BILIRRUBINA TOTAL (DMSO)

Reactivo lquido para la determinacin fotomtrica de Bilirrubina Total en suero o plasma.

Para uso en el diagnstico in Vitro. SIGNIFICANCIA CLINICA La bilirrubina es producto de la degradacin de la hemoglobina en el sistema retculo endotelial, la cual es transportada al hgado unida a albmina. Esta bilirrubina, conocida como bilirrubina indirecta o libre, es insoluble en agua y es conjugada en el hgado con cido glucurnico, siendo excretada hacia el intestino por va biliar, donde es metabolizada por la flora bacteriana. La bilirrubina total corresponde a la suma de la bilirrubina indirecta o libre, y la bilirrubina conjugada o directa. Un aumento en la bilirrubina total es producto de una obstruccin en la va biliar; hepatitis; cirrosis; enfermedad hemoltica y algunas deficiencias enzimticas hereditarias. La bilirrubina indirecta o libre, se encuentra elevada por causas pre-hepticas, tales como enfermedades hemolticas, o bien problemas metablicos intra-hepticos que involucran el proceso de conjugacin. En neonatos es importante el control de la bilirrubinemia, ya que la bilirrubina indirecta o libre es neurotxica. FUNDAMENTOS DEL METODO La mayora de los mtodos utilizados para la determinacin de bilirrubina utilizan cido sulfanlico diazotizado, formndose azobilirrubina coloreada. En medio acuoso slo reacciona la bilirrubina conjugada o directa; para medir la bilirrubina total es necesario la incorporacin de un acelerador, inicialmente se utiliz metanol (MalloyEvelyn), y posteriormente benzoato de sodio (Jendrassic-Grof). El mtodo VALTEK se basa en la modificacin propuesta por Walters y Gerarde, en la cual se utiliza como acelerador DMSO. La azobilirrubina formada es medida fotomtricamente entre 540 y 600 nm, siendo la intensidad del color formado directamente proporcional a la cantidad de bilirrubina directa o total presente en la muestra. REACTIVOS Muestra Conservados entre 2 y 8C. y protegidos de la luz, estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. Preparacin reactivo de trabajo: Agregar al momento de utilizar, por cada 1 ml. de reactivo DMSO, 1 gota de reactivo nitrito de sodio (o 0.05 ml.), mezclar. Estable por 24 horas protegido de la luz. Composicin reactivo de trabajo: Acido sulfanlico HCl DMSO Nitrito de sodio MUESTRA Utilizar suero o plasma libre de hemlisis. Realizar el ensayo dentro de un plazo no mayor a las 2 horas, en caso contrario refrigerar la muestra entre 2 y 8C., o bien congelar a -20C. para perodos ms largos. Mantener protegidas de la luz. Calibrador (ml) (ml) MATERIAL NECESARIO NO INCLUIDO Espectrofotmetro manual o automtico o fotocolormetro de filtros con cubeta termoestable, capaz de medir absorbancia a 560 nm (rango 540 a 600 nm), bao termoregulado, cronmetro, pipetas, calibrador y sueros controles. TECNICA Llevar el reactivo a la temperatura que se realizar el ensayo. Las pipetas a utilizar deben estar limpias y libres de residuos para no contaminar el reactivo. TECNICA MUESTRA NORMAL Desconocido Muestra Calibrador (ml) (ml) 0.10 ---1.00 ---Calibrador ---0.10 1.00 ---Blanco reactivo ------1.00 0.10

Reactivo trabajo (ml) Agua destilada (ml)

Mezclar e incubar 10 minutos a temperatura ambiente (20 a 25C.) o 6 minutos a 37 C., llevando a cero el instrumento con el blanco reactivo. El color resultante es estable por 30 minutos.

Abs. = (Abs. Muestra) (Abs. Blanco)

TECNICA MUESTRA RECIEN NACIDO Desconocido 0.02 ---1.00 ---Calibrador ---0.02 1.00 ---Blanco reactivo ------1.00 0.02

Reactivo trabajo (ml) Agua destilada (ml)

Mezclar e incubar 10 minutos a temperatura ambiente (20 a 25C.) o 6 minutos a 37 C., llevando a cero el instrumento con el blanco reactivo. El color resultante es estable por 30 minutos.

