Universidad del Quindo, Facultad de Ciencias Bsicas y Tecnologas Programa de Qumica. Laboratorio de Fotoqumica II. CROMATOGRAFA EN COLUMNA (C.C.

Natalia Restrepo Mesa Cd. 1094900913 M.Sc. Fernando Agudelo Aguirre RESUMEN En esta Prctica se ha realizado la separacin de una mezcla equivalente de dos colorantes. Conocidos por su nombre comn son el cristal violeta y el segundo naranja de metilo. Colorantes polares pero el primero mucho ms que el otro. Se procedi realizndose dos eluciones aumentando la polaridad en la segunda elucin. En la primera elucin se uso etanol y el colorante que sali primero fue el naranja de metilo como era de esperarse. Luego se uso una mezcla de etanol/dietilamina 9:1 como eluyente pero esta vez el desarrollo de la cromatografa fue lento. La slice gel retena el cristal violeta por tanto la recoleccin de este fue tediosa. OBJETIVOS Conocer la tcnica de cromatografa en columna, sus caractersticas y los factores que en ella intervienen. Utilizar la cromatografa en columna para la separacin de mezclas de compuestos orgnicos. Controlar por cromatografa en capa fina la separacin de una mezcla de compuestos por cromatografa en columna. segn los criterios que se usan para hacer los anlisis, pero todas consisten de una fase estacionaria y una mvil. En la cromatografa de columna las molculas de una mezcla son separadas en base a la afinidad de las molculas por la fase estacionaria o por la fase mvil. Si una molcula A tiene ms afinidad por la fase estacionaria que la B, B bajar ms rpido que A. La cromatografa en columna se emplea para la separacin de mezclas o purificacin de sustancias a escala preparativa. Como fase estacionaria se usa, generalmente, gel de slice o almina dentro de una columna. La eleccin del disolvente es crucial para una buena separacin. Dicho disolvente pasa a travs de la columna por efecto de la gravedad o bien por aplicacin de presin (cromatografa flash). La columna se prepara mezclando el soporte con disolvente y se rellena la columna poniendo en el fondo de sta un poco de algodn o lana de vidrio, para evitar que la slica o la almina queden retenidas en la columna y que el disolvente se engrasada hasta el nivel

INTRODUCCIN Las cromatografas son un grupo de tcnicas de separacin selectiva de molculas, en las que los componentes de una mezcla compleja de componentes pueden ser identificados y/o purificados. Existen varios tipos de cromatografas,

Universidad del Quindo, Facultad de Ciencias Bsicas y Tecnologas Programa de Qumica. Laboratorio de Fotoqumica II. del soporte. A continuacin se introduce la muestra por la parte superior de la columna y se eluye con el disolvente elegido, recogindose por lo general en tubos de ensayo. Una columna de cromatografa es un tubo de vidrio relleno con una sustancia slida de propiedades adsorbentes constituida por pequeas partculas: gel de slice y almina son las ms usadas. Este relleno es lo que se conoce en cromatografa como la fase estacionaria. A travs de la columna se har pasar una corriente de un disolvente o mezcla de disolventes denominada eluyente y/o fase mvil. La mezcla de compuestos a separar se disuelve en una pequea cantidad de disolvente y se coloca sobre el adsorbente, en la parte superior de la columna, quedando adsorbida por el mismo. A continuacin se pasa un flujo de eluyente a travs de la columna. Los compuestos constituyentes de la mezcla son arrastrados por el eluyente a su paso, hacindoles avanzar a lo largo de la columna. Sin embargo, no todos los compuestos avanzan a la misma velocidad, y esta es precisamente la clave de la cromatografa. Algunos compuestos se ven ms fuertemente retenidos por el adsorbente (fase estacionaria) y por lo tanto avanzarn ms despacio. Por el contrario, otros apenas son retenidos y avanzarn a mayor velocidad. (eluyente). Se procedi a llenar la columna con el adsorbente sin dejarlo secar con el eluyente. Se abri la llave, se golpeo suavemente las paredes de la columna mientras duraba la sedimentacin del adsorbente para que este se compacte adecuadamente y se procuro que no se formaran burbujas. El etanol que se fue recogiendo de la columna se incorporo al vaso donde se prepar la suspensin adsorbenteeluyente para as recuperar la gel de slice que hubiera podido quedar y se transvasa todo de nuevo a la columna. Se dejo que el eluyente bajara hasta una altura sobre el adsorbente de 1-2 mm, se cerro la llave de la columna y con una pipeta se aadi cuidadosamente 1 mL de una solucin preparada de cristal violeta y naranja de metilo (1:1). Se abri la llave de la columna para que esta disolucin quedara inmersa en la gel de slice y se volvi a cerrar cuando la disolucin de colorantes alcanzo una altura de 1 mm sobre el adsorbente. Luego se comenz la elucin con etanol, aadindolo cada vez que este se agotaba, todo hasta que se recogi el primer colorante. Despus se utilizo una mezcla de disolventes: etanol/dietilamina en proporcin 9:1 como eluyente para el segundo colorante. Las eluciones se hicieron recogindose la solucin desarrollada cada 6mL en tubos de ensayo desde el comienzo de la primera elucin.

MTODOLOGIA Con una bureta de 25mL se realizo un montaje de cromatografa en columna flash (Fig. 1). Introduciendo un pequeo copo de algodn en su extremo inferior y pasando aire a presin para acelerar el proceso. Primero se preparo una suspensin con 5g de gel de slice 0,2 mm (adsorbente) y 50 mL de etanol

Fig. 1. montaje de cromatografa en columna flash.

