para que ocorra a agregao e a adeso necessrio que esteja presente o fator de von Willebrand, uma glicoprotena que facilita estas aes. Cintica plaquetria As plaquetas so formadas na medula ssea, a partir da clula pluripotencial (steam cell), que vai dar origem a linha megacarioctica. A primeira clula da linha dos megacaricitos o megacarioblasto que vai formar o pr-megacaricito e megacaricito. A diviso celular cessa, mas a diviso nuclear continua. Pode-se encontrar clulas de 4 a 64 ncleos. Este processo chamado endomitose. As plaquetas so simplesmente pequenos fragmentos do citoplasma do megacaricito liberados na corrente sangnea. O citoplasma do megacaricito formado por longos pseudopodes que penetram nos sinusides das clulas endoteliais, liberando as plaquetas que so observadas como pequenos discos com grnulos vermelhos com 2 a 5 m de dimetro (em gatos o tamanho varivel) na circulao sangunea.

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Aps a estimulao as plaquetas aparecem entre 3 e 5 dias, e so controladas pela trombopoetina e tambm pela eritropoetina, possuem uma vida mdia em torno de 8 dias, sendo que cerca de um tero das plaquetas so seqestradas pelo bao. Valor normal em torno de 300 000/ l. Menos que 100 000/ l claramente uma trombocitopenia. 50 000/ l suficiente para prevenir hemorragia. 20 000/ l ocorre hemorragia espontnea.

Funo das plaquetas na hemostasia A funo primria das plaquetas a manuteno da hemostasia por meio da interao com as clulas endoteliais mantendo a integridade vascular. Adeso, agregao e liberao plaquetria so eventos que podem ocorrer simultaneamente ou independentemente, dependendo das condies de estmulos e circunstancias. O transtorno de qualquer um destes processos podem levar desordens hemorrgicas. A adeso a aderncia das plaquetas no local da leso. Esta adeso plaquetria ao endotlio efetuada por meio de seus receptores de superfcie para o colgeno e fator de Von Willebrand que, portanto o liga plaqueta ao colgeno do subendotlio.A agregao uma resposta bsica para a liberao de ADP na presena do clcio. A reao de liberao promove a agregao de agrupamentos plaquetrios e o acmulo de mais plaquetas e assim uma srie de reaes em cadeia para formar uma capa para deter a hemorragia. As plaquetas se aderem ao colgeno do sub-endotlio e liberam aminas vasoativas (serotoninas, catecolaminas, adrenalina e outras) que promovem a vaso constrio local com liberao de ADP (adenosina difosfato). O vaso contrai-se diminuindo o fluxo de sangue no local, causando a agregao das plaquetas em resposta a liberao de ADP na presena dos ons clcio, formando a primeira camada de plaquetas. Estas plaquetas agregadas liberam ATP (adenosina trifosfato) que degradado a ADP por ATPase que facilita a maior agregao das plaquetas no local da parede do vaso lesionado, sendo o suficiente para deter a hemorragia, constituindo a primeira fase da coagulao. As plaquetas tambm so importantes na coagulao sangnea por fornecer fosfolipdio plaquetrio (fator III plaquetrio que atua como um acelerador dos processos de coagulao) e por carrear vrios fatores de coagulao em suas superfcies. Aps a formao da primeira camada, inicia-se um depsito dos fatores de coagulao, culminando com a transformao do fibrinognio em fibrina, havendo um depsito sobre as plaquetas, formando um trombo que constitui a fase terminal da coagulao sangunea. Aps a formao do tampo hemosttico, iniciam-se os mecanismos fibrinolticos, que promovem a degradao enzimtica do fibrinognio e da fibrina e outros fatores da coagulao ativados, permitindo o reparo definitivo da injria vascular e o controle sobre os eventos

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trombticos. A manuteno do sangue dentro dos vasos e a sua fluidez por dentro dos mesmos mantida pelo equilbrio entre a coagulao e a fibrinlise. Hemostasia secundria A hemostasia secundria compreende uma srie de reaes em cascata cujo resultado final a formao de fibrina a partir do fibrinognio que consolida desse agregado e d estabilidade ao cogulo.

Cascata de coagulao A cascata de coagulao um mecanismo complexo de reaes seqenciais que culmina na formao de fibrina a partir do fibrinognio. O conjunto de protenas que atuam na coagulao (fatores de coagulao) esto representados na Tabela 1. Os fatores de coagulao so ativados predominantemente por exposio a tromboplastina tecidual, expressada na superfcie das clulas edoteliais ou fibroblastos extravasculares. Logo aps a ativao inicial, os fatores vo se ativando seqencialmente e amplificando o estmulo inicial por feedback. A cascata de coagulao tradicionalmente de divide em sistema intrnseco, extrnseco e comum (Figura 1).
Tabela 1. Fatores de coagulao. Fator I II III IV V VII VIII:C IX X XI Nome Fibrinognio Protrombina Tromboplastina tecidual Clcio Proacelerina Proconvertina Fator anti-hemoflico Fator de Christmas Fator de Stuard - Prower Antecedente da tromboplastina do plasma Fator de Hageman Estabilizador da fibrina Fator de Fletcher Local de sntese Fgado Fgado, macrfagos Constituinte de fibroblastos e membrana plasmtica de clulas musculares lisas Fgado, macrfagos Fgado, macrfagos Fgado Fgado Fgado, macrfagos Fgado (provavelmente) Fgado (provavelmente) Fgado (provavelmente) Fgado (provavelmente) Fgado (provavelmente) Meia vida plasmtica 1,5 6,3 dias 2,1 4,4 dias

15 24 horas 1 6 horas 2,9 dias 24 horas 32 48 horas 30 horas 18 52 horas 4,5 7,0 dias 35 horas 6,5 dias

XII XIII Precalicreina Cininognio de alto Fator de Fitzgerald peso molecular Fonte: Thrall et al. (2004)

O sistema intrnseco est via de ativao se inicia com a parede vascular traumatizada, com o contado do sangue com o colgeno do sub-endotlio ou corpo estranho. Neste momento ocorre a ativao plaquetria e do fator XII que se ativa e subseqentemente ativa o fator XI

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(para essa reao necessria presena de cininognio de alto peso molecular e precalicreina) este ativa o fator IX que ativa o fator VIII. O sistema extrnseco se inicia por leso vascular ou tecido extravascular, que contm uma protena de membrana denominada fator tecidual. O tecido danificado tambm libera tromboplastina o que ativa o fator VII (sistema extrnseco da coagulao). A ativao destes fatores, mais a presena de fosfolipdios plaquetrios e clcio do incio ao sistema comum, pela ativao do fator X que em conjunto com esses fatores ativam a protrombina (fator II) que se converte em trombina (fator II ativado) que converte o fibrinognio em fibrina. Aps esta converso, o fator XIII confere estabilidade a esta fibrina. A trombina um potente pr-coagulante capaz de acelerar as reaes da cascata formando grandes quantidades de fibrina.

SISTEMA INTRNSECO Colgeno do subendotlio XII Hangeman XI Tromboplastina plasmtica IX Christmas VIII Anti-hemoltico PF-3 IV - Clcio X Stuard V Fator Lbil Clcio II Protrombina I Fibrinognio FIBRINA Trombina

SISTEMA EXTRNSECO

III Tromboplastina tecidual

VII - Proconvertina SISTEMA COMUM

XIII

FIBRINA ESTVEL

Figura 1. Esquema simplificado da cascata de coagulao.

Recentemente tem se sugerido um novo esquema onde a ativao inicial pela tromboplastina tecidual forma uma quantidade de trombina e est daria incio a amplificao e ativao dos sistemas intrnseco, extrnseco e comum. A vitamina K essencial na formao de vrias protenas da coagulao. Os fatores chamados vitamina K dependentes so: II, VII, IX e X que esto distribuidos nos trs sistemas

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da cascata de coagulao. So sintetizados em uma forma afuncional (acarboxiladas) e sofrem uma reao de carboxilao em que a vitamina K participa como cofator, produzindo centro de ligao para o clcio, necessrio para sua funo normal. Durante esta reao a vitamina K convertida num metablito inativo (vitamina K-epxido). A enzima epxido-redutase responsvel pela reciclagem deste metablito, convertendo-o para a forma ativa, razo pela qual a necessidade diria de vitamina K pequena. Desordens na cascata de coagulao conferem ao animal uma coagulopatia. Hemostasia terciria A fibrinlise ativada na mesma ocasio da coagulao, existindo um equilbrio fisiolgico entre as mesmas. A plasmina atua localmente no interior do cogulo e imediatamente removida da circulao por lquidos orgnicos sistmicos. Os produtos de degradao da fibrina (PDFs), formados pela ao da plasmina sobre a fibrina, so normalmente removidos por macrfagos. Vaso sanguneo O endotlio inerte, mas quando exposto ao colgeno sub-endotelial, ativa os mecanismos hemostticos: ativando a adeso e agregao plaquetria e em seguida a ativao do fator XII (sistema intrnseco da coagulao). Alm disso, as clulas endoteliais so ricas em tromboplastina que ativam o sistema extrnseco de coagulao. Desordens vasculares podem ocorrer por deficincia de colgeno ou extensa leso vascular e podem ser congnitas (raro) ou adquiridas. Dentre as adquiridas destacam-se: Desordens inflamatrias como as causadas por bactria, vrus, etc. Desordem imune. Tumores, trauma. O diagnstico de desordem vascular feito quando os problemas plaquetrios e de coagulao so descartados. Desordens vasculares podem ocorrer por problemas congnitos ou adquiridos como em uma extensa leso por desordens inflamatrias, imunes ou tumores. No existe tcnica laboratorial que mea o status funcional dos vasos sanguneos diretamente, suspeita-se de distrbios vasculares quando todos os ndices da coagulao esto normais. Testes laboratoriais mais usados para desordens hemostticas A avaliao para as desordens hemostticas depende de uma histria clinica detalhada e bom exame fsico. Na histria clinica deve-se destacar histria de sangramentos, trauma e cirurgia e levar em considerao a idade, raa, sexo e terapia com drogas. No exame fsico deve-se observar a natureza do sangramento (tipo de hemorragia).

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Contagem de plaquetas a avaliao quantitativa das plaquetas. Valor acima da referncia da espcie confere uma trombocitose e valores abaixo, uma trombocitopenia. A contagem pode ser automtica ou em um hemocitmetro. A amostra deve ser coletada de forma no traumtica, pois o trauma pode causar a ativao plaquetria com formao de agregados que podem falsamente diminuir o nmero de plaquetas. Requer amostra com EDTA (etileno diamino tetraacetato de sdio ou potssio). A contagem em hemocitmetro possui alto coeficiente de erro (20 a 25%). A contagem em gatos difcil devido ao grande tamanho das plaquetas. As plaquetas podem ser estimadas pela observao no esfregao sanguneo com objetiva de 100x. Deve-se contar no mnimo 10 campos e fazer uma mdia: 10 a 20 plaquetas/campo = normal 4 a 10 plaquetas/campo = trombocitopenia < que 4 plaquetas/campo = severa trombocitopenia 1 plaqueta/campo = 15.000 a 20.000 plaquetas/ L A avaliao da morfologia das plaquetas tambm deve ser feita, a presena de macroplaquetas ou agregados plaquetrios exerce influncia sobre a contagem e funo plaquetria e por isso devem ser descritos no laudo. Valores normais de plaquetas/L:

Co: 200.000 a 500.000 Gato: 200.000 a 500.000 Eqino: 100.000 a 600.000 Bovino: 200.000 a 800.000.

Avaliao de medula ssea Pode ser indicada em casos de trombocitopenia e trombocitose para a investigao da causa, principalmente nos casos de trombocitopenia persistente e pancitopenia. A avaliao dos megacaricitos na medula ssea baseada em seu nmero por espcula e adequada maturao. O nmero normal de megacaricitos, em campo de pequeno aumento em um co de um a trs. Para avaliao do estgio de maturao, leva-se em considerao trs grupos de clulas: megacarioblastos, pr-megacaricitos e megacaricitos. Em um co normal, cerca de 70 a 84% da srie megacarioctica so clulas maduras e 16 a 30% imaturas (megacarioblastos e prmegacaricitos). Quando os megacaricitos esto presentes, os possveis mecanismos da trombocitopenia so: destruio ou consumo de plaquetas. Nestes casos o nmero pode estar aumentado. No caso dos megacaricitos estarem ausentes ou com maturao anormal, os provveis mecanismos so: produo diminuda ou destruio de megacaricitos. A avaliao da medula ssea contra indicada nos casos de coagulopatias severas. Pode ser indicada em casos de trombocitopenia para procurar o mecanismo.

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Megacaricitos presentes: destruio ou consumo de plaquetas (devem estar aumentadas). Megacaricitos ausentes com maturao anormal: Produo diminuda ou destruio de megacaricitos. Teste de funo plaquetria: tempo de sangramento na mucosa oral (TSMO) uma prova de funo plaquetria e s tem valor diagnostico quando o nmero de plaquetas estiver acima de 75.000 plaquetas/ l. O procedimento consiste em um corte de 0,5 cm na mucosa oral onde se observa o tempo decorrido at a formao do primeiro cogulo. O tempo normal varia de 1,7 a 4,2 minutos. Se o nmero de plaquetas estiver diminudo, o TSMO estar prolongado. Se o animal estiver com anormalidades na hemostasia secundria, o TSMO estar normal, porm pode ocorrer sangramento posterior a formao do tampo inicial. Existem outras tcnicas para verificar o tempo de sangramento, como o corte da parte viva de uma unha (no co o sangramento deve cessar em 5 minutos e no gato em 3 minutos), plano nasal e gengiva. Tempo de coagulao ativado (TCa) Pode ser indicada em casos de trombocitopenia e trombocitose para a investigao da causa. Principalmente nos casos de trombocitopenia persistente e pancitopenia. A avaliao dos megacaricitos na medula ssea baseada em seu nmero por espcula e adequada maturao. O nmero normal de megacaricitos, em campo de pequeno aumento, em um co de um a trs. Para avaliao do estgio de maturao, levam-se em considerao trs grupos de clulas: megacarioblastos, pr-megacaricitos e megacaricitos. Em um co normal, cerca de 70 a 84% da srie megacarioctica so clulas maduras e 16 a 30% imaturas (megacarioblastos e pr-megacaricitos). Quando os megacaricitos esto presentes, os possveis mecanismos da trombocitopenia so: destruio ou consumo de plaquetas. Nestes casos o nmero pode estar aumentado. No caso dos megacaricitos estarem ausentes ou com maturao anormal, os provveis mecanismos so: produo diminuda ou destruio de megacaricitos.

A avaliao da medula ssea contra indicada nos casos de coagulopatias severas.


Tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPa) O TTPa (ou tempo de cefalina) recebe a denominao "tromboplastina parcial" porque ele efetuado com o emprego da cefalina, a qual parte da tromboplastina, aps extrao por meio de clorofrmio.

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O TTPa o tempo que o plasma leva para formar cogulo de fibrina aps a mistura com cefalina (tromboplastina parcial), caulim (ativa fator XII) e clcio. A cefalina um substituto do fator plaquetrio. Avalia o sistema intrnseco e comum. Requer amostra em citrato de sdio a 3,8% na relao de 1:9 (anticoagulante:sangue) e plasma separado por centrifugao. Este teste mede a deficincia de fatores abaixo de 30%. Valores normais de TTPa (segundos): Co: 6 - 16 Gato: 9 - 20 Eqino: 27 45 Bovino: 20 35 Muitos tipos de ativadores de contato so usados comercialmente para o TTPa, deve-se, portanto, proceder este teste em duplicata e de preferncia concomitantemente com um animal normal. Alm de se estabelecer valores de referncia locais. A coleta no traumtica extremamente importante, pois a contaminao com tromboplastina tecidual pode prolongar o resultado do teste pela ativao do sistema extrnseco. A atividade do fator XIII da coagulao no avaliada neste teste. Esperam-se valores de TTPa prolongados em hemoflicos, deficincia de fatores XII, coagulao intravascular disseminada (CID), venenos cumarnicos e doena de Von Willebrand (dependendo da severidade). Tempo de protrombina (TP) O TP avalia o sistema extrnseco e comum pela adio de um fator tecidual, estimulando a coagulao pela via extrnseca. Os procedimentos com a amostra so semelhantes aos do TTPa. Mtodo: Faz-se a adio de tromboplastina tecidual (fator extrnseco) conseqente recalcificao da amostra, cronometrando o tempo at a formao do cogulo de fibrina.

Valores normais de TP (segundos):


Os valores Co: 6,4 7,4 Gato: 7 11,5 Eqino: 9,5 11,5 de referncia variam na literatura, deve-se, portanto, proceder este teste em

duplicata e estabelecer valores de referncia locais. Pode-se usar um paciente controle. Se a diferena for de mais de 5 segundos tem-se um problema de coagulao. Espera-se TP prolongado em deficincia do fator VII, CID, veneno cumarnico e deficincia de fator I (fibrinognio abaixo de 50mg/dL). Produtos de degradao da fibrina (PDFs) A fibrina quebrada pela plasmina em fragmentos. O aumento de PDFs indicam excessiva fibrinlise.

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Mtodo: aglutinao em ltex por kits comercias. Usado par diagnstico de coagulao intravascular disseminada. Tambm aumentado aps cirurgia.

Valores normais de PDF ( g/mL):


Co: < 40 Gato: < 8 Eqino: < 16.

Fibrinognio O fibrinognio uma protena de coagulao (fator I da coagulao) produzida pelo fgado. Tambm chamado de protena de fase aguda porque sua concentrao no sangue aumenta rapidamente em resposta a processos inflamatrios. A amostra de sangue deve ser coletada com EDTA 10%. O mtodo consiste no aquecimento do plasma a 56-58C por 3 minutos e posterior centrifugao. O aquecimento do plasma precipita o fibrinognio e a centrifugao o separa dos demais constituintes plasmticos. Faz-se ento a leitura das protenas plasmticas totais por refratometria e posteriormente a leitura do plasma com o fibrinognio precipitado. A diferena dos valores obtidos refere-se a concentrao de fibrinognio plasmtico. Est diminudo na CID. Valores normais de fibrinognio (g/L): Co: 1 5 Gato: 0,5 3 Cavalo: 1 4 Bovinos: 2 7 Distrbios da coagulao Desordens plaquetrias A avaliao das plaquetas realizada em dois nveis: quantitativos e qualitativos. Para avaliao quantitativa faz-se a contagem de plaquetas. A trombocitopenia (nmero reduzido de plaquetas) a anormalidade mais comum das plaquetas. Desordens plaquetrias quantitativas Trombocitose o aumento do nmero de plaquetas acima do valor de referncia para a espcie. A trombocitose pode ser reativa ou primria e ocorre com menos freqncia. Reativa: doena crnica, deficincia de ferro, hiperadrenocorticismo, neoplasias, desordens no trato digestivo e endcrinas. Transitria: mobilizao esplnica ou pulmonar (exerccio). Trombocitose maligna: leucemia granuloctica, megacarioctica.

Trombocitopenia a diminuio do nmero de plaquetas abaixo do valor de referncia para a espcie A trombocitopenia a anormalidade mais comum encontrada nas plaquetas e provavelmente a

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causa mais comum de ditese hemorrgica. So cinco os mecanismos que podem levar a uma trombocitopenia: 1. Produo diminuda de plaquetas: Os megacaricitos se encontram reduzidos. indicado fazer uma avaliao de medula ssea para diagnstico diferencial. Dentre as causas mais comuns, esto as seguintes: - Mieloptise (geralmente pancitopenia) Clulas neoplsicas Mielofibrose - Drogas (geralmente pancitopenia). a. Quimioterapia antagonistas do cido flico (vitamina B12). b. Excesso de estrgeno megacariocitopoiese reduzida. c. Antibiticos e agentes anti-fngicos. - Estgios crnicos de doenas ricketsiais tais como erlichiose canina (geralmente leva a pancitopenia). Destruio imunomediada de precursores megacariocticos. - Reduo seletiva de plaquetas pancitopenia pode no estar presente. Produo defeituosa de trombopoetina. Hereditariedade ou congenicidade. 2. Destruio de plaquetas: Os megacaricitos se encontram aumentados. indicado fazer uma avaliao de medula ssea para diagnstico diferencial de problema de produo. Dentre as causas mais comuns, esto: - Infeco: Produtos de endotoxinas cuja causa aparente agregao e renovao, erlichiose, bactria, vrus. - Tumores Hemangioma / hemangiossarcoma - Imuno-mediada ou auto-imune. - Drogas podem servir como carreadoras de protenas as quais revestem as plaquetas e so reconhecidas por anticorpos. Removidas pelo sistema RE. 3. Consumo de plaquetas: como na coagulao intravascular disseminada (CID). No condio primria e ocorre secundariamente a uma ampla variedade doenas. Atividade fibrinoltica produz quebra da fibrina aumentando os produtos de degradao (PDF) que tm potente atividade anticoagulante, aumentando a ditese. Os megacaricitos se encontram aumentados. 4. Seqestro ou distribuio anormal de plaquetas: Megacaricitos aumentados na medula ssea. Esplenomegalia. Hepatomegalia. Hipotermia Endotoxemia Neoplasia 5. Perda de plaquetas Megacaricitos aumentados na medula ssea: Perda massiva de sangue. Transfuso incompatvel.

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Desordens plaquetrias qualitativas Trombocitopatia a falha no mecanismo de aderncia (plaqueta/vaso), agragao (plaqueta/plaqueta) ou uma falha na liberao de constituintes intracelulares ou qualquer combinao destes fatores. Trombocitopatias podem ser congnitas ou adquiridas e o nmero de plaquetas pode estar normal. 1. Trombocitopatias congnitas a. Doena de von Willebrand: pode afetar vrias espcies animais e o homem. O fator de von Willebrand uma glicoprotena multimrica produzida por megacaricitos e clulas endoteliais que facilita a adeso da plaqueta ao colgeno e vaso sanguneo, a agregao plaquetria e, no plasma se associa com fator VIII estabilizando este fator e aumentando seu tempo de circulao. a mais comum das desordens de sangramento hereditrias, sendo reconhecidas em mais de 54 raas de ces. Existem trs tipos da doena: Tipo I: multmeros normais, mas diminudos. Severidade varivel Forma mais comum Comum em dobermans Tipo II: Multmeros com defeito de funo Severidade varivel Comum em Ponter alemo Tipo III: forma mais severa Comum no Scottish terrier b. Trombopatia trombastnica canina: Falha na agregao. Observada em Otterhounds, Scottish Terriers, Foxhounds. c. Trombopatia do Basset Hound: Falha na agregao. d. Sndrome do Chediak-Higashi: Agregao plaquetria diminuda. Observada em bovinos e gatos. 2- Trombocitopatias adquiridas So multifatoriais, mas essencialmente envolve defeitos de ativao, aderncia, agregao e reao de liberao por causa de substncias anormais no plasma ou anormalidade estrutural adquirida. a. Doena renal com uremia: adesividade reduzida ao endotlio. Esta anormalidade das plaquetas se deve aos metablitos da uria como o cido guanidino succnico e fenlico b. Coagulao intravascular disseminada: Produtos de degradao da fibrina envolvem as plaquetas e reduzem a sua aderncia e bloqueiam receptores de fibrinognio, reduzindo a agregao. c. Disproteinemias (macroglobulinemia) ou mieloma mltiplo: Afetam a membrana da plaqueta diminuindo a aderncia. d. Drogas: Anti-inflamatrios no esteroidais. A aspirina gera uma inibio irreversvel das plaquetas porque inibe tromboxano A2 (inicia a agregao) e a funo plaquetria fica dependente de uma nova produo. Drogas como Buprofen, fenilbutazona, indontacin causam inibio plaquetria reversvel. Sulfonamidas, penicilinas, tranqilizantes prozamnicos causam respostas variveis.

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A avaliao para as desordens hemostticas depende de uma histria clnica detalhada e de um bom exame fsico. Na histria clnica deve-se destacar histria de sangramentos, trauma, cirurgia e levar em considerao idade, sexo, raa e terapia com drogas. No exame fsico devese observar o tipo de sangramento. Hemorragias superficiais como petquias e equimoses so sinais de problemas na hemostasia primria (trombocitopenia ou trombocitopatia) ou leso vascular. Hemorragias, hematomas e hemartroses so provveis sinais de problemas na hemostasia secundria, ou seja, nos fatores de coagulao. No caso de petquias e equimoses, aconselha-se a seguir os seguintes passos: 1. Contagem de plaquetas: no caso de uma trombocitopenia, procurar a causa. Os possveis mecanismos para a trombocitopenia so: produo diminuda, destruio, consumo, seqestro ou perda. Para diferenciar problemas de produo pode-se fazer aspirado de medula ssea e observar o nmero e morfologia dos megacaricitos. No caso das plaquetas estarem em nmero normal, seguir o passo 2. 2. Tempo de sangramento na mucosa oral: no caso do tempo estar prolongado, tem-se uma trombocitopatia, deve-se, portanto diferencia-la em congnita ou adquirida. No caso do tempo de sangramento estar normal, deve-se suspeitar de desordem vascular. Coagulopatias As coagulopatias podem ser hereditrias ou adquiridas. 1. Coagulopatias hereditrias So relacionadas a problemas de seleo gentica. Sempre suspeitar em animais jovens, apresentando ditese hemorrgica. 1.1. Hemofilia A Sangramento severo em ces, cavalos, gatos e bovinos Hereford. Somente machos desenvolvem a doena, mas as fmeas so portadoras. Sinais clnicos: hemartrose, hematomas e sangramento pelo trato gastrintestinal e urogenital. Ocorre pela perda do fator VIII na via transplacentria. Afeta animais jovens. Tratamento: Transfuso de sangue fresco, plasma ou crioprecipitado. A argeninavasopressina sinttica (DDAVP) pode promover a liberao do fator VIII dos hepatcitos para a circulao. Diagnstico: Tempo de sangramento: normal (diferente da doena de von Willebrand). TP: normal. TTPa: prolongado. 1.2. Doena de von Willebrand No deficincia de Fator VIII, esse apenas no se estabiliza. a mais comum das coagulopatias hereditrias (54 raas). Diagnstico: Tempo de sangramento: prolongado. TP: normal. TTPa: pode estar prolongado. 1.3. Hemofilia B Fator IX Ocorre em ces e gatos (raro).

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Afeta somente machos. Diagnstico: TP: normal. TTPa: prolongado. 1.4. Deficincia de fator VII Sistema extrnseco. Afeta Beagles e vrias outras raas. Diagnstico: TP: prolongado TTPa: normal 1.5. Deficincia de fator XII Sistema intrnseco. Afeta Poodles, Pointer Alemo, Sharpei e gatos. Diagnstico: TP: normal. TTPa: prolongado. 1.6. Deficincia de fator XI Sistema intrnseco. Afeta ces e cabras. Diagnstico: TP: normal. TTPa: prolongado. 1.7. Deficincia de fator X Sistema comum. Afeta Cocker Spaniel e Jack Russel Terrier Diagnstico: TP: prolongado. TTPa: prolongado.

2. Coagulopatias adquiridas 2.1. Deficincia de vitamina K Os fatores II, VII, IX e X so vitamina K dependentes, ou seja, exigem vitamina K para sua formao. Maior causa: Antagonistas da vitamina K Rodenticidas (ex: Warfarina e cumarnicos) Outras causas: Deficincia de sais biliares no intestino impede a absoro da vitamina K que lipossolvel. Doena heptica pode resultar na falta de utilizao da vitamina. Diagnstico: TP: prolongado TTPa: prolongado

2.2. Doena heptica


O fgado o local de sntese de quase todos os fatores de coagulao. A meia vida do fator VII mais curta do que as dos demais, por isso a determinao de sua atividade utilizada como auxlio diagnstico de doena heptica aguda ou crnica. Na doena heptica, fatores dos trs sistemas (intrnseco, extrnseco e comum) so afetados, porm este quadro observado

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somente em problemas severos. 50% dos gatos com lipidose heptica apresentam alteraes nos fatores de coagulao. Para o diagnstico da doena heptica podem ser utilizados os testes de funo heptica, bipsia ou puno aspirativa com agulha fina. Diagnstico: TP e TTPa: prolongados. 2.3. Coagulao intravascular disseminada (CID) um distrbio na qual ocorre trombose intravascular difusa na microvasculatura. uma doena secundria de consumo, deve-se sempre buscar sua causa. Esta se manifesta como um defeito hemosttico causado pela reduo dos fatores da coagulao e plaquetas, resultando da sua utilizao no processo trombtico. As propriedades anticoagulantes dos PDFs gerados pela ativao do sistema fibrinoltico tambm contribuem para o defeito hemosttico. Vrias doenas ativam a cascata de coagulao, consumindo fatores e plaquetas. Principais fatores V, VII, e I (fibrinognio). Causas: Aumento do contato ativao do sistema intrnseco Viremia. Endotoxemia. Aumento da Tromboplastina tecidual - ativa sistema extrnseco. Trauma / necrose tecidual. Hemlise intravascular. Conseqncias da coagulao intravascular disseminada: Sangramento. Disfuno de rgos pela deposio de fibrina. Anemia hemoltica. Diagnstico: TP: prolongado TTPa / TCa: prolongado PDF: aumentado Contagem de Plaquetas: diminuda Tempo de sangramento: prolongado Fibrinognio: diminudo Fragmentos de eritrcitos podem ser vistos no esfregao sanguneo. A hemostasia o resultado do bom funcionamento das plaquetas, fatores de coagulao e vasos sanguneos trabalhando em conjunto para manter a fluidez do sangue e reparar leses vasculares. Problemas em qualquer ponto deste balano podem resultar em coagulao excessiva (trombose) ou hemostasia inadequada (sangramento). O uso dos testes de coagulao tem por objetivo a procura da causa do problema hemosttico adicionalmente a uma boa avaliao clnica. BIBLIOGRAFIA
DUCAN, R. J., PRASSE, K. W., & MAHAFFEY, E. A. Veterinary Laboratory Medicine: Clinical Patholog.y 3rd ed., Ames; Iowa State University Press, 1994.

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3. TRANSFUSO SANGNEA EM VETERINRIA

Luciana de Almeida Lacerda

O histrico da transfuso sangnea

A prtica da transfuso sangnea teve incio no sculo passado na medicina humana, e vem evoluindo desde ento. A primeira transfuso sangnea entre seres humanos de que se tem registro ocorreu no sculo XVII. Entretanto, foi somente no incio do sculo XX que as conquistas tecnolgicas permitiram o uso mais difundido deste recurso. O reconhecimento das diferenas entre os indivduos para a escolha do doador, o uso dos anticoagulantes durante a coleta e o domnio das tcnicas de esterilizao foram fundamentais para esta evoluo. O fracionamento do sangue, que permite o uso isolado de cada um de seus elementos, e a identificao das doenas transmissveis representam os avanos mais recentes desta forma de tratamento. Na medicina veterinria, o processo foi um pouco mais lento, mas o interesse pela medicina transfusional tem crescido nestes ltimos anos na medicina veterinria e atualmente existem grandes bancos de sangue veterinrios em vrios pases do mundo que tornaram possveis a prtica da medicina transfusional veterinria de alta qualidade. Entretanto, sabe-se que isto no depende somente da disponibilidade de componentes sangneos e do uso adequado de cada um deles, mas tambm da qualidade destes componentes. Respeitar normas adequadas para coleta, processamento e armazenamento a melhor maneira de alcanar os melhores resultados. No Brasil, existem servios de hemoterapia veterinria pouco especializados e recentemente um banco de sangue veterinrio est se desenvolvendo na Faculdade de Medicina Veterinria e Zootecnia da Universidade de So Paulo (FMVZ USP). Modificaes na prtica da hemoterapia atualmente realizada nos hospitais veterinrios brasileiros so necessrias, como o estabelecimento de programas de doadores para melhor atender a demanda de cada hospital ou clnica veterinria, a separao de hemocomponentes para melhor atender cada caso em que exista a necessidade de transfuso sangnea e o controle de qualidade de seus produtos. A pesquisa nesta rea precisa ser motivada para possibilitar uma melhor capacitao de mdicos veterinrios nesta rea e melhorias na qualidade e rapidez do atendimento dos animais que necessitam do servio de hemoterapia.

Os tipos sangneos nos animais domsticos

Os grupos sangneos so definidos por antgenos espcie-especficos presentes na superfcie dos eritrcitos. A maior parte dos antgenos um componente integral de membrana composto por

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carboidratos complexos associados a lipdeos ou protenas inseridos na membrana eritrocitria, sendo denominados de glicolipdeos ou glicoprotenas. Entretanto, estes antgenos tambm podem estar presentes nas plaquetas, nos leuccitos, nos tecidos e em fludos (soro, saliva) do organismo. Contudo, a especificidade sorolgica nestes casos determinada pela estrutura do carboidrato. Os antgenos eritrocitrios podem variar em imunogenicidade e significado clnico e a deteco e a descrio destes ainda feita atravs de testes sorolgicos (anticorpos policlonais ou monoclonais). Na medicina veterinria, o significado clnico dos grupos sangneos est associado s reaes transfusionais e isoeritrlise neonatal. Os antgenos determinantes dos grupos sangneos, por serem marcadores genticos, podem tambm ser utilizados para resolver casos de disputa de paternidade, alm disso, mesmo que ainda no comprovado, podem estar envolvidos na anemia hemoltica imunomediada e podem servir como marcadores de doenas. Os anticorpos contra os antgenos presentes nos eritrcitos so componentes importantes envolvidos nas reaes transfusionais, so encontrados no plasma/soro e geralmente da classe IgM. Existem dois tipos associados transfuso: os anticorpos de ocorrncia natural e aqueles adquiridos aps a exposio a outro tipo sangneo. Os anticorpos de ocorrncia natural (aloanticorpos) esto presentes antes da exposio do animal a outro tipo sangneo. A sntese destes anticorpos se d pela exposio a organismos como plantas, bactrias, protozorios e helmintos, que possuem molculas similares ou idnticas aos antgenos encontrados na superfcie dos eritrcitos e por isso podem levar a uma reao cruzada. Os anticorpos adquiridos so formados apenas aps a exposio a outro tipo sangneo (seja por uma transfuso de sangue ou pela via transplacentria), quando ocorre a sensibilizao e imunoestimulao para sua produo. Estas diferenas entre anticorpos influenciam o tipo e a severidade de uma reao transfusional, ou seja, ela pode ser aguda ou tardia, severa ou moderada. Em humanos existe o sistema de grupos sangneos ABO, enquanto que os animais apresentam uma variedade de diferentes sistemas. O conhecimento sobre os tipos sangneos de diferentes espcies de grande importncia na medicina veterinria, visto que uma transfuso sangnea incompatvel pode resultar em uma reao transfusional hemoltica severa e at levar o animal morte, em alguns casos.

Caninos

Os tipos sangneos da espcie canina so estudados por diversos grupos de pesquisadores de diferentes pases. Nos Estados Unidos os tipos sangneos desta espcie do designados pela sigla DEA (dog erythrocyte antigen). Atualmente o co apresenta cinco grupos sangneos compostos por sete determinantes antignicos, ou seja, DEAs 1 (subgrupos 1.1, 1.2 e 1.3), 3, 4, 5, 7 (Tabela 1). Os 74

grupos DEA 6 e DEA 8 foram reconhecidos na Segunda Oficina Internacional em Imunogentica Canina, mas devido inexistncia de anti-soros para estes antgenos e dificuldade na obteno destes, tais anti-soros no tm sido estudados. Pesquisadores do Japo desenvolveram 16 anti-soros, mas a comparao entre os anti-soros japoneses e americanos apenas conseguiu detectar especificidade semelhante em poucos grupos. Alm disso, estes reagentes no so reconhecidos internacionalmente e no esto disponveis comercialmente. O grupo DEA 1 o mais estudado, sendo a prevalncia deste grupo bastante alta nos diferentes pases em ces de raa e mestios. A importncia deste grupo est no fato de que anticorpos naturais contra ele no foram documentados, no ocorrendo reaes nas primeiras transfuses. Porm, uma vez sensibilizados em transfuses prvias, os pacientes podem desenvolver reaes transfusionais hemolticas graves se receberem o mesmo tipo sangneo em uma transfuso seguinte. Um co pode apresentar qualquer combinao dos antgenos eritrocitrios, com exceo dos antgenos do sistema DEA 1 (por serem alelos do mesmo locus). Por exemplo: DEA 1.1, 3 e 4 ou DEA 1.1, 4 e 7 (Tabela 2).

Tabela 1. Prevalncia dos antgenos eritrocitrios caninos. Autor Swisher & Young (1961) Suzuki et al. (1975) Vriesendorp (1976) Ejima et al. (1986) Giger et al. (1995) Novais (1996) No de ces 1.1 332 217 31 545 224 150 40 36 37 44 33 51 Prevalncia do grupo sangneo DEA (%) 1.2 20 51 4 22 7 40 3 6 10 5 24 nd nd 4 98 nd 56 nd 97 nd 5 22 nd 8 nd nd nd 7 45 nd 31 nd 8 nd

nd = no descrito. Fonte: Novais (2003).

Os grupos DEA 3 e DEA 5 apresentam baixa incidncia na populao canina dos Estados Unidos (6% e 10%, respectivamente). Contudo, os ces da raa Greyhound apresentaram uma prevalncia de 23% para o grupo DEA 3. O fator DEA 7 no um antgeno integral de membrana eritrocitria. Acredita-se que seja secretado no plasma e adsorvido sobre a superfcie das hemcias. Estudos indicam que estes grupos podem provocar reaes transfusionais tardias, caracterizadas pelo seqestro e destruio das hemcias no bao em um perodo de 72 horas. Sendo assim, os ces positivos para estes grupos no devem ser usados como doadores de sangue, exceto para ces do mesmo tipo sangneo. A prevalncia do grupo DEA 4 bastante alta na populao canina, atingindo ndices de 98%. A 75

importncia deste grupo esta no fato de que anticorpos naturais anti-DEA 4 raramente ocorrem e, alm disso, os ces DEA 4 negativos sensibilizados no apresentam hemlise intra ou extravascular, aps terem sido transfundidos com sangue DEA 4 positivo, ou seja, os ces negativos para todos os outros grupos e positivos somente para o DEA 4 so considerados doadores universais. Sendo assim, os ces que s apresentam reaes positivas para o grupo DEA 4 so os melhores doadores de sangue. Apenas uma ocorrncia de reao transfusional hemoltica foi recentemente descrito na literatura.

Tabela 2. Freqncia de combinaes entre os grupos sangneos em ces domsticos mestios no Estado de So Paulo (n = 150). Combinaes de grupos sangneos DEA 1.1 e DEA 4 DEA 1.2/1.3 e DEA 4 DEA 1.1, DEA 3 e DEA 4 DEA 1.1, DEA 4 e DEA 7 DEA 1.2/1.3, DEA 4 e DEA 7 DEA 1.1, DEA 4 e DEA 5 DEA 1.1 DEA 1.2/1.3 DEA 4 e DEA 7 DEA 1.2/1.3, DEA 4 e DEA 5 DEA 1.1, DEA 3, DEA 4 e DEA 5 DEA 1.1 e DEA 3 DEA 1.2/1.3, DEA 3, DEA 4 e DEA 7 DEA 1.1, DEA 3, DEA 4 e DEA 7 DEA 1.2/1.3, DEA 3 e DEA 4 DEA 1.1, DEA 4, DEA 5 e DEA 7 Fonte: Novais (2003). No de animais 52 46 10 6 6 6 4 4 4 2 2 2 2 2 1 1 Porcentagem (%) 35 32,5 7 4 4 4 3 3 3 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5 0,6 0,6

Felinos

Os tipos sangneos dos felinos e as incompatibilidades entre eles, incluindo modo de herana gentica, severidade das reaes transfusionais, e a incidncia de isoeritrlise tm sido estudados durante as ltimas duas dcadas. O sistema de grupos sangneos em felinos possui trs tipos: A, B e AB, sendo que este ltimo muito raro. O tipo A dominante sobre B (na maior parte dos casos), gatos tipo A podem ser homozigotos AA ou heterozigotos AB. Os animais tipo B so sempre homozigotos BB. A exceo regra o grupo AB que muito raro, mas no qual parece que A e B expressam codominncia. Entretanto, os antgenos de superfcie eritrocitria deste sistema so diferentes daqueles do sistema 76

ABO humano. Os felinos apresentam anticorpos de ocorrncia natural (tambm conhecidos como aloanticorpos) contra o antgeno do tipo sangneo que no possuem e o teste de compatibilidade e a tipagem sangnea se tornam muito importantes na preveno de reaes transfusionais na prtica da clnica veterinria. Apenas o felino tipo AB no possui anticorpos de ocorrncia natural, portanto pode receber sangue de todos os tipos do sistema e conhecido como receptor universal entre os felinos. A incompatibilidade sangnea pode causar reaes potencialmente fatais sob duas circunstncias. A primeira a reao hemoltica transfusional, especialmente quando um gato tipo B recebe sangue tipo A. A meia-vida dos eritrcitos transfundidos entre gatos compatveis (isto , tipo A para tipo A ou tipo B para tipo B) de 29 a 39 dias. A transfuso de sangue tipo A em um gato tipo B resulta em uma rpida destruio do sangue do doador (meia-vida de 1,3 horas) com severos sinais clnicos (hipotenso, defeco, vmitos, hemoglobinemia, depresso neurolgica) e at a morte. A transfuso de sangue tipo B em um gato tipo A produz sinais clnicos leves, a meia-vida dos eritrcitos transfundidos de 2,1 dias. Devido presena destes anticorpos de ocorrncia natural, a prova de compatibilidade sangnea deve ser realizada antes da primeira transfuso (especialmente naquelas raas de alta incidncia do tipo B e AB). A segunda reao de incompatibilidade a isoeritrlise neonatal felina, que ocorre durante a fase de amamentao de filhotes tipo A ou AB, nascidos de uma fmea tipo B. A reao de incompatibilidade causada pelos aloanticorpos anti-A da fmea que so transferidos aos filhotes pelo colostro ou pelo leite durante o primeiro dia de vida e que destroem os eritrcitos tipo A ou AB. Os filhotes podem morrer dentro de poucos dias. Estudos realizados no mundo todo revelam que o tipo A o tipo sangneo mais comum. Entretanto, observou-se que a proporo dos gatos tipo B varia consideravelmente de acordo com a regio geogrfica (Tabela 3). A freqncia de gatos tipo B tambm varia muito entre raas (Tabela 4), enquanto que gatos tipo AB so raros. Estudos recentes demonstraram que os felinos selvagens possuem os mesmo tipos sangneos dos gatos domsticos. O tipo A de longe o tipo mais prevalente em felinos, mas entre certas raas puras, a freqncia do tipo B bem mais alta (Devon Rex, British Shorthair, Exotic Shorthair, Turkish Van and Turkish Angora), apesar das percentagens variarem de zero a 60% dependendo da raa. Entre os SRDs a porcentagem alta do tipo B foi visto em algumas regies geogrficas dos EUA. O conhecimento da distribuio dos grupos sangneos na populao local de felinos pode auxiliar na determinao do risco da ocorrncia de reaes transfusionais, enquanto que o conhecimento dos ttulos de aloanticorpos pode auxiliar na determinao da severidade destas reaes. Entretanto, parece que a incidncia de reaes transfusionais de significado clnico baixa, e isto provavelmente reflete uma falha no reconhecimento das complicaes resultantes de uma 77

transfuso. essencial que se faa um teste de compatibilidade entre doador e receptor antes da primeira transfuso em felinos. Os mtodos mais indicados para se assegurar da compatibilidade entre doador e receptor so ambos: prova cruzada (teste de compatibilidade sangnea) e a tipagem sangnea.

Teste de compatibilidade sangnea (prova cruzada)

A compatibilidade entre o sangue de dois indivduos determinada atravs a chamada "Prova Cruzada". O sangue do doador testado contra o sangue do receptor, para verificar a ocorrncia de aglutinao das hemcias (formao de grumos - aglutinao), indicativa de incompatibilidade.

Tabela 3. Freqncia de tipos sangneos em gatos domsticos de diferentes pases. Tipo A Pas Austrlia Austria Inglatera Finlndia Frana Alemanha Holanda Itlia Japo Esccia 137 Sua Estados Unidos 3785 Fonte: Knottenbelt (2002). 98,1 1,7 0,1 Giger et al (1991b) 1018 1072 87,6 99,6 99,7 8,0 0,4 0,3 4,4 0 0 Knottenbelt et al (1999) Giger et al (1992) Giger et al (1989) N (%) 1895 101 477 61 350 600 95 401 265 70 73,3 97 97,1 100 85,1 94,0 95,8 88,8 89,3 97,1 (%) 26,3 3 2,9 0 14,9 6,0 3,1 11,2 1,0 2,9 (%) 0,4 0 0 0 0 0 1,1 0 9,7 0 Auer & Bell (1981) Giger et al (1992) Holmes (1950) Giger et al (1992) Eyquem et al (1962) Giger et al (1992) Giger et al (1992) Giger et al (1992) Ejima et al (1986) Giger et al (1992) Tipo B Tipo AB Referncias

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Tabela 4. Freqncia de grupos sangneos em quatro raas de felinos de diferentes pases. Tipo A Raa Pas N (%) Americano plo curto Estados Unidos Estados Unidos Ingls plo curto Reino Unido Estados Unidos Reino Unido Persa Itlia Alemanha Estados Unidos Siams Reino Unido Fonte: Knottenbelt (2002). 4 100 38 25 99 97,4 84,0 100 2,6 16,0 105 170 16 41,0 75,9 87,5 57,1 24,1 12,5 1.9 15 85 100 41,2 58,8 (%) (%) Tipo B Tipo AB

A prova cruzada completa realizada em duas etapas. A 1a etapa ou Major Crossmatching consiste em misturar uma pequena quantidade do sangue total ou suspenso de hemcias do sangue doador com uma pequena quantidade de soro do receptor. O resultado positivo dado a partir da observao de grumos (macroscopicamente) e a aglutinao dos eritrcitos (microscopicamente). Esta a etapa considerada a mais importante. Na 2a etapa ou Minor Crossmatching, uma pequena quantidade de sangue total ou uma suspenso de hemcias do sangue do receptor misturada com o soro do doador e, do mesmo modo, pesquisa-se a formao de grumos de hemcias. A ausncia de grumos nas duas etapas da prova cruzada significa que a transfuso pode ser realizada. Ao realizar a prova, deve-se evitar hemlise durante a coleta e o anticoagulante (EDTA) deve estar em volume adequado para no diluir a amostra. Laboratrios de referncia, em geral, realizam o teste completo em tubos a temperatura ambiente, a 37oC e a 4oC (opcional), incluindo o teste de antiglobulina canina polivalente (Teste de Coombs indireto). O sangue deve ser compatvel a 37oC (mxima atividade dos anticorpos anti-DEA 1.1. e anti-DEA 1.2). Alguns autores alegam que incompatibilidades a 4oC no causam reaes transfusionais. A prova cruzada pode ser realizada atravs de uma tcnica rpida em lmina de microscopia ou atravs de uma tcnica mais demorada em tubos de ensaio. A tcnica rpida em lmina de microscopia consiste nos seguintes passos:
1) Coletar 0,5 a 1mL de sangue do doador em dois frascos (um com EDTA e outro sem anticoagulantes), identificar os tubos. 2) Coletar 0,5 a 1mL de sangue do receptor em dois frascos (um com EDTA e outro sem anticoagulantes), identificar os tubos.

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3) Centrifugar o sangue do doador e do receptor a 1000-1500g por 5-10 min para separar os eritrcitos do plasma e do soro. 4) Separar o plasma e as clulas do doador e do receptor sempre utilizando pipetas diferentes. 5) Preparar uma soluo a 4% do receptor e uma do doador (0,2 mL do concentrado eritrcitos e 4,8 mL de soluo salina). Esta diluio em soluo salina retarda a formao de rouleaux e facilita a observao microscpica, mas resulta em uma aglutinao menos intensa. Uma diluio maior pode provocar a no reatividade dos aloanticorpos e pode ainda no eliminar a formao de rouleaux totalmente. 6) Identificar 4 lminas de microscopia: Controle Doador (eritrcitos do doador + soro/ plasma do doador, Major Crossmatch Doador x Receptor (eritrcitos do doador + soro/ plasma do receptor), Minor Crossmatch Receptor x Doador (eritrcitos do receptor + soro/ plasma doador), Controle Receptor (eritrcitos do receptor + soro/ plasma do receptor). 7) Em cada uma das lminas, mistura uma gota do soro/ plasma e uma gota da suspenso de eritrcitos ou duas gotas do soro/ plasma e uma gota do concentrado de eritrcitos. 8) Misturar com uma esptula/pipeta ou outro material disponvel. 9) Misturar por inclinao da lmina e observar se ocorre aglutinao macroscpica dentro de 2 minutos. 10) Colocar uma lmina sobre a mistura e observar se ocorre aglutinao microscpica (objetivas 40x a 100x) dentro de 5 minutos. 11) Verificar se h aglutinao, se ocorrer positivo (incompatvel). A seguir, a tcnica em tubos de ensaio: 1) Coletar 0,5 a 1 mL de sangue do doador em dois frascos (um com EDTA e outro sem anticoagulantes), identificar os tubos. 2) Coletar 0,5 a 1 mL de sangue do receptor em dois frascos (um com EDTA e outro sem anticoagulantes), identificar os tubos. 3) Centrifugar o sangue dos tubos sem anticoagulante do doador e do receptor a 1000-1500g por 5-10 min para separar os eritrcitos do soro. 4) Separar o plasma e as clulas do doador e do receptor sempre utilizando pipetas diferentes. 5) Lavar os eritrcitos trs vezes em soluo salina antes de preparar a soluo a 4%: colocar 0,5 a 1 mL de sangue em um tubo e completar com soluo salina, homogeneizar por inverso do tubo e centrifugar em alta velocidade por 1 minuto (ou mais se necessrio), remover o sobrenadante e repetir este procedimento mais duas vezes. 6) Preparar uma soluo a 4% do receptor e uma do doador (0,2 mL do concentrado eritrcitos e 4,8 mL de soluo salina). 7) Identificar 4 tubos de ensaio: Controle Doador (eritrcitos do doador + soro/ plasma do doador), Major Crossmatch Doador x Receptor (eritrcitos do doador + soro/ plasma do receptor), Minor Crossmatch Receptor x Doador (eritrcitos do receptor + soro/ plasma doador), Controle Receptor (eritrcitos do receptor + soro/ plasma do receptor). 8) Adicionar a cada um dos tubos, duas gotas do soro/ plasma e duas gotas da suspenso de eritrcitos, homogeneizar por agitao da parte inferior do tubo.

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9) Centrifugar em baixa velocidade por 15-30 segundos, o suficiente para concentrar as clulas, mas no sediment-las totalmente. 10) Homogeneizar os tubos mais uma vez para ressuspender as clulas e observa-los contra a luz (avaliar aglutinao e/ou hemlise). Confirmar a aglutinao microscopicamente. 11) Se no foi observada aglutinao, deve-se incubar os tubos a 37oC por 30 minutos antes de centrifug-los e reavali-los.

Programa de doadores

Todo banco de sangue veterinrio deve ter um programa de doadores. O sangue pode ser obtido atravs de ces e gatos residentes ou voluntrios (da equipe ou de proprietrios). Em alguns pases, com os avanos dos conceitos de biotica, a utilizao de animais residentes no permitida.

Quanto seleo dos animais doadores O doador canino ideal

O doador canino ideal deve ter idade entre 2 a 8 anos, aproximadamente, pesar acima de 28 kg (ces menores podem doar um volume menor), ter temperamento dcil e ser vacinado anualmente contra doenas infecciosas importantes na regio, como raiva, cinomose, hepatite infecciosa, leptospirose, parvovirose e coronavirose. A maior parte dos ces no requer sedao ou anestesia, em alguns pases, a utilizao destas drogas no permitida durante este procedimento (Abrams-Ogg, 2000, Schneider, 2000). Em ces, 15 a 20% do volume sangneo pode ser doado e calcula-se o volume sangneo estimado com a seguinte frmula: Volume sangneo estimado (Litros) = 0,08 0,09 x peso (kg) ou seja, o mximo a ser doado 16 a 18 mL/kg. Os ces podem doar a cada 3 a 4 semanas, desde que recebam nutrio balanceada em quantidade adequada.

O doador felino ideal

O doador felino ideal deve ter idade entre 2 a 8 anos, aproximadamente, pesar acima de 4,5 kg (tamanho proporcional). Machos so mais procurados por serem maiores. O animal deve ser vacinado anualmente contra doenas infecciosas importantes na regio, como FIV e FeLV, e devem ser negativos para PIF. A maior parte dos gatos geralmente sedada ou anestesiada para a doao de sangue, portanto o comportamento do doador no to importante neste caso, mas ainda assim um temperamento dcil facilita o trabalho. Na Escola de Veterinria de Ontrio (Canad), utiliza-se uma combinao de drogas (butorfanol e acepromazina intramuscular associada a quetamina e diazepam intravenoso). Em felinos, 15 a 20% do volume sangneo pode ser doado e calcula-se o volume sangneo estimado com a seguinte frmula: 81

Volume sangneo estimado (Litros) = 0,055 0,065 x peso (kg) ou seja, o mximo a ser doado 11 a 13 mL/kg. Os felinos doadores podem doar a cada 2 a 3 semanas se o hematcrito estiver normal, mas nestes casos a dieta deve ser suplementada com ferro.

Quanto avaliao dos animais doadores

Antes de cada doao, o histrico do doador deve ser averiguado, o animal deve ser submetido a um exame fsico e a testes de controle laboratoriais. O animal no deve estar sob qualquer tratamento, no deve ter histrico de doena grave ou contato com carrapatos ou outros hospedeiros ou vetores de doenas, no deve ter recebido transfuso sangnea e, no caso de fmeas, no deve estar prenhe.

Quanto ao manejo dos animais doadores

Alguns cuidados devem ser tomados durante o procedimento, como procurar fazer a coleta quando o animal estiver em jejum de 12h (a lipemia pode aumentar a formao de rouleaux complicando o teste de compatibilidade e tambm pode causar ativao plaquetria), realizar assepsia adequada antes do procedimento e presso no local da venipuno aps a doao durante 2 a 5 min para acelerar o processo de coagulao, observar o animal aps a doao por 15 a 30 minutos (fraqueza, mucosas plidas, pulso fraco e outros sinais de hipotenso), realizar soroterapia, se necessria, com soluo salina ou solues cristalides similares para reposio do volume doado, dividindo as doses para no causar hemodiluio imediata. Procurar fazer com que o animal receba rao industrializada e gua aps a doao e recomendar ao proprietrio que evite exerccios fsicos intensos com o animal por alguns dias.

Quanto doao

A veia jugular o vaso sangneo de eleio para a coleta do sangue e o animal geralmente colocado em decbito lateral. Antes da doao aconselha-se palpar a veia e em seguida realizar a assepsia do local. Durante a doao, o bem-estar do doador deve ser constantemente monitorado (colorao das mucosas, pulso, freqncia respiratria). O comportamento tambm um importante indicador de potenciais problemas que possam ocorrer durante o procedimento. A bolsa de sangue deve ser freqentemente e cuidadosamente homogeneizada durante a doao para evitar a formao de cogulos e possibilitar a continuidade do procedimento. A doao dura em torno de 3 a 10 minutos com vcuo e 5 a 15 sem vcuo em ces, e aproximadamente de 3 a 5 minutos sem a utilizao de vcuo em felinos. A hipotenso um problema freqentemente observado em gatos, portanto deve-se ter mais cuidado durante a coleta de sangue nesta espcie.

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O sangue total e seus subprodutos

Transfuso a palavra que define a terapia intravenosa com sangue total ou seus subprodutos. H anos, a hemoterapia tem se baseado no uso de sangue total, e este ainda o principal uso em medicina veterinria. Os subprodutos do sangue incluem seus componentes e derivados. Os componentes sangneos so seus subprodutos obtidos atravs de centrifugao, ou, menos comumente, atravs de afrese (equipamentos especializados que permitem a separao de apenas um componente do sangue do doador, devolvendo-lhe o restante). O uso dos componentes sangneos permite que mais de um paciente possa se beneficiar de apenas um doador e reduz os riscos de uma reao transfusional contra os outros componentes desnecessrios, pois muitas vezes o paciente que requer uma transfuso precisa de apenas um componente sangneo especfico. Durante a ltima dcada houve um aumento do interesse pela medicina veterinria transfusional, acompanhado pelos avanos na oncologia veterinria e pela terapia intensiva, o aumento foi tanto que atualmente os componentes sangneos so rotineiramente preparados por certas instituies e empresas comerciais em alguns pases da Europa e nos Estados Unidos. Os principais componentes sangneos so: concentrado de eritrcitos, plasma (e seus subtipos), concentrado de plaquetas e crioprecipitado. Ambos, sangue total e seus componentes podem ser utilizados logo aps a coleta (produtos frescos) ou aps o armazenamento (produtos armazenados/estocados). Antes da II Guerra Mundial, o armazenamento de sangue no era muito utilizado na medicina humana. O doador era chamado conforme a necessidade, seu sangue era coletado e imediatamente transfundido, e isto ainda muito comum na medicina veterinria. Entretanto, com a preparao de componentes sangneos, o interesse por bancos de sangue aumentou muito no passado recente. O armazenamento permite acesso imediato a sangue total e seus subprodutos, mas a coleta sangnea e a preparao destes podem ser intensivamente trabalhosas e consomem bastante tempo, por isso a existncia de um banco de sangue para clnicas/hospitais que realizam transfuses rotineiramente essencial. Os derivados sangneos so subprodutos proticos preparados atravs de mtodos bioqumicos (ex. extrao por etanol) para processar grandes quantidades de plasma. Os derivados, que incluem solues de albumina, imunoglobulinas intravenosa e concentrados de fatores especficos, tm tido um uso relativamente limitado na medicina veterinria comparado aos componentes sangneos. Os substitutos sangneos, que so produzidos atravs de mtodos biotecnolgicos, incluem colides artificiais, transportadores de oxignio, substitutos de plaquetas e protenas de coagulao humana produzidas atravs da tecnologia de DNA recombinante. Os dois primeiros substitutos tm sido utilizados na medicina veterinria. Atualmente existem diversas formas de preservar as clulas sangneas por um perodo determinado at o momento da transfuso, alguns exemplos so os 83

processos de congelamento (criopreservao), a liofilizao e, a mais comumente utilizada, a adio de solues anticoagulantes como o CPDA1. A seguir esto descritas, de forma resumida, algumas caractersticas do sangue total e seus subprodutos e suas principais indicaes em medicina veterinria.

Sangue total e concentrado de eritrcitos Sangue total

O sangue total pode ser fresco (quando utilizado logo aps a transfuso) ou armazenado sob refrigerao (1-6 oC). A principal indicao hemorragia aguda (anemia com hipovolemia). O volume a ser transfundido depende do volume de sangue perdido e na estimativa de perdas futuras. Em geral, entre 10 e 22 mL/kg, e o volume dirio no deve exceder este valor, a menos que a perda seja muito severa. Soluo salina hipertnica (7,5%), 4-5 mL/kg i.v. por 10 minutos deve ser considerada em casos de choque hemorrgico. A transfuso de sangue total pode ser feita para corrigir anemias conseqentes de outras causas, mas o concentrado de eritrcitos prefervel nestes casos.

Concentrado de eritrcito

A centrifugao do sangue total o mtodo indicado para obteno deste produto e sua armazenagem deve ser feita sob refrigerao (1-6oC). As principais indicaes so anemia sem hipovolemia e anemia hemorrgica aguda com administrao conjunta de plasma.

Observaes importantes

Animais anmicos e normovolmicos no requerem que o sangue a ser transfundido seja reaquecido, de fato o aquecimento acelera a deteriorao dos eritrcitos armazenados e pode permitir o crescimento de microorganismos contaminantes. Entretanto, no caso de pacientes hipotrmicos ou animais que necessitem um grande volume de sangue o produto deve ser reaquecido antes da transfuso. Pode-se deixar o produto a temperatura ambiente por 30 minutos, utilizar um banho-maria a 37oC por 15 minutos, utilizar equipamentos especficos que aquecem o sangue durante o procedimento, ou ainda adicionar soluo salina aquecida (70oC) a uma unidade do produto refrigerada (4oC) em uma diluio de 1:1.

Plasma fresco congelado e produtos relacionados Plasma

Este produto deve ser separado por centrifugao em at de 6 a 8 horas aps a doao. Se o 84

armazenamento interrompido por mais de 30 minutos, deve-se utilizar dentro de 24 horas. O armazenamento deste produto depende do tipo de plasma, que pode ser lquido fresco (utilizado logo aps sua obteno), lquido refrigerado (1 a 6oC por 3 meses), fresco congelado (PFC: -30 a 18oC por 1 ano). Quando o produto foi separado acima de 6 horas aps a doao e ento congelado, ou quando o PFC expira sua validade de 1 ano, ele chamado de plasma congelado (PC: -30 a 18oC por 5 anos). No recomendada a estocagem de sangue felino (ou de outra espcie animal) que tenha sido coletado atravs de seringa, devido contaminao bacteriana. As principais indicaes so: presso onctica plasmtica reduzida (efuso pleural severa, edema pulmonar), pacientes sob anestesia em que exista risco de hipotenso ou alterao da ligao da droga com as protenas, hemorragia devido intoxicao por antagonistas da vitamina K, deficincia de vitamina K e hemofilia B. O armazenamento do plasma prejudica a manuteno de nveis adequados do fator VIII e do fator de von Willebrand.

Observaes importantes

Todo plasma deve ser reaquecido somente antes da tranfuso, utilizando um banho-maria entre 30 e 37oC por 20 a 30 minutos.

Crioprecipitado e produtos relacionados Crioprecipitado

Este produto pode ser definido como um precipitado do plasma fresco congelado, e tambm conhecido como fator antihemoflico crioprecipitado ou CRYO. Este produto contm 50% de fator VIII, 20% de fibrinognio e porcentagens variadas dos fatores XIII, von Willebrand e VIIIc (procoagulante). Este produto deve ser congelado (-30 a -18 oC) e vlido por at um ano aps a data da doao. As principais indicaes so: hemofilia A (incomum) e doena de von Willebrand (mais comum).

Criosobrenadante ou Crioprecipitado pobre

Este produto pode ser definido como o sobrenadante da preparao do crioprecipitado. Este produto deve ser congelado (-30 a -18 oC) e vlido por at 5 anos aps a data da doao. Este produto contm albumina, fatores da coagulao exceto o fator de von Willebrand e o fator VIII, assim como, as imunoglobulinas. As principais indicaes so: intoxicao por antagonistas da vitamina K, hemofilia B e hipoalbuminemia.

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Cola ou selante de fibrina

O crioprecipitado tambm pode ser utilizado como fonte de fibrinognio que pode ser adicionado trombina para a produo de cola ou selante fibrina. Nos Estados Unidos, este produto j foi aprovado pelo FDA e utilizado como agente hemosttico e adesivo em diversos tipos de cirurgias.

Observaes importantes

O crioprecipitado e o criosobrenadante devem ser reaquecidos antes da tranfuso utilizando um banho-maria entre 30 e 37oC por 5 a 10 minutos. Aps este procedimento, estes produtos podem ser deixados a temperatura ambiente (20 a 24oC) e devem ser transfundidos dentro de 6 horas.

Plasma rico em plaquetas e produtos relacionados

Plasma rico em plaquetas e concentrado de plaquetas

Estes compostos fazem parte dos chamados produtos plaquetrios. O seu armazenamento diferenciado dos produtos anteriormente descritos, pois deve passar por repouso por 1 hora seguido de agitao constante a temperatura ambiente (20 a 24oC) por 3 a 5 dias (j existem bolsas que permitem o armazenamento por at 7 dias em humanos). As principais indicaes so: hemorragia por trombocitopenia e trombocitopatia. So eficazes em trombocitopenias causadas por reduo da produo (leucemias, anemia aplsica). Menos eficazes nas causadas por aumento do consumo (coagulao intravascular disseminada), seqestro (esplenomegalia) e destruio (trombocitopenia imunomediada).

Concentrado de plaquetas congelado

Nos Estados Unidos, o concentrado de plaquetas canino j pode ser obtido atravs de afrese (plaquetafrese) o que aumenta a concentrao de plaquetas por unidade. Alm disso, devido aos avanos na criopreservao (como a utilizao de dimetil-sulfxido e outras substncias como crioprotetores), estes concentrados podem ser congelados a -20oC por at 6 meses.

A importncia da adequada preservao do sangue

O desenvolvimento de meios e solues de preservao sangnea possibilitou o armazenamento dos eritrcitos e, conseqentemente, o trabalho dos bancos de sangue. As maiores preocupaes ao desenvolver tais solues eram a manuteno dos nveis de glicose, adenosina trifosfato (ATP) e 2,3-difosfoglicerato (2,3-DPG), ou seja, a manuteno do metabolismo energtico eritrocitrio atravs da gliclise. Os eritrcitos possuem funes vitais no organismo como o tamponamento dos 86

ons hidrognio e o transporte de oxignio e de dixido de carbono, mas para a manuteno destas atividades necessrio energia sob a forma de ATP (adenosina trifosfato). A funo do 2,3-DPG eritrocitrio se ligar a deoxihemoglobina e facilitar o transporte de oxignio. Quando ocorre esta ligao, a molcula de deoxihemoglobina estabilizada e esta interao a afinidade da hemoglobina pelo oxignio e permite sua liberao para os tecidos. Portanto, uma diminuio de 2,3-DPG, que ocorre durante o armazenamento do sangue, interfere neste mecanismo, reduzindo a liberao de oxignio. O tempo de armazenamento depende da soluo anticoagulante utilizada. O tempo de armazenamento para eritrcitos humanos em CPDA1 de 35 dias, entretanto, o tempo mximo de armazenamento sugerido de 20 dias utilizando-se a mesma soluo para preservao de eritrcitos caninos. Este curto tempo de armazenagem dificulta e limita a quantidade de sangue canino que pode ser efetivamente armazenada e uma desvantagem em particular para hospitais de pequenos animais onde o acesso a ces doadores pode ser difcil. Novas solues, a princpio, podem ser utilizadas efetivamente em outras espcies como a canina. Entretanto, o tempo de armazenamento deve ser determinado para cada espcie ao invs de utilizar os tempos preconizados para a espcie humana. Em bancos de sangue humanos, solues salinas, glicosadas e com adenina, tambm conhecidas como solues aditivas (exemplo: SAGM), so adicionadas diretamente ao concentrado de eritrcitos, aps a centrifugao e remoo do plasma, e o objetivo de seu uso prolongar o tempo de estocagem destas clulas por at 42 dias. As solues aditivas conhecidas por Adsol (Fenwall Laboratories) e Nutricel (Miles, Inc, Pharmaceutical Division, West Haven, CT) tm capacidade de prolongar o tempo de estocagem dos eritrcitos caninos, mantendo a viabilidade celular aceitvel por at 37 e 35 dias respectivamente. Em casos crticos, nos quais a liberao de oxignio aos tecidos seja necessria, pode-se utilizar concentrado de eritrcitos ou sangue total desde que armazenados por um perodo menor do que duas e quatro semanas, respectivamente (assumindo que a estocagem seja realizada com as seguintes solues: CPD, CPDA1, Adsol, Nutricel ou Optisol). Este fato no to importante em gatos, visto que esta espcie possui normalmente baixos nveis de 2,3-DPG. As solues mais freqentemente utilizadas atualmente para o armazenamento de sangue canino e felino so o CPD, CPD2 e o CPDA1.

As principais solues anticoagulantes de preservao

A seguir esto descritas, de forma resumida, as principais solues anticoagulantes de preservao utilizadas em medicina veterinria. Outros mtodos, como a liofilizao, criopreservao, e at mesmo outras solues, ainda esto em desenvolvimento. 87

Heparina Componente: Heparina 1000UI/mL. Uso: 5 a 12,5 UI/mL de sangue. Para emergncias em gatos: colocar 300 a 750 UI (0,3 a 0,75 mL) em seringa de 60 mL. Tempo mximo (T. mx.) de estocagem de sangue total: 2 dias (ces e gatos). Comentrios: Mais utilizada em gatos, no preserva eritrcitos, a soluo mais disponvel em clnicas. Cuidar para no confundir com soluo de 10.000 UI/mL (heparinizao de receptores menores).

Citrato de sdio Uso: soluo de 3,8% para bolsa de 500 mL ou manipulado (1 mL de soluo 3,8% para 9 mL de sangue ou 0,5 g para 100 mL de sangue. Para emergncias em gatos: 6 mL em uma seringa de 60 mL. T. mx. de estocagem de sangue total: 5 dias (ces). Comentrios: No preserva eritrcitos, obsoleto em pequenos animais, mas ainda muito usado para coleta de plasma em grandes. CPD (Citrato fosfato dextrose) cido ctrico, citrato de sdio, fosfato e dextrose. Uso: 0,14 mL para 1 mL de sangue. Para emergncias em gatos: 7,5 mL em uma seringa de 60 mL. T. mx. de estocagem de sangue total: 4 semanas (ces, gatos). Comentrios: No recomendado para estoque de concentrado de hemcias, bolsas com 63 mL para 450 mL de sangue e de 70 mL para 500 mL de sangue. CPDA1 (Citrato fosfato dextrose adenina1) cido ctrico, citrato de sdio, fosfato e dextrose. Uso: 0,14 mL para 1 mL de sangue. Para emergncias em gatos: 7,5 mL em uma seringa de 60 mL. T. mx. de estocagem de sangue total: 5 semanas (ces, gatos). T. mx. de estocagem de concenentrado de eritrcitos: 3 semanas (ces, gatos). Comentrios: bolsas com 63 mL para 450 mL de sangue e de 70 mL para 500 mL de sangue. Solues Aditivas: AS-1 (ADSOL), AS-3 (NUTRICEL) e AS-5 (OPTISOL) dextrose, adenina, manitol e cloreto de sdio. Uso: bolsas pr-fabricadas para 450 mL de sangue (bolsa primria com 63 mL de CPD/ CPD2/ CPDA1 e bolsa satlite com 100 mL da soluo aditiva). Para emergncias em gatos: 10 mL em uma seringa de 60 mL. T. mx. de estocagem de sangue total: no aplicvel T. mx. de estocagem de concentrado de eritrcitos: 5-6 semanas (ces), 6 semanas (gatos). Comentrios: devem ser adicionadas aos eritrcitos dentro de 72 horas aps a coleta.

Reaes transfusionais

As reaes transfusionais podem ser classificadas como imunolgicas e no imunolgicas e como 88

agudas e tardias. As principais reaes imunolgicas e no-imunolgicas esto listadas nas Tabelas 6 e 7. A ocorrncia das reaes transfusionais varia de 3 a 8% em ces e gatos, mas este ndice tende a diminuir com o aumento do conhecimento e conseqentes melhorias na medicina transfusional veterinria.

Tabela 5. Sinais no especficos que podem ocorrer durante uma reao transfusional imunolgica aguda. Fraqueza, depresso, decbito Tremores musculares, agitao, vocalizao Polipnia, dispnia Taquicardia, bradicardia (felinos), arritmias, mucosas plidas, pulso fraco (hipotenso) Parada cardiopulmonar (pode ser o nico sinal presente durante a anestesia) Salivao (e outros sinais de nusea), vmitos, diarria Mico Convulses, coma Angioedema e urticria Fonte: Abram-Ogg (2000).

Tabela 6. Reaes transfusionais imunolgicas. Aguda Hemlise Hipersensibilidade aguda Sensibilidade a plaquetas Sensibilidade a leuccitos Tardia Hemlise Prpura ps-transfusional Isoeritrlise neonatal Imunossupresso

Fonte: Harrell e Kristensen (1995), Abrams-Ogg (2000)

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Tabela 7. Reaes transfusionais no-imunolgicas. Aguda Hemlise pr-transfusional dos eritrcitos do doador Hipervolemia Contaminao bacteriana Toxicidade por citrato (hipocalcemia) Coagulopatia e trombose Hiperamonemia Hipotermia Hipofosfatemia Hipercalemia Embolismo por ar Microembolismo pulmonar Acidose Fonte: Harrell e Kristensen (1995), Abrams-Ogg (2000). Tardia Transmisso de doena infecciosa Hemosiderose

Reaes imunolgicas

A seguir esto descritas, de forma resumida, as principais reaes imunolgicas e seus sinais clnicos.
Incompatibilidade sangnea (eritrocitria)

A patognese das reaes hemolticas no ser discutida aqui. Os sinais clnicos de uma crise hemoltica aguda incluem um ou mais sinais no especficos que esto relacionados na Tabela 5, juntamente com sinais especficos como hemoglobinria e hemoglobinemia. Neste caso, hipertermia comum, mas a urticria e o angioedema no. Insuficincia renal aguda e coagulao intravascular disseminada (CID) so seqelas incomuns. A severidade da reao est diretamente relacionada com o nmero de eritrcitos destrudos. A reao hemoltica severa aguda em gatos mediada por IgM e lembra uma reao anafiltica, em ces mediada por IgG. Na reao hemoltica tardia no h sinais clnicos agudos, mas o hematcrito reduz rapidamente em 3-5 dias aps a transfuso (deveria durar 4 a 6 semanas). O tratamento pr-transfusional com antihistamnicos e corticosterides no iro prevenir este tipo de reao.
Reaes a protenas plasmticas

As reaes imunolgicas protenas plasmticas (geralmente gamaglobulinas) so de natureza alrgica (mediadas por IgE) e resultam em urticria e angioedema, ou, raramente, anafilaxia. Podem ocorrer sinais como prurido, salivao, vmitos, diarria e dispnia (pela broncoconstrio), mas a hipertermia no comum. O principal sinal da anafilaxia a hipotenso, caracterizada por fraqueza, pulso fraco e palidez das mucosas. Nas reaes alrgicas, existe perda de fludo e albumina da circulao, o que anula em parte o objetivo da transfuso. Em casos de reaes severas, ascite, 90

efuso pleural e edema pulmonar podem ocorrer. As reaes alrgicas, em geral, ocorrem em 1 a 15 min, mas podem ocorrer durante a transfuso, mesmo que no tenha ocorrido reao alguma com uma dose-teste. O risco desse tipo de reao aumenta com a taxa de transfuso, possivelmente porque algumas so anafilactides. Ces e gatos, ao contrrio de humanos, podem ser receber mais de uma transfuso de um mesmo doador, e isso pode aumentar o risco destas reaes. Nos casos de animais que necessitem mais de uma transfuso, o uso de um novo doador para cada transfuso e o pr-tratamento com antihistamnicos, com ou sem corticosterides, podem ser considerados, especialmente se h histrico de reaes alrgicas. O tratamento pr-transfusional com antihistamnicos e corticosterides deve ser utilizado se uma velocidade alta de transfuso necessria, entretanto isto no garante que a reao no ir ocorrer. Se o paciente tem histrico de reao alrgica severa e requer concentrado de eritrcitos, os eritrcitos podem ser lavados com soluo salina antes da transfuso.
Reaes a leuccitos e plaquetas

Reaes febris no-hemolticas que ocorrem em ces e gatos aps transfuses de sangue total ou de produtos plaquetrios so presumivelmente devido resposta imune do receptor a antgenos leucocitrios do doador ou a substncias bioativas. Hipertermia (algumas vezes acompanhada de tremores e vmitos) pode ocorrer durante a transfuso ou dentro de algumas horas aps e pode levar at 12 horas se resolver. O tratamento pr-transfusional com antihistamnicos no previnem este tipo de reao. O pr-tratamento com corticosterides (como a dexametasona) ou antiinflamatrios no-esteroidais (paracetamol somente em ces) 1 hora antes da transfuso pode auxiliar na preveno de reaes febris. A rotao de doadores tambm pode reduzir o risco destas reaes. O uso de filtros leucocitrios uma opo, mas em vista do seu alto preo torna-se invivel na rotina veterinria, alm disso, todos os mtodos de remoo de leuccitos resultam em alguma perda de eritrcitos e plaquetas. Trombocitopenia ps-transfusional pode ocorrer raramente em humanos e ces dentro de 1 a 2 semanas e dura at 2 meses. Nestes casos, a resposta imune generalizada e os anticorpos do receptor atacam as prprias plaquetas, uma terapia imunossupressiva com prednisolona pode acelerar a recuperao.

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4. Mielograma
Nayro Xavier de Alencar

Introduo cada vez mais comum a utilizao do exame da medula ssea (mielograma) para a avaliao das doenas do sistema hematopoitico. A tcnica para a obteno do material medular tem se mostrado segura e de fcil execuo na clnica veterinria. O objetivo deste material fornecer aos mdicos veterinrios informaes sobre as indicaes deste exame bem como diversas as tcnicas de coleta e preparao de lminas de medula ssea.

Importncia O exame da medula ssea (mielograma) tem sido amplamente utilizado no apenas no diagnstico das doenas do sistema hematopoitico, como as citopenias (anemia, leucopenia e trombocitopenia), mas tambm no estadiamento das neoplasias, como o linfoma e as leucemias de origens diversas e na pesquisa de parasitas (Leishmania sp). Alm disso, tem sido cada vez mais comum a utilizao desta tcnica como via para procedimentos teraputicos (coleta de material e infuso de substncias).

Indicaes para realizao da citologia aspirativa de medula ssea Em geral, as indicaes para a avaliao da medula ssea surgem aps a constatao de anormalidades observadas no hemograma. Essas anormalidades incluem uma srie de alteraes que indicam o exame. As indicaes primrias para a avaliao da medula ssea de um paciente incluem: Anemia arregenerativa: o exame da medula ssea est indicado sempre que existir anemia de caracterstica no regenerativa ou pouco regenerativa. Nas anemias regenerativas, por outro lado, no h indicao para o exame uma vez que a medula mostra evidncias de produo adequada de eritcitos. Deve-se ressaltar, no entanto, que nas anemias por perda aguda de sangue podem no existir sinais de regenerao no sangue perifrico, como elevao do VCM, policromasia ou anisocitose, j que esses sinais s aparecem no sangue aproximadamente trs dias ou mais aps a perda de sangue. Nesta situao, recomenda-se a repetio do hemograma aps este perodo para se decidir sobre a necessidade de puno da medula. Em eqinos, a avaliao da medula ssea a nica forma de determinar se uma anemia nessa espcie regenerativa ou no, uma vez que eqinos anmicos normalmente no apresentam evidncia de regenerao no sangue perifrico. Leucopenia: a reduo no nmero de leuccitos outra alterao hematolgica na qual o mielograma est indicado. Uma leucopenia pode ser resultado de linfopenia e de neutropenia. A

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linfopenia ocorre geralmente como resultado da ao de frmacos (corticides), estresse induzido, infeco viral (FeLV, FIV), imunodeficincia (SIC Sndrome da Imunodeficincia Combinada), perda de linfcitos (quilotrax ou linfangiectasia). Nestes casos no h indcios de produo diminuda pela medula e por isso a avaliao do mielograma no se faz necessria. Por outro lado, a neutropenia pode resultar da diminuio da produo pela medula ou do aumento da utilizao ou destruio destas clulas no sangue perifrico. Uma neutropenia persistente um bom indicativo para a avaliao da medula ssea. Trombocitopenia: um nmero reduzido de plaquetas no sangue perifrico pode ser indicativo de diminuio da produo, do aumento na utilizao (CID) ou destruio (tombocitopenia imunomediada) ou ainda de seqestro (hiperesplenismo). Em muitas situaes o mielograma essencial para se determinar se a trombocitopenia est relacionada a um problema de produo ou de utilizao perifrica. Embora a colheita de medula ssea em animais trombocitopnicos possa parecer arriscada, em nossa experincia e na de muitos autores este procedimento normalmente no resulta em problema de sangramento nos animais, mesmo naqueles que apresentam trombocitopenia severa. Elevaes inexplicadas no nmero de clulas: exemplos de anormalidade proliferativas em que o mielograma est indicado incluem a policitemia, leucocitose ou trombocitose persistentes, especialmente quando estes no apresentam evidncia clnica de doena que justifique tal achado. Existem vrias condies secundrias que resultam em policitemia, como hipxia, desidratao, neoplasia renal, hipertireoidismo ou contrao esplnica. Porm, quando estas condies no esto presentes, a avaliao da medula ssea fundamental na determinao da causa da policitemia. Elevaes inexplicadas de qualquer tipo de leuccito sem uma doena inflamatria aparente so um indicativo para a avaliao da medula. A elevao persistente de um tipo celular pode ser indicativo de leucemia crnica e muitas vezes confirmada pela presena de alteraes displsicas presentes na medula ssea. O aumento no nmero de plaquetas pode ser secundrio perda crnica de sangue, inflamao crnica, esplenectomia, sndrome de Cushing ou diabetes mellitus. Entretanto, uma trombocitose inexplicada pode ser resultado de uma neoplasia da linhagem plaquetria (trombocitemia essencial) e o exame da medula ssea necessrio para demonstrar alteraes displsticas e neoplsicas associadas com a malignidade dessas clulas. Clulas anormais circulantes: a presena de clulas anormais no sangue perifrico pode ser indicativa de neoplasia na medula ssea e um bom indicativo para avaliao deste rgo. Estas clulas anormais podem ser representadas por clulas blsticas hematopoiticas de origem eritride, mielide ou linfide, sendo a sua presena indicativa de leucemia aguda. Clulas apresentando alteraes displsicas so um outro sinal hematolgico em que o mielograma est indicado. Displasia definida como uma maturao anormal de clulas e geralmente est associada com sndromes prleucmicas ou leucemia. Algumas alteraes displsicas incluem eritrcitos nucleados sem evidncia

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de

policromasia,

metarrubrcitos

anormalmente

grandes,

neutrfilos

hiper-segmentados,

metamielcitos gigantes, megaplaquetas e megacaricitos Dwarf. Clulas no hematopoiticas tambm podem ser encontradas na circulao (ex: mastcitos) sugerindo a presena de metstase na medula. Neste caso a puno da medula ssea imprescindvel para se avaliar o envolvimento deste rgo. Estadiamento clnico de neoplasias: a utilizao do mielograma no estadiamento das neoplasias tem sido usada mesmo em pacientes que no apresentam clulas neoplsicas circulantes, isto porque a ausncia de clulas neoplsicas na circulao no assegura que a medula ssea esteja livre de doena metasttica. Sendo assim, o mielograma tem sido usado por razes prognsticas, principalmente em animais com linfoma, onde com muita freqncia, no so detectadas clulas neoplsicas no sangue perifrico. Hipercalcemia inexplicada: a causa mais comum de hipercalcemia relevante clinicamente em animais e humanos a hipercalcemia associada ao cncer. Existem trs mecanismos patognicos principais: a hipercalcemia humoral da neoplasia, a reabsoro ssea local induzida por neoplasia hematolgica que se desenvolve primariamente na medula ssea e a ostelise local causada por tumores metastticos. Esta alterao tem sido descrita mais freqentemente em ces e esporadicamente em gatos, cavalos e outros animais. Em ces, a hipercalcemia geralmente resultado de sndrome paraneoplsica associada com neoplasia linfide ou adenocarcinoma da glndula apcrina do saco anal. Nos casos de hipercalcemia sem envolvimento de linfonodos ou das glndulas do saco anal, a avaliao do mielograma de grande importncia. A maioria desses animais tem uma leucemia linfide onde apenas a medula ssea est acometida, podendo no ser encontradas clulas tumorais no sangue perifrico. Gamopatia monoclonal: a gamopatia monoclonal ou paraproteinemia identificada por uma produo excessiva de um nico tipo de imunoglobulina pela expanso de um clone de plasmcitos (linfcitos B). Estas alteraes so tipicamente encontradas em associao com uma variedade de discrasias linfides e plasmocitrias. Em pequenos animais, gamopatias monoclonais esto mais freqentemente associadas s doenas linfoproliferativas. Tumores produtores de imunoglobulinas incluem o mieloma mltiplo, a leucemia linfoctica crnica (LLC), a macroglobulinemia primria (Sndrome de Waldenstrom) e o linfoma. O mielograma permite a fenotipagem das sub-populaes linfocitrias que esto envolvidas nesta doena.

