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UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAU - UFPI CENTRO DE CINCIAS DA SADE CCS DEPARTAMENTO DE BIOQUMICA E FARMACOLOGIA DISCIPLINA: BIOQUMICA PARA FARMCIA

A PROFESSORA: MARIA DAS GRAAS CASTELO BRANCO SOARES

RELATRIO DA PRTICA DE BIOQUMICA REAES DE CARACTERIZAO DOS GLICDIOS

COMPONENTES: FELIPE CARDOSO 09S14272 PLNIO REIS 09S14400 MARCOS VENCIO 09S142370 AMADEUS NETO 09S14213 MATEUS A. C. DE CARVALHO 09S14388

TERESINA, MARO DE 2010

RESUMO Nos experimentos desenvolvidos, as caractersticas dos carboidratos, foram postas em evidncia a partir de reaes de caracterizao desses compostos. Utilizou- se reagentes para identificao de glicdios, tais como, reagente de Molish, reao como iodo e levando em considerao os carboidratos redutores, foi utilizado o reativo de Benedict para identific-los A reao de Seliwanoff foi aplicada para diferenciao entre aldoses e cetoses e finalmente realizou-se a hidrlise de dissacardeos e polissacardeos com cido sulfrico quente. Os resultados obtidos denotam as diversas propriedades qumicas dos acares.

INTRODUO Os carboidratos so poliidroxialdedos ou poliidroxicetonas ou substncias que liberam estes compostos por hidrlise. Eles so as biomolculas mais abundantes na face da Terra. Segundo LEHNINGER (2006), os glicdios esto divididos em trs classes principais, de acordo com o seu tamanho: monossacardios, oligossacardios e polissacardios. Os monossacardios, ou acares simples, consistem de uma nica unidade de poliidroxialdedo ou poliidroxicetona. O monossacardio mais abundante na natureza o acar com seis tomos de carbono na molcula, a D-glicose, tambm chamada de dextrose. Os oligossacardios so compostos por cadeias curtas de unidades monossacardicas, ou resduos, unidos entre si por ligaes caractersticas, chamadas ligaes glicosdicas. Os mais abundantes so os dissacardios, formados por duas unidades de monossacardios. A sacarose ou acar de cana o representante tpico desta classe. Ela composta por dois monossacardios, D-glicose e D-frutose (LEHNINGER, 2006). Os polissacardios so polmeros que contm mais de unidades de monossacardios e podem ter cadeias contendo centenas ou milhares de unidades monossacardicas. Alguns, como a celulose, tm cadeias lineares, enquanto outros, como o glicognio, tm cadeias ramificadas. Glicognio e celulose consistem de unidades repetitivas de D-glicose, mas eles diferem entre si no tipo de ligao glicosdica e consequentimente tm propriedades e funes biolgicas diferentes (LEHNINGER, 2006). O presente trabalho tem por objetivo demonstrar as reaes de caracterizao de glicdios (tais como teste de Molisch, reao de iodo, reao de Benedict, reao de Seliwanoff, hidrlise da sacarose, e hidrlise do amido), e comparar os dados adquiridos no experimento com os da literatura.

METODOLOGIA Na primeira etapa da prtica realizou-se a identificao de glicdeos. No teste de Molish foram utilizados quatro tubos de ensaio (A, B, C e D) contendo respectivamente 1 ml de gua destilada, 1ml de soluo de glicose 1%, 1 ml de soluo de sacarose 1%, 1ml de soluo de amido 1%. Colocou-se em cada tubo 2 gotas de reagente de Molish,agitou-se bem e adicionou-se cuidadosamente 1 ml de cido sulfrico concentrado sem agitao. No segundo experimento para a verificao de carboidratos foi feita a reao com iodo utilizando os mesmos compostos e medidas da primeira etapa, mas posteriormente fez-se o uso do reagente de Lugol, misturando duas gotas do reagente em cada tubo de ensaio e observou-se a reao, e em seguida aqueceu-se ligeiramente em banho-maria o tubo D at mudar a colorao, posteriormente o tubo foi resfriado em gua corrente observando o retorno da colorao inicial. Na segunda etapa foi empregado o reagente de Benedict para identificar acares redutores. Preparou-se quatro tubos de ensaio nomeados A, B, C e D cada um contendo respectivamente 1 ml de gua destilada, 1 ml de soluo de glicose 1%, 1 ml de frutose 1 % e 1 ml de soluo de amido, em cada vidraria foi adicionado 1 ml do reativo de Benedict aquecendo posteriormente em banho-maria por 3 minutos. Neste experimento foram observados quais acares so redutores a partir da mudana de colorao da soluo. Na terceira etapa fez-se uso do reagente de Seliwanoff para a diferenciao entre aldoses e cetoses. Neste procedimento foram utilizadas as mesmas vidrarias das prticas anteriores, nomeadas A, B, C e D, cada uma contendo 3 ml deste reativo, em seguida foi adicionado respectivamente em cada tubo de ensaio, 5 gotas de gua destilada, 5 gotas de soluo de frutose 1%. As misturas foram colocadas em banho-maria e observadas a cada 3 minutos durante 10 minutos. Na quarta etapa da prtica foi realizada a hidrlise de dissacardeos e polissacardeos. Inicialmente foi hidrolisada a sacarose. Neste experimento usou-se dois tubos de ensaio, A e

