Reaccin en Cadena Polimerasa -EndocrinologaDr.

Elier Pedroza Salazar

Equipo2 Itzel Armendriz Torres Gerardo Delgado Rivera Nicols Snchez Guerrero Vianey Enrquez Gonzlez Nadia Barbosa Coronado

Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR) es una tcnica de biologa molecular desarrollada en 1986 por Kary Mullis

Objetivo: Obtener un gran nmero de copias de un fragmento de ADN particular, partiendo de un mnimo Esta tcnica se fundamenta en la propiedad natural de los ADN polimerasas para replicar hebras de ADN, para lo cual se emplean: 1.- Ciclos de altas y bajas temperaturas alternadas para separar las hebras de ADN recin formadas entre s tras cada fase de replicacin 2.- Dejar que vuelvan a unirse las hebras de ADN para que vuelvan Inicio a duplicarlas. Este paso consiste en llevar la reaccin hasta una temperatura de 9496 C ( 98 C si se est usando una polimerasa termoestable extrema), que se mantiene durante 1-9 minutos. Esto slo es necesario para ADN polimerasas que requieran activacin por calor.

1.- Desnaturalizacin: Se separan las dos cadenas de las cuales est constituido, el calentamiento (94-95 C) de la muestra es la forma ms habitual, depende de la proporcin de G+C que tenga la cadena, como tambin del largo de la misma.

2.- Alineamiento o unin del cebador : Se producir la hibridacin del cebador, es decir, el cebador se unir a su secuencia complementaria en el ADN molde. Bajando la temperatura a 40-68 C durante 2040 segundos 3.- Extensin o elongacin de la cadena: La polimerasa sintetiza una nueva hebra de ADN complementaria a la hebra molde aadiendo los dNTP complementarios en direccin 5' 3', uniendo el grupo 5'-fosfato de los dNTP con el grupo 3'hidroxilo del final de la hebra de ADN creciente (la cual se extiende).

Elongacin final Etapa nica que se lleva a cabo a una temperatura de 70-74 C durante 5-15 minutos tras el ltimo ciclo de PCR. Con ella se asegura que cualquier ADN de cadena simple restante sea totalmente ampliado. Conservacin Este es un paso que se lleva a cabo a 4-15 C durante un tiempo indefinido para conservar la reaccin a corto plazo. La PCR normalmente se realiza con un volumen de reaccin de 15-100 L, en pequeos tubos de 0.2-0.5 mL que se colocan en el termociclador.

Aplicaciones en Medicina En medicina, la PCR se emplea fundamentalmente como herramienta de diagnosis (Coleman y Tsongalis, 2006): 1. Permite el genotipar la especie o especies que provocan un determinado cuadro infeccioso. 2. La PCR tambin se puede usar en revisiones mdicas rutinarias, como en los servicios de donantes de sangre, para test de rutina.