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Apostila 2

Disciplina: Pr-Clnica II (DP-201) Aspectos microbiolgicos da placa dental

rea de Microbiologia e Imunologia FOP-UNICAMP Profa. Dra. Renata O. Mattos Graner Prof. Dr. Reginaldo B. Gonalves Prof. Dr. Jos Francisco Hfling Leandro Moraes Furlan

Piracicaba 2005

Placa dental bacteriana aspectos microbiolgicos


1. Conceito de placa dental bacteriana ou biofilme dental.
Definio de biofilme: Genericamente, biofilmes so definidos como comunidades microbianas ssseis aderidas a superfcies rgidas. Os microrganismos que compem o biofilme formam uma comunidade extremamente organizada, sendo envolvidos por uma matriz extracelular, composta principalmente de polissacardeos produzidos pelos prprios microrganismos, os quais interagem com componentes do fludo pelo qual so banhados. Os biofilmes so tipicamente banhados por fludos que carregam microrganismos. O biofilme dentrio banhado pela saliva.

Os microrganismos que colonizam os dentes formam a chamada placa dental bacteriana, de enorme interesse odontologia e outras reas de medicina. A placa dental bacteriana um BIOFILME. Na natureza existem inmeros biofilmes distintos. Por exemplo, biofilmes microbianos esto implicados na reduo da vazo de tubulaes das redes de gua e esgoto e na contaminao e disseminao de infeces por microrganismos formadores dos biofilmes de catteres e tubulaes de equipamentos mdicos e odontolgicos (4,12). A placa dental possivelmente o biofilme mais estudado, sendo importante no desenvolvimento das principais patologias bucais: a crie dental e as doenas periodontais (3). A comunidade microbiana de um biofilme dental maduro envolve interaes microbianas intra e inter espcies e gneros, as quais so relativamente estveis. A matriz extracelular do biofilme apresenta canais por onde atravessam fludos contendo nutrientes, metablitos secretados, enzimas, oxignio, sais e compostos orgnicos. As bactrias que formam o biofilme apresentam mecanismos de comunicao atravs de sinais qumicos. Estes sinais estimulam as bactrias a produzir protenas e enzimas importantes para a adaptao fisiolgica bacteriana s diferentes condies ambientais, s quais o biofilme est exposto. Assim, os biofilmes se comportam como um tecido organizado, sendo capazes de se adaptar mais facilmente a diferentes condies de estresse ambiental (3). 2. Fases de formao de biofilmes dentrios. Embora tenhamos discutido que a composio microbiana varia segundo as diferentes reas dos dentes, principalmente quando se compara biofilme supragengival e biofilme subgengival, os mecanismos bsicos de formao de biofilmes so academicamente divididos em trs fases principais do desenvolvimento: 1) Fase de aderncia inicial: envolve mecanismos inespecficos e especficos de adeso pelcula adquirida do esmalte e outras superfcies dentrias expostas (Ex. superfcies radiculares). Os microrganismos com maior capacidade de se aderir aos dentes nestas fases iniciais so definidos como colonizadores primrios. 2) Fase de acmulo: envolvem mecanismos de interao bacteriana e a produo de uma matriz extracelular. Muitos microrganismos no se aderem inicialmente aos dentes, mas so capazes de se aderir (co-adeso) a microrganismos primrios que se estabelecem na fase inicial. Estes so denominados de colonizadores secundrios.

3) Fase da comunidade clmax: atinge um estgio de equilbrio dinmico, onde os diversos microrgarnismos que compem o biofilme esto em constante adaptao s alteraes ambientais. Aps a adeso e acmulo, diversas modificaes ambientais ocorrem de forma que os diferentes gneros e espcies microbianas vo variar em proporo at atingir uma fase de equilbrio. Este equilbrio dinmico, pois envolvem constantes modificaes fisiolgicas, para que a comunidade sobreviva no nicho colonizado. Variaes na composio e proporo das espcies so menores, a no ser que grandes variaes ambientais ocorram, como por exemplo, alteraes acentudas da dieta e/ou da sade geral do hospedeiro. A microbiota clmax apresenta microrganismos colonizadores primrios e secundrios, e tambm os microrganismos colonizadores tardios, isto , aqueles que aumentam em proporo como conseqncia de variaes ambientais decorrentes do acmulo microbiano no biofilme dentrio. Os mecanismos envolvidos nestas fases de formao de biofilmes tm sido intensamente estudados, pois ao compreendermos estes mecanismos, poderemos desenvolver mtodos de controle de placa bacteriana e estratgias que atuem apenas sobre aqueles microrganismos patognicos. Os principais mecanismos envolvidos em todas estas fases de formao do biofilme dentrio sero descritos com mais detalhes nos tpicos a seguir. 2.1 Fase de aderncia inicial. Esta fase formada basicamente pela interao dos colonizadores primrios com a pelcula adquirida do esmalte, por meio de interaes inespecficas ou especficas. Interaes inespecficas ocorrem da seguinte forma: o esmalte dentrio possui uma fora de atrao predominantemente negativa, devido aos grupos fosfatos que formam a hidroxiapatita. Sobre esta superfcie, se forma uma camada composta, na sua maioria, por ons clcio (com carga positiva), denominada camada de hidratao. Sobre esta camada, se adsorvem diversos componentes salivares e microbianos atravs de ligaes no covalentes fracas, como as ligaes de van der Waals, interaes hidrofbicas, pontes de hidrognio e pontes inicas (13). Esta camada, formada predominantemente de glicoprotenas e protenas ricas em aminocidos prolina denominada de pelcula adquirida do esmalte (PA) (Figura 1A). A adeso dos colonizadores primrios ao dente ocorre atravs de ligaes ao componentes da PA. Estas ligaes podem ser de dois tipos: 1) ligaes inespecficas: envolvem interaes fracas por carga (por exemplo, interaes de van der Waals); 2) ligaes especficas: envolvem interaes estveis de encaixe entre protenas da PA e protenas de superfcie bacteriana, as chamadas adesinas (Figura 1B). Existem vrios tipos de adesinas nas diversas espcies microbianas. Cada tipo de adesina se liga a um componente especfico comumente presente na PA. Vide alguns exemplos na Tabela 1.

