CRESCIMENTO MICROBIANO

em suspenso em meio lquido

Fases da diviso celular fisso binria (p.ex. E.coli)

Microscopia de contraste de fase Microscopia de fluorescncia (colorao do nucleide com DAPI) Deteco das protenas que formam o anel FtsZ)

(combinao de coloraes nucleide e anel FtsZ)

- Anel proteico (~10000 molculas FtsZ) no centro da clula, quando comea a segregao dos dois nucleides (DNA). Fts Filamentous temperature sensitive - Proteinas Fts do anel proteico divisoma (no centro da clula em diviso; orquestra sntese da membrana plasmtica e da parede celular durante enlongamento da clula, seguindo-se constrio para formar o septo e separao das clulas).

Ciclo celular (ex. Eschericia coli)

Fase C

Fase D

E. coli
Tempo de gerao mdio, em condies ptimas ~ 25 minutos

EXPERINCIA DE CRESCIMENTO DE UMA POPULAO MICROBIANA EM SUSPENSO EM MEIO LIQUIDO

1. INOCULAO

A B

2. INCUBAO COM AGITAO ORBITAL CONSTANTE E TEMPERATURA CONTROLADA

3. DETERMINAO DA CONCENTRAO DE CLULAS, AO LONGO DO TEMPO

CRESCIMENTO EXPONENCIAL
Imagine que arranja uma forma de manter uma populao de clulas de E. coli em crescimento exponencial durante 24 horas. Se partir de uma nica clula, estime quantas clulas obteria aps esse perodo de 24 horas.

Escherichia coli tempo de duplicao ~ 25 minutos

24 horas 57 duplicaes 1 clula

(10-12 gramas) = 140.737.488.400.000.000 clulas (~1,4 x 1017) ~ 144 Kg de biomassa

Evoluo da concentrao de clulas da populao microbiana

CRESCIMENTO EXPONENCIAL

(http://www.e-escola.utl.pt)

[clulas] [clulas]

1 N0

21 N0. 21

22 N0.22

2n

(aps n geraes)

N0.2n (aps n geraes)

Concentrao de clulas no incio da fase de crescimento exponencial log Nt - log N0 log 2

Concentrao de clulas aps um periodo de tempo t de crescimento exponencial - Nt. n - n de geraes ocorridas durante o perodo t de crescimento exponencial

Nt = N0.2n

n =

g=t/n

g o tempo de duplicao (ou, de gerao) (min ou h)

Representao grfica do crescimento exponencial

Cintica do crescimento exponencial Escala logaritmica

Representao matemtica (fase exponencial)

Fase exponencial

dNt dt

-taxa especfica
= .Nt de crescimento da populao microbiana

Equivalente a lnNt = lnN0 + (t-t0) (1)

Ou Nt = N0 e

(t-t0)

N,

N0

g t0
Prescott, Harley & Klein, Microbiology, th edition,Mc GrawHill, 2002

Crescimento exponencial equilibrado clulas completamente adaptadas s condies de crescimento N pode representar: - Concentrao de clulas, N; - Densidade ptica da cultura, DO; - concentrao de biomassa, X, - concentrao de qualquer componente celular (p.ex. proteinas)

Estimativa da taxa especfica de crescimento da populao,

A equao que representa o crescimento exponencial de uma populao microbiana corresponde equao de uma recta ( onde y = lnNt , x = (t-t0))

ln Nt = lnN0 + (t-t0) (1)

y = b + ax

a - declive (= ) b ordenada na origem (= ln N0)

- taxa especfica de crescimento da populao microbiana (o valor de corresponde ao declive da recta lnNt vs. (t-t0))

Unidades : tempo-1 (h-1; min-1)

Estimativa do tempo de duplicao da populao, g

Substituindo na equao (1) (t-t0) = g quando Nt = 2.N0 g= ln 2

(h; min)

OBTENO DA CURVA DE CRESCIMENTO DA POPULAO MICROBIANA MTODOS PARA AVALIAR A CONCENTRAO DE CLULAS NUMA POPULAO MICROBIANA

Contagem de clulas viveis (N)

- Mtodo das diluies sucessivas e espalhamento em meio slido

Mtodo espectrofotomtrico (DO)

Determinao da massa celular (biomassa, X) Contagem directa de clulas Cmaras de contagem (microscpio ptico) Contadores electrnicos

CONTAGEM DE CLULAS VIVEIS [expresso em UFC (Unidades Formadoras de Colnias) por ml de suspenso] Mtodo das diluies sucessivas e espalhamento em meio slido

As placas devem ter entre ~ 20 e 300 colnias

N = 1.59 x 105 UFC / ml

DETERMINAO ESPECTROFOTOMTRICA DA DENSIDADE CELULAR (Densidade Optica DO - medida a um comprimento de onda, , particular)

I0 intensidade de luz incidente ( particular) I intensidade de luz transmitida atravs da suspenso de clulas

I0

Transmitncia (T) = (I/Io) x 100 (%)

I0

DO = Abs
= - log T/100 = log (I0/I)
Prescott, Harley & Klein, Microbiology, th edition,Mc GrawHill, 2002

Terico

Medido

DO640nm

Medies no espectrofotmetro
0 Concentrao de clulas

BIOMASSA -

representado normalmente por X

Estimativa da biomassa seca (peso seco) - Pesagem da massa de clulas presentes na cultura microbiana. - Peso seco ou hmido - usado em circunstncias especficas, como, por exemplo quando se pretende obter o rendimento em biomassa do crescimento.