Colheita do material Aspirados e fragmentos de medula ssea para biopsia podem ser facilmente obtidos de todos os animais domsticos e tambm de animais de laboratrio. A preparao de lminas deste material para posterior fixao e colorao fornece um excelente material para avaliao citolgica.

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Existem poucas contra-indicaes para a biopsia aspirativa da medula ssea. A conteno, sedao ou anestesia, quando usadas, geralmente resultam em mais risco para o paciente do que a prpria colheita. Hemorragia ps colheita pode acontecer em pacientes com diteses hemorrgicas, porm, esta raramente ocorre. Em animais com hiperglobulinemia monoclonal pode haver hemorragia aps a colheita, entretanto, esta facilmente controlada pela compresso sobre o local de colheita ou ainda pela sutura de pele no local da inciso. Infeco ps biopsia no local da colheita muito pouco provvel de ocorrer, quando se utiliza uma tcnica adequada de colheita. As tcnicas de colheita da medula ssea variam com o local, a espcie em questo e a preferncia do coletor. A crista ilaca, a fossa trocantrica do fmur e o mero proximal so os locais mais comumente usados em pequenos animais. Por outro lado, esterno e costela so mais comumente usados para a obteno de medula em grandes animais. Um cuidado especial deve ser tomado na colocao da agulha quando a colheita feita no esterno e costela, devido ao risco de penetrao na cavidade torcica, embora em nossa experincia isso nunca tenha sido observado. Em geral o material utilizado para uma adequada colheita de medula ssea conhecido pela maioria dos profissionais e , na sua maioria, de baixo custo. Recomenda-se que as agulhas utilizadas sejam especficas para este fim, sendo este talvez o maior investimento neste sentido. So conhecidos vrios modelos de agulhas, sendo a Komiyashiki, a Illinois e a Bierman as mais utilizadas (Figura 1). O tamanho das agulhas varia de acordo com a espcie animal em questo, entretanto, na maioria dos casos agulhas de 16-18 G so adequadas para diversas espcies animais. Outros materiais usados na colheita incluem: EDTA 2 - 3% (preparado em soluo salina), seringa plstica (10mL), lminas para histologia, corante (mtodo de Romanowsky), placa de petri, tubos de microhematcrito, lidocana 2%, trictomo e lmina de bisturi. Em geral, uma adequada conteno do animal e a utilizao de agulhas apropriadas resultam na obteno de amostras de boa qualidade mesmo sem a necessidade de tranqilizao do animal.

Preparao para a colheita Na maioria dos casos, a colheita de medula ssea requer apenas uma boa conteno do animal, uma vez que estes se mostram mais incomodados com a anestesia local do que com a perfurao da pele com a agulha de colheita. Em alguns casos, especialmente quando os animais se mostram agressivos, uma sedao leve pode ser utilizada, porm, anestesia geral raramente necessria.

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Figura 1. Agulhas especiais para colheita de medula ssea: (1) Komiyashiki, (2) Illinois e (3) Bierman (BD).

A seleo do local para a puno varia de acordo com o animal em questo (Figura 2). O local mais utilizado em pequenos animais a crista dorsal da asa do lio. Em animais muito pequenos, como gatos e filhotes de ces, ou ainda em animais excessivamente obesos pode-se usar a fossa trocantrica do fmur ou o aspecto crnio-lateral do tubrculo maior do mero (Figura 2). A colheita no mero talvez seja aquela que oferea mais facilidade na obteno do material, porm, a proximidade com a cabea do animal deve alertar o profissional para o risco de acidentes. Nos grandes animais o local mais utilizado o esterno (Figura 3) podendo o animal ser mantido em estao (eqinos e bovinos) ou em decbito lateral (pequenos ruminantes). A costela outro local de colheita, entretanto, este no tem sido usado com muita freqncia em nossa rotina clnica.

2 3 1

Figura 2. Locais para puno no co: (1) Tubrculo maior do mero, (2) Crista ilaca e (3) Fossa trocantrica do fmur proximal.

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Colheita da amostra Aps a escolha do local, a rea selecionada poder ser depilada ou no, porm, uma anti-sepsia criteriosa da rea deve ser realizada para evitar contaminao do local de colheita. Devem-se evitar tambm locais onde j existam ferimentos. A seringa deve ser preenchida com aproximadamente 0,5 mL de EDTA 2 3% para prevenir a coagulao, embora amostras tambm possam ser obtidas sem o uso de anticoagulantes se lminas forem preparadas imediatamente aps a colheita. Seringa e agulha devem ser colocadas sobre uma superfcie estril prxima ao animal.

Figura 3. Demonstrao da colheita de medula ssea no esterno de um ovino.

Quando se fizer uso do anestsico local, uma pequena inciso na pele, suficiente para entrar com a agulha, pode ser feita para facilitar a penetrao no osso. O osso ou a rea a ser penetrada estabilizada com uma mo e ento exercida uma presso firme com movimentos de rotao para penetrar com a agulha a regio cortical do osso. Uma vez que a agulha esteja firmemente fixada no osso, o madril removido e a seringa, contendo anticoagulante, acoplada nesta para aspirao. Uma forte presso negativa aplicada puxando-se o embolo da seringa vrias vezes, porm, para evitar hemodiluio esta presso deve ser liberada assim que aproximadamente 0,5 mL de medula tenha entrado na seringa. Se aps a aspirao no se observar material medular na seringa, esta deve ser removida e o mandril recolocado para possibilitar o reposicionamento da agulha com ligeiro avano por meio de rotao da mesma. Se mesmo com o reposicionamento o material no for obtido, deve-se retirar a agulha e tentar colher em outro local.

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Uma vez a medula tenha sido obtida, agulha e seringa so removidas do animal e esta homogeneizada para evitar a coagulao do material. A seringa deve ser desconectada da agulha e o material transferido para uma placa de petri. Com este procedimento fica mais fcil avaliar o sucesso da colheita pela observao de espculas medulares (estroma e clulas associadas), que so imprescindveis para uma adequada avaliao da medula ssea. A colheita de fragmentos de medula ssea para histopatologia pode ser obtida com agulhas especiais (Jamshidi e Rosenthal) utilizando-se basicamente o mesmo procedimento usado para puno aspirativa. Uma vez que a agulha esteja fixada no osso o mandril removido e esta rotacionada em um nico sentido preenchendo-a com material medular. Em seguida, remove-se a agulha do animal e com o auxlio do mandril retira-se o fragmento de dentro da agulha empurrando-o em sentido contrrio, sempre da ponta da agulha em direo do corpo da mesma, para evitar o esmagamento do fragmento. Algumas lminas podem ser confeccionadas pelo rolamento do fragmento sobre lminas histolgicas antes de se transferir o material para um frasco contendo formol neutro tamponado a 10% para fixao e posterior processamento. No tocante s vantagens de ambos os mtodos podemos dizer que o aspirado da medula ssea propicia excelente detalhe celular do material obtido alm de fornecer resultados rpidos e a um custo relativamente baixo. A biopsia (histopatologia) melhor para determinar alteraes do estroma medular, como mielofibrose, alm de avaliar mais adequadamente celularidade, estoque de ferro e acumulao focal de clulas neoplsicas na medula ssea. A biopsia especialmente til quando as colheitas aspirativas so improdutivas e na avaliao do envolvimento neoplsico medular tal como no estadiamento do linfoma.

Preparao da lmina A preparao de lminas requer cuidadosa ateno do profissional uma vez que mesmo a mais adequada puno ter sido intil se no forem preparadas lminas de boa qualidade. As lminas devem ser preparadas imediatamente aps a colheita se o anticoagulante no tiver sido utilizado ou dentro de uma hora aps a colheita quando o EDTA for usado. Sempre que possvel a preparao das lminas deve ser realizada to logo se obtenha o material. Nos casos em que o envio da amostra para o laboratrio no for possvel em tempo hbil, as lminas devem ser preparadas na clnica ou, quando possvel, o animal deve ser encaminhado ao laboratrio para a colheita. A tcnica de preparao das lminas muito simples e pode ser efetuada mesmo por indivduos com pouca prtica. Aps a colheita da medula ssea o material transferido para uma placa de Petri para se observar melhor a presena de espculas medulares (pequenos fragmentos semelhantes gelatina) com movimentos de inverso da placa. Uma vez visualizadas, coloca-se perpendicular a estas espculas um tubo capilar (microhematcrito) com o objetivo de capturar algumas destas estruturas

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(Figura 4). Em seguida transfere-se o contedo do tubo capilar para uma lmina e coloca-se sobre esta outra lmina no mesmo sentido da primeira. O objetivo deste procedimento concentrar um maior nmero de espculas no centro da lmina, diminuindo, por ao da capilaridade, a quantidade de sangue nesta. Aps o sangue se espalhar entre as duas lminas estas so separadas deslizando-se uma sobre a outra sem empregar qualquer presso sobre elas (Figura 5). A lmina com o material deve ser rapidamente seca ao ar para melhor qualidade do material.

Figura 4. Obteno de espculas para confeco das lminas de medula ssea com o auxlio de um tubo capilar (microhematcrito).

As lminas so ento fixadas em metanol por cinco minutos e coradas por corantes tipo Romanowsky (Giemsa, May-Grmwald Giemsa, Leishman). Na nossa rotina o MGG tem se mostrado excelente para a avaliao citolgica da medula ssea devido suas qualidades tintoriais e rapidez na colorao das lminas. Em algumas situaes, outras coloraes podem ser necessrias como o caso do Azul-da-Prssia par avaliao do ferro medular e coloraes citoqumicas especiais (Sudan Black, peroxidase, etc.) para os casos de leucemia.

Avaliao e interpretao do mielograma Nos animais domsticos as clulas medulares so divididas em seis grupos, a srie eritride, a srie granuloctica, a srie megacarioctica, a srie linfide, a srie monoctica e outras clulas normalmente encontradas na medula e no classificadas dentro dos primeiros grupos que compreende: hematogneas, clulas em mitose, clulas reticulares e clulas degeneradas. A srie eritride composta de eritroblasto, pr-rubrcito, rubrcito basoflico, rubrcito policromtico, rubrcito ortocromrtico, metarrubrcito e reticulcito. A srie granuloctica composta de mieloblasto, prmielcito, mielcito, metamielcito, bastonete e segmentados neutroflicos, eosinoflicos e basoflicos.

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Figura 5. Esquema representativo para confeco de lminas de medula ssea usando a tcnica de compresso Squash.

Nem sempre necessria a avaliao citolgica quantitativa da medula ssea para uma avaliao clnica do animal. Uma viso geral da resposta medular pode ser obtida por meio da avaliao qualitativa da relao mielide-eritride (M:E), que expressa a proporo do nmero total de clulas da srie granuloctica (mielide) e o total de eritrcitos nucleados da srie eritroctica (eritride). A relao mielide/eritride (M:E) calculada pela contagem de 500 clulas determinando a relao entre clulas granulocticas (incluindo granulcitos maduros) e clulas eritrides nucleadas. A relao M:E est geralmente entre 0,75 e 2,5 em ces, entre 1 e 3 em gatos, entre 0,5 e 1,5 em eqinos e 0,77 e 1,68 em ovinos. O aumento da celularidade observado em medulas que esto respondendo a citopenias perifricas, como por exemplo, as anemias regenerativas, leucopenias e trombocitopenias. Medulas hiperplsicas tambm so observadas em animais com um aumento na demanda para produo de leuccitos (leucocitose) e ainda quando a medula esta invadida por clulas neoplsicas (mielofitise). Megacaricitos so as maiores clulas hematopoiticas na medula ssea podendo medir at 150 m, sendo facilmente reconhecidas em lentes de baixo aumento. Em uma medula ssea normal a maioria dos megacaricitos devem ser maduros. Um nmero aumentado de clulas imaturas pode ser observado em respostas regenerativas as trombocitopenias perifricas. Em uma medula adequadamente celular, uma relao M:E menor que 0,5 seria sugestivo de uma hiperplasia eritride ou de uma hipoplasia granuloctica. O grau de celularidade da medula associado com o hemograma deve indicar a interpretao apropriada para o caso. Por outro lado, uma relao M:E maior que 2,0 sugere uma hipoplasia eritride ou uma hiperplasia granuloctica.

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Uma medula ssea normal pode conter at 15% de linfcitos pequenos e 2% de plasmcitos. Moncitos, macrfagos e clulas em mitose normalmente no excedem 1 a 2% do total de clulas nucleadas. Osteoclastos e osteoblastos so raramente vistos na medula ssea, exceto em animais em crescimento. Qualquer aumento numrico destas clulas, ou ainda, alterao da sua morfologia normal deve ser referenciada no exame da medula ssea. Plasmcitos so clulas derivadas dos linfcitos B em resposta a estimulao antignica, proliferao e maturao. Estas clulas podem ser encontradas em qualquer tecido, porm so mais numerosos em tecidos envolvidos na produo de anticorpos. So comumente encontradas em linfonodos antigenicamente estimulados e outros tecidos linfides ativos, tais como, o bao e a medula ssea. Plasmcitos em atividade secretria geralmente contm vrias vesculas hipertrofiadas derivadas do reticulo endoplasmtico. Estas vesculas, denominadas de corpsculos de Russel, contm um material granular a floculento que representa molculas de imunoglobulinas recentemente sintetizadas. Mott cell o termo usado para denominar plasmcitos que apresentam mltiplos corpsculos de Russel no seu citoplasma. Exames citolgicos da medula ssea so teis para avaliao de distrbios do metabolismo do ferro. A reao do Azul-da-Prssia, em que o ferro inico reage com uma soluo cida de ferrocianeto produzindo uma cor azul, comumente utilizada para esse fim. possvel avaliar as reservas de ferro corando-se os tecidos com o Azul-da-Prssia. Isto se aplica especialmente em preparados da medula ssea e nas biopsias hepticas. Pode-se dizer que a presena de ferro corvel nas clulas reticuloendoteliais da medula ssea elimina a deficincia de ferro como causa da anemia. Exceto para gatos, a medula ssea de animais domsticos adultos exibe ferro corvel (hemossiderina) dentro de macrfagos. Na deficincia de ferro, macrfagos e eritrcitos em desenvolvimento no contm grnulos de ferro corveis. Por outro lado, quando a sntese do heme est prejudicada, a mitocndria acumula excesso de agregados amorfos de ferro e um grande anel de grnulos siderticos azuis rodeiam o ncleo do eritroblasto. A grande vantagem da avaliao do ferro medular em relao s determinaes sricas de ferro, capacidade total de ligao do ferro (CTLF) e ndice de saturao de transferrina (IST) que estes podem no diferenciar a depleo dos estoques de ferro das condies associadas aos defeitos da liberao do ferro pelo sistema mononuclear fagocitrio, como ocorre na anemia da doena inflamatria (ADI).

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5. URINLISE
Snia Terezinha dos Anjos Lopes Angela Veiga

Introduo fisiologia renal Os animais apresentam dois rins, que esto situados dorsalmente na cavidade abdominal, logo abaixo do diafragma, um de cada lado da coluna vertebral. Em termos gerais os rins apresentam forma de feijo, ainda que esta possa variar entre as espcies animais. Esto divididos em cpsula, crtex, medula e pelve. Os rins desempenham funes vitais nos animais, funes estas relacionadas manuteno do volume e concentrao do lquido extra-celular, manuteno da presso e do equilbrio osmtico e hidro-eletroltico do organismo, manuteno do pH sangneo, produo de hormnios, excreo de substncias txicas e manuteno de nutrientes orgnicos.

Funes dos rins O rim dos mamferos um rgo de grande importncia, encarregado de uma srie de eventos relacionadas manuteno da homeostasia corporal e controle da maior parte dos constituintes dos lquidos orgnicos. Suas funes bsicas so: 1. Filtrar o sangue e excretar os produtos terminais do metabolismo corporal que so inteis ao organismo; 2. Recuperar o material filtrado necessrio ao organismo como protenas de baixo peso molecular, gua e eletrlitos; 3. Manuteno do equilbrio cido-bsico pela reteno ou eliminao de gua ou eletrlitos; 4. Produo e liberao de hormnios que exercem um papel vital no controle da presso sangnea sistmica (renina) e na produo de clulas sangneas vermelhas (eritropoietina). O nfron A unidade funcional do rim o nfron, o conhecimento da sua funo essencial para entender a funo renal. O nmero de nfrons varia consideravelmente entre as espcies, de 190.000 nfrons/rim no gato 4.000.000 nfrons/rim no bovino. Ele composto por vrios tipos celulares incumbidos de efetuar funes individuais, e preparados para responder, quando necessrio, a uma srie de sinais diretos e indiretos. O nfron formado pelo glomrulo que responsvel pela filtrao e pelo sistema tubular que dividido em vrios segmentos, onde o lquido filtrado transformado em urina durante o seu trajeto at a pelve renal. Os dois rins juntos recebem aproximadamente 25% do dbito cardaco. O sangue entra no glomrulo pela arterola aferente e sai pela arterola eferente. O glomrulo uma rede de at 50

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capilares paralelos, ramificados e anastomosados, recobertos por clulas epiteliais e envoltos pela cpsula de Bowman. A presso do sangue no glomrulo acarreta a filtrao do lquido para o interior da cpsula de Bowman, e a partir da, o lquido flui para o tbulo proximal, localizado no crtex renal juntamente com o glomrulo. Do tbulo proximal, o lquido passa para a Ala de Henle, que mergulha na massa renal, com algumas das alas atingindo a parte inferior da medula renal. Cada ala dividida em ramo descendente e ascendente. A poro descendente e a extremidade inferior da ascendente so extremamente finas, sendo chamadas segmento delgado da ala de Henle. A outra poro da ala ascendente possui mesma espessura das outras pores tubulares, e denominada de segmento espesso do ramo ascendente. Aps passar pela ala de henle o lquido atinge o tbulo distal, no crtex renal. At 8 tbulos distais formam o tbulo coletor, que volta a mergulhar na medula e sua extremidade passa a constituir o canal coletor. Os canais coletores unem-se para formar canais coletores maiores. Estes iro se lanar na pelve renal pelas papilas renais que so projees da medula que fazem protuses para dentro dos clices renais (recessos da pelve renal). A medida que o filtrado glomerular flui atravs dos tbulos, mais de 99% de sua gua e quantidades variveis de seus solutos so reabsorvidos normalmente para o sistema vascular, e pequenas quantidades de algumas substncias so tambm secretadas para os tbulos. O restante da gua tubular e das substncias dissolvidas passa a constituir a urina (Figura 1). Uma rede de capilares peritubulares responsabiliza-se pela irrigao sangunea do rim. Esta rede recebe o sangue proveniente das arterolas aferentes aps passagem pelo glomrulo. A funo bsica do nfron consiste em depurar o plasma sangneo de substncias indesejveis como os produtos finais do metabolismo proteico (uria), muscular (creatinina), cido rico e uratos. Os ons sdio, potssio, cloro e hidrognio que tendem a acumular-se em quantidades excessivas tambm so filtrados pelos nfrons. Os mecanismos bsicos da funo renal so filtrao, reabsoro de substncias necessrias para o metabolismo e secreo (Tabela 1).
Tabela 1. Estruturas renais e suas funes de acordo com os segmentos celulares Estrutura Glomrulo Tbulo proximal Segmento delgado da ala de Henle Segmento espesso do ramo ascendente da ala de Henle Tbulo contornado distal Sistema de ductos coletores Funo Filtrao do sangue Reabsoro volumosa da gua e solutos filtrados Manuteno da hipertonicidade medular pelo mecanismo de contra-corrente Reabsoro de NaCl , gerao da hipertonicidade medular, diluio do fluido tubular e reabsoro de cations divalentes Reabsoro de NaCl, diluio do fluido tubular e reabsoro de cations divalentes Controle final da taxa de excreo de eletrlitos, controle cidobase e da gua

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Figura 1. Esquema das atividades de absoro, reabsoro e excreo em cada parte da estrutura do nfron.

Filtrao glomerular O glomrulo constitui uma rede de capilares especificamente designado para reter componentes celulares e protenas de alto e mdio peso molecular no sistema vascular enquanto provem um fluido tubular que inicialmente possui uma composio eletroltica e aquosa idntica a do plasma. O fluido tubular inicial chamado de filtrado glomerular e o seu processo de formao conhecido como filtrao glomerular. A taxa de filtrao glomerular (TFG) um parmetro para avaliao da funo renal. O tufo glomerular coberto por uma camada de clulas epiteliais denominada Cpsula de Bowman. A rea entre o glomrulo e a cpsula de Bowman denominada espao de Bowman onde o stio da coleo de filtrado glomerular que vai desembocar no primeiro segmento tubular, o tbulo proximal. A estrutura dos capilares glomerulares importante para determinar a taxa e seletividade da filtrao glomerular. A permeabilidade desses capilares de 100 a 500x maior comparado a um capilar normal. A presena de numerosas fenestras nas clulas endoteliais dos capilares glomerulares permite esta permeabilidade. Devido a isso, o volume filtrado produzido muito grande porm com uma grande seletividade para tamanho molecular. A membrana glomerular praticamente impermevel a todas as protenas plasmticas, porm altamente permevel a outras substncias dissolvidas no plasma normal. Essa permeabilidade seletiva responsvel

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pelas diferentes taxas de filtrao do sangue. Em condies normais, os componentes celulares e protenas plasmticas de tamanho igual ou superior ao da albumina (aproximadamente 6nm), no atravessam a barreira de filtrao enquanto a gua e os solutos so livremente filtrados. Outro aspecto a carga eltrica das protenas plasmticas. A parede glomerular possui glicoprotenas de carga eltrica negativa incorporadas a membrana basal que repelem negativamente protenas plasmticas de carga negativa reduzindo a passagem pela barreira de filtrao. O formato e a deformidade tambm so aspectos relevantes na filtrao. O alto grau de seletividade da membrana est relacionado ao tamanho dos poros (permite a passagem de protenas at 8 nm) e a elevada negatividade dos poros glomerulares que repulsam molculas proticas. A composio do filtrado glomerular semelhante ao lquido intersticial (solutos e eletrlitos). Diariamente, o ritmo de filtrao glomerular no co de 53,3 L/dia. O filtrado difere do plasma por no possuir suficiente quantidade de protenas. Reabsoro e secreo tubular A reabsoro tubular um processo seletivo que ocorre nos tbulos proximais, ala de Henle, tbulo distal e canal coletor. Nesse processo, 99% do filtrado glomerular reabsorvido pelo epitlio onde a glicose e aminocidos so totalmente reabsorvidos e K+ e H+ so eliminados. O rim o responsvel pelo transporte ativo da glicose, aminocidos, Ca2+, K+, Cl-, H2CO3, P+ e ons urato. A glicose e os aminocidos so transportados da luz tubular atravs da borda em escova pelo processo co-transporte de sdio onde se fixam protena carreadora do sdio que penetra na membrana e desloca ambos os compostos. Dentro da clula h separao da protena carreadora e essa desloca-se por difuso facilitada para os capilares peritubulares. Os tbulos proximais so altamente permeveis gua e o transporte ocorre de maneira passiva atravs do epitlio tubular. Quando os diferentes solutos so transportados para fora do tbulo e atravs do epitlio tubular, a concentrao produz osmose de gua na mesma direo em que foram transportados os solutos. Algumas pores do sistema tubular so muito mais permeveis gua que outras e isso importante no mecanismo de controle da concentrao urinria. Aproximadamente metade da uria permanece no lquido tubular, aumentando a sua concentrao. A diferena da concentrao de uria que se estabelece entre o lquido tubular e peritubular permite a difuso. Este mesmo efeito ocorre tambm para outros solutos tubulares que no so reabsorvidos ativamente, mas que so difusveis atravs da membrana tubular. Uma grande proporo de uria permanece nos tbulos e perdida na urina habitualmente cerca de 50% de toda quantidade que penetra no filtrado glomerular. A permeabilidade da membrana tubular para reabsoro de creatinina, insulina (um grande polissacardeo), manitol (um 110

monossacardeo) e sacarose nula, o que significa que uma vez que essas substncias foram filtradas para dentro do filtrado glomerular so na totalidade eliminadas pela urina. O controle da permeabilidade do canal coletor gua feito pelo ADH. Em situaes onde h secreo excessiva desse hormnio, a gua reabsorvida para o interstcio medular em grandes quantidades, reduzindo assim o volume de urina e concentrando a maioria dos solutos. A segunda caracterstica importante do epitlio do canal coletor sua capacidade de secretar H+, contra um gradiente muito alto desses ons; desempenhando um papel extremamente importante no controle do equilbrio cido-bsico dos lquidos corporais. Fatores que afetam a filtrao glomerular Os rins possuem habilidade para manter a taxa de filtrao glomerular (TFG) dentro dos padres fisiolgicos em um nvel relativamente constante a despeito das mudanas de presso sangnea e do fluido sangneo renal. A TFG controlada pela modulao da presso sangnea sistmica e volume intravascular, pelo controle intrnseco do fluxo sangneo renal, presso capilar glomerular e o coeficiente de ultrafiltrao (Cf). Esses efeitos so mediados primariamente por fatores humorais, sendo o mais importante o sistema renina-angiotensinaaldosterona (RAA). O controle intrnseco da perfuso capilar glomerular mediado tambm por sistemas de controle da resistncia do fluxo nas arterolas aferentes e eferentes. Estes dois sistemas autoreguladores so, o reflexo miognico e o feedback tubuloglomerular. O sistema renina-angiotensina-aldosterona um mecanismo importante no controle da TFG e fluxo sangneo renal (FSR). A renina um hormnio produzido por clulas especializadas da parede da arterola eferente, as clulas mesangiais granulares extraglomerulares. A liberao da renina estimulada por uma diminuio da presso de perfuso renal (Figura 2). Nveis elevados de angiotensina II tambm estimulam a produo e liberao de prostaglandinas vasodilatadoras renais (PGE2 e PGI2) que so fatores moderadores do sistema renina-angiotensina-aldosterona. A funo deles contrapor ao efeito vasoconstrictor da angiotensina II na vascularizao intrarenal e auxiliar na manuteno da resistncia renal vascular em nveis normais ou prximos do normal. Sem este efeito, a vasoconstrio generalizada resultaria numa reduo da TFG e FSR, a despeito da elevao da presso sangnea.

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Figura 2. Esquema do sistema renina-angiotensina-aldosterona no controle da TFG.

A aferncia aos rins provm da artria aorta que se divide em artria renal e esta em arterola aferente, capilares glomerulares e peritubulares. Por sua vez a eferncia dos rins executada pela arterola eferente que drena para a veia renal. A unidade morfo-funcional renal o nfron, estrutura tubular microscpica que realiza todas as funes dos rins, estando presente em grande nmero, que varia de 300 mil a 1 milho, dependendo da espcie animal. O nfron est divido em duas pores, sejam o glomrulo de Malpighi e os tbulos (contorcido proximal, ala de Henle, contorcido distal e tbulo coletor), continuando em ducto coletor, que desemboca na pelve. As funes dos nfrons resumem-se em 3 aes: filtrao glomerular, reabsoro e secreo tubulares. A partir disso, o plasma equivalente a 20% do dbito cardaco filtrado, dando origem ao filtrado glomerular e, consequentemente, ao lquido tubular, que aps mecanismos de reabsoro de alguns nutrientes e secreo de metablitos dar origem a urina, o principal lquido de excreo do organismo. A urina coletada na pelve renal, que se continua em 2 ureteres, os quais penetram na bexiga onde se armazena a urina, a qual excretada atravs da uretra.

Coleta de urina A melhor urina a primeira da manh, uma vez que est concentrada, devido s horas sem ingesto hdrica durante a noite. Assim apresenta elementos que expressam a real situao do trato urinrio. A urina pode ser colhida por mico espontnea, cateterismo ou cistocentese, sendo que cada uma das tcnicas produz algumas alteraes que devem ser consideradas quando da interpretao dos resultados da urinlise.

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Mico espontnea: sendo a tcnica mais fisiolgica, a que causa menos agresso ao animal. Deve-se tomar o cuidado com contaminao ambiental neste tipo de coleta. Uma vez que a poro final do trato urinrio contm bactrias saprfitas, preconiza-se a limpeza vaginal ou prepucial previamente coleta e que se despreze o primeiro jato. Podem ser encontrados proteinria e bacteriria branda sem significado clnico quando se emprega este mtodo de coleta urinria. Este tipo de coleta no deve ser empregado em cadelas ou gatas na presena de cio devido contaminao da urina com sangue proveniente do trato reprodutivo. Cateterismo: Existem catteres urinrios (sondas) especficas para cada espcie e sexo. Podem ser usadas sondas humanas para a cateterizao de ces machos, sendo o calibre varivel com o tamanho do animal. Emprega-se esta metodologia quando no se obteve resultados com a tentativa de coleta por mico espontnea. o mtodo mais traumtico ao animal, podendo ser utilizado em ces e gatos machos obstrudos, na tentativa de desobstruo. Nos machos deve ser realizada uma limpeza prepucial com gaze umedecida. Aps o pnis exteriorizado e a sonda inserida cuidadosamente, atentando-se para que ela no seja contaminada no ambiente e assim, carreie microorganismos para o interior do trato urinrio do paciente. Ao introduzir a sonda haver trs pontos de resistncia em ces machos: o osso peniano, a entrada da pelve e a entrada da bexiga. Assim que a sonda atingir a bexiga, a urina drenada por capilaridade, no caso de a bexiga estar cheia, ou pode ser aspirada com seringa, cuidando-se para no lesionar a parede vesical com a ponta da sonda. Como a uretra de cadelas e gatas mais curta, as sondas so metlicas, podendo causar ainda mais traumatismos. O animal poder permanecer em estao ou decbito lateral durante a sondagem. Deve-se realizar uma limpeza vulvar antes de se iniciar a tcnica. A partir da, um especulo introduzido na vagina, no sentido cranio-dorsal, tentando-se desviar do fundo de saco vaginal. Em seguida o meato urinrio visualizado com o auxlio de uma fonte de luz e a sonda esterilizada inserida cuidadosamente at atingir a bexiga, momento em que a urina drenada por capilaridade. Neste tipo de coleta espera-se encontrar na urinlise proteinria, hematria e presena de nmero moderado de clulas. Cistocentese: Consiste na coleta de urina atravs da puno vesical com agulha 12x8 acoplada a seringa. Para a realizao deste tipo de coleta, necessariamente a bexiga deve estar repleta e ser palpvel. Esta tcnica utilizada em casos em que a tentativa de coleta por mico espontnea no surtiu resultados ou quando requerido exame bacteriolgico da urina, j que a bexiga normalmente livre de patgenos. Apesar da puno abdominal e vesical, este mtodo leva a menos traumatismos do que o anterior, podendo ser guiado por ultrassom. O animal pode ser contido em decbito lateral ou dorsal. A regio ventral deve ser tricitomizada e submetida a antissepsia. A bexiga deve ser palpada e firmada em uma das mos, enquanto que com a outra a agulha acoplada a seringa introduzida crnio caudalmente, na regio mdia da bexiga, em um ngulo de 45, com o objetivo de se evitar a regio cranial da bexiga, a qual apresenta um 113

espessamento fisiolgico da parede. medida que a agulha penetra na bexiga, a urina drena para a seringa mediante presso negativa. Cada espcie animal apresenta particularidades, as quais podem influenciar no mtodo de coleta urinria. Ruminantes: O estmulo pra mico em vacas pode ser alcanado massagendo-se o clitris. Em touros e carneiros, amarra-se um frasco de coleta e solta-se o animal a campo, sendo que quando o animal urinar, a urina ficar no frasco. No se realiza sondagem em ruminantes machos devido a presena do S peniano e/ou apndice vermiforme. Eqinos: Estimula-se a mico do garanho ao lev-lo para perto da gua em cio. guas so facilmente cateterizadas, tendo-se apenas o cuidado de detectar o meato urinrio por palpao transvaginal e introduzir o cateter guiado pela mo que palpa o meato. Em pequenos animais podem ser realizados os trs tipos de coleta, cada uma com seus aspectos positivos e negativos, sendo indicada de acordo com cada caso. Um bom estmulo para a mico de caninos passear com o animal.

Acondicionamento da amostra A amostra de urina apresenta alta sensibilidade temperatura ambiente. A urina deve ser analisada at no mximo 2 h aps sua coleta se mantida fora de refrigerao. Aps 30 minutos a esta temperatura inicia a multiplicao bacteriana, portanto dever ser acondicionada a 4C no mximo por 12 h se no for analisada at 2 h. Nesse caso, as bactrias, quando presentes, proliferam rapidamente e se forem redutoras de uria iro alcalinizar a amostra. A urina alcalina, por sua vez, tende a dissolver os cilindros e ocasionar a cristalizao dos solutos alterando o aspecto macro e microscpico da urina. Com a manuteno da urina no ambiente, vrias outras alteraes ocorrem, interferindo nos resultados do exame e, consequentemente, com a sua interpretao, tais como consumo de glicose, caso esteja presente e destruio de elementos figurados, como clulas e cilindros. Temperaturas inferiores de refrigerao podem elevar a densidade especfica da amostra e podem degradar os constituintes celulares. Antes da anlise da urina refrigerada, esta deve retornar temperatura ambiente previamente, uma vez que a refrigerao torna susceptvel a cristalizao de determinadas substncias ora presentes na amostra. Existem conservantes que, ao serem adicionados urina, atuam como estabilizantes. So eles o tolueno, o timol e a formalina. Indica-se o uso de 1 gota de formalina a 40% para cada 30 mL de urina. Deve-se ter em mente que os conservantes causam alteraes qumicas na urina, inviabilizando o exame qumico. A urina deve ser colhida em recipiente limpo, podendo ser de vidro ou plstico e obrigatoriamente estril se a amostra for submetida a isolamento bacteriano e antibiograma. Se a amostra de urina no for analisada imediatamente aps a coleta, os frascos escuros so 114

preferveis pois a luz ambiental pode ocasionar a degradao de certos constituintes da urina, tais como bilirrubina e urobilinognio, em menos de uma hora. A primeira urina da manh prefervel, pois provavelmente contm os elementos de significado diagnstico, enquanto a ingesto de lquidos durante o dia dilui a urina. O frasco contendo a urina deve ser identificado, e enviado junto com a requisio devidamente preenchida. A seguir um exemplo de requisio:
Exame n : _________ Proprietrio : RG : Data: / Espcie : Raa : Sexo : Idade : Horrio coleta : Diagnstico provisrio: Sob Tratamento? Qual? Histria Clnica resumida : Coleta: ( ) Cistocentese ( ) Cateterismo ( ) Mico natural /

A URINLISE A urinlise, ou exame comum de urina (ECU), tambm chamado exame qumico de urina (EQU), consiste em um exame de primeira linha. Isso implica na sua utilizao como um dos primeiros exames complementares a serem solicitados pelo clnico veterinrio, juntamente com o hemograma e o exame parasitolgico de fezes. Este exame presta grande auxlio, uma vez que traz informaes no somente sobre o trato urinrio (inferior e superior), mas tambm sobre outros rgos e sistemas, tambm servindo como exame de triagem e de check-up. O EQU est dividido em 3 partes: exame fsico, exame qumico e exame do sedimento.

EXAME FSICO DA URINA Consiste na observao visual e macroscpica das caractersticas da urina.

Volume O volume de urina produzido diariamente pode ser bastante varivel, dependendo da espcie e raa do animal, estado de hidratao, temperatura ambiente e umidade relativa do ar, atividade, dieta, fluidoterapia, tamanho e peso do animal, ingesto de medicamentos e doenas que interfiram na manuteno hdrica do organismo. Como em animais a obteno de urina padro de 24 horas muito difcil, o volume na verdade a quantidade de urina recebida pelo laboratrio. O volume mnimo para a realizao adequada do exame de 10 mL. Em condies de sade, o volume urinrio inversamente proporcional densidade urinria especfica; portanto, o aumento da quantidade de urina excretada, ou poliria, est associada densidade especfica baixa; e a oligria, diminuio do volume urinrio est associada densidade especfica elevada (Tabela 2). Se a funo renal estiver em perfeitas condies, em um animal desidratado tem-se uma oligria fisiolgica, acompanhada de urina concentrada. J um animal desidratado com poliria, suspeita-se de alguma patologia (renal ou extra-renal).

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Cor A cor fisiolgica da urina amarela, a qual pode variar de mais claro a mais escuro. A excreo de alguns compostos, tanto exgenos como exgenos, na urina pode levar a alterao de sua colorao. A cor da urina deve sempre ser considerada associada densidade especfica e volume urinrio. A intensidade da colorao urinria depende da concentrao de urocromos, e varia inversamente com o volume urinrio. A colorao normal da urina pode variar do amarelo-palha ao mbar claro, e em eqinos at a tonalidade amarronzada. Entre as cores mais importantes: - Plida ou amarelo-clara: geralmente uma urina diluida com densidade baixa e associada poliria. Pode ser observada na doena renal terminal, ingesto excessiva de lquidos, Diabetes insipidus, hiperadrenocorticismo, piometra, fase polirica da nefrose txica. - Amarelo-escura ao mbar: urina concentrada com densidade elevada e associada oligria. Pode ser associada febre, desidratao, diminuio de ingesto hdrica, nefrite aguda (fase oligrica), nefrose txica. - Alaranjado-mbar a amarelo-esverdeada: forma uma espuma alaranjada ou esverdeada quando agitada e se relaciona com a presena de bilirrubina. - Avermelhada: pode indicar presena de hemoglobina e/ou hemcias. Aps a centrifugao ou sedimentao a hematria simples apresenta-se com sobrenadante lmpido. - Marron: pode indicar presena de hemoglobina, mioglobina, ou urina normal de eqinos aps certo tempo (oxidao por pirocatequina). - Azul-esverdeada: pode ser devido ao azul de metileno, que comumente encontrada na composio de antisspticos urinrios. A urina normal quando agitada forma uma certa quantidade de espuma branca, tpica. Na proteinria, a quantidade de espuma abundante e demora a desaparecer. Na bilirrubinria a espuma frequentemente apresenta-se esverdeada ou acastanhada; na hemoglobinria, a espuma apresenta-se avermelhada.

Odor O odor fisiolgico da urina caracterizado como sui generis, o qual varia entre as espcies. A urina normal dos herbvoros tem um odor aromtico, mais intenso nos ruminantes, enquanto que nos carnvoros picante e aliceo. O odor da urina dos machos de certas espcies pronunciado, e s vezes at repugnante (suno, felino e caprino). O odor normal da urina conferido pela presena de cidos orgnicos volteis. Entre os odores mais importantes: - Ptrido: indica necrose tecidual de vias urinrias - Adocicado: presena de corpos cetnicos; associado a Diabetes melito e acetonemia da vaca leiteira - Amoniacal: observado na urina de animais com infeco bacteriana. 116

Aspecto O aspecto fisiolgico da urina lmpido, a exceo do eqino, cuja urina turva devido presena de cristais de carbonato de clcio e muco. A presena na urina de elementos figurados podem torn-la levemente turva a turva. Para se detectar esta caracterstica transfere-se a amostra para um tubo transparente de vidro. A capacidade de se realizar a leitura de algo atravs do vidro caracteriza a urina como lmpida. A observao das letras com impossibilidade de leitura a caracteriza como levemente turva e a no observao de letras, como turva. Os elementos que levam turbidez da urina so aqueles que no se dissolvem na poro aquosa, como bactrias, muco, cristais, cilindros, leuccitos, eritrcitos e clulas epiteliais de descamao. Estes elementos faro parte do sedimento aps o ato da centrifugao e no alteram a densidade especfica. A contaminao da urina por exsudato de trato genital tambm pode ser a causa da turvao da urina colhida sem cateterizao. O nico meio de se saber a causa da turbidez o exame microscpico.

Consistncia A consistncia fisiolgica da urina de todas as espcies, excetuando-se a eqina, lquida. Os eqinos apresentam a urina viscosa devido presena de glndulas produtoras de muco no trato urinrio inferior. O fato de esta espcie formar cristais de carbonato de clcio com mais facilidade tambm pode colaborar com a viscosidade e tornar a urina levemente turva. Nas demais espcies, a viscosidade pode ocorrer em infeces severas do trato urinrio, com presena macia de muco.

Densidade Tambm chamada de gravidade especfica, consiste na relao entre a massa de uma soluo e igual volume de gua e avaliado por refratometria, comparando-se com o ndice de refrao da gua na presena de luminosidade. Representa a concentrao dos slidos em soluo urinria e retrata o grau de reabsoro tubular ou da concentrao renal. Preferencialmente obtida por refratometria uma vez que as tiras urinrias no so eficazes para determinar a densidade em caninos. Para determinao, prefere-se o uso do sobrenadante aps a centrifugao. A densidade urinria influenciada por fatores como peso corporal, dieta, exerccio, idade, condies climticas e metabolismo. Caracteriza-se como uma das caractersticas mais importantes da urina. Com esta informao temos a possibilidade de avaliar a funo concentradora dos nfrons. Porm a densidade deve sempre ser analisada luz do estado de hidratao do paciente. Caso no se tenha esta informao, o teste de privao hdrica e uma nova avaliao da densidade pode auxiliar nesta investigao. De um modo geral, pode-se considerar uma variao entre 1.015 e 1.045, sendo 117

que uma nica determinao fora destes limites no significa, obrigatoriamente, alterao renal. Portanto, deve ser interpretada junto ao grau de hidratao e ingesto hdrica recente do animal. A densidade fisiolgica em um animal desidratado deve ser maior que 1.030-1.035. Caso seja inferior isto significa que os rins no esto com sua capacidade de concentrar urina totalmente funcionais ou que esto refratrios ao ADH, como ocorre em algumas patologias renais, ou ainda, que o ADH no est sendo produzido eficientemente, como ocorre na diabetes insipidus. Indica-se neste caso uma avaliao mais detalhada. A capacidade concentradora renal a primeira funo afetada, quando 2/3 de ambos os rins esto afuncionais, o que caracteriza uma doena renal. A azotemia renal s comea a se desenvolver quando nos nfrons esto comprometidos, caracterizando uma insuficincia renal. Seja qual for o tipo de patologia renal, seja aguda ou crnica, a densidade sempre estar baixa. Quanto classificao, a urina pode ser denominada de hipostenrica (menor ou igual a 1.007), isostenrica (entre 1.008 a 1.012) e de elevada densidade urinria (acima de 1.030 para ces e 1.035 para gatos). Em algumas doenas renais, observa-se h perda da capacidade renal de concentrar a urina, reduzindo a densidade. As causas mais freqentes de alteraes na densidade especfica urinria esto representadas na Tabela 2.

Tabela 2. Condies no patolgicas e patolgicas de alteraes da densidade No patolgico (transitrio) Patolgico diabetes mellitus diabetes inspida insuficincia renal hipoplasia renal pielonefrite piometra hepatopatias hiperadrenocorticismo desidratao por perda febre

Poliria ( densidade)

ingesto excessiva de gua terapia diurtica fluidoterapia terapia de corticides

Oligria ( densidade)

reduo de ingesto de gua temperatura elevada hiperventilao alta atividade fsica

EXAME QUMICO DA URINA Para que se realize esta parte da urinlise, devemos utilizar tiras reagentes urinrias, comercialmente disponveis, as quais apresentam vrios quadradinhos impregnados de reagentes especficos para cada substncia supostamente presente na urina. A partir do momento em que a urina entrar em contato com seu respectivo reagente, ter incio a reao, a qual determinar a alterao na colorao inicial da tira em torno de 30 60 segundos, o que pode ser comparado com escala presente no rtulo do produto, sendo um mtodo semi-quantitativo para a realizao rpida do exame qumico da urina. 118

pH Os rins so um dos componentes do sistema responsvel pela manuteno do pH sangneo, seja pela excreo ou manuteno de cidos ou bases do organismo. Para manter o pH sangneo constante, entre 7,35 7,45, haver alterao do pH urinrio, o que corresponde a condies alimentares e metablicas. Assim, animais que ingerem alimentos como carne e cereais apresentam pH urinrio de cido a neutro, como carnvoros (pH urinrio 5,5-7,0) devido presena de fosfatos cidos de sdio e clcio, enquanto que os herbvoros, com dieta mais alcalina, apresentam o pH urinrio fisiolgico entre 7,0-8,5 devido presena de bicarbonato de clcio solvel. Neonatos de qualquer espcie, por ingerirem unicamente leite, apresentam pH urinrio cido. As alteraes do pH urinrio geralmente indicam mais uma alterao sistmica do que um processo localizado em nvel de sistema urinrio. Alteraes metablicas, como a fase cetoacidtica da diabetes mellitus, insuficincia renal, dieta hiperproteica, administrao de acidificantes (cloreto de amnio, cloreto de clcio, DL-metionina, fosfato cido de sdio), catabolismo de protenas orgnicas (febre, jejum, diabetes mellitus), acidose metablica ou respiratria, entre outras, tornam a urina cida. So causas de urina alcalina atraso no processamento e m conservao da amostra, cistite associada a bactrias produtoras de urease (Staphylococcus sp. e Proteus sp.), administrao de alcalinizantes (bicarbonato de sdio, lactato de sdio, citrato de sdio), reteno urinria vesical e alcalose metablica ou respiratria.

Protenas Em condies fisiolgicas, as protenas so 100% mantidas no sangue durante a filtrao glomeular e reabsoro tubular, no estando presentes na urina. Em condies normais a quantidade de protena na urina muito pequena e geralmente as tiras urinrias no detectam. Porm, dependendo da concentrao urinria (urinas concentradas), do tipo de coleta de urina ou da categoria animal (ces machos), pode-se encontrar proteinria leve, relacionada ao trato urinrio baixo (bexiga e uretra). Para que no se tenha dvidas deve-se sempre elucidar a origem da proteinria. A presena de protenas na urina deve ser avaliada luz da densidade urinria e do sedimento, associado a achados clnicos. Proteinria pr-renal: ocorre por alteraes no renais decorrentes de febre, convulses ou exerccio muscular intenso. A hipertenso glomerular pode levar a proteinria branda, como ocorre no hiperadrenocorticismo canino. Pode tambm estar associada a perda glomerular de protenas de baixo peso molecular, como as produzidas nos plasmocitomas. Proteinria renal: quando os rins perdem a capacidade de filtrao por sofrer uma alterao de permeabilidade capilar, como ocorre em algumas doenas com deposio de 119

imunocomplexos nas microvasculaturas, o que causa a leso endotelial, por exemplo, glomerulonefrite e amiloidose renal. Este tipo de proteinria est associado presena de cilindros e clulas renais no sedimento e normalmente acompanhado de densidade urinria baixa e azotemia. O significado da perda protica renal pode ser determinado calculando-se a razo protena /creatinina urinrias. Valores acima de 1 para o co e 0,7 para o gato sugerem doena renal ou inflamao do trato urinrio. Proteinria ps-renal: ocorre em doenas do trato urinrio inferior, como cistites e uretrites. Geralmente est acompanhada de eritrcitos, leuccitos e clulas epiteliais do trato urinrio baixo no sedimento e ausncia de cilindros. A densidade encontra-se dentro dos valores fisiolgicos. Na maioria dos casos, alteraes no comportamento de mico so evidentes, como disria, polaquiria e estrangria. As tiras de urinlise so sensveis para albumina e no para protenas Bence-Jones. Geralmente o pH urinrio elevado pode interferir o resultado desse mtodo e nesse caso (pH urinrio acima de 7,5) recomenda-se os testes de precipitao cida (cido sulfosaliclico) para deteco semiquantitativa de protena na urina. Essa tcnica detecta albumina e demais tipos de protena. O grau de proteinria no necessariamente proporcional severidade da doena principalmente na proteinria renal. As causas de proteinria so relacionadas na Tabela 3.

Tabela 3. Causas de proteinria Proteinria fisiolgica - exerccio muscular excessivo - convulses - ingesto excessiva de protenas - funo renal alterada nos primeiros dias de vida Proteinria patolgica Origem Significado Pr-renal - doena primria no renal

Renal

- aumento da permeabilidade capilar - doena tubular com perda funcional - sangue ou exsudato inflamatrio renal - infeces do trato urinrio inferior - hematria ps-renal - obstruo por clculos (urolitase)

Ps-renal

Patologias hemoglobinria mioglobinria - globulinria nefrose / cistos renais glomerulonefite nefrite / pielonefrite neoplasias / hipoplasia pielite / ureterite cistite / uretrite vaginite / postite

Glicose A glicose filtrada nos glomrulos, mas a sua maior parte reabsorvida nos tbulos proximais, portanto no deve aparecer na urina em condies fisiolgicas. A glicosria ocorre sempre que a glicemia exceder a capacidade de reabsoro renal (Tabela 4).

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Tabela 4. Valores de glicemia a partir dos quais observa-se glicosria (adaptado de Latimer et al., 2003). Espcie Bovinos Caninos Felinos Aves Glicemia (mg/dl) > 100 > 180 > 280 > 600

Tambm deve ser verificada a origem desta glicosria como renal ou no-renal. A glicosria renal (perda da capacidade reabsortiva tubular) ocorre acompanhada de densidade baixa, sedimento caracterstico de leso renal e azotemia, enquanto que a glicemia permanece dentro de valores fisiolgicos (70-110 mg/dL). Por outro lado, a glicosria extra renal pode acontecer se os valores sangneos de glicose extrapolam a capacidade reabsortiva dos rins (limiar renal), que est em torno de 180-220 mg/dL (plasmtica). Isso pode ocorrer na diabetes mellitus, associada a hiperglicemia de jejum persistente e densidade normal. A glicosria pode tambm estar associada ao hiperadrenocorticismo, no tratamento parenteral com glicose e fructose, na pancreatite necrtica aguda, na ingesto excessiva de aucares e administrao parenteral de adrenalina. Nos casos em que se observa glicosria no associada a hiperglicemia pode-se relacionar a nefropatias congnitas ou hereditrias e a doenas renais com comprometimento da poro tubular proximal. A glicosria falso-positiva pode ocorrer por reao qumica cruzada aps administrao de certos antibiticos, substncias redutoras de acar e outros medicamentos.

Corpos cetnicos A urina fisiolgica livre de corpos cetnicos (aceto-acetato, -hidroxibutirato e acetona). A cetonria ocorre quando estes compostos aumentam no plasma (cetonemia) em decorrncia de distrbios no metabolismo de carboidratos e cidos graxos. Exemplos de condies que levam a cetonria so: cetose das vacas, jejum prolongado, anorexia, lipidose heptica, fase cetoacidtica da diabetes mellitus, toxemia da prenhez dos pequenos ruminantes, hepatopatias e febre em animais jovens. As tiras usadas na rotina no so capazes de mesurar o hidroxibutirato. -

Bilirrubina Fisiologicamente, a urina no apresenta bilirrubina. Ces machos com urina concentrada, por apresentarem baixo limiar para excreo de bilirrubina, podem mostrar bilirrubinria discreta fisiologicamente. Patologicamente, distrbios hepticos (hepatite infecciosa canina,

Leptospirose e neoplasias) ou hemolticos e a obstruo das vias biliares com colestase intra e

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extra-heptica, causam bilirrubinria previamente ao aumento de bilirrubina plasmtica. Neste caso sugere-se uma avaliao heptica mais especfica. A bilirrubinria deve sempre ser interpretada em associao a densidade especfica urinria. A urina obtida de ces sadios normalmente contm alguma quantidade de bilirrubina, principalmente quando a amostra possui elevada densidade especfica. O limiar de excreo de bilirrubina no co baixo em condies normais e por isso, normalmente, no se observa.

Urobilinognio O urobilinognio um cromgeno formado no intestino por ao bacteriana redutora de bilirrubina. Uma parte do urobilinognio excretada atravs das fezes, mas outra absorvida pela circulao portal, retornando ao fgado e sendo eliminada pela bile. Pequena quantidade de urobilinognio atinge os rins atravs da circulao, sendo excretado pela urina. A fitas reagente geralmente insensvel ao urobilinognio. Para melhor interpretao devese realizar a prova de Ehrlich. A urina de ces e gatos geralmente possui reao positiva de urobilinognio at diluio de 1:32. A ausncia ou diminuio do urobilinognio urinrio est relacionado a distrbios intestinais de reabsoro (diarria) enquanto que o aumento em quantidades maiores que 1 U/dL reflete dano heptico obstrutivo, hepatite por incapacidade funcional de remoo do urobilinognio da circulao, cirrose heptica e ictercia hemoltica.

Sangue oculto A urina fisiolgica no deve conter sangue oculto, que consiste em eritrcitos, hemoglobina livre ou mioglobina. Para se realizar a diferenciao entre estes trs componentes (Tabela 5), deve-se avaliar conjuntamente o sedimento. Aps a centrifugao, os eritrcitos sedimentam, enquanto que a hemoglobina e a mioglobina permanecem no sobrenadante. Para diferenciar hemoglobinria de mioglobinria pode-se realizar o seguinte teste: 1. Identificar as amostras positivas para mioglobina / hemoglobina pela tira reagente 2. Saturar 5 mL de urina com sulfato de amnio (2,8 g) 3. Agitar fortemente e centrifugar a 2000 rpm por 10 minutos 4. Passar a tira reagente novamente no sobrenadante: Teste positivo = mioglobina Teste negativo = hemoglobina A mioglobinria ocorre em distrbios musculares graves, sendo detectado

concomitantemente um aumento na atividade srica de CK. Deve ser identificada a origem do sangue presente na urina como renal ou ps-renal. De acordo com a avaliao do sedimento pode-se verificar a presena de estruturas caractersticas do trato urinrio inferior e densidade dentro dos valores normais quando se tratar de sangramento ps-renal. Por outro lado, a densidade baixa e a presena no sedimento de 122

estruturas que caracterizam dano renal caracterizam o sangramento renal. A presena de cilindros eritrocitrios e dismorfismo eritrocitrio no sedimento so fortes indicativos de dano nos nfrons.

Tabela 5. Diferenciao entre as causas de hemoglobinria e mioglobinria. Causas de hemoglobinria Agentes infecciosos como leptospirose, piroplasmose, certas estreptoccicas Fotossensibilizao e plantas txicas Agentes qumicos, como Cobre e mercrio Transfuses sanguneas incompatveis Anemia infecciosa eqina Doena hemoltica do recm-nascido Causas de mioglobinria Mioglobinria paraltica dos eqinos Acidente ofdico por cascavel

Outros testes A enzimria pode ser avaliada realizando-se dosagens bioqumicas das enzimas presentes na urina, o que pode prestar grande auxlio clnico. As enzimas GGT (gama-glutamil transferase) e FA (fosfatase alcalina) paresentam alta atividade nas clulas tubulares, sendo que a mensurao de sua excreo por 24h consiste em um bom marcador da funo tubular. A razo enzima/creatinina um indicador de dano tubular inicial mesmo anteriormente de o dano afetar a densidade urinria.

EXAME MICROSCPICO DO SEDIMENTO O exame do sedimento deve ser padronizado e para um exame representativo. Uma amostra homogeneizada de urina fresca (10-15 mL) centrifugada em um tubo de ensaio a baixa velocidade (1500 rpm) por 5-10 minutos at que um depsito coeso seja produzido no fundo do tubo. O sobrenadante decantado e um volume de 0,2 a 0,5 mL deixado no tubo. O sedimento ressuspendido no sobrenadante agitando-se o tubo vrias vezes. Uma gota do sedimento ressuspendido colocada sobre a lmina e coberta com a lamnula. O sedimento inicialmente analisado sob pequeno aumento (100x) para identificar a maioria dos cristais, cilindros, clulas pavimentosas e outras estruturas maiores. O nmero de cilindros visto geralmente descrito como nmero por campo de pequeno aumento (CPA). Exemplo: 510 cilindros hialinos/CPA. Uma vez que o nmero de elementos encontrados em cada campo pode variar consideravelmente de um campo para outro, faz-se a mdia de vrios campos. Em seguida, a continuidade do exame realizada em grande aumento (400x) para identificar os demais cristais, clulas e bactrias. Os tipos celulares so geralmente descritos como de cada tipo encontrado por mdia de campo de grande aumento (CGA). Exemplo: 1-5 leuccitos/CGA.

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Bactrias Bactrias so comumente encontradas em amostras de urina devido a abundante flora microbiana fisiolgica da vagina e meato urinrio externo e devido sua habilidade de se multiplicar rapidamente na urina temperatura ambiente. Portanto, organismos microbianos encontrados em todas, exceto as coletadas mais assepticamente devem ser interpretadas s vistas dos sinais clnicos. Deve-se ter cuidado com falsa bacteriria por tempo prolongado de exposio da amostra de urina previamente ao exame. Uma grande quantidade de bactrias em amostra de urina fresca sugere infeco bacteriana em algum ponto do trato urinrio, especialmente quando associada a outros sinais de inflamao como piria, hematria e proteinria. A presena de bacteriria em caso de suspeita de infeco do trato urinrio inferior requer cultura. O achado de mltiplos organismos reflete contaminao. Entretanto, a presena de qualquer organismo em amostras coletadas por cistocentese deve ser considerada significativa.

Fungos A presena de leveduras podem ser contaminantes ou representar uma infeco fngica verdadeira. Elas geralmente so difceis de distinguir de eritrcitos e cristais amorfos, mas so diferenciados pela sua tendncia ao brotamento.

Eritrcitos As hemcias so menores que os leuccitos e seu achado normal quando na quantidade de 1 a 2/campo de observao no microscpio. Quando superior a 5/campo pode ser considerado hematria, que a presena de nmero anormal de eritrcitos na urina, devido a dano glomerular, tumores no trato urinrio, trauma renal, leso causada por clculos urinrios, infarte renal, necrose tubular aguda, infeces e inflamaes no trato urinrio inferior ou superior, (pielonefrite, ureterite, cistite, pielite, prostatite), traumas (cateterizao, cistocentese, neoplasias renais vesicais ou prostticas), congesto passiva renal, infarto renal, certos parasitas (Dioctophima renale, Sthefanurus sp, dirofilariose), intoxicao (cobre e mercrio), distrbios hemostticos, estro, ps-parto, nefrotoxinas e stress fsico. Os eritrcitos tambm podem contaminar a urina proveniente da vagina (perodo estral) ou de trauma produzido por cateterizao vesical. Teoricamente, nenhum eritrcito deveria ser encontrado na urina, mas alguns esto presentes at mesmo em animais saudveis. Entretanto, 124

se mais de cinco eritrcitos forem encontrados na mdia de CGA e se contaminao for descartada, a amostra pode ser considerada anormal.

Os eritrcitos podem aparecer normocticos, engurgitados pela urina diluda ou crenados pela urina concentrada. Tanto os engurgitados, como os parcialmente hemolizados e os crenados s vezes so difceis de distinguir dos leuccitos na urina. A presena de eritrcitos dismrficos na urina sugere doena glomerular, como glomerulonefrite. Eritrcitos dismrficos tm formas variadas como conseqncia da distoro pela qual sofrem, durante a passagem pelos glomrulos alterados.

Leuccitos Apresentam-se como clulas granulares maiores que as hemcias, porm menores que as clulas epiteliais. Normal quando 1 a 2/campo e quando maior que 5/campo considerado leucocitria ou piria. O termo piria refere-se presena de nmero anormal de leuccitos, os quais podem aparecer com infeco tanto no trato urinrio inferior como superior, ou com glomerulonefrite aguda. Geralmente, os leuccitos so granulcitos. Leuccitos provenientes da vagina, especialmente na presena de infeces vaginais ou cervicais, ou do meato urinrio externo podem contaminar a urina. Se cinco ou mais leuccitos por CGA aparecerem na urina no contaminada, a amostra provavelmente seja anormal. Leuccitos tm ncleo lobulado e citoplasma granular. Em pH alcalino, os leuccitos tendem a apresentar-se sob a forma de grumos.

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As causas de leucocitria podem ser inflamaes renais (nefrite, glomerulonefrite, pielonefrite), inflamaes do trato urinrio inferior (uretrite, cistite) e inflamaes do trato genital (vaginite, prostatite e metrite).

Clulas epiteliais Normal quando esto ausentes ou tm discreta presena. Quando em quantidade elevada (>5 clulas/campo) podem indicar leso local ou difusa. As clulas podem ser diferenciadas quanto sua morfologia como do epitlio renal, pelve, vesical, uretral e vaginal (Tabela 6). Em urinas de reteno ou quando h demora de exame, as clulas podem apresentar-se degeneradas. Clulas epiteliais tubulares renais, geralmente maiores do que leuccitos, contm ncleo grande oval e normalmente esfoliam-se na urina em pequenos nmeros. Entretanto, na sndrome nefrtica e condies que levam a degenerao tubular, a esfoliao maior.

Quando ocorre lipidria, estas clulas contm lipdios endgenos. Quando preenchidos com numerosas gotculas lipdicas, so chamadas de corpsculos de gordura ovais. As clulas epiteliais de transio da pelve renal, ureter ou bexiga apresentam bordas mais irregulares, ncleo maior e tamanho menor que as clulas do epitlio escamoso. As clulas epiteliais tubulares renais so menores e mais arredondadas que as do epitlio de transio, e o seu ncleo ocupa mais espao em relao ao volume celular total.

As clulas epiteliais pavimentosas da superfcie da pele ou da poro externa da uretra podem aparecer na urina. A sua presena representa possvel contaminao na amostra com a flora cutnea.

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Tabela 6. Causas provveis do elevada quantidade de clulas epiteliais na urina Tipo de clulas Possveis causas Renais degenerao tubular aguda, intoxicao renal, isquemia renal e processo inflamatrio Pelve pielite, pielonefrite Vesicais cistite, cateterizao agressiva Uretrais uretrite, cateterizao agressiva Neoplsicas diagnstico por morfologia citolgica do sedimento

Cilindros So constitudos primariamente de mucoprotena e protena que aderem-se ou no a outras estruturas, sendo normal quando ausentes. Representam moldes dos tbulos onde so formados, como nos ductos coletores, tbulos contorcidos e ala de Henle. A formao dos cilindros d-se na poro renal tubular, onde a urina atinge concentrao mxima e acidez, o que favorece a precipitao de protenas e mucoprotenas. Qualquer leso tubular presente no momento da formao dos cilindros pode refletir a sua composio. Deste modo os cilindros so classificados conforme o material que contm (Tabela 7). Os cilindros no se formam em baixas densidades ou em pH alcalino. Cilindros hialinos so compostos primariamente de mucoprotenas (protenas de TammHorsfall) secretadas por clulas tubulares. A secreo de tais protenas (pontos verdes) ilustrada no diagrama abaixo, formando o cilindro hialino no ducto coletor:

Mesmo que a injria glomerular cause aumento de permeabilidade glomerular a protenas plasmticas, com proteinria resultante, a maior parte da matriz que produz os cilindros a

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protena de Tamm-Horsfall, embora a albumina e algumas globulinas tambm sejam incorporadas. Um exemplo de inflamao glomerular com liberao de eritrcitos, produzindo um cilindro eritrocitrio mostrado no diagrama abaixo:

Os fatores que favorecem a formao dos cilindros so baixo fluxo urinrio, alta concentrao de sais e baixo pH, todos os quais favorecem a desnaturao e precipitao protica, particulamente as de Tamm-Horsfall. Cilindros proteicos com cauda longa e fina produzidos na juno da ala de Henle com o tbulo contorcido distal so chamados cilindrides. Cilindros hialinos podem ser encontrados, em pequeno nmero, em animais saudveis.

Os eritrcitos podem se agrupar e formar cilindros eritrocitrios. Tais cilindros so indicativos de glomerulonefrites, com liberao de eritrcitos do glomrulo ou severo dano tubular.

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Cilindros leucocitrios so mais comumente encontrados na pielonefrite aguda, mas podem tambm estar presentes na glomerulonefrite. A sua presena indica inflamao renal, pois tais cilindros s se formam nos rins.

Quando cilindros celulares permanecem nos nfrons por algum tempo antes de serem liberados na urina, as clulas podem se degenerar, produzindo o cilindro granular e, posteriormente, cilindro creo. Acredita-se que estes dois ltimos tipos so derivados de cilindros epiteliais tubulares renais. Cilindros largos emanam de tbulos danificados e dilatados e so, portanto, encontrados no estdio final de insuficincias renais crnicas.

No estdio final de doenas renais o sedimento torna-se escasso, pois os poucos nfrons remanescentes produzem urina diluda.

Tabela 7. Tipos de cilindros urinrios, sua composio e interpretao Tipo Hialino Hemtico Leucocitrio Epiteliais Granuloso Creo Composio mucoprotenas e protenas muco + hemcias muco + leuccitos muco + restos celulares muco + outras estruturas cilindros angulares Interpretao geralmente associados a proteinria, processos transitrios como febre e congesto, doena renal hemorragia glomerular e tubular, glomerulonefrite aguda, nefropatia crnica em fase evolutiva associados a inflamao renal, pielonefrites e abscessos renais semelhante presena de clulas isoladas, inflamaes renais degenerao tubular, necrose de clulas tubulares devido grande permanncia tubular, fase final da degenerao tubular, leso tubular crnica

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Cristais So produtos finais da alimentao do animal e dependem para sua formao do pH urinrio. Grande quantidade de cristais pode indicar urolitase, embora possa haver clculos sem cristalria e vice-versa. Exemplos de cristalria em pH alcalino e cido na Tabela 8. Cristais comuns encontrados mesmo em animais saudveis consistem em oxalato de clcio, carbonato de clcio, fosfato triplo e fosfato amorfo. Cristais incomuns incluem cistina, tirosina ou leucina, encontrados em alteraes no metabolismo de protenas e doenas hepticas. Cristais de bilirrubina e biurato de amnio so encontrados em doenas hepticas obstrutivas.

Tabela 8. Cristais encontrados em diferentes pHs pH Alcalino fosfato triplo fosfato amorfo carbonato de clcio urato de amnio pH cido urato amorfo oxalato de clcio cido hiprico cistina (raro)

Provas de funo renal Os testes bioqumicos de funo renal so realizados para o diagnstico de doena renal e para a monitorizao do tratamento. Os testes devem ser realizados aps um criterioso exame clnico e analisado juntamente com a urinlise. A amostra deve ser obtida sem anticoagulante, porm, eventualmente algumas tcnicas permitem o uso de plasma heparinizado ou com EDTA. Alguns cuidados devem ser tomados na coleta de sangue, como garroteamento prolongado, hemlise e obteno de amostra suficiente para realizao dos testes.
Provas bioqumicas

As principais provas bioqumicas de funo renal incluem a determinao da uria e creatinina sricas/plasmticas. Outras provas como sdio, potssio e fsforo sricos podem ser teis no diagnstico de doenas renais uma vez que so elementos excretados normalmente pela urina.
Uria (BUN)

A uria produzida no fgado atravs da arginase (ciclo da uria) e o principal produto final do catabolismo protico. Por ser de baixo peso molecular, a uria difunde-se igualmente pelos fludos orgnicos. A uria excretada atravs do filtrado glomerular, em concentrao

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igual do sangue. Em torno de 25 a 40% da uria reabsorvida atravs dos tbulos, na dependncia do fluxo urinrio e 60% eliminada atravs da urina. Quando h maior velocidade de fluxo h menor absoro de uria e vice-versa. Em situaes em que ocorre diminuio da filtrao glomerular, observa-se maior reteno da uria. Isso ocasiona um aumento da concentrao sangnea, mas somente ser considerada azotemia renal primria quando 75% dos nefrons de ambos os rins esto afuncionais. A concentrao de uria afetada por fatores extra-renais como ingesta protica elevada e jejum prolongado. Devido a essas interferncias, a uria no um bom indicador do funcionamento renal quando analisada unicamente. Para se analisar a funo renal, esse parmetro deve ser interpretado juntamente aos nveis de creatinina, protena e densidade urinrias. Os fatores que interferem nos nveis de uria esto relacionados na Tabela 9. A reduo dos nveis de uria pode ocorrer pela diminuio da produo como em casos de Insuficincia heptica, na cirrose, no Shunt porto-sistmico e em casos de reduo da protena diettica e hipoproteinemia.

Tabela 9. Causas de elevao dos nveis de uria sangnea Aumento da sntese Extra-renais Catabolismo tecidual Pr-renais Ingesto proteica elevada Hemorragia gastrintestinal Febre e trauma tecidual generalizado Aplicao de glicocorticide e tetraciclina

Renais Ps-renais

Diminuio do fluxo renal Diminuio da presso glomerular Hipotenso e choque Insuficincia cardaca Aumento de presso osmtica Desidratao Quando ou mais dos nefrons esto afuncionais Ruptura e/ou obstruo do trato urinrio

Creatinina

A creatinina formada atravs do metabolismo da creatina e fosfocreatina muscular. O nvel sanguneo no afetado pela dieta, idade e sexo embora elevado metabolismo muscular possa aumentar os nveis de creatinina na circulao. A creatinina totalmente excretada pelos glomrulos, no havendo a reabsoro tubular. Devido a isso, pode ser usada como ndice de filtrao glomerular. Alm disso, por ser facilmente eliminada (4 horas), a elevao na circulao ocorre mais tardiamente nos estados de insuficincia renal, quando comparado com a uria sangunea (1,5 horas). A creatinina pode estar elevada no soro devido a fatores pr-renais como diminuio do fluxo sangneo, renais como a diminuio da filtrao glomerular e ps-renais como a ruptura e/ou obstruo do trato urinrio.

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Eletrlitos Sdio

Normalmente o sdio filtrado e reabsorvido, dependendo da quantidade na dieta. Na nefropatia crnica generalizada h perda de sdio, pois este acompanha a gua na depleo hdrica para manter a isotonicidade. A reduo de sdio a hiponatremia.
Potssio

O potssio fisiologicamente filtrado nos glomrulos, reabsorvido nos tbulos contorcidos proximais e excretado pelos tbulos distais. A concentrao srica de potssio varia com a dieta. Na nefropatia com oligria ou anria h perda de funo excretora renal e reteno de potssio, levando hipercalemia.
Clcio

Na nefropatia aguda no h alterao nos nveis sricos de clcio. Na nefropatia crnica generalizada h perda da capacidade de reabsoro, com conseqente hipocalcemia. Quando perdura, esta hipocalcemia estimula a paratireide a mobilizar clcio sseo para manter a homeostase, levando ao hiperparatireoidismo secundrio renal.
Fsforo

Na nefropatia crnica progressiva e na doena renal generalizada h reduo na velocidade da filtrao e perda na capacidade de excreo de fsforo, levando hiperfosfatemia em ces e gatos. Em grandes animais este aumento no uma constante. Quando perdura a hiperfosfatemia h um estmulo paratireide, no sentido de mobilizar clcio sseo para manter a homeostase sangunea. Este processo leva ao hiperparatireoidismo secundrio renal. Uremia Realizados os exames de funo renal, outro passo importante a interpretao destes resultados. Na presena de concentraes sricas ou plasmticas aumentadas de uria e creatinina, mas ainda sem os sinais clnicos caractersticos deste acmulo, tem-se a chamada azotemia. Quando h evoluo do processo surgem os sinais clnicos caractersticos, tais como hlito urmico, lceras na cavidade bucal e lngua, diarria profusa at sanguinolenta e vmitos. Nesta fase a concentrao de uria e creatinina maior no sangue que na urina. A associao destes sinais clnicos com o aumento sanguneo de uria e creatinina so denominadas de uremia. Devido a diversidade da funo renal, as interpretaes dos testes determinadores da funo renal devem ser sempre realizadas em conjunto considerando todas as alteraes (Tabela 10).

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Tabela 10. Comparao das alteraes encontradas na urinlise em algumas doenas renais e no renais Doena Doena renal aguda Insuficincia Renal Aguda (IRA) Insuficincia Renal Crnica (IRC) Cistite Neoplasias urinrias Hemlise Hepatopatia Diabetes melito Diabetes inspido Exame fsico/qumico densidade normal densidade reduzida proteinria densidade reduzida* densidade reduzida* pH reduzido proteinria ps-renal densidade normal densidade baixa hemoglobinria urobilinognio elevado bilirrubina urobilinognio alterado glicosria, cetonria densidade reduzida, poliria Sedimento cilindros leuccitos e hemcias cilindros leuccitos e clulas epiteliais poucos ou sem cilindros bacteriria, leucocitria clulas neoplsicas hematria hematria cristais de bilirrubina bacteriria, leucocitria

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Casos clnicos
1) Anamnese: canino, M, 5 anos, Poodle. Abdmen distendido, dor palpao lombar, poliria. Exames solicitados: anlise do lquido abdominal, bioqumica heptica e renal, urinlise Anlise do lquido abdominal Volume: 10 mL Cor: incolor Odor: inodoro D=1015 pH=7,5 Prot:1,0g/dL Celularidade: 850nucleadas/L Diferencial: mesoteliais, raras hemcias e linfcitos Urinlise: Fsico Volume: 20 mL Aspecto: turvo Odor: s.g D= 1021 Qumico pH: 6,0 Protena:+++ Glicose:+ Cetona: neg Bilirrubina:neg Sangue oculto:+ Sedimento Hemcias: 10/CGA Leuccitos: 8/cga Clulas renais: 2/cga Cilindros hialinos: 8/CGA Cilindros granulosos: 2/CGA Bioqumica srica BUN: 20 mg/dL (7-25) Creatinina: 0,8 mg/dL (0,8-1,5) Glicose: 90 mg/dL (70-110) ALT: 30 U/L (15-58) FA: 55 U/L (10-73)

2) Anamnese: felino, Persa, M, 3 anos apresentando desidratao moderada, anria, bexiga repleta. Exames solicitados: urinlise, bioqumica Urinlise (coleta: cistocentese) Fsico Volume: 15 mL Cor: amarronzado Odor: ptrido D = 1045 Aspecto: turvo Qumico pH: 8,0 Prot: ++ Sangue oculto: ++ Sedimento Hemcias e leuccitos: 10-15/CGA

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Cilindros hialinos: 1/CGA Cristais estruvita: +++ Celulas vesicais: 8/cga Clulas uretrais: 10/cga Bioqumica srica BUN: 92 mg/dL (7-25) Creatinina: 2,6 mg/dL (0,8-1,5) 3) Anamnese: eqino, F, crioula, 6 anos. Tratada com Gentamicina anteriormente apresentando poliria, polidipsia, dor abdominal palpao, aumento de volume lombar. Exames solicitados: hemograma, urinlise, bioqumca Hemograma Eritrcitos: 8,0/mm Hemoglobina: 11,3 g/dL Hematcrito: 34% VCM: 42 fl CHCM: 33,2 g/dL Leuccitos totais: 25.000/mm (5,2-13,9) Neutrfilos: 18750/mm (2,2-7,4) Linfcitos: 3500/mm (1,1-5,3) Eosfilos: 1750/mm (0-0,6) Moncitos: 250/mm (0-0,9) Urinlise Fsico Volume: 25 mL Cor amarelo palha Odor: sg Aspecto pouco turvo D = 1017 Qumico pH = 5,5 Prot: + Sangue oculto: neg Glicose: + Sedimento Clulas renais: 3/cga Clulas da pelve: 8/cga Cilindros hialinos: 8/cga Cilindros granulosos: 5/cga Bioqumica srica BUN: 80 mg/dL(12-26) Creatinina: 2,5 mg/dL (1-1,9) Glicose: 93 mg/dL (76-127)

4) Anamnese: felino, M, srd, 11 anos com oligria, fraturas patolgicas, mucosas hipocoradas, desidratao, vmitos halitose, lceras orais. Exames solicitados: hemograma, urinlise, bioqumca Hemograma Eritrcitos: 4/mm(5,8-10,7) Hemoglobina:6,6g/dL(9-15) Hematcrito:20% (30-47)

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VCM: 50 fl( 41-51) CHCM: 33g/dL(31-35) Leuccitos: 31000 Segment:27900/mm (2,5-12,5) Linfcitos: 930/mm(1,5-7) Eosinfilos 0 Moncitos 2170 (0-0,8) Urinlise Fsico Volume:10 mL Cor: amarelo palha Odor: s.g. Aspecto: lmpido D=1009 Qumico pH= 4,5 Protena: neg Acetona: neg Bilirrubina: neg Sangue oculto: neg Sedimento Clulas renais: raras Cilindros granulosos: 2/cga Cilindros creos: 3/cga Bioqumica srica BUN: 98 mg/dL (18-33) Creatinina: 3,5 mg/dL (0,7-1,8) Fsforo: 15 mg/dL (2,5-7,9)

5) Anamnese: canino, macho, SRD, 10 anos, chegou ao HCV com mucosas hipocoradas, halitose, lceras orais, vmitos, desidratado e urinando pouco.