Adesina
Bactria presente na saliva

Esmalte dentrio

Esmalte dentrio
Pelcula adquirida

Figura 1. A) Esquema da organizao da pelcula adquirida do esmalte. A superfcie do esmalte apresenta carga negativa decorrente dos grupos fosfatos que compem a hidroxiapatita. ons clcio (Ca +) so ento atrados, formando uma camada de hidratao com carga positiva. Componentes salivares com partes eletronegativas se adsorvem a esta camada por interaes no covalentes fracas. Estes componentes formam uma camada denominada de pelcula adquirida do esmalte (PA). B) Protenas de superfcie bacteriana (adesinas) se ligam especificamente a componentes da pelcula adquirida, permitindo ligaes mais estveis (encaixe). As ligaes bacterianas inespecficas, que ocorrem inicialmente por ligaes eletrostticas e/ou ligaes de van der Waals no esto representadas nesta figura. Figura adaptada de B. Nyvad e O. Fejerskov, in: A. Thylstrup, O. Fejerskov. Tratado de Cariologia. Ed. Cultura Mdica, RJ, 1 a. edio, 1988.

Os colonizadores primrios da placa dental tm como caracterstica, a presena de adesinas com maior afinidade a componentes da PA, quando comparados com colonizadores secundrios. Alm disto, estes microrganismos geralmente so produtores de proteases que quebram os anticorpos IgA1S. Estas proteases so portanto, denominadas de IgA1-proteases (vide Apostila 1). As IgA1-proteases so importantes, pois permitem que estes microrganismos ocupem stios da PA bloqueados por anticorpos. Alm disto, estes microrganismos so capazes de eliminar os anticorpos que se ligam a suas adesinas de superfcie. Dentre as principais espcies classificadas como colonizadores primrios dos dentes esto: Streptococcus sanguinis, Streptococcus gordonii, Streptococcus oralis e Streptococcus mitis (vide as principais caractersticas destas espcies bacterianas na Apostila 1).

5 Tabela 1. Exemplos de adesinas que interagem com componentes da pelcula adquirida, identificadas em espcies de colonizadores primrios. Tipo de adesinas Espcies microbianas que Receptor apresentam
Famlia de Antgenos I/II Protenas Ligantes de Amilase Lectinas de superfcie Complexo antignico G9B Protena de famlia LraI superfcie S. gordonii, S. oralis, S. mutans, S. sobrinus Aglutinina da saliva da partida, protenas ricas em prolina, colgeno. S. gordonii, S. mitis, S. salivarius, S. -amilase salivar. crista S. oralis, S. mitis S. gordonii da S. parasanguis, S. sanguinis Glicoprotenas salivares. Protena de 73 kDa da saliva submandibular. Diversos componentes da PA.

Fonte: adaptado de Kolenbrander, P. E. and J. London. 1993. Adhere today, here tomorrow: oral bacterial adherence. J.Bacteriol. 175:3247-3252. (7)

2.2 Fase de acmulo. A fase de acmulo a fase onde os microrganismos interagem entre si. Nesta fase, microrganismos no capazes de interagir com componentes da PA podem se aderir atravs da interao com as superfcies de microrganismos colonizadores primrios (aderidos PA). Diversos mecanismos esto envolvidos na fase de acmulo microbiano no biofilme. Estes mecanismos podem ser divididos em: (a) Co-adeso e co-agregao: adesinas de novos microrganismos se ligam a receptores da superfcie celular dos microrganismos que formam as primeiras camadas de biofilme (colonizadores primrios). (b) Acmulo microbiano atravs da diviso celular de microrganismos aderidos ao dente. (c) Acmulo atravs da produo de uma matriz extracelular pegajosa de polissacardeos extracelulares que gruda diversas bactrias em diviso no biofilme. (d) Interaes metablicas. Todos os processos de acmulo ocorrem de forma associada e dinmica, sofrendo influncia de diversas condies ambientais, condies do hospedeiro e bacterianas. As interaes bacterianas metablicas incluem mecanismos de antagonismo 1 e mutualismo2 entre as diversas espcies e gneros microbianos. 2.2.1 Mecanismos de co-adeso e co-agregao (a). Estes mecanismos envolvem a interao especfica entre adesinas da superfcie bacteriana e receptores presentes nas superfcies de outros microrganismos. Estas interaes entre clulas promovem agregao de bactrias de mesma espcie. O prefixo co- utilizado para indicar interao entre bactrias de gneros e/ou espcies distintos. Bactrias isoladas ou
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Antagonismo: relao entre dois organismos distintos no qual um inibe o outro. Mutualismo: relao entre dois organismos distintos, na qual ambos so beneficiados.