B, contendo cada um 2 ml de sacarose 1%, colocou-se respectivamente nos tubos 3 gotas de acido sulfrico concentrado e 3 gotas de gua destilada, submetendo as vidrarias ao banhomaria por 3 minutos e em seguida adicionou-se a cada tubo 3 ml do reativo de Benedict e foi recolocado no banho-maria, aps 3 minutos foram retirados e colhidos os resultados. Na hidrlise de amido utilizou-se um erlenmeyer contendo 30 ml de soluo de amido a 1 % e 6 ml de acido clordrico, adicionou-se a 7 tubos de ensaio, nomeadas de A a G, 3ml da mistura acima. No tubo A foi adicionado uma gota do reativo de Lugol, os tubos restantes foram colocados em banho-maria. Os tubos de ensaio foram retiradas do banho-maria, a contar do B, respectivamente em 5,10,15,20,e 25 minutos os tubos contendo os compostos, em 30 minutos foi retirado o tubo G onde adicionou-se 3 ml do reativo de Benedict e retornou-o ao banhomaria por mais 3 minutos.Neste ltimo experimento foi identificada a presena de amido, amilodextrina eritrodextrina, acrodextrina e glicose na hidrlise do amido

DISCUSSO Identificao de Glicdios A reao de Molish utilizada para pesquisa de carboidratos em geral. O mecanismo da reao baseia-se na formao de furfural e hidroximetil-furfural pela ao de um cido forte sobre uma pentose e hexose, respectivamente. Os compostos furfricos reagem com o -naftol formando um produto de condensao colorido. Foi pipetado o reagente de Molish em quatro tubos, ocorrendo a formao de um anel, de colorao violeta, na interface dos lquidos contidos nos tubos B, C e D em ordem de intensidade crescente, respectivamente, devido a presena de carboidratos diferentes nesses tubos. O tubo B contendo Glicose garantiu menor colorao devido formao de uma quantidade menor de compostos que reagem com o -naftol, a sacarose possuiu colorao mediana e o amido colorao mais intensa devida o motivo contrrio a glicose. No tubo A no houve reao, pois continha apenas gua destilada. A reao de Iodo utilizada para a pesquisa do amido, que forma um complexo colorido com o iodo; a amilose d origem a uma colorao negro-azulada, enquanto a amilopectina d origem a uma colorao vermelho-violcea. O reagente de Lugol no qual contm Iodo fora utilizado na reao de identificao de glicdios, especificamente o amido. Nos tubos A, B e C que continham gua destilada, glicose e sacarose, respectivamente no se observou formao de colorao diferente da amarela, caracterstica do Lugol (mono e dissacardeos no produzem colorao com iodo). No tubo D que continha Amido se constatou formao de um complexo de cor roxo, produto de uma interao entre a colorao indicativa da presena de amilose e de amilopectina. Com o aquecimento do tubo D o lquido contido no tudo se tornou incolor, fato ocorrido devido desnaturao reversvel do amido tornando a interao do iodo com o polissacardio nula. Aps o resfriamento da soluo, em gua corrente, observou-se que o amido recuperou a propriedade de interagir com o iodo formando novamente um complexo de cor roxo.

