Introdução

As enzimas são proteínas que catalisam reações químicas, nos seres vivos e possuem um centro ativo, onde se processam as reações com determinados substratos. O emprego de reações enzimáticas em química analítica tem sido amplamente explorado devido a seu alto poder catalítica e alta seletividade A enzima urease, selecionada para o desenvolvimento desta prática, foi extraído de sementes de soja (outras fontes poderiam ser utilizadas como sementes de melancia). A urease é a enzima responsável pela hidrolise da uréia em amônia e dioxo de carbono. Análises da formação dos produtos da reação catalisada pela uréase, seram o ponto de partida a evidenciarmos a caracterização e propriedades das enzimas.

Solução tampão 0.82ml de NaOH 0.1N) Solução de Cloreto de Mercúrio a 0.1 M pH 7. Solução tampão 0.01%.0 contendo 1% de Uréia. Solução tampão 0.Procedimentos Realizados e Variações Físicas Observadas .0.0 contendo 1% de Uréia. 3 . Refrigerador ajustado para 0oC.1 M pH 5.0 contendo 1% de Tiouréia. Forno para banho maria ajusta para 37 e 100oC. Pera.0 contendo 1% de Uréia.1 M pH 4.1 M pH 7. 4 . Solução de Uréia a 1%. Solução de Vermelho de Fenol ( 0. Solução tampão 0. 2 . Pipeta 3ml. Solução tampão 0. Solução tampão 0.1 M pH 6. constatar a grande especificidade enzimática e a ação de inibidores na atividade enzimática.Materiais Utilizados      Tubos de ensaio de 10ml.Soluções Utilizadas           Solução de Urease (extraída da soja).1g de vermelho de fenol dissolvido em 250ml de agua destilada alcalinizada com 2.1 .1 M pH 7.0 contendo 1% de Uréia.Objetivo O principal objetivo dessa prática é evidenciar a influência da temperatura e do pH na atividade enzimática.

o rotulado como “três”. conforme a figura 1. 3 gotas da solução de uréase e 3 gotas da solução do indicador ácido-base. em seguida foram adicionados em cada um deles 0. o rotulado como “dois” foi colocado no refrigerador a 0oC. ● Primeiro experimento. todos por um período de 20mim. após aproximadamente uma hora observou-se a mudança de coloração no “tubo um” para um tom de vermelho. . após cinco minutos observou-se as colorações conforme mostradas na figura 2. foram previamente preparadas por outra equipe. para cada tubo. Sendo que as soluções utilizadas (descritas no item 3). Foram preparados dois tubos de ensaio. o primeiro com 3ml da solução tampão pH 7 com 1% de ureia. Foram preparados três tubos. Inicialmente ambos os tubos apresentaram uma coloração alaranjada. inicialmente adicionou-se em cada tubo 5 gotas de uréase e 3ml da solução tampão pH 7 sem ureia. vermelho fenol.3ml da solução de ureia a 1% e três gotas da solução de vermelho fenol. determinação da atividade enzimática.Os procedimentos realizados foram divididos em cinco experimentos independentes. em banho maria a 37oC e o como “um” em banho maria a 100oC. ● Segundo experimento: Influência da temperatura sobre a atividade enzimática.

após agitação adicionou-se 3ml da solução tampão pH 7 contendo ureia a 1% e uma gota da solução de vermelho fenol. Em um tubo de ensaio adicionou-se 2ml de água destilada.● Terceiro experimento: Inibição da atividade por sais de Mercúrio. após cinco minutos observou-se as colorações conforme a figura 3.01%. . porém sem a solução de cloreto de mercúrio. Um segundo tubo foi preparado. duas gotas de solução de uréase e uma gota da solução do Cloreto de Mercúrio a 0.

Agitou-se as misturas e após cinco minutos observou-se as colorações conforme mostradas na figura 4. e 3ml da solução tampão com 1% de uréia.● Quarto experimento: Teste de especificidade enzimática. era de pH4. o tubo identificado como “dois”. foi adicionado 3ml da solução tampão pH7 com 1% de ureia. Foram preparados dois tubos de ensaio. enquanto que o especificado como “tubo dois”. ● Quinto experimento: preparou-se quatro tubos de ensaio. era de pH7. cada um deles com três gotas da solução de vermelho fenol. Após cinco minutos as misturas apresentaram as colorações mostradas na figura 5. três gotas da solução de uréase. o identificado como “três”. porém a solução tampão usada no tubo que foi identificado como “tudo um”. ambos com duas gostas da solução de uréase e três gotas da solução de vermelho fenol. . porém o tubo que especificamos como “tubo um”. foi adicionado 3ml da solução tampão pH7 com 1% de tiureia. era de pH 5 e o identificado como “tubo quatro” era de pH 6.