30 mM 165 mM 5000 mM 0.50 mM

Abs. = (Abs. Muestra) (Abs. Blanco)

CALIBRACION En la calibracin se recomienda utilizar calibrador srico VALTROLC (cdigo 210-130), proceder de igual forma que con las muestras. Se recomienda recalibrar en cualquier momento que se evidencie alguno de estos acontecimientos: El lote de reactivo cambia Se realiza un mantenimiento preventivo del equipo Los valores de control han cambiado o se encuentran fuera de escala.

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CALCULOS Para obtener las concentraciones de bilirrubina total, debe realizarse una curva de calibracin o bien utilizar un factor a partir de un standard o calibrador de concentracin conocida, con el cual se procede en la forma descrita para las muestras en la tcnica de bilirrubina total. El factor o la curva obtenida con el reactivo para determinacin de bilirrubina total son vlidos para la determinacin de bilirrubina directa, se recomienda verificar su validez con cada nuevo kit de bilirrubina total. Concentracin Standard o Calibrador Abs.Standard o Calibrador Concentracin muestra (mg/dL) = FACTOR x Abs. Muestra CONTROL DE CALIDAD Es conveniente analizar junto con las muestras sueros controles valorados para Bilirrubina Total por este mtodo. Se recomienda la utilizacin de los sueros controles VALTROL-N (cdigo 210-100) y VALTROL-P (cdigo 210-110). Si los valores obtenidos para los controles se encuentran fuera del rango de tolerancia, revisar el instrumento, el reactivo y el calibrador. Cada laboratorio debe disponer de su propio Control de Calidad y establecer las correcciones necesarias en caso de que no se cumpla con las tolerancias permitidas para los controles. FACTOR = -Exactitud: Los reactivos VALTEK no muestran diferencias sistemticas significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales. Los detalles del estudio comparativo estn disponibles bajo solicitud. -Repetibilidad intraserie: n = 20 Nivel Normal Patolgico Media (mg/dL) 1,5 6,12 C.V. 0,87% 1,10%

-Reproducibilidad interserie: n = 20 Nivel Normal Patolgico Media (mg/dL) 0,89 2,1 C.V. 1,03% 1,18%

Estos datos han sido obtenidos utilizando un autoanalizador MINDRAY de la serie BS. Los resultados pueden variar al cambiar de instrumento o al realizar el procedimiento manualmente. -Certificado de Conformidad y Trazabilidad disponible a solicitud RANGOS DE REFERENCIA Cada laboratorio debe establecer sus propios rangos de referencia en funcin de la poblacin de pacientes. Los rangos de referencia que se enumeran a continuacin estn tomados de la bibliografa existente. Bilirrubina Total Adulto : hasta 1.2 mg/dL Bilirrubina Total Recin Nacido : hasta 13.3 mg/dL

ADVERTENCIAS Y MEDIDAS DE PRECAUCION: Sueros ictricos: Debe emplearse la tcnica descrita para recin nacidos. Es recomendable el realizar un blanco para cada muestra, en tal caso se utiliza solamente reactivo DMSO. Proteger las muestras de la luz directa. Consultar en nuestra pgina WEB la ficha de seguridad de este reactivo y observar todas las medidas de precaucin necesarias para la manipulacin y eliminacin de residuos. Para tcnica en autoanalizadores se recomienda utilizar kit especfico (cdigo 300050).

BIBLIOGRAFIA 1. Malloy H.T. & Evelyn K.A., J.Biol.Chem.119(481),1937. 2. Jendrassic L. & Grof P., Biochem Z. 291(81),1938. 3. Walters M. I. & Gerarde H. W., Microchem J.15(231)1970. 4. Young D.S., Effects of drugs on clinical laboratory tests, 4th ed. AACC Press, 1995.

ESPECIFICACIONES DE DESEMPEO: -Linealidad: hasta 20 mg/dL -Lmite de deteccin: 0.03 mg/dL -Interferencias: Hemoglobina sobre 1,0gr/dl y la lipemia (triglicridos sobre 500 mg/dL) podran interferir en la tcnica. Otros medicamentos y sustancias podran interferir (4). REV N 1