Hemograma Eritrcitos (5,4-7,8 X106/mm3) Hemoglobina (13-19 g/dl) Hematcrito (37-54 %) VCM (62-74 fl) CHCM (32-36 g/dl) PPT (6-8 g/dl) Fibrinognio (100-400 mg/dl) LEUCOGRAMA Leuccitos totais (6-17X103/mm3) Bastonetes (0-0,3X103/mm3) Neutrfilos segmentados (3-11,5 X103/mm3) Linfcitos(1-4,8 X103/mm3) Eosinfilos (0,1-1,25 X103/mm3) Moncitos (0,13-0,15 X103/mm3) Basfilos (<0,1 X103/mm3) Observaes 3,2 7,0 21 65 33 8,5 300 25.000 0 22500 500 0 2000 0 Neutrfilos hipersegmentados

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Urinlise Anlise fsica Anlise qumica Anlise do sedimento DEU = 1007 pH 4,9 Cilindros hialinos: 2/lmina Cor amarelo palha Sangue oculto: neg. Cilindros creos: 3/cga Volume 8 mL Protena: + Eritrcitos: 0-2/cga Odor S.G. Bilirrubina: neg. Leuccitos: 0-2/cga Depsito escasso Cetonas: neg. Aspecto lmpido Bioqumica srica: BUN (7-25 mg/dl): 260; Creatinina (0,5-1,4 mg/dl): 4,2 FA (10-73 U/l):150; Fsforo srico (2,4-6,1 mg/dl): 18

Nos 5 casos anteriores, de acordo com o resultado dos exames laboratorias, marque a resposta que mais se adequa ao caso descrito: a) b) c) d) e) IRC com anemia normoctica normocrmica, e leucograma de stress IRA com anemia normoctica normocrmica e leucograma inflamatrio agudo IRA com leucograma inflamatrio crnico Doena renal com leucograma inflamatrio Doena renal com leucograma de stress

6) Anamnese: felino, fmea, Siams, 3 anos de idade foi levado ao HCV por apresentar h 5 dias inapetncia, dor abdominal e urina sanguinolenta. Ao exame clnico foram constatados leve aumento de temperatura retal, disria e polaquiria. A parede da bexiga estava espessa e a urina colhida por mico espontnea apresentava-se avermelhada. Urinlise Anlise fsica DEU (1025-1045) = 1040 Cor avermelhada Volume 5 mL Odor ftido Depsito abundante Aspecto turvo Bioqumica srica BUN (18-33 mg/dl): 18 mg/dl; Creatinina (0,7-1,8 mg/dl): 0,9 mg/dl. De acordo com o resultado dos exames laboratorias, marque a resposta que mais se adequa ao caso anterior descrito: a) b) c) d) e) Doena renal com glomerulonefrite Insuficincia renal devido a um traumatismo renal Cistite bacteriana com hemorragia vesical associada Insuficincia renal devido a inflamao renal NRC Anlise qumica pH 8,5 Sangue oculto: +++ Protena: ++ Bilirrubina: neg. Cetonas: neg. Anlise do sedimento Cilindros hialinos: 2/lmina Clulas vesicais: ++/cga Eritrcitos: incontveis/cga Leuccitos: >20/cga Clulas uretrais +/cga Bacteriria intensa

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7) Uma cadela Poodle de 6 anos de idade chegou ao HCV apresentando hipertermia, poliria, polidipsia e distenso abdominal. Ao exame clnico, quando era realizada a palpao abdominal, uma descarga do tipo leite condensado drenava de sua vagina. Hemograma Eritrcitos (5,4-7,8 X106/mm3) Hemoglobina (13-19 g/dl) Hematcrito (37-54 %) VCM (62-74 fl) CHCM (32-36 g/dl) PPT (6-8 g/dl) Fibrinognio (100-400 mg/dl) LEUCOGRAMA Leuccitos totais (6-17X103/mm3) Bastonetes (0-0,3X103/mm3) Neutrfilos segmentados (3-11,5 X103/mm3) Linfcitos(1-4,8 X103/mm3) Eosinfilos (0,1-1,25 X103/mm3) Moncitos (0,13-0,15 X103/mm3) Basfilos (<0,1 X103/mm3) Bioqumica srica: BUN: 23 mg/dl; Creatinina: 1,0 mg/dl. Albumina (2,5-3,6 mg/dl): 0,5; Globulinas (2,4-4 mg/dl): 4,7. Urinlise Anlise fsica DEU (1025-1045)= 1013 Cor amarelo claro Volume 20 mL Odor s.g. Depsito moderado Aspecto pouco turvo Anlise qumica pH 6,5 Sangue oculto: + Protena: ++++ Bilirrubina: neg. Cetonas: neg. Anlise do sedimento Cilindros hialinos: 4/cga Clulas renais: ++/cga Eritrcitos: +/cga Clulas da pelve +/cga Bacteriria intensa 6,8 15 49 72 30 6,0 700 45.000 2650 42930 4240 1060 2120 0

De acordo com o resultado dos exames laboratorias, marque a resposta que mais se adequa ao caso anterior descrito: a) Doena renal caracterizada por uma glomerulonefrite e leucograma inflamatrio b) Insuficincia renal crnica com leucograma de stress associado c) Insuficincia renal aguda com leucograma de stress associado d) Insuficincia renal causada por uma inflamao renal, o que determinou o leucograma inflamatrio e) NRC

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Bibliografia
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6. BIOQUMICA CLNICA
Flix H. Diaz Gonzlez

Introduo A determinao e interpretao de compostos qumicos no sangue uma das principais aplicaes prticas da Bioqumica Clnica. Os perfis bioqumicos do plasma podem ser utilizados em veterinria no somente para avaliao clnica individual, mas tambm para avaliar e monitorar a condio nutricional e metablica em grupos de animais. Quando interpretado adequadamente, o perfil bioqumico do plasma fornece importante informao com relao ao estado clnico, metablico e produtivo de um animal. Entretanto, deve-se ressaltar que os perfis laboratoriais so considerados uma ajuda no diagnstico e que o veterinrio deve fazer uso de toda a informao disponvel, como o exame fsico e a histria clnica, antes de chegar a qualquer diagnstico final. O perfil bioqumico serve tambm como indicador dos processos adaptativos do organismo, no metabolismo energtico, protico e mineral, alm de oferecer subsdios na interpretao do funcionamento heptico, renal, pancretico, sseo e muscular. Alguns metablitos podem funcionar como indicadores do potencial produtivo e reprodutivo dos animais, sendo que alguns desses indicadores podem estar geneticamente controlados, o que motiva o aprofundamento no estudo desses aspectos na rea de melhoramento animal. O nmero de metablitos a serem analisados no perfil sangneo pode ser ilimitado, mas s se justifica estudar aqueles em que se conhece a sua fisiologia e metabolismo de forma a poder fazer uma interpretao til. As anlises fotomtricas A espectroscopia um ramo da fsica que se ocupa do estudo qualitativo e quantitativo da composio das radiaes eletromagnticas absorvidas, emitidas, dispersas e refletidas pelas substncias qumicas. A radiao eletromagntica, dividida em seus diversos comprimentos de onda ( ) e nveis energticos, forma o espectro eletromagntico. A fotometria estuda uma parte muito pequena do espectro eletromagntico, qual seja a radiao visvel, isto , o intervalo de comprimento de onda correspondente viso humana (400 a 700 nm). A matria, na forma de molculas, tomos ou ons, seja slida, lquida, gasosa ou dissolvida em solues aquosas, deve suas propriedades qumicas e sua capacidade de absoro de ftons a sua estrutura eletrnica. Conforme a teoria quntica, os eltrons s podem existir na matria em certos estados energticos discretos. Considere-se uma molcula individual:

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nvel energtico excitado absoro emisso

energia

nvel energtico basal

O estado energtico basal nesta molcula corresponde ao menor nvel energtico possvel. Sua energia eletrnica pode variar na medida em que um ou mais dos seus eltrons sejam excitados a estados energticos superiores. Essa excitao eletrnica pode ser causada pela absoro de um fton, sempre que a energia dele seja exatamente igual mudana de energia da molcula. As molculas com ligaes duplas absorvem luz com certa intensidade na regio do ultravioleta longnquo (150-200 nm). Quando essas ligaes so conjugadas, a mxima absoro desloca-se para a regio visvel com incremento da intensidade da absoro, desta forma indicando se h sistemas insaturados conjugados na molcula. Em outros casos, a molcula absorve luz no ultravioleta prximo (340-365 nm), como na coenzima NADH, propriedade bastante utilizada nos testes utilizados em bioqumica clnica. A fotometria trata das medidas de intensidade lumnica e tem sido utilizada para expressar a medida de absoro de luz por um meio, o que contitui uma medida de concentrao de solues. Quando a luz passa atravs de um meio lquido, slido ou gasoso, sofre modificaes, pois a luz emitida tem uma intensidade menor que a luz incidida, o que se explica pela absoro de luz pelo meio. A luz utilizada na absoro deve ser luz monocromtica, no espectro visvel, infravermelho ou ultravioleta, A maioria dos fotmetros utilizados nos laboratrios de bioqumica clnica so adequados para leituras no espectro visvel e ultravioleta prximo (340-700 nm). Os mtodos de anlises fotomtricas compreendem: colorimetria = fotocolorimetria = espectrofotometria: medida da quantidade de luz absorvida por uma soluo; turbidimetria: medida da quantidade de luz absorvida por uma suspenso; nefelometria: quantidade de luz dispersa por uma suspenso; fluorometria: quantidade de luz transformada em outra de diferente comprimento de onda por uma substncia fluorescente.

Leis fundamentais da fotometria: Lei de Lambert-Beer. Quando um raio de luz de comprimento de onda especfico (Io) passa atravs de uma soluo, parte da luz absorvida e parte transmitida (It). A quantidade de luz absorvida depende de dois fatores: a distncia que deve percorrer o feixe de luz dentro do lquido (b) e a concentrao da substncia que absorve luz na soluo (C). A lei que relaciona esses fatores com as medidas colorimtricas das substncias conhecida como Lei de Lambert-Beer. Esta lei
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estabelece os seguintes princpios: 1) A quantidade de luz transmitida por uma soluo (It) proporcional intensidade da luz incidente (Io), expresso mediante a seguinte equao:

It Io. a
onde a= fator de proporcionalidade (menor que a unidade). Esta relao constante em cada caso e se expressa como Transmitncia (T), conforme a seguinte relao:

T
2)

It Io

A intensidade da luz transmitida (It) decresce em proporo geomtrica (varia exponencialmente) se a distncia a ser atravessada (b) aumenta em proporo aritmtica:
-Kb It Io.10

onde K depende do comprimento de onda, do meio e da concentrao. 3) A intensidade de luz transmitida (It) decresce exponencialmente medida que a concentrao da substncia (C) aumenta em progresso aritmtica, mantida constante a distncia (b).
-KC It Io.10

Combinando as trs equaes anteriores, fica estabelecida a Lei de Lambert-Beer:

It Io
Aplicando logaritmo nos dois termos da equao:

It log T log K .. C b Io
Para que a Lei de Lambert-Beer seja cumprida, devem ser preenchidas as seguintes condies: usar luz monocromtica (de um comprimento de onda especfico); usar um filtro que elimine radiaes desnecessrias; escolher um filtro de cor complementar ao da soluo; na prtica, isto significa que a leitura de Transmitncia deve ser feita em uma regio do espectro de acordo ao composto analisado; a referncia escolhida de forma que C= 0 quando T= 100% a natureza da soluo deve ser tal que a sua Transmitncia responda a variaes de C.

Definio de Absorbncia A Absorbncia, tambm conhecida como Densidade ptica ou Coeficiente de Extino, o logaritmo decimal da relao entre a luz incidente (Io) e a luz transmitida (It), ou seja, o log decimal do inverso da Transmitncia:

Io A log ou A It

log T

Trocando o sinal e considerando T em percentagem, tem-se que:

1 100 A log log log 2 T (%) TT (%)


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Uma forma prtica de expressar Absorbncia atravs da seguinte relao:

A b. .C
onde: b= passo ptico (distncia em cm da cubeta) = absortividade (absorbncia especfica do composto) C= concentrao do composto

Valores de referncia do perfil bioqumico sangneo A interpretao do perfil bioqumico complexa tanto aplicada a rebanhos quanto a indivduos, devido aos mecanismos que controlam o nvel sangneo de vrios metablitos e devido, tambm, a grande variao desses nveis em funo de fatores como raa, idade, stress, dieta, nvel de produo leiteira, manejo, clima e estado fisiolgico (lactao, gestao, estado reprodutivo). Para a correta interpretao dos perfis metablicos indispensvel contar, tambm, com valores de referncia apropriados para a regio e a populao em particular ou, ento, utilizar valores referenciais de zonas climticas e grupos animais similares. Na Tabela 1 so apresentados os valores de referncia de alguns metablitos sangneos em algumas espcies animais. Considera-se, em geral, que existe variao significativa no valor analisado quando est fora do intervalo compreendido entre a mdia 2 vezes o desvio padro

dos valores normais de referncia. Contudo, o verdadeiro significado de um valor alterado deve ser analisado juntamente com fatores como a histria clnica, o exame clnico, o manejo, a alimentao e a produo.

Coleta e manejo de amostras sangneas A confiabilidade no uso do laboratrio como apoio diagnstico depende em grande medida de que o material utilizado na anlise tenha sido coletado e conservado adequadamente. Adicionalmente, para o aproveitamento timo das anlises de patologia clnica deve existir uma relao estreita entre o mdico veterinrio clnico e o laboratrio de diagnstico. O envio de amostras inadequadas implica em perda de tempo, de recursos e, em ocasies, complicaes na sade do animal devido a uma interpretao incompleta ou incorreta de resultados. Freqentemente argumentado que, na prtica clnica veterinria, complicado recorrer ao uso dos laboratrios para apoiar o diagnstico, uma vez que geralmente esto localizados a grandes distncias, mas quando se domina um adequado manejo de amostras, esta limitante no significativa. Cada vez que amostras so enviadas a qualquer laboratrio de diagnstico, muito importante fazer uma adequada identificao de tais amostras, utilizando material que resista ao manejo, isto , tintas permanentes resistentes a gua, fitas com cola ou etiquetas com adesivo apropriado.

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Tabela 1. Valores de referncia de alguns metablitos sangneos. Metablito Unid. Caninos Felinos Bovinos cidos graxos livres 8,8-20,6 mol/l Albumina g/l 26-33 21-33 27-38 Beta-OH-butirato mg/dl 0,24-0,36 0-10 Bilirrubina direta mg/dl 0,06-0,12 0,04-0,44 Bilirrubina total mg/dl 0,1-0,5 0,15-0,5 0,01-0,5 Colesterol mg/dl 135-270 95-130 80-120 Fructosamina mmol/l 1,26-1,80 Creatinina mg/dl 0,5-1,5 0,8-1,8 1,0-2,0 Glicose mg/dl 65-118 70-100 45-75 Globulinas g/l 27-44 26-51 30-52 Lactato mg/dl 2-13 5-20 Protenas totais g/l 54-71 54-78 66-75 Triglicerdeos mg/dl 32-120 35,4 0-14 Uria mg/dl 21,4-59,9 42,8-64,2 42,8-64,2 Clcio mg/dl 9-11,3 6,2-10,2 8-12,4 Cobre 15,7-31,5 5,16-5,54 mol/l Ferro 5,4-32,2 12,2-38,5 10,2-29,0 mol/l Fsforo mg/dl 2,6-6,2 4,5-8,1 3,4-7,1 Magnsio mg/dl 1,8-2,4 2,2 1,7-3,0 Potssio mmol/l 4,4-5,3 4,0-4,5 3,9-5,8 Sdio mmol/l 141-152 147-156 132-152 Fontes: Kaneko et al. (1997), Wittwer et al. (1987), LacVet/UFRGS (2004) Eqinos 2,9-11,8 26-37 0-10 0-0,4 1-2 75-150 1,2-1,9 75-115 26-40 10-16 52-79 4-44 21,4-51,3 11,2-13,6 13,1-25,1 3,1-5,6 2,2-2,8 2,4-4,7 132-146 Ovinos 2,9-14,7 24-30 6-10 0-0,27 0,1-0,5 52-76 1,2-1,9 50-80 35-57 9-12 60-79 17-43 11,5-12,8 9,13-25,2 29,7-39,7 5-7,3 2,2-2,8 3,9-5,4 139-152

necessrio acompanhar as amostras com um protocolo que inclua: (a) Identificao de proprietrio, mdico veterinrio ou pessoa responsvel, telefone e endereo. (b) Dados de identificao do animal ou animais amostrado (s). (c) Anamnese completa do paciente e/ou do rebanho, sem omitir dados relevantes da histria clnica, nutrio, reproduo, produo e manejo. (d) Indicar se existe suspeita de doenas infecciosas, especialmente se elas so zoonticas. Devido s mudanas fsico-qumicas que ocorrem na amostra com o tempo, deve ser mencionada a hora da coleta da amostra, bem como o tipo de conservante utilizado.

Coleta de amostras Existem diferentes mtodos para obter uma amostra de sangue: (a) agulha direta: til e rpido para obter grandes volumes; sua contra-indicao mais importante que causa contaminao da amostra e, especialmente, do meio-ambiente; (b) seringa: no deve ser feito vcuo violento; quando sejam usadas seringas com anticoagulante; recomenda-se que esteja na forma lquida; quando o sangue vai ser transferido a outro recipiente, deve ser retirada a agulha da seringa para evitar hemlise na amostra; (c) sistema de tubos com vcuo (vacutainer): siga as instrues do fabricante; necessria certa
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prtica para um manejo eficiente; importante que, se utilizado algum tipo de anticoagulante, o tubo deve ser enchido at terminar o vcuo para manter as propores sangue/anticoagulante. (d) sistema de vcuo com tubos de plstico: so de recente introduo no mercado; sua principal vantagem que o vcuo regulvel; sua utilizao est mais orientada para determinaes sorolgicas, tais como deteco de anticorpos para diferentes patologias. O principal fator de alterao de resultados a hemlise, a qual tem como causas mais comuns as seguintes: provocar vcuo violento na coleta da amostra com agulha de calibre de muito fino; causar impacto do jato de sangue no fundo do recipiente; utilizar material mido com gua ou lcool; usar material sujo ou contaminado; usar material de m qualidade, com bordas ou paredes rugosas. agitar a amostra ao incorpor-la com o anticoagulante; provocar choques trmicos tanto quentes quanto frios; permitir temperaturas extremas; manipular bruscamente as amostras para obter o soro antes que o cogulo tenha sido formado. Determinaes de bioqumica clnica Para este fim utilizado soro ou plasma. O soro obtido a partir de uma amostra de sangue extrada sem anticoagulante, esperando o tempo necessrio para a formao de cogulo. O tempo que dura a sua formao muito varivel, entre 30 a 180 minutos. Por esta razo, mais prtico enviar ao laboratrio amostras de plasma utilizando heparina de sdio como anticoagulante (tubos de tampa verde). Os anticoagulantes EDTA, oxalato e citrato no deve ser utilizados para determinaes bioqumicas. Em recipientes de plstico, o tempo de formao do cogulo aproximadamente o dobro daquele do vidro. Assim que se forma o cogulo, este deve ser separado das paredes do tubo ou seringa onde foi obtida a amostra utilizando-se de um palito longo de madeira ou de uma pipeta Pasteur. Posteriormente, deve ser centrifugado a 1.500 g (2.500 a 3.500 rpm) durante 10 minutos e transferir o soro para outro recipiente livre do cogulo. A amostra no deve ser centrifugada e nem colocada em refrigerao antes que o cogulo esteja bem formado, pois se prolonga o tempo de coagulao e existe predisposio hemlise. necessrio separar o soro do cogulo ou o plasma das clulas sangneas dentro de um perodo mximo de 2 horas depois de tirada a amostra. Se o tempo for maior, as fraes dos parmetros a serem medidos variam devido troca de elementos entre as fases celular e lquida do sangue.

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Assim que estiver separado o soro ou o plasma, conveniente analisar de imediato (especialmente no caso da glicose). Se no for possvel, conveniente conservar a amostra sob refrigerao (0-4 C). Quando a obteno dos resultados no for urgente, possvel enviar as amostras congeladas (-8 a -20 C) uma vez que a grande maioria dos parmetros estvel pelo menos por uma semana nestas temperaturas. Contudo, recomendvel consultar um bioqumico clnico antes de proceder, pois existem algumas determinaes instveis. A melhor forma de obter o plasma coletando as amostras de sangue com heparina como anticoagulante, na proporo de 3 gotas de heparina 1% (0,2 mg ou 200 UI) para cada 10 mL de sangue. importante mesclar vrias vezes de forma suave para incorporar totalmente o anticoagulante com o sangue para que este se conserve em bom estado. A amostra heparinizada deve centrifugar-se a 1.500 g durante 10 minutos, e depois deve ser transferido somente o plasma (livre de clulas) para um outro tubo, com uma pipeta Pasteur ou com uma seringa. Aps, tampar e enviar para o laboratrio clnico. Para as anlises de bioqumica clnica completa (8-10 metablitos) suficiente extrair 3 a 5 mL de plasma, volume que se obtm a partir de 7 a 10 mL de sangue aproximadamente. Nos laboratrios que utilizam microtcnicas, suficiente com 1,5 mL de plasma. Quando se trata de dosar microelementos, particularmente Zn, recomendado usar soro e colocar parafilm ao invs da rolha de borracha para fechar o tubo, devido a que o material das rolhas pode interferir com o resultado. A amostra de plasma ou soro deve estar protegida da luz quando se trata de dosar pigmentos biliares (bilirrubina). Se existe o interesse de medir os valores do perfil lipmico (cidos graxos no esterificados, colesterol, -hidroxibutirato, triglicerdios, lipdios totais), sua determinao deve ser feita no soro, e no no plasma. Para a determinao de glicose, possvel refrigerar imediatamente a amostra de sangue completa com heparina, e ser analisada nas 3 horas seguintes a coleta. Se o tempo da anlise for mais prolongado, a amostra deve ser coletada com fluoreto de sdio, o qual atua como anticoagulante e simultaneamente inibe as enzimas da gliclise, evitando a degradao da glicose na amostra. Quando uma amostra est hemolisada os valores se podem observar alterados, geralmente aumentados.

Mecanismo de ao da heparina A heparina foi descoberta acidentalmente em 1916 por Jay McLean, na poca um estudante de medicina. Ele investigava com extratos de fgado e encontrou que esse tecido era capaz de retardar a coagulao do plasma. Como foi encontrada no fgado foi batizada de heparina. O efeito anticoagulante da heparina est relacionado com sua forte carga eletronegativa.

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So descritos 3 efeitos da heparina sobre o processo de coagulao. Primeiro, interfere na converso de protrombina a trombina. Segundo, tem efeito oposto ao da trombina sobre o fibrinognio, impedindo a formao de um cofator desta protena na frao albumina do plasma. E terceiro, reduz a capacidade de aglutinao das plaquetas. O efeito anticoagulante da heparina muito rpido, cerca de 1 minuto, desaparecendo em 3 a 4 horas. A heparina geralmente utilizada no incio em tratamentos anticoagulantes in-vivo (trombose, embolia pulmonar, fibrilao atrial). Alm da utilizao in-vivo, o anticoagulante de escolha para anlises bioqumicas no sangue. No deve ser utilizado como anticoagulante para determinaes de hematologia, pois altera a morfologia dos leuccitos. Determinao do estado cido-bsico Este tipo de anlise requer um manejo muito preciso das amostras. Os passos para fazer uma adequada coleta so descritos a seguir: (a) carregar uma seringa limpa de 1-3 mL de capacidade com uma soluo de heparina a 1% (1000 UI por mL), permitindo que as paredes fiquem umedecidas; (b) voltar a heparina, de forma suave, a seu recipiente. A quantidade de heparina aderida s paredes da seringa suficiente para a conservao da amostra; (c) trocar a agulha usada nos passos anteriores por uma limpa e seca; (d) fazer presso sobre a veia no mximo por 30 segundos, para no alterar os resultados; (e) obter o sangue sem fazer vcuo violento e evitando a formao de bolhas e/ou espuma na amostra; suficiente com 1 mL de sangue; (f) rapidamente proceder a eliminar as bolhas na seringa e observar que saia uma gota de sangue na ponta da agulha; (g) tampar a ponta da agulha com massa (no suficiente dobrar a agulha); (h) depositar imediatamente a seringa em um recipiente de gua com gelo (0-4 C), para bloquear o processo da gliclise; (i) enviar ao laboratrio. A determinao deve ser feita nas primeiras 3 horas posteriores a coleta da amostra. Em ocasies possvel analisar o sangue de bovinos durante as 24 horas seguintes, usando tabelas de correo, para o que importante indicar a hora de coleta da amostra. Quando o mdico veterinrio tenha dvidas sobre o envio de amostras ao laboratrio, deve entrar em contato direto com o patologista clnico veterinrio responsvel, o que permitir a ambos terem um melhor intercmbio de informaes e dessa forma, o clnico far um uso mais eficiente do laboratrio clnico como ferramenta de ajuda nos seus diagnsticos.

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PRINCIPAIS METABLITOS SANGNEOS USADOS NA CLNICA cidos graxos livres Os cidos graxos livres (AGL) no sangue podem ser de origem exgena, provenientes da digesto e absoro de gorduras ou endgena, provenientes da liplise dos triglicerdeos armazenados no tecido adiposo. Em vacas, os nveis sangneos normais de AGL so de 226 20,4 Eq/l. O nvel de AGL plasmticos indicador da mobilizao dos depsitos graxos e, portanto, do dficit energtico. Em bezerros recm desmamados os nveis de AGL sobem abruptamente. A falta de alimento causa elevaes de AGL em menos de 48 horas, sendo melhores indicadores do status energtico do que glicose ou corpos cetnicos. O empecilho para sua utilizao como indicadores rpidos do equilbrio energtico a dificuldade e o alto custo da anlise. Os nveis de AGL aumentam na lactao, especialmente durante as primeiras semanas, e diminuem durante o perodo seco. Nveis sangneos de AGL superiores a 600 Eq/l, em vacas leiteiras lactantes, so considerados como resultado do estresse metablico da lactao. Existe uma correlao positiva entre os nveis de sangneos de AGL e de corpos cetnicos. A oxidao excessiva de cidos graxos, junto com a deficincia aguda de energia na dieta, provoca, em alguns casos, a cetose. A maioria das vacas de alta produo tm algum grau de cetose subclnica no incio da lactao em funo do balano energtico negativo nesse perodo crtico. A habilidade metablica para contornar o problema e evitar a manifestao de sintomas varia entre indivduos. Ovelhas no final da gestao tambm podem sofrer grande mobilizao de cidos graxos e eventual cetose, especialmente em gestao gemelar. Concentraes baixas de AGL no so freqentes, exceto na desnutrio severa.

cido rico O cido rico produto do metabolismo das purinas nos primatas e no co da raa Dlmata, representando o fim do metabolismo de compostos nitrogenados do organismo. Na maioria dos mamferos, este metabolismo ocorre convertendo o cido rico em alantona. A maioria do cido rico sintetizado provm da dieta e, em larga extenso, da quebra de cidos nuclicos endgenos. Valores de cido rico acima dos normais podem ser observados em neoplasias de clulas sangneas, em doena heptica por incompleta converso do cido rico a alantona, na insuficincia renal, em endocrinopatias, em aumentos da reciclagem de cidos nuclicos, na ingesto de substncias txicas ou drogas (salicilatos, thiazida), no hipotireoidismo e finalmente em falhas genticas das enzimas necessrias para o metabolismo do cido rico. Nas aves, o cido rico um bom indicador da funo renal.

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cidos biliares Os cidos biliares (tauroclico e glicoclico) so sintetizados pelo fgado a partir de colesterol e mediante conjugao (cido clico com taurina e glicina), sendo excretados junto com a bile na forma de sais de sdio. Durante a digesto, eles atuam como agentes emulsificantes favorecendo a absoro da gordura. Por efeito das bactrias intestinais, os cidos biliares so desconjugados, ficando livres para serem reabsorvidos pelo intestino, direcionandose via circulao portal para o fgado para serem reciclados. Uma pequena parte desses cidos alcana a circulao perifrica, sendo eles os que so medidos. Normalmente ocorre um leve aumento dos cidos biliares aps uma refeio. A medio de cidos biliares no soro pode servir como teste sensvel de avaliao de disfuno heptica, pois o fgado com disfuno no consegue captar os cidos reabsorvidos e a sua concentrao aumenta no plasma. Uma obstruo heptica ou biliar tambm causa de aumento dos cidos biliares. Um baixo valor de cidos biliares pode indicar uma obstruo intestinal. Considera-se disfuno heptica quando a concentrao de cidos biliares em jejum ou ps-prandial >25 mol/L (co) e >20 mol/L (gato). Uma leve diminuio na concentrao de cidos biliares pode no ser conclusiva para dizer se ocorreu uma melhora na funo heptica. A principal desvantagem de uso de cidos biliares o alto custo de sua determinao.

Albumina A albumina a protena mais abundante no plasma, perfazendo cerca de 50% do total de protenas. Tem um peso molecular aproximado de 66 kD. sintetizada no fgado e contribui em 80% da osmolaridade do plasma sangneo, constituindo tambm uma importante reserva protica, bem como um transportador de cidos graxos livres, aminocidos, metais, clcio, hormnios e bilirrubina. A albumina tambm tem funo importante na regulao do pH sangneo, atuando como nion. A concentrao de albumina afetada pelo funcionamento heptico, a disponibilidade de protenas na dieta, o equilbrio hidro-eletroltico e por perdas da protena em algumas doenas. A nica causa de aumento da albumina plasmtica (hiperalbuminemia) a desidratao. A concentrao da albumina plasmtica pode diminuir (hipoalbuminemia) em vrias situaes: (a) Sntese de albumina diminuda devido a dano heptico crnico ou dficit alimentar de fontes proticas. O nvel de albumina pode ser indicador do contedo de protena na dieta, muito embora as mudanas ocorram lentamente. Para a deteco de mudanas significativas na concentrao de albumina srica necessrio um perodo de pelo menos um ms, devido

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baixa velocidade de sntese e de degradao. Nveis de albumina diminudos, juntamente com diminuio de uria, indicam deficincia protica. Nveis de albumina diminudos com nveis de uria normais ou elevados acompanhados de nveis de enzimas altos so indicadores de falha heptica. No processo de fgado gorduroso, como conseqncia de excessiva mobilizao de lipdeos, evento comum no incio da lactao devido ao desequilbrio energtico, pode ocorrer hipoalbuminemia em vacas leiteiras. (b) Perda de albumina em parasitismos, devido sada de protenas pelo intestino ou em doena renal (sndrome nefrtico, glomerulonefrite crnica, diabetes). (c) Em casos de sndrome de m absoro. (d) Catabolismo aumentado da albumina como conseqncia de dficit energtico, o que estimula a mobilizao de reservas de aminocidos para entrar na via da gliconeognese. (e) Vazamento do sistema vascular (hemorragias). A hipoalbuminemia pode afetar o metabolismo de outras substncias devido ao papel da albumina como transportador, alm de causar queda da presso osmtica do plasma e levar a ascite, geralmente quando a concentrao de albumina cai para menos de 20 g/l. Mudanas fisiolgicas do teor de albumina podem ser observadas em vacas quando cai aps o parto para menos de 30 g/l.. Normalmente, o teor aumenta progressivamente durante o ps-parto a uma taxa entre 3,7 a 6,9 mg/100 ml por dia, exceto em vacas com dietas pobres em protena, nas quais a concentrao pode continuar baixa por at 4-6 meses ps-parto, afetando negativamente a fertilidade. A concentrao sangunea de albumina tem sido relacionada positivamente com a produo de leite, observando-se que vacas hipoalbuminmicas no produzem todo seu potencial. Uma correlao negativa entre nvel de albumina e a idade pode ser conseqncia da correlao positiva entre nvel de globulinas e a idade.

Amnia A amnia produzida por praticamente todas as clulas do organismo, mas principalmente pelas bactrias do trato gastrointestinal, como resultado da degradao de compostos nitrogenados. A amnia uma substncia txica que afeta principalmente o sistema nervoso central. A amnia que se encontra no plasma proveniente principalmente da absoro no intestino, sobretudo no clon, e, em animais ruminantes, a principal fonte o rmen. Uma pequena parte deriva do metabolismo perifrico, em especial do msculo esqueltico. A amnia intestinal derivada da degradao bacteriana dos aminocidos da dieta no intestino e da uria endgena que se excreta no intestino e no rmen. Tambm pode ser

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produzida pelo fgado a partir do catabolismo dos aminocidos tissulares e da dieta, mas neste caso imediatamente entra no ciclo da uria para ser convertida em uria. Normalmente, a amnia transportada do trato gastrointestinal convertida em uria quando alcana o fgado e, portanto, seu nvel no sangue tende a ser baixo. Entretanto, altos nveis de amnia podem ser encontrados quando h uma inadequada funo heptica ou quando o sangue portal desviado sem passar antes pelo fgado (desvio ou shunt portosistmico). Nveis altos de amnia circulante, especialmente em situao ps-prandial, podem afetar o encfalo, podendo provocar apatia ou uma srie de sinais neurolgicos (confuso, convulso, andar em crculo). Esta condio conhecida como encefalopatia heptica. Os nveis de amnia tambm podem estar aumentados na ocorrncia de uma infeco, de uma dieta com altos teores de protena, em desequilbrio cido-bsico (insuficincia renal principalmente) e em obstruo do trato gastrointestinal.

Bilirrubina A maior parte da bilirrubina no plasma deriva da degradao dos eritrcitos velhos pelo sistema retculo-endotelial, especialmente no bao. A bilirrubina restante provm da degradao da mioglobina, dos citocromos e de eritrcitos imaturos na medula ssea. A hemoglobina liberada dos eritrcitos se divide em poro globina e grupo heme. Aps a extrao da molcula de ferro, que fica armazenado ou reutilizado, o grupo heme convertido em bilirrubina. A bilirrubina assim formada chamada de bilirrubina no-conjugada, que transportada at o fgado ligado albumina plasmtica. Esta forma tambm conhecida como bilirrubina livre ou indireta. Esta bilirrubina no solvel em gua. Sendo lipossolvel, no filtrada pelos glomrulos renais, e no excretada pela urina. A bilirrubina livre pode no estar ligada albumina em trs situaes distintas: (a) quando os nveis de albumina so extremamente baixos , (b) quando existe uma alta concorrncia pelos lugares de unio da albumina, por exemplo com tiroxina, salicilatos, sulfonamidas, digoxina, cortisol e diazepam; ou (c) quando o nvel de bilirrubina livre extremamente alto (> 20 mg/dl). No fgado, a bilirrubina desligada da albumina e conjugada com o cido glicurnico para formar bilirrubina conjugada. Esta solvel em gua e secretada ativamente pelos canalculos biliares menores e posteriormente excretada pela bile. No plasma, se observam pequenas quantidades de bilirrubina conjugada, sendo que a maior parte da bilirrubina plasmtica livre. A bilirrubina conjugada no pode ser reabsorvida no intestino, mas as enzimas bacterianas presentes no leo e clon convertem a bilirrubina em urobilinognio fecal (estercobilinognio), que reabsorvido em torno de 10 a 15% pela circulao portal at o

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fgado. A maioria deste urobilinognio re-excretada pela bile e uma parte pode ser excretada pela urina. O urobilinognio no reabsorvido no intestino oxidado a estercobilina, pigmento responsvel pela cor marrom das fezes. O aumento dos nveis plasmticos de bilirrubina pode ser devido ao aumento da bilirrubina livre na hemlise aguda grave, em absoro de um grande hematoma, em hemorragia interna massiva ou na transfuso de eritrcitos armazenados inadequadamente. Aumento da bilirrubina conjugada ocorre na perda da funcionalidade hepato-celular devido a doena infecciosa, dano txico ou obstruo do trato biliar. Aumento de ambas bilirrubinas ocorre na perda da funcionalidade hepato-celular, obstruo do fluxo biliar ou aps uma hemlise intravascular aguda grave. Diminuio dos nveis plasmticos de bilirrubina so observados em doenas crnicas, principalmente as que cursam com diminuio da formao dos eritrcitos, causando anemia. Neste caso, devido ao nmero reduzido de eritrcitos, o sistema retculo-endotelial reduz a fagocitose dos eritrcitos, o que diminui os nveis de bilirrubina no plasma. Portanto, a hipobilirrubinemia devido a anemias hipoproliferativas atribudas a uma infeco ou inflamao crnica, neoplasia maligna ou na ltima fase da enfermidade renal.

Clcio No plasma, o clcio (Ca) existe em duas formas, livre ionizada (cerca de 45%) ou associado a molculas orgnicas, tais como protenas, principalmente albumina (cerca de 45%) ou a cidos orgnicos (cerca de 10%). O clcio total, forma como medido no sangue, contm a forma ionizada que biologicamente ativa, e a forma no ionizada. Estas duas formas esto em equilbrio e sua distribuio final depende do pH, da concentrao de albumina e da relao cido-base. Quando existe acidose, h uma tendncia para aumentar a forma ionizada de Ca. Uma queda no nvel de albumina causa diminuio do valor de clcio sangneo. O nvel de clcio no plasma sangneo da maioria das espcies animais, excetuando as galinhas poedeiras, bastante constante, entre 8 a 12 mg/dl. O sistema endcrino envolvendo a vitamina D3, o paratormnio (PTH) e a calcitonina, responsveis pela manuteno dos nveis sangneos de clcio, atua de forma bastante eficiente para ajustar-se quantidade de clcio disponvel no alimento e s perdas que acontecem, principalmente na gestao e na lactao. O firme controle endcrino do Ca faz com que seus nveis variem muito pouco (17%) comparado com o fsforo (variao de 40%) e o magnsio (variao de 57%). Portanto, o nvel sangneo de clcio no um bom indicador do estado nutricional, enquanto que os nveis de fsforo e magnsio refletem diretamente o estado nutricional com relao a estes minerais. A hipocalcemia freqente nas vacas leiteiras de alta produo, podendo causar febre do

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leite ou paresia do parto. A quantidade total de clcio em uma vaca adulta est em torno de 6.000 g, 90% dos quais armazenados nos ossos. Cerca de 1% (60 g) est no sangue e nos tecidos moles, sendo que na corrente circulatria h cerca de 8 g. Uma vaca que produza 30 kg de leite, com contedo de 0,12% de Ca, perde diariamente cerca de 36 g de clcio, isto , mais de 4 vezes a quantidade de clcio sangneo. Estima-se que durante o perodo de uma lactao, cerca de 18% do mineral do esqueleto perdido. Portanto, a taxa de reposio deve ser rpida o suficiente para cobrir a demanda e evitar a hipocalcemia. Qualquer interferncia com a absoro intestinal e a mobilizao ssea do Ca pode ser fatal. A absoro de clcio no intestino diminui com a idade. Animais mais velhos sofrem reduo na capacidade de mobilizar reservas de Ca quando ocorrem desequilbrios, sendo, portanto, mais suscetveis de sofrer hipocalcemia. A absoro de clcio no intestino tambm afetada por outros fatores, tais como: (a) a relao Ca:P nos alimentos (a relao tima de 2:1); (b) a quantidade de protena na dieta, uma vez que a deficincia de protena causa diminuio da absoro de clcio; (c) ingesto excessiva de magnsio, que interfere com a absoro de clcio, por competio nas clulas intestinais (d) dietas deficientes em magnsio, que reduzem a disponibilidade de clcio; (e) suplementao excessiva de vitamina D3 que aumenta a absoro de clcio e pode causar calcificao dos tecidos moles. A hipercalcemia rara. Pode ocorrer por intoxicao com vitamina D, neoplasias, hiperparatireoidismo primrio e dietas ricas em Ca. Em touros, o excesso de clcio pode causar osteopetrose (excessiva calcificao dos ossos).

Cloro O Cl- um dos 4 ons, juntamente com K+, Na+ e HCO3-, que so medidos no plasma para determinar o equilbrio cido-bsico. Sendo um on principalmente extracelular, a sua concentrao pode mudar em resposta as variaes de outros eletrlitos para manter o equilbrio eltrico dos fluidos corporais. Em geral, a sua concentrao est inversamente relacionada com a de HCO3- e diretamente relacionada com a de Na+. As mudanas de Cl- esto reguladas principalmente pela sua excreo no rim. No momento em que o Cl - seja substitudo por outros nions, como cidos orgnicos, sem compensao de HCO3- ou Na+, est conformada uma diferena aninica anormal. Uma hipocloremia pode ser observada na acidose metablica por acmulo de cidos orgnicos (cetose, diabetes, acidose lctica), na acidose respiratria por acmulo de CO2, que leva a um aumento de HCO3- e, conseqentemente, queda de Cl-, no vmito contnuo, por perda de HCl, na diarria, por perda de fluidos intestinais ricos em Cl-, e em casos de doena renal, por acmulo de grupos fosfato (H2PO4-) e sulfatos (HSO4-) que no se excretam e substituem o

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Cl-. Uma hipercloremia pode ser observada na desidratao, e na alcalose respiratria, por perda de CO2 e conseqentemente de HCO3- com aumento de Cl- compensatrio. Em transtornos do crtex adrenal, a produo alterada de aldosterona pode levar a quadros de hiper- ou hipocloremia.

Colesterol O colesterol nos animais pode ser tanto de origem exgena, proveniente dos alimentos, como endgena, sendo sintetizado, a partir do acetil-CoA, no fgado, nas gnadas, no intestino, na glndula adrenal e na pele. A biossntese de colesterol no organismo inibida com a ingesto de colesterol exgeno. O colesterol circula no plasma ligado s lipoprotenas (HDL, LDL e VLDL), sendo que cerca de 2/3 dele est esterificado com cidos graxos. Os nveis de colesterol plasmtico so indicadores adequados do total de lipdios no plasma, pois corresponde a aproximadamente 30% do total. O colesterol necessrio como precursor dos cidos biliares, os quais fazem parte da bile, e dos hormnios esterides (adrenais e gonadais). Os estrgenos, sintetizados a partir de colesterol, afetam a complexa inter-relao das funes hipofisiria, tireoidiana e adrenal. Portanto, os nveis de colesterol podem dar uma indicao indireta da atividade tireoidiana. O colesterol excretado pela bile, na forma de cidos biliares, ou na urina, na forma de hormnios esterides. Os nveis sangneos de colesterol podem estar aumentados no hipotireoidismo, em obstrues biliares, na diabetes mellitus, na pancreatite ou quando so utilizadas dietas ricas em carboidratos ou gorduras. O nvel normal de colesterol maior em animais mais velhos. Os nveis de colesterol tm valores mximos durante a gestao em funo do aumento da sntese de esterides gonadais nessa fase. Por outro lado, as vacas lactantes podem apresentar hipercolesterolemia fisiolgica. O aumento de colesterol durante a lactao tem sido atribudo ao aumento na sntese de lipoprotenas plasmticas. Nveis baixos de colesterol ocorrem quando h deficincia de alimentos energticos. Seu nvel tambm pode diminuir em uma leso hepato-celular, no hipertireoidismo, em alimentao deficiente em energia e em doenas genticas relacionadas com sntese diminuda de apolipoprotenas do plasma. Os valores de colesterol no momento do parto so significativamente menores que durante o estados pr- e ps-parto. No incio da lactao os valores de colesterol so baixos, aumentando progressivamente at a 10 semana para voltar a cair no fim do perodo. Em animais monogstricos recomendvel que as coletas para dosar colesterol sejam feitas aps jejum de 12 horas.

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Corpos cetnicos Os corpos cetnicos, produto do metabolismo dos cidos graxos, so o -hidroxibutirato, o acetoacetato e a acetona. Em situaes onde h deficincia de energia, o acetoacetato, produzido normalmente no metabolismo dos cidos graxos, no pode ser metabolizado e sofre reduo a -hidroxibutirato ou descarboxilao at acetona. A cetose ou cetonemia uma condio caracterizada por um aumento anormal na concentrao de corpos cetnicos nos fludos corporais (sangue, urina, leite e saliva). Esta condio comumente encontrada em situaes como diabetes mellitus, jejum prolongado, m nutrio e m absoro. A cetose est geralmente associada com hipoglicemia. Esta sndrome denominada cetonemia bastante freqente em bovinos, principalmente em vacas leiteiras de alta produo, devido a um balano nutricional negativo, pois o animal precisa de muita energia para a produo de leite e no consegue manter equilibrada a sua glicemia, ocorrendo assim uma mobilizao lipdica que dar origem ao aumento dos corpos cetnicos no plasma. Aumentar somente a quantidade de alimento pode no resolver o problema, visto que estes animais tm uma capacidade mxima admissvel no trato gastrointestinal.

Creatinina A creatinina plasmtica derivada, praticamente em sua totalidade, do catabolismo da creatina presente no tecido muscular. A creatina um metablito utilizado para armazenar energia no msculo, na forma de fosfocreatina, e sua degradao para creatinina ocorre de maneira constante, ao redor de 2% do total de creatina diariamente (Figura 1). A converso de fosfocreatina em creatinina uma reao no enzimtica e irreversvel, dependente de fatores estequiomtricos. A concentrao sangnea de creatinina proporcional massa muscular. Por este motivo em situaes de atrofia muscular e outras enfermidades relacionadas, ocorre diminuio do teor de creatinina plasmtica. Ao mesmo tempo, em situaes de exerccio prolongando ou intenso, pode ser observado um aumento nos nveis plasmticos de creatinina. Na prtica, a produo de creatinina constante e muito pouco afetada pelo aumento do catabolismo das protenas tissulares e da dieta. A excreo de creatinina s se realiza por via renal, uma vez que ela no reabsorvida nem reaproveitada pelo organismo. Por isso, os nveis de creatinina plasmtica refletem a taxa de filtrao renal, de forma que nveis altos de creatinina indicam uma deficincia na funcionalidade renal. Entre as causas de aumento plasmtico da creatinina, devem ser consideradas uma azotemia pr-renal por diminuio da perfuso renal, como por exemplo na desidratao, uma azotemia renal devido insuficincia renal, uma azotemia ps-renal por obstruo do fluxo

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urinrio ou ruptura de bexiga ou simplesmente uma atividade muscular intensa ou prolongada. Entre as causas da diminuio dos nveis de creatinina no plasma so consideradas hidratao excessiva, insuficincia heptica e doenas musculares degenerativas.

H3N

C
H2N
+

C H2 O

N H3 HN C C C C H2 H2 H2 H

O O O

g lic in a
N H3 C C C C H2 H2 H2 H
+

C
+

H2N

a r g in in a
H2N
+

O O

H3N

o r n itin a
NH C O C H2 O

H2N

g u a n id in o a c e ta to S -a d e n o s il-m e tio n in a

S -a d e n o s il-h o m o c is te n a
H2N
+

C H3 N

H2N

C O

C H2 O

2 H+

c r e a tin a

H2 O
H2N
+

C H3 N

HN

C O

C H2

c r e a tin in a

Figura 1. Formao de creatinina no msculo.

Dixido de carbono O dixido de carbono (CO2) o produto final do metabolismo. Na presena da enzima anidrase carbnica, o CO2 e gua formam o cido carbnico, que posteriormente dissociado em bicarbonato e hidrognio. Estes compostos so responsveis pelo equilbrio cido-bsico e o controle do pH plasmtico, agindo como um sistema tampo. A determinao do dixido de carbono no plasma feita para avaliar o balano cidobsico e a capacidade tamponante do plasma. A concentrao do dixido de carbono no plasma, pode ser regulada atravs da sua excreo via respirao. Nveis aumentados de dixido de carbono esto relacionados com alcalose metablica, hipocalemia e acidose respiratria. Nveis abaixo do normal so encontrados quando ocorre uma acidose metablica (devido a uma
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insuficincia renal), diarria, hipotenso, alcalose respiratria e desidratao.

Ferro O ferro um constituinte essencial da poro heme da hemoglobina. Esta protena continuamente degradada e sintetizada em funo da meia-vida dos eritrcitos, de forma que o ferro reciclado continuamente. Uma protena -globulina, denominada transferrina, transporta o ferro via sangnea para todo o organismo. O ferro derivado da degradao da hemoglobina captado pelo sistema mononuclear fagocitrio e pode ser armazenado no sistema retculoendotelial (bao, fgado e medula ssea) sob a forma de ferritina e hemossiderina, protenas armazenadoras do mineral. Perdas de ferro ocorrem inevitavelmente, principalmente pelas clulas epiteliais do trato gastrintestinal. A principal fonte de ferro da dieta a carne. A taxa de absoro determinada pela quantidade de ferro armazenado e pela taxa de produo de eritrcitos. O valores do ferro podem estar aumentados no plasma em decorrncia de diversos fatores, tais como: anemia hemoltica (ocorre liberao de ferro dos eritrcitos), doenas hepticas (local de estocagem do ferro na forma de hemossiderina e ferritina), leucemia aguda, nveis altos de substncias estrognicas, transfuso sangnea, nefrite, administrao parenteral excessiva de ferro ou excesso de ferro na dieta. Nveis de ferro abaixo do normal indicam uma deficincia de ferro na dieta, problemas de m absoro, anemia, infeco crnica, uremia, sndrome nefrtica ou -transferrinemia congnita.

Fsforo O fsforo (P) existe em combinaes orgnicas dentro das clulas, mas o interesse principal no perfil metablico reside no fsforo inorgnico presente no plasma. A manuteno do nvel de P do sangue governada pelos mesmos fatores que promovem a assimilao do Ca. Porm, na interpretao do perfil os dois minerais indicam diferentes problemas. Por outro lado, o controle da concentrao de clcio via endcrina mais rigoroso e o nvel de fsforo inorgnico no plasma sangneo dos bovinos geralmente oscila bem mais que o nvel de clcio. Os nveis de P so particularmente variveis no ruminante em funo da grande quantidade que se recicla via saliva e sua absoro no rmen e intestino. A interrupo do ciclo leva a hipofosfatemia. Normalmente a perda de P nas secrees digestivas no bovino chega a 10 g/dia. Por outro lado, o P no rmen necessrio para a normal atividade da microflora e portanto para a normal digesto. A disponibilidade de P alimentar diminui com a idade (90% em bezerros, 55% em vacas adultas). Da que os nveis sangneos de P sejam menores em animais mais velhos.

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Deficincias no fsforo no tem efeitos imediatos, como o caso do clcio, porm no longo prazo podem causar crescimento retardado, osteoporose progressiva, infertilidade e baixa produo. A deficincia severa de fsforo manifestada por nveis sangneos de <3,0 mg/dl leva a depravao do apetite. As hipofosfatemias so observadas em dietas deficientes em P, mais comumente em solos deficientes em fsforo, principalmente durante o outono/inverno e em vacas de alta produo. Existem muitas reas deficientes em P (McDowell, 1999). Vrios trabalhos mostram deficincias na frica (Senegal, Qunia), na Europa (Irlanda, Esccia), na Austrlia e na Amrica Latina (Brasil, Costa Rica, entre outros). No leite a relao Ca:P de quase 1:1. Entretanto, a relao Ca:P tima nos alimentos para absoro de 2:1, a mesma que existe nos ossos. Assim, a excreo de P pelo leite maior, especialmente em vacas em produo. Nesses animais, uma alimentao com concentrados (rica em P) pode evitar problemas de deficincia. Geralmente, as pastagens so abundantes em Ca e deficientes em P, acontecendo uma relativa deficincia de P e um excesso de Ca. Porm, os ruminantes esto bem adaptados para compensar altas relaes Ca:P (at mais de 3:1). Por outro lado, o excesso de suplementao com Ca e P podem causar diminuio da absoro intestinal de outros minerais, tais como Mg, Zn, Mn e Cu. Dietas com excesso de cereais, especialmente trigo, que contm alto teor de P, podem causar hiperfosfatemia em ovelhas e cabras, em decorrncia da qual pode ocorrer urolitase. O mesmo pode acontecer em gado sobrealimentado com concentrados e em ces e gatos com dietas nicas de carne.

Glicose Entre vrios metablitos usados como combustvel para a oxidao respiratria, a glicose considerada o mais importante, sendo vital para funes tais como o metabolismo do crebro e na lactao. O nvel de glicose sangunea pode indicar falhas na homeostase, como ocorre em doenas tais como as cetoses. Na digesto dos ruminantes, pouca glicose proveniente do trato alimentar entra na corrente sangunea. O fgado o rgo responsvel pela sua sntese a partir de molculas precursoras na via da gliconeognese. Assim, o cido propinico produz 50% dos requerimentos de glicose, os aminocidos gliconeognicos contribuem com 25% e o cido lctico com 15%. Outro precursor importante o glicerol. O nvel de glicose tem poucas variaes, em funo dos mecanismos homeostticos bastante eficientes do organismo, os quais envolvem o controle endcrino por parte da insulina e do glucagon sobre o glicognio e dos glicocorticides sobre a gliconeognese. Quando o fornecimento energtico inadequado, esses hormnios estimulam a degradao de glicognio

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heptico e a sntese de nova glicose no fgado e quando o balano energtico se torna negativo, estimulam a mobilizao de triglicerdeos para fornecer cidos graxos como fonte de energia e glicerol como precursor de glicose heptica. A dieta tem pouco efeito sobre a glicemia, em funo dos mecanismos homeostticos, exceto em animais com severa desnutrio. Sob alimentao sem deficincia ou excesso drsticos de energia, o nvel de glicose no bom indicador do nvel energtico da dieta. Porm, o fato de ser um metablito vital para as necessidades energticas do organismo justifica sua incluso no perfil metablico. A concentrao de glicose pode aumentar no estresse crnico. A diabetes mellitus, mais freqente em monogstricos do que em ruminantes, caracterizada por quadro de hiperglicemia e glicosria. A glicemia pode diminuir com a idade. Estados hipoglicmicos em vacas leiteiras esto associados a cetose e deficincias severas de energia ou, em menor grau, a produes elevadas de leite. O nvel de glicose tende a diminuir com produes acima de 30 kg de leite/dia. Na lactao, o suprimento de glicose na vaca importante, especialmente quando alcana o mximo de produo, pois a glndula mamria necessita de glicose para sntese de lactose. Quando ocorre hipoglicemia na lactao (glicemia menor que 35 mg/dl), diminui a produo de leite como forma de compensao. Em casos extremos pode sobrevir cetose. Nas vacas de alta produo, os requerimentos energticos so cobertos pela alimentao adequada e gliconeognese normal. A primeira deve adaptar-se s necessidades particulares dos ruminantes (a fibra importante no peri-parto) e a segunda s realizada se o fgado estiver funcionando normalmente. Diante de uma falha na alimentao ou na gliconeognese, ocorre mobilizao de triglicerdeos que servem como fonte de energia. A falta de oxalacetato leva ao aumento dos corpos cetnicos e, eventualmente, a cetose. Por outra parte, a excessiva mobilizao de lipdeos pode levar a uma infiltrao gordurosa no fgado, aumentando a falha heptica e, eventualmente, causando cirrose. Sob condies de campo, diferentemente das condies experimentais, em ocasies ocorre hipoglicemia, e seja qual for a causa ela indica um estado patolgico com importantes implicaes na sade e na produo. Em cavalos subalimentados apresenta-se com freqncia hipoglicemia e hiperlipemia. A mobilizao de lipdeos nesta espcie pode ser excessiva podendo causar dano heptico, s vezes fatal. O nvel de glicose nos ruminantes tende a ser menor no tero final da gestao do que nos perodos anteriores, isto , os nveis tendem a diminuir medida que a gestao avana. Sabe-se que o feto in utero demanda glicose como maior fonte de energia. Entretanto, no momento do parto, a glicemia tem um aumento agudo, talvez devido ao estresse. No perodo posterior ao parto os nveis caem de novo, especialmente na primeira semana e em vacas de alta produo.

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Globulinas A concentrao de globulinas obtida pela diferena de concentrao entre as protenas totais e a albumina. As globulinas podem ser divididas em trs tipos, , e , identificadas

mediante eletroforese. Elas tm funes no transporte de metais, lipdeos e bilirrubina, bem como papel na imunidade (frao gama). As globulinas so indicadores limitados do metabolismo protico, tendo mais importncia como indicadores de processos inflamatrios. Altos nveis de globulinas esto associados a doenas infecciosas ou a vacinaes recentes. As globulinas aumentam com a idade, talvez por maior experincia imunolgica, e durante a gestao. Existe uma correlao negativa entre a concentrao de albumina e globulinas; assim, um aumento nas globulinas devido a estados infecciosos, inibe a sntese de albumina no fgado como mecanismo compensatrio para manter constante o nvel protico total e, portanto, a presso osmtica sangunea. Por outra parte, na disfuno heptica, o nvel de albumina cai e o de globulinas aumenta. Mudanas nos nveis das globulinas podem ser usadas para avaliar estados de adaptao ao stress. Animais adaptados tendem a ter nveis normais, enquanto os no adaptados tm os nveis aumentados. A concentrao de globulinas diminui ao final da gestao devido passagem de gamaglobulinas para o colostro. Em bezerros, a hipoglobulinemia indicativo de que a ingesto de colostro foi pouca, o que os predispe a sofrer de doenas, principalmente diarrias por colibacilose. A concentrao de globulinas tambm diminui semanas antes do parto, recuperando seus valores at trs semanas aps o parto.

Hemoglobina A funo da hemoglobina (Hb) transportar oxignio no sangue. Est composta por 4 subunidades que contm a frao heme, em complexo com a protena globina. O heme est encarregado de transportar o oxignio. A Hb produzida pelos eritrcitos imaturos (reticulcitos) e sua degradao leva a formao de bilirrubina. Quase toda a Hb est localizada no eritrcito, porm uma mnima frao pode ser encontrada no plasma, como resultado da degradao eritroctica. A concentrao de Hb aumenta com a idade e na desidratao. A Hb diminui no perodo final do parto e durante o ps-parto. A queda de Hb no final do parto pode estar relacionada com a transferncia indireta de Hb materna para o sangue fetal, o que possvel mediante a degradao dos eritrcitos nos cotildones e a transferncia do ferro do heme da Hb, aumentando, portanto, o nvel de bilirrubina no sangue materno. A reduo do nvel de hemoglobina e do hematcrito indicam anemia, a qual pode ser causada por vrios fatores: (a) deficincia de protenas ou de alguns minerais, principalmente

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ferro, cobre e cobalto; (b) hemlise por intoxicaes, defeitos congnitos, porfirias; (c) hematozorios e infestao por nematides; (d) infeces virais especficas. Em geral, a anemia representa um sinal de alerta para que sejam tratados os problemas causadores. A anemia fica configurada quando a concentrao de Hb menor que 8 g/dl ou o hematcrito menor que 25%. Logo aps o parto normal acontecer anemia subclnica por hemodiluio, devido ao ajuste circulatrio s necessidades hdricas e metablicas como resultado do funcionamento da glndula mamria. Entretanto, se a anemia se prolongar por mais de 4 semanas ps-parto, isto pode ser indicao de algum problema, geralmente deficincia de nutrientes ou falha heptica. As anemias subclnicas esto associadas a baixa fertilidade. Em bezerros, a anemia causa crescimento retardado. Em leites indispensvel a suplementao com ferro porque o leite da porca deficitrio nesse mineral. A anemia pode levar a diminuio da tolerncia ao exerccio em cavalos e ces. A deficincia de cobre, que causa de anemia, pode ser exacerbada por excesso de Mo ou de sulfatos.

Lactato O lactato um produto intermedirio do metabolismo dos glicdeos, sendo o produto final da glicose anaerbica. Na presena suficiente de oxignio e uma moderada taxa de gliclise, o cido pirvico entra no ciclo de Krebs, gerando CO2 e H2O. Em condies em que o cido pirvico produzido em uma quantidade maior da que consiga utilizar, ou quando ocorre condio de anaerobiose, o cido pirvico convertido em cido lctico. Em condies normais, a maioria do lactato produzida pelos eritrcitos, mas durante exerccio ou atividade fsica intensa, o msculo produz grandes quantidades de lactato, devido condio de insuficiente oxigenao do msculo nestas situaes. As condies patolgicas que resultam no aumento do lactato plasmtico so agrupadas em: transtornos do msculo esqueltico, cardiomiopatias, diabetes mellitus (onde o lactato e o piruvato esto aumentados), deficincia de tiamina, transtornos hepticos, doena gentica na qual ocorre falha nas enzimas responsveis pela estocagem do glicognio, toxemia da gestao, hipoxia, choque e reduo da presso sangnea e anemia causando reduo na capacidade de oxigenao. Em ruminantes pode ocorrer tambm aumento do lactato sangneo na chamada acidose lctica ou indigesto lctica. Este transtorno observado em animais que tm mudanas sbitas de dieta de forragem para concentrado, onde h uma rpida fermentao de carboidratos solveis com alta produo de lactato.

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Lipdeos totais Os lipdeos encontrados no plasma so divididos em trs grandes grupos: colesterol, fosfolipdeos e gorduras neutras (TG). Mudanas na composio e na concentrao plasmtica dos lipdeos, podem ser observadas em vrias condies fisiolgicas, como por exemplo, em animais jovens, nos quais h baixas concentraes de lipdeos totais, ou durante a gestao, quando ocorre um aumento considervel de lipdeos totais no plasma. Condies patolgicas que cursam com o aumento dos lipdeos totais plasmticos so nefrose, cirrose, hepatite aguda, hipotireoidismo e caquexia. Diminuio nos nveis plasmticos de lipdeos totais pode ser devida a anemia, infeco aguda ou hipertireoidismo. normal encontrar aumento nos nveis de lipdeos totais em vacas leiteiras de alta produo durante o ps-parto.

Magnsio No existe um controle homeosttico rigoroso do Mg e, portanto, sua concentrao sangunea reflete diretamente o nvel da dieta. O controle renal de Mg est mais direcionado para prevenir a hipermagnesemia, mediante a excreo do excesso de Mg pela urina. Diante de uma deficincia de Mg, seus nveis na urina caem a praticamente zero. Assim, os nveis de Mg na urina so indicadores da ingesto do mineral nos alimentos. A hipomagnesemia tem srias conseqncias para os ruminantes podendo levar at a morte, enquanto que a hipermagnesemia no causa maior transtorno. A hipomagnesemia ou a tetania hipomagnesmica constitui uma doena da produo, geralmente causada pela baixa ingesto de magnsio (Mg) na dieta. A hipomagnesemia pode causar, alm da tetania, hiperexcitabilidade, reteno de placenta, bem como anormalidade da digesto ruminal e diminuio da produo de leite. Tambm predispe apresentao de febre do leite em vacas aps o parto, devido a que nveis baixos de Mg (< 2 mg/dl) reduzem drasticamente a capacidade de mobilizao das reservas de Ca dos ossos. O Mg est mais disponvel em forragens secas e em concentrados (10-40%) do que em pastos frescos (5-33%). Pastagens jovens com altos nveis de protena e K inibem a absoro de Mg.O Mg absorvido no intestino mediante um sistema de transporte ativo que pode ser interferido pela relao Na:K e ainda pela quantidade de energia, de Ca e de P presentes no alimento. A hipomagnesemia tambm pode ser conseqncia de uma excessiva liplise em decorrncia de uma deficincia de energia. O Mg um mineral no essencial para o crescimento das pastagens. O K, que essencial, muitas vezes fica em excesso especialmente por causa dos fertilizantes. Esse K em excesso inibe a absoro intestinal de Mg e, associado deficincia de Mg, pode levar facilmente hipomagnesemia. O nvel de Mg no perfil metablico pode indicar estados subclnicos antes de surgir o problema (nvel normal 2,0-3,0 mg/dl), sendo especialmente til antes do parto para

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evitar problemas de tetania no ps-parto, geralmente complicados com febre de leite. Configura-se hipomagnesemia em ruminantes com nveis de Mg abaixo de 1,75 mg/dl, aparecendo sintomas com concentraes abaixo de 1,0 mg/dl. O nveis de Mg na urina podem ser indicativos de deficincia quando esto abaixo de 0,5 mg/dl (o nvel normal de Mg na urina de 10-15 mg/dl). aconselhvel fazer monitoramento dos nveis de Mg no sangue ou na urina ao longo do ano para prevenir hipomagnesemias. O leite relativamente deficiente em Mg, pelo qual recomenda-se suplementar aos animais lactentes.

Potssio O potssio o ction intracelular mais abundante do organismo. Na maioria dos animais, a concentrao de potssio dentro da clula similar a concentrao de sdio fora da clula. Este ction, quando presente no fluido extracelular, est relacionado com o processo de excitao nervosa e muscular. A concentrao srica deste elemento controlada atravs de sua contnua filtrao pelo rim. O potssio encontrado na saliva, no suco gstrico, na bile, no suco pancretico e nos lquidos intestinais. Qualquer situao patolgica que interfira com a absoro ou reabsoro deste eletrlito no rim ou qualquer situao que implique em perda de lquidos corporais ricos em potssio alteram sua concentrao srica. Situaes em que pode ser encontrado aumento nos nveis sricos de K (hipercalemia) so devidas excreo reduzida, como no hipoadrenocorticismo, no tratamento com espirinolactona, em ingesta baixa de sdio, na fase oligrica da insuficincia renal (principalmente insuficincia renal aguda), em ruptura vesical ou quando ocorre redistribuio do potssio do espao intracelular para o lquido extracelular, como por exemplo, em casos de acidose (especialmente metablica), hiperosmolaridade do plasma, dano tecidual extenso (queimadura) e trombocitose. Situaes em que encontrado um nvel baixo de K sangneo (hipocalemia) incluem diminuio da ingesto de potssio ou aumento da perda deste elemento como, por exemplo em vmito e diarria persistente, em terapias de diurticos, mineralocorticides em excesso, em enfermidade heptica crnica, na fase polirica da insuficincia renal crnica ou por redistribuio do potssio do lquido extracelular para o espao intracelular, como por exemplo, em alcalose, hiperinsulinemia e em recuperao de traumatismo grave.

Protenas totais As principais protenas plasmticas so a albumina, as globulinas e o fibrinognio. Elas esto envolvidas em mltiplas funes: (a) manuteno da presso osmtica e da viscosidade do sangue; (b) transporte de nutrientes, metablitos, hormnios e produtos de excreo, (c) regulao do pH sangneo; e (d) participao na coagulao sangunea.

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As protenas sanguneas so sintetizadas principalmente pelo fgado, sendo que a taxa de sntese est diretamente relacionada com o estado nutricional do animal, especialmente com os nveis de protena e de vitamina A, e com a funcionalidade heptica. A concentrao de protenas totais pode estar aumentada na desidratao por hemoconcentrao. Alguns autores assinalam que os animais mais velhos tm maiores teores de protena sangunea que os mais novos, talvez por apresentarem maior eficincia metablica na utilizao da protena. A frao protica responsvel por este aumento parece ser a das globulinas, principalmente da frao gama. A concentrao das protenas totais encontra-se diminuda em falhas hepticas, transtornos intestinais e renais, hemorragia, ou por deficincia na alimentao. Em estados de inanio, a protena de reserva, especialmente do msculo e do fgado, degradada para servir de fonte de glicose, ao mesmo tempo em que ocorre diminuio das protenas totais do plasma provocando queda na osmolaridade plasmtica, o que pode resultar, em casos extremos, em sada de lquidos da corrente circulatria para os tecidos (edema). Dietas com menos de 10% de protena causam diminuio dos nveis proticos no sangue. Fisiologicamente, a concentrao de protenas pode cair na semana anterior ao parto, recuperando-se depois do parto. Vacas secas podem ter maiores teores de protenas que vacas em lactao ou em gestao. Dietas com deficincia de protena no incio da lactao impedem a recuperao dos nveis sangneos proticos no ps-parto e levam, necessariamente, a uma reduo da produo leiteira. Sdio O sdio est presente principalmente no lquido extracelular e determina, em grande parte, o volume deste lquido e a osmolaridade do plasma. O nvel de sdio dentro das clulas mantido baixo, graas a uma membrana celular relativamente impermevel entrada de sdio e a uma bomba de sdio que retorna o sdio da clula para o lquido extracelular. Os rins regulam a quantidade de sdio do organismo, controlando tambm a de gua, mantendo assim a concentrao plasmtica de sdio dentro de limites estreitos, apesar das flutuaes devidas a ingesta diria. Um aumento nos nveis plasmticos de sdio produzido por aumento na ingesto de sdio, por perda excessiva de gua ou fluidos (poliria, vmito, diarria) ou por ingesto inadequada de gua (falta ou incapacidade de beber). Uma diminuio nos nveis plasmticos de sdio pode ser devida a perdas deste eletrlito na diurese osmtica, na desidratao grave, na fase polirica da insuficincia renal aguda, na polidipsia psicognica. Nesses casos, se observa aumento da presso sangnea e diminuio da presso osmtica coloidal.

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Triglicerdeos Os triglicerdeos (TG) formados nas clulas da mucosa intestinal a partir dos monoglicerdeos e cidos graxos de cadeia longa absorvidos, so transportados pelos vasos linfticos como quilomcrons e posteriormente entram na circulao sangnea. Os quilomcrons so formados praticamente em sua totalidade por triglicerdeos (80-95%) e por pequenas quantidades de colesterol, fosfolipdeos e uma protena plasmtica que confere solubilidade a este lipdeo. Os TG ligados aos quilomcrons so considerados TG exgenos. Os TG formados no fgado so transportados no sangue sob a forma de lipoprotenas de baixa densidade (VLDL). Estes compostos consistem principalmente de triglicerdeos (em torno de 60%), contendo tambm colesterol, fosfolipdeos e protenas plasmticas. Os TG ligados VLDL so considerados TG endgenos. Os nveis de triglicerdeos plasmticos esto aumentados depois de ingerir alimentos ricos em gordura, em casos de deficincia da atividade da enzima lipase lipoprotica, o que ocorre secundariamente a processos como diabetes mellitus ou por falha gentica da atividade desta enzima. Uria A uria sintetizada no fgado a partir da amnia proveniente do catabolismo dos aminocidos e da reciclagem de amnia do rmen. Os nveis de uria so analisados em relao ao nvel de protena na dieta e ao funcionamento renal. A uria excretada principalmente pela urina e, em menor grau, pelo intestino e o leite. Na maioria dos animais (exceto em aves, que secretam cido rico), o nvel de uria indicador de funcionamento renal. Na insuficincia renal pode ser observada azotemia (aumento nos nveis sangneos de uria e creatinina). Tambm pode ocorrer azotemia por causas pr-renais, que incluem desidratao, choque hipovolmico e hipotenso, bem como por causas ps-renais, principalmente obstruo do trato urinrio. Os nveis de uria sangnea tambm esto afetados pelo nvel nutricional, particularmente em ruminantes. De modo geral, a uria um indicador sensvel e imediato da ingesto de protena, enquanto que a albumina indicador a longo prazo do estado protico. Por outra parte, uma dieta baixa em protenas afeta pouco a concentrao de globulinas. A concentrao de uria pode esta aumentada em alimentao com excesso de protena ou de fontes de nitrognio no protico, como a prpria uria, que usada em ruminantes em at 3% da dieta. No entanto, tambm so encontrados nveis aumentados de uria quando ocorre deficincia de energia, devido a diminuio da capacidade da microflora ruminal em utilizar os compostos nitrogenados para a sntese de protenas, aumentando a quantidade de amnia absorvida no rmen. O adequado fornecimento de glicdeos na dieta, quando h suplementao de compostos nitrogenados, evita o aumento excessivo dos nveis de uria sangunea, devido
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utilizao pelas bactrias do rmen da uria e dos glicdeos para sintetizar aminocidos e protena. O jejum prolongado pode causar aumento da protelise endgena para utilizar aminocidos como fonte energtica o que causa aumento na concentrao de uria. Isto freqente em bezerros com diarria, quando o consumo de alimento chega a ser nulo. Nesses casos, o quadro exacerbado pela desidratao, pois o fluxo de urina diminui e inibe a excreo renal de uria, podendo causar uremia. Em ruminantes ocorre diminuio dos nveis de uria sangunea por dietas deficientes em compostos nitrogenados. O balano nitrogenado nestas espcies pode ser estudado com base nos nveis de uria tanto no sangue quanto no leite. Os valores de uria sangunea diminuem pouco antes e aps o parto, inclusive em vacas com adequados nveis de protena na dieta. importante considerar quando se expressa um resultado, se o dosado uria ou N urico, uma vez que o valor de uria 2,14 vezes maior que o valor de N urico. Tambm deve ser observada a unidade com que expressado o resultado, pois o Sistema Internacional de Unidades utiliza mmol/l, enquanto que alguns laboratrios entregam o resultado no sistema convencional de medida, isto , mg/dl. Facilmente possvel converter as unidades de um sistema para outro usando o fator 0,167 (1 mg/dl = 0,167 mmol/l).

ENZIMAS CLNICAS A enzimologia clnica de grande ajuda diagnstica, principalmente em relao as enzimas presentes na corrente sangnea, vrias das quais so includas no estudo do perfil metablito sangneo (Tabela 2).

Tabela 2. Nveis sricos normais (U/l) de algumas enzimas. Enzima Bovinos Fosfatase alcalina (FA) 0-488 Alanina transaminase (ALT) 14-38 aspartato transaminase (AST) 78-132 Colinesterase (ChE) 1270-2430 Amilase (Amyl) Arginase (Arg) 1-30 Creatina quinase (CK) < 94 Glutamato desidrogenase (GLDH) 31 Gama-glutamil transferase (GGT) 6,1-17,4 Lactato desidrogenase (LDH) 692-1445 Sorbitol desidrogenase (SDH) 4,3-15,3 Fonte: Kaneko et alii. (1997), Wittwer (199) Equinos 143-395 3-23 226-366 450-790 75-150 0-14 < 140 0-11,8 4,3-13,4 162-412 1,9-5,8 Caninos 20-156 21-102 23-66 270 185-700 0-14 < 125 3 1,2-6,4 45-233 2,9-8,2 Ovinos 68-387 30 307 640 0-14 < 40 20 20-52 238-440 5,8-27,9

A medio da atividade enzimtica no plasma como ajuda diagnstica esta fundamentada no seguintes conceitos: (a) No plasma sangneo podem ser encontradas enzimas cuja sntese e funo so
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exercidas em nvel intracelular, mas que podem sair para a corrente circulatria, aps a morte celular. Sob condies normais, estas enzimas tm baixa atividade no plasma. Outras enzimas, que tambm so produzidas no espao intracelular podem ser secretadas para atuar fora das clulas, como o caso das enzimas da coagulao sangnea (trombina). (b) Como a concentrao intracelular das enzimas bem maior que no plasma, danos celulares relativamente pequenos podem levar a aumentos significativos da atividade das enzimas no plasma. (c) Aumentos da atividade enzimtica no plasma permite fazer inferncia sobre o lugar e o grau do dano celular, uma vez que muitas enzimas so especficas de rgos. O grau de alterao pode ser determinado pela atividade de enzimas associadas a diferentes compartimentos celulares. Assim, em danos tissulares severos, aparece maior atividade de enzimas mitocndrias (e.g. GLDH) e em danos menores aparece atividade de enzimas citoplasmticas (e.g. ALT) ou de membrana (e.g. FA). (d) Os nveis enzimticos no plasma esto influenciados pela velocidade com que entram na corrente circulatria, o que por sua vez depende do dano celular e pela taxa de inativao enzimtica (meia-vida da enzima). (e) O evento que interessa na determinao enzimtica o aumento da atividade, no tendo geralmente importncia a diminuio. O sistema de medida da concentrao das enzimas mais usado o de Unidades Internacionais (U), equivalente quantidade de enzima que catalisa a converso de 1 mol de substrato por minuto. Devem ser expressadas as condies de pH, temperatura e concentrao de substrato usadas na determinao. A Unio Internacional de Bioqumica (IUB) recomenda, para expressar a atividade enzimtica, o uso do katal (1 kat= 1 mol/s) unidade que tem equivalncia no sistema internacional (1 U/l= 16,67 nkat/l). A amostra utilizada para a anlise de enzimas deve ser preferivelmente soro e, se usar plasma, deve evitar-se o uso de anticoagulantes com agentes quelantes de metais, tais como EDTA, citrato ou oxalato, para evitar a inativao das metaloenzimas. A heparina uma boa alternativa. A estabilidade das enzimas diferente para cada uma sendo conveniente separar o soro ou o plasma o mais rapidamente possvel. Deve evitar-se congelar e descongelar muitas vezes a mesma amostra, pois este processo pode causar a desnaturao de algumas enzimas. Quando for necessrio analisar uma amostra em dias diferentes, recomenda-se dividir em pequenas alquotas, descongelando s o que for analisado logo em seguida. Alm dos cuidados, j citados, com a coleta e armazenamento da amostra, o clnico deve ter cuidado especial com a anamnese do paciente. Alguns fatos podem passar desapercebidos e levar a uma interpretao equivocada dos resultados, como por exemplo: - a aplicao de uma injeo por via intramuscular pode causar uma irritao tecidual no msculo, suficiente para elevar a concentrao de CK, AST ou LDH no sangue;
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- a hemlise pode interferir no somente pela variao na absorbncia da amostra como tambm pela liberao de enzimas presentes nos eritrcitos; - a CK pode elevar-se devido uma crise convulsiva em que o animal se debata e traumatize os msculos esquelticos; - o animal pode ter sofrido algum acidente que no foi percebido ou relatado pelos proprietrios, caso em que se deve procurar por outras evidncias, pois alm do traumatismo muscular, pode ter ocorrido alguma leso visceral; - verificar a possibilidade de induo enzimtica por uso de drogas; - levar em conta fatores como caquexia, prenhez, idade, dieta e outros que possam interferir nos resultados; - animais e raas com taxas de crescimento maiores apresentam maior atividade enzimtica de AST, ALT e FA.

PRINCIPAIS ENZIMAS USADAS NA CLNICA VETERINRIA Aldolase (ALD) Catalisa a hidrlise da frutose-1,6-difosfato em gliceraldedo-3-fosfato e

dihidroxiacetona-fosfato, na via da gliclise. Tem importncia no diagnstico de leso muscular (esqueltica e cardaca). Tambm pode estar aumentada em casos de dano heptico, na hemlise e aps administrao de cortisol. A sua medio difcil, razo pela qual so preferidas outras enzimas indicadoras desses problemas, tais como AST, ALT, CK e LDH.

Alanina aminotransferase (ALT) A ALT (GPT, TGP) catalisa a transaminao reversvel de alanina e 2-cetoglutarato em piruvato e glutamato. Tem como cofator o piridoxal-fosfato. encontrada em grande concentrao no fgado e, em menor grau, no rim e nos msculos, tendo localizao citoplasmtica. A ALT um bom indicador de hepatopatias agudas em ces, gatos, coelhos, ratos e primatas, principalmente em doenas hepato-celulares, necrose heptica, obstruo biliar, intoxicaes e infeces parasitrias. Seu uso em sunos, cavalos e ruminantes de pouco valor diagnstico devido aos baixos teores da enzima nos tecidos destas espcies. Em processos crnicos seu valor est diminudo. Tambm pode estar aumentada em casos severos de dano muscular. Gestao, nutrio inadequada e falha renal podem levar a uma atividade da ALT diminuda pela deficincia desta vitamina. Ces e ratos tratados com cefalosporina tambm podem apresentar diminuio da atividade desta enzima Embora presente no corao, nos rins, msculos e eritrcitos, a enzima oriunda destes

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rgos no capaz de fazer a ALT aumentar muito mais do que 3 vezes. O aumento da ALT est relacionado com o nmero de clulas envolvidas, ou seja, com a extenso, e no com a gravidade da leso. Na realidade, mesmo uma leso que no cause morte celular, pode ser suficiente para que ocorra a liberao de ALT na corrente sangnea. Diversas drogas podem induzir um incremento da atividade da ALT. Em pequenos animais so relevantes para o clnico os seguintes princpios ativos: acetaminofeno, barbitricos, glicocorticides, cetoconazol, mebendazol, fenobarbital, fenilbutazona, primidona e tetraciclina. Substncias qumicas (fenis, alcatro e outros), plantas hepatotxicas e aflatoxina podem causar o mesmo efeito. ALT tem um pico de liberao no sangue cerca de 3 ou 4 dias aps a leso, mas retorna aos valores basais cerca de 2 semanas aps. A persistncia de valores elevados por um perodo maior pode indicar o estabelecimento de uma patologia crnica como neoplasia ou hepatite. Outras causas possveis de aumento da ALT so shunts portossistmicos, lipidose heptica, pancreatite aguda (aumento moderado), hepatites txicas ou infecciosas (leptospirose, peritonite infecciosa felina, e outras), hipxia e febre (pequena variao). Amilase (Amyl) A amilase uma metaloenzima Ca2+-dependente que atua no intestino hidrolisando polmeros de glicose (amido, amilopectina e glicognio) nas ligaes glicosdicas -1,4,

produzindo maltose e dextrina limite. Existem, no mnimo, 4 isoenzimas de amilase no plasma de ces e 7 nos humanos . Existe amilase em vrios tecidos (glndulas salivares, crebro, pulmo) exceto no fgado. Seu nvel 6 vezes maior no pncreas e no duodeno do que nos outros tecidos. A elevao de amilase no plasma indicativo de pancreatite em ces, obstruo intestinal, falha renal, obstruo urinria, neoplasias do pncreas, hiperadrenocorticismo, obstruo das glndulas salivares e administrao de drogas (cortisol, opiceos). Tambm pode aparecer amilase na urina nos casos de pancreatite, leses das glndulas salivares e insuficincia renal. O co no possui alfa-amilase nas glndulas salivares, embora outras espcies a possuam. Grande parte da amilase sangunea removida do organismo pela filtrao renal e eliminada na urina. Portanto, uma das causas provveis de hiperamilasemia a diminuio da filtrao glomerular. No entanto, se esta causa for eliminada, a amilase tem uma alta especificidade para leso pancretica. Em casos mais raros pode ocorrer aumento da amilase sangnea por trauma cerebral. Algumas drogas podem causar pancreatite e por conseqncia hiperamilasemia. No entanto, no foram encontrados relatos de induo da produo enzimtica pelo uso de drogas. Vrios tecidos como intestino, rins e tero apresentam atividade de amilase, e por isso, os pesquisadores preferem considerar que o diagnstico de pancreatite em ces seja dado s
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quando o valor ultrapassar 3 ou 4 vezes os valores de referncia. Arginase (Arg) Esta enzima apresenta aumento de atividade aps uma injria aguda do fgado, retornando aos valores normais mais rapidamente que a ALT e AST. Em hepatites necrticas crnicas pode manter nveis elevados, com um mau prognstico para o animal. A arginase j foi demonstrada em vrias espcies, mas pode ter valor diagnstico em eqinos, bovinos, ovinos, caprinos e ces. Atualmente no usada na rotina laboratorial por falta de kit comercial disponvel. Aspartato aminotransferase (AST) A AST (GOT, TGO)) catalisa a transaminao reversvel de aspartato e 2-cetoglutarato em oxalacetato e glutamato. Tem como cofator o piridoxal-fosfato. Existe em muitos tecidos como duas isoformas, no citosol e na mitocndria, sendo mais abundante no fgado, nos eritrcitos e nos msculos esqueltico e cardaco. Seu uso como indicador de danos nesses tecidos. Aumento de AST so observados em hepatite infecciosa e txica, cirrose, obstruo biliar e fgado gorduroso. Seu nvel tambm est aumentado quando ocorre hemlise, deficincia de selnio/vitamina E e no exerccio fsico intenso. Em leses musculares, convm conferir tambm a atividade de CK. A AST usada para avaliar condicionamento fsico em animais de esportes. Tambm, em sunos, pode ser indicador da capacidade de suportar estresse por transporte (teste de halotano) Em ruminantes a AST um bom indicador do funcionamento heptico. Assim, seus nveis sangneos so utilizados em vacas no pr-parto para prevenir doenas metablicas durante o ps-parto, especialmente em vacas de alta produo. Vacas com altos valores de AST antes do parto (>35 U/l), tm mais tendncia a sofrer problemas de infertilidade, paresia de parto e reteno de placenta que vacas com baixos valores (<25 U/l). Valores altos de AST e baixos de colesterol e de albumina revelam, com razovel certeza, transtornos na funo heptica. Em aves e outros animais, a AST pode indicar toxicidade por ionforos usados como drogas anticoccidiais. AST pode estar elevada na intoxicao crnica pelo cobre nos ovinos. Plantas hepatotxicas que causem necrose heptica, como Cestrum parqui e Xanthium cavalinesii so causas possveis de aumento da AST. Senna ocidentalis e outras que causam extensa necrose muscular podem ter o mesmo efeito. A deficincia de vitamina E e selnio pode causar necrose segmentar dos msculos esquelticos (doena dos msculos brancos), incrementando a atividade de AST no plasma. Nestes casos pode ser interessante avaliar conjuntamente a creatina quinase, que mais
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especfica para leso muscular, e a glutation peroxidase, para avaliar a carncia de selnio. AST pode ser usada para avaliar leso heptica em pequenos animais da mesma forma que a ALT, porm com uma especificidade muito menor. Na avaliao de leso muscular, ela produz aumentos menores do que a creatina quinase, mas que se estendem por um perodo de tempo maior. AST por ser uma enzima mitocondrial e citosslica, necessita uma leso maior para ser liberada na corrente sangnea. Por outro lado CK e LDH, por serem citosslicas e de tamanho pequeno, conseguem ultrapassar a membrana celular mesmo que no exista um dano tecidual muito grande. Na realidade, um simples aumento de permeabilidade de membrana suficiente para que ocorra o extravasamento da enzima. Leses no msculo cardaco tambm so demonstradas pelo aumento da AST. Cardiomiopatias diversas podem causar este efeito, assim como endocardites bacterianas, dirofilariose, trombose artica e infarto do miocrdio. Quando estiver presente congesto heptica por problema cardaco, a enzima provavelmente estar elevada devido ao fgado congesto. O aumento da AST srica pode ocorrer em patologias de localizao no sistema nervoso central. Quando isto ocorrer, sugere uma grande leso do parnquima e um prognstico ruim. Colinesterase (ChE) Existem duas enzimas conhecidas por este nome, a acetilcolinesterase (AChE) ou colinesterase verdadeira, e a butirilcolinesterase (ButChE), ou pseudocolinesterase. No plasma encontram-se maiores nveis da pseudo-colinesterase (butiril-colinesterase) do que da ChE verdadeira (acetil-colinesterase), mas os nveis de ambas so paralelos e indicativos um do outro, tendo os mesmos inibidores e ativadores. A ChE uma enzima integrante da juno mioneural, da substncia cinzenta do crebro que catalisa a hidrlise do neurotransmissor acetilcolina em colina e acetato. Entre os mais importantes inibidores desta enzima esto os organofosforados, cujo grupo fosforil se une irreversivelmente ChE, permitindo a ao contnua da acetilcolina e causando tremores e convulses. O significado clnico da ChE quando se observam nveis menores que o normal, por exemplo na intoxicao com organo-fosforados ou em leso heptica. Nveis baixos de ChE tambm so observados em animais anmicos ou mal alimentados. Aumentos da ChE so vistos em leses cerebrais (abscessos) ou em hiperlipoproteinemia. A intoxicao por organofosforados causa uma inibio relativamente estvel da enzima, enquanto que aquela causada por carbamatos muito lbil. A acetilcolinesterase serve para fazer o diagnstico diferencial entre as substncias txicas, uma vez que no tem uma relao muito grande com a gravidade dos sinais clnicos. A avaliao da atividade da
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acetilcolinesterase varia muito com o tempo e quantidade do produto ingerido. Como a AChE encontrada em quantidades muito pequenas no plasma, normalmente avalia-se a atividade enzimtica da ButChE como indicador da atividade enzimtica da AChE na juno mioneural. Creatina quinase (CK) A CK, tambm conhecida como creatina fosfoquinase (CPK), existe na forma dmeros, cujas subunidades pesam 40 kD. As subunidades correspondem a formas M (muscular) ou B (cerebral), havendo 3 isoenzimas (MM, MB e BB). Em medicina veterinria, a determinao das isoenzimas de CK ainda no tem utilidade prtica, embora seja comum na medicina humana. A principal atividade da CK est no tecido muscular (esqueltico e cardaco), tendo como funo fosforilar de forma reversvel a creatina a expensas do ATP, como uma forma adicional de conservao de energia em ligaes fosfatadas (Figura VIII-1). Alm do tecido muscular, a CK pode estar localizada, em menor quantidade, no rim, crebro, diafragma, trato gastrointestinal, tero e bexiga. A CK amplamente usada para diagnosticar transtornos musculares. A enzima citoslica ou associada s estruturas das miofibrilas. Requer Mg2+ como cofator e, portanto, sua atividade pode estar inibida na presena de compostos quelantes (EDTA, citrato, oxalato). Seu nvel est aumentado no infarto cardaco e em danos musculares, como isquemia muscular por decbito prolongado, convulses, tremores, traumas, excesso de exerccio, necrose, cirurgias, injees intramusculares, choque e miopatias nutricionais que envolvam deficincia de vitamina E e selnio. Em problemas musculares, conveniente dosar tambm AST. A CK aparece elevada antes da AST e tambm desaparece primeiro. Assim, o padro enzimtico dessas enzimas pode indicar o estgio do problema. CK aumentada com baixa AST indica leso recente, nveis persistentemente altos das duas indicam leso continuada, enquanto que nveis baixos de CK e altos de AST indicam processo de recuperao. Ces com leptospirose apresentam a atividade srica da CK aumentada, o que sugere uma extensa degenerao muscular, o que explica as dores observados na clnica veterinria. Incremento de CK ocorre em bovinos transportados por longos perodos. Este aumento ocorre pelo esforo fsico que so submetidos os animais. O esforo do parto tambm um fator de aumento da CK, assim como o exerccio de cavalos de pentatlon. O uso da isoenzima CK-MB no um indicador confivel de leso cardaca em ces, diferente do que ocorre com humanos. Isto devido a que a meia vida da CK-MB canina muito curta e, desta forma, raramente a isoenzima pode ser avaliada a tempo.