6 agregados bacterianos podem se ligar a outras aderidas ao dente. Atravs destes mecanismos de interao especfica h um progressivo aumento da diversidade microbiana. Primeiro surgem os colonizadores secundrios e com o aumento sucessivo e ordenado de novas espcies, aparecem os colonizadores tardios. Alguns dos gneros bacterianos mais freqentemente identificados como colonizadores secundrios esto Actinomyces spp., Veillonela spp. Fusobacterium spp, Haemophilus spp. e Capnocytophaga spp. (vide caractersticas destes microrganismos na Apostila 1). Os colonizadores tardios so aqueles que dependem das modificaes desencadeadas pelos colonizadores primrios e secundrios. Estes normalmente incluem bactrias anaerbicas estritas, como as do gnero Prevotella, Porphyromonas, Actinobacillus e Treponema (7). A Figura 2 ilustra um modelo de acmulo bacteriano envolvendo mecanismos de coaderncia e co-agregao proposto por Kolenbrander e London (1993) (7). Note que os microrganismos da primeira camada bacteriana correspondem aos colonizadores primrios, os quais apresentam inmeros receptores para os colonizadores secundrios. Assim, a sucesso microbiana parece no ser aleatria, mas sim determinada pelos tipos de receptores presentes nas superfcies das bactrias que formam as camadas anteriores e as adesinas das bactrias que formam as camadas subseqentes. Entretanto, como veremos a seguir, este no o nico mecanismo que determina a composio da microbiota do biofilme dentrio (vide tpico de Dinmica das sucesses microbianas). 2.2.2 Acmulo microbiano pela diviso celular (b e c) Outro mecanismo de acmulo bacteriano no biofilme, consiste no prprio processo de diviso celular das bactrias aderidas. As novas bactrias geradas pela diviso celular passam a formar microcolnias que aumentam em tamanho. Durante a formao do biofilme, diversas microcolnias em crescimento se unem umas s outras. Este acmulo concomitante e dependente da produo de polissacardeos extracelulares (polmeros de acar como a glicose ou frutose). Estes polissacardeos formam uma matriz extracelular pegajosa que muito importante para que as clulas em diviso se acumulem no biofilme. Esta matriz pode tambm interagir com outras bactrias trazidas pela saliva individualmente ou como agregados e coagregados. A Figura 3 ilustra estes processos. A matriz de polissacardeos extracelulares (PEC) produzida por enzimas secretadas pelas prprias bactrias colonizadoras. Estas enzimas catalisam a produo de polmeros de glicose (dextranos) ou de frutose (frutanos) a partir da sacarose presente na dieta. Como vimos na Apostila 1 (vide Tabela 3), diversas espcies bacterianas, principalmente Streptococcus, so capazes de produzir polissacardeos extracelulares a partir da sacarose. Entretanto, estes polissacardeos variam muito quanto a suas propriedades (por exemplo, solubilidade em gua), dependendo do tipo das ligaes glicosdicas e do tamanho das cadeias de acar formadas. Algumas espcies no patognicas produzem PEC mais solveis em gua e mais facilmente quebrados (por exemplo, S. sanguinis), enquanto outras espcies produzem PEC altamente ramificados e insolveis em gua (por exemplo, S. mutans). Estes PEC insolveis so mais estveis e so considerados como essenciais na patogenia da crie dentria, como veremos mais adiante. Indivduos que ingerem acar com freqncia, tm maior acmulo de placa dental nos seus dentes. A produo de PEC aumenta a rapidez de acmulo e o volume de placa formada sobre os dentes. Assim, a composio microbiana (proporo de microrganismos produtores de PEC), dieta (disponibilidade de sacarose) e hbitos de higiene bucal determinam a velocidade de formao de placa dental. Assim, aps a completa remoo de placa atravs da escovao e uso de fio dental, ou atravs da remoo de placa profissional, alguns indivduos apresentam um rpido re-acmulo de placa, enquanto que em outros indivduos, o acmulo de placa dental muito lento. Por isto, a velocidade com que a placa dental foi

7 utilizada por um pesquisador sueco, Dr. Per Axelsson, como um indicador dos riscos dos indivduos desenvolverem doenas bucais como a crie, uma vez que esta patologia est associada a microrganismos altamente formadores de PEC e ao consumo freqente de sacarose (10).