Em certas condies, o aumento da massa pode no reflectir crescimento da populao, mas aumento de compostos de reserva

Cmara de contagem
Lmina de vidro especial, onde est marcado um reticulado com dimenses conhecidas; tambm conhecida a distncia da lmina lamela, sendo possvel estimar o volume de suspenso de clulas sobre o reticulado. Fcil, barato e rpido. til para contar clulas de eucariotas e procariotas. No distingue clulas viveis de mortas.
Observao no Microscpio ptico

Figure 6.5
Prescott, Harley & Klein, Microbiology, th edition,Mc GrawHill, 2002

CURVA DE CRESCIMENTO DUMA POPULAO MICROBIANA EM DESCONTNUO (BATCH)

Cultura batch sistema fechado (excepto troca de gases)

Fase estacionria

Fase de morte Fase de latncia

Prescott, Harley & Klein, Microbiology, th edition,Mc GrawHill, 2002

Fase exponencial

Log Optical Density (OD. ---)

Exemplo clculo da taxa especfica de crescimento

x 104 N (Escala logaritmica) Variao da concentrao de clulas duma populao bacteriana (incubao em meio de cultura lquido, a 37C) Tempo (h) 0 0.5 1 2 2.5 3 4 N (clulas / mL) 1.0 x 104 1.0 x 104 1.5 x 104 3.0 x 104 3.6 x 104 4.9 x 104 5.0 x 104
Latencia Exponencial

5 4 3 2 Declive: 0,7

1 0 1 2 3 4

Estacionria

Populao duplica em 1h

Tempo (h)

Estimativa da taxa especfica de crescimento da populao,

(Anlise de regresso linear: ln Nt vs. t ln N2 ln N1 = (2-1) declive = 0.7 = 0.7 h-1 )

= ln (3.0 x 104) - ln (1.5 x 104) = 0.7 h-1

Estimativa do tempo de duplicao, g g = ln2 / = ln2 / 0.7 = 1 h

Valores de g e de dependem de: - potencial gentico da estirpe microbiana. - composio do meio de cultura; - condies ambientais (Temperatura, pH, disponibilidade de gua, nvel de oxignio, etc.)

Prescott, Harley & Klein, Microbiology, th edition,Mc GrawHill, 2002

Crescimento diuxico

Exemplo:
Crescimento de populao de Escherichia coli em meio de cultura com duas fontes de C e energia, glucose e lactose.

lactose

-galactosidade

glucose + galactose

ln [ Clulas viveis]

Consumo de lactose Glucose esgotada

Consumo de glucose

Tempo
Glucose rapidamente metabolizada; Represso da expresso do opero da lactose (Fenmeno: Represso Catablica)

INFLUNCIA DA CONCENTRAO DE NUTRIENTE LIMITANTE NO CRESCIMENTO MICROBIANO

[Biomassa] X (mg/L)

2 1

15

Tempo (h)

A cheio (vermelho) - Curva de crescimento expressa em termos de evoluo da concentrao total de biomassa formada (escala logaritmica) em funo do tempo. A tracejado (azul) Evoluo da concentrao do nutriente S ao longo do tempo de crescimento.

[Nutriente], S (---)

5 4 3

30

The relationship between concentration of limiting nutrient, growth rate (green curve) and growth yield (red curve) in a batch culture (closed system).

At low nutrient concentrations both growth rate and growth yield are affected.

A taxa especfica de crescimento, , depende da concentrao de nutriente limitante (S) fornecida no meio de cultura

max EQUAO DE MONOD S = max

max 2

Ks + S

Ks

,S Concentrao saturante de S
Situao raramente encontrada nos ambientes naturais, onde um ou mais nutrientes esto normalmente presentes em concentraes limitantes ( < max )

max

- Taxa especfica mxima de crescimento - quando concentrao de S saturante; sistemas de transporte transmembranar para o nutriente S esto saturados Constante de semi-saturao - numericamente igual concentrao de substrato que permite uma taxa de crescimento igual a metade da max; reflecte a afinidade dos sistemas de transporte transmembranar para a molcula do nutriente limitante (maior Ks menor afinidade menor ) Os valores das constantes max e KS dependem: - das caracteristicas intrnsecas do microrganismo; - do substrato limitante; - das condies ambientais (ex. Temperatura, pH, etc.) Microrganismo Temperatura 37C 37C 37C 30C 30C Nutriente limitante Glucose Glicerol Lactose Glucose Glucose max (h-1) 0.8-1.4 0.9 0.8 0.5 0.5-0.6 Ks (mg/L) 2-4 2 20 25 50-75

