BLOCO VIII- CURVAS LINEARES DE CALIBRAO

---------------------------------------------------------------------------------------------------------Os resultados de mtodos analticos instrumentais baseiam-se numa curva de calibrao na qual
uma medida quantitativa plotada como funo da concentrao de uma srie de padres. Devido ao
erro indeterminado, que sempre acompanha uma medida experimental, nem todos os pontos caem
exatamente sobre a linha, deste modo preciso que se derive a melhor linha reta representativa destes
pontos. A tcnica estatstica chamada de anlise de regresso fornece os meios para obter tal linha.A
tcnica dos mnimos quadrados fornece o modelo matemtico mais adequado e um teste ANOVA pode
fazer a validao deste modelo.
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Curva de calibrao.Derivar uma curva de calibrao linear significa determinar a
equao de reta que melhor se ajusta aos pontos experimentais. Estes pontos
experimentais so obtidos pela leitura de uma propriedade que varia em funo da
concentrao do analito. A propriedade medida chamamos de sinal do instrumento.
Este sinal pode ser: absorvncia, rea de pico cromatogrfico, milivolts de um eletrodo
e etc...Quando pretendemos construir uma curva de calibrao, geralmente seguimos
os procedimentos.
1 A obteno dos dados. Precisamos fazer, no mnimo, trs solues, isentas de
erros determinados em concentraes diferentes. Fazemos a leitura, em replicatas ou
no,par a obteno do sinal do instrumento. Para fins de discusso supomos que cinco
concentraes, do analito, em ppm sejam levadas a um instrumento de anlise que
acusam os seguintes sinais.
Concentrao do analito em ppm: 40 45 50 55 60
Sinal:
60 70 77 86 91
1-Coeficiente De Correlao Linear (r) um estimador do quanto os resultados
esto dependentes entre si numa correlao linear e dado pela equao 1.
(1)
{ Xi Xm) (Yi Ym)}
r = ---------------------------------------------- =
{ [ (X i Xm)2 ] [ (Yi Ym)2 ] }1/2

r = +1

r = -1

Quanto mais prximo da unidade melhor a correlao linear.

r=
0

VERA TRINDADE
59

Organize os seus dados para o clculo do valor de r.

Tabela 1: Dados para o coeficiente de correlao

xi
40

60

45

70

50

77

55

86

60

91

Xm= 50

(xi xm )

(xi xm)2

I
1

(X i Xm)2 = 250

Y1

(y1 ym)

Ym= 76,8

(y1 ym)2

(Yi Ym)2 = 614,8

(xi xm) (y1 ym)

{ (Xi Xm) (Yi Ym)} =

390

Plote dos dados originais mostram que as variveis esto relacionadas segundo uma
reta, porm os dados no se dispem numa linha perfeita. H pontos com desvios.
preciso encontrar um modelo, isto , uma equao de reta que diminua estes desvios.
Para isto preciso que se calcule os parmetro da reta que melhor se ajustem aos
pontos experimentais. Calcular os parmetros significa calcular os valores dos
intercepto e da inclinao. Intercepto o ponto que corta o eixo y; representamos por
b0. O valor de b0 representa o sinal do branco. A inclinao, representado por b 1 est
associado a sensibilidade do mtodo.
Voc pode verificar, usando uma rgua,
que no possvel traar uma reta que
passe ao mesmo tempo por todos os
pontos desta figura. Qualquer reta que
decidirmos escolher deixar resduos em
relao algumas observao. Qualquer
linha escolhida sobre os pontos muda a
inclinao da reta.

2 Determinando os parmetros da reta : y = b0 + b1xi ; onde y o sinal e xi a

concentrao.

VERA TRINDADE
60

Tabela 2 de dados para a determinao dos parmetros b0 e b1.

