ANALIZA TOXICOLOGIC A DROGURILOR

OPIOIDE

Compui relevani pentru evidenierea consumului:

Heroina Morfina 6-monoacetilmorfina Codeina Acetilcodeina Morfin-O-glucuronidele (M-3-G, M-6-G, morfin-3,6-O-diglucuronida)

MORFINA

Doza medie terapeutic: 5-10 mg/70 kg (s.c. sau i.m.) Doza medie utilizat ilicit: 10-20 mg Biodisponibilitatea: 15-64% - efect intens al primului pasaj hepatic

MORFINA: ci metabolice
CH3 N N H Gluc O O Morfin-3-glucuronida OH HO O Normorfina (5%) efect neurotoxic CH3 N OH

Codeina

HO

O Morfina

OH

CH3 N N

CH3

Gluc HO O Morfinona efect toxic N O CH3 HO O Morfin-6-glucuronida O

HO3SO

OH Morfin-3-sulfat

MORFINA: eliminare

10% morfin liber timp de 72 ore 75%: M-3-G Cantiti mici de ali metabolii conjugai Consum de alimente ce conin semine de mac concentraii n ser: 0,1 mg/l morfin i 0,007 mg/l codein concentraii n urin: 4,5 mg/l morfin i 0,2 mg/l codein

HEROINA

Doze la toxicomanii tolerani: pn la 250 mg/zi i.v. sau prizare T snge = 20 minute

HEROINA: ci metabolice
CH3 N Heroina (diacetilmorfina) CH3COO t 1/2 = 9 min O OCOCH3 esteraze sanguine CH3 N

6-monoacetilmorfina OCOCH3 Ficat CH3 N

HO t 1/2 = 38 min

Morfina

conjugare 90% la glucuronide

HO

OH

HEROINA: eliminare

Urin: 20-40 ore de la administrare

M-3-G: 38,2% din doz Morfin liber: 4,2% din doz 6-monoacetil morfin (MAM): 1,3% Heroin nemodificat: 0,1% din doz Metabolii minori: alte glucuronide ale morfinei, normorfina Codein deacetilarea acetilcodeinei (impuritate n heroina ilicit)

HEROINA: indicatori ai consumului

Determinarea morfinei n urin

Cazuri fatale nivele de 86 g/ml

Determinarea MAM (t 0,6 ore) n urin: timp de detecie de 2-8 ore

Se poate determina i n alte matrici: pr, sudoare, saliv (apare dup cteva min de la adm i.v. n conc. > plasm) MAM/morfin > 1 n saliv indic utilizarea heroinei n ultima or nainte de colectarea probei

CODEINA
Doze orale zilnice ntre 60 i 240 mg

CODEINA: ci metabolice
CH3 N N H

CH3O

O Codeina

OH

CH3O

O Norcodeina

OH

CH3 N N

CH3

HO

O Morfina

OH

CH3O

O Codein-6-glucuronida

O Gluc

CODEINA: eliminare

Codein liber n urina de 24 ore: 10% din doz Codein glucuronoconjugat: 32-46% din doz Morfin conjugat n urina din 24 ore: 5-13% din doz Norcodein conjugat: 10-21% din doz Urme: morfin i norcodein libere

CODEINA: nivele plasmatice

Dup 60 mg codein fosfat 0,135 mg/l codein (1 h) i 0,007 mg/l morfin (1,5 h) Intoxicaii letale: conc. plasmatice 1-9 mg/l codein (48 mg/l) n cazul identificrii morfinei n urin sau snge, trebuie exclus ingestia codeinei

OPIACEE: interpretare analize

Pot fi detectate n urin pn la 3 zile Concentraiile urinare depind de: metabolism, starea fizic, aportul de fluide, modul de administrare Prezena morfinei n urin nu indic opiaceul consumat n caz de dubii, determinarea compusului printe sau a altor metabolii majori pot da informaii preioase (ex. MAM) Codeina total/morfina total 0,5 i conc. morfin > 200 ng/ml codeina poate fi exclus ca surs a morfinei

HEROIN: pregtirea probelor

Pretirea pentru metodele imunochimice: eventual ajustarea pHului i centrifugarea urinei

