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Determinao de cianotoxinas em gua

Introduo

As cianobactrias so microrganismos autotrficos, a fotossntese seu principal meio para obteno de energia e manuteno metablica. Seus processos vitais requerem somente gua, dixido de carbono, substncias inorgnicas e luz.

Os motivos principais para o aumento da incidncia de cianobactrias so:

O aumento anormal da quantidade de componentes nitrogenados e fosfatados na gua. As cianobactrias tm trs elementos que limitam o seu crescimento so, o Nitrognio, o Oxignio e o Fsforo.

Alm disto, nos meios anaerbicos a disponibilidade das formas inorgnicas de nitrognio e fsforo aumentam, facilitando as grandes infestaes.

Imagem 1

Cianotoxina so toxinas produzidas por algumas espcies de cianobactrias em gua doce ou salgada . So classficas como neurotoxina, hepatoxionas , citotoxinas , dermatoxinas .

Poluio guas Florao dasda gua Este fenmeno causado pelo uso agrcola de fertilizantes , que contem P e N que ao atingir um curso de gua nutrem as plantas aquticas. Com o aumento destes nutrientes, a sua populao tende a crescer descontroladamente, diminuindo a transparncia da gua e com isso causando a diminuio de luz solar

Imagen 2

Eutrofizao A eutrofizao ou eutroficao um fenmeno causado pelo excesso de nutrientes (normalmente causado pela descarga de agrcolas, urbanos ou industriais) num efluente corpo de gua mais ou menos fechado.

Imagen 3

Hipxia O aumento de organismos consumidores de oxignio pode levar a um fenmeno de baixa concentrao de Oxignio que ocorre em ambientes aquticos. Ocorre quando a concentrao de oxignio dissolvido (OD) encontra-se a nveis reduzidos, ao ponto de causar danos nos organismos aquticos presentes no ecossitema

Metodos de analises
As coletas foram feitas em frascos de vidro mbar para evitar a degradao das toxinas e refrigeradas at serem analisadas. Algumas amostras foram filtradas por extrao em fase slida (EFS), e outras tiveram os extratos slidos congelados at serem analisadas em CLAE/DAD.

MICROCISTINA As analises de microcistina, foram efetuadas em um CLAE/DAD, precedidas de preparao da amostra para introduo no cromatgrafo, segundo as seguintes etapas : extrao, centrifugao, limpeza e concentrao. A amostra foi purificada fazendo-se passar atravs de uma coluna de EFS e de slica-gel para limpeza, sendo posteriormente eluda com fraes de gua e metanol. Em seguida a amostra foi introduzida no cromatgrafo.

Esta tcnica combina a identificao do espectro de absoro e tempo de reteno caracterstico da microcistina (LR) utilizada como padro. Em uma tpica anlise por CLAE utiliza-se uma coluna de fase reversa C -18 Octadecil silano (ODS) para a separao dos picos cromatogrficos conseguidos atravs de um gradiente isocrtico, onde a composio das

CILINDROSPERMOPSINA Diversos mtodos analticos, principalmente com o uso da CLAE / DAD, foram desenvolvidos com variados graus de eficincia para identificao e quantificao de cilindrospermopsina. Para a extrao da hepatotoxina do meio intracelular, uma das formas utilizados para a sua liberao a imerso do material particulado proveniente das clulas em uma soluo de cido actico 5 %, embora alguns autores relatem melhores resultados com o uso de outros solventes como gua e metanol .

Para obter sucesso na anlise de cilindrospermopsina por EFS , o cartucho adquirido comercialmente deve ser completado com mais fase slida C-18(em torno de 2 cm). A seguir sero relatadas as etapas que devem ser seguidas para concentrao de cilindrospermopsina em gua por EFS.

Etapa 1 : Adicionando a amostra ; Condicionar a coluna com 20 mL de metanol a 100%;

Lavar com 20 mL de gua ultrapura,100%; No deixar a coluna secar; Passar a amostra pelo cartuxo de EFS atravs de um sistema de vcuo, (no exceder o fluxo de 2 mL/mim). Etapa 2 :Eluindo a cilindrospermopsina Eluir com 10 mL de gua a 100%; Eluir no mesmo frasco com uma soluo de 10 mL de metanol 100% e TFA 0.1%(v/v).

Congelar e liofilizar os solventes e re-suspender em 1 a 2 mL de gua ultrapura; Injetar no cromatgrafo. A deteco mxima conseguida em um DAD caracterizado pela absorbncia em 262nm de comprimento de onda, usando-se a faixa do espectro de absoro de 195 a 300 nm. O resultado deve ser comparado com o espectro do padro puro de cilindrospermopsina.

Antes de iniciar a injeo do padro e das amostras, deve ser injetado por trs vezes, gua ultrapura para se observar a estabilizao da linha de base. A soluo de metanol e cido trifluoractico teve seu pH observado em 1,23 e deve ser corrigido para esse valor, se necessrio, com cido actico.

bibliografia
http://pt.wikipedia.org/wiki/Polui%C3%A7%C3% A3o_da_%C3%A1gua http://www.bvsde.paho.org/bvsacd/abes23/I168.pdf http://www.enq.ufsc.br/labs/probio/disc_eng_bio q/trabalhos_pos2004/microorganismos/CIANOB ACTERIAS.html