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Fosfatase cida (AcP) Enzima da famlia das fosfatases, que hidrolisam steres do cido fosfrico. A AcP tem a sua atividade tima a pH menor de 7,0. Tem localizao intra e extra-lisossmica, atuando principalmente em prstata, fgado, bao, leite, clulas sangneas e smen. Em humanos, a enzima tem sua atividade srica aumentada em doenas prostticas (hipertrofia, prostatite e carcinoma), alm de algumas doenas sseas e hematolgicas. Em medicina veterinria ainda no existem resultados conclusivos a respeito de doenas prostticas e a atividade srica da AcP.

Fosfatase alcalina (FA, ALP) Foi a primeira enzima utilizada na clnica por King e Armstrong em 1927. A FA catalisa a hidrlise de steres de cido fosfrico em condies alcalinas, tendo um pH timo de atividade in-vitro de 10. Como nenhuma clula possui esse pH, acredita-se que o pH intracelular exerce um importante controle sobre a atividade desta enzima. Existem vrias isoenzimas de FA em praticamente todos os tecidos, estando localizada na membrana celular. Tem maior presena nas clulas do epitlio intestinal, osso, fgado, tbulos renais e placenta. Todas as isoenzimas de FA so dmeros cujas cadeias pesam de 40 a 70 kD. So metaloenzimas que contm Zn2+ e tm como cofator o Mg2+. Existe uma isoenzima induzida por corticosteride em ces. A concentrao srica de FA 2 a 3 vezes maior em animais jovens do que em adultos. Em gestantes, o aumento pode ser de 300% do normal, devido a sua presena na placenta. A isoforma heptica da FA a que predomina no plasma, tendo maior importncia em doena hepatobiliar. Assim, na colestase ocorre aumento da concentrao de FA, de forma que quanto maior a atividade da FA, maior o grau de obstruo biliar. Em danos do parnquima heptico, o aumento de FA de baixo a moderado. Os felinos possuem uma menor quantidade hepatocelular de fosfatase alcalina, e rapidamente eliminada pelos rins. Alm disso, nessa espcie, nem toda hepatopatia significativa causa um aumento significativo da enzima. Em ces, a hepatopatia que causa aumento da fosfatase alcalina, cursa com colestase. A obstruo biliar extra-heptica, assim como a induo por corticosterides, pode aument-la em at 10 vezes. Necrose hepatocelular geralmente cursa com aumento transitrio da fosfatase alcalina. A isoforma renal no est presente no plasma. Quando h dano renal, a FA aparece na urina junto com a enzima GGT. FA de pouca importncia em doenas hepticas em cavalos e ruminantes devido aos amplos intervalos normais de concentrao nestes animais. Tambm pode estar aumentada em casos de osteomalcia, hiperparatireoidismo, tumor sseo, cicatrizao de fraturas, deficincia de vitamina D, raquitismo, hiperadrenocorticismo, gestao e reteno de placenta. Como a FA

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est presente no leite cru, serve como marcador da pasteurizao e da inativao por calor. A isoenzima de FA induzida por corticosteride pode estar presente nos ces com hiperadrenocorticismo, ces em tratamento, ou secundrio a doenas prolongadas pelo efeito do stress. Alm dos corticosterides, outras drogas induzem ao aumento da fosfatase alcalina, entre as quais se citam barbitricos, cefalosporinas, fenobarbital, fenotiazinas, fenilbutazona, tetraciclinas, tiabendazol e halotano. FA de origem ssea pode estar aumentada em animais jovens, em consolidao de fraturas, hiperparatireoidismo, osteossarcoma, osteomalcia ou na deficincia de vitamina D. Os animais castrados apresentam uma maior atividade da enzima que os inteiros. Gama-glutamil transferase (GGT) A GGT catalisa a transferncia de grupos gama-carboxila do glutamato a um peptdeo, geralmente o dipeptdeo Gly-Gly. Esta enzima tambm conhecida como gama-glutamil transpeptidase. Encontra-se como enzima associada s membranas, mas tambm est no citosol, especialmente nos epitlios dos dutos biliares e renais, embora possa ser encontrada no pncreas e no intestino delgado, mas somente aquela de origem heptica normalmente encontrada no plasma, pois a de origem renal excretada na urina. Seu peso molecular varia de 90 a 350 kD, dependendo da espcie. A funo da GGT no est muito bem esclarecida, mas acredita-se que est relacionada com o metabolismo do glutation. A GGT do plasma de origem heptica, sendo indicativa de colestases e proliferao de dutos biliares em todas as espcies, aumentando tambm na cirrose e no colangiocarcinoma. Em felinos, mas no em ces, pode ser utilizada no lugar da fosfatase alcalina, com maior sensibilidade e especificidade para o fgado. Por isso mais utilizada em gatos do que em ces. Em ces pode ser induzida pelo tratamento com prednisolona, sem causar colestase. Em filhotes de co, a GGT pode atingir valores de at 25 vezes o valor normal para ces adultos. A GGT urinria provem da GGT renal e indicativa de dano renal. O nvel de GGT muito baixo em ces e gatos, comparado com os nveis nos ruminantes. Os nveis desta enzima podem estar aumentados tambm em neonatos aps o consumo de colostro, fato que pode servir de marcador da ingesto de colostro, principalmente em bezerros recm-nascidos, embora com menor eficincia que a imunoglobulina G. Os nveis de GGT comeam a diminuir no soro, e aos 21 dias estabilizam. Em bovinos, se relata elevao da atividade da GGT em vacas leiteiras com lipidose heptica e em animais infestados com Fasciola hepatica , nos quais os nveis de GGT esto aumentados cerca de 6 semanas aps a infeco.

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Glutamato desidrogenase (GLDH) A glutamato desidrogenase uma enzima mitocondrial, encontrada principalmente no fgado e no rim , e em menor extenso, no msculo cardaco e em outros tecidos. considerada uma enzima hepato-especfica. Em ruminantes, principalmente, esta enzima um importante indicador de necrose heptica ou obstruo do ducto biliar. Quanto maior a sua atividade plasmtica, maior o dano heptico. Durante processos inflamatrios, como hepatite ou cirrose, esta enzima, comparada com a ALT, tem um pequeno aumento na sua atividade plasmtica, devido a sua localizao mitocondrial. Podem ser observados grandes aumentos na sua atividade em doenas hepticas causadas por agentes hepatotxicos. Glutation peroxidase (GSH-Px) uma enzima intracelular presente nos eritrcitos, que contm 4 tomos de selnio por molcula. A GSH-Px representa mais de 75% do selnio sangneo. O fato de existir uma boa correlao entre a atividade enzimtica nos eritrcitos e a concentrao de selnio, faz com que a GSH-Px seja usada para avaliar a deficincia deste mineral. Como a enzima intracelular, normalmente ela avaliada como unidades por miligrama de hemoglobina (U/mg de Hb) ou unidades por decilitro de hemcias (U/dL de hemcias). A deficincia de selnio conhecida por estar relacionada a uma maior incidncia de mastite, degenerao testicular, imunossupresso, aborto, reteno de placenta, miopatia cardaca, doena dos msculos brancos entre outras. A GSH-Px pode ser usada para avaliar a melhor forma de suplementar o mineral e sua resposta frente a doenas e correlao com ganho de peso. Animais deficientes em selnio, quando submetidos a esforos fsicos intensos, tm uma maior leso tecidual e por conseqncia um nvel mais elevado de outras enzimas como a AST, CK e LDH. Lactato desidrogenase (LDH) A LDH catalisa a oxidao reversvel do lactato para piruvato com o cofator NAD+. Existem como mnimo 5 isoenzimas, estando compostas por tetrmeros, cujos protmeros so de 2 tipos (H e M) com pesos moleculares aproximados de 35 kD. A concentrao de LDH nos eritrcitos 150 vezes maior do que no plasma. Portanto, uma hemlise leve detectada por aumento nos nveis desta enzima no soro. A anlise eletrofortica das isoenzimas revela danos tissulares especficos. Existem cinco isoenzimas conhecidas de LDH, que no so comumente analisadas nos laboratrios veterinrios. Isoladamente a enzima no especfica para nenhum rgo. Leses musculares de etiologias variadas podem estar relacionadas ao aumento da LDH. Deficincia de vitamina E e selnio e a mioglobinria so causas de aumento de LDH. Em
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cavalos de salto, a LDH aumentou imediatamente aps o exerccio e se manteve elevada aps 24 horas, diferente da CK que teve um pico aps o exerccio, mas voltou aos valores basais aps um dia. Por se apresentar como um bom indicador de leso muscular, LDH se usa em conjunto com CK e AST para monitorar a intensidade de exerccio em cavalos. A LDH pode ser utilizada para avaliar cardiomiopatias diversas (isquemia, endocardite bacteriana, dirofilariose, trombose artica e infarto do miocrdio). Normalmente a LDH aumenta menos rapidamente que a CK, mas tambm mantm os valores elevados por mais tempo. Aps o infarto agudo do miocrdio, em humanos, a LDH atinge valores acima da referncia aps 16 horas, atingindo valores mximos em 40 horas e mantendo a atividade elevada por at 8 dias. Em medicina humana comum analisar a isoenzima LDH1, e comparar com os valores de outras isoenzimas para avaliar o infarto do miocrdio. LDH1, que normalmente no ultrapassa 40% da atividade total, aps o infarto pode atingir a proporo de 50 a 60% da atividade total. Alm disso, ela costuma estar em menor quantidade que a LDH2, situao que se inverte aps o infarto. A LDH tambm pode ser utilizada em casos de meningite bacteriana. Nestes casos, ocorre um incremento da isoenzima LDH5 e um pequeno aumento da LDH4.

Lipase (LIP) A lipase catalisa a hidrlise de triglicerdeos liberando 2 cidos graxos e um 2monoglicerdeo. A lipase pancretica a mais abundante de todas as lipases no plasma. Sua presena elevada no soro indicativo de pancreatite, especialmente em ces, mas seu uso tem sido substitudo pela amilase, devido aos custos de anlise. Os nveis de colipase (cofator da lipase pancretica) so importantes na anlise. Como a colipase excretada no rim e a lipase no, um dano renal pode produzir um aumento na atividade da lipase srica. Sorbitol desidrogenase (SDH) A SDH catalisa a oxidao reversvel de sorbitol para frutose, tendo como cofator o NAD . Seu peso molecular de 95 kD e aparece exclusivamente no citosol dos hepatcitos. Seu incremento no plasma revela dano heptico. especialmente instvel no soro eqino, onde sua atividade s dura 1-2 dias depois de ser obtida a amostra. mais usada em ruminantes e em cavalos do que em ces e gatos.
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Tripsina A tripsina sintetizada pelas clulas acinares do pncreas, sob a forma de uma pr-

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enzima inativada, denominada tripsinognio, a qual secretada no duodeno atravs do suco pancretico. No trato gastrointestinal, o tripsinognio convertido pela enteroquinase em tripsina, enzima que participa da protelise de protenas e peptdeos produzindo aminocidos. No plasma, fatores antitripsina esto presentes para proteger as protenas plasmticas da hidrlise pela tripsina e sua entrada na circulao vascular. Ela pode estar na forma de tripsina, tripsinognio ou do complexo antitripsina. Um tipo de imunoensaio especfico capaz de detectar as trs formas de tripsina, e chamado de TLI (trypsin-like immunoreactivity ou imunorreatividade semelhante tripsina). A tcnica mais utilizada em ces, dosando no plasma com jejum de doze horas. Uma concentrao plasmtica baixa de TLI (< 2,3 g/l), est relacionada com insuficincia pancretica excrina. Nveis elevados de TLI (> 100 g/l) so observados em casos de pancreatite aguda.

Outras enzimas Algumas outras enzimas podem ser utilizadas na medicina veterinria. No entanto, devido aos custos elevados, dificuldade de realizar os testes ou baixa especificidade que oferecem, acabam substitudas por outras enzimas. o caso da aldolase, enzima que tem uma boa especificidade por leses no fgado e nos msculos esqueltico e cardaco. A sua atividade srica pode estar aumentada em hepatites virais, tumores hepticos, infarto do miocrdio e leses dos msculos esquelticos. A dificuldade de realizar o ensaio de determinao da atividade da aldolase, faz com que seja substituda por outros testes mais fceis e rpidos, como a AST, ALT, CK e LDH. A piruvato quinase (PK) pode ser utilizada para avaliar leses musculares. A enzima pode auxiliar na identificao de sunos homozigotos para hipertermia maligna. A transcetolase uma enzima intra-eritrocitria que pode estar aumentada em casos de necrose cerebrocortical ou na acidose ltica nos bovinos.

INDICADORES DA FUNO HEPTICA Na avaliao da funo heptica devem ser considerados dois tipos de indicadores sangneos que podem estar alterados: as enzimas hepticas, que podem estar aumentadas por processos de inflamao ou injria e os metablitos sintetizados nesse rgo, que podem estar diminudos. Uma exceo a este caso o aumento que pode ocorrer na amnia por conta de sua falta de metabolizao em uria. Na Tabela 3 constam os principais indicadores sangneos da funo heptica.

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Tabela 3. Indicadores sangneos do funcionamento heptico. Metablito Alanina aminotransferase (ALT) Comentrio Enzima especfica para diagnstico de insuficincia heptica em pequenos animais.

O aumento desta enzima no plasma indica insuficincia heptica aguda em diversas Aspartato aminotransferase espcies; no muito especfica, pois pode indicar tambm problemas musculares, (AST) entre outros; mais usada em grandes animais. Enzima pouco especfica; sua atividade est aumentada principalmente em casos de Fosfatase alcalina (FA) obstruo biliar. Gama-glutamil transferase Seu aumento no plasma indicativo de insuficincia heptica crnica (tumor, (GGT) colestase). Sorbitol desidrogenase Enzima especfica para o diagnstico de insuficincia heptica em eqinos e (SDH) ruminantes. Seus nveis esto aumentados no plasma quando ocorre reduo da funo hepatoBilirrubina total celular ou obstruo do trato biliar. Seus nveis esto aumentados no sangue devido incapacidade do fgado de Amnia transform-la em uria, no caso de insuficincia heptica grave e desvios porto sistmicos. Em caso de insuficincia heptica, seus nveis esto diminudos devido Uria incapacidade de sntese a partir de amnia. O fgado lesado no consegue sintetizar a albumina necessria para manter o Albumina equilbrio osmtico do plasma ocorrendo hipoalbuminemia que pode levar a edema ou ascite. Com leso do fgado haver diminuio da glicemia devido reduo das reservas Glicose de glicognio e a incapacidade do fgado de efetuar a gliconeognese adequadamente. Freqentemente se encontra aumentado em doenas hepticas, sendo um achado acidental no especfico. Entretanto, comum observar diminuio do colesterol Colesterol sangneo em insuficincia heptica, devido incapacidade de sntese por parte do fgado. Em leso do fgado pode ocorrer aumento de seus nveis em decorrncia da reduo cidos biliares da extrao de cidos biliares do sangue pelas clulas hepticas. Tambm pode haver aumento em casos de obstruo biliar.

ANLISES PARA MONITORAR A FUNO RENAL Na avaliao da funo renal necessrio considerar que a funo do rim compreende processos de excreo e de reabsoro. Dessa forma, recomendvel revisar a fisiologia deste rgo. Os principais indicadores sangneos da funo renal constam na Tabela 4.

Uria e creatinina plasmticas A uria sintetizada no fgado a partir da amnia derivada do catabolismo protico. excretada por via renal, sendo filtrada no glomrulo e parcialmente reabsorvida de forma passiva nos tbulos. A reabsoro de uria no tbulo est relacionada de forma inversa com o fluxo de urina. Assim, em condies de alto fluxo, cerca de 40% da uria da urina se reabsorve,

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enquanto que em casos de pouco fluxo de urina (desidratao e outros problemas pr-renais ou ps-renais) pode reabsorver at 70% de uria. Em ruminantes e eqideos, a uria pode ser excretada por via gastrointestinal, de forma que nestas espcies, valores normais ou no muito elevados de uria podem ser achados em casos de insuficincia renal. Nos ruminantes cobra especial importncia no metabolismo nitrogenado, a reciclagem de uria que pode acontece por via salival, para servir de fonte de nitrognio s bactrias ruminais.

Tabela 4. Indicadores sangneos do funcionamento renal. Metablito Albumina Uria Creatinina Relao Albumina/Globulinas Clcio Potssio Fsforo Comentrio a principal frao protica que se perde nos rins em casos de glomerulonefrites e doenas glomerulares primrias, levando a hipoalbuminemia. Este metablito excretado quase que totalmente pelo rim; altos nveis no plasma podem estar relacionados com filtrao renal insuficiente. Metablito mais especfico de diagnstico de funo renal alterada. excretado pelos rins e, por isso, altos nveis plasmticos indicam deficiente funo renal. Em doenas glomerulares ocorre diminuio da relao A/G por perda de albumina nos rins. No hiperparatireoidismo secundrio de origem renal pode ocorrer hipocalcemia. Altos nveis no plasma so encontrados em problemas da funo glomerular; nveis baixos no plasma esto associados com problemas nos tbulos renais ou na nefrite intersticial crnica. Seus nveis sricos esto aumentados quando h insuficiente filtrao renal, o que pode levar a um hiperparatireoidismo secundrio de origem renal. Seu aumento est relacionado com amiloidose renal.

Fibrinognio Fosfatase alcalina (FA) A isoforma renal da FA no est presente no plasma; quando h dano renal, a FA e gama glutamil aparece na urina junto com a GGT. transferase (GGT)

A uria sangnea pode ser expressada como uria propriamente ou como

BUN

(nitrognio urico sangneo). Para converter BUN a uria, em mg/dL, o fator de multiplicao 2,14. A creatinina se forma endogenamente a partir da converso da creatina, composto que armazena energia no msculo (fosfocreatina). A sntese de creatinina ocorre de forma constante, influenciada sobretudo pela massa muscular. Treinamentos prolongados, doenas musculares ou emagrecimento pronunciado podem afetar os valores de creatinina. Diferentemente da uria, o teor de creatinina no afetado pelo aumento do catabolismo das protenas tisulares ou pela dieta. A creatinina filtrada pelo glomrulo e no se reabsorve no tbulo, pelo qual se considera como melhor marcador da filtrao glomerular que a uria. Aumentos por causas pr-renais O aumento de compostos nitrogenados (uria e creatinina) no sangue chamado de azotemia, e pode ser pr-renal, renal e ps-renal. Azotemia pr-renal pode ser ocasionada pelas causas seguintes: (a) Aumento do catabolismo protico devido a:

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hemorragia gastrintestinal que provoca absoro de protenas do sangue; dieta alta em protenas: causam aumentos pouco significativos de uria em animais sadios, mas podem provocar grande aumento em animais com doena renal oculta;

infeco e febre; exerccio prolongado; uso de glicocorticides; hipertireoidismo da

(b) Diminuio da perfuso renal: h filtrao glomerular reduzida, porm aumento reabsoro de uria. As principais causas so: -

hipovolemia por desidratao: vmito, diarria, processos que cursam com poliria como diabetes mellitus ou hipoadrenocorticismo;

doena cardiovascular. Em geral, nas causas de azotemia pr-renal, aumenta menos a creatinina e mais a uria.

Aumentos por causas renais e ps-renais So produzidas em casos de insuficincia renal aguda ou crnica, quando cerca de 75% da taxa de filtrao glomerular est comprometida. Pode ser associada com queda da densidade da urina, embora em gatos pode encontrar-se densidade normal. A razo para que no haja azotemia com alteraes iniciais dos nfrons, porque em qualquer dano renal com perda de nfrons funcionais, ocorre hipertrofia compensatria e aumento da funo do resto de nfrons no afetados. Quando se atinge 75% dos nfrons afetados, pequenos danos adicionais e queda da filtrao glomerular causam aumentos exponenciais de uria e creatinina. Portanto, a principal limitao da dosagem de uria e creatinina que no pode detectar danos renais leves, sendo que apenas detectam falha renal demasiado tarde. Azotemia renal pode ser causada por nefrite, amiloidose, necrose tubular, neoplasias e, enfim, qualquer causa que afete a funo do rim. Azotemia ps-renal pode ser por causas obstrutivas que impedem o fluxo normal da urina e que se associam a sinais clnicos de oligria e anria. Os aumentos causados por fatores renais e ps-renais podem ser diferenciados das causas pr-renais (Tabela 5). Em causas renais, os aumentos de uria e creatinina so maiores, enquanto que a densidade especfica baixa. Alguns autores indicam as seguintes densidades na urina para suspeitar de insuficincia renal: <1,025 em bovinos e eqinos <1,030 no co <1,035 no gato A creatinina, comparada com a uria, no se afeta pela dieta nem o catabolismo protico e
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aumenta pouco em casos de desidratao ou falha cardaca, a no ser em casos severos. Entretanto, aumenta de forma mais significativa e rpida em casos de insuficincia renal e responde antes que a uria ao tratamento. Portanto, a creatinina melhor indicador da funo renal e do prognstico em casos de insuficincia renal que a uria.
Tabela 5. Diferenas analticas entre as principais causas de azotemia pr-renal e renal. Causa da azotemia Catabolismo protico Falta de irrigao ao rim Insuficincia renal Uria Levemente elevada (<100 mg/dL) Pode chegar a >100 mg/dL Muito elevada (>180-200 mg/dL) Creatinina No aumenta S aumenta em casos graves (indicara incio de IR) Aumenta sempre de forma significativa Densidade Normal Aumentada (desidratao) Diminuda (isostenria)

Queda de uria e creatinina Diminuio de uria ocorre em casos de insuficincia heptica, quando diminui sua sntese. Tambm est associada a dietas baixas em protena. Diminuio de creatinina pode ser vista em casos de caquexia com perda da massa muscular. Estimao da taxa de filtrao glomerular (TFG) com provas de clearance ou depurao renal Estas provas esto baseadas na administrao intravenosa de compostos que apenas se excretam pelo rim e que no se reabsorvem pelos tbulos nem se metabolizam em nenhum tecido. Entre outros compostos, se utiliza creatinina e inulina (polmero de fructose). Em caso de insuficincia renal, esses compostos tm maior persistncia no sangue ao realizar uma cintica de excreo. Atualmente, devido ao tempo e esforo que requerem, no aportam vantagens suficientes do ponto de vista diagnstico, de forma que apenas so usados em pesquisa. Outros indicadores alterados na insuficincia renal. Clcio e fsforo Em pequenos animais, a insuficincia renal produz uma queda na excreo de fsforo pelo rim e, portanto, uma hiperfosfatemia. Persistindo o processo, o fsforo causa diminuio do clcio circulante devido formao de complexos de ambos minerais que se depositam nos tecidos e diminuio da relao Ca/P, o que leva a hiperparatireoidismo secundrio. Este evento uma tentativa para aumentar os nveis de clcio a partir de sua mobilizao em nvel sseo e aumentar a excreo de fsforo em nvel renal. Como o rim no est funcional, o fsforo no se excreta e o processo se agrava cada vez mais. Assim, um sinal de insuficincia renal crnica em pequenos animais aumento de fsforo com clcio normal ou diminudo. alm de fragilidade ssea.
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Em bovinos, pode apresentar-se baixa concentrao de clcio nesses casos, porm sem hiperfosfatemia, uma vez que o rim no o rgo principal de excreo de fsforo. Em cavalos, pode haver hipercalcemia, sobretudo em animais alimentados com dietas ricas em clcio, porque o rim o rgo fundamental na excreo de clcio nesta espcie, estando o fsforo normal ou baixo. Potssio O rim, de forma normal, excreta cidos (H+) e reabsorve bicarbonato (HCO3-). Em caso de insuficincia renal, o rim no capaz de cumprir esta funo e, portanto, h um acmulo de cidos no sangue provocando acidose metablica. O potssio sofre troca com o hidrognio em nvel celular na tentativa de compensar a acidose, de forma que aparecem nveis elevados de potssio no sangue (hipercalemia) na insuficincia renal. A dosagem srica de K nesses casos indicadora da severidade da acidose. Entretanto, os bovinos podem apresentar um equilbrio cido-bsico normal ou inclusive uma alcalose metablica devido atonia ruminal secundria que se produz e que causa seqestro de cidos. Anemia Na insuficincia renal crnica caracterstico o aparecimento de anemia no regenerativa com ausncia de reticulcitos, no muito severa, que se desenvolve pela falta de sntese de eritropoietina renal. Tanto a anemia como o hiperparatireoidismo secundrio renal so considerados melhores indicadores para diferenciar insuficincia renal crnica de aguda que os sintomas clnicos de oligria (na insuficincia renal aguda) e poliria (na insuficincia renal crnica), uma vez que podem ser observados com freqncia casos de poliria na insuficincia renal aguda. INDICADORES DA FUNO PANCRETICA EXCRINA A funo principal do pncreas excrino produzir e secretar enzimas digestivas que degradam protenas, lipdeos e polissacardeos, facilitando a absoro de nutrientes, vitaminas e minerais. As enzimas, com exceo da lipase e da amilase, so armazenadas e secretadas na forma inativa (zimognios), evitando assim a autodigesto do pncreas. A ativao dos zimognios ocorre depois que eles so secretados no intestino delgado, onde a enteropeptidase, enzima sintetizada pela mucosa duodenal, ativa o tripsinognio, que transformado em tripsina ativar os outros zimognios. O pncreas secreta tambm bicarbonato, que contribui para a neutralizao do cido gstrico no duodeno. Na Tabela 6 constam os principais indicadores da funo pancretica excrina. Distrbios pancreticos excrinos podem ser causados por inflamao da glndula
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(pancreatite aguda ou crnica) ou por produo e secreo reduzidas de enzimas digestivas (insuficincia pancretica excrina). Pancreatite O processo inflamatrio do pncreas resulta na perda de enzimas no interstcio pancretico e cavidade abdominal. As enzimas atingem a corrente sangunea, o que evidenciado pelo seu aumento no soro. Em herbvoros a pancreatite no descrita. A etiologia pode ser de origem desconhecida (idioptica), ou causada por traumatismo, obesidade, dieta rica em gordura, infeco, lipidose heptica, frmacos e isquemia.

Lipase e amilase A lipase e a amilase so as duas enzimas que so mensuradas com maior freqncia como marcadores da pancreatite aguda. A amilase em geral est muito elevada no incio do processo patolgico, e a lipase aumenta mais vagarosamente, mas permanece elevada por mais tempo. O enfoque laboratorial da pancreatite se aplica ao co. Em gatos, o exame controverso, podendo apresentar lipase normal ou aumentada, e amilase normal. A maioria dos autores afirma que em gatos, nenhuma das enzimas plasmticas utilizadas confivel para avaliar a presena de pancreatite, indicando-se para esta espcie outros exames diagnsticos, como o ultra-som. Outras causas do aumento da lipase e da amilase incluem insuficincia renal, doena gastrintestinal, doena heptica e neoplasia. No entanto, as elevaes no-pancreticas geralmente no excedem 2 a 3 vezes o limite superior do valor de referncia normal. Corticosterides causam aumento considervel da lipase (de at 5 vezes), mas no da amilase.

Tripsina imunorreativa (imunorreatividade tripsinide, imunorreatividade semelhante tripsina) O teste de tripsina imunorreativa mede a tripsina e o tripsinognio plasmticos. Como o tripsinognio s sintetizado pelo pncreas e convertido a tripsina no intestino delgado, os nveis de tripsina imunorreativa bastante elevados so indicativos de pancreatite. Este teste ainda no utilizado rotineiramente no Brasil, pois espcie-especfico necessitando de kits para as espcies animais. Animais com insuficincia pancretica excrina apresentam nveis reduzidos, devido a pouca ou nenhuma produo de tripsinognio e tripsina.

Outros indicadores alterados na pancreatite Outras anormalidades laboratoriais que podem estar associadas pancreatite incluem leucocitose e neutrofilia, hiperlipidemia, hiperglicemia, aumento das enzimas hepticas e hiberbilirrubinemia (mais comum em gatos, por leso heptica secundria).

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Indicadores na insuficincia pancretica excrina A insuficincia pancretica excrina ocorre devido perda de mais de 85% da capacidade acinar do pncreas de secretar enzimas digestivas, levando a uma falha na absoro adequada de nutrientes. caracterizada por funo digestiva inadequada, isto , por m digesto. Assim como na pancreatite, o enfoque laboratorial da insuficincia pancretica excrina se aplica quase que exclusivamente ao co, sendo extremamente rara em gatos. A insuficincia pancretica excrina no tem sido relatada em herbvoros. As causas da insuficincia pancretica podem ser idiopticas ou hereditrias, sendo esta ltima mais comum no caso da raa Pastor Alemo. Teste de desafio com triglicerdeos Nesta prova, os triglicerdeos so mensurados no plasma antes e aps a administrao de leo de milho. No animal saudvel ocorrer um aumento de duas a trs vezes o valor basal, e no animal com insuficincia pancretica excrina o valor ser igual ao basal, devido falta de absoro intestinal. Outros indicadores alterados na insuficincia pancretica excrina Geralmente esto dentro dos valores normais o hemograma, a urinlise e os exames bioqumicos. Pode ocorrer hipoalbuminemia nos casos graves e de longa durao, tempo de protrombina prolongado devido a deficincia de vitamina K (por baixa absoro) e hipocalcemia caso a albumina estiver diminuda. A microscopia fecal pode auxiliar no diagnstico, sendo observada gordura excessiva nas fezes (esteatorria) e amido no digerido nas fezes (amilorria), porm estes testes no so exclusivos da insuficincia pancretica excrina, apresentando sensibilidade e especificidade baixas. Dosagens de amilase e lipase sricas no so teis em casos de insuficincia pancreatica.

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Tabela 6. Indicadores do funcionamento pancretico. Metablito Amilase Comentrio Nveis extremamente elevados so encontrados no estgio inicial de uma pancreatite aguda; nveis baixos esto relacionados com insuficincia pancretica excrina. considerada a melhor enzima para o diagnstico de pancreatite por ser menos afetada por outros fatores que a amilase e por se manter elevada por longo perodo. Seus nveis aumentam na disfuno do pncreas. Existem limitaes tcnicas para sua determinao em veterinria A hipocalcemia freqente achado na pancreatite aguda devido ao aumento de cidos graxos, por ao da lipase, que se combinam com o Ca tornando-o insolvel no plasma. Seus nveis esto aumentados na disfuno pancretica devido elevao das lipoprotenas de alta e baixa densidade no plasma. Podem diminuir no plasma na insuficincia pancretica devido pouca liberao de lipase pelo pncreas. Pode estar com nveis aumentados na pancreatite por aumento da secreo de glucagon. Nveis diminudos no plasma em casos avanados de insuficincia pancretica por falhas na absoro de aminocidos.

Lipase Tripsina imunoreativa Clcio Colesterol Triglicerdeos Glicose Albumina

INDICADORES DE AVALIAO DO EXERCCIO E DE DANO MUSCULAR No exerccio, o organismo sofre uma srie de respostas metablicas: (1) aumento da capacidade de oxigenao do sangue mediante aumento da freqncia respiratria e contrao esplnica que leva a aumentar o nmero de eritrcitos no sangue (aumento de hematcrito e de hemoglobina); (2) aumento da produo de cido lctico quando o metabolismo passa de aerbico a anaerbico; o cido lctico, por sua vez, pode afetar a permeabilidade das membranas celulares, especialmente das clulas musculares e algumas enzimas podem vazar para o sangue, principalmente creatina quinase; (3) desidratao, devido perda de gua no suor e na respirao; (4) mudanas no equilbrio cido-bsico, processo no qual intervm dois fatores: (a) hiperventilao que causa uma queda da concentrao de CO2 e tendncia a alcalose; (b) aumento de cido lctico com tendncia a acidose. As mudanas no equilbrio vo depender da durao e intensidade do exerccio e da adaptao do animal. Um animal melhor treinado tem menor aumento de cido lctico e maior capacidade de oxigenao. O uso do perfil metablico para avaliar a adaptao ao exerccio deve incluir a estandardizao de valores referenciais para a raa, o sexo e a idade dos animais. Os melhores indicadores de adaptao ao exerccio so o cido lctico e as enzimas CK, AST e LDH (Tabela 7). Em geral, animais mais bem adaptados tem menores aumentos de cido lctico e de enzimas e retorno mais rpido aos valores basais aps corridas ou exerccios fortes. Em exerccios de longa durao acentua-se o risco de desidratao, a qual mais bem

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indicada pela concentrao de protenas totais do que pelo hematcrito, o qual pode aumentar pela contrao esplnica, alm da desidratao. Tambm em corridas longas pode ocorrer aumento do potssio por dano nas clulas musculares, diminuio do cloro por perda no suor, aumento de cidos graxos livres e diminuio da glicose por gasto energtico e aumento do fsforo por defosforilao de compostos energticos. Alm disso, como o exerccio aumenta a peroxidao das membranas celulares, a demanda de vitamina E/selnio aumenta, tornando-se metablitos que podem limitar o performance do exerccio. O transporte prolongado causa as mesmas mudanas metablicas que o exerccio exagerado. INDICADORES DE TRANSTORNOS SSEOS Fosfatase alcalina A isoenzima ssea da fosfatase alcalina est presente em altas concentraes nos osteoblastos. Infelizmente, no esto disponveis testes na rotina que diferenciem as isoenzimas (ssea, intestinal, heptica, induzida por esterides), devendo a fosfatase alcalina ser interpretada em conjunto com outros testes e quadro clnico. O aumento da atividade osteoblstica, ou seja, deposio de tecido sseo novo produzir um aumento dos nveis plasmticos da fosfatase alcalina, sendo normal em animais jovens (em crescimento). A elevao desta enzima ocorre tambm nas fraturas em processo de consolidao, doenas como osteossarcoma e ostete, e em casos de reabsoro ssea ativa, como por exemplo raquitismo, osteomalcia e hiperparatireoidismo.

Tabela 7. Indicadores de avaliao do exerccio e do tecido muscular. Metablito Creatina quinase (CK) Comentrio a enzima mais especfica para diagnstico de dano muscular. Nveis extremamente altos no plasma so observados logo aps uma leso muscular.

Aspartato aminotransferase Aumenta concomitantemente com a CPK quando ocorrem danos musculares. (AST) Lactato desidrogenase Enzima menos especfica que fica com nveis elevados vrios dias aps a leso (LDH) muscular. Dano muscular pode resultar em mioglobinemia. Quando a concentrao no plasma Mioglobina excede a 20 mg/dl, a mioglobina comea a aparecer na urina (mioglobinria). Pode estar aumentada em transtornos que aumentem o catabolismo muscular Creatinina devido liberao de creatina, composto precursor de creatinina. Piruvato quinase (PK) Enzima que pode estar moderadamente aumentada quando ocorre dano muscular. Hipocalcemia pode estar associada com tetania em cadelas, no perodo de gestao Clcio ou lactao ou com paralisia muscular aps o parto em vacas leiteiras. Fsforo Em perodos prolongados de paralisia muscular, pode ocorrer hipofosfatemia. Hipomagnesemia est associada a tetanias hipocalcmicas em cadelas, Magnsio principalmente. A deficincia crnica de Se est associada a distrofia muscular. O diagnstico pode Selnio (GSH-Px) ser feito mediante dosagem da enzima glutation peroxidase nos eritrcitos. Pode ocorrer hipercalemia na degenerao ou necrose muscular por liberao do K Potssio intracelular. Hipocalemia ocorre associada a perodos prolongados de paralisia muscular. 186

Clcio Os nveis de clcio so regulados primariamente por trs hormnios: paratormnio (PTH), calcitonina e vitamina D3. O PTH, secretado pelas paratireides, mobiliza o clcio das reservas esquelticas para o fluido extracelular, ou seja, eleva a concentrao srica do clcio e reduz a do fsforo (por inibio da reabsoro renal). Portanto, a secreo do paratormnio estimulada por hipocalcemia. O PTH estimula a desmineralizao ssea para aumentar os nveis de clcio circulante. O 1,25 di-hidroxicolecalciferol (calcitriol), metablito ativo da vitamina D, tem como funo aumentar a absoro de clcio e fsforo pela mucosa intestinal e facilitar a ao do PTH nos ossos (efeito permissivo), mantendo desta forma nveis suficientes destes eletrlitos no fluido extracelular para permitir mineralizao adequada da matriz ssea. A calcitonina, secretada pelas clulas C da tireide, possui ao oposta ao PTH. Inibe a liberao de clcio e fsforo dos ossos, ou seja, reduz a concentrao srica do clcio e do fsforo. A calcitonina aumenta a excreo renal de fsforo e inibe a ao do PTH.

Fsforo O metabolismo do fsforo regulado atravs da interao com o clcio e pela ao do PTH, calcitonina e calcitriol. O aumento do fsforo plasmtico pode resultar em uma diminuio recproca de clcio no plasma. O PTH promove aumento da excreo urinaria de fsforo assim como inibe sua absoro no tbulo renal proximal, o que auxilia na manuteno da proporo do clcio para o fsforo no plasma. Animais em crescimento tem um valor de fsforo plasmtico maior que os adultos. Como a excreo de fsforo depende de filtrao glomerular e reabsoro tubular, a reduo do fluxo sanguneo renal e da taxa de filtrao glomerular geralmente resultam em hiperfosfatemia. A hiperfosfatemia induz a hipocalcemia e hipocalcitriolemia, que por sua vez estimula a liberao de PTH. A hiperfosfatemia tambm pode ser por aumento da ingesto do fsforo na dieta. Na Tabela 8 constam os principais indicadores de leses e transtornos sseos.

Principais distrbios relacionados com o clcio O hiperparatireoidismo primrio ocorre por secreo excessiva de PTH pela paratireide. raro em ces e gatos. Causa hipercalcemia, hipofosfatemia, e diminuio da densidade urinria. Se ocorrer insuficincia renal concomitante, pode haver aumento dos nveis de fsforo. No hiperparatireoidismo nutricional secundrio (osteodistrofia fibrosa) tambm ocorre reabsoro ssea excessiva, estimulada pelo PTH, na tentativa de corrigir o desequilbrio causado por uma dieta rica em fosfato e pobre em clcio e/ou vitamina D. Este quadro pode

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resultar na chamada mandbula de borracha. O clcio srico geralmente est dentro dos parmetros de referncia normais por causa das alteraes compensatrias. Fosfatase alcalina e fosfato inorgnico podem estar aumentados (animais em crescimento j apresentam valores maiores que adultos normalmente). No hiperparatireoidismo secundrio renal (osteodistrofia renal): ocorre reabsoro ssea excessiva e mineralizao osteide prejudicada. O hiperparatireoidismo resulta da excreo renal comprometida de fosfato e conseqente hiperfosfatemia e reduo da concentrao sangnea de clcio, que aumenta a atividade da paratireide e induz reabsoro ssea. Embora isso tenda a normalizar as concentraes sangneas de clcio, o estado hiperparatireideo mantido pela hiperfosfatemia persistente. O hipoparatireoidismo leva a uma hipocalcemia devido a deficincia de PTH, e geralmente iatrognico, causado pela retirada cirrgica das paratireides. Secundariamente ocorre hiperfosfatemia. O principal diagnstico diferencial desta combinao de desequilbrio eletroltico a insuficincia renal, porm pacientes com insuficincia renal esto azotmicos. Raquitismo (filhotes) / osteomalcia (adultos): ocorre principalmente quando h deficincia de vitamina D, mas tambm quando h insuficincia de clcio e/ou fsforo para a mineralizao do osteide recm formado. As causas mais provveis em ces e gatos so hipovitaminose D por deficincia diettica, erro inato no metabolismo, ou baixa quantidade de minerais na dieta. Ces e gatos no sintetizam colecalciferol (pr-vitamina D3) na pele exposta luz ultravioleta e dependem principalmente do consumo alimentar para obter a vitamina. Em ruminantes ocorre por deficincia de fosfato na dieta, ou por falta de exposio ao sol. As anormalidades nos testes sanguneos incluem baixos nveis de clcio e fosfato inorgnico, aumento de fosfatase alcalina e PTH e baixo 25-hidroxicolecalciferol. A osteoporose ocorre com maior freqncia em vacas de alta produo leiteira, devido ao baixo consumo de clcio e gasto excessivo no leite, levando a desmineralizao ssea. Tumores sseos primrios podem resultar em hipercalcemia devido a destruio ssea pelas clulas neoplsicas, secreo do fator ativador de osteoclastos ou efeitos de prostaglandinas. O pseudohiperparatireoidismo causado por neoplasias malignas, no localizadas na paratireide, capazes de produzir substncias que causam ostelise e liberao macia de clcio dos ossos para o plasma. As neoplasias mais comumente envolvidas so o linfossarcoma e o adenocarcinoma de glndula perianal.

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Tabela 8. Indicadores de leses e transtornos sseos. Metablito Fosfatase (FA) Clcio Fsforo Relao Ca/P alcalina Comentrio O aumento da atividade osteoblstica causa elevaes na atividade plasmtica desta enzima em ces e gatos. Doenas como hiperparatireoidismo e osteossarcoma, bem como processos de cicatrizao ssea e de crescimento, envolvem maior atividade osteoblstica. Hipercalcemia comum em casos de osteoporose, tumores sseos osteolticos, hiperparatireodismo primrio e pseudohiperparatireodismo. Est diminudo em casos hiperparatireodismo primrio e pseudohiperparatireoidismo e aumentado em casos de tumores sseos osteolticos, hipotireodismo e hiperparatireoidismo secundrio. Sempre que a relao estiver alterada (normal 2:1) indcio de uma predisposio a patologias sseas.

Indicadores bioqumicos do status nutricional Embora de difcil aplicao, os perfis metablicos podem ser usados para monitorar o estado nutricional em grupos de animais, principalmente em ruminantes (Tabela 9). Baixos valores sangneos de protenas e especialmente de uria revelam deficincia protica na dieta, que pode causar diminuio do consumo e da produo de leite. Alto nvel de uria pode indicar excesso de consumo de protenas ou deficincia de substratos energticos e ocasionar baixa fertilidade. Baixos valores plasmticos de albumina, uria e hemoglobina revelam a necessidade de adicionar protena na dieta. Valores de sdio plasmtico diminudos indicam baixos valores de sal na rao. Baixos valores de glicose e altos de corpos cetnicos no sangue indicam deficincia de energia na dieta. Uma reviso das aplicaes do perfil metablico na condio nutricional so encontradas em Gonzlez et al. (2000a).

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Tabela 9. Metablitos sangneos indicadores do status nutricional. Metablito Uria Protena total Albumina Triglicerdeos Comentrio Dieta com altos teores de protena causam aumento da uria plasmtica devido ao aumento do catabolismo protico. Deficincia energtica na dieta tambm aumenta o catabolismo protico e aumenta o nvel de uria no plasma. Dieta com baixos teores de protena pode causar diminuio dos nveis de uria. Deficincia protica na alimentao tende a causar hipoproteinemia. Dietas com baixo teor de protenas podem causar hipoalbuminemia devido diminuio da sntese protica no fgado. A produo de quilomcrons logo aps uma refeio rica em gordura pode resultar em aumento temporrio dos triglicerdeos plasmticos. Jejum em animais obesos pode causar aumento dos triglicerdeos plasmticos devido mobilizao das reservas de gordura. Seus nveis aumentam aps uma refeio rica em gordura (hiperlipidemia ps-prandial). Dietas com alto teor de gordura resultam em hipercolesterolemia. Jejum tambm pode causar aumento de colesterol no plasma devido mobilizao de gorduras de reserva. Dietas com baixo teor de gordura causam diminuio do colesterol plasmtico. A glicemia aumenta logo aps as refeies. A hipoglicemia s problema nos animais recm-nascidos (principalmente em sunos) pois os adultos conseguem manter o nvel de glicose constante mesmo durante perodos longos de inanio. Seus nveis podem aumentar em ruminantes como consequncia de severa deficincia energtica, devido mobilizao de triglicerdeos de reserva e converso dos cidos graxos em corpos cetnicos. Em situaes crticas, como incio de lactao e altos nveis de produo, pode ocorrer cetoacidose. Altos teores de protena na dieta podem causar aumento do sdio plasmtico devido diurese induzida pelos altos nveis de uria. Animais cardacos aos quais se prescreve uma dieta com baixos teores de sdio, podem apresentar hipercalemia devido a um desequilbrio na troca inica nos tbulos renais. Animais com anorexia que so mantidos com fluidoterapia sem suplementao de potssio, apresentam hipocalemia pois a excreo de potssio continua normalmente. O aumento relativo de albumina (desidratao), principal protena transportadora de clcio no plasma ou a suplementao com excesso de clcio provocam hipercalcemia. A hipoalbuminemia ou uma dieta deficiente de clcio so responsveis por baixos nveis de clcio plasmtico. Hipocalcemia pode ocorrer em desbalanos Ca/P na alimentao, principalmente en animais jovens. Dietas compostas exclusivamente a base de carne e vsceras podem causar hiperfosfatemia devido a desbalano na relao Ca/P.

Colesterol

Glicose

Betahidroxibutirato Sdio

Potssio

Clcio

Fsforo

Perfil bioqumico no crescimento O crescimento um processo multifatorial que envolve muitas possveis limitaes. A multiplicao das clulas demanda de muitos metablitos e a limitao de um deles pode diminuir ou ainda deter o processo integral de crescimento. Mediante o uso do perfil metablico podem ser detectadas anormalidades metablicas limitantes, embora no exista um indicador especfico que detecte uma possvel superioridade de um animal para o crescimento. O uso do perfil metablico para avaliar o crescimento exige levar em considerao o manejo e o tipo de alimentao. Os animais possuem uma marcada individualidade para o crescimento e essa diferena pode ser devida simplesmente ao apetite. Se o animal come mais, tem melhor crescimento. Assim, a avaliao da habilidade para crescer pode ser medida pelo consumo de alimento. Entretanto, alguns indicadores qumicos podem estar relacionados com o crescimento. Os tecidos em crescimento demandam de protena e energia adicionais. A deficincia
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desses nutrientes causar falhas no crescimento. Encontram-se correlaes positivas entre a concentrao de glicose sangunea e a taxa de crescimento. Aqueles animais que conseguem manter nveis de glicose normais, apesar de limitaes de energia na dieta seriam superiores fisiologicamente queles com menor glicemia nas mesmas condies. A deficincia de sdio e eventualmente a hiponatremia podem causar falhas digestivas e indiretamente diminuio do apetite. O cobalto, ligado produo de eritrcitos e o ferro, ligado produo de hemoglobina, podem afetar indiretamente o crescimento quando ocorrem deficincias desses minerais, especialmente em bezerros e leites, pois a anemia est vinculada a baixo crescimento. O zinco um elemento cuja deficincia mostra tipicamente falhas no crescimento. J o cobre parece no afetar a taxa de crescimento. Por enquanto no existem indicadores qumicos do sangue que possam ser utilizados para selecionar animais geneticamente superiores em termos de crescimento, embora exista alta herdabilidade das concentraes de alguns metablitos, especialmente hemoglobina, glicose e potssio, todos eles relacionados com a taxa de crescimento. Os fatores que intervm no crescimento so to mltiplos que o resultado supera a herdabilidade de uns poucos metablitos. Perfil bioqumico na avaliao da fertilidade O problema da infertilidade multifatorial, muitas vezes em relao com o manejo e a alimentao. Entretanto, o perfil metablico como ferramenta para detectar anormalidades na qumica sangunea pode relacionar problemas metablicos com infertilidade. Os principais problemas que causam baixa fertilidade nos rebanhos so falhas na deteco de estros e na inseminao no momento certo. O perfil metablico tem pouco a oferecer com relao a esses problemas. Entretanto, mediante a anlise de progesterona no leite possvel saber se o tempo de inseminao foi correto e pode diagnosticar de forma precoce a gestao. Amostras no dia da inseminao e 21-23 dias aps revelam se a inseminao foi feita no dia apropriado, quando haver baixos nveis de progesterona ou se o animal est gestante aos 21-23 dias, quando h altos nveis de progesterona. Vrios metablitos tem sido estudados em relao com a fertilidade. Entre os mais estudados esto a glicose e a albumina. Com relao a glicose os resultados so inconsistentes. As vezes se relaciona a hipoglicemia com infertilidade, s vezes no se encontra relao. Baixos nveis de glicose sangneo tem sido indicados como causa de fertilidade reduzida, especialmente em vacas no ps-parto. A hipoglicemia tambm tem sido responsabilizada por causar anestro, falhas na ovulao e diminuio da taxa de gestao. Sugere-se que exista um nvel de glicose abaixo do qual a fertilidade inibida. De qualquer forma, como nos ruminantes a sntese de glicose depende de um adequado funcionamento heptico, o mais racional deve ser avaliar o fgado mediante os principais indicadores de sua funo, conjuntamente com a glicose. No caso da albumina sabe-se que fisiologicamente seu nvel no sangue pode diminuir
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aps o parto, devendo recuperar-se gradativamente durante o ps-parto. A capacidade dessa recuperao est diretamente relacionada com a reativao ovariana e o potencial de produo leiteira nesse perodo. A fertilidade na vaca diminui se a concentrao de albumina estiver abaixo de 32 g/l. Aquelas vacas que tendem a manter os nveis de albumina mais estveis, tm tendncia a serem mais frteis. De qualquer forma, volta-se ao fgado. A lenta recuperao dos nveis de albumina aps a queda no parto pode estar relacionada com problemas no funcionamento heptico que diminuem a sntese de albumina e outras protenas. Por outra parte, vacas com nveis elevados de globulinas geralmente requerem de maior nmero de servios por concepo, o que pode estar relacionado com estados inflamatrios ou infecciosos. Muitos trabalhos mencionam a influncia negativa que uma inadequada nutrio pode causar sobre a fertilidade. Se o perfil metablico capaz de refletir o status nutricional do animal, pode ser usado para diagnosticar ou prevenir transtornos reprodutivos. O dficit energtico, que s vezes podem levar a uma cetose, pode afetar tambm a funo heptica devido acumulao de corpos cetnicos e excessiva mobilizao de lipdeos que causa infiltrao gordurosa no fgado. Concentraes elevadas de fsforo, potssio, protenas totais e uria tm sido relacionadas com baixa fertilidade em rebanhos bovinos. O excesso de protenas e de uria podem causar problemas de sobrevivncia embrionria, diminuindo portanto a taxa de concepo. O anestro em vacas tem sido relacionado com nveis inadequados de fsforo e de beta-carotenos na dieta. A deficincia de alguns oligoelementos tais como cobre, selnio e cobalto tm sido relacionados com infertilidade. Igualmente a diminuio dos nveis de Ca, Mg e Na tem sido apontada como causa de infertilidade.

Perfil bioqumico no diagnstico e prognstico de doenas A hipoglobulinemia em animais neonatos que receberam pouco colostro pode ser detectada mediante perfil metablico, o que permite tomar providncias para evitar complicaes devidas ao aumento da suscetibilidade a sofrer infeces, especialmente diarrias por colibacilose. O estado hipoproteinmico da me ao final da gestao uma das causas do baixo nvel de imunoglobulinas no colostro, e isto tambm pode ser detectado pelo perfil metablico da me antes do parto. Nos animais neonatos com problemas de baixas defesas observa-se, alm da hipoglobulinemia, tendncia a hipoglicemia, especialmente antes dos sintomas aparecerem. A desidratao que ocorre durante um quadro de diarria pode ser avaliada mediante o perfil metablico. Um hematcrito acima de 55% indica grave comprometimento da vida do animal, uria elevada (>100 mg/dl) de mal prognstico, a hipercalemia e a hiperfosfatemia devidas sada de K e P das clulas danificadas podem indicar a iminncia de um colapso.

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Outras deficincias detectadas mediante o perfil metablico podem ser tratadas em animais antes de ocorrerem os sintomas. A deficincia de Zn causa diminuio da competncia imunolgica, aumentando a probabilidade de infeces, especialmente em animais jovens. Em carneiros consumindo pastagens com menos de 100 ppm de Zn, observam-se nveis sangneos de Zn abaixo do limite inferior que pode causar predisposio a infeces e morte (6 moles/l). Deficincias causadoras de doenas graves em animais jovens e que podem ser detectadas mediante o perfil metablico incluem tambm: deficincia de selnio/vitamina E mediante nvel de glutation peroxidase (GSHPx), deficincias de fsforo e de sdio e, mediante medio de tiroxina, deficincias de iodo. Com relao cetose das vacas leiteiras, a questo : pode o perfil metablico ser utilizado para prever o problema? Os eventos metablicos mais importantes na cetose manifestam-se na hipoglicemia e na elevao dos corpos cetnicos, tanto no sangue quanto no leite e na urina. O nvel de cidos graxos livres tambm se eleva e o fgado pode sofrer alteraes lipdicas. Uma informao importante para avaliar a evoluo da doena so os nveis das enzimas hepato-especficas bem como o nvel de albumina que decai com a diminuio da funo heptica. Por outra parte, antes dos sintomas aparecerem, o nvel dos corpos cetnicos, entre eles o mais importante, o BHB, aumentam. Os sinais clnicos podem ser observados quando o BHB ultrapassa 1,0 mM. Outro corpo cetnico, o acetoacetato, tambm considerado como bom indicador. Concentraes de at 0,35 mmoles/l se consideram normais, nveis entre 0,36 e 1,05 mmoles/l so compatveis com cetose subclnica e acima de 1,05 mmoles/l indicam doena clnica. A cetose clnica pode ser ento previsvel combinando os valores de corpos cetnicos e glicose. possvel tambm acompanhar a evoluo da doena atravs dos nveis de corpos cetnicos no leite ou na urina. Considera-se que os nveis de corpos cetnicos no leite correspondem a 35-50% dos valores no sangue. No caso da febre do leite, sendo uma doena de apresentao aguda, no existe teste sangneo que possa prever. Entretanto, mediante o perfil metablico podem ser detectados fatores predisponentes da doena e, uma vez sofrida a doena, pode ser avaliado o prognstico. Entre os fatores predisponentes febre do leite, os desequilbrios minerais podem ser avaliados mediante o perfil metablico, especificamente a situao do Mg e da relao Ca:P. A deficincia de Mg a mais importante causa predisponente para a febre do leite. A maioria das vezes a hipomagnesemia no se apresenta clinicamente mas de forma crnica subclnica atacando as vacas logo aps o parto. A incidncia de hipomagnesemia aumenta nas pocas em que o pasto fertilizado com K, pois esse mineral inibe a disponibilidade de Mg no animal. Tambm em pocas de produo de pastagem ou forragem de m qualidade como no inverno, os nveis de Mg caem perigosamente. Mediante o perfil metablico pode se acompanhar o estado magnesmico do rebanho a fim de manter nveis de segurana de 0,85 mmoles/l e suplementar quando for o caso.
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O desequilbrio da relao Ca:P se refere ao aumento da relao seja por deficincia de P ou por excesso de Ca. Uma relao Ca:P maior de 3,8:1 pode provocar inibio da secreo de hormnio paratireoidiano (PTH) e aumento da secreo de calcitonina. Assim, o efeito sobre o metabolismo de uma relao Ca:P alta a diminuio da mobilizao das reservas de Ca e o aumento da predisposio a sofrer febre do leite. Conhecendo o estado mineral mediante o perfil metablico, podem ser tomadas as providncias do caso antes do parto. Nas vacas acometidas pela febre do leite, o perfil metablico pode ajudar no prognstico. Sabendo que o dano muscular o principal responsvel da falta de recuperao do febre do leite e o fator que causa o sndrome da vaca cada, podem ser analisados os nveis das enzimas do msculo, principalmente AST e CK. Altos nveis enzimticos revelam extenso dano muscular com poucas probabilidades de recuperao. A proporo de recuperao das vacas com febre do leite mediante uma nica injeo intravenosa de borogliconato de clcio da ordem de 65%. A recuperao das demais vai depender da resposta metablica e, principalmente, do dano muscular. Outros fatores predisponentes a febre do leite, como estase alimentar, alcalose, raa, peso, produo de leite, no podem ser avaliados mediante o perfil metablico. Outros transtornos minerais que podem ser detectados mediante o perfil metablico incluem a urolitase e doenas sseas. A formao de clculos na urina depende de uma combinao de circunstncias que envolvem desequilbrios minerais devido dieta, observveis com o perfil metablico apropriado. Nos ruminantes, que possuem uma urina normalmente alcalina, devido presena de grandes quantidades de bicarbonato de K, o aumento de P ou Mg por causa de dietas ricas em cereais, provoca queda do pH na urina com precipitao e formao de clculos. Os machos so propensos a sofrer mais devido a ter a uretra mais longa, estreita e convoluta. O perfil metablico aparece com hiperfosfatemia e hipermagnesemia, com ou sem hipocalcemia. O tratamento consiste na adio de carbonato de Ca no alimento para inibir a absoro de P no intestino. Entre as doenas sseas, a osteoporose tem bastante incidncia principalmente em vacas de alta produo, devido desmineralizao do osso quando se combinam a sada de altas quantidades de Ca no leite com deficincia de Ca na alimentao por um perodo relativamente prolongado. O teste sangneo para diagnosticar o problema pode incluir Ca, P, Mg e fosfatase alcalina no plasma e prolina na urina. A prolina um aminocido abundante na matriz ssea, que pode estar se excretando em excesso quando ocorre osteoporose. Dietas com excesso de P (cereais) podem causar hiperfosfatemia e hipocalcemia e levar a osteoporose. Os animais mais suscetveis a sofrer osteoporose, alm das vacas de alta produo, so as ovelhas e os cavalos. A osteopetrose, causada por excesso de consumo de Ca, especialmente em cachorros e touros, leva a excessiva mineralizao dos ossos causando engrossamento do osso e exostose. No perfil sangneo no se observa aumento de Ca, mas devido secreo de calcitonina em
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resposta aos nveis elevados de Ca, o que pode ser detectado no sangue hipocalcemia e hipofosfatemia com baixa concentrao de fosfatase alcalina. Maiores aplicaes do perfil bioqumico sangneo, urinrio e ruminal so revisadas em Gonzlez et al.(2000b). Bibliografia
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7. EQUILBRIO CIDO-BSICO EM MEDICINA VETERINRIA


Ndia Almosny

Introduo
A manuteno da vida animal requer uma srie de reaes qumicas. Estas reaes podem produzir substncias acidificantes ou alcalinizantes. As reaes enzimticas mantm o funcionamento do organismo e as enzimas so bastante sensveis a variaes de pH (assim como de temperatura). O sangue usado como parmetro para a avaliao do estado cido-base dos animais, portanto, avaliamos o pH sanguneo e extrapolamos este dado para os tecidos. Assim, se o pH do sangue fisiolgico, cada tecido tambm dever estar em seu pH ideal. O pH do sangue est prximo da neutralidade com leve tendncia alcalinidade (aproximadamente 7,4). As reaes metablicas, porm, tendem a desviar continuamente este pH para cido ou bsico. Para evitar que ocorram grandes variaes sricas de pH, existem sistemas amortecedores plasmticos, ou sistemas tamponantes. Os sistemas tamponantes so: protenas plasmticas hemoglobina sistema fosfato-cido fosfrico sistema bicarbonato-cido carbnico

Protenas plasmticas
No meio intracelular o tampo mais eficiente (o que no ocorre no plasma). O mecanismo de ao ocorre atravs dos aminocidos, os quais podem associar ou dissociar H+ de acordo com a necessidade do sangue e assim, atuar na manuteno do pH fisiolgico.

Hemoglobina
Como protena, ela mantm um grande nmero de grupos cidos ou bsicos. Podem existir tambm outros grupos tamponantes (grupo imidazol = histidina). Como transportadora de gases, ela aumenta ou diminui sua afinidade pelo gs carbnico, permitindo sua maior liberao (em caso de acidose) ou sua reteno (na alcalose). Grande parte do tamponamento na faixa fisiolgica de pH ocorre devido s modificaes dos grupos imidazol da histidina. Os grupos tamponantes da hemoglobina esto associados com os tomos de ferro. Na oxihemoglobina, o oxignio transportado pelos tomos de ferro. Quando o oxignio removido, as modificaes que ocorrem na estrutura eletrnica dos tomos de ferro influenciam o imidazol e os outros grupos tamponantes. Modificaes na dissociao do grupo imidazol relacionam a capacidade tampo da hemoglobina com a sua oxigenao e desoxigenao. O aumento da acidez favorece a liberao de oxignio, enquanto que sua reduo facilita a fixao de oxignio. Quando a hemoglobina desoxigenada, forma compostos carbamnicos e
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ons H+ so liberados. A maior poro do gs carbnico que entra nos eritrcitos hidratada para formar cido carbnico por ao da anidrase carbnica. Em seguida o cido carbnico ioniza-se, formando ons H+ e ons bicarbonato. Estas reaes ocorrem porque os produtos de reao so removidos do eritrcito medida que se formam, por intermdio de dois processos: a hemoglobina tampona a maioria dos ons H+ e boa parte do on bicarbonato difunde para o plasma. Quando o cido carbnico ioniza-se, forma um nmero igual de ctions hidrognio e nions bicarbonato. Os ons H+ se combinam com a hemoglobina e a carga da hemoglobina se reduz. Os ons sdio e potssio so balanceados eletricamente com os bicarbonatos formados, mantendo a neutralidade eltrica da soluo. O dixido de carbono total do plasma existe de trs formas: dissolvido no plasma, como cido carbnico, e como bicarbonato.

Sistema fosfato - cido fosfrico


Abundante nos lquidos tubulares, eficiente no sangue, porm em menor quantidade. Possui grande poder de tamponamento. Atua no transporte de H+ e de sdio, aumentando as trocas renais para a correo dos desequilbrios cido-bsicos.

Sistema bicarbonato - cido carbnico


Com menor poder de tamponamento, porm mais abundante no plasma, mais facilmente controlado e mais fcil de medir. Assim, ele se torna o mais importante. O lquido cfaloraqudeo pobremente tamponado e um pequeno aumento na PCO2 representa reduo significativa de pH.

Ao dos rins no tamponamento de pH


A funo do rim manter a constncia do meio interno. Para isto, ele excreta gua, promove a troca de ons e mantm o organismo em equilbrio. Os tbulos renais secretam ons H+ na urina tubular, e para cada mol de cido secretado, um mol de bicarbonato (base) aparece no sangue. As clulas tubulares tambm secretam potssio na urina tubular e a secreo de ons potssio est inter-relacionada com a de H+. Na acidose respiratria, a taxa de secreo de cido est elevada e a de potssio reduzida. Por outro lado, na deficincia de potssio, a secreo deste est reduzida e a de H+ aumentada. Como resultado, ocorre alcalose metablica de origem renal. O pH mnimo da urina em torno de 4,5, e isto acontece devido capacidade tamponante dos rins. Um dos tampes mais importantes o fosfato.

198

DISTRBIOS CIDO-BSICOS Os distrbios cido base, podero estar relacionados a parmetros respiratrios (CO2) ou metablicos (HCO3). Ento, a acidose e a alcalose podero ser metablicas ou respiratrias. Acidose metablica Causas cetoacidose diabtica inibidores da anidrase carbnica insuficincia renal com perda da capacidade de reabsorver o sdio acidose lctica choque hipoxemia exerccio toxinas exgenas etileno-glicol cido saliclico acidificantes urinrios diarria. Na diarria, ocorre aumento do cloro porque os rins corrigem a acidose acompanhando sdio com cloro. Tratamento Segundo Cornellius, deve-se corrigir a patologia de base, pois ela , geralmente, a que mata o paciente. O animal somente deve ser tratado em condies extremas de pH (menor que 7,2 ou superior a 7,6) e acrescenta-se o tratamento da causa. Existem casos em que o prprio tratamento pode induzir a complicaes. Devem se usar agentes alcalinizantes , como o bicarbonato (exemplo Carbicab: Na2CO3 + NaHCO3). No clculo, considera-se o lquido extracelular (LEC: 20% do volume total). Por causa do intercmbio entre LIC e LEC, toma-se como base um volume maior (30%). No usar frmulas com base na gua corporal total (60%), porque o intercmbio entre LIC e LEC lento e isto acarretaria uma superdosagem. Lembrar tambm que os processos mrbidos no so estticos e que os mecanismos de compensao tambm esto atuando. A quantidade de bicarbonato a medicar segue a seguinte equao: HCO3 meq/l = 0,3 x peso corporal (kg) x E.B.*

espao tratvel (30%) mais seguro administrar a metade da dose e logo reavaliar o paciente e os valores de

EB= Excesso de Base: condio ocasionada pela adio de base ou remoo de cido (pode ser negativo ou positivo). 199

gases e do pH do sangue. Se o tratamento da enfermidade primria eficiente, no necessrio continuar a terapia com o bicarbonato. Neste caso, prefere-se que o prprio paciente normalize o desequilbrio cido-base em curso. Complicaes 1Formao de mais cido carbnico, com passagem de CO2 para as clulas de Aumento da osmolaridade do LEC com aumento do volume intravascular:

L.C.R. (acidose paradoxal do L.C.R.). 2-

problemas em pacientes com insuficincia cardaca. 345A infuso rpida leva a hemorragia intracranial (neonatos). Sobregiro alcolico (sobre-correo). Trocas nos eletrlitos sricos.

pH alcalino - aumenta ligao protena + clcio -diminui clcio inico = TETANIA 6Quando a acidose corrigida, o potssio se movimenta para o interior da clula,

podendo mascarar uma hipocalemia.

Acidose respiratria Elevao da pCO2 Causas Depresso do centro respiratrio, causada por: 1. drogas anestsicas gerais 2. opiceos 3. traumas de SNC 4. leso ocupante de espao 5. tumor cerebral 6. abscesso cerebral Afeces respiratrias, tais como: 1. pneumotrax 2. obstruo de vias areas 3. pneumonia 4. edema pulmonar 5. debilidade de msculos respiratrios 6. polimiopatia 7. polineuropatia Movimento do torx reduzido devido a: 1 obesidade 2 dor
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= Hipercapnia

3 bandagem torcica ajustada 4 hipertermia maligna Os sistemas amortecedores respondem imediatamente, porm a resposta no completa e duradoura. A causa original precisa ser corrigida, seno a acidose persistir. O aumento da pCO2 causa vaso-dilatao, aumentando o fluxo sanguneo cerebral e agravando os sinais neurolgicos. Valores superiores a 70 mmHg de CO2 causam narcose. Observar e considerar este fato quando a recuperao anestsica for retardada. pCO2 = estimula o simptico causando: taquicardia sudorese aumento da temperatura corporal vaso dilatao perifrica arritmia (maior no co): considerar quando se administram outros agentes arritmognicos, como Halotano e Xilazina

Tratamento
O tratamento depender da causa primria. A acidose respiratria crnica um desafio, pois muitas etiologias so irreversveis. Em pneumonias ou obstrues, usar bronco-dilatadores e antibiticos. Convulses e arritmias cardacas so complicaes das modificaes rpidas da pCO2. Hiperventilar somente em casos extremos (casos agudos), para no inibir o estmulo da hipxia. Nunca usar bicarbonato em tratamento de acidose metablica. A utilizao do bicarbonato eleva a pCO2 causando narcose.

Alcalose metablica
Causas vmito gstrico puro overdose de bicarbonato de sdio (NaHCO3) diminuio do LEC diminuio do potssio (atualmente esta hiptese est sendo contestada) desidratao intoxicao pela uria (em bovinos). Compensao A reduo da ventilao alveolar uma forma de compensao praticamente impossvel porque ocorre o estmulo hipxico, o que impede a compensao por esta via (o animal no fica sem respirar). A verdadeira compensao renal, mediante excreo de HCO3.

201

Nveis de potssio e cloreto sricos influem na excreo de HCO3 (por causa das trocas) e os rins se tornam culpados pela manuteno da alcalose. Sinais clnicos da alcalose metablica podem ser confundidos com os da hipocalcemia. Quando o volume do LEC est reduzido (assim como os nveis de cloro e potssio) no pode ocorrer bicarbonatria (papel poupador de sdio e gua) e a alcalose mantm-se.

Tratamento
A etiologia deve ser tratada, caso contrrio a alcalose se manter descompensada. O cloreto de sdio 0,9% promover a expanso do LEC e reduzir o pH. Em casos de hipocalemia, acrescentar cloreto de potssio nas solues intravenosas.

Alcalose respiratria
Hiperventilao - causas calor ansiedade medo dor leses do SNC anemia pronunciada (ver acidose metablica paralela) ventilao mecnica aumentada. Em ces: grave somente quando a pCO2 est abaixo de 25 mmHg. Alcalose intensa: hiperexcitabilidade do S.N. Perifrico = tetania ( clcio) Tratamento Deve-se tratar a causa do distrbio, conforme a seguir: calor: reduzir a temperatura corporal leses do SNC: oxigenioterapia dor: analgsicos ansiedade: tranquilizantes. Em casos de anemia e de hiperventilao em geral, interessante observar o grande aumento da formao de cido lctico.

Desordens combinadas
Quando duas ou mais patologias causam distrbios diferentes. O distrbio primrio sempre tem o pH tendendo para si. Exemplos:

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1 - insuficincia renal e vmito: acidose e alcalose, porm o pH est baixo 2 -calor intenso: alcalose respiratria e formao de cido lctico 3 - pneumonia e anorexia 4 - vmito e hiperventilao 5 - nefrite e pneumonia 6 - diarria e vmito.

Gasometria
Para coletar amostras para gasometria deve se usar seringa heparinizada. Em humanos usa-se sangue arterial sempre (artria femoral). Em veterinria, preferencialmente deve-se tentar coletar sangue arterial (tambm artria femoral aps garrotear a coxa do animal por algum tempo). Levar em conta que anestesiar o animal vai alterar o estado cido-bsico do sangue. Pode-se utilizar sangue venoso e, neste caso, no devem ser considerados os dados da pO2. A diferena de pH entre sangue arterial e venoso pequena. Existem pequenas variaes entre nveis de eletrlitos, porm os valores de pCO2 e O2 variaro .Deve-se lembrar que a pCO2 maior no sangue venoso e a pO 2,maior no arterial. Entretanto, a literatura cita vrios trabalhos que consideram somente sangue venoso. A puno dever ser cuidadosa e no poder haver ar na seringa (este dever ser totalmente retirado). Ao final da puno, aps certificar-se da no existncia de ar na seringa, vedar totalmente a agulha (por dobramento desta, com tampas apropriadas ou usar uma rolha na ponta da agulha). O material dever ser acondicionado em isopor com gelo e enviado imediatamente ao laboratrio. Existem seringas importadas especiais para gasometria, nas quais o sangue poder aguardar at duas horas para ser analisado. Quando usamos seringas comuns, o tempo mximo dever ser de meia hora. Os aparelhos so computadorizados e a anlise feita aps injetar-se (com a mesma seringa em que foi coletado) uma pequena quantidade de sangue em orifcio apropriado. O resultado dado em um minuto com as seguintes informaes: pH pO2 pCO2 HCO3 proporo respiratria/metablica excesso de base (E.B.) hemoglobina anion gap (normalmente calculado)
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potssio, cloreto outros (de acordo com o equipamento). Para a avaliao da gasometria, consideramos como dados indispensveis: pH: varia em torno de 7,4, que o pH fisiolgico do sangue; pCO2: igual a 40mmHg, aproximadamente, e mantida pelos pulmes. o parmetro respiratrio; bicarbonato (HCO3): seu nvel fisiolgico mdio de 24mEq/l . o parmetro metablico; a proporo entre os parmetros metablicos (HCO3) e respiratrio (pCO2) de 20:1, ou seja, temos que ter 20 partes de HCO3 para 1 parte de PCO2. Por que? Porque, segundo a equao de Henderson-Hasselbalch, o pH a relao entre cidos e bases, ou seja: pH = pK +log [base/cido] E como fica a equao no final? pH = 3,7 + log [20/1] Ou seja, vinte partes de bicarbonato para uma de cido carbnico. Observamos a, que a pCO 2 foi substituda na frmula pelo cido carbnico (H2CO3), porque j sabemos que: H

CO2 + HO2

H2CO3

HCO3

Se a pCO2 dada em mmHg e o HCO 3 em mEq/l , como saber se a proporo realmente 20:1? O aparelho j faz as correes, transformando em mEq/l, multiplicando o valor por 0,03. Portanto, a pCO2 dada em mmHg (40) e em mEq/l (1,2). Se a proporo de 20:1, o pH 7,4!!!! O excesso de base (EB) avalia o parmetro metablico: E.B. negativo = acidose E.B. positivo = alcalose Valores normais de EB: 1 a -3 para ces, 1 a -5 para gatos.

Gasometria (interpretao)
1. 2. Ao avaliarmos a gasometria, primeiro verificamos o pH, que indicar acidose ou alcalose. Aps verificarmos o estado cido-base, observamos o parmetro que est alterado (se metablico ou respiratrio). 3. 4. 5. A reduo no nvel de HCO3 acarretar em acidose metablica. Nveis aumentados de HCO3 causaro alcalose metablica. Valores reduzidos na pCO2 causaro alcalose respiratria.
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6. 7.

Aumento na pCO2 causar acidose respiratria. Em caso de desordens combinadas, devemos observar o pH, pois o processo predominante desviar o pH.

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8. TOXICOLOGIA CLNICA: ASPECTOS TERICO-PRTICOS


Eliane Dallegrave Viviane Cristina Sebben

1 Introduo A toxicologia clnica veterinria estuda a identificao do agente txico, a ao deste no organismo animal e os fatores que influenciam na toxicidade, permitindo estabelecer um diagnstico e escolher a melhor conduta teraputica. Aspectos toxicocinticos como absoro, distribuio, biotransformao e excreo dos toxicantes e toxicodinmicos como mecanismos de ao e/ou produo de leses, so fundamentais para compreenso dos casos de intoxicao. Para que se possa estabelecer um diagnstico preciso em toxicologia veterinria importante considerar aspectos epidemiolgicos, clnicos e laboratoriais. Estando estes, diretamente relacionados escolha da teraputica mais adequada, que pode ser composta por medidas de descontaminao e tratamento sintomtico, ou mesmo pela utilizao de antdotos especficos. Vrios agentes como animais peonhentos e venenosos, plantas ornamentais e de interesse pecurio, micotoxinas, medicamentos e produtos de uso veterinrio, metais pesados, pesticidas, produtos qumicos industriais e de uso domstico, drogas de abuso, podem induzir intoxicaes em animais. Manifestaes clnicas semelhantes podem ter origens diferentes, sendo assim, para que se possa diferenciar as causas das intoxicaes, muitas vezes so necessrios exames toxicolgicos ou bioqumicos para auxlio diagnstico. As anlises laboratoriais utilizadas na toxicologia clnica podem ser realizadas em diferentes fluidos biolgicos como sangue, urina, leite, lquido ruminal, contedo estomacal, buscando substncias definidas, seus metablitos ou mesmo alteraes bioqumicas induzidas pelos agentes txicos. Os objetivos do estudo da toxicologia clnica veterinria so: desenvolver uma linha de raciocnio toxicolgico-clnica para auxiliar no diagnstico dos processos patolgicos ligados a intoxicaes; capacitar os mdicos veterinrios para a escolha, realizao e interpretao de anlises toxicolgicas e de bioqumica clnica como ferramenta de suporte no diagnstico e evoluo das intoxicaes mais freqentes em medicina veterinria.

2 Toxicocintica Define-se toxicocintica como o movimento dos princpios ativos dentro do organismo. Esta envolve as fases de absoro, distribuio, biotransformao e excreo (Figura 1). Os agentes txicos podem ser os prprios princpios ativos, no caso de substncias qumicas, medicamentos, como tambm, podem ser toxinas liberadas por animais, plantas ou outros organismos.

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Agente no stio de exposio


Injetvel: SC, IM inalatria oral drmica

ABSORO Agente nos tecidos DISTRIBUIO

IV

Agente no plasma
Forma livre Forma conjugada

Metablitos nos tecidos Agente e/ou metablitos em urina, bile ou fezes EXCREO

BIOTRANSFORMAO

Nem sempre todos estes processos esto presentes.