Tubos
1
2
3
4
5
n=5

ppm (xi)
40
45
50
55
60
xi =
(xi)2 =

CURVA DE CALIBRAO
Abs. (yi)
Xi 2
60
70
77
86
91
(yi)=
Xi2 =

xiyi

xi yi =

Aplicando os dados na equao b1 = 1,56

(2)
xiyi -

( xI ) ( y1)
----------------------------------

n
b1 = -------------------------------------( xI )2
2
xI - ----------------------n

------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Determinando o valor de b0 . Para isto voc determina a mdia xm e a mdia ym e

aplica ambas as mdias na equao de reta obtida.
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

(3) A equao de regresso: y = -1,20 + 1,56 X

4 Aplicando a equao. Qual o valor de x para um valor de sinal de 74?
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

VERA TRINDADE
61

Voc pode determinar os parmetros pela calculadora.

1- Colocar na funo REG ( regresso).
2- Inserir os pares (xi , yi ). Coloca o par e pressiona M+. Insere todos os pares, um aps o
outro.Na segunda funo da calculadora buscar os valores A (b0) e B (b1)

5 Discutindo o Modelo. Entre os dados obtidos experimentalmente e o modelo

proposto sempre h uma diferena, o qual denominamos de desvio, erro ou resduo
e representamos por ei.
(4) ei = yi - onde yi o valor medido ( ou observado ) e o valor previsto ou
estimado pelo modelo. Para obter o valor estimado () basta voc substituir, na
equao cada valor xi e obter o valor estimado.
(5) i = -1,20 + 1,56 Xi

xi

yi

ei

40
45
50
55
60

Os desvios so mostrados exagerados para melhor visualizao.

Um resduo uma diferena entre um valor
observado e a sua estimativa de acordo com o
modelo : e1 = yi
Os resduos podem ser positivos ou negativos,
conforme os rendimentos observados estejam
acima ou abaixo da reta escolhida. A melhor reta,
ser sem dvida a que passar mais perto dos
pontos experimentais, j que impossvel passar
exatamente sobre todos eles.

Em termos prticos, passar mais perto

significa minimizar a distncia global dos
pontos em relao reta, isto , minimizar o
comprimento total dos segmentos verticais
na figura 2. A maneira tradicional de
conseguirmos esse resultado localizar a
reta de tal maneira que a soma dos
quadrados dos resduos seja mnima, razo
pela qual este mtodo chamado de ajuste

VERA TRINDADE

62

por mnimos quadrados. tambm conhecido, por razes histricas, como anlise de
regresso. Como os valores yi j so conhecidos de antemo, os resduos iro
depender apenas dos valores que escolhemos para b o e b1. No ajuste por mnimos
quadrados, esses valores so aqueles que tornam o somatrio ei2 o menor. possvel.
Os resduos produzidos pelo modelo. Os valores previstos ou estimado pela equao
deixam, em relao aos rendimentos efetivamente observados os resduos segundo a
equao (5)
yi
60
70
77
86
91

i = -1,20 + 1,56 xi.

40
45
50
55
60

ei = yi -
-1,2
1
0,2
1,4
-1,4

6 Validando o modelo .O exame dos resduos fundamental, para que possamos

avaliar a qualidade do ajuste de qualquer modelo. Em primeiro lugar, os resduos
devem ser pequenos. Se um determinado modelo deixa resduos considerveis, ele
um modelo ruim. No modelo ideal, todas as previses coincidiriam exatamente com as
respostas observadas, e no haveria resduo nenhum. O mtodo mais usado para se
avaliar a qualidade do ajuste de um modelo a anlise de varincia. Para fazer a
anlise de varincia de um modelo comeamos com uma decomposio algbrica dos
desvios da respostas observadas em relao resposta mdia global. Como mostra a
figura abaixo, o desvio de uma resposta individual em relao mdia de todas as
respostas observadas, ( yi - ), pode ser decomposta em duas parcelas
(6) ( yi - ) = ( i - ) + ( yi )
A primeira parcela ( - ), representa o desvio da previso feita pelo modelo para o
ponto em questo, i, em relao a mdia geral, . A segunda parcela a diferena
entre o valor observado e o valor previsto. Num modelo bem ajustado essa diferena
deve ser bem pequena. Isto equivale a dizer, em termos da equao 6, que o desvio ( yi
- ) deve ser aproximadamente Igual ao desvio ( - ). Dizer que os desvios dos valores
previstos pelo modelo so semelhantes aos desvios dos valores observados ( ambos
em relao a mdia ) outra maneira de dizer que as previses esto em boa
concordncia com os valores medidos.
O plote ao lado mostra a decomposio
do desvio de uma observao em
relao a mdia global (yi - ), na soma
das parcelas ( i - ) + ( yi ).
O prximo passo expressar esta
comparao de desvios em termos
quantitativos seguindo a equao
seguinte.