Identificao de Glicdios Redutores Na identificao de Glicdios que possuem grupamento glicosdico livre (hidroxila anomrica livre) utilizado amplamente o reativo de Benedict [Cu (OH)2] que consiste, basicamente, de uma soluo de sulfato cprico em meio alcalino (com muitos ons OH-); e pode ser preparado atravs do carbonato de sdio, citrato de sdio e sulfato cprico. Esses glicdios reduzem o Cu++ em meio alcalino, quente. Nos tubos B, C e D devido presena de Glicdios redutores sendo, respectivamente glicose, frutose e amido; obtemos colorao vermelha caracterstica da reao. No tubo A contendo gua destilada no ocorre reao, por isso apresenta uma colorao Azul caracterstica do prprio reativo. Diferenciao entre aldoses e cetoses O reagente de Seliwanoff contm resorcinol diludo na presena de HCl, a quente. Essa reao utilizada para diferenciar aldoses de cetoses, que sobre ao desidratante do acido clordrico so transformadas em derivados de furfural, que se condensam com o resorcinol formando com as aldoses colorao laranja mais lentamente e as cetoses mais rapidamente. No tubo A contendo gua destilada no ocorre reao ficando transparente. No tubo B contendo frutose, que uma cetose, ocorre formao de colorao laranja que fica visualmente constante com o passar do aquecimento da reao. No tubo C contendo Glicose, que uma aldose, na reao forma 5-hidroximetil-furfural e gua com colorao transparente. No tubo D contendo sacarose, que um dissacardeo composto por glicose e frutose, se obtm colorao laranja que fica mais intenso com o passar do aquecimento da reao. Hidrlise de Di e Polissacardeos Hidrlise da sacarose A sacarose composta por uma molcula de -D-glicose e uma de -D-frutose, tendo os tomos de carbono C1 da glicose e C2 da frutose participando na ligao glicosdica. O seu nome sistemtico -D-glucopiranosil-(12)--D-fructofuranose (abreviado Glc(12)Fru). A sacarose um acar no redutor, pois ambos os grupos qumicos de natureza redutora dos monmeros que a constitui participam na ligao glicosdica. Assim, a sacarose no pode formar polmeros. A ligao glicosdica pode ser hidrolisada, mas muito estvel: uma soluo aquosa de sacarose se mantm estvel durante vrios anos.

No tubo A foi reagido sacarose com cido sulfrico concentrado ocorrendo a hidrolise cida (A hidrlise cida da sacarose octometilada fornece 2,3,4,6-tetra-O-metil-D-glicose e 1,3,4,6-tetra-O-metil-D-frutose) produzindo glicose e frutose que conferiu colorao vermelho tijolo ao composto. No tubo B foi reagida gua destilada com a sacarose, produzindo tambm glicose e frutose, mas com colorao vermelho tijolo mais intenso devido menor quebra da sacarose. A sacarose por no ser acar redutor no reage com o reativo de Benedict em nenhum dos tubos. Hidrlise do amido O amido uma mistura de dois polissacardeos, amilose e amilopectina, polmeros de glicose formados atravs de sntese por desidratao (a cada ligao de duas glicoses, no caso, h a "liberao" de uma molcula de gua). Na reao de hidrlise do amido foi inicialmente reagido o amido com o cido clordrico, quente de onde foram extradas dextrinas (amilo, eritro e acrodextrinas), maltose e glicose como produto final. As dextrinas so obtidas a partir do rompimento cido das ligaes -1,4 da amilopectina. O reagente de Lugol usado posteriormente para classificar os tipos de dextrinas extradas da reao, atravs das reaes coloridas especificas que ocorrem na presena de iodo, como representado a seguir:
amido amilodextrina eritrodextrina acrodextrina + lugol + lugol + lugol + lugol cor azul cor roxa cor vermelha incolor

A partir das reaes com Lugol com aquecimento constante 100oC com observaes em perodos de tempos regulados foram identificados os seguintes resultados: Com a colocao do reativo de Benedict devido a presena de maltose que redutor ocorre a reao formando a colorao vermelho tijolo.

RESULTADOS TABELA 1.0: REGISTRO DOS SINAIS OBSERVADOS NA INTERFACE DAS SOLUES APS A REAO COM REAGENTE DE MOLISH CONTEDO DOS TUBOS DE COR COM O REAGENTE DE MOLISH

ENSAIO (FORMAO DO ANEL) A- 1 ML GUA DESTILADA LARANJA CLARO (cor do reagente) B- 1 ML SOLUO DE VIOLETA GLICOSE 1% C- 1 ML SOLUO DE VIOLETA

SACAROSE 1% D- 1 ML SOLUO DE AMIDO VIOLETA 1%

TABELA 2.0: REGISTRO DOS SINAIS OBSERVADOS NAS SOLUES APS A REAO COM IODO. CONTEDO DOS TUBOS DE ENSAIO COR APS REAO COM O IODO