Figura 1. Processos toxicocinticos. Relacionado a estes processos temos determinados parmetros farmacocinticos como: biodisponibilidade: quantidade de frmaco que alcana a corrente circulatria; volume de distribuio: constante que relaciona a quantidade de frmaco no organismo com a concentrao deste no sangue; meia vida plasmtica: tempo necessrio para que a quantidade total de frmaco no organismo decresa a 50%; depurao corprea: volume de sangue do qual um frmaco foi eliminado por unidade de tempo; relacionando a taxa de eliminao pelos diferentes tecidos (fgado, rins, pulmes) e a concentrao srica do frmaco.

2.1 Absoro Corresponde ao transporte da substncia at a circulao.Vrios fatores interferem na velocidade e na extenso da absoro: estrutura da pele caractersticas fsicoqumicas do agente tipo de exposio quantidade do agente: dose, concentrao perodo curto prolongado via de exposio oral inalatria drmica.

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Tabela 1. Influncia dos fatores na absoro de princpios ativos. Fator Concentrao Peso molecular Solubilidade Ionizao Forma farmacutica Dissoluo dos slidos pH do local cido pH do local bsico rea absortiva Espessura da membrana Circulao local Condies fisiolgicas Condies patolgicas Aumenta absoro maior baixo lipossolvel forma no ionizada lquida maior cidos fracos bases fracas maior menor maior cio, puerprio inflamao, lceras, queimadura Diminui absoro menor alto hidrossolvel forma ionizada slida menor bases fracas cidos fracos menor maior menor edema, choque

2.2 Distribuio Define-se distribuio como sendo o processo de transporte entre os diferentes compartimentos orgnicos (intra e extra celular) aps a chegada na corrente circulatria. Vrios fatores interferem na distribuio das substncias, como o fluxo sangneo tecidual, as caractersticas das membranas de transporte e das barreiras biolgicas, as propriedades fsico-qumicas das substncias, o tipo e a quantidade de protenas plasmticas e, a capacidade de ligao das substncias a tecidos de depsito. rgos com alto fluxo sangneo como os pulmes, favorecem a distribuio, j os msculos em repouso tm sua distribuio reduzida devido ao baixo fluxo sangneo local. As caractersticas das membranas de transporte so fundamentais na compreenso da distribuio, pois estas vo determinar o tipo de transporte entre os compartimentos (difuso, transporte ativo), incluindo as barreiras celulares como a mucosa gastrintestinal e o epitlio tubular renal, e as barreiras biolgicas. As barreiras biolgicas que interferem na distribuio dos agentes txicos so: hematoenceflica: que bloqueia a entrada de substncias no SNC; placentria: que protege o feto, evitando a transferncia de substncias exgenas para o feto; hemato-testicular: que bloqueia a entrada de anticorpos circulantes e/ou de substncias nos testculos, evitando efeitos sobre os espermatozides. Estas barreiras de uma forma geral bloqueiam a entrada de substncias hidrossolveis e de alto peso molecular, alm de contar com sistemas de efluxo mediados pela glicoprotena P. Os principais depsitos incluem: tecido adiposo: onde se depositam as substncias hidrossolveis; tecido conjuntivo: onde se depositam as substncias lipossolveis. Estes depsitos apenas fixam o agente e liberam quando o gradiente favorecer. Sendo por esta razo denominados de silenciosos ou indiferentes. As protenas plasmticas tm um papel fundamental na distribuio das substncias exgenas no organismo. As principais so a albumina que se recebe preferencialmente cidos e, a -globulina e a glicoprotena cida que aceptam bases. Outras protenas incluem as lipoprotenas circulantes e as protenas de membranas dos eritrcitos, leuccitos e plaquetas. Ligando-se reversivelmente a estas, so capazes de liberar quantidades na corrente circulatria conforme a reduo de substncia livre (capaz de ligar-se aos receptores e efetuar sua ao) ou competio por outra substncia que tenha afinidade pelo mesmo tipo de protena. Hipoproteinemia pode ser uma das causas de aumento de toxicidade de

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agentes txicos que tem alta taxa de ligao a protenas plasmticas. As substncias podem ligar-se tambm a protenas teciduais como as de membrana, cidos nuclicos, polipeptdeos ou polissacardeos, ampliando seus locais de depsito para outros tipos de tecidos. Neste caso, tecidos como pulmes, ossos, fgado entre outros, podem ser suscetveis as aes das substncias. Tanto as substncias lipossolveis quanto as hidrossolveis podem distribuir-se no leite, tornando-se passveis de transferncia para os filhotes e/ou para os consumidores deste produto e de seus derivados.

2.3 Biotransformao A biotransformao converte a substncia em composto diferente do administrado. Os principais tecidos responsveis pela biotransformao de substncias exgenas, denominados de ativos, so: fgado; pulmes; mucosa intestinal; pele; placenta. O principal objetivo da biotransformao tornar a substncia polar (hidrossolvel) e, portanto, passvel de excreo renal. A biotransformao pode gerar: metablitos inativos; metablitos ativos: substncias originalmente ativas prolongando sua ao; pr-toxicantes tornando-as ativas. Uma substncia pode necessitar de mais de uma transformao para poder ser eliminada. Fases da biotransformao: Fase I gera metablitos ativos ou inativos atravs de reaes de: oxidao reduo hidrlise O Citocromo P-450 o componente chave dos processos de biotransformao. Especialmente no fgado, principal rgo de biotransformao, o retculo endoplasmtico liso o local mais importante de atividade das enzimas oxidases de funo mista (OFM). Freqentemente se observa um aumento significativo na atividade destas enzimas depois de alguns dias de exposio a toxicantes. O sistema de OFM atua primariamente em substncias lipoflicas (apolares), acrescentando a estas, grupos funcionais polares (hidroflicos). Fase II (sintticas) gera preferencialmente metablitos inativos atravs de conjugaes com: cido glicurnico aminocidos acetatos sulfatos glutationa Esta fase inclui uma srie de reaes de conjugao, envolvendo substncias exgenas previamente modificadas na fase I, para torn-las hidrossolveis e passveis de excreo renal. Vrios fatores reduzem a capacidade de biotransformao das substncias. So estes: idade: perodo neonatal e senil; espcie, raa ou linhagem: sistemas enzimticos pouco eficientes; sexo: machos possuem 40% a mais de Citocromo P-450 do que fmeas; estado fisiolgico: gestao; condies clnicas: insuficincia heptica, desnutrio, hipotermia...

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A capacidade de biotransformao pode ainda ser influenciada por outras substncias: indutoras enzimticas: que aceleram a biotransformao, reduzindo a intensidade e durao do efeito; inibidoras enzimticas: que aumentam a meia vida e a durao do efeito, potencializando a toxicidade. Exceo se d para os pr-toxicantes onde: indutores reduzem a latncia e intensificam o efeito; inibidores aumentam a latncia e reduzem o efeito. Importante salientar que substncia com ligao forte a lipdios, ossos e tecidos cerebrais, ficam inacessveis a biotransformao. Porm, nem sempre o acmulo de uma substncia em um rgo ou tecido, est relacionado com sua toxicidade, pois estes podem ser indiferentes a ao do agente.

2.4 Excreo A excreo a fase da toxicocintica responsvel pela eliminao da substncia do organismo e os rgos responsveis por este processo so denominados emunctrios. Os principais tecidos responsveis pela excreo de substncias exgenas so: rins: via urina; fgado: via bile; A excreo pode se dar ainda via: pulmes: via expirado; intestinos: via fezes; glndulas salivares e lacrimais: via saliva e lgrima; pele: via suor; glndula mamria: via leite. Os rins tm um papel depurador crucial, excretando substncias polares e hidrossolveis. Aps a filtrao, partculas hidrossolveis so excretadas na urina e as lipossolveis so reabsorvidas e vo circulao sistmica novamente. Os glomrulos filtram substncias at o peso molecular da albumina (69000), mas somente aquelas no ligadas a protenas plasmticas. cidos orgnicos fracos, no se dissociam em pH cido, permanecendo lipossolveis e passveis de reabsoro. Neste caso, a alcalinizao urinria permite ioniz-los, tornando-os hidrossolveis e passveis de excreo urinria. O oposto, ou seja, acidificar a urina para favorecer a excreo de bases fracas tambm possvel. Estes processos so denominados de armadilha inica e de alta relevncia teraputica em toxicologia. A excreo biliar muito importante na preveno da intoxicao, pois facilita a excreo de substncias de alto peso molecular e muito polares, englobadas em micelas. Entretanto, algumas substncias so passveis de reabsoro no intestino, sofrendo o ciclo entero-heptico, possibilitando assim, o aumento de sua meia vida. Vrios fatores podem reduzir a excreo, como: baixa perfuso renal; baixa taxa de filtrao glomerular; saturao de carreadores; idade: neonatos e idosos; insuficincia renal.

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3 Toxicodinmica 3.1 Bases celulares da leso txica A leso celular a base para a maioria das leses txicas, sendo o efeito caracterizado por disfuno de processos biolgicos. Diferenas quantitativas nas funes celulares, teciduais e de rgos podem deprimir ou mesmo interromper processos fisiolgicos, como tambm aument-los, sendo capazes de afetar outros sistemas que no os diretamente envolvidos na leso celular. A resposta celular a agentes toxicantes ocorre atravs de mecanismos estruturais e metablicos celulares, tais como: integridade da membrana: relacionada ao fluxo de lquidos e eletrlitos; regulao do volume celular: relacionada ao metabolismo energtico responsvel por fornecer energia para sistemas ativos de transporte transmembrana, sntese de macromolculas ou manuteno do balano osmtico; regulao metablica: relacionada ao controle do acmulo de lipdios e pigmentos; regulao da sntese protica: relacionada ao controle da formao de cidos nuclicos, enzimas e protenas estruturais; regulao do crescimento: relacionada a alteraes no DNA (hiperplasia, carcinognese). Substncias estranhas ao organismo so biotransformadas a intermedirios eletroflicos pelas oxidases de funo mista (OFM) microssomais. Provavelmente, estes compostos intermedirios eletroflicos ligam-se covalentemente a macromolculas celulares que podem ser desnaturadas por esta ligao. Este tipo de ligao tem uma forte correlao com as leses celulares e/ou carcinognese. Os compostos eletroflicos podem ligar-se a glutationa reduzida, sendo esta ligao, considerada fator de proteo celular. Macromolculas podem ser lesadas por radicais livres, resultantes da adio de eltrons a um carbono, catalizada por enzima, e com subseqente clivagem. O oxignito ativo (superxido) formado pela oxidao induzida pelas OFM em substncias exgenas, reage com lipdios no saturados, iniciando uma reao autocataltica em cadeia que conduz a formao de radicais livres lipdicos e da, a peroxidao lipdica. Esta peroxidao lesa as organelas e membranas celulares reduzindo sua integridade estrutural. Isto favorece a perda da homeostasia do clcio, aumentado no citossol, ativando com isto as fosfolipases, autodigesto das membranas com perda funcional, turgidez celular e eventual leso celular irreversvel progredindo at a necrose. As Figuras 2 e 3 descrevem, respectivamente, as vias e a progresso das leses que conduzem a morte celular. As clulas podem produzir antioxidantes como a superxido dismutase, a catalase, a glutationa peroxidase e a Vitamina E, capazes de evitar a formao de radicais livres.

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Xenobitico Metabolismo pelas enzimas oxidativas celulares X O2

Oxignio GRO GRRx GR GRPx

H2O

Peroxidao SOD Reaes com antioxidantes celulares H2O2 CAT H2O

H2 Fe OH Reaes com macromolculas celulares

Peroxidao lipdica Leso de membrana

Desnaturao protica Perda de enzimas

Leso de DNA

Mutao Cncer Sntese de protenas

GR glutationa reduzida GRPx glutationa peroxidase GRRx glutationa redutase GRO glutationa oxidada CAT - catalase SOD superxido dismutase X radical livre Figura 2. Vias de leso txica induzida por radicais livres produzidos por agentes toxicantes e superxidos. (Osweiler, 1998).

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Progresso da leso qumica levando morte celular Substncia qumica ou metablito txico Inibio do metabolismo energtico com depleo de ATP Diminuio da Na+/K+ ATPase Diminuio da Ca+2/Mg+2 ATPase

Acmulo de sdio e clcio no citosol Influxo de gua Tumefao celular com formao de vacolos Liberao de hidroxilases cidas pelos lisossomos Ativao de fosfolipases pelo clcio Leso de membranas e organelas Perda do controle do Ca

Morte celular Figura 3. Progresso da leso txica conduzindo morte celular. (Osweiler, 1998).

3.2 Mecanismos especficos da intoxicao Dentre os vrios mecanismos de induo da intoxicao, pode-se referir: leso qumica: membranas lesadas por corrosivos, custicos, coagulantes de protenas ou mesmo agentes que afetam os lipdios de membrana; necrose: dficit energtico ou isquemia; inibio ou competio por enzimas: inativando ou desnaturando; interferncia na sntese ou metabolismo: desacoplamento ou inibio da fosforilao oxidativa, inibio da sntese de protenas e de cidos nuclicos, interferncia com a mobilizao de gordura no interior das clulas; efeitos funcionais: bloqueio ou estmulo neurotransmisso, imunossupresso; mimetismo de substncias endgenas: hormnios, nutrientes (vitaminas ou minerais); efeitos sobre o desenvolvimento: reabsoro embrionria, teratognese, retardo do crescimento; carcinognese.

4 Fatores que influenciam na toxicidade Diversos fatores podem modificar a resposta aos agentes toxicantes. Estes podem estar relacionados ao agente, ao animal e ao ambiente. A compreenso destes fatores e suas inter-relaes permitem uma melhor interpretao dos dados e conseqentemente, diagnostico e prognstico mais apurados. Variaes no efeito esperado aps a exposio a agente toxicante podem desencadear reaes adversas, entretanto somente so consideradas txicas aquelas decorrentes de exposies a dosagens

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superiores s teraputicas (toxicidade absoluta) ou quando fatores farmacocinticos propiciam concentraes sricas superiores as esperadas (toxicidade relativa). 4.1 Fatores do agente toxicante Composio do produto: presena de impurezas txicas ou capazes de potencializar a toxicidade dos princpios ativos; mudanas na molcula ativa alterando propriedades qumicas e a resposta dos receptores; instabilidade da substncia sob condies de uso, conduzindo a decomposio dos princpios ativos no ambiente; presena de veculos, muitas vezes, igualmente ou mais txicos do que os princpios ativos; apresentao (ps molhveis, suspenses, emulses) capaz de interferir na taxa de reteno ou velocidade de absoro; homogenizao, capaz de modificar a concentrao do princpio ativo na formulao. Solubilidade: substncias lipossolveis tm maior capacidade de atravessar as membranas celulares. Polaridade: substncias no polares tm maior capacidade de atravessar as membranas celulares. Peso molecular: substncias com baixo peso molecular tm maior capacidade de atravessar as membranas celulares. Grau de ionizao: substncias no ionizveis em pH fisiolgico so mais lipossolveis e, portanto, com maior capacidade de absoro. Ligao a protenas plasmticas: restringe a disponibilidade da substncia e retarda a excreo (por filtrao glomerular). Interaes qumicas: formao de precipitados insolveis, trocas de nions em sais,... 4.2 Fatores do animal Fisiologicamente, espcie, raa, idade, sexo, estado gestacional ou lactacional so fatores que influenciam na resposta a determinados agentes toxicantes. Alm disso, algumas condies patolgicas so responsveis pelo aumento da resposta aos toxicantes.

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Tabela 2. Caractersticas especficas em relao ao animal que influenciam na toxicidade. Fator Espcie Caracterstica Gatos so maus conjugadores com cido glicurnico, sunos com sulfato, porquinhos-da-ndia so maus desmetiladores e ces acetiladores, caractersticas que reduzem a biotransformao de toxicantes que utilizam estes sistemas. Ruminantes podem ter a absoro retardada pela ampla capacidade de armazenar grandes volumes de ingesta e a microbiota ruminal pode biotransformar substncias em toxicantes ou mesmo inativ-las. Cavalos, ratos e coelhos so incapazes de vomitar, aumentando a toxicidade de venenos emticos por natureza e dificultando o procedimento de descontaminao oro-gstrica. Collies tm a barreira hematoenceflica menos desenvolvida, permitindo a passagem de substncias como a ivermectina, provocando toxicidade. Neonatos tm menor capacidade de biotransformao e maior permeabilidade nas barreiras ainda imaturas (hematoenceflica), permitindo aumento da toxicidade. Idosos tm sistemas de biotransformao deficientes. Machos com nveis elevados de testosterona tm maior capacidade de biotransformao do que as fmeas. Toxicantes que mimetizam efeitos hormonais afetam mais intensamente animais do sexo dependente daquele hormnio. Pode aumentar a capacidade de biotransformao de alguns toxicantes. Pode aumentar a excreo de toxicantes lipossolveis. Reduz a biotransformao dos toxicantes, retardando o processo de eliminao. Reduz a excreo dos toxicantes. Reduzem o trnsito intestinal e conseqentemente a absoro de toxicantes orais. Aumenta a absoro de toxicantes.

Raa Idade Sexo

Gestao Lactao Insuficincia heptica Insuficincia renal Irritantes gastrintestinais Gastroenterite/lceras

4.3 Fatores ambientais Vrios fatores externos podem influenciar na resposta aos agentes toxicantes. Estes incluem: Volume/concentrao do toxicante: a exposio aguda a grandes volumes ou concentraes de toxicantes produz respostas maiores do que a exposio prolongada das mesmas quantidades. Entretanto, alguns agentes podem manifestar efeitos mais pronunciados por exposio crnica de pequenas doses do que aguda de doses elevadas. Via e local de exposio: tm relao direta com a absoro (tecidos vascularizados aumentam, enquanto que os menos vascularizados ou mesmo queratinizados reduzem) e a biotransformao (oral passa pelo fgado antes de atigir a circulao e a inalatria no). Temperatura ambiental: se baixa pode propiciar aumento de biotransformao pelos animais que aumentam seu metabolismo para manterem-se aquecidos; se alta pode favorecer o consumo hdrico e a ingesto de toxicantes presentes na gua, alm de aumentar a suscetibilidade a toxicantes que aumentam o metabolismo ou a temperatura corporal (desacopladores oxidativos), tambm a absoro drmica pode ser aumentada quando a temperatura ambiente est elevada, devido ao desvio sangneo para a periferia. Presso atmosfrica: a reduzida tenso de oxignio ambiental pode estar associada com aumento de toxicidade de determinados agentes, assim como o seu oposto, exposio ao oxignio hiperbrico, capaz de tratar certos tipos de intoxicaes. Fatores nutricionais e dietticos: inativao de toxicantes por componentes da dieta; boa palatabilidade pode aumentar a ingesta; deficincias nutricionais reduzem a sntese de enzimas microssomais ou a atividade antioxidante e deficincias energticas reduzem a atividade enzimtica.

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5 Diagnstico em toxicologia veterinria O diagnstico clnico pode ser utilizado para determinar os sistemas orgnicos afetados e as alteraes que necessitam ser controladas imediatamente para manter a vida do animal. A etapa fundamental a que estabelece o diagnstico etiolgico, pois este, permite a identificao do agente e a aplicao imediata de terapia especfica. A linha de raciocnio diante de uma suspeita de intoxicao deve respeitar uma seqncia de dados a serem investigados: Quais as principais manifestaes clnicas? choque parada respiratria convulses depresso ataxia hemorragias Existe alguma leso aparente? picada queimadura bolha necrose H presena de agente txico no ambiente? planta txica alimento contaminado animal peonhento ou venenoso produto qumico pesticida medicamento O que pode ter ocorrido? exposio a algum agente conhecido ou suspeito mudana de ambiente mudana de alimentao aplicao de alguma substncia qumica no animal e/ou ambiente Que sinais clnicos o animal manifesta? ataxia salivao cegueira depresso excitao convulses vmito diarria melena polifagia polidipsia poliria dispnia ictercia hemorragia hematria febre fraqueza necrose

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Que sistemas ou processos metablicos esto envolvidos? sistema respiratrio sistema cardiovascular sistema nervoso central sistema digestivo sistema locomotor sistema reprodutor olhos, pele e anexos coagulao/hematopoese Com que velocidade surgiram os sinais clnicos? imediatamente algumas horas um dia vrios dias Com que velocidade evoluram os sinais clnicos? rapidamente (horas) lentamente (dias) Outros animais manifestam sinais clnicos? Ocorreram mortes? Existiu alguma situao de estresse? O animal possua leso orgnica prvia? Fez ou fazia uso de medicamentos? Quais? Que exames complementares podem auxiliar no diagnstico? perfil bioqumico heptico e renal; testes de coagulao; urinlise hemograma completo anlise de eletrlitos (Ca, Mg, K, Na,...) e pH. Que anlises toxicolgicas podem contribuir no diagnstico toxicolgico? pesquisa de agentes txicos e/ou metablitos (sangue, vmito, urina, fezes, plos dos animais ou post mortem contedo gstrico ou ruminal, fgado, rins, gordura, lquidos oculares e crebro); pesquisa de plantas txicas, alimentos contaminados, substncias qumicas como pesticidas ou domissanitrios no ambiente, gua, solo. Caso o animal venha a bito, o que investigar na necropsia? anlise macroscpica, anlise histopatolgica ou pesquisa de agentes e/ou metablitos contedo gstrico ou ruminal, ou em tecidos.

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Tabela 3. Alteraes em sistemas orgnicos decorrentes da exposio a agentes txicos em potencial.


Sistema Nervoso Alterao Convulses Depresso Agente txico Chumbo, organoclorados, metaldedo, piretrinas e piretrides, uria, sdio, anfetaminas, cafena, chocolate, cocana, estricnina, fluoracetato, ... Anticolinrgicos, barbitricos, fenotiaznicos, opiides, ivermectina, lcoois, Datura spp., Cannabis sativa, Micrurus sp., organofosforado, chumbo, monxido de carbono Micotoxinas, organofosforados e carbamatos Aminoglicosdeos, Cannabis sativa,... Dixido de carbono, monxido de carbono, metano, nitrognio Cloro, formaldedo, fumaa Endotoxina, paraquat Cetonas Paraquat Digitalis sp., digoxina, bufotoxina anfetaminas, cafena, chocolate, cocana, metaldedo, organofosforados, teofilina Xilazina, bufotoxina, bloqueadores dos canais de clcio, carbamatos, organofosforados, Digitalis sp., betabloqueadores Antineoplsicos, arsenicais, estrgenos, fenilbutazona, cloranfenicol, benzeno, clorpromazina, tolueno Chumbo Monxido de carbono Nitratos e nitritos, cobre, organoclorados e paracetamol

Respiratrio

Cardiovascular

Tremores musculares Ataxia e nistagmo Asfixia Irritao Edema pulmonar Enfisema Fibrose Inotropismo Taquicardia Bradicardia

Hematopotico

Anemia aplsica Porfiria Carboxiemoglobinemia Metemoglobinemia

Digestrio

Salivao Irritao, queimadura Gastrite, gastroenterite Emese Insuficincia heptica

Excretor

Insuficincia renal

Reprodutor

Alterao na fertilidade do macho Alterao na fertilidade da fmea Aborto Teratogenicidade

Carbamatos, organofosforados, oxalatos de clcio, piretrides, bufotoxina, corrosivos cidos, lcalis, fenis, formaldedo, solventes, hipoclorito, plantas com oxalatos cido acetilsaliclico, ibuprofeno, Naproxen, glicosdeos cardiotnicos, arsnico, chumbo, ferro, cobre, fertilizantes, herbicidas fenoxi, organofosforados e carbamatos, Amanita sp., micotoxinas, enterotoxinas (Clostridium sp.), Euforbiceas, Solanum sp. Apomorfina, ipeca, xilazina Paracetamol, cobre, ferro dextrano, mebendazole, tiacetarsamida, tolueno, vitamina A, alcatro, fenis, nitrosaminas, tetracloreto de carbono, micotoxinas, Senecio sp., Lantana camara, Amanita sp. metais pesados, aminoglicosdeos, sulfonamidas, barbitricos, AINES, carbamatos, herbicidas fenoxi, micotoxinas, oxalatos, solventes, Vitamina D3 e plantas calcinognicas, Crotalus sp., Bothrops sp. Antineoplsicos, naftalenos, organoclorados, estrgenos Andrgenos, estrgenos, DDT, progesterona, fitoestrgenos (Trifolium subterraneum, Medicago sativa, Ateleia glazioviana) Chumbo, corticosterides, dicumarnicos, monxido de carbono, nitratos e nitritos, selnio, Trifolium subterraneum, Medicago sativa Benzimidazis, aminoglicosdeos, griseofulvina, imidazotiazis, hormnios esterides, vitaminas A e D, AAS, arsnico, chumbo Corticosterides, ferro dextran, halotano, ionforos, selnio, Crotalus sp., Cassia sp., Senna occidentalis Vitamina D3, plantas calcinognicas (Solanum malacoxylon Nierembergia veitchii)

Locomotor

Necrose muscular Calcificaes de tecidos moles

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Saber selecionar as melhores evidncias fundamental no diagnstico etiolgico, mas mesmo assim, o principal tratar o paciente e no o veneno! Sendo assim, uma investigao toxicolgica baseia-se em critrios indiretos tais como: anlises biolgicas determinao dos sistemas envolvidos e/ou das alteraes metablicas gravidade da intoxicao perfil bioqumico agente txico suspeito anlise toxicolgica As tabelas 3 e 4 referem os principais sistemas envolvidos e as alteraes metablicas correlacionadas aos agentes txicos.

Tabela 4. Alteraes metablicas relacionadas com os agentes txicos em potencial.


Alteraes metablicas Acidose Kalemia Hipocalcemia Hemorragias Perturbaes enzimticas Hemlise Agentes txicos cido acetil-saliclico, metanol, metaldedo,... Digitlicos, tetraciclinas, fenotiaznicos e antidepressivos tricclicos,... cido fluordrico, cido oxlico,... Cumarnicos, Bothrops sp,... Paracetamol, organofosforados,... Sais de cobre, arsnico, mercrio, Crotalus sp., Loxosceles sp.,...

Anlises laboratoriais podem confirmar e quantificar os resultados de uma exposio agente txico. Hematologia, bioqumica, urinlise podem ser de grande valia, assim como o contedo gstrico ou ruminal (vmito, coleta por sondagem ou mesmo post mortem), fezes ou mesmo plos. Outras anlises incluem avaliao post mortem, incluindo a utilizao de tecidos como fgado, rins, gordura e crebro para pesquisa do agente, metablitos ou mesmo possveis leses causadas por estes. Amostras ambientais como alimento, rao, forragem, gua, solo, plantas txicas, iscas, medicamentos, objetos contaminados com produtos qumicos, ou outros, no confirmam, mas sugerem um provvel diagnstico. de extrema relevncia a coleta e o envio adequados das amostras para que o laboratrio possa realizar as anlises de forma precisa. Na Tabela 5, encontram-se indicadas as quantidades e a forma de conservao necessrias para o envio das amostras. Os critrios biolgicos, principalmente a determinao dos sistemas envolvidos e das alteraes metablicas, so de suma importncia na investigao, refletindo a tolerncia do paciente frente ao toxicante, pois nem sempre as concentraes sangneas se relacionam diretamente com o efeito clnico. Estas alteraes, juntamente com a anamnese especfica, o exame das evidncias ambientais, o perfil bioqumico e as anlises toxicolgicas, quando pertinentes, fundamentam o diagnstico toxicolgico e conseqentemente, o tratamento especfico.

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Tabela 5. Aspectos prticos para o envio de amostras para diagnstico laboratorial em toxicologia.
Amostra Sangue total (refrigerado) Soro (refrigerado) Urina (refrigerada) Fezes (refrigeradas) Vmito (refrigerado) Plos Fgado (congelado e formalina tamponada 10%) Rins (congelado e formalina tamponada 10%) Contedo gstrico (refrigerado) Contedo ruminal (congelado) Gordura Crebro (congelado e formalina tamponada 10%) Alimentos (mltiplas amostras) Forragens (mltiplas amostras, congeladas) Iscas gua (refrigerada) Solo (mltiplas amostras) Quantidade 5-10 mL 5-10 mL 50 mL 250 g 250 g 5-10 g 100 g 100 g 500 g 500 g 250 g inteiro 2 kg 5 kg todas 0,5-1 L 1 kg Agentes Metais, minerais, colinesterase, pesticidas e hemograma Eletrlitos, uria, metais, drogas, antibiticos e vitaminas Alcalides, metais, eletrlitos, drogas, antibiticos, sulfonamidas e oxalatos Exposio oral recente de substncias excretadas pela bile Vrios agentes (principalmente aqueles no detectados em tecidos), organofosforados e ionforos Pesticidas e metais (exposio crnica) Metais, pesticidas, alcalides e micotoxinas Antibiticos, outros frmacos, alcalides, herbicidas, metais, compostos fenlicos e oxalatos Semelhante ao vmito Rumen pode degradar nitratos e micotoxins (melhor congelar) Organoclorados, dioxinas (lipossolveis) Organoclorados, piretrinas, sdio e mercrio (neurotxicos) Micotoxinas, aditivos alimentares,... Micotoxinas,... Rodenticidas, inseticidas,... Nitratos, sulfatos, slidos totais, metais, pesticidas Minerais, pesticidas

6 Manejo das intoxicaes O principal enfoque que deve ser dado nos casos de intoxicao tratar o paciente, e no o agente txico! Uma seqncia lgica de medidas deve estar sempre em mente para que se possa adequar os primeiros socorros teraputica especfica ou mesmo de suporte. Dentre as principais medidas, a descontaminao essencial para que se evite a continuidade da exposio ao agente txico. Igualmente importante, so as medidas de suporte que favorecem a manuteno da vida, at que se possa terminar a investigao ou mesmo estabelecer terapia especfica, atravs de antdotos, quando houver.

6.1 Descontaminao O primeiro passo inclui a remoo do ambiente txico, principalmente em exposies por via inalatria e/ou drmica ambiental (banheiro, tanque, cho,...). Instrues aos cuidadores quanto necessidade de material de proteo como luvas, roupas com pernas e mangas longas para efetuar o manejo e/ou descontaminao. Orientaes quanto remoo de resqucios do agente toxicante da boca, ou mesmo induo de emese com perxido de hidrognio (gua oxigenada) ou detergente lquido de loua, atentando para a posio do animal de forma a evitar aspirao do vmito. Informar sobre a necessidade ou no de atendimento clnico de emergncia e os procedimentos para o transporte alm da necessidade de trazer a embalagem do produto, planta ou mesmo animal venenoso ou peonhento, quando for seguro e possvel. Descontaminao drmica:

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lavar continuamente o animal com gua morna e sabo ou detergente suave, at que o produto tenha sido removido; animais de plos longos podem necessitar de corte ou tosa para remover os resduos txicos. Descontaminao ocular: lavar com gua, vrias vezes ou irrigar com soro fisiolgico por cerca de 20 min. Descontaminao gstrica/enteral: emese: contra-indicada: roedores, coelhos, eqinos ou ruminantes; animais inconscientes, muito deprimidos, convulsivos; em ingesto de corrosivos, custicos, derivados do petrleo ou outras substncias volteis; quando indicada: perxido de hidrognio 3% (2-5 mg/kg no excedendo 50 mL); soluo de detergente lquido de loua no de mquina ou de roupa (3 colheres de sopa em 250 mL de gua 10 mL/kg); xilazina (1,1 mg/kg); lavagem gstrica: quando emese foi ineficaz ou contra-indicada; animal entubado endotraquealmente para evitar aspirao, sonda gstrica calibrosa, administrar gua ou salina (10 mL/kg) por gravidade e aspirar aps alguns minutos, repetir at que o lquido esteja claro, evitar presso excessiva pelo risco de dano a mucosa enfraquecida. lavagem enterogstrica: concomitante com lavagem gstrica efetuado enema retrgrado alto (lquido via retal); adsoro com carvo ativado: administrado para adsorver o toxicante, mais eficaz para molculas grandes, no polareas, agentes ionizados so menos adsorvidos do que os neutros; em suspenso aqosa de 1g em 5 mL de gua e administrado na dose de 1-5 g/kg; frmacos administrados na presena de carvo so adsorvidos e tm sua eficcia reduzida; gastrotomia ou rumenotomia: necessrias em situaes refratrias emese, lavagem gstrica ou carvo ativado; indicada para remoo de corpos estranho constitudos por metais pesados; materiais persistentes como alcatro, leos txicos, podem necessitar evacuao cirrgica. 6.2 Medidas gerais de suporte Freqentemente, na interveno de emergncia de casos de intoxicao, as medidas de suporte so prioritrias, mesmo quando existe o diagnstico etiolgico e antdoto apropriado. Estas incluem: Vias areas permeveis e com adequada oxigenao: por sonda endotraqueal (evita aspirao do vmito em animais inconscientes), ventilao mecnica, oxigenioterapia, estimulante respiratrio como doxapram. Disfunes neurolgicas: convulses devem ser controladas com benzodiazepnicos e/ou barbitricos, jamais com tranqilizantes fenotiaznicos (diminuem o limiar convulsivo); depresso pode ser reduzida por estimulante central como o doxapram. Choque: hipovolmico controlar com Ringer lactato ou expansores plasmticos; hemorrgico, considerar transfuso. Arritmias cardacas: bradicardia sinusal controlar com atropina; bloqueio trioventricular tratar com atropina, dopamina ou isoproterenol; parada atrial utilizar bicarbonato de sdio em salina e insulina com glicose; taquicardia ventricular em ces controlar com lidocana, mas no em gatos (neurotxica). Vmitos e/ou diarria: hiperreatividade gastrintestinal pode reduzir a absoro ou auxiliar na eliminao de toxicantes, entretanto desequilbrios hidreletrolticos devem ser controlados; irritao local do estmago pode ser controlada com anti-histamnicos H2.

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Desequilbrios hidreletrolticos: acidose metablica corrigir com lactato de sdio ou bicarbonato de sdio. Hipo ou hipertermia: aquecimento ambiental nos casos de hipotermia; banhos frios e/ou administrao intravenosa de lquidos frios que tambm controlam a desidratao produzida pela hipertermia. Monitorar a condio clnica, pois os produtos da biotransformao de toxicantes podem ser mais txicos que os de origem. Alm disso, mudanas secundrias ou seqelas da leso original podem produzir danos que necessitam tratamento. 6.3 Antdotos Antdotos so agentes com ao especfica contra a atividade ou efeitos de um toxicante. A aplicao de um antdoto deve ser considerada quando o diagnstico etiolgico foi estabelecido. Devese administrar dosagens relativas avaliao do quadro clnico que proporcional a exposio. Diferenas na durao do efeito do antdoto em relao ao do agente deve ser considerada no esquema teraputico. Alguns antdotos podem ser txicos, principalmente se administrados na ausncia ou mesmo na presena de concentraes muito baixas dos toxicantes. Antdotos podem ser considerados ineficazes se a descontaminao geral do animal no for realizada. Os antdotos podem atuar via mecanismos especficos como: Antdotos qumicos: formao de complexos inativos e estveis at a excreo; converso metablica, aumentando a biotransformao. Antdotos farmacolgicos: preveno da ativao de toxicantes (formao de metablitos txicos); aumento da excreo ; antagonismo competitivo pelos receptores farmacolgicos; bloqueio de receptores responsveis pelo efeito txico; restabelecimento da funo normal. Na Tabela 7 encontram-se referidos os antdotos mais comuns utilizados no tratamento das intoxicaes em veterinria. Tabela 6. Principais antdotos utilizados em veterinria. Agente toxicante Paracetamol Carbamatos Organofosforados Arsnico Cianeto Chumbo Cobre em ces Cobre em ovinos Antdoto Acetilcistena Atropina Pralidoxima* (ou atropina) Dimercaprol (BAL)* Nitrito ou tiossulfato de sdio EDTA clcio-dissdico* cido ascrbico ou D-penicilamina* Molibdato de amnio* ou tetratiomolibidato de amnio* (aguda) Vitamina K -fitomenandiona

Anticoagulantes cumarnicos ou indanedinicos Metemoglobinemia em gatos cido ascrbico Nitrato, nitrito ou cloreto em grandes animais Azul de metileno Peonha de serpentes Soro antiofdico especfico Zinco EDTA clcio-dissdico* * No aprovado pelo FDA para uso em animais.

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7 Epidemiologia das intoxicaes em veterinria no Rio Grande do Sul O Centro de Informao Toxicolgica do Rio Grande do Sul registrou em 2006, 830 casos de intoxicao em vrias espcies animais, envolvendo diferentes classes de agentes toxicantes. Conforme os dados apresentados nas Tabelas 7, 8, 9, 10, 11, 12 e 13, pode-se verificar uma maior incidncia de acidentes txicos em pequenos animais, com pesticidas agrcolas e domsticos, medicamentos e produtos de uso veterinrio. Dos 830 casos de intoxicao animal registrados no CIT/RS em 2006, 328 foram por pesticidas, 205 por medicamentos e produtos veterinrios, 77 por animais, 73 por plantas, 62 por domissanitrios, 65 por qumicos industriais e 21 por outros agentes incluindo metais, drogas, cosmticos, aditivos alimentares entre outros. Dentre as diferentes espcies, os ces foram envolvidos em 653 casos e os gatos em 111. Estes dados fundamentam um maior conhecimento sobre os agentes txicos mais envolvidos nos acidentes em nosso meio, facilitando o diagnstico, tornando o atendimento mais rpido e tambm, possibilitando aes preventivas no que se refere educao dos proprietrios para a questo do risco txico. Tabela 7. Casos de intoxicao animal por pesticidas agrcolas e domsticos registrados em 2006 no CIT/RS. Sem Classe Pesticidas Aves Bovinos Caninos Felinos Outros definio Total Pesticidas Agrcolas Fungicida 5 5 Herbicidas 1 8 1 10 Mistura de pesticidas Carbamatos 3 2 5 Organoclorados 1 2 3 Organofosforados 2 9 1 1 1 14 Piretrides 4 1 2 7 Preservativos de madeira Ignorados Outros pesticidas 1 21 22 Pesticidas mais outros produtos Total agrcola 4 51 5 3 3 66 Pesticidas Domsticos Repelente de inseto 2 2 Organoclorados Organofosforados/ Carbamatos 16 5 1 1 23 Piretrides 49 21 1 2 73 Ignorados Outros pesticidas 56 1 1 1 59 Mistura de pesticidas Pesticidas mais outros produtos Total domstico 123 27 3 4 157 Total raticidas 6 1 89 5 2 2 105 Total de pesticidas 6 5 263 37 8 9 328

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Tabela 8. Casos de intoxicao animal por medicamentos e produtos de uso veterinrio registrados em 2006 no CIT/RS. Classe Medicamentos Analgsico Anestsico local Antiandrognico Antiasmtico Antibitico Anticonvulsivante Antidepressivo Antidiarrico Antiemtico Antifngico Antiinfecciosos Antiinfecciosos do trato gastrintestinal Antiinflamatrio no esteride Antilipmicos Antiobesidade Antiprotozorio sistmico Anti-sptico tpico Antivertiginoso Benzodiazepnico Catrticos Corticosterides de uso sistmico Diurticos Estimulantes do SNC Frmacos antienxaqueca Frmacos para hipotireoidismo Frmacos para resfriado Frmacos para pele, mucosas e fneros Frmacos que afetam a calcificao Hormnios sexuais e anlogos Neurolpticos Sedativo-hipntico Vasodilatador Vitaminas Total medicamentos Aves Bovinos Caninos 7 1 1 3 3 2 1 5 2 1 7 3 2 1 1 5 1 12 3 1 1 2 2 1 1 9 2 4 1 1 4 89 Felinos 1 Sunos Sem definio Total 8 1 1 1 5 4 2 1 6 2 1 14 3 2 3 2 5 1 12 3 1 1 2 2 1 1 11 2 1 4 1 1 4 109

1 2 1

1 1 6

1 1

2 1

1 Bovinos 1

16

Produtos veterinrios Medicamentos veterinrios Pesticida veterinrio Produtos veterinrios - outros Total de produtos veterinrios Total de medic. e produtos veterinrios

Caninos Felinos Outros 13 2 2 53 5 6 6 4 1 1 72 11 9 2 161 27 11

1 Sem definio Total 18 3 67 11 3 96 4 205

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Tabela 9. Casos de intoxicao animal por animais venenosos, peonhentos e outros animais registrados em 2006 no CIT/RS. Classe Insetos/peonhentos/venenosos Lagarta peonhenta/venenosa Total de insetos e outros animais Loxosceles Phoneutria Aranha ignorada Bothriurus sp Tityus sp Escorpio outro Total de aracndeos Bothrops Crotalus Micrurus Total de ofdios Animais peonhentos/venenosos ignorado Animais peonhentos/venenosos outros Total de animais venenosos, peonhentos e outros Aves Bovinos Caninos Felinos Outros Total 6 1 7 1 1 6 2 8 1 1 3 1 4 6 6 4 1 5 1 1 1 1 15 1 2 18 1 26 4 31 1 1 1 1 2 1 27 1 5 34 7 9 1 64 4 1 8 9 77

Tabela 10. Casos de intoxicao animal por plantas txicas registrados em 2006 no CIT/RS. Classe Cogumelos/Fungos txicos Plantas outras Plantas medicinais Plantas txicas Total de plantas Aves Bovinos Caninos 2 3 1 1 2 2 52 57 Felinos Outros Sem Total identificao 2 5 1 65 73

2 1 7 10

2 2

1 1

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Tabela 11. Casos de intoxicao animal por domissanitrios registrados em 2006 no CIT/RS. Classe Alvejantes / desinfetantes liberadores de cloro Desentupidor Desinfetantes - antimicrobianos / aldeidos Desinfetantes - antimicrobianos / fenlicos Desinfetantes - antimicrobianos / quaternrios Detergentes, limpadores e congneres leos saneantes domissanitrios Propelentes - uso domstico Removedores de mancha / ferrugem Sapleos / saponceos Tensoativo aninico Tensoativo catinico Total de domissanitrios Caninos 15 5 4 5 3 1 1 1 1 6 1 43 Felinos 2 1 7 1 2 1 1 1 3 1 Outros Sem identificao 1 1 Total 19 6 4 12 4 1 2 2 1 2 8 1 62

1 15

Tabela 12. Casos de intoxicao animal por produtos qumicos industriais registrados em 2006 no CIT/RS. Classe Aves lcalis Colas e adesivos Combustveis Gases Hidrocarbonetos leos Poeiras Polmeros Produtos qumicos - Outros Tintas/ Vernizes Total de qumicos industriais Caninos 1 3 3 5 17 1 3 4 2 7 1 45 Felinos 1 1 2 12 Outros 1 Sem definio Total 6 4 2 17 18 1 3 4 3 7 65

17

Tabela 13. Casos de intoxicao animal por outros agentes toxicantes registrados em 2006 no CIT/RS. Classe Metais/chumbo Drogas de abuso Cosmticos/toalete Diverso/ recreao Miscelnea Outros Total de outros agentes Caninos 1 7 2 1 4 5 20 Felinos Total 1 7 2 1 5 5 21

1 1

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8. Aspectos clnicos das intoxicaes 8.1 Animais peonhentos e venenosos Animais venenosos so aqueles capazes de produzir substncias ativas ou txicas em quantidade suficiente para causar efeitos nocivos no homem e/ou nos animais, quando expostos. Animais peonhentos, assim como os venenosos, produzem substncias txicas, alm disso, possuem estruturas capazes de inocular as toxinas. Dentre os animais peonhentos e/ou venenosos de interesse toxicolgico em veterinria podese citar: serpentes, aranhas, escorpies, lagartas, abelhas e sapos. Para o estabelecimento do diagnstico correto so necessrios conhecimentos sobre habitats, hbitos alimentares, comportamento destes agentes txicos em potencial, bem como os sinais deixados pelo contato e os sinais clnicos decorrentes dos efeitos da ao do veneno. 8.1.1 Artrpodos 8.1.1.1 Aracndeos Apesar de raros os acidentes com aracndeos em animais, exceto os causados pela aranha armadeira, devido a sua agressividade natural e tamanho razovel atrai pequenos animais bravos ou curiosos, o conhecimento das espcies potencialmente nocivas existentes em nosso meio pode ser til. Aranhas Dentre as espcies peonhentas comuns no Rio Grande do Sul, pode-se citar: aranha caranguejeira, Gramostola sp (Figura 4): de grande porte, com o corpo coberto por plos capazes de provocar dermatite urticante, se em contato com a pele, ou mesmo dor no local da picada pelas enormes quelceras que a mesma apresenta;

Figura 4. Aranha Gramostola sp. (carangujeira).

aranha-de-jardim, Lycosa sp (Figura 5): caracterizada por apresentar um desenho em forma de seta no abdmen, e um veneno de baixa toxicidade;

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Figura 5. Aranha Lycosa sp. (aranha-de jardim).

aranha marrom, Loxosceles sp. (Figura 6): de pequeno porte, no agressiva, mas com veneno de alta toxicidade, entretanto, s pica quando comprimida, o que limita o nmero de acidentes com animais; a toxina potente causando uma necrose intensa no local da picada, que se inicia cerca de 12 horas aps o acidente, podendo evoluir clinicamente para um quadro de insuficincia renal.

Figura 6. Aranha Loxosceles sp. (aranha marron).

Aranha armadeira, Phoneutria sp. (Figura 7): extremamente agressiva, podendo saltar cerca de 30cm, veneno bastante txico, podendo causar acidente fatal em pequenos animais; Sinais clnicos: dor intensa no local da picada (freqentemente boca ou focinho), lacrimejamento, midrase, sialorria, tremores musculares, ataxia, prostrao, vmitos e priapismo (ereo do pnis por vrias horas), ejaculao, dispnia, fezes sanguinolentas e ocasionalmente, morte; Tratamento: no h soro especfico disponvel para utilizao em animais no Brasil, a terapia de suporte inclui: analgesia potente, antiinflamatrio (no esteride ou corticosteride), suporte respiratrio e hidreletroltico.

Figura 7. Aranha Phoneutria sp (armadeira).

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Escorpies Dentre as espcies peonhentas de escorpies, pode-se citar: Bothriurus bonariesis (Figura 8), Tityus costatus (F 9A), Tityus serrulatus (Figura 9B). Apesar dos acidentes com escorpies em animais serem extremamente raros, relevante conhecer as espcies e seu potencial de toxicidade. O escorpio preto, Bothriurus sp. caracterizado por apresentar pinas robustas e unhas curtas, j as espcies de Tityus, apresentam pinas finas e unhas longas, sendo que no T. costatus o corpo amarelo coberto por manchas marrons. Nos casos de acidentes com os escorpies nativos do Rio Grande do Sul como Bothriurus sp ou Tityus costatus, devido baixa toxicidade do veneno, o principal sintoma a dor local; esta pode ser tratada com analgsicos ou mesmo anestsicos locais. No caso de acidentes com Tityus serrulatus (no nativo do RGS), que pode ocorrer quando estes animais entram no Rio Grande do Sul atravs de carregamento de frutas, lenha,... pode ocorrer quadro clnico severo de neurotoxicidade perifrica e morte; no h soro especfico disponvel para administrao em animais no Brasil, em caso de acidente o tratamento deve ser sintomtico e incluir: analgsicos potentes para o controle da dor, evitando o choque neurognico.

Figura 8. Escorpio Bothriurus bonariesis (escorpio preto).

A
Figura 9. A - Tytius costatus; B - Tytius serrulatus (escorpio amarelo).

8.1.1.2 Insetos Ordem Hymenoptera Acidentes com abelhas, marimbondos e vespas de modo geral so benignos, entretanto, se estes envolverem um nmero elevado de picadas como no caso de abelhas africanas, quase sempre so fatais. Usualmente estes animais ficam em locais afastados e sua presena pode ser identificada pela presena de ninhos de barro ou colmias (incluindo as caixas de criao comercial). Os acidentes ocorrem freqentemente quando os animais perturbam os ninho, ou mesmo quando fuam nas flores ou em resduos de alimentos doces. As substncias no esto bem identificadas, mas podem conter cido frmico. Todas as espcies animais so suscetveis. Sinais clnicos: edema e calor local, dor leve intensa, se mltiplas picadas, anafilaxia e morte.

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Diagnstico: pela presena dos ferres ou sinais clnicos caractersticos, associados a possvel presena destes animais no ambiente. As leses persistem por 24 48h. Tratamento: suporte de emergncia em caso de choque anafiltico com respirao assistida, epinefrina, corticosterides e analgsicos; em casos leves a moderados, a terapia inclui antihistamnicos, corticosterides, analgsicos e em alguns casos, anestsicos locais.

A
Figura 10. A Apis mellifera (Abelha); B - vespa. 8.1.2

Sapos A exposio ocorre principalmente quando ces atacam e mordem os sapos. As substncias txicas com ao glicosdica cardioativa e ocitcica so as bufotoxinas e bufoteninas. As toxinas produzidas pelas glndulas de veneno distribudas ao longo da superfcie dorsal do sapo so liberadas ao serem comprimidas durante a mordida, e o veneno que rapidamente absorvido pela mucosa oral, provocando alteraes digestivas, cardacas e neurolgicas. Sinais clnicos: salivao, vmitos, midrase, hipertenso, fibrilao ventricular, agitao da cabea, incoordenao motora, desorientao e convulses, a fibrilao ventricular precede a morte por insuficincia cardaca. Diagnstico: histrico de exposio ao animal e sinais clnicos caractersticos. Laboratorial: aumento de hematcrito, hiperpotassemia, hipercalcemia, hiperglicemia e reduo dos leuccitos. Tratamento: descontaminar enxaguando abundantemente a boca e administrando carvo ativado; administrar propranolol (2 mg/kg) para controlar a arritmia cardaca e atropina para controlar a broncoconstrio e sialorria; diazepam no controle das convulses.

Figura 11. Sapo da espcie Chaunus ictericus.

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8.1.3 Ofdios As principais serpentes peonhentas do Rio Grande do Sul so: Bothrops jararaca, B. alternatus, B. cotiara, B. neuwied, Crotalus durissus terrificus, Micrurus altirostris e M. frontalis. Na Figura 12 pode-se observar as caractersticas principais das serpentes peonhentas como a presena de fosseta loreal (orifcio sensorial trmico), localizada entre as narinas e os olhos e as presas inoculadoras de veneno anteriores e flexveis (proterglifas). Exceto as serpentes do gnero Micrurus que no apresentam a fosseta loreal e tm suas presas inoculadores pequenas, fixas e mais laterais (opistglifas). Estas ltimas so identificadas pelos anis completos brancos, vermelhos e pretos, alternadamente dispostos ao redor de seu corpo (Figura 13). Na Figura 14, encontram-se as serpentes do gnero Bothrops, sendo a Figura 14A, representativa da B. alternatus que possui seus desenhos em forma de gancho de telefone e a B. jararaca (Figura 14B), em forma de V. A Figura 15 apresenta a serpente Crotalus durissus terrificus com a sua caracterstica distintiva, o chocalho na ponta da cauda.

A
Figura 12. Caractersticas de ofdio peonhento: presas inoculadoras (A) e fosseta loreal (B).

Figura 13. Caractersticas das serpentes do gnero Micrurus: presas inoculadoras e anis completos ao redor do corpo.

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A B Figura 14. Serpentes do gnero Bothrops: A B. alternatus e B B. jararaca.

Figura 15. Caractersticas da serpente Crotalus durissus terrificus. O habitat e os hbitos destas serpentes influenciam na casustica. As serpentes do gnero Bothrops so as responsveis pela maioria dos acidentes ofdicos, por serem agressivas e de habitats diversos, incluindo as margens de rios, periferia de cidades, locais ricos em roedores (alimento). J as serpentes do gnero Crotalus, apesar de agressivas, habitam campos abertos, reas secas, arenosas e ao sentirem-se ameaadas emitem um rudo caracterstico com o chocalho, sendo assim, o ndice de acidentes com estas menor do que as anteriores. Mas sem dvida nenhuma os menos freqentes, so os acidentes por serpentes do gnero Micrurus, devido a sua docilidade, sua preferncia por ambientes florestais, buracos, tocas, ou mesmo pela caracterstica de suas presas e tamanho da sua boca, que dificulta a picada na maioria das regies do corpo e frente a muitas espcies. Os acidentes com serpentes em veterinria podem sofrer variaes relativas espcie animal exposta. A sensibilidade dos animais domsticos foi avaliada experimentalmente por Arajo e Belluomini (1960), frente ao veneno de serpentes: Bothrops jararaca, B. alternatus, B. cotiara, B. neuwied, Crotalus durissus terrificus, entre outras. Eqinos, ovinos e bovinos foram os mais sensveis e revelam altas taxas de mortalidade, seguidos pelos caprinos, caninos, coelhos e sunos, sendo os gatos, os mais resistentes. O edema do envenenamento botrpico foi caracterstico e acentuado no

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local da picada na maioria das espcies, exceto nos gatos. No envenenamento crotlico, o edema foi mais discreto em eqinos e caninos. A necrose foi observada no envenenamento botrpico em bovinos, caninos e coelhos. O risco de vida para bovinos foi maior nos acidentes por Crotalus durissus terrificus, Bothrops cotiara e B. alternatus, pela capacidade de inoculao de grandes volumes de veneno. Segundo Bicudo (1994), os fatores mais relevantes destes acidentes incluem: a espcie de serpente e o tamanho da mesma (quantidade de veneno inoculado), a espcie animal envolvida (incluindo o porte do animal), o local da picada, a intensidade dos sintomas e o tempo decorrido entre o acidente e o atendimento. O mecanismo de ao complexo e nas Bothrops, inclui respostas a fraes proteolticas (proteases, hialuronidases e fosfolipases), responsveis pelo edema intenso e pela necrose, fraes prcoagulantes (que ativam o fator X e a protrombina, alm de promover a converso do fibrinognio em fibrina) e fraes hemorrgicas (hemorraginas). Nos acidentes crotlicos, h um importante componente miotxico (que provoca rabdomilise com liberao de mioglobina para o soro e posteriormente, para a urina) alm de um neurotxico (crotoxina que inibe a liberao pr-sinptica da acetilcolina gerando um bloqueio neuromuscular), e um componente coagulante (que promove a converso do fibrinognio em fibrina e secundariamente, esgota este fator de coagulao, conduzindo a hemorragias). Nos acidentes elapdicos, os principais componentes so neurotxicos: neurotoxinas de ao pr-sinpticas (semelhante a crotoxina, que inibe a liberao pr-sinptica da acetilcolina gerando um bloqueio neuromuscular) e ps-sinpticas (bloqueadores neuromusculares de ao curarisante). Acidente botrpico Sinais clnicos: h edema intenso no local da picada, sendo este diretamente proporcional ao tempo transcorrido desde a inoculao, hemorragia no local da picada, e em casos mais graves, gengivorragia, epistaxe, hemoptise, hemorragias subcutneas, intracavitrias e intracraniana; nestes casos a anemia evidente; a dor no local da picada intensa fazendo com que animais picados nos membros fiquem imveis ou claudiquem; picadas no focinho podem gerar dificuldade respiratria em funo do edema; as marcas da picada podem no ser observadas em funo da pelagem ou do edema, outras vezes esta se torna evidente quando a hemorragia se inicia; a necrose um sinal tardio. Acidente por Bothrops filhote pode cursar com edema leve e sem sinal caracterstico da picada, mas com hemorragia. Diagnstico: inclui os sinais clnicos caractersticos (edema, hemorragia,...) associados aos detalhes referentes epidemiologia, habitat e hbitos deste gnero e as alteraes hematolgicas. Laboratorial: o tempo de coagulao est aumentado e as plaquetas reduzidas; importante avaliar a creatinina como forma de monitorar a funo renal. Tratamento: soro antiofdico (Bio-Vet ou Vencofarma) polivalente (antibotrpico e anticrotlico), administrado por via IV, em doses suficientes para neutralizar a ao da peonha inoculada (em mdia: Bothrops jararaca: 65mg; B. alternatus: 130mg e Crotalus: 50mg - Bio-Vet/50 mL: poder neutralizante de 50mg de veneno botrpico e 50mg de crotlico; Vencofarma/10 mL: poder neutralizante de 20mg de veneno botrpico e 10mg de crotlico) e portanto, no se relacionando com a massa corporal do animal; as medidas de suporte incluem auxlio respiratrio, anti-histamnicos, analgsicos, antimicrobianos, terapia hidreletroltica e transfuso sangnea (se necessria, somente aps soroterapia especfica). Acidente crotlico Sinais clnicos: prostrao, parestesias, um sinal caracterstico a oftalmoplegia (paralisia dos msculos do globo ocular), facilmente evidenciada rotando-se a cabea dos bovinos, circunstncia na qual se espera que o globo ocular gire em sentido oposto, mas este gira no mesmo sentido, no revelando nitidamente a esclertica; urina cor de caf devido a mioglobinria em decorrncia da rabdomilise; os sinais locais so pouco evidentes e a dor de difcil interpretao uma vez que a resposta muscular encontra-se prejudicada. Diagnstico: inclui os sinais clnicos caractersticos (prostrao, parestesia, oftalmoplegia,...) associados aos detalhes referentes epidemiologia, habitat e hbitos deste gnero e as alteraes hematolgicas e urinrias. Laboratorial: creatininaquinase aumentada; a creatinina pode aumentadar em decorrncia de uma possvel insuficincia renal.

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Tratamento: soroterapia antiofdica como citada para acidente botrpico e medidas de suporte que incluem: lubrificao ocular e bucal, alternar decbito, terapia hidreletroltica, alcalinizar o pH urinrio (7 ou mais) para evitar precipitao da mioglobina nos tbulos renais. Acidente elapdico Sinais clnicos: prostrao, fraqueza muscular, oftalmoplegia, paralisia flcida do diafragma, com dispnia seguida de morte por parada respiratria. Diagnstico: inclui os sinais clnicos caractersticos (prostrao, fraqueza muscular, oftalmoplegia, dispnia,...) associados aos detalhes referentes epidemiologia, habitat e hbitos deste gnero. Tratamento: no h soroterapia especfica disponvel; especial ateno deve ser dada ao sistema respiratrio. 8.2 Plantas txicas ornamentais e de interesse pecurio Plantas txicas so aquelas que contm produtos fisiologicamente ativos ou substncias txicas em quantidade suficiente para causar efeitos nocivos no homem e/ou nos animais. Estas podem ser nativas ou cultivadas, ornamentais, medicinais ou invasoras. Tanto as ornamentais quanto s de interesse pecurio so influenciadas por determinados fatores capazes de interferir na toxicidade: tipo de solo; nutrientes; fase evolutiva; clima; parte da planta. Dentre os aspectos que caracterizam as plantas txicas, pode-se citar: algumas plantas necessitam de grandes quantidades ou exposio prolongada para manifestar efeitos txicos; os efeitos nem sempre so precoces; nem sempre as plantas causam alteraes digestivas como timpanismo / diarria; No estudo das plantas txicas relevante atentar para os seguintes critrios de classificao: regional; conforme o quadro clnico-patolgico; conforme as famlias botnicas; conforme os princpios ativos txicos. Para o estabelecimento do diagnstico correto so importantes: cuidados com os nomes populares; quadros clnicos vagos; inspeo da pastagem; exames laboratoriais como exame de contedo gstrico, histopatolgico; ensaios biolgicos em animais modelo; identificao botnica. Oxalato de clcio Famlia: Araceae Diefenbachia picta - Comigo-ningum-pode Anturium andraeanum Antrio vermelho Anturium ornatum Antrio branco Zantedeschia aethiopica - Copo-de-leite Princpio ativo: rfides de oxalato de clcio. Quadro clnico: dor em queimao, edema de mucosas, sialorria, disfagia, nuseas e vmitos. dermatite de contato. contato com olhos: lacrimejamento, fotofobia. Tratamento: demulcentes, analgsicos, corticosterides.

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Famlia Liliaceae Sansevieria trifasciata Espada-de-So Jorge Caractersticas: folhas grandes, eretas, verde-escuras, com faixas transversais ou manchas brancas; flores verde-claras. Princpio ativo: rfides de oxalato de clcio. Quadro clnico: dor em queimao, edema de mucosas, sialorria, disfagia, nuseas e vmitos. dermatite de contato; contato com olhos: lacrimejamento, fotofobia. Tratamento: demulcentes, analgsicos, corticosterides.

A
Figura 16. A - Dieffenbachia sp. (Comigo-ningum-pode); B Zantedeschia aethiopica (Copo-deleite). Glicosdeos cardiotxicos Famlia: Scrophulariaceae Digitalis purpurea - Dedaleira Princpio ativo: digitoxina Quadro clnico: nuseas, vmitos, clicas abdominais, diarria muco-sanginolenta; alteraes visuais, tontura, perda do equilbrio, midrase, sonolncia e coma; alteraes de ritmo cardaco, taquicardia, fibrilao atrial ou ventricular e hipotenso. Tratamento: sintomtico: antiespasmdicos, antiemticos e antiarrtmico; protetor de mucosas. Monitoramento cardaco. Famlia: Apocynaceae Nerium oleander - Espirradeira Princpios ativos: oleandrina, nerioside e folineurina. Thevetia neriifolia Chapu-de-napoleo Quadro clnico: semelhante intoxicao digitlica; distrbios neurolgicos e cardiovasculares. Tratamento: sintomtico: antiespasmdicos, antiemticos e antiarrtmico; protetor de mucosas. Monitoramento cardaco.

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Figura 17. A Nerium oleander (Espirradeira); B Digitalis purprea (Dedaleira). Ltex irritante Famlia Euphorbiaceae Euphorbia pulcherrima - Bico-de-papagaio Euphorbia cotinifolia - Leiteiro-vermelho Euphorbia milii - Coroa-de-Cristo Caractersticas da Coroa-de-Cristo: arbusto com numerosos espinhos rgidos e pontiagudos,flores pequenas e avermelhadas, dispostas na ponta dos ramos. Princpio ativo: latex irritante. Quadro clnico: eritema, vesculas e pstulas,edema de lbios e lngua, dor, sialorria, leses de mucosas faringiana, esofgica e gstrica; disfagia, nuseas e vmitos; conjuntivite. Tratamento: demulcentes, analgsicos, corticosterides.

A
Figura 18. A Euphorbia milli (Coroa-de-cristo); B Euphorbia pulchemima (Bico-de-papagaio).

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Glicosdeos saponnicos Famlia Meliaceae Melia azedarach - Cinamomo Caractersticas: flores pequenas, de colorao lils; fruto ovide, pequeno, mole, esbranquiado e de cheiro desagradvel. Princpio ativo: glicosdios saponnicos. Quadro clnico: distrbios gastrintestinais, distrbios hidroeletrolticos; confuso mental, ataxia, torpor e coma. Tratamento: esvaziamento gstrico; demulcentes, hidratao, benzodiazepnicos, se convulses.

Figura 19. Melia azedarach (Cinamomo) Glicosdeos cianognicos Famlia Euphorbiaceae Manihot esculenta - Mandioca-brava Princpio ativo: linamarina e lotaustralina. Quadro clnico: distrbios gastrintestinais, neurolgicos e respiratrios. Tratamento: nitrito de amila (inalao); nitrito de sdio 3%; hipossulfito de sdio 25%; azul de metileno: 1 -2 mg IV; corrigir distrbios hidroeletrolticos. Hydrangea macrophylla - Hortncia Quadro clnico: distrbios gastrintestinais; neurolgicos; respiratrios. Tratamento: nitrito de amila (inalao); nitrito de sdio 3% ; azul de metileno: 1 -2 mg IV; hipossulfito de sdio 25%; corrigir distrbios hidroeletrolticos.

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Figura 20. Manihot esculenta (Mandioca-brava). Toxalbumina Famlia Euphorbiaceae Ricinus communis - mamona Caractersticas: arbusto com at 2m de altura, folhas palmatiformes, com bordas serradas,verdes ou vermelho-escuras, frutos arredondados e espinhosos. Princpios ativos: toxoalbumina ricina, alcalide ricinina. Quadro clnico: nuseas, queimao na garganta, vmitos, diarria mucossanguinolenta e clicas abdominais; reaes alrgicas: conjuntivite, coriza, dermatites, eczemas, asma brnquica. Tratamento: esvaziamento gstrico, carvo ativado, fluidoterapia e tratamento das reaes alrgicas.

Figura 21. Ricinus communis (Mamona). Uroshiois Famlia: Anacardiaceae Lithraea brasiliensis aroeira-brava Princpio ativo: uroshiois - substncias hipersensibilizantes. Quadro clnico:dermatite, eritema, ppulas, vesculas e prurido intenso. Tratamento: para reao alrgica anti-histamnicos, corticosterides, antisspticos e analgsicos. No caso de ingesta, usar demulcentes. Famlia Euphorbiaceae Jathropa curcas - Pinho-de-purga Caractersticas: arbusto, com flores esverdeadas e fruto esfrico de cor amarelo-esverdeada. Princpio ativo: cursina. Quadro clnico: nuseas, queimao na garganta, vmitos, diarria mucossanguinolenta e clicas abdominais; reaes alrgicas: conjuntivite, coriza, dermatites,eczemas, asma brnquica. Tratamento: esvaziamento gstrico e hidratao para evitar distrbios hidroeletrolticos e diminuir os riscos de complicaes cardiovasculares, neurolgicas e renais; usar antiespasmdicos, antiemticos e

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antidiarricos; leses na pele e mucosas - descontaminao local e usar solues antisspticas suaves, analgsicos, anti-histamnicos ou corticides. Famlia: Solanaceae Atropa belladona Dama da noite Datura stramonium Figueira-do-inferno Brugmansia suaveolens - Cartucheira Princpios ativos: daturina (hioscina, atropina) Quadro clnico: anticolinrgico - diminuio das secrees, pele e mucosas secas, midrase, com viso alterada; vmitos e alterao de conduta. Tratamento: esvaziamento gstrico, carvo ativado; sintomtico com parassimpaticomimticos (fisostigmina), sedativos e compressas frias.

Figura 22. A - Lithraea brasiliensis (Aroeira-brava); B - Jathropa curcas (Pinho-de-purga); C Datura stramonium (Figueira-do-inferno); D - Brugmansia suaveolens (Cartucheira). Alcalides pirrolizidnicos Famlia Compositae Senecio brasiliensis - Maria-mole Princpio ativo: alcalides pirrolizidnicos. Quadro clnico: anorexia, nuseas, vmitos, dor e distenso abdominal, flatulnca, edema de membros inferiores, diarria, ascite, hepatoesplenomegalia, cirrose heptica, ictercia, hemorragia gastrointestinal e encefalopatia; emagrecimento, agressividade, incordenao motora, tenesmo e fotossensibilizao; alteraes centrais so mais evidentes nos eqinos que nos bovinos. Anlise laboratorial: elevao de bilirrubinas e transaminases: gamaglutamil transferase pode ser eficiente para estabelecimento de prognstico nos animais assintomticos. Os alcalides pirrolizidnicos podem ser detectados por cromatografia de camada delgada. Elevao da enzima glutamato desidrogenase, da fosfatase alcalina e da gamaglutamil transferase. Patologia: ocluso dos pequenos ramos da veia heptica por colgeno e formao de canalculos pelos sinusides dilatados; congesto macia centrolobular e necrose; leses primrias no fgado que

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consistem em fibrose portal, megalocitose, necrose hepatocelular, hiperplasia do ducto biliar, estase biliar e hiperplasia nodular; cirrose heptica e edema pulmonar. Tratamento: no fazer esvaziamento gstrico; corticides. Famlia Borafinaceae Symphytum officinale - Confrei Caractersticas: erva perene de 50 cm de altura; folhas grandes, alternadas, ovaladas, grossas e pilosas. Quadro clnico: distrbios gastrintestinais; hepatite txica (cirrose, ictericia e encefalopatia); fotossensibilizao. Anlise laboratorial: elevao das aminotransferases, hipoglicemia, hiperbilirrubinemia e coagulopatias. Tratamento: esvaziamento gstrico; correo da hipoglicemia; controlar a ascite; necrose heptica severa sinal de mau prognstico e o manejo o mesmo dispensado para a insuficincia heptica fulminante.

Figura 23. A - Senecio brasiliensis (Maria-mole); B - Symphytum officinale (Confrei). Plantas calcinognicas Famlia Solanaceae Solanum malacoxylon Caractersticas: intoxica bovinos, ovinos, eqinos e sunos. Princpio ativo: glicosdeo esteroidal, que aps hidrlise, torna-se um metablito ativo da Vitamina D. Quadro clnico: incio dos sintomas em poucas semanas aps o comeo da ingesto, hipercalcemia e hiperfosfatemia ocorrem rapidamente (horas). A morte pode ocorrer em um ms (0,8g/kg/semana) ou at anos (0,16g/kg/semana). Alguns animais podem mostrar apenas perda de massa corporal progressiva e dificuldades de locomoo, que se prolongada o animal acaba morrendo. Diagnstico diferencial: Nierembergia veitchii e Vitamina D. Patologia: calcificao da aorta abdominal e artria renal, calcificao da mitral e vlvula artica, calcificao pulmonar. Tratamento: no h tratamento especfico; retirar da exposio (recuperao parcial). Nierembergia veitchii Caractersticas: rasteira e por isso intoxica ovinos. Princpio ativo: com atividade de Vitamina D. Quadro clnico: incio tardio (30 60d), hiperexcitabilidade, depravao do apetite, diarria ocasional. rigidez e dificuldade locomotora; dispnia, pulso arterial palpvel evoluo crnica (morte em 4 meses). A morte ocorre geralmente aps 2-3 meses de curso clnico, no entanto alguns animais

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podem morrer subitamente se exercitados vigorosamente. Alguns rebanhos podem mostrar apenas perda de peso e falha em ganhar peso de outubro a fevereiro e se recuperam aps o desaparecimento da planta. Diagnstico diferencial: Solanum malacoxylon, Vitamina D Patologia: calcificao da aorta abdominal e artria renal, calcificao da mitral e vlvula artica, calcificao pulmonar. Tratamento: no h tratamento especfico; retirar da exposio (recuperao parcial). Tricotecenos Famlia Compositae Baccharis coridifolia - Mio-mio Princpio ativo: tricotecenos (roridinas A e E) absorvidos do solo. Quadro clnico: efeito custico em mucosas do tubo digestivo de bovinos e ovinos; maior toxicidade na florao; anorexia, timpanismo, ausncia de movimentos ruminais; tremores musculares, gemidos (dor). Morbi-mortalidade altas. Patologia: congesto, hemorragia e edema das paredes do intestino, dos pr-estmagos; degenerao e necrose de epitlios. Tratamento: carvo ativado, remoo da pastagem contaminada, tratar o timpanismo. Saponinas Famlia Leguminosae Enterolobium spp - Timbava, Orelha-de- macaco Princpio ativo: saponina esteroidal. Quadro clnico: anorexia, fezes escuras e ftidas; ictercia mucosa ocular; leso de pele; bovinos so sensveis em condies naturais e experimentais (favas maduras tem boa palatabilidade). Patologia: degenerao heptica e de tbulos renais; hiperemia medular renal. Anlise: bilirrubinria alta e filoeritrina srica alta. Tratamento/ controle/profilaxia: sombra, cicatrizantes, antidiarricos. Tiaminase Pteridium aquilinum -Samambaia, Samambaia-do-campo Caractersticas: planta rizomatosa, bipinada, com folhas de aspecto coriceo; fololos lobados e em sua parte ventral mostra colees de esporos marrons arranjados linearmente; a largura da planta de 60-120cm e a altura de 60-180cm; habitat: cosmopolita, principalmente em solos arenosos e cidos. Princpios ativos: toxinas, agudamente suprimem a medula ssea (10 g/kg/dia por 3-4 semanas da planta verde); cronicamente, causam hematria enzotica (bovinos ingerindo <10 g/kg/dia, por cerca de dois anos). Quadro clnico da forma aguda: aplasia de medula, anemia, hemorragias; bovinos afetados desenvolvem febre (41-42C), palidez e petquias nas mucosas. O curso clnico agudo e muitos bovinos podem ser encontrados mortos; aqueles que vivem mais tempo acabam sucumbindo aos efeitos da hemorragia ou de anemia aplstica. Diagnstico diferencial: ingesto crnica de polpa ctrica, intoxicao por trevo doce, pasteurelose. Quadro clnico da forma crnica - hematria enzotica: neoplasia de bexiga, hematria intermitente ou contnua e acabam morrendo, devido anemia; carcinoma de clulas escamosas do trato digestivo, a morte devido extrema caquexia o desenlace invarivel nessa forma de intoxicao. Diagnstico diferencial (hematria): leptospirose e intoxicao por Brachiaria radicans. Patologia: massas teciduais de crescimento invasivo, nodulares, amareladas ou amarelo-acinzentadas e ulceraes so encontradas na base da lngua, crdia, esfago e rmen; carcinoma de clulas

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escamosas: massa nodular invasiva na base da lngua, massa nodular invasiva e ulcerada na entrada do rmen. Pteridim aquilinum em eqnos: Princpio ativo: tiaminase tipo I - provoca a inativao da tiamina. Quadro clnico: incoordenao motora, tremores musculares, convulses e sonolncia. Tratamento: Vitamina B1 (100mg/dia, durante uma semana). Cogumelos Amanita phalloides Caractersticas: chapu ovide e convexo, de 5 10cm de dimetro, cor verde-amarelado ou esbranquiado. Princpio ativo: falotoxina, amatoxinas Quadro clnico: distrbios digestivos, cimbras, prostrao, posteriormente hepatite, nefrite tubular. Tratamento: sintomtico com dieta hiperproteica, hipercalrica, hipogordurosa; correo dos distrbios hidroeletrolticos. Psilocibe sp Caractersticas: fungo conhecido como cogumelo mgico devido aos efeitos alucingenos que provoca; cresce preferencialmente sobre estrume bovino. Princpio ativo: derivados triptamnicos, responsveis pela sua neurotoxicidade. Quadro clnico: em eqinos observou-se dor, clicas, comportamento agressivo e excitabilidade; em ces, alm dos sintomas observados nos eqinos, temos afetado o sistema de regulao da temperatura corporal. Tratamento: no se deve efetuar lavagem gstrica durante as alucinaes; descanso, observao contnua do paciente para prevenir comportamento agitado ou perigoso durante as alucinaes e sedao com benzodiazepnicos. Fitoestrgenos Trifolium subterraneum Trevo subterrneo Princpio ativo: isoflavonas. Medicago sativa - Alfafa Princpio ativo: cumestanos. Quadro clnico: infertilidade, ginecomastia em machos castrados. Patologia: hiperplasia glandular cstica do crvix e tero, piometra, cio permanente, aborto. Tratamento: evitar alimentao nica ou em altas quantidades de fitoestrgenos; possveis cistos ovarianos devem ser tratados como de rotina.

8.3 Micotoxinas Micotoxinas so metablitos secundrios de certos fungos que contaminam alimentos e so reconhecidamente txicos para vrias espcies animais. As micotoxicoses so intoxicaes alimentares causadas pelas micotoxinas produzidas pelos fungos. Dentre estas, pode-se citar: aflatoxicose, zealarenona, intoxicao tremorgnica, leucoencefalomalcia, ergotismo e festucose, como sendo as mais comuns que afetam ruminantes e eqinos no Sul do Brasil. Aflatoxicose Toxicidade: causada pelos fungos Aspergillus flavus ou A. parasiticus, que contaminam gros como milho, sorgo, amendoim e raes, onde produzem as aflatoxinas fluorescentes B1 (mais abundante), B2, G1 e G2, sob condies ideais de umidade (mais de 14% de umidade em cereais e 9% em

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oleaginosas). Alm da produo de um metablito (M1) da aflatoxina B1, encontrado na urina, leite ou tecidos de animais intoxicados. Ruminantes so menos sensveis do que herbvoros monogstricos ou aves. Jovens ou animais caquticos so mais suscetveis. Mecanismo de ao: inibio da sntese protica e conseqentemente do metabolismo energtico, sendo o fgado o rgo mais afetado. Quadro clnico: os animais manifestam depresso, anorexia, anemia, ictercia, diarria, tenesmo, diminuio da produo e fotossensibilizao. Fibrose heptica, lipidose heptica, ictercia, ascite, dilatao da vescula biliar e edema so as principais leses macroscpicas encontradas. Dentre as microscpicas pode-se citar: degenerao e necrose de hepatcitos, alteraes gordurosas e proliferao do epitlio do ducto biliar e fibroplasia interlobular heptica. Diagnstico laboratorial: inclui hematologia: anemia leve, aumento de enzimas hepticas (AST, ALT, AP) e cidos biliares, reduo da albumina e da relao albumina:globulina, reduo da protrombina (sntese dos fatores de coagulao); anlise do metablito M1 na urina, leite ou fgado e rins ou por quantificao das aflatoxinas nos alimentos (teste da luz negra fluorescncia verdeamarela brilhante, cromatografia em camada delgada, lquida-gasosa ou por espectrometria de massa). Tratamento: inclui a desintoxicao com aluminosilicato de clcio e sdio hidratado (adsoro) e medidas de apoio com Vitamina E e Selnio. Para prevenir a aflatoxicose indica-se inibidores de mofo (evita o agente produtor). Zealarenona Toxicidade: causada pelos fungos Fusarium moniliforme e F. roseum, que produzem a zealarenona no milho, sorgo, trigo, cevada, ... sob timas condies de umidade 22-25%, alternncia de temperatura 721C, armazenamento em espiga. Sunos so particularmente sensveis, principalmente fmeas prpberes. Mecanismo de ao: de estrutura semelhante ao anabolizante zearalenol, prontamente absorvida pelo TGI, biotransformada em e zearalenol, realiza o ciclo entero-heptico (reteno prolongada) e eliminada pela bile, fezes, urina e leite (pouco) aps ligao aos receptores nucleares do 17-estradiol, portando-se como um estrgeno fraco (potncia 2 a 4 vezes menor que o estradiol), mas capaz de inibir a secreo de FSH e a maturao do folculo. Quadro clnico: variam conforme a espcie, idade e fase reprodutiva. Sndrome hiperestrognica em leitoas pr-pberes, anestro e pseudoprenhez em porcas adultas, ou ainda ninfomania; cachaos imaturos demonstram reduo de libido e retardo no desenvolvimento testicular e nos castrados, ocorre um aumento no prepcio e mamilos; em novilhas pode ocorrer aumento das glndulas mamrias ou mesmo vaginite. Diagnstico laboratorial: a anlise da zearalenona ou metablitos em tecidos ou na urina preterida a anlise nos alimentos, pois a intoxicao pode manifestar os sintomas muito tempo aps a exposio. Tratamento: desintoxicao com carvo ativado previne o ciclo ntero-heptico; prostaglandina F2 para lisar o corpo lteo e corrigir o anestro em porcas. Ergotismo Toxicidade: causada pelo fungo Claviceps purpurea, que produz ergoalcalides nas sementes de gramneas ou em gros de centeio, cevada, trigo e aveia,... sob condies ideais de calor e umidade. Mecanismo de ao: os alcalides do ergot so potentes indutores da contrao dos msculos lisos, tais como tero e a camada medial das pequenas artrias. Quadro clnico: constrio prolongada das artrias, levando isquemia e necrose das extremidades (cascos, ps, orelhas ou cauda), agalactia (inibio da prolactina), hipertermia, hiperexcitabilidade, hipermetria, taquipnia, taquicardia e anorexia. Diagnstico laboratorial: anlise da presena dos alcalides do ergot por cromatografia de camada delgada, gasosa ou espectrometria de massa dos alimentos. Tratamento: substituir os alimentos por outros livres da contaminao, tratar as infeces secundrias gangrena com antimicrobianos. Festucose Causada pelo fungo Acremonium coenophialum, que produz a toxina sobre a pastagem de festuca. Esta toxina provoca sinais semelhantes ao ergotismo como agalactia, transtornos reprodutivos

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e gangrena seca de extremidades. O diagnstico clnico e atravs da anlise da presena do fungo e/ou da toxina na pastagem. Intoxicao tremorgnica Causada pelo fungo Claviceps paspali, que produz sua toxina principalmente no outono, durante a semeadura; ou pelos fungos Peniccillium spp e Aspergillus spp, que produzem toxinas em cereais, raes,... sob timas condies de umidade. Todas provocando tremores e ataxia nos animais. O diagnstico pode ser firmado pela presena dos fungos e/ou de suas toxinas nos alimentos, associado ao quadro clnico. Leucoencefalomalcia Causada pelo fungo Fusarium moniliforme, que produz a toxina fumonisina B1 no milho e alimentos contendo este, sob condies timas de umidade. Esta toxina provoca incoordenao, cegueira e morte em 6-12h por induzir uma necrose liquefativa da substncia branca do crebro. O diagnstico clnico-epidemiolgico.