Adesina

Receptor

Colonizadores tardios

Colonizadores secundrios

Resto celular bacteriano

Protena rica em prolina

Protena rica em prolina

estaterina

-amilase

PA

Superfcie dentria
Adaptado de PE Kolenbrander e J London. J Bacteriol 175:3247-3252, 1993

Figura 2. Diagrama de aderncia bacteriana superfcie dentria. Os colonizadores primrios consistem naqueles com adesinas de maior afinidade a componentes de pelcula adquirida da esmalte. Aps aderidos, estes microrganismos oferecem novos stios de interao, visto que colonizadores secundrios apresentam adesinas que se ligam a protenas de superfcie de alguns colonizadores primrios, podendo co-aderir e co-agregar. Camadas sucessivas so formadas a partir destes processos de co-aderncia/agregao, ocorrendo um aumento da diversidade microbiana da placa dental. Observe que a espcie Fusobacterium nucleatum corresponde a uma das espcies fusiformes que funcionam como uma ponte entre as diferentes camadas de bactrias.

Co-agregado bacteriano

Agregado bacteriano

Bactrias em diviso (microcolnia)

Superfcie dentria

Bactria colonizadora primria

Matriz de polissacardeos extracelulares

Figura 3. Diagrama simplificado do acmulo bacteriano durante a formao da placa dentria. Bactrias inicialmente aderidas aos dentes passam a se dividir, formando microcolnias, as quais vo crescer em tamanho e se unem a outras microcolnias. Algumas das bactrias em diviso produzem tambm uma matriz de PEC, a qual favorece o acmulo, agregao e co-agregao de outros microrganismos na placa.

2.2.3 Dinmica das sucesses microbianas (d). Conforme o biofilme vai se formando, diversas mudanas locais ocorrem. Com o aumento da quantidade de matriz extracelular, as camadas mais internas (mais prximas do esmalte) apresentam menor disponibilidade de alguns nutrientes e de oxignio. Estas reas mais internas passam a ser favorveis aos microorganismos anaerbios, os quais iniciam sua proliferao. Alm disto, algumas espcies presentes na placa utilizam O 2, para a produo de H2O2, tambm favorecendo microrganismos anaerbios estritos. Outras modificaes ocorrem devido a variaes no pH local. Como grande parte dos colonizadores primrios e secundrios so bactrias sacarolticas fermentativas, h a produo de cido lctico e conseqente queda do pH local. Embora existam diversos mecanismos de tolerncia bacteriana a meios cidos, a maior parte dos colonizadores comensais (S. sanguinis, S. gordonii, S. oralis) no so capazes de resistir a quedas muito drsticas e duradouras do pH. Em algumas placas dentrias, o pH pode cair rapidamente para valores por volta de 4,0! Algumas espcies bucais se desenvolvem bem em meios cidos, como Lactobacillus spp., Veillonela spp. e estreptococos do grupo mutans, sendo favorecidas nos ambientes altamente acidognicos. Por outro lado, nas placas subgengivais, o pH torna-se alcalino em decorrncia da resposta inflamatria, onde h degradao de protenas, liberao de aminas e produo de amnia. Nestes casos, o pH local varia de 7,2 a 7,4, o que favorece o crescimento de algumas espcies patognicas como a Porphyromonas gingivalis, cujo pH timo de crescimento est por volta de 7,5 (8,9). Com a maior competio por nutrientes, aqueles microrganismos com capacidade de transportar e metabolizar maior diversidade de acares ou de nutrientes disponveis tendero a aumentar em proporo na placa dental. A saliva funciona como uma fonte importante de