Pregtirea pentru cromatografie:

Hidroliza: acid, enzimatic Atenie: pot dezacetila MAM la morfin Extracia: L-L (pH = 8,5-9), EFS (C18)

HEROIN: analiza toxicologic

Screening:
Metode imunochimice CSS

Confirmare:
GC derivatizare cu BSTFA, BSA GC-MS HPLC: detecie UV (218 nm)m fluorescen, electrochimic MAM: analiz GC-MS

COCAINA

Doze medii utilizate:

10-35 mg/linie - prizare 10-20 mg injectare 50-200 mg inhalare crack

Compui de referin pentru analiz:

Cocaina Benzoilecgonina Esterul metilic al ecgoninei ecgonina

COCAINA: ci metabolice
COOCH3 H O N COC6H5 Norcocain-N-oxid hepatotoxic

Norcocaina

COOCH3 CH3 O N COC6H5 hidroliza neenzimatica N CH3

COOH O COC6H5 Benzoilecgonina (40%)

Cocaina

hidroliza enzimatica COOCH3 CH3 OH N N CH3 OH COOH

Esterul metilic al ecgoninei (30-50%)

Ecgonina

COCAINA: eliminare

T = 4-5 ore In urin

Cocaina nemodificat: 1-9% din doz Benzoilecgonina: 35-54% din doz Esterul metilic al ecgoninei: 32-49%

Timp de detecie:
Doz unic: 24 ore cocaina, 48 ore metaboliii Administrare cronic: 5 zile sau mai mult

Alte probe: prul, saliva

COCAINA: biodisponibilitate

Crack: BD = 70%
Stare de high mai accentuat comparativ cu i.v. (bolus cocain)

Prizare: BD = 94%
Pic concentraii sczut fa de calea inhalatorie sau i.v. conc,. plasmatice ale benzoilecgoninei > comparativ cu calea inhalatorie

COCAINA: concentraii

Doze terapeutice: conc. plasmatice de 0,5 g/ml pentru cocain i 0,1 g/ml pentru benzoilecgonin Supradozare: conc. plasmatice de 1-20 g/ml pentru cocain i 1-10 g/ml pentru benzoilecgonin

COCAINA: pregtirea probelor

Precauii: probele vor fi pstrate la rece i

la ntuneric, iar pH-ul ajustat la 5 pt. a evita hidroliza

Pregtirea probelor pentru analiza imunochimic: centrifugare, ajustarea

probelor la pH 6,5-8

Pregtirea probelor pentru cromatografie:

Extracia L-L (pH 9) EFS: Extrelut (pmnt de diatomee), C18, coloane pe baz de ciclodextran

COCAINA: analiza toxicologic

Screening:
Metode imunochimice CSS

Confirmare:
GC derivatizare: acilare, sililare (MSTFA) GC-MS HPLC: detecie UV, coloan C18

AMFETAMINE

Doze (oral, prizare): 5-15 mg utilizatori ocazionali; 100-2000 mg/zi utilizatori dependeni T eliminare: 8-12 ore Amfetamina i metamfetamina apar n urin dup 20 min de la administrare

AMFETAMINA: ci metabolice
OH NH2 NHOH Glucuronosi sulfoconjugati Norefedrina

beta-hidroxilare

N-oxidare

NH2 p-hidroxilare Amfetamina HO

NH2 Glucuronosi sulfoconjugati 4-Hidroxi-amfetamina

dezaminare oxidativa

O COOH N H COOH

Fenilacetona

Acid benzoic

Acid hipuric

AMFETAMINA: eliminare

Nemodificat: 20-30% din doz Metabolii deaminai (acid hipuric, acid benzoic) Metabolii hidroxilai, parial conjugai Viteza de excreie i fraciunea nemodificat depind de pH urin:
Urin alcalin: 45% (24h) 2% nemodificat Urin acid: 78% (24 h) 68% nemodificat

METAMFETAMINA: ci metabolice
H N CH3 HO 4-Hidroxi-metamfetamina Hidroxilare aromatica H N CH3 Metamfetamina