8.4 Medicamentos e produtos veterinrios Vrios medicamentos destinados a humanos so freqentemente utilizados em animais, entretanto a maioria das intoxicaes por estes frmacos refere-se disponibilidade destes em decorrncia do uso humano. Evidentemente, frmacos com baixa margem de segurana tendem a ter maior nmero de efeitos txicos, ou mesmo pelo uso abusivo. Quanto aos produtos de uso veterinrio como os antiparasitrios (endo e ectoparasiticidas), pode-se dizer que os acidentes so muito freqentes. Outrossim, so os frmacos muito utilizados e que algumas espcies animais apresentam relativa sensibilidade, como os antiinflamatrios utilizados em ces, gatos ou cavalos. Antiinflamatrios no esterides Exposio: acidental, uso abusivo, extraprescrio ou iatrogenia. Toxicidade: sensibilidade ao cido acetilsaliclico em carnvoros, especialmente gatos; toxicidade relacionada ao grau de inibio da ciclooxigenase 1 em relao a 2: flunixin meglumine, cetoprofeno, ibuprofeno, fenilbutazona, ... possuem maior risco do que carprofeno (inibidor seletivo COX 2). Mecanismo de ao: inibio das ciclooxigenases (COX 1 e 2), resultando em reduo da proteo da mucosa gstrica induzida por prostaglandinas e da agregao plaquetria, interferindo na coagulao sangnea (COX 1). Toxicocintica: absoro: rpida e completa por via oral; distribuio: possuem alta taxa de ligao protenas plasmticas e agentes que competem pelas protenas como as sulfonamidas podem potencializar aumentar a absoro; biotransformao: AAS: conjugao com glicina e cido glicurnico (gatos so maus conjugadores - > toxicidade); Ibuprofeno: heptica em metablito inativo; Fenilbutazona: metablito ativo (oxifembutazona excretada aps 48h); excreo: urinria; alcalinizao, aumenta a excreo. Diagnstico: sinais clnicos: anorexia, vmitos, diarria, melena, hematemese, anorexia, letargia, dor abdominal, azotemia e insuficincia renal; laboratorial: hemograma (anemia, trombocitopenia, presena de corpsculos de Heinz), tempo de coagulao (aumento), pH sangneo (acidose); nveis sricos de salicilatos ou outros AINES ou ainda, pesquisa dos metablitos na urina; RX ou endoscopia; leses: lceras e ou perfurao gastrintestinal, equimoses, sufuses, necrose renal; Tratamento: descontaminao (ingesta a menos de 4 horas): induzir emese, lavagem gstrica se os sinais j estiveram presentes, administrar carvo ativado;

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prover ventilao adequada; administrar cristalides (velocidade mnima); medir fluxo urinrio (2-3 mL/kg/h para ces e 1-2 mL/kg/h para gatos); monitorar funo renal (urinlise); se pH < 7,1: administrar bicarbonato (no em cristalides que contenham Ca); se necessrio administrar furosemida, dopamina ou manitol para manter o fluxo urinrio; administrar protetores do trato digestrio: sucralfato, omeprazol (cimetidina, ranitidina no tm apresentado benefcio na profilaxia das lcera induzidas por AINES), se h suspeita de perfurao: abdominocentese (com lavagem se necessrio) para diagnstico se perfurado: laparotomia, lavagem peritoneal com NaCl 0,9%; administrar antimicrobianos de amplo espectro exceto aminoglicosdeos ou outros nefrotxicos.

Paracetamol Exposio: comumente acidental ou extraprescrio de medicamentos destinados aos humanos. Toxicidade: maior sensibilidade dos felinos por serem maus conjugadores (dose txica 50-100 mg/kg); ces menor sensibilidade (dose txica 600 mg/kg). Mecanismo de ao: relacionado a sua toxicocintica - quando a capacidade de biotransformao por conjugao excedida, o mesmo sofre N-hidroxilao, seguida da formao espontnea de N-acetilbenzoquinona (metablito de fase I) que se liga covalentemente a macromolculas celulares, levando necrose heptica; tambm o acmulo de metablitos oxidantes, produz metemoglobinemia, reduzindo a oxigenao tecidual. Diagnstico: sinais clnicos: cianose (4 a 12h), hematria e hemoglobinria, edema de face (acompanhado de lacrimejamento e prurido) e patas, anorexia, depresso, entre 2 e 7 dias, hemlise e ictercia; laboratorial: metemoglobinemia, reduo da glutationa reduzida eritrocitria, presena de corpsculos de Heinz, reduo do hematcrito, aumento dos nveis de ALT, AST, FA, bilirrubinemia direta e indireta; leses: fgado mosqueado, sangue escuro; degenerao heptica centrolobular, necrose, conjuntivite, edema e necrose linfide focal. Tratamento: descontaminao oral com induo de vmito, seguida de carvo ativado; antdoto: acetilcistena (restabelece estoques de glutationa), administrado 2 horas aps o carvo, inicialmente 140 mg/kg, seguida por 70 mg/kg a cada 4-6h por 3 dias;oxigenioterapia, sulfato de Na, cido ascrbico ou azul de metileno para tratar a metemoglobinemia. Tranqilizantes Exposio: acidental por ingesto de tranqilizantes utilizados pelos proprietrios, medicao extraprescrio ou mesmo iatrogenia; fenotiaznicos esto comumente envolvidos nas intoxicaes. Toxicidade: acepromazina em ces gigantes deve ter a dose diminuda em 50; cautela no uso em pacientes fracos, debilitados, idosos, cardiopatas ou hepatopatas; injeo IV rpida pode causar hipotenso e colapso cardiovascular; no utilizar adrenalina para tratar hipotenso, pois pode reduzir muito a presso sangnea. noradrenalina pode ser usada; pelo risco de paralisia do msculo retrator do pnis em eqinos, o uso deve ser feito com cautela ou totalmente evitado em garanhes; uso contraindicado em ces da raa Boxer, uso concomitante com vermfugos ou ectoparasiticidas organofosforados (incluindo colar para pulgas); com procana; evitar em pacientes com histrico de convulses. Mecanismo de ao: exerce bloqueio em receptores da dopamina e reduz ao da serotonina; como um fenotiaznico, possui efeito depressor do SNC, e por isto causa sedao, relaxamento muscular, e reduo da atividade espontnea. Toxicocintica: absoro: bem absorvida pelas vias oral, SC, IM e IV; distribuio: amplamente distribuda pelos tecidos, principalmente fgado, pulmes e encfalo; biotransformao: heptica; excreo: urinria e fecal, por vrios dias. Diagnstico:

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sinais clnicos: pode causar prolongada depresso e impossibilidade de locomoo; depresso respiratria, hipotenso, miose, hipotermia, hipertermia e edema pulmonar; convulses e morte; Tratamento: descontaminao oral por lavagem gstrica e carvo ativado em mltiplas doses (at 4 horas da ingesta); assistncia respiratria, controle hemodinmico; monitorizao cardiovascular, tratamento da hipotenso com fluidoterapia (ringer lactato) e vasopressores como noradrenalina. Diminazeno Exposio: uso abusivo, medicao extraprescrio ou mesmo iatrogenia no tratamento da babesiose, tripanossomase ou mesmo na papilomatose. Toxicidade: em ces o ndice teraputico muito baixo (20 a 60 mg/kg, IM, causaram bito em 36-54 horas com hemorragia e degenerao / malcia cerebral); 2 mg/kg IV pode causar hipotenso e possibilidade de colapso; em gatos a dose de 21 mg/kg (6 vezes teraputica recomendada) no ocorreram efeitos agudos. Mecanismo de ao: altera a sntese do DNA (bloqueio seletivo da replicao) no parasita, resultando na dilatao da membrana de organelas, dissoluo do plasma e destruio do ncleo; tambm interfere na gliclise aerbica, causando hipoglicemia tanto no parasita como no animal hospedeiro. Diagnstico: sinais clnicos: ataxia, incoordenao de membros posteriores, paralisia espastica, dor, nistagmo, convulses, cegueira e coma; laboratorial: leso: em ces, doses teraputicas mltiplas causaram graves e importantes leses hemorrgicas e degenerativas no cerebelo, mesencfalo e tlamo; alteraes degenerativas em fgado, rins, msculos e miocrdio; em bovinos, degenerao gordurosa e leses neurolgicas tm maior gravidade. Tratamento: essencialmente medidas sintomticas e de suporte. Benzimidazis Exposio: sobredosagem do anti-helmnticos de ao sistmica, acidental, por extraprescrio ou iatrogenica. Toxicidade: a DL50 oral do Mebendazole em ovelhas 80 mg/kg, em ratos e galinhas de 40 mg/kg e em ces, 640 mg/kg; so teratognicos. Mecanismo de ao: produz degenerao dos microtbulos citoplasmticos nas clulas tegumentares e intestinais do parasito; as substncias secretoras acumulam-se nas reas de Golgi, havendo prejuzo na secreo de acetilcolinesterase e bloqueando de forma seletiva e irreversvel a captao de glicose nos helmintos adultos sensveis e suas larvas. Toxicocintica: absoro: pouco absorvido pelo trato gastrintestinal (5-10%); pico de concentrao em 1 hora; distribuio: se distribui no soro, lquido cstico, fgado, omento e cistos plvicos, pulmonares e hepticos; as concentraes mais elevadas se encontram no fgado; ligao a protenas plasmticas elevada (95%); passa por barreira placentria; biotransformao: heptica, extenso metabolismo de 1 passagem; excreo: fecal (95%). Diagnstico: sinais clnicos: dor abdominal, diarria, nuseas; efeitos sistmicos so raros; laboratorial: determinao de concentrao srica de mebendazol ou o metablito principal (derivado 2-amino); Tratamento: descontaminao oral por esvaziamento gstrico e carvo ativado; sintomtico e de manuteno. Avermectinas Exposio: a maioria dos casos de intoxicao ocorre em ces Collie (ou cruzamentos da raa) aps uso injetvel, por extraprescrio ou iatrogenismo. Toxicidade:

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Mecanismo de ao: atua sobre neurotransmisso gabargica., age no parasita estimulando liberao de GABA nas terminaes nervosas, favorecendo sua ligao aos receptores ps sinpticos; assim aumenta a permeabilidade da membrana ao on Cl -, interrompendo impulsos nervosos, paralisando e matando o parasita; interage tambm com receptores GABA no crebro de vertebrados (mamferos) mas com afinidade 100 vezes menor por receptores que nos invertebrados, entretanto, em determinadas raas de ces (ex.: Collie e Australian Sheepedogs) o produto atravessa a barreira hemato-enceflica, alterando a neurotransmisso mediada por GABA. Toxicocintica: absoro: os dados farmacocinticos variam com a espcie, em geral, rapidamente absorvido por via SC, IV, oral e intrarruminal; baixa absoro percutnea; distribuio: maiores concentraes teciduais em fgado e tecido adiposo; nveis muito baixos so encontrados no crebro, apesar da solubilidade; pequena quantidade (2%) aparece no leite materno; mnima deposio em msculo; o volume de distribuio em ces: de 2,4 L/kg, bovinos, 1,9 L/kg, ovinos, 4,6 L/kg; a T1/2 em ces de 2 a 3 dias; bovinos e ovinos: 65 horas e, em sunos de 12 horas; preparaes injetveis, no aquosas, podem ter T1/2 de at 8,3 dias pela lenta absoro que sofrem; alta ligao a protenas (93%). excreo: 95% da dose administrada excretada via fecal em 5 a 6 dias; 0,5 a 2% so eliminados na urina. Diagnstico: sinais clnicos: em vrias espcies animais: ataxia, paralisia, coma, morte; em ces: midrase dose-dependente, cegueira, alteraes comportamentais, depresso, vmitos, ptialismo e sialorria ataxia, tremores, convulses, depresso, coma e morte; outros sinais: desorientao, olhar fixo, hiperatividade, inquietao, flacidez, agressividade, bradicardia, convulses, hipertermia, dificuldade respiratria e cianose; intoxicaes severas levam a choque, edema pulmonar, dispnia, taquicardia, tremor muscular, coma e morte; em gatos, ataxia, vocalizao, desorientao, tremores, midrase, perda de reflexo pupilar, bradicardia, hipotermia, coma e morte; Tratamento: a maioria das intoxicaes ocorre em ces no uso da forma injetvel, nestes casos, o tratamento sintomtico e de apoio por longo perodo e inclui respirao assistida, controle de convulses com barbitricos, se necessrio; nas grandes ingestas de apresentaes para uso oral, a descontaminao deve ser realizada mediante esvaziamento gstrico e carvo ativado. Fipronil Exposio: utilizao de altas concentraes ou mesmo formulaes no adequadas espcie (produtos formulados para bovinos utilizados em ces ou gatos) por extraprescrio ou iatrogenismo. Mecanismo de ao: um inibidor reversvel dos receptores do GABA. Toxicidade: nos vertebrados o Fipronil no se fixa de maneira estvel, o que explica sua boa margem de segurana, entretanto, durante a intoxicao, h induo de estimulao neurolgica; a DL 50 oral em ces de 640 mg/kg; ratos, 97 mg/kg; a DL 50 cutnea em ces 2000 mg/kg; a apresentao em spray comercializada no Brasil que contm o Fipronil o interesse toxicolgico fundamentalmente o veculo: lcool isoproplico. Toxicocintica: absoro: devido a pequena absoro intestinal, sintomas podem ser retardados por vrias horas 1 dia; excreo: fecal. Diagnstico: sinais clnicos: farmacodermia no local de aplicao (erupo bolhosa); em intoxicaes experimentais agudas foram observados: vmitos, transtornos gastrintestinais e convulses; nas crnicas ocorreu alteraes de tireide, fgado e sistema nervoso; em teste cutneos, h relato de irritao cutnea (dermatite alrgica) e ocular; laboratorial: o Fipronil e seu principal metablito podem ser detectados no sangue ou lavado gstrico.

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Tratamento: em pequenas ingestas, a descontaminao deve ser realizada com carvo ativado; na superdosagem, deve-se proceder a lavagem gstrica e carvo ativado em mltiplas doses; tratamento sintomtico, incluindo anticonvulsivantes como fenobarbital e benzodiazepnicos. Imidacloprid Exposio: contato drmico ou oral com o pesticida agrcola, para jardinagem amadora ou mesmo o ectoparasiticida para uso veterinrio. Toxicidade: moderadamente txico - DL50 em ratos 450 mg/kg; no irritante de olhos e pele de coelhos; alguns sintomas duraram mais de 5 dias aps exposio (produto que contm apenas imidacloprid) ou no caso de produtos agrcolas, 12 dias; Mecanismo de ao: anlogo a molcula da nicotina; encaixa-se no receptor molecular no sistema nervoso, bloqueando irreversivelmente os receptores de acetilcolina; age interferindo na transmisso de estmulos no sistema nervoso do inseto; especificamente causa bloqueio nos receptores nicotinrgicos, que leva ao acmulo de acetilcolina (importante neurotransmissor) resultando em paralisia do inseto com eventual morte. Toxicocintica: absoro: cutnea e oral (estmago), rapidamente e quase completamente; excreo: via renal (70-80%) e fecal (20-38%). Diagnstico: sinais clnicos: sinais e sintomas nicotnicos, incluindo fadiga, contraes musculares, clicas e fraqueza muscular, inclusive nos msculos necessrios da respirao; para produtos agrcolas (imidacloprid mais outros ingredientes - slica e Naftaleno), reduo de atividade, incoordenao, tremores,diarria e emaciao; Tratamento: sintomtico e de suporte. Amitraz Exposio: ingesto por lambedura ou concentrao excessiva de ectoparasiticida para asperso, imerso ou em coleiras. Toxicidade: DL50 oral: ces 100 mg/kg; ratos 515-938 mg/Kg; ces podem apresentar sinais clnicos transitrios de intoxicao com doses de 20 mg/Kg. Mecanismo de ao: aredita-se que o amitraz atue como um agonista alfa 2-adrenrgico em receptores do SNC e prifrico, e como inibidor fraco da monoamido oxidase (MAO). Toxicocintica: absoro: bem absorvido por via oral e drmica; a concentrao sangnea mxima ocorre 2 horas aps a exposio; distribuio: se concentra na pele, fgado, olhos, bile, rins, cerebelo, pulmes, bao e gnodas; biotransformao: heptica; excreo: renal. Diagnstico: sinais clnicos: vmitos, anorexia, diarria, poliria, bradicardia, hipotenso, depresso, desorientao, sedao, vocalizao, ataxia, convulses e coma; por contato, irritao e eritema nas reas expostas; laboratorial: cromatografia de camada gasosa; anlise de tecidos: fgado, rins, pele, crebro, pulmes, tecido adiposo ou bao; leso: hepatomegalia, se exposio crnica, hiperplasia periportal heptica e adelgaamento das zonas fasciculada e reticular da adrenal. Tratamento: descontaminao oral: lavagem gstrica ou induo de vmito (contra-indicado, se houver solvente na formulao), carvo ativado; drmica: descontaminao cutnea e tosa se necessria; asistncia respiratria/oxignio, fluidoterapia; ioimbina. Organofosforados Exposio: inseticidas agrcolas, domiciliares, medicamentos de uso humano e veterinrio sob vrias apresentaes: aerossis, ps, solues, sabonetes, xampus, ...; ingesta ou contato acidental (alimentos

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ou diretamente com produtos), prescrio inadequada (alta concentrao, dose ou inadequado para a espcie, idade,...) ou extraprescrio. Toxicidade: dependente da concentrao, via (bucal, oral, drmica, inalatria,...) e do tempo de exposio ao produto; interessante atentar a classificao relativa de toxicidade dos princpios ativos mais comuns: extrema: menvifs e paration; alta: carbofenotion, diclorvs (DDVP), fention, monocrotofs; moderada: Diazinon, clorpirifs, dimetoato, naled, fenitrotion, fenclorfs; baixa: Triclorfon, pirimifs-metlico, azametiofs, bromofs, biodofenfs; pode ainda ser potencializada por fenotiaznicos, succinilcolina, levamisole, aminoglicosdeos, nicotina, curarizantes e indutores enzimticos. Mecanismo de ao: inibio irreversvel da acetilcolinesterase (AChE), resultando em acmulo de acetilcolina nos receptores muscarnicos, nicotinicos (junes neuromusculares esquelticas) e no sistema nervoso central. Toxicocintica: absoro: so bem absorvidos por via oral, inalatria e drmica; presena de solvente orgnico intensifica absoro; atravs da pele absoro tende a ser lenta, mas dificuldade de remoo prolonga contato; temperatura elevada, presena de dermatites potenciam absoro; distribuio: ampla, mas no se acumulam por tempo prolongado; altamente lipoflicos, so armazenados no tecido adiposo, liberados gradualmente durante vrios dias aps exposio; biotransformao: biotransformados por enzimas oxidases, hidrolases e transferases, principalmente hepticas; alguns metablitos tem maior toxicidade que o composto original, por transformao do grupo "tion" em metablito "oxon" (paration, malation, diazinon); excreo: principalmente urinria, menor quantidade nas fezes e ar expirado; excreo mxima em 2 dias, aps diminui rapidamente. Diagnstico sinais clnicos: muscarnicos: broncoconstrio, broncorria, dispnia, cianose, edema pulmonar; anorexia, nuseas, vmitos, clicas abdominais, diarria, incontinncia fecal, tenesmo; sudorese, salivao, lacrimejamento; bradicardia, hipotenso, bloqueio av; miose, viso borrada; incontinncia urinria; nicotnicos: fadiga, fraqueza, fasciculaes, contraes, arreflexia, paralisia flcida, insuficincia respiratria ou parada devido fraqueza muscular; hipertenso, taquicardia, palidez, midrase (porm, predominam efeitos muscarnicos); efeitos no snc: cefalia, ansiedade, agitao, tremores, ataxia, sonolncia, confuso, dificuldade de fala, labilidade emocional.fraqueza generalizada, coma, convulses, depresso central respiratria e cardiovascular; laboratorial: determinao da atividade colinestersica, plasmtica ("pseudocolinesterase") ou eritrocitria (indicador mais preciso); ainda, contedo gstrico ou ruminal, plos e urina (pesquisa deorganofosforado e/ou metablitos); Tambm, atividade colinestersica em crebro; leses: edema pulmonar e lquidos no trato digestivo. Tratamento: primeiros socorros: manter ventilao, aspirar secrees, oxigenao; descontaminao: oral por lavagem gstrica at 4 h (com solvente derivado de petrleo fazer intubao traqueal prvia pelo risco de aspirao), carvo ativado;.**contraindicado induzir vmito (com solvente hidrocarboneto); exposio drmica, ampla descontaminao cutnea, pode-se usar soluo de bicarbonato (instvel em meio alcalino), proteger pessoal de enfermagem com luvas, avental durante descontaminao do paciente; olhos: descontaminao ocular. pode ser usado gotas de anestsico previamente para facilitar procedimento;

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convulses e ansiedade: diazepam; Antdotos: essencial uso de ATROPINA (bloqueia efeitos da acetilcolina) e PRALIDOXIMA - Contrathion (reverte a colinesterase).

Carbamatos Exposio: semelhante aos organofosforados. Toxicidade: tem inibio colinestersica reversvel e de curta durao, no penetram efetivamente no SNC, resultando em toxicidade limitada; usualmente severidade leve a moderada, porm exposio a altas concentraes, especialmente aldicarb e carbaril pode conduzir a quadros severos, evoluindo ao bito. Aldicarb tem ALTA TOXICIDADE considerado inseticida sistmico, absorvido do solo pode concentrar nveis txicos em alimentos. Mecanismo de ao: inibidores reversveis da AChE, resultando em acmulo de acetilcolina nos receptores muscarnicos, nicotnicos e no SNC; tem reverso espontnea e curta durao (minutos a poucas horas); e tm menor penetrao no SNC. Toxicocintica: absoro: rpida por todas as vias, oral, inalatria e drmica; a drmica pequena em comparao aos organofosforados, com exceo do aldicarb que elevada em todas as vias; temperatura alta, umidade, dermatites, aumentam absoro; aldicarb tem extensiva recirculao entero-heptica; carbaril tambm tem ciclo entero-heptico considervel, especialmente pela via oral. distribuio: rpida distribuio, com menor penetrao no SNC que os organofosforados; no se acumulam no organismo. biotransformao: rpida, por hidrlise, oxidao ou conjugao; usualmente os metablitos tm menor toxicidade, exceto o propoxur e o carbaril, em que os metablitos tm maior atividade anticolinestersica, elevando toxicidade. excreo: principalmente urinria, usualmente em 24h, menor percentual nas fezes e ar expirado. Diagnstico: sinais clnicos: efeitos so imediatos, cessando logo aps trmino da exposio; manifestaes usualmente em menor grau que os organofosforados incluindo as neurolgicas (devido a menor penetrao no SNC); predominam efeitos muscarnicos: broncoconstrio, broncorria, dispnia, cianose, edema pulmonar; anorexia, nuseas, vmitos, clicas abdominais, diarria, incontinncia fecal, tenesmo; sudorese, salivao, lacrimejamento; bradicardia, hipotenso; miose, viso borrada; incontinncia urinria; laboratorial: colinesterase plasmtica ou eritrocitria tem valor diagnstico reduzido devido a rpida reverso e normalizao de nveis alterados (minutos a algumas horas); metablitos podem ser pesquisados na urina (carbaril). Tratamento: descontaminao oral com carvo ativado ou, para aldicarb e carbaril, esvaziamento gstrico seguido de carvo ativado; antdoto - atropina (antimuscarnica); monitorizao respiratria, limpeza de secrees; edema pulmonar, broncoespasmo, respondem adequadamente a oxigenao; monitorizao cardaca; diazepam, melhora ansiedade e algumas manifestaes do SNC. Piretrides Exposio: inseticidas agrcolas, domiciliares, medicamentos de uso humano e veterinrio sob vrias apresentaes: aerossis, ps, solues, sabonetes, xampus, ...; ingesta ou contato acidental (alimentos ou diretamente com produtos), prescrio inadequada (alta concentrao, dose ou inadequado para a espcie, idade,...) ou extraprescrio. Toxicidade: baixa para mamferos e aves, muito txico para peixes; felinos so mais sensveis, assim como animais jovens (menores de 6 semanas - est contra-indicado o uso); em intoxicaes mistas com organofosforados, a toxicidade dos piretrides fica exacerbada; interessante atentar a classificao relativa de toxicidade dos princpios ativos mais comuns: alta: bifentrin, fenpropatrin, lambidacialotrina; moderada/alta: alfacipermetrina, deltametrina; moderada: cipermetrina, cialotrina;

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baixa/moderada: Aletrina, bioaletrina, esbiotrin, esbiotrin, fenvalerato; baixa: D-aletrina, S-bioaletrina, resmetrina, bio-resmetrina, fenotrina, d-fenotrina, tetrametrina. Mecanismo de ao: inibem a condutncia ao Na nas membranas axonais, alm da inibio da ATPase, reduzindo o potencial de ao e gerando impulsos nervosos repetitivos; piretrides do tipo II (cipermetrina, cialotrina, deltametrina,...) interferem na ligao do GABA aos seus stios receptores. Toxicocintica: absoro: rapidamente absorvido por vias oral, drmica e inalatria; biotransformao: rpida por hidrlise pelas esterases plasmticas e hepticas; os metablitos so conjugados com glicina, cido glicurnico e sulfatos; excreo: renal. Diagnstico: difcil, deve haver histrico compatvel alm de diferenciar de infeces que causem meningite (cinomose), intoxicaes por organoclorados, fosforados, metaldedo, estricnina, nicotina ou aminopiridina; sinais clnicos: sialorria, vmitos, ataxia, dispnia, anorexia, hiper ou hipotermia, incoordenao motora tremores musculares, convulses, conjuntivite, dificuldade respiratria, contraturas musculares superficiais, tremores nas extremidades das orelhas e membros; incio de sintomas em 1 a 3 horas aps contato. laboratorial: podem ser detectados em fgado e crebro, mas os nveis das substncias no se correlacionam bem com a gravidade e prognstico dos casos; leso: Geralmente no h leses caractersticas associadas ao bito. Tratamento: descontaminao oral com carvo ativado; em ingesto de grandes quantidades, esvaziamento gstrico at 1 hora aps; diluente que pode ser derivado de petrleo (no fazer esvaziamento gstrico neste caso, havendo risco de pneumonite); descontaminao cutnea com gua morna (gua quente aumenta a perfuso e absoro dos produtos) e xampu neutro, podendo ser necessria tosa em animais com pelos muitos longos; tratamento sintomtico: diazepnicos ou barbitricos para convulses; se o animal apresentar sintomas de estimulao parassimptica como sialorria, utilizar atropina em baixas doses (0,02 a 0,04 mg/kg). Outra classe farmacolgica comumente envolvida em acidentes txicos em veterinria, a das metilxantinas. Neste grupo, a teofilina representa uma xantina utilizada como agente broncodilatador. Entretanto, no a xantina de maior evidncia txica, neste grupo encontram-se as metilxantinas que so alcalides metilados das xantinas, capazes de produzir efeitos txicos semelhantes a teofilina. Dentre estes, o caf e o chocolate. Metilxantinas Exposio: caf ou principalmente, o chocolate; a intoxicao por chocolate mais comum prximo a datas comemorativas (Pscoa, aniversrios, Natal, etc). Toxicidade:leves sinais de intoxicao ocorrem com ingesta de 20 mg/kg e severos com 40-50 mg/kg; em ces a DL50 de 60 mg/kg em gatos 80-150 mg/kg; a quantidade de teobromina (mg/100g) cerca de 0,88 no chocolate branco, 204,7 no ao leite, 458,9 no preto doce, 487,1 no semi-doce, 1387,3 no amargo e 2118 nos gros de cacau, 480,08 no cacau em p instantneo e 2601,6 no cacau em p seco; metilxantinas podem atravessar a placenta e afetar os fetos ou ainda, podem passar para o leite. Mecanismo de ao: inibem o seqestro intracelular de clcio, aumentando a atividade do msculo cardaco e esqueltico; antagonizam competitivamente os receptores celulares de adenosina, resultando em estimulao do SNC, vasoconstrio, taquicardia e acmulo de nucleotdeos cclicos (especialmente AMPc); tambm aumentam a irritabilidade do crtex sensorial, resultando em aumento do estado de alerta mental. Toxicocintica: absoro: so rapidamente absorvidas por via oral; distribuio: amplamente distribudas pelo corpo, principalmente nos tecidos muito vascularizados e ricos em lquidos; biotransformao: heptica pelas oxidases de funo mista microssomais, por Ndesmetilao e conjugao;

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excreo: renal; so alcalinas, conseqentemente, so mais rapidamente excretadas quando a urina acidificada. Diagnstico sinais clnicos: vmitos, diarria, agitao, hiperatividade, rigidez, contrao muscular sbita, hiperreflexia, tremores e convulses; incontinncia urinria ou poliria; taquipnia, polipnia, taquicardia (grandes ingestas) ou bradicardia (pequenas ingestas); as mortes podem ocorrer de 6-24 horas da ingesta, por arritmia ou falncia respiratria; exposio crnica pode conduzir a insuficincia cardaca; laboratorial: as metilxantinas e seus metablitos podem ser medidos pelo alto desempenho da cromatografia lquida em soro, plasma, tecidos, urina e contedo estomacal; permanecem estveis no soro ou plasma, refrigerados por 14 dias, em temperatura ambiente por 7 dias e congelado por 4 meses. Tratamento: descontaminao oral por induzio de vmito (4 a 6 horas da ingesta), carvo ativado a cada 3 a 4 horas (1-5g/kg) pode reduzir a meia-vida das metilxantinas; aumento da eliminao por fluidoterapia e acidificao urinria; assistncia respiratria; diazepam ou fenobarbital para as convulses, tremores e ansiedade; tratar hipertermia; monitorar eletrlitos e ECG; evitar o uso de antibiiticos da famlia dos macroldeos, cimetidina, ranitidina e corticides, j que interferem na excreo das metilxantinas; no utilizar lidocana em felinos. A Tabela 14 apresenta outros grupos e/ou frmacos com relativa incidncia de acidentes txicos em animais, a sintomatologia caracterstica e as condutas gerais. 8.5 Produtos qumicos industriais e domsticos 8.5.1 Produtos qumicos industriais Vrios produtos industriais tm uso restrito e, portanto, menor risco de acidente txico em animais. Entretanto, devido a riscos ambientais relacionados a estas substncias, torna-se relevante seu estudo. Os principais produtos incluem: Produtos de petrleo: leo bruto ou refinados: gasolina, querosene, nafta,... Dioxinas: em produtos como herbicidas fenoxiclorados (agente laranja), hexaclorofeno (sabes), pentaclorofenol (conservante de madeira),... Fluoretos: indstrias de alumnio, ao, fertilizantes, suplementos minerais,... Bifenilas polibromadas (BPBS): antichamas. Bifenilas policloradas (BPCS): em produtos como leos no inflamveis para transformadores, condensadores e isolantes eltricos, tintas e selantes para silos, antioxidantes,... Triaril fosfato e steres de fosfatos: antichamas, solventes, estabilizadores, antioxidantes, aditivos,... Produtos de petrleo Hidrocarbonetos alifticos: cadeia curta: metano, etano, propano e butano; cadeia longa: leo mineral, gasolina, querosene,... clorados: tetracloreto de carbono, clorofrmio, tetracloroetileno; hidrocarbonetos aromticos: benzeno, tolueno, xileno,... Exposio: reas industriais, campos de extrao, contaminao ambiental, uso domstico ou comercial Toxicocintica: absoro: lipoflicos e volteis; excreo: aromticos: biotranformados a fenis, cido carboxlico e conjugao c/ sulfatos ou glicurondeos ou glicina; alifticos volteis: pulmes.

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Toxicidade: irritao drmica, respiratria, gastrintestinal e depresso do SNC e de medula ssea (aromticos). Diagnstico: sinais clnicos: anorexia, vmito, timpanismo, emagrecimento, ataxia, tremores, confuso mental, depresso, asfixia, pneumonia qumica, arritmia cardaca; laboratorial: hipoglicemia, aumento do nitrognio urico, hemoconcentrao, anemia, leucopenia, trombocitopenia; leses: lceraes gastrintestinais e de traquia, congesto pulmonar, pleurite fibrinosa, necrose heptica e renal. Tratamento: no provocar vmito (volteis); administrar carvo ativado at 4 horas ps-ingesto; banho com gua quente e detergente leve; profilaxia com antimicrobiano; fluidoterapia; estimulantes (SNC e cardacos); transfuso; salicilato de bismuto (protetor gastrintestinal).

Tabela 14. Medicamentos freqentemente envolvidos em acidentes txicos em animais. Medicamento/grupo Analgsicos opiides Antidepressivos tricclicos Efeitos clnicos Depresso respiratria, nuseas, vmitos, bradicardia, hipotenso,... Taquiarritmias ventriculares, complexos QRS prolongados, vmito, fraqueza, depresso, tremores e convulses. Vmito, diarria, arritmias, conduo trio-ventricular lenta e bloqueio cardaco completo. Procainamida: assistolia e efeitos colinrgicos. Propranolol: bradicardia, hipotenso e broncoconstrio. Agudo: retenso de Na e gua, perda de K, alcalose e hipertenso. Crnico: miopatia, leso heptica. Estro prolongado, aborto, pancitopenia, anemia aplsica. Efeitos anticolinrgicos (midrase, hipomotilidade do trato gastrintestinal, xerostomia, taquicardia), hipotenso depresso ou estimulao. Efeitos anticolinrgicos (midrase, hipomotilidade do trato gastrintestinal, xerostomia, taquicardia), desorientao e ataxia. Conduta Descontaminao oral; ventilao assistida e Naloxona. Descontaminao oral, lavagem gstrica se necessrio, seguida de carvo, lidocana, bicarbonato de sdio e diazepam. Descontaminao oral, atropina e fenitona. Isoproterenol e dopamina. Descontaminao oral, atropina, epinefrina e aminofilina. Se agudo descontaminao oral; ambos, tratamento sintomtico. Transfuso, fluidos e corticosterides para o choque. Descontaminao oral, vasopressina.

Digitlicos

Antiarrtmicos

Glicocorticides

Estrgenos Difenidramina

Atropina

Descontaminao oral, ventilao assistida, neostigmina e norepinefrina.

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Dioxinas O diclorofenol, herbicidas fenoxiclorados utilizado no preparo do agente laranja, forma tetra, hexa e octaclorodibenzodioxina, molculas mais txicas e persistentes no ambiente; tambm, a combusto de dioxinas pode liberar tetraclorodibenzodioxina. Exposio: leo queimado, herbicida desfolhante Toxicocintica: absoro: vias oral ou dermal, inibida pela terra e carvo ativado; distribuio: acumula no fgado e tecido adiposo; excreo: maioria inalterada nas fezes, pequenas quantidades na bile e urina Toxicidade: aguda e crnica (cumulativa); se liga a enzima citoslica e transferida para o ncleo, afetando as clulas; induz oxidases de funo mista e sintetase heptica, afetando a biotransformao de medicamentos; teratognica, carcinognica e imunodepressora. Diagnstico: sinais clnicos: hiperqueratose, acne, edema palpebral, emagrecimento, porfiria e fotossensibilizao; edema generalizado em aves; laboratorial: anemia e trombocitopenia, presena de dioxinas nos tecidos (adiposo, heptico e renal); leses: necrose heptica, leses renais e depresso de medula ssea. Fluoretos Na natureza encontrado como fluoreto. Tambm encontrado na indstria de ao, alumnio, suplementos minerais e fertilizantes. Materiais contendo fluor, aquecidos a altas temperaturas, expelem fluoretos, que reagindo com a gua, se depositam nos vegetais. Exposio: forragens contaminadas, gua, suplementos minerais,... Toxicocintica: absoro: trato gastrintestinal; distribuio: 96-99% incorporado aos ossos; excreo: filtrao glomerular. Toxicidade: reduz a formao da matriz e do esmalte dos dentes; exostose ou osteoporose; aguda: incontinncia urinria e intestinal, vmitos, insuficincia cardaca, excitao do SNC, depresso severa e morte; crnica (meses a anos): defeitos nos dentes e ossos. Diagnstico: sinais clnicos: dentes irregularmente desgastados e com manchas no esmalte; claudicao, caquexia; laboratorial: concentrao de fluoreto nos dentes e/ou tecido sseo, na urina, nos alimentos e/ou gua consumidos; RX; leses: hiperostose peristea, mineralizao irregular generalizada e dentes radiolucentes. Tratamento: sulfato ou cloreto de alumnio, carbonato de clcio (reduzem a absoro). Bifenilas polibromadas (BPBS) Antichamas altamente persistentes no meio ambiente e no tecido adiposo dos animais. Em 1973 foi acidentalmente adicionado a rao animal (aves e gado leiteiro) nos EUA e gerou grandes perdas. Mecanismo de ao: ativam a sntese de RNA, induzindo as mono-oxigenases Diagnstico: sinais clnicos: distrbios neuroendcrinos com falha reprodutiva, imunossupresso, retardo no crescimento, alteraes de casco, pele e plos; laboratorial: aumento do nitrognio urico, aumento de transferases (ALT e AST) e hipercolesterolemia; cromatografia lquida-gasosa de tecido adiposo, leite (T1/2 de 12 semanas) ou ovos.

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leses: lipidose heptica, degenerao tubular renal, enfisema subcutneo. Tratamento: remover o paciente da exposio (no h tratamento ou antdoto).
Bifenilas policloradas (BPCS) Antichamas, leos, tintas, plsticos: estrutura semelhante ao DDT (inseticida), persistentes no meio ambiente e na cadeia alimentar. Em1968 houve uma contaminao do leo de arroz que intoxicou aves e homens em Yusho (Japo), causando pigmentao da pele, edema de membros e neuropatia perifrica. Mecanismo de ao: indutoras de oxidases de funo mista. Diagnstico: sinais clnicos: imunossupresso, embriofetotoxicidade, teratogenicidade, hiperestrogenismo em ratos, doena do edema em aves,... laboratorial: cromatografia de tecido adiposo; leses: lipidose heptica, hemorragia intestinal, miocardite e endocardite. Tratamento: remover o paciente da exposio (no h tratamento ou antdoto). Triaril fosfato e steres de fosfatos Usados como antichamas, solventes, estabilizadores, antioxidantes em lubrificantes, borrachas, plsticos, aditivos para gasolina,... Em 1930, o consumo de extrato de gengibre ou leo de cozinha contaminado provocou paralisia em 40.000 pessoas na Jamaica. Bovinos e ovinos, eventualmente so expostos a lubrificantes contendo tri-orto-cresil-fosfatos. Mecanismo de ao: steres fosfato hidrofbicos: penetram no SNC e fosforilam ou alquilam macromolculas, provocando degenerao axonal seguida de desmielinizao dos nervos perifricos; steres organofosforados: inibem a esterase neurotxica e enzimas nos nervos perifricos e crebro, associados com axonopatia perifrica (neurotoxicidade retardada). Toxicidade: quanto menor a cadeia alquila lateral, maior a atividade neurotxica retardada. As aves so suscetveis e os melhores modelos para a sndrome em humanos (pesquisa). Roedores de laboratrio, ces e coelhos so resistentes (inadequados para pesquisa). Diagnstico: sinais clnicos: latncia de 1 a 2 semanas; dormncia e perda de sensibilidade da parte distal dos membros, paresia ascendente, hemiplegia e at quadriplegia; laboratorial: determinao dos nveis de esterase neurotxica; leses: degenerao nervosa distal/proximal com desmielinizao. Tratamento: remover o paciente da exposio (no h tratamento ou antdoto). 8.5.2 Produtos qumicos domsticos Domissanitrios So produtos utilizados na limpeza e desinfeco de casas, canis, pocilgas, ambientes domsticos e /ou coletivos. Estes incluem: detergentes; limpadores lquidos e abrasivos; alvejantes; desentupidores/desengraxantes; lcalis; cidos; polidores. Detergentes So produtos cujo princpio ativo so surfactantes; agentes tenso-ativos, que baixam a tenso superficial da gua, desnaturam protenas, alteram a permeabilidade das membranas celulares, permitindo a passagem de enzimas, metablitos. So classificados conforme sua carga inica:

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No inicos: pouca atividade germicida, levemente irritantes de mucosas; utilizados em formulaes de medicamentos,aditivos alimentares. Toxicidade: dificilmente causam alteraes quando ingeridos ou em contato com a pele ou mucosas. Tratamento: descontaminao com gua. Aninicos: possuem carga negativa; so derivados sulfonados alquilbenznicos;; so biodegradveis quando possuem cadeia alquil linear e apresentam difcil degradao no meio ambiente quando esta ramificada; atuam sobre germes Gram positivos. Toxicidade: moderadamente txicos, quando ingeridos. Sinais clnicos: irritantes do trato gastrintestinal. Tratamento: diluir com gua, demulcentes e sintomtico. Catinicos: possuem carga positiva; basicamente derivados quaternrios da amnia; atuam como bactericidas e antisspticos; atuam sobre germes Gram positivos e negativos, fungos, bactrias e vrus; utilizados para desinfeco de material cirrgico, amaciantes de roupas e condicinadores de cabelos (baixas concentraes). Toxicidade: altamente txicos, dependendo da dose ingerida. Sinais clnicos: distrbios gastrintestinais como nuseas, vmitos; alteraes neurolgicas como agitao psicomotora, convulses at parada respiratria e morte. Tratamento: induzir emese com solues fracas de detergente neutro; hidratao e benzodiazepnicos, se houver convulses. Limpadores (lquidos e abrasivos) So produtos que contm leo ou essncia de Pinho, amonaco, formaldedo ou abrasivos. Limpadores ou desinfetantes com leo ou essncia de Pinho/eucalipto: algumas formulaes podem conter surfactantes; contm substncias derivadas do petrleo, o que lhes confere uma ao irritante de mucosas, alm de risco de pneumonite qumica em caso de aspirao. Sinais clnicos: irritao gastrintestinal (nuseas, vmitos, at gastrite hemorrgica) e urinria com hemoglobinria devido hemlise. Tratamento: evitar emese (risco de aspirao); alimentos ou laxantes oleosos (aumentam a absoro); RX de trax, 24 horas aps ingesta pelo risco de pneumonite qumica; neste caso utilizar antimicrobianos. Limpadores ou desinfetantes com amonaco ou formaldedo: substncias casticas que causam leses de pele e mucosas; atentar para seu uso em canis e pocilgas, adicionado ao hipoclorito de sdio, risco de potencializar os efeitos custicos e pela maior liberao de gases que levam a alteraes respiratrias mais intensas. Sinais clnicos: ingeridos - distrbios gastrintestinal, com nuseas, vmitos, diarria (risco de desidratao); distrbio hidroeletroltico; leso renal que leva a oligria, albuminria; inalados - tosse, dispnia, espasmos de glote e laringe. Tratamento: descontaminao, evitar o vmito, diluir com leite ou gua; assistncia respiratria; corrigir desequilbrio hidreletroltico; controle de funo renal. Abrasivos: produtos compostos por slica, pedra pome; utilizados na limpeza de utenslios domsticos. Toxicidade: baixa toxicidade. Sinais clnicos: saponceo p - irritao das vias areas superiores; ingesto do p ou do creme - irritao gastrintestinal. Tratamento: descontaminao e sintomtico. Alvejantes Tambm utilizados como antisspticos. O princpio ativo o hipoclorito de sdio, que em contato com o suco gstrico se transforma em cido hipocloroso que aumenta seu potencial irritante de pele e mucosa; comercialmente apresenta-se com uma concentrao de 3% de cloro ativo, existindo formulaes com at 12 % de cloro ativo, o que torna o produto corrosivo. Diagnstico: odor caracterstico; reaes com nitrato de prata onde ocorre precipitao branca; reaes com nitrato de chumbo onde ocorre precipitao branca que se torna alaranjada/marrom.

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Sinais clnicos: ingeridos - nuseas, vmitos, irritao de oro-faringe; alterao hidreletroltica importante; edema de glote com risco de asfixia e apresentao de cianose; raramente, perfurao de mucosa gstrica; inalados - irritao do trato respiratrio (cianose e asfixia). Tratamento: descontaminao, demulcentes, sintomtico (analgsicos/hidratao). Desentupidores/Desengraxantes So produtos cujo princpio ativo o hidrxido de sdio; utilizados na indstria, em pocilgas, canis e residncias com a finalidade de retirar matria orgnica acumulada. Toxicidade: emergncia toxicolgica; provoca queimaduras muito invasivas devido ao seu alto pH. Sinais clnicos: dor intensa e imediata; vmitos que se tornam sanguinolentos; dificuldade respiratria; colapso circulatrio por hipovolemia; choque hemorrgico por perfurao de esfago e estmago; em contato com os olhos, causam lceras de crnea; a morte geralmente ocorre por asfixia ou por infeco secundria entre o segundo e terceiro dia aps a ingesta, podendo ocorrer ao final de uma semana (rigidez abdominal, choque por septicemia e morte). Tratamento: demulcentes de forma fracionada, correo de desequilbrio hidreletroltico; corticides (diminuir estenoses); antimicrobianoterabia; repouso gstrico (pelo menos por 4 horas). cidos cido actico: vinagre de cozinha, baixo risco toxicolgico, podendo provocar leve desconforto abdominal. cido brico: utilizado em medicamentos (colrios - baixas concentraes). Apresentaes com outras finalidades (15g do produto, representa risco de vida). cido clordrico ou muritico: utilizado na limpeza de utenslios domsticos, possui mdia toxicidade. cido oxlico: presente nos polidores de metais, combina-se com o clcio do organismo formando oxalato de clcio insolvel, que causa hipocalcemia e leso tubular renal. cido sulfrico: cido forte, utilizado em baterias de automveis; em contato com pele e/ou mucosas causa necrose de coagulao. Toxicidade: os cidos fortes formam uma necrose por coagulao, isto , formam um cogulo que impede um aprofundamento intenso da leso inicial. Sinais clnicos: dor local, nuseas, vmitos; edema de glote; tosse com aumento da secreo brnquica que pode levar a edema pulmonar; contato - queimadura de pele, mucosa e leso de crnea; desidratao, hipotenso e choque; aumento da temperatura corporal. Tratamento: demulcentes de forma fracionada; evitar provocar vmito ou lavagem gstrica, neutralizao qumica (reao exotrmica) e oferecer alimentos slidos; correo do desequilbrio hidreletroltico; descontaminao de pele, mucosas, olhos por lavagem copiosa com soluo fisiolgica. lcalis xido de clcio: produto alcalino de pouco poder invasivo e sem efeito corrosivo; quando em contato com a gua produz calor. Hidrxido de sdio (soda castica): de pH em torno de 12; apresenta-se na forma lquida e em escamas. Toxicidade: provocam uma necrose do tipo liquefao com aprofundamento da leso inicial. Sinais clnicos: dor local (pode ocorrer destruio das terminaes nervosas, ficando prejudicada a relao dor/ leso); vmitos escuros; desequilbrio hidreletroltico; contato - queimadura de pele, mucosa e leso de crnea; desidratao; hipotenso e choque; aumento da temperatura corporal. Tratamento: demulcentes de forma fracionada; evitar provocar vmito ou lavagem gstrica, neutralizao qumica (reao exotrmica) e oferecer alimentos slidos; correo do desequilbrio hidreletroltico; descontaminao de pele, mucosas, olhos por lavagem copiosa com soluo fisiolgica. Polidores So produtos utilizados na limpeza e polimento de utenslios domsticos. Polidor de mveis: contm destilados do petrleo.

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Sinais clnicos: irritao pulmonar, de mucosa gstrica, pele e mucosas; depresso do SNC. Polidor de metais: contm cido oxlico, substncia castica. Sinais clnicos: irritao pulmonar, de mucosa gstrica, pele e mucosas. Polidor de sapatos: contm ceras e anilina (pigmento). Toxicidade: ceras apresentam baixa toxicidade; a anilina metahemoglobinizante, mas pela quantidade na formulao, representa pouco risco. Removedor de ferrugem: contm vrias substncias de interesse toxicolgico: hipocloritos, cido oxlico,... Sinais clnicos: irritao pulmonar, de mucosa gstrica, pele e mucosas. Tratamento: para polidores de mveis, metais e removedores de ferrugem, administrar demulcentes de forma fracionada; evitar provocar vmito ou lavagem gstrica, neutralizao qumica e oferecer alimentos slidos; correo do desequilbrio hidreletroltico; descontaminao de pele, mucosas, olhos por lavagem copiosa com soluo fisiolgica. Produtos de Higiene e Cosmticos Desodorantes: produtos a base de agentes antibacterianos/antiperspirantes como alumnio/zircnio e lcool. Perfumes/Colnias/Loes de barba Toxicidade: devido a grande quantidade, o lcool, representa maior risco. Sinais clnicos: irritao de mucosa, nuseas e vmitos; alteraes neurolgicas como euforia, seguida de depresso. Batom: contm leo de rcino e ceras. Toxicidade: baixa. Sinais clnicos: distrbio gastrintestinal, se ingerido em grande quantidade. Loes Depilatrias: produtos a base de tioglicolatos, que por seu pH 8-12, torna-se castico; contm sulfetos que conferem ao produto odor de ovo podre. Sinais clnicos: irritao pulmonar, de mucosa gstrica, pele e mucosas. Loes para Permanente: produtos a base de tioglicolatos, que por seu pH 8-12, torna-se castico; contm bromatos, substncias metahemoglobinizantes. Sinais clnicos: irritao pulmonar, de mucosa gstrica, pele e mucosas; metahemoglobinizantes cianose e distrbios neurolgicos devido a hipxia. Tratamento: descontaminao; azul de metileno (1 mg/kg IV), associado com cido ascrbico 1 a 2g/dia; transfuso de sangue se necessrio. Tintura para Cabelos: produto a base de pigmentos (metais pesados) e fenilenodiamina (reagente qumico); agentes oxidantes. Sinais clnicos: irritao de mucosa gstrica, pele e mucosas; reao de hipersensibilidade com edema de face, lbios e glote. Talco: produto a base de carbonato de magnsio. Toxicidade: praticamente atxico, ocorrendo risco de asfixia por seu efeito mecnico, pois com a saliva pode formar bolo. Tratamento geral para todos os produtos de higiene e cosmticos, alm do especfico descrito: demulcentes; correo do desequilbrio hidreletroltico; descontaminao de pele, mucosas, olhos por lavagem copiosa com soluo fisiolgica. Colas e Adesivos: amplamente utilizadas utilizadas, tanto em ambiente domstico, escolar e em indstrias de calados, aeromodelismo, etc; os acidentes ocorrem por confuso pela semelhana das embalagens com produtos como pasta de dentes, alimentos, que quando deixados no cho ou local inadequado, servem para bricadeiras e so mordidos pelos animais jovens.

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Colas Brancas: colas plsticas, praticamente incuas. Colas de sapateiro ou de aeromodelismo: contm tolueno. Recomendado ambiente arejado quando da sua utilizao. Sinais clnicos: euforia; irritabilidade; bronquite at asfixia; dermatites; ingerido (raro) - edema de lbios, edema de lngua com dor e sialorria; alteraes hematolgicas (uso ou exposio crnica), quando h contaminao por benzeno, pode levar aplasia de medula. Colas do tipo Bonder: adesivo instantneo a base de cianoacrilato de metila/bucrilatos. Toxicidade: baixa, o contato provoca adeso rpida de tecidos; ingesto improvvel, solidifica rapidamente. Sinais clnicos: queimadura em rea de contato; ruptura de estruturas (pele e mucosas), na tentativa de separar. Tratamento: descontaminao com gua morna e emolientes (hidratantes) em movimentos circulares leves; compressas com gua morna e sabo, no separar estruturas. Tintas:

leo: mamona, tungue mais solventes destilados do petrleo; Plstica: base de resinas; Caio: cal extinta: pouco corrosiva; cal virgem em gua: queimadura; Escrever: pequeno risco pela apresentao atual; Carimbar tecidos: surtos em berrios; * Solvente: amina aromtica usada como veculo de pigmento. Sinais clnicos: distrbios neurolgicos, hipxia, cianose. Tratamento: azul de metileno (1 mg/kg IV e cido ascrbico (1g/kg); transfuso. Pigmentos: variam de acordo com a cor. Componentes: branco - xido de titnio, chumbo; amarelo - sulfeto de cdmio, cromato de brio; azul - sulfato de chumbo; marrom - xido de ferro; verde - xido de cromo e vermelho - xido de ferro e sulfeto de mercrio. Toxicidade: risco ocupacional; utilizao de cermicas (Pb em meio cido - quadro de saturnismo).

8.6 Pesticidas 8.6.1 Fungicidas Servem para evitar o crescimento fngico em sementes de gros, plantas (tubrculos, frutas, etc.), solo ou madeiras. Variam em toxicidade; veculos como solventes tambm podem ser txicos. Sinais clnicos: inespecficos; anorexia, depresso, fraqueza e diarria. Tratamento: descontaminao do animal; supresso da fonte de origem do envenenamento (pastagem ou alimento), tratamento sintomtico. Ditiocarbamatos: dissulfeto de thiuram; ditiocarbamatos metlicos e etileno-bis-ditiocarbamato. Caractersticas: derivados do cido ditiocarbamico, degradao mais acentuada devido a maior umidade ou meio cido; cristais slidos, brancos ou incolores, solveis em solventes orgnicos apolares (acetona, clorofrmio, benzeno, e xileno). Toxicocintica: absorvidos por via oral, respiratria ou cutnea. Toxicidade: varivel; baixa a moderada; lcool favorece o aumento da toxicidade; etileno-etiluria (ETU) como impureza de fabricao da formulao possui efeitos carcinognico (adenocarcinoma de tireide), teratognico e mutagnico em animais de laboratrio.

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Sinais clnicos: depresso, anorexia e diarria amarelada em herbvoros; em exposio intensa dermatite, faringite, bronquite e conjuntivite (mamferos); Thiram e Ziram em aves induz atraso do crescimento, inibio da postura, diminuio da ingesto de rao, aumento da mortalidade embrionria e deformaes dos membros de aves jovens; Tratamento: descontaminao, remoo do animal do local contaminado e suspenso da alimentao suspeita; sintomtico. Fungicidas a base de cobre: sulfato de cobre (princpio ativo da calda bordalesa); oxicloreto de cobre; xido cuproso e hidrxido de cobre. Toxicidade: intoxicao rara, cobre induz vmito, pouco palatvel, necessrio doses elevadas; aguda 1-2 dias e crnica 1-4 dias. Mecanismo de ao: inibe enzimas vitais, induzindo alteraes hepticas, metemoglobinemia, crise hemoltica e necrose renal; sulfato de cobre tem propriedades custicas (leses de pele e mucosas) Diagnstico: sinais clnicos: agudos - diarria aguda profusa, hemorragias e ptialismo; sinais nervosos fase convulsiva seguida de paralisia membros posteriores; sinais cardiovasculares diminuio do pulso, taquicardia e morte por colapso; monogstricos - vmito azulado; laboratorial: alterao das enzimas hepticas, amostras de fgado e rim para exame toxicolgico; leses: aguda - gastrenterites, congesto heptica, renal e esplnica; crnico - ictercia, degenerao heptica, vescula biliar aumentada, rins friveis e com petquias e derrames cavitrios sero-hemorrgicos. Tratamento: descontaminao cutnea com gua (contato direto com o produto); demulcentes para favorercer a precipitao do Cu existente no contedo gstrico; sintomtico e queladores de metais (BAL, EDTA, e penicilamina) indicados em casos graves - prognstico grave; Fungicidas derivados do fenol: Pentaclorofenol: fungicida, herbicida, bactericida, molusquicida e inseticida; preservante de madeira. Exposio: animais de produo: aves (maravalha), cochos, postes. Toxicocintica: absorvido rapidamente pela pele, pulmes (volatizao) e tratogastrintestinal; inibidor enzimticos (diminui a formao de ATP). Sinais clnicos: irritao de pele e mucosas; fraqueza muscular e anorexia; se grave - hipertermia, polipnia e morte por colapso. Leses: rigidez cadavrica precoce, petquias e congesto generalizada. Tratamento: descontaminao cutnea; diminuio da temperatura com duchas de gua fria; sintomtico. 8.6.2 Herbicidas inorgnicos: arsnicos e clorados; a maioria banida para uso; orgnicos sintticos (mais utilizados): controle de ervas daninhas. Mecanismo de ao: herbicidas reguladores de crescimento e inibidores de crescimento, fosforilao oxidativa, fotossntese, mitose, sntese de clorofila, dentre outros; Herbicidas fenoxiacticos: 2-4D (cido 2,4-diclorofenoxiactico); 2,4,5 T (cido triclorofenoxiactico); MCPA (cido metil-4 clorofenoxiactico). Exposio: ingesto de concentrados, na gua, pastagens ou com plantas txicas (potencializando a toxicidade: Chenopodium, capim Sudo). Toxicidade: aumentada por contaminante dioxina teratognica; aumentam o potencial txico de algumas plantas (nitritos) e a palatabilidade (ingesto); ons de nitrito transformam hemoglobina em metahemoglobina (anxia tecidual); ces: maior toxicidade - excreo lenta; aguda DT de 200 mg/kg para bovinos e 100 mg/kg para sunos; DL50 oral 500 mg/kg para ratos e 100 mg/kg paraces; crnica: 100 mg/kg para bovinos (10-30d).

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Mecanismo de ao: deprimem a sntese de ribonucleases, desacoplam a fosforilao oxidativa e aumentam o nmero de peroxissomos hepticos. Toxicocintica: absoro: via inalatria e oral, a cutnea menor e incompleta; distribuio: ligado a protenas plasmticas vai p/ fgado, rins e crebro; biotransformao: por hidrlise; excreo: por secreo tubular, T1/2 18h (na forragem de 1-2 semanas); caninos excretam mais lentamente (melhor se alcalinizar a urina). Diagnstico: sinais clnicos: irritao de mucosa; via oral - hipersalivao, lceras orais, timpanismo, estase ruminal, dor gstrica, vmito e diarria sanguinolenta, miotonia seguida de fraqueza muscular, ataxia, incoordenao e perda de reflexos; espasmos clnicos peridicos, anorexia e depresso; laboratorial: eletromiograma (ces), creatinina fosfocinase, lactato desedrogenase e fosfatase alcalina; anlises qumicas de forragens, urina ou tecido renal; leso: membranas musculares em ces; lceras orais, fgado aumentado e frivel, congesto renal e degenerao tubular, linfonodos e vasos mesentricos hipermicos e aumentados, hemorragia epicrdica, hidropericrdio. Tratamento: no h antdoto especfico; descontaminao das reas atingidas, medidas gerais de diluio e esvaziamento gstrico, tratamento sintomtico; azul de metileno ou altas doses de cido ascrbico- metahemoglobinemia; monitorizao da funo renal. Derivados de Fenis e Cresis: 2-4 Dinitrofenol, 2-4 Dinitrortocresol. Toxicocintica: absoro: boa absoro por todas as vias. Mecanismo de ao: estmulo da oxidao celular (catabolismo de glicdios), inibio da sntese de ATP; aumento do consumo de oxignio e diminuio da glicose srica; ao corrosiva. Toxicidade: aumentada: por temperaturas altas; atividade fsica; ms condies gerais; veculos como solventes oleosos ou orgnicos; exposies anteriores; hipotireoidismo; reduzida: por baixas temperaturas; drogas antitireoidianas; presena de gordura corprea. Sinais clnicos: hipertermia elevada (40-44 C em ruminantes), anorexia, sede intensa, dermatites, eroso de mucosas, polipnia, sudorese, desidratao progressiva; acidose, taquicardia, alteraes hepticas e renais; coma e morte; em ruminantes o Dinoseb causa metemoglobinemia - colorao amarelada da pele em torno da boca, no pelo e em torno do nariz e cascos que persiste de dias a semanas. Tratamento: no existe antdoto; sintomtico (diminuio da temperatura; hidratao); contraindicados o uso de morfina e barbitricos. Triazinas: Atrazina, Triazina, Simazina, Prometon, Prometrina, Ciazina, Terbutrine, Propazina e Ametrina. Toxicidade: variada, dependendo das formulaes e solventes. Mecanismo de ao: inibio da fotossntese (no animal desconhecido). Caractersticas: persistncia no solo: 3 18 meses. Sinais clnicos: anorexia, depresso, atonia muscular, espasmos musculares e dispnia; fraqueza, incoordenao motora. Leses: congesto gastrintestinal; enfisema pulmonar, hemorragias no miocrdio, rins e encfalo. Tratamento: sem antdoto especfico; sintomtico. Herbicidas dipirilo e bidipirilo: Paraquat, Diquat,... Caractersticas: no volteis, solveis em gua e estveis at 300C, fortemente ligados a argila do solo. Exposio: formas concentradas na agricultura, consumo de concentrados ou em misturas em tanques. Toxicocintica: absoro: oral, menos de 20%; dermal, menos de 10%;

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distribuio: 10x mais nos pulmes; biotransformao: mnima; excreo: maioria inalterado na urina. Toxicidade: aguda - DL50 ratos: 100 mg/kg, perus: 250 mg/kg, outras espcies: 25-75 mg/kg; crnica 170 ppm por 2 meses em ces. Diagnstico: sinais clnicos: agudos - ingesto custica (estomatite, faringite, traquete, dores na faringe e abdominais intensa, vmito e diarria), depresso, ataxia, dispnia, cianose e convulses; 2-10 dias - congesto e edema pulmonar; infiltrao, conduzindo a fibrose pulmonar progressiva. laboratorial: toxicolgico (2-3 dias). leses: congesto, hemorragia, atelectasia, broncodilatao, enfisema pulmonar e leses de membrana, degenerao celular e necrose (principalmente pulmonar). Tratamento: induzir emese, lavagem gstrica, adsorventes (bentonita), ventilao assistida (oxignio contra-indicado), monitorar a funo renal, administrao de antagonistas bioqumicos: superxido dismutase, acetilcistena, cido ascrbico, niacina e riboflavina. Tiocarbamatos: Pebulate, Dialato, Trialato, Diclormato, Vernolato, Clorprofam, Barban, Pebulato, Molinate. Toxicidade: moderada; bastante volteis. Sinais clnicos: ruminantes - espasmos musculares, ataxia, depresso e prostrao; crnico alopecia. Leses: alteraes hepticas, congesto e necrose renal. Tratamento: antdoto desconhecido; descontaminao das reas atingidas, diluio ou esvaziamento gstrico e sintomtico. 8.6.3 Molusquicida Metaldedo: princpio ativo nas preparaes de molusquicidas, utilizado no combate a lesmas e caracis; normalmente de colorao azul-esverdeada, contendo de 3,5-8% de metaldeido; palatvel, podendo ser ingerido por ces, gatos e ovinos. Toxicidade: DL50 oral para ces: 60 mg/kg. Toxicocintica: absoro: rapidamente absorvido por via digestiva; biotransformao: metabolizado em acetaldeido; excreo: urinria. Diagnstico: sinais clnicos: podem surgir de 30min a 3h - ansiedade e inquietao, sialorria, hiperpnia, taquicardia, congesto de pele e mucosas, midrase, nistagmo, hipertermia, vmitos, hematemese, diarria e desidratao; ataxia, tremores musculares, opisttono, convulses e cianose; eventualmente, sonolncia; gatos - nistagmo predominante; bovinos e ovinos - predominam ataxia/ tremores; eqinos - predominam clicas, diarria, sudorese e tremores. laboratorial: acidose metablica; colinesterase para diferenciar de organofosforado. leses: macroscpicas - congesto heptica, renal e pulmonar, petquias e equimose gastrintestinal; microscpicas - edema, degenerao heptica e neuronal cerebral. diferencial: organofosforado - atividade da acetilcolinesterase. Tratamento: descontaminao - emese ou lavagem gstrica; carvo ineficaz; sintomtico diazepam ou pentobarbital para sedao e controle de convulses; respirao assistida; correo da acidose; dextrose,vitaminas e antimicrobianos, em alguns casos. * Inseticidas Organofosforados/Carbamatos e Piretrides so abordados em produtos veterinrios.

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8.6.4 Rodenticidas Produtos elaborados a partir de substncias anticoagulantes (derivados cumarnicos ou indanediona) esto disponveis comercialmente em vrias apresentaes como pastas, granulados, blocos parafinados, ps. H ainda, produtos ilcitos como a estricnina e o fluoracetato de sdio (1080). Exposio: iscas colocadas para controle de roedores em locais acessveis aos animais domsticos e contaminao acidental ou intencional dos alimentos. Anticoagulantes Toxicidade: conforme a Tabela 15, pode-se verificar as diferenas de sensibilidade entre as espcies.

Tabela 15. Toxicidade dos rodenticidas anticoagulante nas diferentes espcies animais. Varfarina Dose nica / repetida (mg/kg) Gatos 5-50 / 1 (5 dias) Ces 5-50 /5 (5-15 dias) Sunos 3 / 0,05 (7 dias) Ruminantes - / 200 (12 dias) Fonte: Osweiler (1998). * DL50 Espcie Difaciona Dose nica / repetida (mg/kg) 15* 3* 150* Brodifacoum Dose nica / repetida (mg/kg) 25* 0,25-3,6* 0,5-2,0* 25-33*

Mecanismo de ao: inibio competitiva da enzima Vitamina K epxido redutase, necessria para a reduo da Vitamina K, forma biologicamente ativa para exercer a ativao dos fatores II, VII, IX e X, essenciais na cascata da coagulao sangnea. Toxicocintica: absoro: altamente absorvido (90%), com pico plasmtico em 12 horas; distribuio: alta taxa de ligao a protenas plasmticas (90-95% - varfarina); biotransformao: atravs de oxidases de funo mista microssomais geram metablitos hidroxilados inativos; excreo: renal. Comparao entre anticoagulantes: 1 gerao (varfarina, dicumarol,...): antigos, baixa potncia, excreo rpida e, usualmente, necessidade de vrias doses para induo de toxicidade; 2 gerao (brodifacoum, bromadiolona, difaciona,...): mais modernos, retidos no organismo por perodo prolongado, e eficazes aps ingesto de dose nica. Agentes potencializadores da toxicidade: sulfonamidas, antibiticos de amplo espectro (reduzem a sntese no trato intestinal), fenilbutazona e corticosterides (deslocamento dos stios de ligao plasmtica). Diagnstico: sinais clnicos: hematoma subcutneo, epistaxe, hemorragia gengival, fezes escuras, hematemese, hematria (aparentes de 1 a 3 dias aps a ingesto), posteriormente: mucosas plidas, fraqueza, ataxia, dispnia, freqncia cardaca irregular, pulso fraco, cianose e choque; pode haver morte sbita. laboratorial: tempo de coagulao (2-10 vezes mais longo); tempo de protrombina (2-6 vezes mais longo); anlise do anticoagulante ou de seus metablitos em urina, sangue ou tecidos (renal, heptico). leso: hemorragias (equimoses ou sufuses), hemotrax, hemopericrdio, edema e hemorragia pulmonar, necrose centrolobular heptica. Tratamento: 2-5 mg/kg/dia de Fitonandiona (Vitamina K 1), via oral ou SC, divididos em duas tomadas no 1 dia e aps, 2-3 mg/kg/dia, via oral, dividido em trs tomadas p dia, por uma semana; se for anticoagulante de 2 gerao, 1-2 mg/kg/dia, via oral, dividido em trs doses ao dia, por 6 semanas; tratamento de suporte: transfuso de sangue ou plasma.

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Estricnina Uso ilcito como rodenticida. Toxicidade: aguda causada pelo alcalide indlico extrado da Strychnos nux vomica, sendo este, relativamente estvel e persistente no alimento e no ambiente. Conforme a Tabela 16, pode-se verificar as diferenas de sensibilidade entre as espcies. Tabela 16. Toxicidade da estricnina nas diferentes espcies animais. Espcie Estricnina (mg/kg) Aves 5,0 Bovinos 0,5 Ces 0,75 Eqinos 0,5 Gatos 2,0 Ratos 3,0 Sunos 0,5 Fonte: Osweiler (1998). Mecanismo de ao: bloqueio competitivo dos receptores da glicina (neurotransmissor inibitrio); a inibio do arco reflexo perdida, resultando em excitao incontrolvel do reflexo medular, estimulao dos msculos extensores, resultando em rigidez e convulses. Toxicocintica: absoro: rpida pelas mucosas do TGI e respiratria; distribuio: apenas uma pequena parte atinge o SNC (stio de ao), grandes quantidades so encontradas no fgado e nos rins; biotransformao: transformada em N-xido de estricnina pelas oxidases microssomais de funo mista; excreo: urinria (urina cida aumenta a excreo do alcalide). Diagnstico: sinais clnicos: nervosismo, intranqilidade, tremores e abalos musculares, hipersensibilidade a luz e rudos, convulses tnicas ou tetnicas de incio sbito (15min a 2h da ingesto), hipertermia, mioglobinria. laboratorial: creatinina fosfocinase, pesquisa de estricnina em urina, contedo gstrico ou tecido heptico. leso: rigor mortis rpido. Tratamento: anticonvulsivantes (barbitrico ou BZD), mesmo antes da descontaminao por lavagem gstrica (anestesiado e com tubo endotraqueal colocado); diurese lquida e acidificao urinria (caso no esteja em acidose). Fluoracetato (1080) Uso ilcito como rodenticida. Toxicidade: altamente txico para ces (DL50 de 66g/kg) principalmente se comparada toxicidade para gatos (DL50 350g/kg). Mecanismo de ao: o fluoracetato substitui a acetil coenzima A, no metabolismo intermedirio, combinando-se com o cido oxaloactico formando o fluorocitrato que inibe a aconitase, com a conseqente interrupo do ciclo do cido ctrico, resultando em bloqueio da produo de energia e da respirao celular. Toxicocintica: absoro: rpida absoro pelo TGI; biotransformao: hidrolizado a cido monofluoractico.

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Diagnstico: sinais clnicos: ces - intranqilidade, hiperirritabilidade, corrida selavagem, histeria, latidos, emese, defecao, mico, dispnia, sialorria, convulses tnico-clnicas intermitentes; gatos vocalizao e arritmias cardacas; eqinos e ruminantes parada cardaca (morte sbita). laboratorial: hiperglicemia, acidose, nveis de citrato em sangue ou tecido renal, contedo gstrico. leso: rigor mortis rpido, corao plido e flcido. Tratamento: anticonvulsivantes (barbitrico de ao curta), assistncia respiratria, descontaminao por induo de emese ou lavagem gstrica (anestesiado e com tubo endotraqueal colocado); como antdoto o monoacetato de glicerol na dose de 0,55 mg/kg via IM a cada hora, at atingir 2-4 mg/kg ou alternativamente, etanol (50%) em cido actico (5%), 8 mL/kg, via oral (supre de acetato para reduzir a converso do fluoracetato em fluorocitrato).

8.7 Metais e minerais Chumbo Fontes: intensamente utilizado no passado em tintas para edificaes, automotivos, calafetagem, fundies, cermicas, lubrificantes, gasolina, leo queimado, arsenato de chumbo (pesticida),... e pelo carter persistente no ambiente, ainda provoca intoxicaes; dentre os usos atuais, cita-se: baterias, chumbos de pesca, chumbo grosso para caa e sola para encanamentos. Mecanismo de leso toxicolgica: o chumbo liga-se aos grupos sulfidrilas de muitas enzimas envolvidas na funo hematopotica, interferindo na ao das mesmas (inibio da ALAD, hemesintetase, ferroquelatase reduzindo a sntese do heme e acumulando seus precursores (ALA, cocproporfirinas, e protoporfirina de zinco), alm da inibio da 5-nucleotidase (conduzindo a reteno de cidos nuclicos e ribossomas pontilhado basoflico); o chumbo compete com o zinco nos stios de ligao de algumas enzimas; no SNC interfere no GABA, na funo colinrgica, na captao da dopamina e no clcio (reduo das concentraes extracelulares); Toxicidade: pode ser sazonal, aumentando a incidncia na primavera-vero, maioria subaguda, por objetos no TGI; a absoro lenta e incompleta (2-10%), sendo aumentada em pH cido e na carncia de Ca e Zn; transportado como protenato de chumbo na membrana dos eritrcitos (concentraes muito baixas no soro); deposita-se brevemente em tecidos moles, atravessa a barreira placentria e acumula-se no feto; grande deposio em ossos (70% nos ossos esponjosos), bloqueando a hematopoese na medula ssea; excretado na urina. Diagnstico: sinais clnicos: encefalopatia com convulses, tremores, cegueira, depresso ou demncia; alteraes digestivas com anorexia, clicas, emese e constipao; anemia e proteinria; em bovinos ocorre oscilao da cabea com contrao rtmica das orelhas, estase ruminal e aborto tardio; em eqinos h roncos (paralisia do nervo recurrente larngeo), clica, engrossamento das epfises em potros; em ces ocorre histeria depresso intermitentes; em gatos h depresso e miados persistentes; em aves aquticas: paresia das asas e psitacdeos torcicolo e movimentos circulares. laboratorial: hematologia: o nvel de chumbo em sangue elevado em todas as espcies afetadas (0,4 ppm associa-se a sinais clnicos e menos de 0,1 ppm considerada normal), bovinos: porfiria plasmtica e urinria; ces: pontilhado basoflico, eritrcitos nucleados e protoporfirina de zinco; urinlise: aumento dos nveis de ALAU; radiologia: em pequenos animais imagens radiodensas abdominais compatveis com a ingesto de objetos de chumbo; animais jovens (ces, potros,...) apresentam esclerose metafiseal e linhas de chumbo. leses: as macroscpicas incluem musculatura plida em bovinos, fragmentos de tinta, leo queimado,... no TGI alm da fluorescncia do plasma sob luz ultravioleta (porfiria); as microscpicas em bovinos incluem necrose cerebral cortical e polimalcia, degenerao tubular ou necrose renal, incluses nucleares de reao cida no epitlio tubular renal. Tratamento: quelao EDTA-clcico-dissdico (no aprovado pelo FDA para uso veterinrio) passvel de aquisio em farmcias ou indstria qumica; * evitar o EDTA tetrassdico, pois pode quelar o clcio e conduzir a hipocalcemia; 110 mg/kg de EDTA-clcico-dissdico diludo em 1g/mL 265

de glicose 5%, dividido em 3 doses, sendo a 1 IV e as demais SC, mximo por 5 dias; efeitos adversos como depresso, anorexia e emese, podem ser antagonizados pela suplementao com zinco; pode ocasionalmente aumentar os nveis de chumbo por mobiliz-los dos locais de armazenamento inertes (ossos), sem quelar o chumbo no SNC; o dimercaprol administrado antes do EDTA pode auxiliar no alvio dos sinais neurolgicos agudos (atravessa a BHE) alm de aumentar a excreo biliar e urinria do chumbo; a D-penicilamina tambm queladora e ativa por via oral, na dose de 8 mg/kg dividida em 4 tomadas/dia , utilizada em intoxicaes crnicas ou aps o uso de EDTA; o ADS cido dimercaptosuccnico recomendado para pssaros (menos txico), na dose de 25-35 mg/kg VO, dividida em 2 tomadas/dia, por 5 dias. Terapia de suporte: descontaminao do TGI com sulfato de magnsio (precipita o chumbo e promove a evacuao); tiamina (0,5-1g/dia para bovinos); corticosteride e manitol (edema cerebral em bovinos e eqinos); diazepam ou barbitricos (controle de convulses); suplementao com zinco; hidratao; administrao de probiticos ou contedo ruminal; remoo cirrgica dos objetos ou rumenotomia (estase). Consideraes de sade pblica: a ocorrncia de surtos de intoxicao por chumbo em rebanhos deve ser comunicada s autoridades de sade pblica; as fontes de intoxicao so comuns a homens e animais (podendo estes servir como indicadores biolgicos de contaminao ambiental); apesar da excreo de chumbo pelo leite ser mnima, especial ateno deve ser dada a produtos contendo ossos ou farinha de ossos (local de armazenamento). Arsnico Fontes: minas, solos prximos de mineraes, fundies, ...; ambiente ele existe na forma pentavalente, mas pode ser metilado por microorganismos; herbicidas (inorgnicos no passado e orgnicos na atualidade); tiacetarsamida (tratamento da dirofilariose em ces); aditivo alimentar (cido aesanlico, arsanilato de sdio,...). A exposio ocorre por contato com os pesticidas armazenados inadequadamente, solos contaminados, pilhas incineradas, guas contaminadas, iscas para formigas, uso teraputico, uso crnico ou dose excessiva como aditivo alimentar para aves ou sunos (pentavalente). Toxicocintica: facilmente absorvidos pelo TGI e pele; os arseniacais inorgnicos sofrem metilao o que pode auxiliar na detoxificao; uma pequena frao do pentavalente pode ser reduzida a trivalente (mais txico), sendo que o pentavalente excretado via renal e o trivalente via biliar-fecal, dentro de poucos dias. Toxicidade: inorgnicos trivalentes so 10 vezes mais txicos que os pentavalentes; dentre as espcies mais suscetveis a intoxicao aguda, citam-se gatos, eqinos seguidos pelos bovinos, ovinos, sunos e aves; toxicidade crnica rara. Diagnstico: pelos sinais clnicos associados ao histrico de exposio, confirmado por anlises de lquidos orgnicos. sinais clnicos: agudos/trivalente: vmito, dor abdominal intensa, diarria aquosa grave de incio sbito, atonia ruminal e gastrintestinal, fraqueza, rigidez, ataxia, decbito, pulso rpido e fraco, sinais de choque hipovolmico; se sobrevivem, na seqncia pode haver oligria e proteinria, desidratao, acidose e azotemia o que pode levar a morte. agudos/pentavalente: ataxia, incoordenao, torcicolo e cegueira, fraqueza e decbito lateral. laboratorial: hemoconcentrao, aumento do nitrognio urico sangneo, proteinria, aumento de densidade urinria e presena de cilindros no sedimento; pesquisa de arsnico inorgnico em plos, fezes, urina ou vmito, se post mortem, em fgado, rins ou tecido nervoso; arsnico orgnico, deve ser investigado principalmente em tecido nervoso. leses: congesto da mucosa gastrintestinal, edema de submucosa, necrose epitelial e acmulo macio de lquidos no intestino delgado; rins plidos e edemaciados, fgado plido, petquias da mucosa e serosa intestinal; as leses microscpicas incluem: dilatao capilar intestinal, necrose epitelial intestinal e tubular renal, degenerao gordurosa do fgado. Tratamento: desintoxicao gastrintestinal com emticos e carvo ativado; terapia hidreletroltica e correo cido-bsica; o antdoto dimercaprol s eficaz se administrado

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precocemente (antes dos sinais clnicos aparecerem); apesar do cido tiico ser mais eficaz que o dimercaprol (para bovinos), este no est disponvel comercialmente, nem aprovado para ser utilizado em animais de produo. Mecanismo de leso toxicolgica: Cardiovascular Dilatao capilar A G U D O Gastrintestinal Dilatao vascular esplncnica e necrose epitelial Vesculas e edema da camada submucosa Reduo dos volumes de lquidos extracelular e sangue. Diarria e perda de eletrlitos Hipotenso, choque e desidratao Necrose da mucosa C R N I C O Renal Dilatao capilar glomerular Proteinria Hipotermia Necrose e cilindros tubulares Dermal Vasodilatao

Morte Isquemia renal Fibrose renal Hiperceratose

Figura 24. Patognese da intoxicao por arseniacais (Fonte: Osweiler, 1998). Molibdnio Fontes: solos cidos, escassamente drenados ou contaminados com resduos de minrios, em plantas, especialmente nas pastagens de solos ricos em molibdnio, na primavera/vero, tambm em tijolos de argila ricas em molibdnio, usinas de ao ou alumnio, indstria de fertilizantes. Mecanismo de leso toxicolgica: promove excreo do cobre (complexo cobre-molibdato), causando deficincia de cobre, levando a reduo na integridade dos eritrcitos, interferindo na sntese de melanina (reduo na atividade da tirosinasinase) e na resistncia do colgeno nos ossos e na elastina nos vasos sangneos (reduo na atividade da lisil oxidase); compete com o fsforo para mineralizao dos ossos; aumento do armazenamento de cobre heptico em sunos. Toxicidade: bovinos so mais suscetveis, especialmente os jovens; a toxicidade pode ser aumentada pela presena de altos nveis de sulfatos na dieta e reduzida pelo cobre. Diagnstico: baseado nos sinais clnicos caractersticos, associado aos nveis sricos de molibdnio e/ou de cobre. sinais clnicos: diarria esverdeada, lquida e espumosa (8 a 10 dias aps), acromotriquia, reduo da produo de leite, libido e fertilidade, dor articular, claudicaes e fraturas espontneas, anemia, apetite depravado; laboratorial: nveis sricos(>0,1 ppm) ou hepticos (>5 ppm) de molibdnio e nveis sricos (<0,6 ppm) ou hepticos (<10 ppm) de cobre. leses: enterite, flacidez, intestino cheio de lquido, rarefao ssea, exostoses, hemosiderose e eritrcitos microcticos e hipocrmicos.