9 nutrientes, pois contm carboidratos, glicoprotenas, protenas e diversos ons importantes para o metabolismo microbiano. A saliva pode sustentar o crescimento de muitos microrganismos durante os perodos entre as refeies, quando h ausncia de nutrientes da dieta (exgenos). Entrentanto, possvel que a maior fonte de nutrientes nos perodos entre as refeies seja proveniente de reservas de acares presentes na forma de polissacardeos da prpria matriz extracelular e de polissacardeos intracelulares (glicognio) (2). Os componentes da dieta tm grande influncia na composio da microbiota bucal. Os carboidratos da dieta, principalmente a sacarose, e seu efeito na composio da microbiota bucal so os de maior interesse, pois podem favorecer microrganismos patognicos, como S. mutans, como veremos em mais detalhes na Apostila 3. Por outro lado, enquanto microrganismos da placa supragengival utilizam os nutrientes da dieta e saliva, os microrganismos da placa subgengival, menos expostos a nutrientes exgenos, utilizam principalmente os nutrientes do fludo crevicular. O fludo crevicular contm diversos nutrientes proticos e glicoprotenas, alm de fatores de crescimento essenciais para diversos microrganismos anaerbicos, como a hemina e vitamina K. Com o aumento do nmero e diversidade microbiana, uma srie de produtos do metabolismo microbiano se acumula no biofilme. H um aumento da presso osmtica, o que poder promover perda de gua pelas clulas microbianas. Assim, quando h alta concentraes de soluto no meio extracelular, os microrganismos somente podem captar gua do ambiente, atravs do bombeamento de ons inorgnicos para o interior da clula. Assim, a proporo de ons de sdio (Na+) e potssio (K+) extracelular alterada. Os ons sdio e potssio so osmorreguladores que participam do transporte ativo de componentes atravs da membrana celular (13). Para lidar com o estresse osmtico, as bactrias tambm sofrem alteraes na sua membrana e parede celular, para tornarem-se mais impermeveis. Outro desafio ambiental consiste no acmulo de radicais livres e variaes no potencial de oxido-reduo (Eh). Diversas reaes enzimticas envolvem reaes de oxidao-reduo, nas quais um componente oxidado (perde eltrons) e outro reduzido (recebe eltrons). A tendncia de transferir eltrons de um composto para o outro definida como o potencial de oxidao-reduo ou potencial redox (Eh). O Eh de um composto pode ser determinado experimentalmente, sendo definido como a diferena de voltagem ocorrida quando eltrons de um componente em soluo com baixa afinidade a eltrons migram para a soluo de outro componente com alta afinidade a eltrons. A diferena de energia ocorrida pela migrao de eltrons medida atravs de um voltmetro, sendo o valor de Eh expresso em miliVolts (mV). Assim, o Eh uma medida da afinidade por eltrons (1). A baixa afinidade a eltrons de um composto em relao ao outro gera um valor de Eh negativo, enquanto a alta afinidade a eltrons tende a gerar Ehs positivos. O Eh altamente influenciado pela disponibilidade de O 2, uma vez que o oxignio o receptor de eltrons mais comum no ambiente. A cavidade bucal caracterizada por grandes variaes nos valores Eh. Na saliva, Ehs variam de +158 a +542mV, mas chegam a valores de -300mV no sulco gengival. O Eh tambm varia muito na extenso da placa dental, principalmente em placas dentais espessas. Nas pores externas, o Eh tende a ser positivo com a maior exposio ao oxignio, mas nas pores internas tende a ser negativo (6). Bactrias anaerbicas precisam de ambientes com valores de Eh negativos, enquanto a bactrias aerbicas precisam de condies oxidantes (valores de Eh positivos) (6). Na placa supragengival, apesar da maior exposio ao O2, o Eh apresenta valores negativos (por volta de -141mV), o que est associada presena de grande proporo de anaerbios facultativos (por exemplo, Streptococcus spp.). Por outro lado, estudos mais recentes tm demonstrado que at mesmo diversos microrganismos associados doena periodontal e classificados como anaerbios estritos apresentam certa tolerncia ao oxignio. Isto porque estes microrganismos apresentam mecanismos para controle do estresse oxidativo. Por estas caractersticas, alguns

10 pesquisadores consideram questionvel a classificao de espcies bucais dos gneros Porphyromonas, Prevotella e Treponemas, como anaerbios estritos (2). O estresse oxidativo decorrente dos vrios produtos txicos oxidantes derivados do O2, os quais so altamente reativos. A reatividade do O2 aumenta com a aquisio de eltrons. Entre os produtos txicos gerados a partir do O 2, temos o radical livre superxido (O2-), o perxido de hidrognio (H2O2), o radical hidroxila (OH.) formado pela adio de um a trs eltrons. Os produtos O2- ou H2O2 podem ainda reagir com ons de ferro (Fe 3+) ou cobre (Cu2+), gerando produtos tambm txicos s bactrias. A sobrevivncia ao estresse oxidativo dependente da capacidade de metabolizar O2 sem gerar produtos txicos ou de remover/modificar os agentes txicos produzidos em produtos finais no txicos. Enquanto os microrganismos aerbicos utilizam inmeros sistemas enzimticos que eliminam os agentes redutores originados do O2, as bactrias anaerbicas estritas no produzem estas enzimas, sendo altamente sensveis ao estresse oxidativo. Os anaerbios facultativos tambm apresentam diversos sistemas para converter produtos txicos, embora no utilizem o O 2 para obter energia, como os aerbicos. As bactrias bucais se utilizam de pelo menos 6 reaes enzimticas distintas para metabolizar o oxignio e/ou seus produtos (2). Cada uma destas reaes envolvem diferentes enzimas, cujas reaes catalisadas esto a seguir: 1) Superxido dismutase : O2- + O2- + 2H+ H2O2 + O2 2) Catalase : 2 H2O2 2H2O + O2 3) Perxido de hidrognio NADH oxidase : NADH + H+ + O2 2NAD+ + H2O2 4) gua-NADH oxidase: 2NADH + 2H+ + 2O2 2NAD+ + 2H2O 5) NADH peroxidase: NADH + H+ + H2O2 NAD+ + H2O 6) Piruvato oxidase: Piruvato + Pi + O2 Acetyl-P + H2O2 Streptococcus spp. (anaerbios facultativos) apresentam NADH oxidases, NADH peroxidases, superoxido-dismutases, mas no catalases. Enzimas NADH oxidase e superxido dismutase tambm foram detectadas em espcies de anaerbios estritos, como Treponema denticola, Porphyromonas spp.e Prevotella spp. A Figura 4 ilustra as principais modificaes ambientais ocorridas em diferentes reas de placa dental bacteriana, da mais externa mais interna. Variaes nos mesmos fatores ambientais tambm existem quando se comparam as microbiotas da placa supragengival e subgengival (no representado na Figura 4). O conjunto de mecanismos de adaptao ao estresse ambiental tambm influenciado pela composio microbiana de placa dental. Diversas interaes entre microrganismos favorecem o estabelecimento de uma condio de equilbrio. Um biofilme dentrio maduro formado por uma comunidade complexa em equilbrio dinmico pode ser referido como uma comunidade clmax. As comunidades clmax podem existir apenas temporariamente, uma vez que alteraes ambientais podem constantemente interferir neste equilbrio ecolgico. Portanto, improvvel que as comunidades clmax existam por muito tempo na cavidade bucal, exceto em reas mais protegidas.