N-oxidare

NH 2

Amfetamina

METAMFETAMINA: eliminare

Nemodificat: 44% Amfetamin: 6-20% 4-hidroxiamfetamin: 10% Urina acid crete viteza de excreie i procentul de substan nemodificat i alte probe biologice: snge,

sudoare, lapte, pr, unghii

AMFETAMINE: interpretare

Conc. urinare dup administrare cronic: 1-90 g/ml (amfetamin) 25-300 g/ml (metamfetamin) 90% din doza de amfetamin excretat n 3-4 zile Un test pozitiv pentru amfetamin indic utilizarea n ultimele 24-48 ore

AMFETAMINE: pregtirea probelor

Precauii: risc de volatilizare a bazelor

libere n timpul evaporrii probelor

Pregtirea probelor pentru analiza imunochimic: ajustarea pH-ului i

centrifugarea urinei

Pregtirea probelor pentru cromatografie:

Extracie L-L pH alcalin EFS: pmnt de diatomee, silicagel substituit (C18), rini schimbtoare de cationi

AMFETAMINE: analiza toxicologic

Screening:
Metode imunochimice CSS Reacii de culoare (reactiv Simons modificat)

Confirmare:
GC: derivatizare cu HFBA, TFAA, MTBSTFA, fr derivatizare GC-MS HPLC: coloan C18, detector UV, electrochimic

AMFETAMINE SUBSTITUITE

Administrare: oral, i.v., inhalare Doze uzuale: 80-125 mg Metabolizare insuficient cunoscut prin:
N-dealchilare Deaminare Oxidare la catena lateral Clivaj oxidativ al ciclului metilendioxi

AMFETAMINE SUBSTITUITE

Analii int: compuii printe n snge sau urin Concentraii la decedai:

MDMA: 0,9-2 g/ml n snge MDA: 2,3-26 g/ml n snge i 46-175 g/ml n urin

AMFETAMINE SUBSTITUITE: pregtirea probelor

Precauii: risc de pierdere a bazelor libere n

timpul evaporrii solventului

Pregtirea probelor pentru metodele imunochimice: ajustarea pH, centrifugarea

urinei

Pregtirea probelor pentru metodele cromatografice:

Hidroliza (metaboliii hidroxilai) Extracia: EFS (C18 + schimbtori de cationi)

AMFETAMINE SUBSTITUITE: analiza toxicologic

Screening:
Metode imunochimice (nespecifice) CSS

Confirmare:
GC derivatizare cu HFBA, TFAA, fr derivatizare GC-MS HPLC: coloan C18, detector UV, electrochimic

CANNABIS

Doze fumate: 0,5-1 g material vegetal Compusul activ: THC metabolizat n proporie ridicat ( 1% se regsete n urin)

THC: ci metabolice
CH2OH OH H OH H O H O 9-THC 11-Hidroxi- -THC
9

OH

COOH

OH H

H O COO-Glucuronida Acid 11-Nor-9-THC-9-Carboxilic O-Glucuronida H

H O Mono-/Di-glucuronida 9-carboxi THC

THC: eliminare

50% din doza se elimin n 72 ore, restul reinut n esutul adipos Excreie prin: urin (25%) fecale (65%) T > 20 ore Indicator consum = metabolitul acid major, 9-carboxi-THC

THC: indicatori consum

Utilizatori ocazionali ( 2 ori/sptmn): 9-carboxi-THC detectat n urin timp de 13 zile Utilizatori cronici: timp de detecie de o sptmn sau mai mult

9-CARBOXI-THC: pregtirea probelor

Precauii: degradare termic chiar la

temperatura camerei

Pregtirea probelor pentru cromatografie:

Hidroliz alcalin sau enzimatic Extracia: L-L (pH 2), EFS (C18)

9-CARBOXI-THC: analiza toxicologic

Screening:
Metode imunochimice CSS (silicagel cu aditiv de fluorescen, vizualizare reactiv Fast Blue B)

Confirmare:
GC derivatizare cu BSTFA, TMCS, MSTFA GC-MS derivatizare HPLC (coloan C8, detecie UV, electrochimic)