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Tratamento: casos subagudos e graves: glicinato de cobre SC, nos crnicos, sulfato de cobre na dieta. Ferro Elemento metlico de transio, de carter bsico, apresentando-se normalmente em duas formas oxidativas: estado ferroso ( Fe +2) e frrico (Fe+3), podendo-se interconverter dentro do organismo. Grande proporo do ferro (60%) no organismo encontra-se presente na molcula de hemoglobina. Fontes: suplemento nutricional (sulfato ferroso, fumarato-ferroso, fosfato frrico); injetveis: ferrodextrano. Mecanismo de leso toxicolgica: o excesso de ferro no sangue ocorre pelas vias oral e parenteral. O ferro srico que excede a capacidade de ligao a transferritina provoca alteraes na membrana que resultam em leses vasculares e hepticas, choque e morte. O ferro elementar no ligado corrosivo direto das clulas epiteliais; causa corroso de estmago e intestino delgado; perfurao, hemorragia gstrica e peritonite; o acmulo de ferro heptico causa leso mitocondrial que tem como conseqncia necrose heptica; leses nas membranas por radicais livres levam ao aumento da permeabilidade vascular, hemorragia e colapso cardiovascular. Toxicidade: maior com preparaes injetveis; dosagens txicas VO: 20-60 mg/kg moderada; > que 60 mg/kg alta; > que 200 mg/kg letal; dietas contendo mais que 5000 ppm de ferro interferem na absoro de fosfatos, conduzindo ao retardo no crescimento com raquitismo em leites. Diagnstico: sinais clnicos: intoxicao via oral: 1as 6 horas, sonolncia, depresso, vmito e diarria hemorrgica; pode ocorrer melhora aparente, mas em 24 horas retorna diarria,desidratao, necrose heptica aguda, choque, acidose e coma. intoxicao via parenteral: 2 sndromes: depresso grave, choque, e acidose, resultante do excesso de ferro circulante; reao tipo anafiltica aps injeo (pode no depender da dosagem e sim, relacionada com liberao de histamina). laboratorial: taxa normal de ferro srico: 100-300 g/dl, se aumentada de 50 a 100% acima da taxa normal (h dificuldade na interpretao por variarem muito as taxas normais em filhotes ou recm nascidos), requer tratamento com quelante; acidose; bilirrubinemia e enzimas sricas hepticas aumentadas; radiografia abdominal pode revelar quantidade de comprimidos ingeridos. leses: necrose de mucosas; enterite com contedo hemorrgico; congesto de vasos hepticos, esplnicos e renais; necrose heptica, ictercia e hemoglobinria. Tratamento: induzir emese (menos de 4 horas); demulcentes; leite de magnsia precipita o ferro, na forma de hidrxido de ferro que insolvel; carvo ativado NO adsorve o ferro; controlar choque, desequilbrios hidreletrolticos e cido-bsicos (solues de bicarbonato 6%.via oral que aumenta o pH no local de absoro); quelao com a deferoxamina (Desferal , 20-40 mg/kg a cada 4 horas ou 15 mg/kg em infuso IV; ateno administrao rpida pode causar arritmia cardaca ou aumentar a hipotenso por promover a liberao de histamina. A urina com colorao marrom avermelhada no incio do tratamento pela excreo do ferro. Os nveis sricos devem ser monitorizados at taxas normalizarem (2-3 dias). Cuidado com convalescentes, pois sobreviventes podem ter escaras intestinais residuais e leses hepticas que requerem cuidados apropriados. Cobre Elemento metlico de transio, de carter bsico, que apresentando como caracterstica qumica a facilidade de se oxidar, em especial na forma inica (Cu+). A principal via de eliminao do cobre biliar; para tal, o cobre tem que se ligar uma metaloproteina chamada metalotionena, produzida nos hepatcitos; quanto menor a capacidade de ligao da metalotionena com o cobre, menor a capacidade de excreo do cobre heptico e maior predisposio intoxicao. Isto ocorre nos ovinos, onde apenas cerca de 5% do cobre heptico, est ligado a esta protena, enquanto no homem, em sunos, ratos e nos fetos de quase todas as espcies, 85% do cobre est ligados metalotionena. Fontes: sais de cobre so utilizados tanto na agricultura como sulfato de cobre na pulverizao de rvores frutferas no combate s doenas fngicas (calda bordalesa), solos adubados, e na pecuria nos

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tratamentos de podermites, como anti-helmntico, nas raes com suplementaes de cobre; solos contaminados por indstrias de metais; em confinamento de ovelhas com acesso limitado a forragem verde (com molibdnio suficiente para prevenir acmulo de cobre no fgado). Txicocintica absoro: no intestino; distribuio: fixa-se nos eritrcitos e, quando lanado na circulao, armazenado basicamente no fgado, podendo ocorrer ciculao entero-heptica; excreo: via biliar. Mecanismo de ao: o aumento da concentrao do cobre na circulao e armazenado no fgado leva a uma disfuno heptica, aumenta a concentrao do cobre nos eritrcitos com conseqente aumento no tamanho e nmero de eritrcitos, aumentando o hematcrito, o que leva lise macia e rpida dos eritrcitos - crise hemoltica grave. Toxicidade: depende da concentrao de elementos como molibdnio,enxofre fero e zinco. Crnica: em locais de concentraes altas de cobre, levam ao acmulo no fgado e surgimento de crise hemoltica com ictercia, necrose heptica e disfuno renal; ovinos so mais suscetveis do que os bovinos ao excesso de cobre e deficincia de molibdnio; mesmo recebendo doses normais de cobre (8-11 ppm), mas sem molibdnio, intoxicamse (5% do rebanho e desses, 75% morrem). Doses txicas: vacas: 200 a 800 mg/kg; ovinos: 20-1000 mg/kg; sunos: 250 ppm, como aditivo so perigosos. Diagnstico sinais clnicos: intoxicao aguda: distrbios gastrintestinais, dor abdominal, sialorria, diarria hemorrgica ou lquida, vmitos (carnvoros), desidratao e morte; evoluo rpida com morte em 1 a 2 dias; intoxicao crnica: anorexia, sede e depresso; manifestaes agudas da crise hemoltica: anemia aguda, fraqueza, ictercia, febre,dispnia. laboratorial: bilirrubinemia, hemoglobinemia, hemoglobinria, elevao de enzimas hepticas que indicativas de necrose; nveis de cobre maiores de 1,5 ppm no sangue e maiores do que 150 ppm em fgado e rins. Leses: congesto de mucosa gastrintestinal heptica, renal e de bao; na crise hemoltica os tbulos renais se obstruem com hemoglobina e se observa necrose tubular e glomerular pelo excesso de cobre, que resulta em insuficincia renal aguda, uremia; na intoxicao crnica: ictercia, degenerao heptica, aumento vescula biliar, rim frivel com petquias e derrames cavitrios sero-hemorrgicos. Tratamento: descontaminao cutnea; imediatamente aps ingesta: gua albuminosa, leite; penicilamina (50 mg/kg VO, por at 6 dias); corrigir desequilbrios hidreletrolticos, vitaminas, analgsicos. As medidas de suporte podem salvar, mas o prognstico desfavorvel quando ocorre a crise hemoltica; morte normalmente ocorre em 24-48 horas aps a crise hemoltica. Preveno: suplementao com zinco (250 ppm), reduz acmulo heptico; na rao, no mximo 6:1 na relao cobre:molibdnio. Intoxicao por cobre em ces: acmulo mais comum nas raas de Terries, Pinchers, Dobermann e ocasionalmente em outras raas. hereditrio: caracterstica recessiva, pode aparecer na idade de 2 a 6 anos. Mecanismo: cobre acumula-se nos lisossomas dos hepatcitos at esgotar sua capacidade de armazenamento, sendo liberado para o citoplasma, causando leso inflamatria e necrose. Diagnstico: sinais clnicos: ces jovens: sndrome inespecfica com vmitos, anorexia, fraqueza e desidratao; ces velhos: anorexia, perda de peso, ictercia, ascite, encefalopatia heptica. laboratorial: aumento de enzimas hepticas ALT e FA e bilirrubina. Tratamento: quelao com d-penicilamina (50 mg/kg VO, muitas vezes por toda a vida); corticoides (estabilizar as membranas dos lisossomas hepticos); cido ascrbico: 500-1000mg/dia, a fim de aumentar excreo do cobre.

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Cloreto de Sdio Fontes: sal mineral; a falta de H2O potvel pode levar intoxicao; medicao na H 2O (exemplo: antibiticos) diminui o consumo; superlotao dos campos; alimento com muito sal (churrasco, lavagens, restos de padarias, queijarias); animais estabulados e alimentos com resduos de sal; mudana de H2O doce para salobra. Mecanismo de ao: o sdio passa do plasma para o lquido crebro- espinhal de forma passiva, mas o contrrio requer energia (transporte ativo); os nveis de sdio no plasma sangneo e o lquido crebro-espinhal ficam entre 135 e 155mEq/L; com a reduo da ingesto de H2O ocorre desidratao e os nveis de sdio no sangue aumentam para 150-190mEq/L ou mais; nestes nveis de sdio, ocorre a inibio da gliclise aerbica, com reduo de produo de energia; assim a alta concentrao de sdio no lquido crebro espinhal impedido de voltar para o sangue por que realizado por mecanismo ativo, necessitando de energia que no h para o transporte; mesmo diminuindo ou normalizando a concentrao do sdio no sangue, as concentraes no crebro permanecem por no haver energia; estabelece-se um gradiente osmtico entre o sangue e o crebro, resultando em edema cerebral com sinais neurolgicos. Toxicidade: relacionada com consumo limitado de H2O potvel: sunos e aves so os mais sensveis (DL50 Oral - sunos: 2,2g/kg; caninos:4,0g/kg e ovinos: 6,0g/kg Diagnstico: sinais clnicos: quando no trato gastrintestinal - anorexia, diarria, vmitos e clicas; na circulao - sialorria, sede, poliria, secreo nasal e sons de fludos em pulmes; em SNC - edema cerebral: excitao, calafrios tremores, falta de resposta a estmulos, recusa de H 2O ou incapacidade de beber; marcha desorientada (em crculos), dorso arqueado, prostrao, agitao dos membros, opisttono intermitente; coma e morte. Ces: diarria da 2a-feira. Sunos: tremores e prurido. Bovinos: fezes com muco. laboratorial: concentrao de sdio no lquido crebro-espinhal (160 mEq/L), no tecido cerebral 1800 ppm. leses: inflamao de mucosa gstrica, lceras e edema; edema de tecidos, lquido nas cavidades e edema cerebral proeminente; exame microscpico: proliferao endotelial vascular no crebro; espaos perivasculares distendidos. Diferencial: pseudo-raiva e organoclorados. Tratamento: remover alimentos ou H2O contaminados; oferecer H2O fresca em pequenas quantidades com intervalos regulares; glicose 5%; aliviar prurito.

8.8 Drogas de abuso Maconha Princpio ativo: tetraidrocanabinol (THC); altamente lipossolvel. Exposio: ingesto de tocos de cigarros, planta fresca, blocos de maconha; fumaa em ambiente fechado. Toxicocintica: absoro: via oral e inalatria; distribuio: realiza ciclo ntero-heptico; biotransformao: heptica - produz uma srie de metablitos; excreo: urina (maioria em 24h). Mecanismo de ao: no est claro, provavelmente por alteraes nas aminas biognicas no SNC. Toxicidade: relativamente baixa; a dosagem letal em ces maior que 3g/kg. Diagnstico: sinais clnicos: vmitos, mucosas e membranas secas, hipertermia, taquipnia, ataxia, incoordenao, depresso, no co as vezes h depresso alternada com excitao e/ou alucinaes (latidos sem razo).

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laboratorial: THC em plasma ou urina. Tratamento: induo de emese (nem sempre eficaz, pois o THC antiemtico), carvo ativado; pode ser necessria ventilao assistida; diazepam pode ser utilizado para controlar a agitao. Cocana Princpio ativo: alcalides da Erythroxylon coca extrado quimicamente. Toxicocintica: absoro: via oral e inalatria; biotransformao: rapidamente biotransformada em pelo menos 6 metablitos no fgado e no plasma; excreo: na urina (T1/2 < 3h). Mecanismo de ao: inibe a recaptao das catecolaminas e promove sua liberao; quantidades excessivas causam parada cardaca e respiratria. Toxicidade: moderada a altamente txica; DL 50 oral em ratos de 50 mg/kg e IV aproximadamente12 mg/kg. Diagnstico: sinais clnicos: excitao do SNC, alternada com profunda depresso, hiperestesia convulses, taquicardia e hipertenso, taquiarritmias, contraes ventriculares prematuras. laboratorial: hiperglicemia, alanina aminotrasferase e creatinina cinase; metablitos da cocana em plasma (exposio recente). Tratamento: assistncia respiratria; clorpromazina auxilia nos efeitos cardiovasculares; banhos frios para controle da hipertermia. Anfetaminas Princpio ativo: droga alcalina que se ioniza em condies cidas. Exposio: frmaco lcito como inibidor do apetite e estimulante do humor, quanto ilcito como estimulante central. Toxicocintica: absoro: boa absoro oral, com pico em 2-3 horas; biotransformao: desaminao e hidroxilao, a benzoilglicurondeo, cido hirico, norepinefrina e p-hidroxianfetamina; excreo: maior em pH cido. Mecanismo de ao: estimula a liberao das catecolaminas dos terminais adrenrgicos; inibe a MAO, bloqueando o metabolismo das catecolaminas; ativa o AMPc; estimula a formao reticular, o crtex e o centro respiratrio. Toxicidade: alta, DL oral aproximadamente de 10-30 mg/kg Diagnstico: sinais clnicos: taquicardia, arritmias, hipertenso, tremores, reflexos hiperativos, midrase, polipnia, broncodilatao, excitao e agitao, convulses; insuficincia renal; laboratorial: acidose lctica; hipoglicemia;pesquisa de anfetaminas no contedo estomacal, plasma ou urina. Tratamento: induzir emese ou lavagem gstrica; carvo ativado; acidificao urinria (aumenta a excreo); banhos frios; diazepam para o controle das convulses; haloperidol para controlar a hiperatividade. 9 Anlises laboratoriais em toxicologia. A parte prtica inclui a realizao de anlises laboratoriais para identificao e/ou dosagem de substncias e/ou de seus metablitos, obtidas nos diferentes fluidos biolgicos (sangue, urina, fluido ruminal, contedo estomacal) e sua interpretao clnica. 9.1 Medicamentos

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A identificao de frmacos em sangue, urina, fluido ruminal ou contedo estomacal pode ser feita atravs da metodologia de cromatografia em camada delgada (CCD), como por exemplo a pesquisa de salicilatos, fenobarbital e digitlicos. 9.1.1 Princpio do mtodo analtico A preparao da amostra consiste em uma extrao lquido/lquido, onde a substncia de interesse extrada do material biolgico usando-se solventes orgnicos apropriados em dois pH distintos (cido e bsico). Os extratos obtidos so concentrados e aplicados na placa cromatogrfica e eluidos em sistema solvente adequado. A CCD uma metodologia cromatogrfica de separao e identificao de componentes de uma mistura atravs da migrao sobre uma camada delgada e uniforme de adsorvente em uma superfcie plana (vidro, metal ou plstico), com base na diferena de afinidade destes componentes com a fase mvel e a fase estacionria. O resultado baseia-se na comparao da amostra com padres das substncias sob suspeita. 9.1.2 Amostra Colher cerca de 20 mL de sangue total e/ou 30 mL de urina e/ou 30 mL de fluido ruminal e/ou 30 mL de contedo estomacal. Manter sob refrigerao a 4 oC at o momento da anlise. 9.1.3 Procedimento analtico

Amostra de soro, urina, fluido ruminal ou contedo estomacal

Pipetar 5 mL (soro) ou 10 mL (urina, fluido ruminal ou contedo estomacal) em dois


tubos, um para identificao de frmacos de carter cido ou neutro (AC) e outro para frmacos de carter bsico (BAS) AC: ajustar pH 4-5 com H2SO4 6N ou HCl 10% BAS: tamponar com Na2CO3 e ajustar pH 8-9 c/NH4OH 30%

Em ambos (AC e BAS) adicionar 15 mL de Clorofrmio:Isopropanol (9:1) Mixer por 1 min Centrifugar 5 min (6000 rpm) Separar a fase aquosa e repetir o procedimento de extrao com mais 15 mL de Clorofrmio:Isopropanol (9:1) Filtrar a fase orgnica sobre sulfato de sdio anidro Ao resduo bsico (BAS) adicionar 100L HCl:CH3OH (1:100) Evaporar at secura os resduos (AC e BAS) com N2 em Banho-Maria a 60 C Reconstituir com CH3OH Aplicar na placa cromatogrfica com indicador fluorescente UV 254 todo o extrato e os padres Migrar no sistema solvente adequado Leitura em UV e clculo do Rf Aplicar os reagentes cromognicos. 9.1.4 Sistema solvente

Clorofrmio:Acetona (9:1) para frmacos de carter cido e neutro Metanol:Hidrxido de Amnio (100:1,5) para frmacos de carter bsico EMA Acetato de Etila:Metanol:Hidrxido de Amnio (17:2:1) para frmacos em geral.

As cubas cromatogrficas (Figura 25) devem ser saturadas por 30 min antes de serem usadas. Forrar as paredes internas da cuba com papel filtro que permitir uma saturao mais eficiente. A cada

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troca de papel saturar a cuba duas vezes antes do uso. Preparar as cubas cromatogrficas, com o sistema solvente adequado, tomando cuidado para que o volume total utilizado seja de 20 mL para cubas 10 x 10 cm ou 40 mL para cubas de 20 x 20 cm.

Figura 25. Cuba cromatogrfica. 9.1.5 Placa cromatogrfica Preparar as placas cromatogrficas obedecendo aos seguintes parmetros: Origem: 1,0 cm Linha de frente: 8,5 cm Divises: 1,0 cm entre cada aplicao.

Transferir, com o auxlio de um capilar, cerca de 20 L (cerca de capilar) da soluo padro e 40 L (cerca de 2x capilar) dos extratos das amostras para a origem das cromatoplacas, observando o espao de 1,0cm entre cada aplicao (Figura 26). Transferir as cromatoplacas para cubas cromatogrficas, previamente saturadas contendo o sistema solvente adequado e desenvolver por cerca de 8,5 cm.

Figura 26. Placa cromatogrfica. 9.1.6 Aplicao dos reagentes cromognicos

Seqncia com Ninidrina para frmacos de carter bsico (ex.: anfetaminas, opiceos,
cocana, carbamazepina, antidepressivos tricclicos) 1) Ninidrina 0,5% 2) Aquecimento a 105 C por 10 min 3) Reativo de Forrest 4) Iodoplatinato 5) Reativo de Dragendorff

Seqncia com Cloreto Frrico para frmacos de carter cido e neutro (ex.: Ac. Acetilsaliclico, paracetamol, benzodiazepnicos, digoxina, haloperidol)

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1) Cloreto Frrico 38% (FeCl3) 2) Aquecimento a 105 C por 10 min 3) Reativo de Dragendorff 4) Iodoplatinado cido

Seqncia com Denings para barbitricos (ex.: fenobarbital, pentobarbital, primidona) 1) Reativo de Denings

9.1.7 Preparo das solues e reagentes

Ninidrina 0,5%: pesar 0,025 g de ninidrina e dissolver em 5 mL de acetona. Esta soluo deve ser preparada somente na hora do uso. Reativo de Forrest: Soluo estoque: a) Dicromato de Potssio 0,2% (m/v): dissolver 0,2 g de dicromato de potssio em 100 mL de gua purificada. b) cido Sulfrico 30% (v/v): misturar 17 mL de H2SO4 em 100 mL de gua purificada. c) cido Perclrico 20% (v/v): misturar 17 mL de HClO4 em 100 mL de gua purificada. d) cido Ntrico 50% (v/v): misturar 55 mL de HNO3 em 100 mL de gua purificada. Soluo Uso: misturar volumes equivalentes das solues a, b, c e d. Iodoplatinado: Solues Estoque : a) Iodeto de Potssio 10%: dissolver 10 g de KI em 100 mL de gua purificada. b) cido Hexacloroplatnico: dissolver 1 g de cido hexacloroplatnico em 100 mL da soluo a. Soluo Uso: diluir a soluo b na proporo 1:5 (v/v) com gua destilada. Em proveta colocar 20 mL da soluo b e qsp 100 mL com gua purificada.

Reativo de Dragendorff: pipetar 0,5 mL de Nitrato de Bismuto; 0,5 mL Iodeto de Potssio 40%; 1,0 mL cido Actico Glacial; 3 mL de H2O d/d. Soluo estvel por 48 h. Cloreto Frrico 38%: pesar 38 g de FeCl3 e dissolver em qsp 100 mL de gua purificada.

Iodoplatinado cido: acidificar a soluo uso de reativo iodoplatinado na proporo 100:4 (v/v) com HCl. Misturar 100 mL do reativo iodoplatinato em 4 mL de HCl. Reativo de Denings: pesar 5 g de xido amarelo de mercrio, adicionar 20 mL de H 2SO4 e completar o volume de 100 mL com gua purificada. Os padres devem ser preparados na concentrao de 1 g/L em metanol.

9.1.8 Resultado

Expressar os resultados da seguinte forma: Detectado, para amostras positivas. No Detectado, para amostras negativas.

9.1.9 Referncias RIO GRANDE DO SUL. Secretaria da Sade. Fundao Estadual de Produo e Pesquisa em Sade. Centro de Informao Toxicolgica. Ncleo e Anlise Laboratorial. Procedimento Operacional

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Padro: guia prtico para pesquisa de drogas por CCD baseado na sintomatologia do paciente. Porto Alegre, 2004. 18p. UFRGS. Faculdade de Farmcia. Laboratrio de Pesquisa Toxicolgica. Procedimento Operacional Padro: deteco de substncias de carter cido e bsico em material biolgico. Porto Alegre, 2004. FLANAGAN, R.J. et al. Basic Analytical Toxicology. Genebra: World Health Organization, 1995. BRITO FILHO, D. Toxicologia Humana e Geral. Rio de Janeiro, So Paulo: Atheneu, 1988. 9.2 Produtos de uso veterinrio (colinesterase) A colinesterase plasmtica no um indicador especfico para inibidores da colinesterase porque pode ser influenciada por diversos fatores, tais como: espcie, raa, caractersticas genticas, idade, sexo, variaes individuais como estado nutricional, prenhez, alteraes de funo heptica e diversas enfermidades que alteram os nveis da atividade da colinesterase plasmtica, diminuindo ou aumentando. Entretanto a determinao dos nveis de colinesterase plasmtica tem sido utilizada na prtica toxicolgica como um dos mais importantes biomarcadores nas intoxicaes por compostos inibidores da colinesterase como, por exemplo, os inseticidas organofosforados e carbamatos. 9.2.1 Princpio do mtodo analtico Mtodo proposto por ELLMAN et al. modificado. A enzima colinesterase catalisa a hidrlise do iodeto de butiriltiocolina com formao de tiocolina que em reao secundria com o cido 5,5-ditio bis-2-nitrobenzico (DTNB), forma o 5mercaptano-2-nitrobenzico de colorao amarela. A intensidade da cor diretamente proporcional a atividade da colinesterase, a qual pode ser determinada em espectrofotmetro na regio do visvel 405 nm. Metodologia: Espectrofotometria Visvel. 9.2.2 Amostra Colher cerca de 2 mL de sangue total. Aps, separar o soro e acondicionar em tubo de ensaio seco, bem vedado e mantido sob refrigerao a 4 oC at o momento da anlise. Estabilidade da amostra a temperatura ambiente de apenas 4 h, aps este tempo ocorre reativao da enzima. Caso a anlise no ocorra imediatamente congelar a mesma. O plasma pode ser utilizado quando colhido com heparina ou EDTA. Os anticoagulantes a base de citrato, fluoreto ou oxalato inibem a atividade enzimtica da colinesterase, no podendo ser utilizados. Cuidados com a amostra igual ao soro. 9.2.3 Procedimento analtico Kit: Colinesterase-butiriltiocolina - Wiener Lab. Amostra: soro ou plasma Soro controle Reconstituir cada frasco de substrato com 3 mL de tampo - Temperatura das amostras, controle e reagente deve ser controlada e anotada no momento da anlise Na prpria cubeta do espectrofotmetro pipetar 3 mL do substrato reconstitudo Adicionar a amostra ou soro controle - 20 L Misturar por inverso 4x Zerar o equipamento contra o ar Ler amostras e controles contra o ar em caso de espectrofotmetro de duplo feixe. Ler a absorbncia inicial ( = 405 nm) e disparar simultaneamente o cronmetro Voltar a ler depois de 30, 60 e 90 segundos exatos.

Determinar a absorbncia mdia (A) atravs da diferena entre cada leitura a cada acrscimo de 30 segundos. Calcular o resultado empregando a seguinte equao:

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Atividade Enzimtica (U/L) = A x 22.710

NOTA: Quando o A/30 seg exceder 0,300, dilua a amostra com soluo salina e multiplique o resultado pelo fator da diluio. 9.2.4 Referncias FUNDAO ESTADUAL DE PRODUO E PESQUISA EM SADE. Centro de Informao Toxicolgica. Laboratrio de Anlise de Emergncia. Procedimento Operacional Padro: dosagem de colinesterase plasmtica por espectrofotometria visvel, Porto Alegre. 2004. 18p. OGA, S. Fundamentos de toxicologia. 2. ed. So Paulo: Atheneu Editora, 2003. 474 p. WIENER LAB. Colinesterase. Argentina: Wiener, s.d. Bula de kit. 9.3 Pesticidas (cumarnicos, estricnina, paraquat e diquat) 9.3.1 Pesquisa de Paraquat e Diquat O paraquat e o diquat so herbicidas amplamente utilizados e extremamente txicos. Do ponto de vista toxicolgico, o paraquat o composto mais importante da classe de compostos bipiridlicos. A ingesto de qualquer quantidade da soluo a 20% deve ser considerada potencialmente grave. A determinao qualitativa do paraquat e diquat, em amostra de urina, constitui-se em teste rpido e prognstico na avaliao dos quadros de intoxicao. 9.3.1.1. Princpio do mtodo analtico O paraquat reage com o ditionito de sdio (Na2S204), em meio alcalino (NaHC03), produzindo um radical semiquinide (dieno) de colorao azul e o diquat produz um radical de colorao verde. 9.3.1.2 Amostra Coletar cerca de 30 mL de urina, preferencialmente em frasco plstico, pois o paraquat ligase superfcie do vidro. Aps a coleta, manter a amostra sob refrigerao a 4 oC. 9.3.1.3 Procedimento analtico Pipetar 10 mL de urina em um becker Pipetar 10 mL de cada um dos controles positivos (paraquat e diquat) e negativo, nos respectivos beckers Adiconar 2 g de bicarbonato de sdio Misturar Adicionar 1 g de ditionito de sdio Misturar Observar o desenvolvimento de colorao azul no controle positivo para paraquat, colorao verde no controle positivo para diquat e colorao amarela no controle negativo Fazer a leitura da amostra frente aos controles 9.3.1.4 Resultado

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O resultado do teste liberado como NEGATIVO, FRACAMENTE POSITIVO, POSITIVO OU FORTEMENTE POSITIVO. 9.3.1.5 Referncias ELLENHORN, Mattew. Ellenhrns Medical Toxicology Diagnosis and Treatment of Human Poisoning. Baltimore: Walerly Company, 1997. FUNDAO ESTADUAL DE PRODUO E PESQUISA EM SADE. Centro de Informao Toxicolgica. Laboratrio de Anlise de Emergncia. Procedimento Operacional Padro: determinao qualitativa de paraquat. Porto Alegre, 2002. 6p. GILMAN, A. G. Et all. As Bases Farmacolgicas da Teraputica. 8 ed. Rio de Janeiro: Editora Guanabara Koogan, 1991. 1232p. GOLDFRANKS Toxicologic Emergencies. 5 ed. Norwalk, Connecticut: APPLETON & LANGE, 1994, 1589 p. SCHVARTSMAN, Samuel. Intoxicaes Agudas. So Paulo: Sarvier, 1991. Pg. 269. TOWSHEND, Alan; VERMA, Krishna K.; JAIN, Archana. Determination of Paraquat by FlowInjection Spectrophotometry. Analytica Chimica Acta, 284 (1993). WORLD HEALTH ORGANIZATION. Basic Analytical Toxicology. Geneva: WHO, 1995. Pg. 1617. 9.3.2 Pesquisa de Cumarnicos e Estricnina Os raticidas cumarnicos so inibidores da coagulao, compostos anti-vitamina K, facilmente absorvidos pelo trato grastrintestinal, enquanto que a estricnina .um alcalide extrado da planta Strichnos nux vomica com ao inibitria do neurotransmissor glicina, e comercializado como raticida ilcito. A identificao de pesticidas em sangue, urina, fluido ruminal ou contedo estomacal pode ser feita atravs da metodologia de cromatografia em camada delgada (CCD), como por exemplo a pesquisa de cumarnicos (brodifacum, cumacloro, cumafeno, cumatretralil). 9.3.2.1 Princpio do mtodo analtico Idem ao item 9.1.1 Cromatografia em Camada Delgada para Medicamentos 9.3.2.2 Amostra Colher cerca de 10 mL de sangue total e/ou 30 mL de urina e/ou 30 mL de fluido ruminal e/ou 30 mL de contedo estomacal. Manter sob refrigerao a 4 oC at o momento da anlise. 9.3.2.3 Fluxograma analtico

Amostra de soro, urina, fluido ruminal ou contedo estomacal o Pipetar 5 mL (soro) ou 10 mL (urina, fluido ruminal ou contedo estomacal) em dois tubos, um para identificao de substncias de carter cido ou neutro (AC) e outro para substncias de carter bsico (BAS) AC: ajustar pH 2-3 com H2SO4 6N ou HCl 10% BAS: tamponar com Na2CO3 e ajustar pH 9-10 c/NH4OH 30%

o o

Em ambos (AC e BAS) adicionar 15 mL de Clorofrmio:Isopropanol (9:1) Mixer por 1 min Centrifugar 5 min (6000 rpm) Separar a fase aquosa e repetir o procedimento de extrao com mais 15 mL de Clorofrmio:Isopropanol (9:1)

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Filtrar a fase orgnica sobre sulfato de sdio anidro Ao resduo bsico (BAS) adicionar 100L HCl:CH3OH (1:100) Evaporar at secura os resduos (AC e BAS) com N2 em Banho-Maria a 60 C Reconstituir com CH3OH Aplicar na placa cromatogrfica com indicador fluorescente UV 254 todo o extrato e os padres Migrar no sistema solvente adequado Leitura em UV e clculo do Rf Aplicar os reagentes cromognicos

9.3.2.4 Sistema solvente

ter de petrleo:Acetona (4:1) Clorofrmio:Metanol (9:1)

As cubas cromatogrficas devem ser saturadas por 30 min antes de serem usadas. Forrar as paredes internas da cuba com papel filtro que permitir uma saturao mais eficiente. A cada troca de papel saturar a cuba duas vezes antes do uso. Preparar as cubas cromatogrficas, com o sistema solvente adequado, tomando cuidado para que o volume total utilizado seja de 20 mL para cubas 10 x 10 cm ou 40 mL para cubas de 20 x 20 cm. 9.3.2.5 Placa cromatogrfica Preparar as placas cromatogrficas obedecendo aos seguintes parmetros: Origem: 1,0 cm; Linha de frente: 8,5 cm; Divises: 1,0 cm entre cada aplicao;

Transferir, com o auxlio de um capilar, cerca de 20 L (cerca de capilar) da soluo padro e 40 L (cerca de 2x capilar) dos extratos das amostras para a origem das cromatoplacas, observando o espao de 1,0 cm entre cada aplicao. Transferir as cromatoplacas para cubas cromatogrficas, previamente saturadas contendo o sistema solvente adequado e desenvolver por cerca de 8,5 cm. 9.3.2.6 Aplicao dos reagentes cromognicos

Seqncia com p-nitroanilina e NaOH


1) p-Nitroanilina 2) NaOH

Seqncia com KMnO4 1%

9.3.2.7 Preparo das solues e reagentes

cido Clordrico 1N (HCl 1N): Diluir 21 mL de HCl conc (37%) em 250 mL de gua destilada. (8,3 mL em 100 mL H2O) Reativo de p-Nitroanilina Soluo estoque: a) p-Nitroanilina 1% em HCl 1 N Etanol (1:1): pesar 0,5 g de p-Nitroanilina e dissolver em 25 mL de HCl 1 N. Diluir at 50 mL com etanol. b) Nitrito de Sdio 5%: pesar 0,5g de nitrito de sdio e dissolver em 10mL de gua destilada.

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c) Hidrxido de Sdio (NaOH) 50%: pesar 5 g de NaOH e dissolver em 10 mL de gua destilada. Soluo Uso: misturar 16 mL da soluo a e 4 mL da soluo b, no momento do uso. Em seguida aplicar a soluo c que deve ser diluda 1:10 com etanol antes do uso (10 mL de NaOH 50% e 90 mL de etanol).

Permanganato de Potssio 1%: pesar 0,5 g de KMnO 4 e dissolver em 50 mL de gua destilada. 9.3.2.8 Resultado

Expressar os resultados da seguinte forma: Detectado, para amostras positivas. No Detectado, para amostras negativas.

9.3.2.9 Referncias FUNDAO ESTADUAL DE PRODUO E PESQUISA EM SADE. Centro de Informao Toxicolgica. Laboratrio de Anlise de Emergncia. Procedimento Operacional Padro: pesquisa de pesticidas por cromatografia de camada delgada. Porto Alegre, 1999. 16p. 9.4 Metais (ALA-U) O chumbo metal no essencial e cumulativo que determina efeitos txicos ao nvel do sistema nervoso central e renal, sendo que a principal alterao tem lugar no sistema hematopotico, interferindo na sntese do heme. O chumbo inibe vrias enzimas necessrias sntese do heme e dos eritroblastos da medula ssea, privando assim o organismo do principal componente para a formao da hemoglobina e, conseqentemente o aparecimento de anemia hipocrmica. Intoxicao por chumbo pode provocar a interferncia em vrios sistemas enzimticos, pela sua ligao aos grupos sulfidrilas, presentes em vrias enzimas. A inibio da enzima cido delta aminolevulnico desidratase ocasiona acmulo de cido delta aminolevulnico (ALA), com conseqente aumento da sua excreo urinria. Para o diagnstico precoce da intoxicao por chumbo inorgnico, a determinao do cido -aminolevulnico tem-se mostrado extremamente til. 9.4.1 Princpio do mtodo analtico Mtodo proposto por Tomokuni e Ogata, 1972. O cido -aminolevulnico urinrio (ALA-U) reage com o acetoacetato de etila quente (95100 oC), atravs de uma reao de condensao, produzindo o 2-metil-3-acetil-4-(3-cido propinico) pirrol que extrado em acetato de etila. Aps a adio do reativo de Ehrlich, ocorre a formao de um complexo de colorao rosa, cuja intensidade diretamente proporcional a concentrao do cido aminolevulnico. Metodologia: Espectrofotometria Visvel. 9.4.2 Amostra Colher cerca de 30 mL de urina em frasco plstico protegido da luz. Aps a coleta, reservar 5 mL de amostra para dosagem de creatinina o restante da amostra deve ser preservada com cido actico na proporo 1 mL de cido, para cada 100 mL de urina (pH=4) e conservada sob refrigerao a 4 oC. A urina, no preservada quando exposta luz, em temperatura ambiente mostra uma diminuio de 40 a 60% dentro das primeiras 24 h.

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9.4.3 Procedimento analtico Executar o procedimento de acordo com as orientaes da Tabela 17. Tabela 17: Procedimento analtico para determinao do cido -aminolevulnico urinrio. Pipetar em tubos de ensaio de 15 mL: Branco Branco Branco Amostra Controle Padres Amostra Controle Padro Tampo Acetato 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL Amostra 1,0 mL 1,0 mL Controle 1,0 mL 1,0 mL Padro 1,0 mL 1,0 mL Acetoacetato de etila 0,2 mL 0,2 mL 0,2 mL sturar no mixer 5 segundos. Levar ao banho-maria ferverte (100 C) durante 10 min. Resfriar. Acetato Etila 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL Agitar em mixer por 1 min. Centrifugar por 3 min, nvel 6. Pipetar 2 mL da fase orgnica para tubo de baquelite Reagente Ehrlich 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL Misturar por inverso. Aguardar 10 min (cronometrar) e ler imediatamente contra o branco respectivo em 553 nm. Cubetas de quartzo. A concentrao do cido -aminolevulnico na amostra obtida empregando a seguinte ALA-U (mg/l) = Concentrao do Padro x Abs Amostra/Abs. Padro Por exigncia da NR-7 os resultados do cido -amino levulnico em mg/L, devem ser divididos pelo valor da creatinina da amostra. Clculo final: ALA- U (mg/g de creatinina) = ALA-U (mg/l)/creatinina(g/l) O resultado final dever ser expresso em mg/g de creatinina, desde que o valor de creatinina obtido para a amostra, esteja dentro do intervalo 0,5 at 3,0 g/L. Caso contrrio, liberar os resultados obtidos para cada uma das anlises individualmente. 9.4.4 Preparo das solues e reagentes Tampo Acetato pH 4,6 Em um bequer de 100 mL, pesar 1,36 g de acetato de sdio trihidratado. Adicionar 5,6 mL de cido actico glacial e transferir quantitativamente para um balo volumtrico de 100 mL. Medir o pH. Conservar sob refrigerao entre 2 a 8 oC. Reagente de Ehrlich Em um becker de 50 mL, pesar 1 g de p-dimetilaminobenzaldedo (C 9H11NO). Adicionar cerca de 30 mL de cido actico glacial. Transferir para uma proveta de 50 mL e adicionar 4,3 mL de cido perclrico 70% e 5 mL de gua destilada. Completar o volume at a marca com cido actico

equao:

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glacial. Instvel, preparar somente o volume necessrio Manter ao abrigo da luz, envolvendo a proveta em papel alumnio. 9.4.5 Referncias FUNDAO ESTADUAL DE PRODUO E PESQUISA EM SADE. Centro de Informao Toxicolgica. Laboratrio de Anlise de Emergncia. Procedimento Operacional Padro: quantificao de cido delta-aminolevulnico por espectrofotometria. Porto Alegre, 2001. 16p. LADENSON, Jack H. Non analytical sources of variation in clinical chemistry results. 8 a ed. In: Gradwohls Clinical Laboratory Methods and Diagnosis. St. Louis: Mosby Company, 1980 vol.1. LEITE, Edna Maria Alvarez et all. Otimizao das condies analticas para a determinao espectrofotomtrica de cido delta-aminolevulnico urinrio (ALA-U). Revista Brasileira de Sade Ocupacional, 17 (66), 1989. MORAES, Ester C.F.; SZNELWAR, Rywka B.; FERNICOLA, Nilda A.G.G. Manual de Toxicologia Analtica. So Paulo: Roca, 1991. ROELS, Harry et all. Comparison of Four Methods for Determination of -Aminolevulinic Acid in Urine, and Evaluation of Critical Factors. Clin. Chem. 20/7, 753-760 (1974). TOMUKUNI, K; OGATA, M. Single method for determination of urinary aminolevulinic acid as na index of lead exposure. Clin. Chem., 19 (12), 1972. VESTERBERG, Olof; LINDSTEDT, G. A modified method for determining -aminolevulinic acid in urine eliminating some interferences. Work-environm-hlth 11 (1974) 166-169. 10 Avaliao de toxicidade A toxicidade de uma substncia a um organismo vivo pode ser considerada como a capacidade de causar dano grave ou morte. Fatores relevantes: interao: agente/organismo; relao: concentrao do agente X intensidade do efeito; tempo de exposio; suscetibilidade do organismo (relativa idade, doenas intercorrentes, estado fisiolgico como gestao, lactao, entre outros); potncia do agente (mais txico aquele que necessita menor quantidade para produzir efeito). A exposio relacionada dose (ex: mg do agente/kg de massa corporal ou mg/cm de superfcie corporal) ou concentrao (mg de agente/mL de solvente) do agente e o tempo de interao com o organismo. Um desafio constante na toxicologia o de estabelecer nveis de exposio tolerveis. Para tanto, necessrio definir o que deve ser considerado dano ou efeito adverso: uma alterao anormal, indesejvel ou nociva aps exposio a substncias potencialmente txicas. Efeitos adversos incluem alteraes nos consumos de gua e alimento, no ganho de massa corporal, na massa relativa dos rgos, em nveis enzimticos, ou mesmo, alteraes anatomopatolgicas. 10.1 Relao dose-resposta e concentrao-resposta Representada por uma curva Gausiana terica. Na prtica calculada a partir de observaes de mortalidade aps exposio a doses ou concentraes relacionadas da substncia testada (Tabela 18). Geralmente empregada para calcular a dose letal mdia (DL 50) ou concentrao letal mdia (CL50). Outros so a LOAEL (Lowest Observed Adverse Effect Level) - menor dose com efeito adverso observado e NOAEL (No Observed Adverse Effect Level) dose sem efeito adverso observado. Tanto a DL50 quanto a CL50 devem ser referidas em relao via de exposio, ao nmero de administraes (dose nica = aguda, ou doses repetidas = sub-aguda) e a espcie testada (rato, coelho, entre outros).

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Tabela 18. Classificao relativa de toxicidades de acordo com a Organizao Mundial da Sade. Categoria Ia Ib II III IV Classificao Extremamente txico Altamente txico Moderadamente txico Levemente txico Praticamente atxico DL50 oral para ratos (mg/kg de massa corporal) slidos lquidos < 5 mg/kg < 20 mg/kg 5-50 mg/kg 20-200 mg/kg 50-500 mg/kg 200-2000 mg/kg 500-5000 mg/kg > 2000 mg/kg > 5 mg/kg

* Classificao semelhante efetuada para outras vias de exposio, como tambm para o ambiente. Todos os dados obtidos pela curva dose/concentrao-resposta permitem a seleo de doses para a realizao de testes com exposies a mdio e longo prazo. A tendncia atual substituir os experimentos e clculos de DL50/CL50 (reduzindo de forma tica o sofrimento dos animais) pelo teste de dose fixa. Para tanto, administra-se uma nica dose oral de 500 mg/kg a um grupo de ratos (5 machos e 5 fmeas) ou outra espcie e, na ausncia de sinais de toxicidade avaliados por 14 dias, a substncia no ser classificada em nenhuma das categorias citadas anteriormente. Se houver toxicidade sem morte, a substncia ser classificada como nociva e, se houver morte, deve-se proceder novo teste com 50 mg/kg. Da mesma forma, a substncia que provoca sinais de toxicidade nesta faixa de exposio, ser classificada como txica e, se houver mortalidade, est dever ser testada na dose de 5 mg/kg. Nesta dose, tanto sinais de toxicidade quanto morte, permitem classificar a substncia como muito txica. No entanto, se 500 mg/kg de uma substncia no produzir sinais de toxicidade, esta dever ser testada na dose de 2.000 mg/kg (avaliao total de risco). 10.2 Tipos de testes toxicolgicos No Brasil, a ANVISA estabelece oito tipos de testes de toxicidade para aprovao de substncias a serem utilizadas ou produzidas em larga escala como pesticidas, produtos qumicos, produtos de uso veterinrio, medicamentos, entre outros:

aguda; subaguda/subcrnica; crnica; mutagenicidade; teratogenicidade; carcinogenicidade; estudos especiais (reprodutivos, neurotoxicidade,...); ecotoxicolgicos (organismos aquticos).
Fatores como: uso, tipo de efeito txico produzido pela substncia em si ou por substncias estruturalmente semelhantes, podem definir quais os testes que devem ser realizados em situaes especficas. O objetivo dos testes toxicolgicos caracterizar o tipo efeito txico que uma substncia qumica produz. Sendo assim, justifica-se a exposio de animais experimentais a altas doses de um agente txico para prever provveis efeitos danosos ao homem. A lista de testes pode variar entre os pases, mas basicamente inclui: Informaes preliminares caracterizao qumica (qualitativa e quantitativa em relao as impurezas);

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propriedades fsico-qumicas (presena de solventes grau de dissoluo, volatilidade, entre outras); nveis de exposio da populao. As caractersticas toxicocinticas permitem a predio do comportamento da substncia nos organismos, bem como no ambiente. Estudos de toxicidade aguda Avaliam os efeitos da administrao de dose nica ou mltiplas doses num perodo de 24 horas. Sendo a dose nica til na avaliao da potncia da substncia e mltiplas doses para avaliar os efeitos cumulativos. A via oral a mais indicada, mas pode-se utilizar outras como a inalatria quando pertinente (referente exposio humana). DL50: representa a probabilidade estatstica de uma dose causar efeito letal em 50% dos animais da populao; identifica a toxicidade relativa. CL50: representa a concentrao letal mdia, capaz de causar morte em 50% dos animais expostos via inalatria ou para peixes em meio aqutico. Quando os dados so expressos em logaritmos das doses versus o percentual de mortes a sigmide obtida aproxima-se mais da linearidade facilitando a obteno do ponto mdio (DL50). Os resultados destes testes permitem conhecer o mecanismo de ao, identificar a sensibilidade de diferentes rgos ou sistemas, bem como a possvel reversibilidade dos efeitos. importante avaliar-se a quantidade de animais mortos, o incio e a natureza da intoxicao, incluindo aspectos clnicos e anatomopatolgicos. Deve-se testar as substncias em diferentes espcies, linhagens e em ambos os sexos. Estudos de toxicidade subcrnica Avaliam os efeitos da administrao de doses repetidas de 90 dias. Os objetivos destes testes so: estabelecer os nveis nos quais no se observam os efeitos txicos, identificar e caracterizar os rgos afetados e a severidade dos efeitos aps exposies repetidas, verificar se os efeitos observados se devem a um acmulo de substncia, a possvel reversibilidade do efeito e ainda, efeitos especficos como a neurotoxicidade. Geralmente a exposio se d por via oral, exceto quando outras vias de exposio humana devem ser consideradas, utilizando-se pelo menos trs doses, em duas espcies animais (uma roedora e uma no-roedora). As variveis avaliadas, diariamente, incluem: massa corporal, consumo de gua e rao, sinais clnicos de toxicidade (alteraes circulatrias, respiratrias, na pelagem, motoras e comportamentais). Um grupo controle dever ser tratado da mesma forma, porm, sem o agente txico. No final do teste os animais devero ser sacrificados e submetidos necropsia com avaliaes macro e microscpicas. Alm destas variveis, avaliaes hematolgicas e bioqumicas devem ser realizadas. Dependendo da espcie (coelhos) estas anlises podem ser realizadas antes do inicio do tratamento, no meio do teste e no final deste, incluindo a urinlise. Estudos de toxicidade crnica Avaliam os efeitos da administrao de doses repetidas por perodos superiores a trs meses, sendo este perodo de dois anos em roedores e de um ano, em outras espcies (dependendo do padro de uso da substncia em teste). Os objetivos destes testes so: determinar o efeito txico aps exposio prolongada das doses cumulativas e/ou avaliar o potencial carcinognico. Para tanto so utilizadas duas espcies, geralmente, camundogos e ratos (50 animais por dose e sexo). De forma semelhante ao teste subcrnico os animais so avaliados quanto massa corporal, consumos e sinais clnicos, semanalmente; hematologia, bioqumica sangnea e urinlise devem ser realizadas antes do inicio do estudo, aps seis meses e ao final do teste, onde so tambm avaliados anatomopatologicamente. Estudos de mutagnese e carcinognese O processo mutagnico envolve modificaes do material gentico das clulas, de forma a serem transmitidos s novas clulas durante a diviso, acarretando desde a inviabilidade de

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desenvolvimento da clula ovo, passando por morte do embrio ou feto at o desenvolvimento de anormalidades congnitas que podem ser transmitidas hereditariamente. Testes in vitro como o da avaliao das mutaes pontuais em cepas mutantes de Salmonella typhinurium e in vivo realizado nas clulas da medula ssea em metfase, nos linfcitos de sangue perifrico e o teste do dominante letal (alteraes espermticas capazes de afetar a prole), em modelos animais, so utilizados com o propsito de detectar potencial mutagnico relativo s substncias testadas. Apesar destes testes terem a capacidade de avaliar o potencial mutagnico das substncias, os resultados obtidos so de difcil extrapolao ao homem. Entretanto, podem ser empregados para prever (triagem) o desenvolvimento de cncer, j que uma das teorias da carcinognese qumica indica a mutao como evento desencadeante do processo (genotoxicidade). Outros testes so necessrios para avaliar o potencial carcinognico de substncias por mecanismos no genotxicos como os testes de citotoxicidade com regenerao (acompanhada de aumento na sntese de DNA), desbalanos hormonais, imunossupressores e promotores de expresso de oncogenes. Usualmente, para os testes de carcinognese empregam-se doses relativas maior dose tolervel, ou seja, aquela que administrada durante o perodo mdio de vida dos modelos animais utilizados, no provoca morte ou reduo maior do que 10% na massa corporal. Estudos de desenvolvimento Reproduo e teratognense: A toxicologia do desenvolvimento engloba a toxicologia da reproduo (efeitos adversos sobre os sistemas reprodutores masculino e feminino) e a teratologia (alteraes induzidas entre a concepo e o nascimento). Os testes devem ser realizados de modo a avaliar a fertilidade e o desempenho reprodutivo (segmento I), o potencial teratognico (segmento II) e a toxicidade peri e ps-natal (segmento III). O segmento I, trata machos e/ou fmeas adultos durante a fase de pr e acasalamento, sendo avaliadas alteraes sobre a fertilidade e a possvel reversibilidade do processo. O segmento II, trata fmeas prenhes durante a fase de organognese e avalia a presena de malformaes e / ou alteraes de desenvolvimento. O segmento III, trata fmeas prenhes (no tero final da gestao) e lactantes, avaliando o desenvolvimento geral e sexual da prole at a idade adulta. So utilizados camundongos ratos e/ou coelhos para realizao dos testes. Estudos de geraes sucessivas podem tambm ser realizados. Atualmente, nos protocolos da EDSTAC (Endocrine Disruptor Screening and Testing Advisory Commitee, que o comit consultivo de teste e rastreamento de desreguladores endcrinos), testes de curta durao como o Hershberger e o uterotrfico so utilizados como screening de substncias potencialmente desreguladoras endcrinas. Nestes testes, so avaliadas as massas relativas do tero ou vescula seminal e prstada, de indivduos pr-pberes tratados por um curto perodo de tempo (3 dias para fmeas e 7 dias para machos castrados) com o objetivo de avaliar os potenciais androgncico ou anti-androgncio e estrognico ou anti-estrognico da substncia em questo. Outro teste utilizado o pubertal, que avalia os efeitos da exposio de animais durante a fase de maturao dos rgos reprodutivos (pr-puberdade). Estudos de toxicocintica Informaes sobre absoro, distribuio, armazenamento, biotransformao e excreo das substncias em teste permitem avaliar o comportamento da substncia em diferentes espcies animais e assim, prever seu comportamento no homem. Principalmente a biotransfomao, tem sido alvo de inmeros estudos txicocinticos considerando que muitas substncias qumicas exercem efeitos txicos atravs de seus metablitos, originrio de processos que envolvem enzimas como oxidases de funo mista, hidrolases, glutitionatransferases e glicuronil-transferases, que variam entre as espcies animais. Tambm, tipos e concentrao de receptores hormonais e outras molculas regulatrias so igualmente diferentes entre as espcies diferenciando comparativamente a cintica da substncia ao extrapolar-se as respostas para espcie humana. Estudos de efeitos locais sobre a pele e olhos

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Essenciais na avaliao de segurana de substncias como cosmticos ou produtos industriais, so os testes de irritao ocular e da pele, capazes de prever com boa segurana os efeitos potenciais na espcie humana, utilizando para tanto, espcies muito sensveis como o coelho (ocular e drmica) e o cobaio (drmica). Para a pele avaliada presena de eritema, escara, edema e corroso, e para os olhos, alteraes de conjuntiva, crnea, ris e cristalino. Existem trs tipos de testes de irritao: local ou aguda: aplicao nica com possibilidade de reverso da resposta (num perodo mximo de 14 dias); cumulativa: exposio repetida; induzida fotoquimicamente: aps irritao primria induzida pela luz aplicada a substncia em teste. Estudos de sensibilizao cutnea Essenciais na avaliao de segurana de substncias passveis de contatos repetidos com a pele. So realizados em coelhos ou cobaios submetidos a repetidas doses da substncia com ou sem adjuvantes, por perodos entre uma e duas semanas e, aps duas a trs semanas de intervalo, os animais so submetidos a uma dose no irritante da substncia e o eritema monitorado. Dois tipos de testes podem ser performados: o adjuvante completo de Freud (ACF): imunopotenciador (que pode ser associado ao lauril sulfato de sdio = maximizao de Magnusson e Kligmann) aplicado topicamente e, intradermicamente, aplicada a substncia teste. teste sem adjuvante: aplicado aps o teste de adjuvante (verifica a intensidade da resposta). Estudos de ecotoxicidade A toxicologia ambiental estuda os efeitos adversos em organismos vivos, provocados por substncias qumicas liberadas no ambiente. Especificamente, a ecotoxicologia estuda estes efeitos no ecossistema e seus componentes. A associao de substncias deve ser considerada na anlise ambiental, bem como as condies climticas (temperatura, chuvas). Tornando assim, a monitorizao ambiental pea fundamental na preciso de avaliao de risco. Existe uma lista de fatores a ser considerada ao se avaliar o risco ambiental de uma dada substncia qumica: qumicos (possveis estados de oxidao, interaes como outros materiais e impurezas, vias e produtos de degradao e biodisponibilidade, forma fsica), potencial de biodegradao (demanda biolgica e qumica de oxignio, variao de temperatura, disponibilidade de oxignio e biodegradao de produtos de interao), testes de toxicidade aguda (microorganismos, plantas superiores, invertebrados, peixes, pssaros e mamferos) e toxicidade crnica (espcies de peixes, cadeia alimentar de invertebrados e mamferos mais significativos), desaparecimento da atmosfera, guas de rios, lagos, solo, bioacumulao em microorganismos, plantas superiores, invertebrados, peixes, pssaros, mamferos e humanos, eutrofizao, ou seja, excessos de nutrientes em guas naturais (testes laboratoriais da resposta em algas e outras plantas aquticas), solos, lodo e sedimentos (acumulao e liberao de outros materiais por reaes de troca ou pela modificao do meio) e efeitos fsicos (radiaes). A finalidade destes estudos fornecer dados que possam ser utilizados para avaliao de risco do uso da substncia para o homem e para as demais espcies, considerando a possvel associao de substncias, efeitos climticos, indivduos expostos, perodo de exposio e a possibilidade de bioacumulao. 10.3 Noes sobre avaliao de risco Segundo a Academia Nacional de Cincias dos Estados Unidos (1983), a terminologia utilizada no estudo de avaliao de risco fica padronizada conforme citao a seguir: perigo: capacidade da substncia para causar um efeito adverso;

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risco: probabilidade de ocorrncia de perigo sob condies especficas de exposio; avaliao de risco: processo pelo qual o perigo, a exposio e o risco so determinados; manejo do risco: processo atravs do qual so avaliadas as opes polticas e selecionada a medida regulatria mais apropriada com base nos resultados da avaliao do risco e nos interesses sociais, econmicos e polticos. Para a realizao da avaliao do risco, so necessrios: identificao do perigo: caracterizao dos efeitos adversos inerentes a determinado agente qumico; avaliao dose-resposta: caracterizao da relao entre a dose e a incidncia de efeitos adversos em populaes expostas; avaliao da exposio: medio ou estimativa da intensidade, da freqncia e da durao da exposio humana ao agente qumico; caracterizao do risco: estimativa da incidncia de efeitos adversos para a sade sob vrias condies de exposio humana. Os objetivos da avaliao incluem: a anlise da relao risco versus benefcios, o estabelecimento de alvos e nveis de risco, e o auxlio na definio das prioridade dos programas de vigilncia pelas agncias regulatrias, indstrias, organizaes ambientais e de consumidores. Para identificao do perigo, investiga-se a possibilidade do agente causar um efeito adverso e se estabelece a natureza dos efeitos presentes numa populao e/ou ecossitema. Utilizam-se dados epidemiolgicos de populaes expostas por meio de estudos analticos retrospectivo como o caso-controle (que relaciona indivduos com e sem os efeitos txicos aos nveis de exposio) ou prospectivo como o de coorte (que observa ao longo do tempo indivduos expostos ao fator de risco, mas inicialmente assintomticos), buscando evidncias de causalidade, associados aos estudos descritivos. Estes ltimos, apenas descrevem a existncia de eventos mostrando padres temporal e espacial como as ocorrncias relacionadas a gnero, faixa etria, raa, entre outras, utilizando estudos de incidncia (nmero de casos novos no perodo de tempo), prevalncia (nmero de casos novos e antigos num perodo de tempo) e estudos ecolgicos (correlao entre morbidade ou mortalidade de populaes expostos ao fator de risco uma rea geogrfica). Alm de estudos epidemiolgicos, na fase de identificao do perigo, utilizam-se dados de estudos em modelos animais (toxicidade aguda, subcrnica, crnica, carcinogenicidade, toxicidade reprodutiva, entre outros), com os resultados de DL 50 ou CL50, NOAEL e LOAEL doses para cada tipo de teste. Nesta fase, a Agncia de Proteo Ambiental (EPA Environmental Protection Agency) dos Estados Unidos, classifica as evidncias em: suficiente, limitada, inadequada, no disponvel ou nenhuma evidncia, considerando a qualidade dos dados, o tipo de estudo, a via e a durao da exposio, as doses utilizadas e a reprodutividade do estudo. A avaliao da dose-resposta, que tem como objetivo quantificar o perigo, envolve o clculo da dose de Referncia (RfD reference dose): doses passveis de exposio diria pela populao ao longo de toda vida sem apresentar risco de efeitos nocivos sade; e da ingesto diria aceitvel (IDA): nveis permissivos de exposio crnica resduos de pesticidas e aditivos alimentares (baseado em efeitos no carcinognicos). Como no se considera a existncia de limiar para os efeitos carcinognicos, este risco especificamente mensurado por modelos matemticos como uma probabilidade de ocorrncia de 1 caso em 1.000.000 para o risco de exposio a uma substncia com potencial carcninognico (em baixas doses). Para os clculos de RfD ou IDA utilizada a frmula que segue: IDA ou RfD = NOAEL (ou LOAEL) fatores de segurana Considerando que o homem geralmente mais sensvel do que as espcies utilizadas nos testes biolgicos, fatores de segurana so includos no clculo (Tabela 19).

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Tabela 19. Fatores de segurana para avaliao de risco humano mediante dados obtidos em animais. Fatores Justificativa 10 Variabilidade humana 10 Extrapolao dos animais para os humanos 10 Utilizao de estudos subcrnicos 10 Utilizao da LOAEL 0,1-10 Fatores adicionais

O nmero de fatores aplicados inversamente proporcional ao grau de confiabilidade dos dados disponveis. Com relao avaliao da exposio, pode-se dizer que esta mensurada considerando os fatores: intensidade, freqncia e durao da exposio humana a um agente presente no ambiente ou seu uso. O clculo inclui: magnitude da exposio = E; concentrao da exposio em relao ao tempo = C(t); tempo total da exposio = dt; durao da exposio = t2 - t1. Avaliado pela integral: t2 E= C (t). dt t1 Esta avaliao inclui as fases de caracterizao da fonte de exposio, identificao dos meios de exposio (gua, solo, ar, contato direto ou por alimentos) e das vias (drmica, inalatria ou oral), e por fim, a quantificao da exposio. Pode ser referida em valores numricos ou freqncias e expressa em mg/kg/dia. A concentrao ou dose potencial pode ser quantificada por medio direta da dose potencial de contato (monitoramento individual), da concentrao do agente no meio (exposio mensurao ambiental) e estimativa de dose potencial (biomarcadores de efeito e dose interna biomonitoramento). A caracterizao e o manejo do risco compe a etapa final da avaliao e esta, envolve a predio da freqncia e da severidade dos efeitos adversos numa populao exposta. Para execuo do processo de caracterizao do risco, so considerados os fatores: toxicidade da substncia e exposio. Relacionando estes fatores, pode-se predizer o grau de risco conforme descrito na Tabela 20. Sendo assim, a partir dos dados de identificao do perigo, da avaliao da dose-resposta e da exposio, so geradas evidncias que compe o risco da exposio a um agente potencialmente txico, para a tomada de decises polticas referentes regulamentao, ao gerenciamento e comunicao do risco.

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Tabela 20. Caracterizao do grau de risco baseada na toxicidade da substncia, exposio e risco. Toxicidade da substncia Exposio Risco Alta Alta Muito alto Alta Mdia Alto Alta Baixa Alto / Mdio Alta Muito baixa Mdio / Baixo Mdia Alta Alto / Mdio Mdia Mdia Mdio Mdia Baixa Baixo / Mdio Baixa Alta Baixo / Mdio Baixa Mdia Baixo Baixa Baixa Sem importncia

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288

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9. ANLISES CLNICAS MICOLGICAS


Laerte Ferreiro

1.

INTRODUO Os fungos constituem um grupo diversificado de microorganismos

suficientemente diferenciados de outros seres vivos para serem considerados um reino separado na natureza, o reino Fungi. As doenas que ocorrem aps a invaso tecidual podem ser classificadas na Micologia Veterinria como micoses cutneas, subcutneas e sistmicas. A penetrao do fungo pode ser: - diretamente na epiderme; por inoculao transcutnea (trauma); por inalao;

- a partir de um foco profundo de infeco preexistente no organismo, levando a uma disseminao endgena. Alguns fungos, denominados dimrficos, apresentam duas formas de crescimento e podem existir tanto na fase/forma leveduriforme como na fase/forma filamentosa, dependendo da temperatura. A fase leveduriforme ocorre nos tecidos do hospedeiro e em cultivos a 37 C, enquanto a fase filamentosa observada em culturas entre 25-28 C. Uma exceo o dimorfismo particular do C. immitis que na fase tecidual s apresenta esfrulas. A estrutura de um fungo pode ser unicelular - como usualmente ocorre com as leveduras - ou multicelular, onde as clulas alongam-se para formar filamentos ou hifas divididos por septos. Alguns fungos (Zigomicetos) possuem rarssimos septos, sendo descritos como asseptados ou cenocticos. O conjunto dessas hifas do origem ao miclio (areo e vegetativo), que caracteriza o aspecto macroscpico dos fungos filamentosos.

2. CLASSIFICAO

A classificao dos fungos largamente baseada na morfologia. A taxonomia baseada nas estruturas da fase sexuada ou teleomrficos (fungos perfeitos) do ciclo biolgico, assim, as divises do Reino Fungi como, Ascomycota, Basidiomycota e

290

Zygomycota caracterizam-se pela produo de ascosporos, basidiosporos e zigosporos, respectivamente; e tambm conforme os propgulos fngicos resultantes da reproduo assexuada (estado anamrfico). Os fungos que s possuem o estado anamrfico so classificados como fungos mitospricos, pertencentes a Diviso Deuteromycota (Fungos imperfeitos).
Reproduo Sexuada e Assexuada Reproduo Reproduo assexuada sexuada (Fungos perfeitos) Ascosporos Basidiosporos Zigosporos Condios Esporangiosporos

Diviso

Tipo de Hifas

Ascomycota Basidiomycota Zygomycota

Septadas Asseptadas (cenotticas) Septadas

Deuteromycota

Inexistente ou Desconhecida

Condios

TAXONOMIA DOS PRINCIPAIS FUNGOS DE INTERESSE VETERINRIO (BRASIL) ZYGOMYCOTA Classe : Zygomicota Ordem: Mucorales Gneros: Absidia Mucor Rhizomucor Rhizopus Syncephalastum ASCOMYCOTA Classe: Ascomycetes Arthroderma BASIDIOMYC OTA Classe: Classe: Basidiomycetes Blastomycetes Ordem: Ustilagenales Famlia: Criptococaceae Gnero: Filobasidiella Gneros: Cryptoccocus Malassezia Candida Rhodotorula Torulopsis Trichosporon DEUTEROMYCOTA Classe: Hyphomycetes Famlia: Dematiaceae

Famlia: Moniliaceae Tuberculariaceae Gneros: Aspergillus

Famlia:

Gnero: Alternaria

Gnero:

Ordem: Entomophthrales Gneros: Conidiobolus Basidiobolus

Coccidioides Epidermophyton Geotrichum Histoplasma Microsporum Paecilomyces Penicillium Scopulariopsis Sporothrix Trichophyton

Fusarium Bipolaris Cladosporium Curvularia Drechslera Exophiala Fonsecaea Helminthosporium Nigrospora Phialophora Wangiella Xylohypha

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3. PORTA

DE

ENTRADA,

SUSPEITA

CLNICA,

AMOSTRAS

BIOLGICAS E PROCEDIMENTOS

Porta de entrada de micoses e actinomicetoses


Porta de entrada Pulmo Epiderme, plo e unha Pele e tecido subcutneo Seios paranasais Pele, tecido subcutneo, mucosa nasal, conjuntiva Pele e mucosas Crnea Micose/actinomicose Micoses sistmicas e oportunsticas, nocardiose, rodococose, actinomicose, Dermatofitoses Micoses subcutneas e micetoma Actinomictico Zigomicose, aspergilose, feohifomicose, hialohifomicose Rinosporidiose, pitiose,

Candidose Aspergilose, hialohifomicose

Suspeita clnica conforme amostras biolgicas enviadas


Fludos Corpreos Qualquer agente etiolgico, de actinomicose, nocardiose, rodococose, micoses sistmicas e oportunsticas. Candida spp., H. capsulatum, Cryptococcus neoformans e alguns agentes de hialohifomicoses (Fusarium spp.) H. capsulatum, Cryptococcus neoformans, P. brasiliensis Agentes de actinomicose, nocardiose, rodococose, micoses sistmicas, micoses oportunsticas, especialmente pneumocistose Cryptococcus neoformans, Nocardia asteroides Aspergillus, especialmente A. niger Trichophyton spp., Microsporum spp. Candida albicans, Trichophyton spp., S. brevicaulis Agentes de micoses superficiais, cutneas e subcutneas. Micoses sistmicas e oportunsticas como resultado de disseminao hematognica. Agentes de micoses sistmicas, oportunsticas, subcutneas;nocardiose, actinomicose, rodococose. Agentes de micoses sistmicas, oportunsticas, incluindo pneumocistose, nocardiose, actinomicose, rodococose. Cryptococcus neoformans, Candida spp., H. capsulatum

Sangue

Medula ssea Lavado Broncoalveolar Lquor Ouvido Plo Unha Pele Pus e Exsudatos Escarro Urina

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Micoses e alguns focos potencialmente fontes da infeco


Foco Solo/plantas Solo/gua Pssaros Roedores Tatu Morcegos Diversos animais Micose Coccidioidomicose, criptococose, esporotricose, cromomicose, zigomicose, micetoma Aspergilose, pitiose, rinosporidiose, lobomicose Histoplasmose, criptococose Adiaspiromicose, dermatfitos Paracoccidioidomicose, esporotricose Histoplasmose, adiaspiromicose Dermatfitos zooflicos

Material de Origem Cutnea


Natureza Escamas / crostas Plos Unhas Cerume Exsudato Lq. Abscesso Ndulo Ulcerao Tcnica Raspado cutneo Raspado cutneo, pinagem de plos Raspagem da unha Curetagem com swabs Com aspirao Puno, bipsia Puno, bipsia Puno, bipsia Princip. Indicaes Dermatofitose, Malasseziose, Candidose Dermatofitose Dermatofitose Malasseziose Candidose Criptococose, Esporotricose Criptococose Criptococose, Candidose, Esporotricose, Feohifomicose

Material de Origem Respiratria


Natureza Descarga nasal Tecidos das cavidades nasais e sinus Tcnica de obteno "swabs"; impresso (clap); aspirao Bipsia sob rinoscopia ou aps rinotomia Principais Indicaes Aspergilose, Criptococose, Rhinosporidiose Aspergilose, Criptococose, Feohofomicose; Rhinosporidiose Aspergilose, Pneumocistose, Histoplasmose Idem

Lquido bronquioalveolar (LBA) Lavagem ou traquiobrnquico Tecido pulmonar Puno; bipsia

293

Material de Origem Digestiva


Natureza Cavidade bucal (exsudato pseudomembranoso); tecido neoformado Mucosas e lq. Gastroduodenal Material fecal Tcnica de obteno Raspagem com swabs, curetagem Endoscopia; bipsia Colher "in sito" Principais Indicaes Candidose, Criptococose

Candidose, Mucormicose; Aspergilose Candidose, Geotricose

Quantidade de material para estudo micolgico


Espcime Fludos do corpo (*) Sangue Medula ssea (*) Quantidade O mximo possvel 1-5 ml Processamento Direto, Prata, Giemsa Prata, Giemsa

0,2 ml (esfregao); 1 ml KOH, prata, Kinyoun, Gram (cultivo)

Lavado broncoalveolar Lquor Plo Pele Unha Pus e exsudatos Tecido (bipsia) Urina

10-20 ml 3-5 ml 3-5 ml 10-20 ml

Direto, Prata Tinta da China Hidrxido de potssio (KOH) KOH (**) KOH (**) KOH, Prata, Kinyoun, Gram Prata, KOH (**) Direto, Tinta da China

* Devem estar heparinizados. (**) Pode ser acrescido de tinta Parker ou branco de calcoflor; Os materiais lquidos so centrifugados 3.000 r.p.m./10 min.

4. DIAGNSTICO LABORATORIAL DAS MICOSES O diagnstico micolgico obtido pelo EXAME MICROSCPICO e pelo EXAME EM CULTIVO de um espcime clnico. O exame microscpico do espcime busca visualizar o fungo em sua morfologia parasitria, e o cultivo isolar o fungo para posterior identificao. Para que o diagnstico possa ser realizado necessrio: 1) que o clnico suspeite ou leve em considerao as micoses no diagnstico diferencial; 2) colhido e encaminhado espcime clnico apropriado; e

294

3) que esse espcime seja devidamente processado para o exame microscpico e cultivo em meio apropriado ao isolamento do fungo e posterior identificao. Todas as fases do diagnstico micolgico ficam simplificadas se houver uma cooperao entre o clnico e o laboratorista. 4.1 Avaliao Micolgica 4.1.1 Exame microscpico direto - a fresco, entre lmina e lamnula, de fluidos orgnicos ou do sedimento de seu centrifugado; na suspeita de presena lvedo capsulado, adicionar tinta da China; - em lquido clarificador, potassa a 20%; acrescido ou no de tinta Parker 51 permanente; - em lquido para fluorescncia direta, calcoflor; - distendido em esfregao, fixado e corado ao Gram, Giemsa ou Grocott (Prata); - em cortes histolgicos corados com HE, Grocott, Fontana-Masson. 4.1.2 Isolamento em cultivo O cultivo deve ser executado mesmo quando o fungo, por ter morfologia peculiar, identificvel ao exame microscpico. O isolamento em cultivo feito usualmente por semeadura em meios usados rotineiramente em micologia. O gar Sabouraud (SAB) acrescido de cloranfenicol (SCl) ou ciclohexamida (Mycosel, My). Meios enriquecidos como infuso de corao e crebro (BHI) deve ser includo ou gar Sangue (AS). Os cultivos devem ser incubados 25C ou 35C / 37C; examinados diariamente, durante os primeiros cinco dias e em dias alternados por mais 10 dias antes de serem descartados.

PRINCIPAIS MEIOS DE CULTIVO DAS AMOSTRAS MAIS COMUNS EM VETERINRIA


Sabouraud + Cloranfenicol+ Cicloeximida Sabouraud + Cloranfenicol Swab otolgico

Pele e plos

Pulmonar

lquidos

Bipsias

secrees

vaginal

urina

5 dias 15 dias 5 dias 10 dias 15 dias 295 20 dias 30 dias 48 horas

Rotina de cultivo em micologia


Espcime SAB Pele Plo Unha Lquor Lquido ascite Lq. pleural/Aspirado pul. Lquido sinovial Sangue Medula ssea Pus (leso fechada) Aspirado gstrico Urina Secreo vaginal Lavado brnq./Asp. Traqueal Ouvido, olhos, nariz, boca Tecidos Material de necropsia SCl 2c 2c 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2d 1 1 1 2d 2 3t Meios de cultivo My BHI 1 1 1 2 2 2 2 2 2 2 L-J AN

3t 3t 3t 3t 3t 3t 3t

c=Candida, d=dimorfismo, t=tuberculose ,AN=gar niger (suspeita Cryptococcus), L-J=Lwenstein-Janssen. Temperaturas (C): SAB/SCl(25, 35), My(25), BHI(35), L-J(37). Ordem de preferncia: 1, 2, 3 e 4; cuidado: SCl e My no cresce Nocardia e My - no crescem Cryptococcus, Pseudallescheria e Aspergillus.

4.1.3 Caractersticas do cultivo por agente fngico A)Histoplasma capsulatum var. capsulatum Meio de transmisso: inalao de condios provenientes de solo com fezes de aves e morcegos. Cultivo: em 26 C (fase filamentosa) e 37 C (fase leveduriforme). A forma filamentosa produz colnias brancas e flocosas com macrocondios grandes (aneurocondios) de parede tuberculada. A confirmao de identificao do fungo feita atravs da converso da fase miceliana leveduriforme por subcultivo a 37 C em gar BHI. A identificao tambm pode ser feita usando-se o teste de deteco de exoantgeno que consiste em mtodo de imunodifuso para antgeno secretado. Para diagnstico sorolgico esto disponveis as reaes de fixao do complemento (RFC) e de imunodifuso dupla (ID). O radioimunoensaio (RIE) para deteco de antgeno, tambm disponvel. 296

B) Coccidioides immitis Transmisso: causada pela inalao de condios do fungo proveniente do solo, encontrado em regies semi-desrticas. Acomete humanos e diversos animais. Cultivo:em gar glicose-petona ou BHI a 37 C. A colnia tem caracterstica branca e flocosa, com artrocondios, os quais so altamente infectantes. No possuem fase leveduriforme e sim esfrulas na fase tecidual. Para diagnstico sorolgico, RFC e ID esto disponveis.

C) Sporothrix schenckii Transmisso: fungo dimrfico encontrado no solo e em fragmentos de vegetais, plantas em decomposio,etc. A esporotricose cutnea est associada a certas profisses, como as que lidam com produtos vegetais ou solo (floricultores, jardineiros, trabalhadores florestais, nariz de palhao em gatos) por estarem freqentemente expostas ao organismo. Ocorre em animais, principalmente em gatos. Cultivo: Material como exsudato de lcera ou fragmento de tecido obtido por bipsia, devem ser semeados em gar glicose-peptona ou gar BHI (ambos podendo conter cicloheximida e cloranfenicol). Crescimento (fase filamentosa) de colnias brancas ou cinzentas a 26 C que escurecem, as vezes tornando-se negras com a maturidade do cultivo. As colnias apresentam uma superfcie pregueada e textura mida. A microscopia revela agrupamento de condios ovides, formados no pice de conidiforos em um padro semelhante a ptalas de margarida (simpodiocondio). Confirmao da identificao obtida por subcultivo em gar BHI a 37 C, para converso para a fase leveduriforme (que a forma encontrada no tecido subcutneo). Colnias midas, de textura pastosa e cor de creme se desenvolvem, sendo formadas por leveduras alongadas que se desenvolvem nestas condies de cultivo. Corpos asterides: formao de complexo Ag-Ac que aparece em cortes histolgicos de animais imunocompetentes. Se encontrado no pus, patognomnico da esporotricose. Nos cortes histolgicos encontra-se leveduras com forma tipo charuto.

D) Rhinosporidium seeberi

297

Transmisso: No ocorre transmisso de humanos/humanos e nem de animais/humanos. guas paradas, audes e poos so lugares considerados como nicho ecolgico deste microorganismo considerado atualmente como protista. Diagnstico laboratorial: No existe cultivo. realizado atravs do exame direto (KOH), ou do histopatolgico dos plipos notadamente (contm esporngios com endsporos). E) Fungos DEMATICEOS e MONILICEOS: Os micetomas so classificados de acordo com a etiologia implicada no processo. Os de origem bacteriana (actinomicetos), so denominados micetomas actinomicticos ou actinomicetomas. J os micetomas eumicticos ou eumicetomas, so aqueles causados por fungos.. Os eumicetomas podem ter gros negros (fungos dematiceos) e gros brancos (fungos moniliceos/hialinos), enquanto que os micetomas actinomicticos podem ter gros brancos, amarelos, vermelhos ou pretos, dependendo do tipo de bactria responsvel. O tipo de granulo formado ajuda a orientar na suspeita da provvel etiologia. O diagnstico laboratorial: obteno dos gros nas leses que drenam espontaneamente, e nas fechadas realizar punes. O material dever ser submetido ao exame direto e a cultura (fungo ou bactria) aps a observao dos gros. E.I - Fungos Dematiceos (demceos): Infeco subcutnea, geralmente localizada, formando cistos, granulomas ou abscessos. Foram classificadas dentro das Feohifomicoses doenas especficas conforme a etiologia. -Feohifomicoses propriamente ditas -Cromomicose -Micetomas eumicticos Transmisso em geral: Atravs do contato com o solo e vegetais. Cultivo: de fragmentos de bipsia iro desenvolver colnias de fungos de cor escura em gar glicose-peptona sem cicloheximida. A maioria dos agentes etiolgicos (todos septados) cresce melhor a 30 C. Cultivo dos principais fungos Dematiceos: Cladosporium Colnias cinzas e negras. Os conidiforos so ramificados e os condios (ovides ou cilndricos,com ou sem septao) so produzidos em cadeias.

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Curvularia Colnias escuras (cinza a marrom). Os condios so produzidos em grupos na extremidade de conidiforos, com 3 a 4 septos e so curvados. Alternaria Colnias escuras. Os condos so alongados, escuros, caudatos e com septaes longitudinais e transversais. So produzidos em cadeias. Helminthosporium Difere da Curvularia pelos condios que so cilndricos ou elpticos, septados e no encurvados. Os materiais mais utilizados: aspirados peritoneais, secrees respiratrias, bipsias de tecidos infectados (ex.:pele e nariz). O cultivo deve ser em meio de Sabouraud com ou sem cloranfenicol e as subcuturas ou microcultivos em gar fub ou gar batata para a estimular a conidiao. Crescem a 25 a 30 C. As Feohifomicoses geralmente so diagnosticadas pelo exame histopatolgico que detecta a presena de hifas pigmentadas e septadas, as quais podem estar associadas a outros elementos fngicos tambm pigmentados. Os agentes etiolgicos variam quanto ao grau de pigmentao formada in vivo, portanto, pode ser necessria a utilizao de uma colorao especial (ex.: Fontana-Masson), para demonstrao do pigmento na parede celular.

E.II - Fungos Moniliceos (hialinos) Cultivo dos principais fungos Moniliceos: Fusarium Transmisso: contaminao com condios de Fusarium sp. dispersos no solo, no feno e no ar. Cultivo: em Agar Sabouraud com cloranfenicol e sem ciclohexamida. A colnia inicialmente branca e algodonosa ou flocosa, mas freqentemente desenvolvem um centro violeta ou rosa com uma periferia mais clara. Algumas espcies se mantm brancas ou amarelo marrom. O reverso de cor clara. No exame direto com KOH a 10%, encontra-se hifas hialinas, septadas e ramificadas que lembram s dos Aspergillus spp., no tamanho e na forma de ramificao e septao. Penicillium Transmisso: Seu habitat o mais variado possvel.

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Cultivo: Fungos de crescimento muito rpido. Inicialmente as colnias apresentam uma textura algodonosa baixa ou aveludada, que rapidamente adquirem uma cor amarelo/alaranjada, amarelo/esverdeada, verde ou azul/esverdeada, O reverso varia do castanho/amarelado ao castanho/avermelhado, podendo o pigmento ser difusvel ou no no meio. Penicillium marneffei Espcie dimrfica, apresentando-se na forma leveduriforme quando "in vivo" (em pacientes imunodeprimidos). Nicho ecolgico associado a animais ou pessoas em contato com bambus, especialmente em pases da sia. Aspergillus Transmisso: As espcies do gnero Aspergillus so encontradas em todos os lugares e particularmente nos vegetais. Os condios esto na superfcie dos gros, raes, superfcies de palhas, cascas de arroz, amendoim, sabugo de milho, materiais que so empregados para cobrir o piso dos criadouros, etc. Cultivo: Aspergillus spp. podem ser uni ou biseriados. O formato da cabea aspergilar, disposio das filides, presena ou no de metulas so importantes na identificao da espcie, bem como a colorao da colnia no meio de Czapek. No corte histolgico, as hifas apresentam bifurcao e direcionadas para as reas oxigenadas. Prova de termotolerncia: coloca-se a amostra a temperatura ambiente, a 30 C e a 41 C. O Aspergillus se desenvolve muito bem em altas temperaturas (inclusive at mais de 50oC). F) Mucorales (Mucor, Absidia e Rhizopus) Transmisso: so adquiridas atravs da inalao ou ingesto de condios, normalmente presentes em vegetais (feno). Diagnstico Laboratorial: O material a ser analisado deve ser coletado atravs de bipsia, retirada do tecido necrosado. Estes devem ser submetidos as preparaes histopatolgicas e submetidas as coloraes de PAS, Prata, como tambm observao direta com a potassa com azul de algodo. Em todos as coloraes sero observadas hifas cenocticas de dimetros variados. Cultivo: meios Sabouraud com cloranfenicol. O meio com ciclohexamida no deve ser utilizado, pois este inibe o crescimento de fungos oportunistas.

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A caracterstica da famlia Mucoraceae por possuir esporos assexuados formados dentro de esporngios e por zigosporos produzidos em um processo de reproduo sexuada, e tambm pelas hifas asseptadas. As espcies patognicas mais importantes so: Mucor pusillus, M. racemosus, Absidia corymbifera, A. ramosa, Rhizopus cohnii, R. microsporus, R. arrhizus e R. oryzae. G) Entomophthorales Conidiobolus coronatus Transmisso: isolado em insetos e madeira apodrecida. Cultivo: O material necrosado, colhido por bipsia, deve ser triturado e semeado em Sabouraud glicosado em temperatura ambiente. O crescimento rpido, com colnias branco-amareladas, planas e pulverulentas.