VERA TRINDADE

63

(7) ( yi - )2 = ( i - )2 +( yi )2
Estas somas de quadrados de desvios costumam ser chamadas de somas quadrticas
(SQ).Usando estes termos a equao 6 poderia assim ser mencionada: a soma
quadrtica em torno da mdia = SQ devido a regresso + SQ residual
Numa notao mais compacta, podemos escrever
(8) SQT = SQRegresso + SQresduos
A equao das somas quadrticas mostram que uma parte da variao total das
observaes yi em torno da mdia descrita pela equao de regresso e o restante
fica por conta dos resduos. Evidentemente, quanto maior for a frao descritas pela
regresso, melhor ser o ajuste do modelo, o que podemos quantificar por meio da
razo R2.
Tabela 3. Dados para o coeficiente de determinao R 2
xi
= -1,2 + 1,56 X
( i - )2

( yi - )2
*(valor feito na tabela 1)

= 76,8

1
2
3
4
5

40
45
50
55
60

61,2
69,0
76,8
84,6
92,4

SQR
2
(9) R = -------------------- =
SQT

(61,2 76,8)2 = 243,36

(60 76,8)2 = 282,24

( i - )2 =608,40

( yi - )2 = 614,8

( i - )2
608,40
------------------- 0,9896 ------------------ = 0,9896
( yi - )2
614,8

R2 o chamado coeficiente de determinao do modelo. O valor mximo de R2

1 e s ocorrer se no houver resduo nenhum e portanto toda a variao em torno da
mdia ser explicada pela regresso. Quanto mais perto de 1 estiver o valor de R 2,
melhor ter sido o ajuste do modelo s respostas observadas.
Cada parcela da equao (9) est associada a graus de liberdade
Para o caso explicado, com apenas dois parmetros a relao entre os graus de
liberdade dado por
(10) ( n 1 ) = 1
(SQT)

= (SQR) +

(n2)
(SQr)

VERA TRINDADE
64

Tabela de resumo da anlise de varincia para regresso linear.

Fonte
de Soma Quadrtica
variao
Regresso
( i - )2
Resduos
( yi )2
Total
( yi - )2

Graus
liberdade
1
n2
n1

Mdias quadrticas
MQRregresso = SQRregressao /1
MQresduo = SQresduo / (n 2)

Tabela do resultado da anlise de varincia dos dados operacionais da tabela 1.

Fonte
de Soma Quadrtica
Graus
Mdias quadrticas
variao
liberdade
Regresso
608,4
1
608,4
Resduos
6,4
3
6,4 3 = 2,13 ( s2)
Total
614.8
4

A soma quadrtica residual, SQr, representa a parte da variao das respostas em

torno da mdia que o modelo no consegue reproduzir . Quando dividimos pelos
graus de liberdade da SQr, obtemos a mdia quadrtica residual, que uma
estimativa, com n 2 graus de liberdade, da varincia dos pontos em torno da
regresso, isto , em torno do modelo ajustado. Essa estimativa pode ser interpretada
como uma medida aproximada do erro mdio quadrtico que cometeremos se usar
a equao de regresso para prever a resposta yi correspondente a um valor Xi. No
nosso exemplo, temos s2 =2,13 com trs graus de liberdade.
Aplicando um teste F a nvel de 95% possvel verificar se SQR regresso SQT, isto se
os resduos ( yi - ) igual aos resduos ( i - ). Este teste chega a mesma concluso
em funo do valor de R2 uma vez que Fcal < Ftab.
7 Determinando as incertezas dos parmetros da reta.
As incertezas so obtidas pelos somatrios.
(xi)2
(yi)2
(11) Sxx = xi2 - ----------- (12) Syy = yi2 - ----------N
N

yi
(13) Sxy = xiyi - xi ----------N

Busque os valores dos somatrios na tabela 2 da pgina 3.