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Nutrientes

O2

Eh

pH

Produtos metablicos

Placa dental

Superfcie dentria
Figura 4. Diagrama representativo das variaes em diferentes condies ambientais que influenciam na composio microbiana das diversas camadas da placa dental (das pores externas s internas). As setas em preto voltadas para baixo indicam reduo nas concentraes de nutrientes, tenso de oxignio e pH nas regies mais internas da placa dentria. A seta em preto voltada para cima indica maiores concentraes de produtos metablicos nas reas internas da placa. Observe que o Eh tende a ser negativo nas regies de menor tenso de oxignio. As barras pretas indicam variaes nos valores de Eh e concentraes de ons potssio e sdio. Figura adaptada P.D. Marsh, Microbiologia Oral, 2005 (6).

3. Interaes metablicas entre gneros e/ou espcies da placa dental A sucesso microbiana no casual, mas sim envolve inmeros processos que ordenam a colonizao e composio da microbiota bucal. Alm dos mecanismos de interao mediados por adesinas, PEC e adaptao a condies de estresse ambiental, h tambm o efeito de interaes metablicas entre microrganismos distintos da comunidade da placa dental. Estas interaes envolvem diversos mecanismos especficos de antagonismo (uma espcie/gnero inibe outra espcie ou gnero distinto) e de mutualismo/agonismo (uma espcie ou gnero favorece a outra espcie ou gnero distinto). Estes processos contribuem para o estabelecimento de uma comunidade microbiana em equilbrio. Alm disto, dentro de uma mesma espcie microbiana, cepas distintas competem entre si para se estabelecer dentro de uma comunidade especfica. Vamos compreender isto melhor. Considere que os alunos do curso de graduao da FOP-UNICAMP pertencem espcie Homo sapiens. Embora sendo da mesma espcie, muitos destes alunos podero interagir de forma competitiva, ou para vencer um torneio esportivo, ou para obter as melhores notas, ou para adquirir o aproveitamento mais completo e/ou especializado do curso e com isto tornar-se mais competitivo em reas especficas do mercado de trabalho. Cada indivduo desta espcie apresenta, no entanto, habilidades distintas que os tornam mais ou menos competitivos, dentro da situao ou condio especfica. Muitas destas habilidades so determinadas geneticamente. Entre as bactrias de uma mesma espcie, algo semelhante ocorre. Assim, por exemplo, cada indivduo da espcie Streptococcus gordonii, embora semelhante em muitas caractersticas fundamentais, pode diferir bastante em caractersticas especficas. Cada indivduo dentro de uma mesma espcie bacteriana denominado de cepa. Cepas distintas de uma mesma espcie variam geneticamente, o que influencia na sua capacidade competitiva. A seguir, vamos explicar alguns exemplos de interaes metablicas entre microrganismos da placa dental e mecanismos competitivos dentro ou fora de um mesmo gnero e/ou espcie microbiana.