H) LEVEDURAS H.1 - Candida Transmisso: ocorre em humanos, em todas as espcies de animais domsticos, em uma imensa variedade de mamferos selvagens,alm de pssaros que so imputados tambm como reservatrios. At o presente, no foi encontrada Candida em anfbios. Isolar C. albicans na natureza uma condio excepcional e geralmente est relacionada a uma contaminao, sobretudo com matria fecal. As espcies mais comumente isloadas de quadros clnicos so: C. albicans, C. tropicalis, C. parapsilosis, C. glabrata ( Torulopsis glabrata) e C. krusei. Outras espcies menos freqentes C. lusitaniae, C. rugosa, C. pseudotropicalis e C. guillermondii. Cultivo: As colnias de leveduras s devem ser identificadas, quando estiverem puras e em grande quantidade, ou seja, sem contaminao bacteriana ou mistura com outras espcies. Os meios utilizados podem ser : Agar Sabouraud (AS), Yeast Medium (YM), Dixon (para espcies do gnero Malassezia). A morfologia das leveduras, ao contrrio do que ocorre com os fungos filamentosos, no apresenta muita diversidade. Porm, em determinadas situaes, a morfologia celular permite a diferenciao de gneros. Desse modo, realiza-se a microscopia celular da levedura e observa-se a presena blastocondios, pseudo-hifas, hifas, cpsula, entre outras estruturas caractersticas. 301

Para o diagnstico diferencial podemos utilizar testes rpidos como induo da formao de tubos germinativos ou formao de clamidsporos (identificao de Candida albicans). Outros gneros, tais como, Cryptococcus, Rhodotorula, Trichosporon e Geotrichum [considerado por alguns taxonomistas como fungo filamentoso] tambm podem ser identificados atravs da observao das caractersticas macro e micromorfolgicas. Por exemplo, a presena de cores avermelhadas (pigmentos carotenides) indica provvel diagnstico do gnero Rhodotorula. Atualmente, existem diversos testes laboratoriais que facilitam e agilizam a identificao das leveduras. Destacam-se os chamados meios cromognicos (CHROMagar Candida / Candida ID (bioMrieux SA), empregados na triagem e identificao rpida de espcies patognicas como Candida albicans, C. parapsilosis, C. glabrata e C. krusei, alm dos testes bioqumicos atravs do padro de assimilao de substratos do sistema de galerias API 20 e API 32 (bioMrieux SA). O grande entrave para a utilizao destes testes o alto custo e a baixa procura por diagnstico nos laboratrios de micologia veterinria. A seguir so resumidamente relacionados os principais testes utilizados na metodologia convencional. Diagnstico laboratorial: 1. Caracteristicas Fenotpicas 1.1 Macromorfologia Observar as caractersticas coloniais como cor (branca, creme, rosa, vermelha), brilho (brilhante, opaca), forma (circular, oval ou fusiforme), margem (regular, irregular, lobada ou difusa/com razes), superfcie (lise ou rugosa), elevao (plana, convexa, umbelicada ou vulco) ou consistncia (cremosa, mucide, butirosa, membranosa, esfarelada, dura, seca). 1.2 Micromorfologia A)- Aspecto das clulas Realizar lminas a fresco a partir do crescimento de culturas em Agar Sabouraud com no mximo uma semana de incubao. Os caracteres morfolgicos a serem observados so: forma e tamanho da clula, presena de pseudomiclio, tipo de reproduo assexuada (brotamento e/ou fisso) e quando for o caso, tipo de brotamento (multipolar, bipolar, unipolar). B)- Produo de Clamidsporos

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A induo da formao de clamidsporos serve como triagem de leveduras possivelmente patognicas,especialmente para Candida albicans. A tcnica de rotina a de microcultivo no meio agar Fub (opcional). A colnia suspeita inoculada atravs de estrias na superfcie do meio e, aps, coberta com uma lamnula. Os clamidsporos so visualizados aps 24-48 horas de incubao a 300C. Aps o perodo de incubao, so procuradas as seguintes caractersticas: formao de miclio, pseudomiclio, clamidsporos terminais e blastoconidios. 1.3 Testes Bioqumicos A)- Fermentao Se um carboidrato for fermentado, ele ser assimilado, porm o contrrio no necessariamente verdadeiro. Se a fermentao ocorre, a glicose ser sempre fermentada. B)- Assimilao de Fontes de Carbono A separao das espcies de acordo com o padro de assimilao. Tradicionalmente trs principais mtodos so utilizados: o mtodo de Wickerham em tubos com meios lquidos, auxanograma em placas com gar base nitrogenado e o mtodo de rplica em placas. C)- Assimilao de Fontes de Nitrognio Determinados compostos nitrogenados como nitrato de potssio, nitrato de sdio, lisina, creatinina, aminas alifticas e alguns aminocidos so seletivamente utilizados por diferentes leveduras, caracterstica importante na sua identificao. 1.4 Teste Fisiolgico As leveduras crescem numa ampla faixa de variao trmica (0C a 47C) e o teste de temperatura contribui para a identificao de algumas espcies. avalia a capacidade de crescimento das leveduras e fungos leveduriformes nas temperaturas de 37C, 40C e 42C. As espcies patognicas crescem favoravelmente entre 30C e 37C, sendo o crescimento a 37C bem caracterstico. O teste realizado com a utilizao do meio caldo Sabouraud.

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ETAPAS PARA DIAGNSTICO DE LEVEDURAS

H.2 - Cryptococcus Trasmisso:A transmisso se d via inalatria, onde o pulmo o local primrio da infeco. isolado de excretas e restos de poleiros de pombos. Cultivo: O organismo cresce bem em diversos meios (2 a 6 dias a 37 C), mas inibido pela cicloheximida. A identificao baseada na presena de uma cpsula, produo da enzima urease e outras reaes bioqumicas especficas. A pesquisa da fenilxoidase com cido cafeico pode ser um teste til para a diferenciao de Cryptococcus de Candida. O gnero Cryptococccus composto por vrias espcies, entretanto, apenas Cryptococcus neoformans capaz de crescer na temperatura de 37 C. O meio Canavanina glicina azul de bromotimol (Meio CGB), til para tipagem das cepas de Cryptococcus neoformans var. neoformans e Cryptococcus neoformans var. gattii. A

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variedade gatti utiliza o cido mlico, fumrico e o succnico como nica fonte de carbono, contrariamente ao que se observa com a outra variedade. A variedade neoformans extremamente sensvel glicina, no crescendo na presena desta; assim, no Meio CGB, observamos o crescimento da variedade gattii , atravs da viragem do indicador de pH para azul cobalto, demonstrando sua resistncia glicina presente no meio. Sorologia: Ao contrrio das outras micoses sistmicas, os procedimentos sorolgicos usados no diagnstico da criptococose baseiam-se na deteco do antgeno, no do anticorpo. O teste de aglutinao do ltex para deteco do antgeno polissacardio criptoccico no lquor e/ou soro muito usado tambm para avaliao do tratamento e prognstico. H.3 - Malassezia Transmisso: No ocorre em condies normais. Esta levedura pode ser isolada de diversas regies do corpo. Cultivo: Malassezia pachydermatis (espcie no lipodependente) cultivada em meio de Sabouraud, Sabouraud com BHI, Sabouraud com cloranfenicol e tambm com ciclohexamida (em concentrao baixa, pois em altas concentraes observou-se resistncia), Agar glicosado acrescido de Tween 80 a 1%, associado a extrato de levedura a 1,5%. O crescimento das colnias possvel em temperaturas de 25 a 41 c, sendo a temperatura tima de 37 C em cerca de 24 a 48 horas. Existem outras espcies de Malassezia, as quais so lipodependentes como : M. sympodialis, M. slooffiae, M. Globosa e M. restricta entre outras.
I) Pythium insidiosum

Transmisso: a fonte de infeco so os zosporos ambientais, no havendo relatos de transmisso direta entre os animais ou entre animais e humanos. Comumente, observa-se que os animais afetados permanecem por longos perodos em contato com guas paradas em lagos, audes ou locais pantanosos. Provavelmente, altas temperaturas e precipitao pluviomtrica mantm as condies necessrias para reproduo do Pythium insidiosum . Cultivo: Embora o isolamento e identificao de Pythium insidiosum constituam uma importante ferramenta para o diagnstico, em algumas ocasies o isolamento no ocorre e a identificao das espcies de Pythium no uma tarefa fcil, pois se baseia principalmente nas caractersticas morfolgicas dos zoosporngios, zosporos, oognia e anterdio.

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O sucesso no isolamento de Pythium insidiosum alto quando amostras de bipsias, especialmente kunkers no caso de eqinos, forem armazenadas ou transportadas temperatura ambiente, com o acrscimo de antibiticos, entre 1 e 3 dias antes de seu processamento no laboratrio. Quando o meio de transporte no contiver antibitico, melhor transport-la a 4C, embora alguns autores citem que a refrigerao pode resultar em morte do P. insidiosum na amostra. Para o isolamento, alguns autores sugerem o uso de gar V8, acrescido de estreptomicina (200g/mL) e ampicilina (100g/mL). Entretanto, meios de cultivo como agar Sabouraud dextrose, caldo Sabouraud, agar sangue, agar infuso-crebrocorao (BHI) e agar farinha de milho (CMA) tambm podem ser utilizados. Pedaos pequenos de tecido fresco, previamente lavados em soluo salina ou gua destilada estril, so distribudos diretamente na superfcie do agar, devendo ficar incubado a 37C, por 24 48 horas. A identificao realizada atravs do aspecto da colnia e da caracterstica das hifas. Em agar V8, sabouraud dextrose ou CMA, as colnias apresentam-se submersas no agar, com curto miclio areo, apresentando colorao branca ou hialina. Microscopicamente, observam-se hifas hialinas, cenocticas com 4-10 m de dimetro, ocasionalmente septadas, apresentando ramificaes em ngulo reto. A produo de zoosporngios e zosporos deve ser observada para identificao final de Pythium insidiosum. Para obteno de zosporos in vitro, pedaos de folhas de grama previamente esterilizados, so distribudos sobre cultivos de P. insidiosum em agar gua a 2% e incubados a 37C por 24 horas. Posteriormente, os pedaos de folhas infectados so transferidos para uma soluo de sais minerais diluda a 1%. Cerca de 2-4 horas de incubao a 37C, zoosporngios contendo zosporos mveis so observados nos bordos terminais das folhas. Os zosporos tm forma reniforme e apresentam um flagelo anterior (que gera o impulso) e um flagelo posterior (responsvel pela direo) originados de um sulco ventral ou lateral. Uma vez liberados das vesculas, nadam em movimentos espirais ou helicoidais em diferentes direes, por aproximadamente 15 minutos. Aps esse perodo, se encistam tornando-se globosos e emitem tubo germinativo. Mesmo sendo possvel a correta caracterizao de Pythium insidiosum atravs destes mtodos, a identificao precoce da doena torna-se difcil. Atualmente, o desenvolvimento de tcnicas de imunohistoqumica, sorolgicas e moleculares auxilia e suporta um diagnstico precoce e seguro. J foram desenvolvidas tcnicas de imunodifuso em gel de agar (ID), fixao do complemento (FC) e um teste de 306

hipersensibilidade intradrmica (TI), para diagnosticar e avaliar a resposta imune humoral e celular de cavalos com pitiose.

5. HISTOPATOLOGIA Coloraes Histopatolgicas teis no diagnstico micolgico


Colorao Utilidade

Hematoxilina & eosina Permite o estudo da resposta tecidual; permite a vizualizao da cor cora muitos fungos natural dos elementos fngicos; demonstra o fenmeno de SplendoreHoeppli Prata (Grocott) Cora todos os fungos, includos os no viveis; a principal tcnica diagnstica para P. jirovecii; cora filamentos actinomicticos (Nocardia, Actinomyces) Permite a diferenciao Cryptococcus da marioria dos fungos com igual tamanho e forma. Mucicarmin de Mayer Gram (Brow & Brenn) Kinyoun Fontana - Masson Demonstra agentes de actinomicose, nocardiose, rodococose e botriomicose, alm de outras bacterioses Evidencia a cido-resistncia de Mycobacterium, Nocardia, Rhodococcus, Legionella micdadei Evidencia melanina na parede de hifas jovens dos agentes de feohifomicose

5.1 IDENTIFICAO ETIOLGICA ATRAVS DA HISTOPATOLOGIA Geralmente possvel reconhecer os elementos fngicos leveduriformes pelo tamanho, micromorfologia, modo de gemao e pela presena ou ausncia de pseudohifas e hifas. Em determinadas micoses, candidose e aspergilose, os aspectos dos elementos fngicos nos tecidos fngicos s permitem o diagnstico do gnero. Na aspergilose a visualizao da frutificao aspergilar, permite o reconhecimento do A. fumigatus, A. niger, A. flavus e A. nidulans. A presena no tecido de hifas hialinas, ramificadas, regularmente septadas tanto pode indicar aspergilose ou hialohifomicose. As feohifomicoses, cromomicoses, zigomicoses, e bola fngica so termos que agrupam micoses causadas por diferentes gneros fngicos e que a histopatologia no tem possibilidade de fornecer diagnstico etiolgico associado a algum genero.

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Fungos e Actinomicetos identificados por Imunofluorescncia


Actinomyces israelii A. naeslundii A. viscosus Aspergillus spp.* Blastomyces dermatitidis** Candida spp.* Coccidioides immitis** Cryptococcus sp. Histoplasma capsulatum*** Pseudallescheria boydii Proprionibacterium propionicum Protheca wickerhamii P. zopfii Sporothrix schenckii**

* Identificao de gnero, ** Forma tecidual, *** Forma tecidual das duas variedades.

Aspectos Ocupacionais das Micoses em Humanos


Micose Aspergilose Candidose cutnea Coccidioidomicose Criptococose Cromomicose Esporotricose Atividade Contato com gros de cereais, ambientes de muito p, construes, demolies Cozinheira, enfermeira, lavadeira Agricultura, solo rido; arqueologista; antropologista; paleontologista; zoologista; militares; tcnico de laboratrio de microbiologia Contato com fezes de pombas e eucaliptos Agricultura Jardineiro, florista, horti e agricultores,Vets.

Agentes Etiolgicos (fungos dimrficos) das Micoses Sistmicas


Micose
Blastomicose Coccidioidomicose

Nome
Blastomyces dermatitidis Coccidioides immitis

Agente etiolgico Tamanho Forma


8-15 m 30-60 m Esfrico brotamento com base larga Esfrula com endosporos

Tropismo tecidual
Pulmo, pele e ossos Pulmo, ossos, pele, linfonodos, e S.N.C., etc. Pulmo, fgado, linfonodos, bao, etc. Pele, ossos.. linfonodos,

Histoplasmose

Histoplasma capsulatum var. capsulatum Histoplasma capsulatum var. duboisii


P.brasiliensis

2-5 m

Oval, unibrotante com base estreita Oval, brotamento nico ou em cadeia curta Polimrfico, multibrotante

10-15 m

Paracoccidioidomicose

5-20 m

Pulmo,reas mucocutnea,..

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6. SOROMICOLOGIA

6.1 Reao de imunodifuso radial dupla A imunodifuso um exame que se realiza a partir das reaes antgenoanticorpo dos fungos. O resultado do teste ID positivo varia de acordo com a fonte, tipo e concentrao do reagente, durao e condio do desenvolvimento e procedimento da colorao. A ID para diagnosticar a histoplasmose qualitativa e reconhecida como positiva ou negativa, em relao a linha H e M. Anticorpo anti M desenvolve no soro de pacientes com infeco aguda ou crnica e na proporo de indivduos sensibilizados aps teste cutneo com histoplasmina. A linha anti H precipitinas aparece depois e est presente no soro de paciente com histoplasmose ativa. Linhas H usualmente coexistem com linha M. A aspergilose inclui as doenas: Aspergilose broncopulmonar alrgica (ABPA), Colonizao intracavitria aspergilar (CIPA), Bola fngica, Aspergiloma, AI. A ID positiva em alta proporo (70%) de pacientes com ABPA e AI. Soro de pacientes com ABPA raramente apresenta reao forte ao teste ID, durante a fase aguda da doena. Paciente com aspergilose invasiva raramente contm nveis altos de precipitinas e as reaes so traos ou fraca. Quando se suspeita desta condio faz-se ELISA. Teste ID positivo para Candida ou Aspergillus simplesmente indica que o paciente foi exposto a Candida ou Aspergillus respectivamente, e formou anticorpo como resultado. Deve ser interpretado junto com a clnica e achados de laboratrio. 6.2 Reao de aglutinao pelo ltex para criptococose o sistema de aglutinao do ltex para a deteco de antgenos polissacardios capsulares do Cryptococcus. O teste baseado no princpio de que partculas de ltex, sensibilizadas com altos ttulos de globulina purificada na presena de antgenos polissacardeos criptoccicos, iro aglutinar com amostras contendo antgenos capsulares criptoccicos apropriados. Os antgenos polissacardeos do Cryptococcus esto presentes no soro de pacientes com criptococose pulmonar e presente no LCR de pacientes com envolvimento do sistema nervoso central. O teste detecta estes antgenos qualitativa e semi-quantitativamente (titulao).

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Esquema para o diagnstico soromicolgico


Micose Aspergilose Histoplasmose Paracoccidioidomicose Criptococose Amostra Soro, liquor Soro, liquor Soro Soro,urina,liq. Sorologia Imunodifuso para Aspergillus (flavus, fumigatus, niger) Imunodifuso H. capsulatum Imunodifuso P. brasiliensis Ltex para C. neoformans

7. IDENTIFICAO LABORATORIAL DOS DERMATFITOS

7.1 EXAME DIRETO: 1. O diagnstico das dermatofitoses pode ser prontamente realizado em montagens microscpicas das amostras de pele, plos e unhas com KOH. 2. O tipo e a morfologia da hifa permite que estes fungos sejam facilmente diferenciados dos outros agentes de micoses cutneas. A) Na pele ou escamas: as hifas jovens aparecem nas escamas epidrmicas como filamentos ramificados. As hifas velhas apresentam muitos septos que, eventualmente se fragmentam, formando estruturas arredondadas ou em forma de barril (podem se assemelhar aos artrocondios). B) Nos plos: na raiz do plo, observa-se a posio dos artrocondios em relao estrutura pilar. Os artrocondios podem apresentar-se fora do plo e dispostos em cadeia ou em mosaico (padro ectotrix: interesse para animais) ou intrapilarmente, ocupando a medula do plo (padro endotrix: interesse para humanos). 3. Em todos os tipos de espcimes, as hifas devem ser diferenciadas de alguns artefatos que podem ser muito semelhantes ao miclio dos dermatfitos. Esses artefatos incluem: fibras de algodo, materiais sintticos, gros de amido, gotas de gordura, detritos vegetais e o mosaico fngico que so cristais de colesterol depositados em torno das clulas epidrmicas queratinizadas, formando redes que podem estar prximas ou misturadas s hifas. 4. A identificao especfica do agente s pode ser feita pelo estudo dos macro e microcondios obtidos pela cultura dos espcimens clnicos. Contudo, algumas indicaes da espcie envolvida podem se obtidas quando existem plos

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infectados. Para tanto, os arranjos dos artrocondios no plo e a presena ou ausncia de fluorescncia sob luz ultravioleta devem ser considerados. Parasitismo pilar e dermatfitos que atacam animais
Montagem direta em KOH Ectotrix Fungo

Artrocondios pequenos com 2-3m, em massa Microsporum canis mosaica na superfcie externa do plo

Artrocondios pequenos com 3-5m, formando M. praecox (raro) uma bainha ou cadeias isoladas na superfcie Trichophyton mentagrophytes var. externa do plo. mentagrophytes Artrocondios grandes 5-8m, formando uma bainha ou cadeias isoladas na superfcie externa do plo.

T. equinum T. megninii Artrocondios grandes com 8-10 m, formando T. rubrum (raro) uma bainha ou cadeias na superfcie externa do plo T. verrucosum

7.2 CULTIVO: 1. Tanto o exame microscpio direto positivo quanto o negativo devem ser seguidos de cultura dos espcimes clnicos. essencial isolar os dermatfitos, pois o exame direto no permite a identificao das espcies e o prognstico e/ou a instituio de terapia medicamentosa podem depender da espcie envolvida. 2. O meio de seleo para o isolamento primrio dos dermatfitos o Agar Mycoselou Micobitico. 3. A incubao deve ser feita a 25C. Todavia, algumas espcies, tais como T. verrucosum, crescem melhor a 37 C. Nesta temperatura a maioria dos dermatfitos inibida. 4. A taxa de crescimento relativamente demorada, levando, em geral, de 5-10 dias a 3 semanas para atingir a maturidade. 5. As culturas devem ser observadas diariamente para evidenciar o crescimento. Quando o crescimento se torna aparente, fragmentos de cultura primria devem ser retirados e montados em lactofenol com azul de algodo (LPCB ou Azul de Aman), para a observao microscpica. Algumas vezes esse procedimento 311

permite a identificao imediata do dermatfito, reduzindo o tempo de identificao. Em outras situaes necessria a realizao de subcultivos em meios especiais (com diferentes requerimentos nutricionais). A melhor maneira de se observar aa disposio caracterstica das estruturas fngicas atravs da tcnica do subcultivo em lmina ( Tcnica de Riedel).

7.3 SUBCULTIVO EM LMINA Nesta tcnica as estruturas devem permanecer ntegras e o meio utilizado pode ser, preferencialmente Agar Batata ou Agar Lactrimel (meio de Borelli). Esterilizar placas de Petri com uma lmina no interior, papel de filtro e lamnula. Colocar o meio de agar em placa. Deixar solidificar.

Lamnula Com a ala em L, destacar pores bem pequenas da colnia e colocar nos quatro lados do pedao de agar. Cobrir com lamnula esterilizada, pressionando levemente.

Lmina suporte Umedecer com 4 ml de gua esterilizada Agar batata Lmina para microcultivo

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Colocar um pouco de gua destilada esterilizada no fundo da placa esterilizada, repor a gua esterilizada, sempre que necessrio. Deixar por 10-15 dias, dependendo da velocidade de crescimento do fungo. Para montar, retirar a lamnula com pina estril. Fixar o fungo na lamnula colocando 1 a 2 gotas de lcool e esperar secar. Montar essa lamnula em uma lmina limpa, com uma gota de lactofenol azul-algodo. A lamnula pode ser vedada com esmalte de unha ou Blsamo do Canad para conservar por mais tempo. 7.4 Macro e micromorfologia

1. Os aspectos macroscpicos que devem ser levados em conta so a taxa de crescimento, a textura e a colorao das culturas. 2. Formas de crescimento lento produzem colnias glabrosas, cerosas ou consistentes (T. verrucosum). As formas de crescimento rpido podem apresentar colnias planas, sedosas ou fibrosas (M.canis) e colnias planas e pulvurulentas devido a produo de grande quantidade de condeos (M.gypseum e T. mentagrophytes var. mentagrophytes). 3. A cor importante. Pigmentos caractersticos podem ser produzidos por

condeos na superfcie da colnia; ex: creme em T. mentagrophytes. Pigmentos podem tambm ser vistos no reverso da colnia difundindo-se no meio (vermelho em T.rubrum e amarelo limo em M. canis). 4. Colnias mantidas muito tempo no mesmo meio de cultivo produzem mutaes (pleomorfismos) caracterizadas pela presena de tufos brancos estreis que do um aspecto extremamente algodonoso e que surgem inicialmente em pontos isolados e rapidamente tornam-se confluentes, tomando toda a colnia. 5. Os dermatfitos produzem uma srie de estruturas microscpicas caractersticas que so fundamentais para a sua identificao, a saber: Macrocondios: so fundamentais para a identificao do gnero Microsporum. Alm de sua forma e tamanho, devem ser consideradas a espessura da parede (espessas em M. canis e delgadas em M. gypseum) e a presena ou ausncia de tubrculos (predominantes em M. canis, ocasionais em M. persicolor e ausentes nas espcies de Trichophyton). Microcondios: variam em sua forma e arranjo na hifa e tambm em seu nmero. No T. mentagrophytes so numerosos e arranjados em cachos

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ou ao longo da hifa, ao passo que no T. rubrum so poucos, ovais e posicionados lateralmente na hifa. Nas espcies de Microsporum, os microcondios esto em bem menor quantidade e no Epidermophyton floccosum, totalmente ausentes. Clamidocondios: so grandes corpos esfricos com paredes espessas e formados a partir de uma dilatao da hifa em posio terminal ou intercalar. Eles so particularmente comuns em culturas velhas, mas podem ser vistos especialmente em culturas jovens de E. floccosum e T. tonsurans e tambm naquelas espcies que tm colnias glabrosas. Outras estuturas hiflicas: hifas em espiral (freqentes em T. mentagrophytes); hifas em raquete (segmentos de hifas que se dilatam na extremidade); corpos pectinados (projees laterais em forma de pente). Dessas, pelo menos duas estruturas podem ser vistas em espcies de Microsporum.
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Mc o o d s a r c n io pe o in n se r d m a te m r c n io pe e te o ic o o d s r s n s u asn s u e te

Mc o o d se a r c n io m c c o , e f r ad a h s m om e r q e ec m a u te o p r d slis s ae e a E id r o h to p e mp y n flo c s m c ou

M r c n io pe o in n s ic o o d s r d m a te emc o o d sr r so a r c n io a o u asn s u e te M r c n io ic o o d s

Mc o o d se u u d s a r c n io q in la o

Mc o o d slis s a r c n io o

P r d sgo s s ae e r s a

P r d sf a a e e in s

P r d sgo s s ae e r s a

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A maioria dos dermatfitos pode ser identificada apenas pelo estudo de suas macro e micromorfologias. Contudo, existem alguns poucos testes fisiolgicos que podem ser empregados para a confirmao do diagnstico. Estes testes tambm podem fornecer

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informaes adicionais importantes quando o isolado morfologicamente atpico e sua identidade no pode ser estabelecida. 7.5 Testes Fisiolgicos 7.5.1 Perfurao Do Fio De Cabelo In Vitro O teste usado para diferenciar o T. mentagrophytes e o T. rubrum. 7.5.2 Produo de Urease Muitos dermatfitos possuem capacidade de hidrolisar a uria. Assim, um teste demonstrando sua produo, pode ser empregado para diferenciao das espcies. 7.5.3 Crescimento em Arroz As espcies de Microsporum variam em sua habilidade de crescer em arroz e a diferenciao entre M. Audouinii e M. Canis pode ser feita desse modo. Esse meio tambm ir encorajar a formao de tpicos macrocondios em culturas com pouca conidiognese. 7.5.4 Produo de Pigmentos A capacidade dos dermatfitos em produzir pigmentos, quando esto crescendo em determinados meios de cultura (PDA, Agar Fub com 1% de glicose ou Agar peptona 1%), no perodo de 1 ou 2 semanas, uma caracterstica de algumas espcies, e pode ser usada como um critrio para a identificao.
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7.6 Requerimento Nutricional Vrios dermatfitos requerem tiamina, inositol, histidina e cidos orgnicos para o seu crescimento. Para o teste nutricional, o agar cido casamnico vitamina-livre usado como meio basal, no qual solues de vitaminas so agregadas. Para o requerimento de aminocidos, o Agar nitrato de amnia o meio basal. Os meios para este teste esto disponveis comercialmente na forma de meios desidratados. Uma srie de sete agares Trichophyton usada para a diferenciao das espcies, atravs de suas necesssidades nutricionais. A incubao deve ser feita a 30C por 7-14 dias. A leitura da prova feita atravs da comparao do crescimento no meio basal e nos meios suplementados. Um fungo sem requerimento nutricional crescer bem em ambos os meios. Por outro lado, aquele que exige determinado fator de crescimento se desenvolver pobremente no meio basal e sem maiores problemas no meio suplementado com o nutriente requerido. Provas nutricionais para diferenciao das espcies de Trichophyton
Agar Trichophyton 1 Agarcasena 2 Agarcasena + inositol 3 Agarcasena + inositol e tiamina T. verrucosum 84% 16% T. schoenleinii T. concentricum T. violaceum T. tonsurans T. rubrum T. mentagrophytes T. equinum T. megninii T. terrestre 0 4+ 4+ 4+ 0 4+ 50% 50% 0 0 4+ 4+ 2+ ou 1+ ou 1+ 4+ 4+ 0 4+ 4+ 2+ 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 0 0 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 4 Agarcasena + tiamina 5 Agarcasena + cido nicotnico 6 Agarnitrato de amnio 7 Agarnitrato de amnio + histidina

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REFERNCIAS
Atlas de Micologia.Diagnstico Laboratorial das Micoses Superficiais e Profundas. 1995. Clarisse Zaitz. Ed. Medsi, 155 p. Diagnstico em cores Micologia Mdica. 1998. Gillian Midgley, Yvonne M. Clayton, Roderick J. Hay. Ed. Manole Ltda,S.P., 155p. Fundamentos Clnicos e Laboratoriais da Micologia Mdica. 1999. Jos Jlio Costa Sidrim & Jos Luciano Bezerra Moreira. Guanabara Koogan,S.P., 287p. Les Mycoses. Patrice Boure. 1993. Pfizer, Paris, 106 p. Micologia Mdica-Texto & Atlas. 1999. Martha E. Kern & Kathleen S. Blevins. Editorial Premier S.P.,256 p. Micologia Veterinria. 1985. Luiz Celso Hygino daCruz. Imprensa Universitria, R.J.,202p. Microbiologia Mdica. 1990. Patrick R. Murray, W. Lawrence Drew, George S. Kobayashi, John H. Thompson. Ed. Guanabara Koogan, S.P., pp.215-250.

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10. HELMINTOLOGIA: DIAGNSTICO E INTERPRETAO DE RESULTADOS PARASITOLGICOS


Mary Jane Tweedie de Mattos Rita Pato Hoffmann

1. Introduo As helmintoses tem assumido importante papel na sanidade animal, tendo em vista as perdas econmicas evidenciadas seja pelo bito de animais, como diminuio do ganho de peso, alm das diarrias e interferncia na reproduo. O diagnstico inicia pela histria clinica e atravs de exames complementares estabelecido. Assim, para que os exames sejam adequadamente conduzidos so necessrias seguir alguns critrios desde a coleta e conservao da amostra. Acrescido a isto, devem ser observados os prazos entre as coletas e o processamento das amostras. A interpretao dos exames laboratoriais mais utilizados na rotina em Medicina Veterinria, frente a casos clnicos, devem ser correlacionada com os sinais clnicos, dados epidemiolgicos da propriedade, conhecimento prvio do ciclo biolgico dos helmintos, postura das fmeas, patogenicidade dos helmintos e estado nutricional dos animais, tratamentos j utilizados, idade dos animais. 2. Mtodos de pesquisa de parasitos O profissional deve ter conhecimento das tcnicas laboratoriais de diagnstico, bem como saber selecionar as mais apropriadas para que o diagnstico seja correto. Os diferentes exames parasitolgicos so realizados conforme a localizao de cada agente parasitolgico: Exame de fezes Exame de urina Exame do muco nasal Sangue Biopsia Necropsia Recuperao de larvas nas pastagens 3. Coleta de amostras para anlise laboratorial Cada amostra deve estar devidamente identificada com o nome da espcie animal, lote ou categoria a que pertence, raa, idade, nome do proprietrio, endereo, telefone, exame solicitado, data e horrio da coleta, data da ltima medicao anti-helmintica e qual o produto utilizado. Deve ser acompanhado da histria clinica.

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3.1. Coleta de fezes, identificao e conservao As amostras de fezes devem ser colhidas a fresco e no ficarem expostas ao sol, pois os ovos podem evoluir e desidratar, prejudicando o diagnstico. Em pequenos animais deve ser realizada imediatamente aps a defecao, retirando a poro que no ficou em contato com o solo (quantidade =10 a 20 g). Em grandes animais coleta-se diretamente do reto, usando um saco plstico como luva e depois inverte o saco (Figura 1). A coleta deve ser individual, sendo indicado coletar 10-15 amostras por potreiro/campo e por faixa etria. importante que as amostras sejam colocadas em recipientes apropriados, como frascos( limpos e secos, de boca larga e com tampa) ou sacos plsticos. As amostras de fezes devem ser mantidas em refrigerao logo aps a coleta (2C a 8C) ou em liquidos conservantes (formalina 5 a 10%, lquido de Railliet, Henry, soluo de MIF = mertiolate, iodo e formalina). No transporte das amostras utiliza-se caixas isopor com gelo. No caso de conservao em lquidos conservadores no necessrio enviar em caixa com gelo. Nunca congelar as amostras de fezes.

Figura 1. Coleta de fezes para anlises helmintolgicas em bovinos

3.2. Coleta de sangue As amostras de sangue podem ser coletadas atravs de esfregaos sangneos ou de sangue total. Em ces cuja suspeita clinica dirofilariose, o sangue deve ser coletado a tardinha ou nas primeiras horas do dia, perodo que as microfilarias esto presente na circulao

perifrica. A coleta de sangue em grandes animais pela puno da: veia jugular, coccgea mdia ou mamria. Em pequenos animais: veia jugular, safena lateral e medial,ceflica, femural

3.3. Coleta de urina

As amostras de urina so obtidas pela puno direta da bexiga, mico espontnea ou cateterismo. O volume de 5 a 10 mL. A urina deve ser recente, no mximo, 6 horas aps a eliminao. Se o exame no puder ser realizado no mesmo dia, utiliza-se formol 40%, cido brico (0,30 g) ou tulol (1 mL) para cada 120 mL de urina.

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3.4. Recuperao de larvas nas pastagens As larvas infectantes presentes na pastagem indicam o nvel de contaminao do campo/potreiro. A coleta de amostras de pastagem deve ser realizada, no mximo, at as 10 horas da manh. Deve-se coletar sub-amostras (200 g) de cada substrato e imediatamente enviadas ao Laboratrio.

3.5. Coleta de helmintos adultos Separar as vsceras atravs da utilizao de cordo, identificar e acondicionar em sacos de polietileno com formol a 5%, acompanhado de uma ficha com o histrico do animal. 4. Exame de fezes 4.1. Exame fisico (macroscpico) No laboratrio, o exame macroscpico das amostras de fezes pode ser feito por simples obse rvao ou tamisao. Nos ces possvel visualizar proglotes de D. caninum na amostra remetida ao laboratrio, e se no for utilizada aquela poro para a realizao do exame, comum no serem visualizados os ovos deste cestdeo. Isto implicaria em um diagnstico falso negativo. O mesmo ocorre em ruminantes parasitados por Moniezia spp. Muitas vezes so

visualizados os proglotes e na avaliao microscpica os ovos no so observados. O conhecimento da consistncia e forma das fezes dos animais, pode indicar se o animal est com alguma alterao. Nos carnvoros as fezes so cilndricas, nos eqinos so de forma arredondada e nos bovinos so de forma pastosa. J os ovinos e caprinos tm as fezes em forma de pequenas bolas, semelhantes a caroo de azeitona. No caso de uma ancilostomose observa-se que as fezes dos ces ficam escuras e de odor ftido. J nos ovinos e caprinos as fezes ficam endurecidas, ressequidas quando esto com hemoncose.

4.2. Exame microscpico O exame microscpico de fezes deve ser realizado atravs de um conjunto de mtodos que determinam maior fidelidade o seu resultado. A execuo de um nico mtodo, na rotina de laboratrio, no revela a realidade do parasitismo do hospedeiro. O exame microscpico d uma viso do aspecto qualitativo ou quantitativo do parasitismo.

4.2.1. Mtodos qualitativos Metodos diretos Quando realizados imediatamente aps a coleta das fezes. Podem ser realizados:

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a) a fresco b) aps colorao (Iodo, Hematoxilina, Giemsa, Eosina ) c) ou aps concentrao das fezes: Tcnica de flutuao: Mtodos simples, Willis-Mollay, Sheather modificado, Faust Tcnica de sedimentao: Mtodos simples ou natural, Dennis, Stones & Swanson modificado, Baermann modificado, Tubo cnico de concentrao, Ritchie, Ecloso. Tcnica da aderncia: Mtodo de Graham modificado Estes mtodos so simples e rpidos e servem para a visualizao direta do material sem concentrao. So indicados na rotina clinica, em casos de infeces muito altas em que o animal j est apresentando sinais clnicos. Em caso de infeces leves dificilmente sero observados ovos de helmintos atravs destes mtodos. Apesar dos mtodos no serem muito precisos, todo processamento de material dever comear por eles, pois possibilitam a visualizao de outros resduos no parasitos. Nos herbvoros, pela quantidade acentuada de fibras nas fezes no um bom mtodo. Mtodo de Willis-Mollay (Flutuao) Este mtodo se baseia no fato de que ovos so menos densos que as solues supersaturadas usadas no processamento (cloreto de sdio, acar,sulfato de magnsio e sulfato de zinco), por isso flutuam e so recolhidos pela lmina ou lamnula. Os detritos por serem mais densos e mais pesados se sedimentam. um bom mtodo para ovos de helmintos, principalmente para carnvoros e herbvoros.

Mtodo de Dennis-Stones & Swanson (Sedimentao) usado para a pesquisa de ovos de trematdeos e cestdeos. O resultado ser mais confivel quanto mais demorar a sedimentao.

Mtodo de Baermann baseado na motilidade e no termotropismo das larvas. especfico para a verificao da presena de larvas de primeiro estgio de Dictyocaulus , Muellerius que so vermes pulmonares dos ruminantes. Tambm indicado para a recuperao de larvas de Aelurostrongylus,( parasito de gato) e Strongyloides (parasito intestinal de carnvoros). Nesse mtodo importante a utilizao de fezes recentes e recolhidas diretamente no reto do animal para evitar tropismo das larvas de vida livre em direo as fezes.

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Mtodos indiretos So realizados quando as fezes esto fixadas ou conservadas em solues especiais, devido a impossibilidade de um exame mediato. 4.2.2.Mtodos quantitativos: Tem como objetivo determinar a intensidade do parasitismo, apesar de no expressar a real infeco do hospedeiro. Os mtodos so: Mtodo de Stoll; Mtodo de Gordon & Whitlock (McMaster); Mtodo de Roberts & OSullivan e Mtodo de Giro & Ueno (4 tamises).

Mtodo de Stoll Este mtodo visa a contagem de ovos de helmintos. Indicado para exame coprolgico de pequenos animais. Tem como principio suspenso titulada de fezes em soluo decinormal de soda custica

Mtodo de Gordon & Whitlock (Contagem de ovos ou OPG) indicado para se verificar a infeco dos rebanhos. Usa-se o mtodo da cmara de MacMaster na qual so contados os ovos de uma amostra de fezes de um certo rebanho. A interpretao do resultado deve ser realizada de maneira criteriosa, levando-se em conta a patogenicidade do gnero que est presente, assim recomenda-se que seja avaliado junto com o resultado da coprocultura. Os helmintos do gnero Haemonchus sugam sangue do hospedeiro, podendo haver uma perda diria de 250 mL de sangue quando o animal estiver parasitado por 5.000 exemplares, podendo levar a um anemia em um perodo curto de tempo. O resultado da contagem de ovos por grama de fezes aliada a coprocultura indica se necessrio ou no a medicao anti-helmintica. A interpretao deve ser realizada de maneira global, considerando o lote problema, histrico da utilizao de anti-helmintico e regio de procedncia dos animais. O aparecimento de ovos de Strongyloidea com identificao do gnero Haemonchus, deve ser aliado ao conhecimento do principio ativo utilizado na propriedade, intervalo entre as medicaes e principalmente o perodo entre a aplicao e o exame coprolgico. No caso de perodos inferiores a 7-10 dias, pode-se suspeitar de resistncia anti-parasitria. Neste momento, indica-se realizar um monitoramento da propriedade, utilizando os testes de avaliao anti-helminticos. Os valores de nmeros de ovos de Strongyloidea indicativos de necessidade de medicao depende da espcie animal: Bovinos= 300 opg Ovinos= 500 opg Eqinos= 300 opg

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Mtodo de Roberts & Sullivan (Coprocultura) Este mtodo indicado para obteno de larvas de nematdeos gastrintestinais. Baseia-se na identificao nas caractersticas das larvas infectantes, que so tpicas para cada um dos gneros.

Mtodo de Giro & Ueno (4 tamises) Pesquisa de ovos de Fasciola e Paramphistomum. Baseia-se no principio da lavagem, filtragem das fezes em tamises com telas metlicas de 100, 180, 200, 250 malhas polegada.

Mtodos de avaliao de anti-helmnticos

1) Testes in vivo: Teste de reduo de OPG, Teste de eficcia anti-helmintica controlada; Teste critico 2) Testes in vitro: Teste de ecloso in vitro, Teste de motilidade larval in vitro, Teste de fixao de tubulina, Teste de desenvolvimento larval, Anlise enzimtica.
Escolha do mtodo de diagnstico helmintolgico O mdico veterinrio seleciona a tcnica de acordo com a suspeita clinica. Na Tabela 1 esto descriminadas as tcnicas parasitolgicas para a idenificao de ovos, larvas de primeiro estgio e larvas infectantes e na Tabela 2 os mtodos indicados conforme a suspeita clnica.
Tabela 1. Descrio dos objetivos das tcnicas helmintolgicas ovos a fresco flutuao sedimentao contagem ovos (OPG) sedimentao coprocultura recuperao pastagem a fresco necropsia biopsia a fresco flutuao sedimentao necropsia a fresco sedimentao ecloso necropsia

Nematdeos

larvas de primeiro estgio larvas infectantes adultos

ovos e segmentos Cestdeos adultos ovos Trematdeos Acantocfalos miracdios adultos

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5. Interpretao de resultados A metodologia de diagnstico laboratorial eleita deve ter alta qualidade de resultados, rapidez, maior sensibilidade e especificidade, baixo custo, eficincia na deteco ou monitoramento de doenas. Os resultados podem ser alterados dependendo de alguns fatores como tamanho inadequado e conservao da amostra, contaminao da amostra e utilizao de anti-helmnticos.

Tabela 2. Indicaes de mtodos helmintolgicos conforme a suspeita clinica Espcie Mtodo Baermann Dictyocaulu Muellerius Neoascaris Strongyloidea Strongyloides Moniezia Trichuris Nematodirus Neoascaris Strongyloidea Strongyloides Moniezia Trichuris Nematodirus Fasciola Paramphistomum Eurytrema Fasciola Paramphistomum Trichostrongylus Ostertagia Haemonchus Cooperia Bunostomum Oesophagostomum Chabertia Strongyloides Aelurostrongylus Strongyloidea Parascaris Anoplocephala Strongyloides Ruminantes Equinos Suinos Ces/Gatos

Gordon & Whitlock

Willis-Mollay

Strongyloidea Parascaris Anoplocephala Strongyloides

Strongyloidea Ascaris Strongyloides Trichuris

Ancylostoma Toxocara Trichuris Spirocerca

Dennis-Stones & Swanson Giro & Ueno

Dipylidium

Roberts O`Sullivan

Referncias
HOFFMANN, R.P. Diagnstico de Parasitismo Veterinrio. Editora Sulina. 1987.156 p. MATTOS, M.J.T.de; HOFFMANN, R.P. Diagnstico Laboratorial em Helmintoses. Grfica de UFRGS.2007. 30 p. SLOSS, M.W.; ZAJAC, A; KEMP, R. Parasitologia Clinica Veterinria.Editora Manole Ltda.2003. 198p. UENO, H.; GUTIERRES, V.C. Manual para o diagnstico das helmintoses de ruminantes. JICA.1983. 176 p.

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11. METODOLOGIA DA PESQUISA


Csar Augusto M. Avancini Jos Maria Wiest Ana Vera Finardi Rodrigues

Introduo
Para a obteno de ttulo acadmico de ps-graduao em cincia, alm de cumprir determinado nmero de horas/aula cursando disciplinas, o candidato precisa elaborar um documento monogrfico final cujas caractersticas variam de acordo com o nvel de titulao e grau pretendido. O documento monogrfico, segundo Ferreira (1994), caracteriza-se pela abordagem do trabalho de investigao restrito a um nico, ou um nmero delimitado de assuntos (tema), e a profundidade com a qual ele elaborado depende de sua finalidade. Assim, denomina-se Tese ao documento destinado obteno do ttulo de Doutor, de Dissertao ao ttulo de Mestre e de Monografia ao ttulo de Especialista. Todos devem ser resultado do trabalho de pesquisa cientfica, havendo alguns acordos sobre as exigncias pelo modo com que devem ser tratados. A Tese de doutoramento a modalidade mais antiga de trabalho acadmico, com surgimento ligado s primeiras Universidades na Europa, h 800 anos passados. Os intelectuais que aspiravam o cargo de docncia em alguma faculdade de Filosofia ou de Teologia, as primeiras e mais importantes reas de conhecimento ento cultivadas, deveriam apresentar uma Tese, uma nova doutrina ou teoria, a ser defendida perante uma banca examinadora que argia o candidato apresentado argumentos contrrios aos propostos. Se a tese fosse vitoriosa, ele conseguia a aprovao anunciada pela usual expresso Doctorem habemus. Doutor (aquele que sabe) designa a pessoa que tem conhecimento profundo sobre um assunto, e deu prova deste seu saber mediante a realizao de um trabalho original e indito (DOfrio, 2000). Na elaborao de uma Dissertao de mestrado (Tobar e Yalour, 2001), no necessrio apresentar um novo enfoque terico, construir um paradigma ou formular algo novo sobre tema especfico. O mestrando tem que saber estudar um tema, mas no necessita levar o assunto at a fronteira do conhecimento. A dissertao de mestrado destinada demonstrar que o estudante tem habilidade para sistematizar e processar informaes, para encontrar e consultar bibliografia e para poder extrair concluses relevantes da pesquisa empreendida. Igualmente na Monografia para Especializao, o trabalho no necessariamente precisa ser indito podendo (Salomon, 2001) originar-se de tema ministrado nas disciplinas cursadas. Porm, o documento, que um trabalho de iniciao em cincia, deve evidenciar conhecimento e reflexo do candidato sobre o tema tratado e algumas vezes pode ser equivalente uma Dissertao.

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Deve-se ressaltar que o que distingue um documento do outro no o rigor do contedo cientfico com o qual todos eles devem ser elaborados e nem a capacidade intelectual ou de sistematizao, mas sim o tempo que os candidatos tm para tratar e aprofundar o tema. E entende-se que tem melhor chance para elaborar um bom documento monogrfico quem tem a melhor organizao, melhor projeto na busca, na pesquisa de dados para serem tratados no documento, do que quem imagina ter tido uma grande idia de tema de pesquisa mas possui rudimentar organizao. A pesquisa pode ser definida como uma forma de estudo de um objeto, com a finalidade de incorporar os resultados obtidos em expresses comunicveis e comprovadas aos nveis de conhecimento obtido (Rudio, 1986; Barros e Lehefeld, 1996). A fim de merecer o qualificativo cientfica, a pesquisa deve ser feita de modo sistematizado, utilizando para isso mtodo prprio e tcnicas especficas, procurando um conhecimento que se refira realidade demonstrvel pelos sentidos e com modo tambm prprio para comunicar o conhecimento obtido. O mtodo prprio o mtodo cientfico e a forma prpria, entre outras, o documento monogrfico. Um mtodo pode ser definido como uma srie de regras para tentar resolver um problema. Uma das caractersticas bsicas do mtodo cientfico a tentativa de resolver problemas por meio de suposies, isto , hipteses, que possam ser testadas empiricamente. Uma hiptese contm previses sobre o os resultados que se podem obter, em condies determinadas. Se o cientista pesquisador fizer uma experincia, ou observao, e obtiver os resultados previstos pela hiptese, esta ser aceita, pelo menos provisoriamente. Se os resultados forem contrrios aos previstos ela ser considerada, em princpio, falsa, e outra hiptese ter de ser buscada (Alves-Mazzotti e Gewandsznajder, 1998).

O Projeto de Pesquisa
Como escrito acima, melhor trabalho de pesquisa ser desenvolvido quanto mais organizado o pesquisador. Para organizar a pesquisa, a metodologia da pesquisa oferece regras destinadas elaborao de um projeto de pesquisa, sendo este entendido como instrumento para uma ao planejada em investigao cientfica, na aplicao do mtodo cientfico. O projeto um documento que detalha as intenes, aes e procedimentos que sero desenvolvidos na busca de dados para formao de conhecimento sobre a realidade biolgica, qumica, fsica ou social. Os elementos que compem um projeto de pesquisa em cincia devem responder, na ordem proposta, s seguintes questes: - Tema de Pesquisa: o que eu quero pesquisar? - Problema de Pesquisa: o que eu desconheo sobre o que quero pesquisar? - Hiptese de Pesquisa: o que eu penso que vou encontrar sobre o que eu ainda no sei? - Justificativa e Levantamento Bibliogrfico: porque eu quero pesquisar?

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- Objetivo Especfico: o que eu vou fazer neste trabalho? - Materiais e Mtodos: como eu vou fazer? - Bibliografia: onde encontrei referncias sobre o que estou tratando? - Oramento: o quanto vai custar? - Cronograma: quanto tempo vai levar? A seguir, algumas referncias de como responder os questionamentos e como desenvolver os elementos constituintes de um projeto de pesquisa

O Tema de Pesquisa
Saber o que se quer pesquisar o primeiro passo para iniciar o trabalho de investigao, mas nem sempre o mais fcil pois existe uma enorme diversidade de assuntos a sem tratados. Um critrio que deve ser observado na escolha o interesse que o pesquisador tem pelo assunto. Pode ser, por exemplo, devido atividade profissional ou subrea de conhecimento que desenvolve. Outras vezes, o projeto ser desenvolvido porque o orientador assim determina. De todo modo, no se pode esquecer que a escolha do tema dever ser justificada, seja devido importncia cientfica, tecnolgica, social, econmica ou outro motivo que determine sua relevncia no investimento de tempo, dinheiro e emoo. Talvez a referncia mais marcante na construo de um tema de pesquisa a sua pertinncia ao campo cientfico. Ou seja, ele deve estar bem localizado na derivao da hierarquizao dos campos de conhecimento conforme organizado, em nosso pas, pelo Conselho Nacional de Cincia e Tecnologia (CNPq/MCT). Usando como referncia as Anlises Clnicas Veterinrias, especialidade na qual o Curso de Especializao para o qual esta publicao serve de base, sua classificao fica assim constituda: Grande rea: Cincias Agrrias rea: Medicina Veterinria Subrea: Patologia Clnica Animal Especialidade: Anlises Clinicas Veterinrias. Alertamos que algumas modificaes nesta classificao ocorrem, com incluso de novas reas e subreas para acompanhar a complexa dinmica da produo de conhecimento. Linha de Pesquisa: estas so entendidas como estudos aglutinadores que se fundamentam na tradio investigativa de um pesquisador, de um grupo de pesquisa ou de uma instituio. Elas esto relacionadas com as caractersticas da formao dos recursos humanos disponveis. Neste Curso de Especializao, algumas Linhas de Pesquisa so as seguintes: - Patobiologia aplicada Veterinria - Hematologia, transtornos da coagulao - Bioqumica clnica e transtornos endcrinos Das linhas de pesquisa so derivados os temas de pesquisa.

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No se deve confundir tema/assunto de pesquisa com o ttulo da monografia. O Tema informa o assunto que ser investigado, enquanto o ttulo da monografia pode ter mais informaes como os referentes aos resultados e suas interpretaes. importante que o tema esteja devidamente delimitado. Assim como todos os elementos constituintes do projeto de pesquisa, ele serve para orientar os procedimentos que sero executados na investigao e, portanto, deve servir tanto para a organizao do pesquisador quanto para informar aos leitores ou avaliadores do projeto sobre a sua pertinncia cientfica e exeqibilidade prtica. Exemplo de tema relacionado com a primeira linha, livremente adaptando de um projeto (Saccaro, 2007), elaborado na primeira edio do Curso: Nveis basais de atividade de butirilcolinesterase em ces que usam coleiras impregnadas com agente anticolinestersico.

O Problema de Pesquisa
Tendo delimitado o tema, o assunto de interesse, o passo seguinte o de elaborao do Problema de Pesquisa. Informar o que desconhecido no tema tratado, e por isso ser investigado. Atualmente o problema de pesquisa formulado na forma de pergunta, sendo uma maneira de interrogar-se sobre o fenmeno ou fato que se quer observar ou experimentar. A pesquisa toda conduzida com a finalidade de encontrar uma resposta questo formulada. Deve-se lembrar que, assim como o Tema, o Problema de pesquisa deve ser passvel de demonstrao e verificao pelos sentidos. Alm do mais, exige um considervel conhecimento da produo cientfica sobre o tema tratado. Quanto maior formao acadmica pretendida, tanto maior a exigncia da profundidade do problema colocado. No caso de um projeto de Tese de doutoramento, quando exige-se originalidade no trabalho, deve tambm haver originalidade na formulao do Problema de pesquisa. Ou seja, descobrir algo que desconhece-se sobre o Tema, perguntar o que ainda no foi perguntado. O que significa tambm elevado conhecimento conceitual e terico sobre a Especialidade e a Linha de Pesquisa. O que ocorre frequentemente a formulao provisria de um Problema de Pesquisa. A leitura sobre o tema, ou mesmo testes-pilotos e entrevistas iniciais, podero fazer com que o Problema de Pesquisa seja reformulado. Assim como ocorre com a formulao da Hiptese, o momento de demonstrao de criatividade por parte do pesquisador. Exemplo de Problema de Pesquisa: As coleiras antiparasitrias que apresentam anticolinestersicos como princpio qumico ativo, afetam a atividade butirilcolinesterase em ces hgidos?

Hiptese de Pesquisa

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O mtodo cientfico tem usado como o recurso na resoluo de Problemas de Pesquisa a metodologia hipottico-dedutiva. Ou seja, resolve o Problema atravs de uma antecipao, da resposta antecipada, uma suposio do resultado. Ateno: antecipao de resultados no se confunde com antecipao dos dados. Estes sero obtidos com o desenvolvimento do trabalho. A Hiptese uma proposio que poder ser afirmada ou negada atravs da obteno dos dados e interpretao de seus significados, o que dever ser informado como parte integrante do processo de concluso do trabalho. Para Pauli (1976), a Hiptese a previso em favor de uma varivel, a qual foi eleita para iniciar o trabalho de sua comprovao ou desaprovao. Variveis como se denominam as mltiplas possibilidades explicativas a que esto sujeitos os fatos antes de se ter conhecimento da verdade a que efetivamente esto subordinados. Existem algumas formas de classific-las, como: variveis dicotmicas que divergem pela afirmativa ou pela negativa de uma das possibilidades (se um, no outro); variveis contnuas que permitem graus de presena, e assim possibilitam conseqentes medidas (quanto maior a presena de X, maior a de Y). Tambm podem ser distinguidas pela importncia de suas aes: variveis independentes as que se exercem como causa direta do fenmeno; variveis dependentes so as variveis resposta, que se exercem condicionadas; variveis intervenientes capazes de condicionar o fenmeno, mas sem serem sua explicao fundamental e nem decorrerem dessa fundamental. A formulao de uma hiptese, assim como todos os elementos do projeto, colabora com a restrio da amplitude da investigao, evitando que o pesquisador divague de modo errtico na busca do conhecimento. Exemplo de Hiptese de Pesquisa: Ocorre reduo na atividade de butirilcolinesterase em ces saudveis que utilizam coleira impregnada com agentes anticolinestersicos, aps sete dias de uso.

A Justificativa e a Leitura Exploratria (Levantamento Bibliogrfico)


Segundo Richardson (1999), este o local onde se explicitam os motivos de ordem terica ou prtica que motivam e justificam a pesquisa. Pode ser informado como e por qu foi escolhido o fenmeno que ser observado, possveis contribuies para a sociedade como um todo, para o conhecimento cientfico e para a soluo do problema proposto. Fazer referncia a possveis aspectos inovadores do trabalho, e se for uma replicao o porqu se faz necessria. As leituras exploratrias servem para se obter informaes sobre investigaes j realizadas acerca do Tema do trabalho. Elas permitem o investigador destacar a perspectiva que lhe parece mais pertinente na abordagem de seu objeto de pesquisa, inclusive fazendo com que possa ajustar tanto o Problema quanto o Tema da pesquisa.

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A Leitura Exploratria, que j faz parte do Levantamento Bibliogrfico, deve ser feita mais alinhada como o Tema de Pesquisa, e no com a Linha de Pesquisa, que mais ampla. O pesquisador deve fazer a leitura de abordagens diversificadas, o que colabora para seu melhor esclarecimento, bem como dispor de tempo tanto para refletir sobre as informaes recolhidas quanto para discutir sobre elas com o orientador e outros colegas do grupo de pesquisa. Mais abaixo, sero indicados procedimentos para qualificar a busca bibliogrfica e organizar as informaes obtidas. Exemplo de argumentao Justificativa: Os organofosforados e carbamatos so muito utilizados em Medicina Veterinria, na formulao de produtos contra ectoparasitas, como pulgas e carrapatos. Esses inseticidas podem ser encontrados sob vrias formas como talcos, coleiras, sprays e shampoos. Somente no ano de 2004, foram notificados no Centro de Informaes Toxicolgicas do Rio Grande do Sul (CIT/RS) 40 casos de intoxicao por agentes anticolinestersicos em animais de companhia .....

O(s) Objetivo(s)
Caracterizam de forma resumida a finalidade do projeto (Goldim, 1997). Dependendo da magnitude do projeto, o Objetivo pode ser dividido em Geral e Especfico. O Geral explicita o propsito (mais amplo), e o Especfico caracteriza etapas ou fases do projeto. Como os Objetivos expressam as aes que sero desenvolvidas no projeto devem iniciar, sempre que possvel, com verbos operacionais no infinitivo como: descrever, comparar, verificar. importante a preciso na escolha do verbo, escolhendo aquele que rigorosamente exprime a ao que o pesquisador pretende executar. Critrio fundamental na delimitao dos objetivos da pesquisa a disponibilidade de recursos financeiros e humanos e de tempo para a execuo da pesquisa, de tal modo que no se corra o risco de torn-la invivel. prefervel diminuir o recorte da realidade do que se perder em um mundo de informaes impossveis de serem tratadas (Barreto e Honorato, 1998). Exemplo de Objetivos: Geral: reduzir o tempo de diagnstico em suspeitas de intoxicaes de ces por agentes qumicos antiparasitrios como organofosforados e carbamatos. Especfico: verificar a ocorrncia de alterao na enzima enzimtica butirilcolinesterase em ces aps sete dias usando coleira antiparasitria.

Material e Mtodo
Nesta seco devem ser descritos todos os procedimentos, meios tcnicos e materiais que sero adotados e usados durante o processo de investigao. Pode-se iniciar definindo o tipo de pesquisa:

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- qualitativa: que especifica os fenmenos em sua razo de ser quanto aos significados, intencionalidades, motivaes, aspiraes, crenas, valores e atitudes. Este tipo de pesquisa pode ser utilizado, por exemplo, quando interroga-se sobre que explicaes os criadores de gado de leite atribuem s causas de aborto?. - quantitativa: neste caso a pesquisa supe uma populao, ou amostra, qualquer conjunto de elementos que seja comparveis entre si, objetivando a mensurao de determinadas variveis do fenmeno, evento ou fato observado ou experimentado. Deve gerar dados para a interpretao matemtica atravs da estatstica descritiva ou analtica. Tambm pode-se determinar como tipos de pesquisa: - observacional: quando as tcnicas de coleta de dados visam descrever o objeto de pesquisa sem nele interferir, no sentido de no introduzir ou manipular as variveis estudadas. Por ser observacional no significa passividade de parte do investigador, pois esse examina os fenmenos no apenas vendo e ouvindo diretamente mas tambm atravs da coleta de informaes materiais para observao analtica. - experimental: nesse tipo de pesquisa as variveis capazes de influenciar o objeto de pesquisa so propositadamente introduzidas ou manipuladas com a finalidade de obter como resultados a resposta manifestada pela populao ou sua amostra. - reviso bibliogrfica: tambm aceita como um modo de busca de resultados de pesquisa. A busca de dados atravs da reviso de pesquisas j realizadas pode ser aceitvel quando se quer comparar, por exemplo, tcnicas diferentes de anlises clnicas ou intervenes teraputicas e que, por ordem cronolgica, buscam-se evidncias de melhores eficcias e eficincias de tratamentos. Nomina-se essa modalidade descrita como reviso sistemtica. Outra modalidade a reviso crtica, quando ela entremeada por comentrios sobre o mtodo de busca dos dados, das suas interpretaes ou anlises estatsticas. Vemos que em ambos os casos, o conhecimento do pesquisador no pode estar sujeito ao nvel de conhecimento de iniciao cientfica. Pelo contrrio, exige grande conhecimento prvio sobre o tema tratado bem como capacidade de reconhecer acertos e possveis erros nos resultados, interpretaes apresentadas nas comunicaes cientficas. Muitos se deixam levar pela falsa aparncia de ser trabalho de mais fcil execuo e menor tempo para concluso. Uma pesquisa e monografia apresentada como recorta e cola, inaceitvel do ponto de vista acadmico. Outro quesito importante a descrio do delineamento da pesquisa. Diz respeito ao modo como populao ou sua amostra organizada em relao s variveis de observao ou experimentao. Quando tratamos do delineamento de um experimento, realizamos a descrio da forma como os tratamentos sero designados s unidades experimentais. O tratamento pode ser entendido como um produto, substncia ou um processo que se quer testar, e unidades experimentais pode ser um paciente, um grupo de indivduos ou mesmo uma clula bacteriana.

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Deve ser especificada a varivel em anlise e a forma como ser medida, alm do nmero de repeties. Tomando como referncia desenhos-delineamento de pesquisa com critrio tempo e direo da amostra (prospectivo: causa efeito), o Estudo de Coorte (dois grupos), que pode ser: ante facto ou pos facto, apresenta o seguinte arranjo: expostos tempo efeito sim doena no no expostos tempo efeito sim doena no Presente futuro Uma pesquisa, seja qual for o desenho-delineamento adotado, pressupe a determinao da populao em experimentao ou observao. A populao significa todos os indivduos (elementos, ou gnero e espcie quando seres vivos) de determinada rea, o que, dependendo do cenrio que o projeto pretende estudar, torna o trabalho invivel por razes sejam elas de ordem logstica, de tempo ou recursos econmicos. Quando invivel trabalhar com todos os indivduos, precisamos escolher parte da populao, a qual denominada amostra (parte de um todo). Quando vamos escolher qual parte da populao que selecionaremos para compor nossa amostra, um critrio que podemos adotar o da representatividade probabilstica ou no probabilstica. Na amostragem probabilstica (Lakatus e Marconi, 1996) todos os elementos do universo da pesquisa tem a mesma probabilidade de serem sorteados para compor a amostra. O pr-requisito bsico que precisamos ter a relao de todos os elementos que formam a populao determinada, de modo que se torne possvel selecionar ao acaso qualquer um deles. Para isso, os procedimentos adotados vo do simples sorteio at a consulta em tabelas de nmeros aleatrios, tendo esse tipo de amostragem como vantagem a possibilidade de generalizar os resultados da pesquisa para toda a populao investigada. Os tipos de amostras probabilsticas so: - Aleatria Simples: onde todos e cada um dos elementos da populao tem a mesma chance de serem escolhidos; - Estratificada: a base deste modelo est no fato do reconhecimento da existncia de um universo heterogneo, com grupos mutuamente exclusivos. Ento, para formar a amostra devemos organizar estratos, sub-categorias conforme sua homogeneidade, e deles sortear as unidades para compor a amostra; - Conglomerados ou Agrupamentos: neste caso, so escolhidos grupos e no indivduos. No grupo, todos os indivduos faro parte da amostra. Neste caso os grupos j esto pr-formados sem a interferncia do pesquisador, como pode ser o caso de bovinos pertencentes a uma associao de criadores;

causa

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- Sistemtica: quando o nmero de amostras pr-determinada, por exemplo cinco, em uma populao de cem, sorteia-se o primeiro, e vai-se selecionado de vinte em vinte indivduos ou elementos. O segundo critrio de formao de amostra o no-probabilstico. Tanto este quanto o critrio probabilstico tem o mesmo status cientfico. Ao contrrio do que ouve-se falar com freqncia, o critrio no-probabilstico no caracteriza um vis na formao da amostra, posto que conforme o caso a escolha tecnicamente correta. Por exemplo, quando a generalizao dos resultados no for desejada, ou no estudo de sinais patognomnicos de enfermidades a amostra formada precisa ser a no-probabilstica, do tipo intencional. Podem ocorrer vieses nos resultados tanto devido formao da amostra quanto devido escolha do modelo de amostra. Os tipos de amostras no-probabilstica: - Acidental, ou por Convenincia: a possibilidade de escolher certo elemento no universo populao desconhecido. Os indivduos ou elementos so escolhidos por serem mais acessveis ou ento por serem mais fceis de serem avaliados; - Intencional, por julgamento: quando os indivduos, ou mesmo grupos, so escolhidos para comporem a amostra por que so mais caractersticos, melhor adequados para o estudo em questo; - Por Cotas: neste caso a populao dividida em sub-populaes, conforme a importncia atribuda (pode ser pela idade zootcnica), e cada uma delas recebe uma cota percentual; - Sistemtica: aqui diferente da probabilstica quando o primeiro indivduo no for sorteado. Outro passo importante nesta seco especificar os instrumentos de coleta de informaes, como: - reviso de fichas clnicas; - dados obtidos em arquivos da vigilncia epidemiolgica; - entrevistas, questionrios; - indicadores sangneos: antgenos x anticorpo; nveis hormonais, glicmicos, etc... - isolamento de microrganismos; - verificao antomo-patolgica; - sinais clnicos, etc.... Tambm deve estar prevista a avaliao matemtica dos dados, como o caso da estatstica descritiva ou analtica. Para projetos que utilizam animais ou seres humanos na observao e experimentao, se faz necessria a aprovao dos procedimentos por uma comisso de tica ou de regulao do uso de animais na pesquisa.

Referncias 333

Notifica as fontes onde as informaes utilizadas na formulao do projeto foram obtidas.

Cronograma
Indica a data de incio e finalizao do projeto, bem como a distribuio temporal semanal ou mensal, das atividades e procedimentos necessrios sua execuo.

Oramento
Geralmente dividido por recursos necessrios aquisio dos materiais de custeio e permanentes, que se aparecem como ltima seco do projeto nem por isso a menos importante. As seces aparecem no projeto em ordem de apresentao que obedecem uma lgica de comunicao. Mas nenhuma mais importante que outra. Se o projeto um modo de planejamento, ele pressupe a sua exeqibilidade. Portanto, mesmo que o oramento seja apresentado como ltimo item no significa que deva ser o ltimo a ser considerado na projeo, posto que desde o incio pode ser o fator limitador na execuo do trabalho. Assim tambm com o tempo disponvel. Por exemplo uma tese de doutoramento, que mesmo tendo a necessidade de uma complexidade maior no aprofundamentos do tema proposto permite algumas correes de rumo no desenvolvimento do trabalho planejado posto que tem tambm maior tempo na sua execuo. J uma monografia de concluso de um curso de especializao, a margem para correo de rumo caso o planejamento de alguma das seces no tenha sido bem elaborada, muito menor. Sintetizando e reforando, todas as seces do projeto devem estar encadeadas de modo que permitam a construo de dados com o rigor exigido pelas caractersticas cientficas.

O levantamento bibliogrfico
Uma vez definido o tema sobre o qual versar o trabalho, chegado o momento de organizar-se em relao aos suportes bibliogrficos que tornaro possvel a sua realizao, embasado em uma bibliografia bsica cuja funo orientar o pesquisador na estruturao dos tpicos, a partir do problema exposto, na coleta, anlise e interpretao dos dados a serem relatados na monografia, podendo utiliz-lo como roteiro para sua execuo. O levantamento bibliogrfico consiste na busca e obteno das informaes pertinentes, atravs dos suportes oferecidos pelas tecnologias da informao e a utilizao adequada das ferramentas inerentes.

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A informao cientfica tais como artigos de peridicos, livros, captulos de livros, teses de doutorado, dissertaes de mestrado, reunida e armazenada pelos profissionais da informao, de forma sistemtica e organizada, de maneira a possibilitar sua recuperao com a finalidade de consulta e leitura, atuando como suporte pesquisa. A esta recuperao de documentos chamamos levantamento bibliogrfico. Atualmente, as mais utilizadas so as fontes de informaes eletrnicas (que utilizam os computadores como suporte - hardware e software), dada a facilidade com que so disseminadas, resultando em agilidade na obteno dos documentos, alm de oferecer recursos multimdia, links para artigos relacionados e outros que possam enriquecer a busca do pesquisador. Embora os recursos e bases oferecidos pela internet sejam incontveis, sero abordados a seguir aqueles mais comumente utilizados para a elaborao de trabalhos acadmicos. Nesse contexto, os peridicos cientficos tendem, na atualidade, a figurarem como a principal fonte de difuso do conhecimento cientfico devido, justamente, periodicidade da publicao, tendo como caracterstica atualidade da informao e confiabilidade, uma vez que os trabalhos publicados so avaliados pelos seus pares, pesquisadores, e passam pelo crivo de uma comisso editorial especialista na rea. As bases de dados que contemplam textos, podem ser apresentadas na forma referencial e texto completo e podem conter, alm de artigos de peridicos cientficos, teses de doutorado, dissertaes de mestrado, livros, trabalhos apresentados em congressos e outros documentos de cunho cientfico. As bases de dados referencias so aquelas que, quando da busca do material, fornece apenas a referncia do documento, ou seja: autor, ttulo e/ou publicao e outros elementos que permitam localizar o documento. Estas bases, seguidamente, fornecem tambm os resumos dos documentos, facilitando ao pesquisador determinar a importncia do documento para o seu trabalho. A partir destes dados, feita a busca para saber onde est armazenado o documento impresso (em bibliotecas ou centros de informao do Brasil e do mundo) para que possa ser providenciada sua chegada s mos do interessado. As bases de dados de texto completo fornecem o texto na ntegra, permitindo sua leitura direto na tela do computador, bem como imprimi-lo ou envi-lo por e-mail para leitura posterior. Podem ser de acesso gratuito ou mediante pagamento (assinatura ou acesso pago a um nico artigo). Algumas bases de dados, mesmo tidas como referenciais, fornecem, atravs de links, o acesso ao texto completo, podendo este ser gratuito ou solicitar senha de assinatura ou, ainda, pagamento para acesso ao documento na ntegra. Com o levantamento bibliogrfico em mos, hora de buscar os documentos cujo acesso no foi imediato. Os catlogos de bibliotecas acadmicas prximas podem e devem ser consultados nessa busca pois pode haver reduo de nus em relao a tempo e custo.

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Apesar da Internet oferecer ferramentas de busca de documentos como o Google, Yahoo, Cad, esses so recursos cuja recomendao de que sejam utilizados com parcimnia, pois, considerando a facilidade com que qualquer indivduo pode postar informaes na internet, sua confiabilidade pode ser prejudicada.

Organizao do material
Uma vez selecionado o material de interesse, o prximo passo organizar aquele que ser utilizado na elaborao do trabalho. A partir da leitura dos textos, selecionam-se aqueles que, pelo seu contedo, sero utilizados na fundamentao terica do trabalho e, dada a quantidade de material que reunida no decorrer da tarefa, urge que os mesmos sejam organizados facilitando sua posterior recuperao. momento de colocar-se em prtica as fichas de leitura. Organizam-se fichas que contenham um cabealho, para a referncia do documento consultado, espao para resumo e observaes importantes e espao para outras notas relevantes, tencionando recuperar a informao caso haja necessidade. Este espao pode conter, por exemplo, a biblioteca em que se encontra o material. importante enfatizar que, no decorrer do trabalho, outras bibliografias interessantes podem surgir e, para manter-se organizado, no deve ser desconsiderada a prtica das fichas. Exemplo de ficha bibliogrfica: Assunto: Referncia: Resumo: Ficha 1

O original pode ser encontrado na Biblioteca ... Endereo:

O documento monogrfico
Redao do Trabalho
A recomendao de que o trabalho (elementos textuais) siga uma redao fluente, concatenada, primando pela clareza, objetividade e impessoalidade, e, conquanto varie o estilo, dependendo da rea, no deve distanciar-se da objetividade, optando pelas idias concisas e evitando-se redundncias. A monografia deve ser considerada como um estudo que leve a concluses pertinentes e passveis de contribuies tericas e/ou prticas nos campos cientficos, sociais e tecnolgicos relevantes. A ateno e exigncia com o trabalho proposto,

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parte da utilizao da norma culta para sua redao e segue, at sua concluso, com a acuidade tcnica quando da sua formatao final. Quando da adoo de frmulas e/ou termos especficos de determinadas reas, recomenda-se a adoo daqueles utilizados por fontes autorizadas. As siglas, na redao do texto devem ser evitadas, entretanto, optando-se por este formato, na sua primeira aluso no texto, coloca-se o nome por extenso, seguido da sigla entre parnteses, podendo, ento, as aluses subseqentes valerem-se somente da sigla. Exemplo: Associao Brasileira de Normas Tcnicas (ABNT) A estrutura do trabalho cientfico segue as normas da Associao Brasileira de Normas Tcnicas, Comit de Informao e Documentao (ABNT). A ABNT o rgo responsvel por elaborar e revisar, periodicamente, normas visando normalizar tecnicamente procedimentos nas diversas reas, no Brasil, contribuindo, enquanto fornecedor oficial das bases necessrias ao desenvolvimento tecnolgico do Pas. Na rea da documentao, delibera sobre quesitos que englobam disposio, seqncia e estilo, visando a uniformizao e enquadramento formal dos trabalhos acadmicos, desde a sua forma de apresentao estrutural, at a elaborao das referncias bibliogrficas. Tais deliberaes visam a facilitar a leitura, consulta e recuperao de informaes ali contidas. Sendo assim, uma monografia, enquanto trabalho cientfico, deve segui-la quando da sua elaborao e disposio. Segundo a Norma da ABNT para Trabalhos acadmicos Apresentao (2002), o trabalho cientfico composto de elementos pr-textuais, textuais e ps-textuais sendo estruturados e dispostos conforme o Quadro 1.

Elementos pr-textuais
Constituem-se em elementos que antecedem o corpo do trabalho.

Elementos Textuais
Os elementos textuais so subdivididos em captulos ou sees, de acordo com a necessidade apresentada.

Introduo O primeiro captulo (ou seco) a Introduo, que deve expor, sucintamente, a natureza da pesquisa, abordando de forma geral as informaes que se seguiro e a intencionalidade do trabalho, tendo o cuidado de evitar j no princpio, aprofundar-se ou estender-se em demasia no tema, bem como se distanciar da temtica proposta.

Desenvolvimento Os captulos subseqentes (Desenvolvimento) devem conter os objetivos do trabalho; reviso de literatura, onde o autor expor seu ponto de vista e abordar outras pesquisas e

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investigaes realizadas na rea, estabelecendo comparaes com o seu trabalho de investigao e fazendo consideraes pertinentes; materiais e mtodos; resultados; discusso e concluses. Quadro 1. Estrutura e disposio dos elementos na monografia. Estrutura Elemento Capa Lombada Folha de rosto Errata Folha de aprovao Dedicatria Pr-textuais Agradecimentos Epgrafe Resumo na lngua verncula Resumo em lngua estrangeira Lista de ilustraes Lista de tabelas Lista de abreviaturas Lista de smbolos Sumrio Introduo Textuais Desenvolvimento Concluso Referncias Glossrio Ps-textuais Apndice(s) Anexo(s) ndice(s) X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X Obrigatrio X X Opcional

A reviso bibliogrfica, por sua natureza, far uso das citaes onde, mais uma vez a ABNT deve ser seguida, atravs da sua norma de citaes de documentos, evitando a cpia ou apropriao indevida de idias. Toda e qualquer idia, especfica, retirada de um documento, deve ter sua fonte devidamente citada, no corpo do trabalho e referenciada ao final deste. Entretanto, esta prtica no impede que o autor contraponha seu ponto de vista ou concorde com o exposto por outro autor ou autores consultados, ao contrrio, esta a maneira adequada quando da elaborao do trabalho. As divises dos captulos (ou seces) e destes em subcaptulos (ou seces secundrias, tercirias etc.), ficam a critrio do autor, de acordo com a necessidade apresentada

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pelo trabalho visando sua melhor concatenao. Regra esta, que excetua a introduo e a concluso ou concluses, que no comportam subdivises.

Concluses As concluses devem abordar, de forma sinttica, o contedo pesquisado abordando informaes relevantes e apontando diretrizes presentes ou futuras relacionadas problemtica levantada.

Elementos ps-textuais
Normalmente contm as referncias, mas pode conter outros elementos que no se adaptem ao corpo do trabalho.

Citaes bibliogrficas
As citaes bibliogrficas, presentes na reviso de literatura, devem seguir a NBR 10520 de agosto de 2002, que recomenda o seguinte: Nas citaes, as chamadas pelo sobrenome do autor, pela instituio responsvel ou ttulo includo na sentena devem ser em letras maisculas e minsculas, e quando estiverem entre parnteses, devem ser em letras maisculas (ABNT, 2002). As citaes podem ser diretas ou indiretas. As citaes diretas so caracterizadas pela transcrio de parte do texto, transcrevendo-se as palavras do autor consultado; as citaes indiretas, no utilizam as palavras do autor, apenas a(s) idia(s). Sistema de chamada das citaes: Quanto ao sistema de chamada das citaes, recomendado seu emprego segundo os exemplos que seguem: a) quando o nome do autor estiver includo na sentena, indica-se somente o ano entre parnteses. O nome do autor grafado somente com a primeira letra em maiscula. Exemplo: Segundo Morais (1998) .... b) quando o nome do autor no estiver includo na sentena, indica-se o autor seguido da data de publicao, separados por vrgula e entre parnteses. O nome do autor grafado todo em maisculas. Exemplo: Em um estudo recente revelou-se que, nos bebs, a capacidade de realizar clculos numricos inata (MARTINEZ; ARGIBAY, 2007). At trs autores, a pontuao de separao entre os nomes dos autores deve ser de ponto e vrgula (;). Mais de trs autores, coloca-se o primeiro seguido da expresso latina et al.

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Exemplos: (MUNHOZ; SCAVONE, 2007, p. 26) (BRANDO et al. 2003) c) As citaes de diversos documentos de um mesmo autor, publicados em um mesmo ano, so distinguidas pelo acrscimo de letras minsculas do alfabeto, aps a data e sem espacejamentos. Exemplo: Resende (1979a), Resende (1979b)

d)

quando for necessrio especificar no texto a(s) pgina(s) ou seco(_es) da obra consultada, esta(s) dever(_o) seguir a data, separada(s) por vrgula e precedida(s) pelo designativo que a(s) caracteriza(m). Especifica-se a pgina, quando a transcrio do trecho em questo for ipsis literis, ou seja, tal como est escrito na obra original. So as chamadas citaes diretas.

Exemplos: Conforme Munhoz e Scavone (2007, p. 35) [...] o estresse pode ser definido, de maneira mais precisa, como qualquer mudana fisiolgica ou psicolgica que altera a homeostasia do organismo. ou [...] o estresse pode ser definido, de maneira mais precisa, como qualquer mudana fisiolgica ou psicolgica que altera a homeostasia do organismo. (MUNHOZ; SCAVONE, 2007, p. 35). e) Ainda sobre as citaes diretas:

- at trs linhas, devem estar contidas entre aspas duplas. Citaes no interior da citao, utilizam-se aspas simples; Exemplo: De acordo com o pensamento de Assis (2003, p. 36) Quando falamos em cincia, precisamos ter em mente onde ela acontece e a que interesse atende. Na perspectiva de um pas perifrico, cincia um luxo, exercida em universidades e em centros de pesquisa, e visa basicamente formao de pessoal. ou Quando falamos em cincia, precisamos ter em mente onde ela acontece e a que interesse atende. Na perspectiva de um pas perifrico, cincia um luxo, exercida em universidades e em centros de pesquisa, e visa basicamente formao de pessoal (ASSIS 2003, p. 36). mais de trs linhas, as citaes devem obedecer a um recuo de 4 cm da margem esquerda, espao simples, letra tamanho 11 e sem aspas. Exemplo: O estudo das funes cerebrais, porm, nem sempre possvel pela simples anlise estrutural. Surgem, ento, as neuroimagens

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funcionais, que procuram mostrar o crebro em ao. Alm de possibilitar o estudo de vrios processos cerebrais, o uso de neuroimagens funcionais tambm importante para o tratamento de pacientes, em especial os que sero submetidos a cirurgias. (ARAJO et al., 2003, p. 28). ou Segundo Arajo et al. (2003, p.28), O estudo das funes cerebrais, porm, nem sempre possvel pela simples anlise estrutural. Surgem, ento, as neuroimagens funcionais, que procuram mostrar o crebro em ao. Alm de possibilitar o estudo de vrios processos cerebrais, o uso de neuroimagens funcionais tambm importante para o tratamento de pacientes, em especial os que sero submetidos a cirurgias As citaes utilizadas no texto de uma obra, devem ter sua referncia completa, nas REFERNCIAS (Elemento ps-textual). As citaes de uma mesma obra, devem ser referenciadas de forma abreviada, utilizando as seguintes expresses latinas: a) apud citado por; Usa-se para citaes de citaes. Ex: (SILVA apud PESSOA, 1965) Segundo Silva (1993 apud ABREU, 1999, p.3) diz ser [...] Segundo Anastasi (1977 apud ARRAES; RUIZ , 1983) Segundo Cesarino (1990, apud SOUZA et al., 1994, p.482) Referncias utilizadas nos exemplos das citaes
ARAJO, Drulio Barros de et al. Imagens do crebro em ao. Cincia Hoje, So Paulo, v. 33, n. 197, p. 28-35, set. 2003. ASSIS, Jesus de Paula. Dialtica da fraude. Cincia Hoje, So Paulo, v. 32, n. 192, p. 32-39. abr. 2003. ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. Comit Brasileiro de Finanas, Bancos, Seguros, Comrcio, Administrao e Documentao. Informao e documentao Citaes em documentos - Apresentao : NBR 10520. Rio de Janeiro, 2002. 7 p. BRANDO, Cludia Valria Seullner et al. Linfedema secundrio em co: relato de caso. Nosso Clnico: Medicina Veterinria para animais de companhia, So Paulo, v. 6, n. 32, p. 24-26, mar./abr. 2003. MARTINEZ, Julia; ARGIBAY, Pablo. O aprendizado da matemtica e o crebro. Cincia Hoje, So Paulo, v. 41, n. 243, p. 27-31, nov. 2007. MUNHOZ, Carolina Demarchi; SCAVONE, Cristforo. Controle do estresse: arma no combate inflamao. Cincia Hoje, So Paulo, v. 40, n. 237, p. 24-29, maio 2007.

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