Universidad del Quindo, Facultad de Ciencias Bsicas y Tecnologas Programa de Qumica. Laboratorio de Fotoqumica II. RESULTADOS Y DISCUSIN En una bureta de 25mL se realizo un montaje de cromatografa en columna flash (Fig. 2). Introduciendo un pequeo copo de algodn en su extremo inferior y usando aire a presin para acelerar el proceso. Primero se preparo una suspensin con 5g de gel de slice 0,2 mm (adsorbente) y 50 mL de etanol (eluyente). Se procedi a llenar la columna con el adsorbente sin dejarlo secar con el eluyente. Se abri la llave, se golpeo suavemente las paredes de la columna mientras duraba la sedimentacin del adsorbente para que este se compacte adecuadamente y se procuro que no se formaran burbujas. El etanol que se fue recogiendo de la columna se incorporo al vaso donde se prepar la suspensin adsorbenteeluyente para as recuperar la gel de slice que hubiera podido quedar y se transvasa todo de nuevo a la columna. Se dejo que el eluyente bajara hasta una altura sobre el adsorbente de 1-2 mm, se cerro la llave de la columna y con una pipeta se aadi cuidadosamente 1 mL de una solucin preparada de cristal violeta y naranja de metilo (1:1). Se abri la llave de la columna para que esta disolucin quedara inmersa en la gel de slice y se volvi a cerrar cuando la disolucin de colorantes alcanzo una altura de 1 mm sobre el adsorbente. Luego se comenz la elucin con etanol, aadindolo cada vez que este se agotaba, todo hasta que se recogi el primer colorante. Despus se utilizo una mezcla de disolventes: etanol/dietilamina en proporcin 9:1 como eluyente para el segundo colorante. Las eluciones se hicieron recogindose la solucin desarrollada cada 6mL en tubos de ensayo desde el comienzo de la primera elucin.

Fig. 2. Montaje de cromatografa en columna flash. La solucin preparada de los colorantes cristal de violeta y naranja de metilo posea una coloracin marrn (Fig. 3). Luego de eluir con etanol, este fue capaz de arrastrar el naranja de metilo. Adems se observa una gran afinidad del eluyente frente al colorante, el desarrollo de este colorante tuvo un corto tiempo. Adems cuando se fue separando la mezcla un color amarillo bajaba mientras que un color violeta quedaba retenido en el inicio del adsorbente, desapareciendo el color marrn que formo los dos colores ya mencionados.

Fig. 3. Solucin de los colorantes a separar

Universidad del Quindo, Facultad de Ciencias Bsicas y Tecnologas Programa de Qumica. Laboratorio de Fotoqumica II. En la Figura 4, se puede observar la separacin de los colores en donde el cristal violeta es retenido por el adsorbente mientras el etanol se lleva el naranja de metilo en la primera elucin. CONCLUSIN En esta prctica se realiz la separacin por columna de una mezcla de Anaranjado de metilo con Cristal Violeta. El inconveniente como se vio en el laboratorio es que para la separacin de solo 1mL de la muestra de colorantes, se uso mas de 50 mL de etanol, mas de 50mL de la mezcla etanol/dietilamina y mas de dos horas de trabajo. Adems los compuestos a separar solamente eran dos y para agregar eran coloreados lo que hizo mucho ms fcil la separacin, pero si hubiese sido una mezcla de ms sustancias y adems no tuviesen color, la separacin se complicara mucho ms. La cromatografa por columna se emplea para la separacin de mezclas o purificacin de sustancias, reteniendo en su fase estacionaria (en este caso la almina) a algunos compuestos por su propiedad de adsorcin, por la que a travs de ella se har pasar una corriente de disolventes o mezcla de disolventes (fase mvil: eluyente) que arrastrar a los compuestos constituyentes de la mezcla, hacindoles avanzar a travs de la columna. Este tipo de cromatografa se utiliza para saber en qu recipientes se encuentra un componente buscado y para determinar la cantidad de este cuantitativamente, contrario a la cromatografa por capa fina donde solo se puede hacer un anlisis cuantitativo.

Fig. 4. Elucin de la cromatografa en columna flash. (Naranjado de metilo). En la segunda elucin con etanol/dietilamina (9:1) aumentando la polaridad, pero aun as se observo un desarrollo mucho ms lento para la recoleccin del cristal violeta y la gran afinidad del adsorbente (Fig. 4). Ms de 40mL del eluyente. Adems el colorante ocupo casi todo la columna mientras se elua (Fig. 5).

Fig. 5. Elucin con etanol/dietilamina 9:1. (Cristal violeta).

Universidad del Quindo, Facultad de Ciencias Bsicas y Tecnologas Programa de Qumica. Laboratorio de Fotoqumica II. BIBLIOGRAFA http://es.scribd.com/doc/1417269 7/6-Cromatografia-en-Columna. http://depa.pquim.unam.mx(9/oct/2 006) http://www.fq.uh.cu/dpto/qi/Aimee /sintesis_inor_web/conf_3.htm (28/ago/2006) www.ugr.es/~quiored/lab/oper_bas/ crom.htm - 22k(Oct/9/2006) http://www.uprm.edu/biology/profs /velez/cromatografias.htm(9/oct/20 06) Agudelo A. F. Universidad del Quindo Facultad de ciencias bsicas y tecnologa programa de qumica - prcticas de laboratorio de fotoqumica II. Cromatografa en columna (C.C.)