Reação Catalisada pela Uréase A uréase é uma enzima que catalisa a hidrólise da uréia em dióxido de carbono e amônia conforme equação abaixo.1 . a composição química do substrato e produtos da catalise enzimática. especificidade das enzimas. como. noções gerais sobre a variação da atividade enzimática em função da variação de temperatura e pH.Fundamentações Teóricas e Discussões dos Resultados Para que possamos compreender os resultados obtidos experimentalmente é necessário que tenhamos algumas fundamentações teóricas. ação de inibidores e as características do indicador ácido-base vermelho fenol. 5.5 . + H2O → CO2 + 2NH3 .

mesmo que de forma qualitativa.O. no que diz respeito a performance da sua atividade enzimática. Para cada enzima existe valores ideais de pH e temperatura.br/cbq/2008/trabalhos/4/4-3714759. a atividade enzimática e verificada pela formação de carbonato de amônio). os fazem fatores limitantes em relação a atividade enzimática. publicado no endereço eletrônico.A hidrólise da uréia promove a elevação do pH. podendo aumentar ou diminuir a velocidade reacional pela modificação na estrutura do sitio ativo. A grande sensibilidade da reação catalítica em função da temperatura e pH. em função da inserção de amônia no meio. Estudos da atividade enzimática da uréase em função da temperatura e pH são resumidos nos gráficos abaixo. Essa será a característica chave para evidenciarmos a ocorrência da catalise e a sua intensidade. 2 NH3 + 2 H2O →2 NH4OH .2 . alterando assim a atividade catalítica. e a reação da água com dióxido de carbono formando o ácido carbônico.org. K. 1 1 . formando assim o carbonato de amônio (que e uma sal de caráter básico.trabalho experimental realizado por Amaral.G (UFRN). Em meio aquoso ocorre a reação da amônia com a água formando hidróxido de amônio. conforme reações abaixo. http://www.Variantes da Atividade Enzimática Fatores como pH e temperatura atuam no mecanismo cinético das reações enzimáticas.C.abq. CO2 + H2O → H2CO3 H2CO3 + 2 NH4OH → (NH4) 2CO3 + 2H2O 5.htm .

. A solução de vermelho de fenol é usada como indicador de pH.3 – Vermelho de fenol O vermelho fenol é um cristal vermelho.6 e 8. 5. apresentando uma gradual transição do amarelo ao vermelho entre o pH 6. acima do pH 8. cuja formula estrutural é apresentada na figura 6. .1 apresenta uma coloração rosa conforme figuara 7.

promovidas pelo indicador ácido-base. verificando um pH mais elevado no “tubo um”. os colocamos em diferentes pontos na escala de pH. representa essa formação. ●Segundo experimento: nesse experimento ao tentarmos posicionar de forma relativa os três tubos na escala de pH. que diz que a atividade enzimática da uréase é maior na temperatura 37oC do que em 0oC. vermelho fenol. figura 8. caracterizando a atividade enzimática. figura 9. encontramos muita dificuldade em função da proximidade de suas cores. entretanto observamos um tom mais avermelhado no tubo um (100oC). conforme características do indicador vermelho fenol. o que não está de acordo com estudos anteriores publicados e fontes confiáveis. que por sua vez representa atividade enzimática.4 .5. já que nessa temperatura é esperada a desnaturação da uréase pelo calor. e que as variações de coloração das misturas. que injeta amônia e dióxido e carbono no meio promovendo a formação do sal carbonato de amônio (básico). . já o tubo dois( 0oC) apresenta um tom mais avermelhado que o tudo três (37oC). ●Primeiro experimento: relacionando as colorações observadas em ambos os tubos de ensaio. provavelmente por ter ocorrido hidrólise da uréia em função da temperatura. Os resultados demonstram que ocorreram falhas na execução do experimento. não havendo assim atividade enzimática.Interpretações dos Resultados Para interpretarmos os resultados adequadamente é necessário que esteja consolidada a idéia de que a elevação do pH no meio está relacionado com a atividade enzimática.

evidenciando assim a especificidade da uréase em relação a ureia. sequencialmente o tubo quatro. posicionamos os quatro tubos em função do pH. tendo o tubo um (tampão pH7) o maior pH. já no “tubo um” observamos um tom de vermelho (figura 11). Vale ressaltar a grande similaridade da uréia em relação a tiuréia (figura 12) Quinto experimento: fundamentando-se nas mudanças de coloração proporcionada pelo vermelho fenol. observamos que o “tubo dois” é muito mais básico que o “tubo um” (figura 10) o que evidencia a atuação do cloreto de Mercúrio como agente inibidor da catálise enzimática da uréase.Terceiro experimento: posicionando de forma relativa os dois tubos na escala de pH. Quarto experimento: observamos um tom amarelado no “tudo dois”. três. e dois (figura 13) o que demonstra maior atividade enzimática no . o que caracteriza a atividade enzimática no tubo um e a não atividade no tubo dois.

não há nenhum indicio de atividade enzimática em função da acentuada coloração amarela.tubo um. reduzindo a atividade com a redução do pH da solução tampão com ureia utilizada. No tudo dois (tampão 4). . evidenciando assim a influência do pH na atividade enzimática.

sem dúvida está entre as obras mais fascinantes da “engenharia química da vida”. fragilidade. vulnerabilidade a ação de agentes inibidores. restrições funcionais. Nessa prática trabalhamos com propriedades das enzimas de caráter limitante. .Conclusão Falhas operacionais ocorreram. porém nada que comprometa os objetivos esperados. o que não reduz a grandiosidade do universo das enzimas.

acessado em 10/05/2012 . 1993. Editora Sarvier. SP. Albert Lester “Princípios de Bioquímica” 2ª ed.br/cbq/2008/trabalhos/4/4-371-4759. 839p.htm.abq.org. http://www.Referencias Bibliográficas LEHNINGER.