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(Exemplo 1) Antagonismo: bactrias produtoras de cido lctico versus microrganismos aerbios e outros competidores Como explicado no tpico do gnero Streptococcus, as bactrias produtoras de cido lctico so anaerbias facultativas, isto , no requerem O2 para obter energia (ATP), embora no sejam sensveis ao oxignio. Entretanto, as bactrias produtoras de cido lctico captam O2 em propores similares aos microrganismos aerbicos. Parte deste reduzido ao radical livre superxido (O2- ), H2O2 ou H2O. O superxido produzido altamente txico e deve ser convertido em O2 e H2O2, pela enzima superxido-dismutase. O O2 captado no utilizado para obteno de energia, mas tem uma funo ecolgica importante. Ao utilizar O2 do meio, estas bactrias criam um ambiente anaerbico, inibindo a proliferao de microrganismos aerbicos. Alm disto, a prpria H2O2 produzida ou substncias geradas a partir de H 2O2 so capazes de inibir o metabolismo e crescimento de outros microrganismos competidores. (Exemplo 2) Mutualismo: bactrias produtoras de cido lctico versus Veillonella spp. O cido lctico, produto final do metabolismo de Streptococcus e outros gneros de bactrias produtoras de cido lctico, consiste na fonte de carbono ideal de Veillonella spp. Espcies de veilonela no so capazes de fermentar acares, mas obtm energia a partir de cido lctico. Veillonella metaboliza cido lctico produzindo CO2 e H2. Desta forma, h boa disponibilidade de cido lctico em comunidades onde predominam Streptococcus e Lactobacillus, o que favorece o crescimento e aumento da proporo de veilonelas. Por outro lado, muitas espcies de estreptococos comensais da placa dental (por exemplo, S. sanguinis) no so capazes de tolerar pH muito baixos, que ocorre em decorrncia do acmulo de metablitos, como o cido lctico. Assim, as veilonelas presentes auxiliam no controle do pH local impedindo que este atinja limites txicos aos prprios estreptococos produtores de cidos. (Exemplo 3) Antagonismo: bacteriocinas A produo de bacteriocinas um exemplo de competio entre cepas de uma mesma espcie microbiana. Cepas distintas de diversas espcies bacterianas produzem substncias que inibem o crescimento de cepas da mesma espcie ou de espcies semelhantes. Estas substncias so denominadas de bacteriocinas. Diferente dos antibiticos, substncias inibitrias de amplo espectro de ao produzidas por diversos microrganismos, as bacteriocinas tm pequeno espectro de ao e atuam normalmente sobre cepas da mesma espcie ou sobre cepas de espcies semelhantes espcie produtora. Assim, Streptococcus mutans produzem bacteriocinas que inibem outras espcies de Streptococcus competidoras, como S. gordonii, S. sanguinis e S. mitis, alm de inibirem cepas distintas, tambm da espcie S. mutans. Nem todas as cepas de S. mutans produzem bacteriocinas, e cepas distintas podem produzir tipos distintos de bacteriocinas. Existem bacteriocinas que inibem cepas distintas dentro de uma mesma espcie, enquanto outras tm maior espectro da ao. Atravs da produo de um grupo particular de bacteriocinas, uma cepa pode ser mais hbil do que a outra em se estabelecer em um determinado nicho ecolgico. Existem estudos que sugerem que cepas de S. mutans que produzem maior nmero de bacteriocinas distintas contra um maior espectro de cepas de S. mutans e de outras espcies de estreptococos bucais, so mais facilmente transmitidas de mes para seus filhos (as) (5).

13 (Exemplo 4) Comunicao: atravs de interaes qumicas entre bactrias de mesma espcie ou entre espcies distintas Como abordado superficialmente na Apostila 1, as bactrias que colonizam o mesmo ambiente so capazes de se comunicar atravs de sistemas de sinalizao. Alguns destes sistemas so denominados de quorum-sensing (do Latim, quorum: nmero mnimo de indivduos presentes exigidos para que um rgo coletivo funcione), atravs dos quais as bactrias sentem o aumento de sua densidade populacional. Isto ocorre porque as bactrias secretam pequenos peptdeos (tambm chamados de ferormnios), para o meio extracelular. Quando h um aumento na concentrao destes ferormnios em decorrncia do aumento do nmero de bactrias no local, estes se ligam a receptores das bactrias locais, ativando a transcrio de genes importantes para uma srie de modificaes fisiolgicas (11,14). Estas modificaes fisiolgicas tornam as bactrias mais hbeis a se adaptar a condies de estresse decorrentes da super-populao, como carncia de nutrientes, estresse osmtico, quedas do pH e variaes de Eh. Existem ferormnios que ativam apenas as cepas da mesma espcie da cepa produtora (sinalizao intra-espcie), enquanto outros ferormnios ativam bactrias de espcies distintas (sinalizao inter-espcie) (11,11). 4. Placa dental associada s doenas bucais A placa dental pode apresentar uma composio microbiana compatvel com a sade, quando h o bom funcionamento dos mecanismos de defesa do hospedeiro inatos e adaptativos, um controle fsico-mecnico de placa peridico (atravs de escovao e fio dental) e uma dieta balanceada (rica em fibras e com baixa concentrao e freqncia de consumo de sacarose). Nestas situaes, podemos dizer que a placa dental encontra-se em condio homeostase (equilbrio) com o hospedeiro. Entretanto, fatores que interfiram no sistema imune, no acmulo de placa dental e ou que promovam uma dieta inadequada (pobre em fibras, com alta freqncia de consumo de acares fermentveis), podem promover o desequilbrio microbiano da placa dental e reduo da proporo de microrganismos comensais. Esta condio de desequilbrio est associadao ao aumento em proporo dos microrganismos patognicos oportunistas envolvidos na patogenia da crie dental ou em doenas periodontais. Assim condies que favoream microrganismos capazes de proliferar em baixos pHs (por exemplo: estreptococcus do grupo mutans e lactobacilos) esto associados desmineralizao progressiva dos dentes, e conseqente desenvolvimento de leses de crie. Por outro lado, o acmulo prolongado de placa nas margens gengivais causam inflamao gengival pela ao mais exacerbada do sistema imune local e favorece o crescimento de microrganismos anaerbios estritos, incluindo bactrias proteolticas (por exemplo: Porphyromonas spp., Prevotella spp., Treponema spp.) que promovem destruio dos tecidos periodontais e ativam mecanismos imunolgicos que agridem o prprio tecido periodontal. Alm das proteases produzidas por estes microrganismos, os produtos da prpria reao inflamatria so responsveis pelo dano do periodonto. Durante a inflamao, o pH da placa subgengival varia de neutro a pHs mais bsicos, por volta de 7,5 (8). Estes pHs alcalinos favorecem o crescimento de bactrias periodontopatognicas anaerbias, Gram-negativas, como Prevotella intermedia e Porphyromonas gingivalis. Alm disto, o fludo crevicular aumenta em volume em decorrncia do processo inflamatrio. Por ser rico em protenas, este fludo passa ser uma fonte rica em nutrientes para as bactrias proteolticas, favorecendo o crescimento das espcies periodontopatognicas, os quais aumentam em proporo na placa dental bacteriana (9). A Figura 5 ilustra a evoluo de uma placa dental associada sade para uma placa dental patognica. Na prxima apostila, vamos estudar em detalhes os fatores associados ao estabelecimento de uma placa dental associada crie dentria.