A- 1 ML GUA DESTLADA AMARELO (nenhuma reao observada) B- 1 ML SOLUO DE GLICOSE 1% AMARELO (nenhuma reao observada) C- 1 ML SOLUO DE SACAROSE AMARELO (nenhuma reao observada) 1% DE- 1 ML SOLUO DE AMIDO 1%
AMBIENTE AQUECIMENTO RESFRIAMENTO

ROXO

AMARELOESVERDEADO

ROXO

TABELA 3.0: REGISTRO DA OCORRNCIA DE REAES DE IDENTIFICAO DE GLICDIOS REDUTORES. CONTEDO DOS TUBOS DE TEMPO DE COR OBSERVADA AZUL VERMELHO TIJOLO VERMELHO TIJOLO VERMELHO TIJOLO(menos intensa)

ENSAIO AQUECIMENTO A- 1 ML GUA DESTILADA 3 B- 1 ML SOLUO DE 3 GLICOSE 1% C- 1 ML SOLUO DE 3

FRUTOSE 1% D- 1 ML SOLUO DE AMIDO 3 1%

TABELA 4.0: REGISTRO DE OCORRNCIA DE REES DE DIFERENCIAO ENTRE ALDOSES E CETOSES CONTEDO DOS TUBOS 6 MINUTOS INCOLOR 9 MINUTOS INCOLOR COR COM REAGENTE DE SELIWANOFF

3 MINUTOS ENSAIO A- 3 ML DE INCOLOR SELIWAN OFF + 5 GOTAS DE GUA DESTILAD A B- 3 ML DE LARANJA SELIWAN OFF DE FRUTOSE 1% C- 3 ML DE LARANJA SELIWAN OFF DE SOLUO DE GLICOSE 1% D- 3 ML DE LARANJA SELIWAN OFF DE SOLUO + 5 GOTAS + 5 GOTAS + 5 GOTAS

VERMELHO

VERMELHO INTENSO

VERMELHO

VERMELHO INTENSO

VERMELHO

VERMELHO INTENSO

DE SACAROS E 1%

TABELA 5.0: REGISTRO DA OCORRNCIA DE HIDRLISE DA SACAROSE CONTEDOS TUBOS DE ENSAIO 1% + 3 GOTAS DE CIDO SULFRICO COCENTRADO B- 2 ML DE SACAROSE AZUL 1% + 3 GOTAS DE GUA DESTILADA DOS COR DA SOLUO APS 3 MINUTOS EM BANHOMARIA + 3 ML DO REATIVO DE BENEDICT

A- 2 ML DE SACAROSE VERMELHO TIJOLO

TABELA 6.0: REGISTRO DE OCORRNCIA DE HIDRLISE DO AMIDO TUBO A B C D E F TEMPO DE COR COM O REATIVO PRODUTO DE LUGOL AZUL ROXO ROXO - AVERMELHADO VERMELHO VERMELHO - AMARELO AMARELO BEM CLARO IDENTIFICADO AMIDO AMILODEXTRINA AMILODEXTRINA ERITRODEXTRINA ERITRODEXTRINA ERITRODEXTRINA E ACRODEXTRINA ACRODEXTRINA E REAO (MIN) 0 5 10 15 20 25

ERITRODEXTRINA COR COM O REATIVO DE BENEDICT G 30 VERMELHO TIJOLO

FONTE: Laboratrio de Bioqumica da UFPI, Alunos de Farmcia, 2010.2, Teresina.

CONCLUSO Diante dos aspectos aferidos nos experimentos, puderam ser identificadas algumas caractersticas qumicas dos carboidratos atravs de testes inespecficos como o de Molish e por meio de reagentes que interagem com glicdios especficos. Dentre estes reativos que reagem com carboidratados especficos, o iodo foi utilizado para identificar amido. J para a caracterizao de glicdios redutores e diferenciao entre aldoses e cetoses fora usados, respectivamente, reativo de Benedict e reagente de Seliwanoff. O reagente de Benedict foi novamente empregado, porm na identificao dos produtos da hidrlise da sacarose e do amido, identificao evidenciada a partir da interao dos produtos de hidrlise destes acares com o reagente de Benedict gerando cores caractersticas.

REFERNCIAS NELSON, David L.; COX, Michael M. Princpios de bioqumica. 4 ed. So Paulo: Sarvier, 2006.p. 236. http://pt.wikipedia.org/wiki/Reagente_de_Benedict Acessado em 28/03/2010 s 8:40 http://pt.wikibooks.org/wiki/Bioquimica/Oligossacarideos Acessado em 28/03/2010 s 8:56