Primeiro voc calcula a incerteza associada a regresso (Sy)
(14) Desvio padro da regresso (sy)

Sy = [ (Syy - b1Sxx) / (n-2)]1/2

A estimativa do desvio padro Sy o desvio padro para y quando os desvios so

medidos no em relao a mdia de y(como comum ), mas a partir da linha reta que
resulta da previso dos mnimos quadrados. O valor de Sy est relacionado a soma dos
quadrados dos resduos conforme mostra a equao.

VERA TRINDADE

65

(15) Sy =

[ yi - ( b0 + b1xi)] 2

-------------------------------------- onde [ yi - ( b0 + b1xi)] = ( yi - i)2 que a soma

( N 2)
dos quadrados dos resduos visto na validao.

Nesta equao , o grau de liberdade de N-2, uma vez que 1 grau de liberdade perdido no
clculo de b1 e outro na determinao de b0. A estimativa do desvio padro da regresso
frequentemente chamado de erro padro da estimativa
----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Com o valor da incerteza da regresso calculamos a incerteza da inclinao.

(15) Desvio da inclinao (b1) Sb1 = [ (Sy2 / Sxx)1/2
----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

(16) Desvio do intercepto (b0) Sb0 = Sy [ ( xi2 ) / N xi2 ( xi)2 ]1/2

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

(17) Equao completa. (y sy) = (b0 sb0) + (b1 sb1) ( x s)

Onde : Sy a incerteza associada ao valor do sinal na equao de regresso.
Sb0 a incerteza associada ao valor do branco,
Sb1 a incerteza associada a inclinao.
Sx a incerteza associada a resposta.
A equao completa: -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

A incerteza associada a resposta obtida pela combinao das varincias que esto
associadas aos outros componentes da equao.
(y sy) - (b0 sb0)
(18) ( x sx) = -----------------------------(b1 sb1)
66

VERA TRINDADE

8 Reproduza a equao 18 com os seus respectivos valores.

---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Como trata-se de multiplicao / diviso a incerteza absoluta da resposta dada por:
(19) Sx = (Sy /y)2 + (Sb0/ b0)2 + (Sb1/ b1)2

. ( X)

A incerteza absoluta associada a concentrao do analito obtida pela raiz quadrada

das somas das varincias relativas multiplicada pelo valor da concentrao obtida (x)
9 Aplicando a equao. Determine a incerteza associada a resposta x para o sinal
74.
-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

10 Melhorando a incerteza da resposta.

Sy
(20) Sc = ----b1

1
1
(m )2
------- + -------- + --------------M
N
( b1)2 . Sxx

A equao 20 permite calcular a estimativa do desvio padro em relao mdia do valor

estimado() de um conjunto de M replicatas de anlise de amostras desconhecidas
quando uma curva analtica contm N pontos. Lembre-se que o valor mdio de y
pontos da calibrao. Esta equao apenas uma aproximao e condidera que a
inclinao e o intercepto so parmetros independentes, o que no rigorosamente
correto.

VERA TRINDADE
67

11 Aplicando a equao. Supondo que os nossos dados originais tenham sido obtido
no com cinco pontos mas com oitos pontos, onde cada ponto foi medido trs vezes.
Qual a incerteza da calibrao?
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------12 Use a incerteza da equao 20 e aplique como incerteza do sinal.Determine a
incerteza final do sinal 74.
-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

FAA VOC MESMO

Os dados abaixo referem-se a curva de calibrao do mtodo cromatogrfico para a
determinao de isooctano numa mistura de hidrocarbonetos.
Percentagem molar de rea do pico, yi
isooctano, xi
0,352
1,09
0,803
1,78
1,08
2,60
1,38
3,03
1,75
4,01
Desenvolva neste exemplo tudo que foi trabalhado no exemplo fictcio.

VERA TRINDADE
68