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Presses Ecolgicas ambientais

superfcie dentria
Placa dental associada sade
(maiores nveis de microrganismos comensais)

superfcie dentria
Placa dental associada doena
(maiores nveis de microrganismos patognicos)

Figura 5. Relao entre os nveis de patgenos da placa dental associada sade e doena periodontal. Bactrias em cinza representam as espcies patognicas. As bactrias comensais so representadas em branco. Observe que os nveis de microrganismos comensais maior nas placas dentrias compatveis com a sade, embora microrganismos patognicos possam existir em baixos nveis. Presses ecolgicas podem favorecer a proliferao de microrganismos patognicos, o que promove o desenvolvimento de uma placa dental patognica. Figura adaptada de P.D. Marsh. Microbiology 149: 279-294, 2003 (9).

Agradecimentos
A elaborao desta apostila contou com a colaborao do aluno do Curso de Graduao em Odontologia da FOP-UNICAMP, Leandro Moraes Furlan (RA 24277).

15 Referncias Bibliogrficas 1. Alberts, B, A. Johnson, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts, and P. Walter. 2002. IV. Internal Organization of the Cell -> 14. Energy Conversion: Mitochondria and Chloroplasts -> Electron-Transport Chains and Their Proton Pumps, In Alberts, B, A. Johnson, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts, and P. Walter (eds.), Garland Publishing, New York. Bowden, G. H. and I. R. Hamilton. 1998. Survival of oral bacteria. Crit Rev.Oral Biol.Med. 9:54-85. Costerton, J. W., P. S. Stewart, and E. P. Greenberg. 1999. Bacterial biofilms: a common cause of persistent infections. Science 284:1318-1322. DuPont, G. A. 1997. Understanding dental plaque; biofilm dynamics. J.Vet.Dent. 14:91-94. Gronroos, L., M. Saarela, J. Matto, U. Tanner-Salo, A. Vuorela, and S. Alaluusua. 1998. Mutacin production by Streptococcus mutans may promote transmission of bacteria from mother to child. Infect.Immun. 66:2595-2600. Kenney, E. B. and M. M. Ash, Jr. 1969. Oxidation reduction potential of developing plaque, periodontal pockets and gingival sulci. J.Periodontol. 40:630-633. Kolenbrander, P. E. and J. London. 1993. Adhere today, here tomorrow: oral bacterial adherence. J.Bacteriol. 175:3247-3252. Marcotte, H. and M. C. Lavoie. 1998. Oral microbial ecology and the role of salivary immunoglobulin A. Microbiol.Mol.Biol.Rev. 62:71-109. Marsh, P. D. 2003. Are dental diseases examples of ecological catastrophes? Microbiology 149:279-294. per Axelsson, A. 1991. A four-point scale for selection of caries risk patients, based on salivary S. mutans levels and plaque formation rate index., p. 159-171. In N. W. Johnson (ed.), Risk marker for oral disease. Cambridge University, New York. Podbielski, A. and B. Kreikemeyer. 2004. Cell density--dependent regulation: basic principles and effects on the virulence of Gram-positive cocci. Int.J.Infect.Dis. 8:8195. Shearer, B. G. 1996. Biofilm and the dental office. J.Am.Dent.Assoc. 127:181-189.

2. 3. 4. 5.

6. 7. 8. 9. 10.

11.

12.

13. Thylstrup, A. and O. Fejerskov. 1995. Cariologia clnica. Editora Santos, So Paulo. 14. Vendeville, A., K. Winzer, K. Heurlier, C. M. Tang, and K. R. Hardie. 2005. Making 'sense' of metabolism: autoinducer-2, LuxS and pathogenic bacteria. Nat.Rev.Microbiol. 3:383-396.

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Glossrio Heme: subunidade da molcula de hemoglobina que consiste de uma parte orgnica e um tomo de ferro. A parte orgnica formada por 4 anis, os quais se ligam formando um tetraestrutura. O tomo de ferro fica no centro da estrutura tetra e se liga ao oxignio. Hemina: forma qumica de heme, na qual o tomo de ferro se torna frrico (reativo com cloro. Tambm chamado de cloreto de hemina, cloreto de hematina, cloro-hemina, fator X de Haemophilus. Mutualismo: Relao entre dois organismos distintos, na qual ambos so beneficiados.