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ANLISES CLNICAS FUNDAMENTOS 1 ETAPA Elaborao : Professora Maria Celeste Diniz INTRODUO AO SETOR DE BIOQUMICA

A bioqumica o setor que dosa as substncias qumicas presentes nas amostras biolgicas. Vrias amostras podem ser utilizadas neste setor. Entre o sangue total, o plasma e o soro, o soro o mais utilizado por ser o que menos interfere nas dosagens bioqumicas, j que o plasma e o sangue total apresentam um aditivo qumico que o anticoagulante. Alm do soro, lquor e urina tambm podem ser utilizados como amostras nas dosagens. Quais os princpios bsicos destas determinaes? No incio, a fotometria utilizou o olho humano, para determinar a concentrao de substncias cromforas. De acordo com o senso comum, quanto mais cromforo (substncia que absorve luz) uma soluo tiver, mais escura ela ser.Para facilitar esta tarefa, uma vez que o nosso olho no um equipamento absoluto, usaram-se cores ou concentraes padres com os quais a soluo em anlise poderia ser comparada. A preciso deste mtodo, porm, no era adequada devido s propriedades da viso e tambm do componente subjetivo, que sempre que possvel deve ser eliminado na quantificao. O advento de equipamentos capazes de quantificar a luz permitiu uma determinao da concentrao dos constituintes dosados muito mais precisa. As dosagens de constituintes qumicos presentes nas amostras biolgicas realizada na maioria das vezes, atravs de mtodos denominados espectrofotocolorimtricos. Estes mtodos empregam reaes coradas, produto de reaes qumicas entre o constituinte a ser dosado e reagentes especficos. A fotometria usada nos laboratrios para se determinar a concentrao de vrios analitos presentes em amostras biolgicas. Normalmente aplica-se uma reao qumica especfica para determinado analito, para obter-se um produto colorido e estvel em soluo, com a capacidade de absorver ou transmitir energia radiante. Amostra biolgica + Reagente de cor especfico
(contm o analito a ser dosado)

Produto da reao corado

(cromgeno estvel)

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ANLISES CLNICAS FUNDAMENTOS 1 ETAPA Elaborao : Professora Maria Celeste Diniz INTRODUO AO SETOR DE BIOQUMICA

A cor do produto formado cresce com o aumento da concentrao do analito presente na amostra. Para determinar a concentrao de um analito em uma determinada amostra necessrio incidir sobre o produto da reao, uma radiao eletromagntica. Uma parte dessa energia ser absorvida pela soluo e a frao absorvida proporcional ao nmero de partculas do analito presente na soluo. Quais so os fundamentos bsicos da fotometria? O mtodo espectrofotocolorimtrico, como diz o nome, usa a luz (foto), para medir algo (mtrico), geralmente a concentrao de um cromforocomposto que tem capacidade de absorver a luz.Dois pesquisadores Lambert e Beer, concluram que havia uma relao entre a intensidade de energia transmitida e a concentrao da soluo corada. Quando a concentrao aumentava, a intensidade de energia absorvida ( Absorvncia ou Absorbncia) aumentava e a transmitida diminua ( transmitncia) . Qual o aparelho mais utilizado nestes procedimentos? O aparelho mais utilizado nas medidas fotomtricas o espectrofotmetro. Neste aparelho um dispositivo localiza o feixe especfico de luz sobre um prisma de quartzo, que decompe a luz nas cores do espectro. O feixe de luz monocromtico especfico a ser usado localizado por uma fenda seletora e enviado para a cubeta contendo a soluo em estudo. A luz transmitida medida por uma fotoclula que transforma a energia luminosa em eltrica para se lida. Qual o procedimento bsico de uma reao bioqumica? Uma dosagem bioqumica constituda de trs reaes: Padro: a amostra utilizada na reao qumica uma soluo reagente contendo o constituinte a ser dosado em concentrao conhecida . a referncia de concentrao para efetuarmos os clculos. Teste: contm a amostra biolgica onde se encontra o constituinte a ser dosado Branco: de acordo com a dosagem contm reagentes ou apenas gua destilada, no significa que seja incolor. Este branco contm todos os componentes do meio, exceto a substncia a ser medida. Utilizado para o ajuste do aparelho estabelecer o Zero de absorbncia ou o 100% de transmitncia Todas as trs reaes devem ser realizadas simultaneamente, seguindo a mesma metodologia. Clculos para a determinao da concentrao Obtida as leituras do padro e teste podemos efetuar os clculos, caso o aparelho em uso no fornea o resultado final. Para os clculos empregamos as leituras em absorbncia. Podemos ler em transmitncia ( valores de 0 a 100%) e atravs de uma tabela converter em absorbncia. Exemplo: determinao da concentrao de protenas em uma amostra Dados: concentrao do padro = 4 g/dl Absorbncia do padro = 0,20 Absorbncia do teste = 0,18

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1 Fator de Calibrao (FC) FC = Concentrao do padro Absorbncia do padro FC = 4 0,20 2 Concentrao do teste = absorbncia do teste x concentrao do padro absorbncia do padro = 20 Concentrao do Teste (CT) = FC

Absorbncia do teste CT = 20 x 0,18 = 3,6 g/dl

3 Curva de calibrao : a representao grfica dos valores de uma srie de padres. As curvas so feitas em papel milimetrado para leituras em absorbncia e em papel monolog quando as leituras forem em transmitncia.

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