KS

Escherichia coli Escherichia coli Escherichia coli Saccharomyces cerevisiae Candida tropicalis

- Competio entre diferentes microorganismos (p.ex. S. cerevisiae e C. tropicalis)

Inibio pelo substrato

,S

Rendimento do crescimento, Y =

Biomassa total formada (fase estacionria)

=
Massa de nutriente usada

X S

- Y reflecte a eficincia do crescimento microbiano relativamente ao nutriente (substrato) limitante usado para crescimento (fins comerciais / custos de produo)

Biomassa produzida (g) FACTOR DE RENDIMENTO EM ATP (YATP) = ATP produzido (moles)

Medida da eficincia com que a clula utiliza para crescimento (i.e. biossntese de novo de biomassa) a energia que produz.

Conceito de ENERGIA DE MANUTENO

Exemplo: S fonte de C e energia, fermentiscvel (p.ex. glucose)
verifica-se que YATP real < YATP terico (i.e., admitindo que todo o ATP sintetizado usado para biossntese)

BIOSSNTESE DE MATERIAL CELULAR (CRESCIMENTO)

S
ENERGIA ( ATP)

Energia de MANUTENO (desvio)

(Ex. Gastos em renovao de macromolculas (protenas, RNA), expulso activa de metabolitos txicos, manuteno de gradientes electroqumicos de ies e do pH intracelular em nveis ptimos, etc. Para uma dada estirpe microbiana, o valor YATP depende das condies ambientais. Quanto mais afastadas das condies ptimas, maiores so os gastos de energia para manuteno: YATP

Esquema de bioreactor (ou fermentador) industrial para microrganismo aerbio

(Note os sistemas para medio e controlo de temperatura, pH, nivel de oxignio e para anlise de metabolitos biosensor unit)

Prescott, Harley & Klein, Microbiology, th edition,Mc GrawHill, 2002

Scale-up na produo industrial de microrganismos

(exemplo- produo de clulas da levedura Saccharomyces cerevisiae)

TIPOS E EXEMPLOS DE PRODUTOS DE ORIGEM MICROBIANA

Metabolitos primrios vs. secundrios

Metabolito primrio
Crescimento associado ao metabolismo essencial do microrganismo (Ex. etanol, produzido em resultado da fermentao alcolica)

Concentrao de clulas ou massa celular

Crescimento

Formao de metabolito secundrio

Tempo

Concentrao de produto formado

(
Metabolito secundrio
aps a fase de produo das clulas (aps o crescimento exponencial), normalmente a partir de um metabolito primrio ou de substrato usado para crescimento que esteja em excesso Ex. antibiticos produzidos por fungos miceliais ou por bactrias)

Formao de metabolito primrio

CULTURA CONTNUA DE MICRORGANISMOS NO QUIMIOSTATO

S0, F

Esquema de funcionamento de um bioreactor para a cultura contnua de microrganismos (exemplo - quimiostato)

X, S, F

QUIMIOSTATO opera por fornecimento do nutriente limitante do crescimento a uma taxa constante
(relacionada com o caudal de entrada do meio de cultura fresco), de modo que a densidade celular (biomassa) e a taxa especfica de crescimento do microrganismo se ajustam a este fornecimento.

TAXA DE DILUIO
Caudal de alimentao do meio fresco = caudal de sada da cultura = F (Litros/hora) Volume da cultura no quimiostato = V = constante (L)

F D taxa de diluio =
V

(h-1) (inverso do tempo de reteno mdio da clula no interior do quimiostato)

ESTADO ESTACIONRIO
O quimiostato permite manter a populao microbiana em crescimento equilibrado, isto , na fase de crescimento exponencial, durante perodos de tempo longos i.e. em ESTADO ESTACIONRIO.

Equao do estado estacionrio no quimiostato

Balano de massas massa celular, X (no h morte celular; no h entrada de clulas do exterior, X0=0))
Variao da massa celular no quimiostato Massa celular produzida Massa celular que sai no efluente V = volume de cultura no quimiostato (L)

S0, F

= =

dX dt

.X

F V

.X

Estado dX =0 estacionrio dt .X = F V F V

X, S, F X massa celular (g/L) F caudal (L/h)

.X

=D

S concentrao de nutriente Limitante (g/L) T tempo (h) taxa especfica de crescimento (h-1) D taxa de diluio (h-1)

=D

Estado estacionrio (steady state) no quimiostato

Dependncia da concentrao de biomassa (X), da concentrao de nutriente limitante (S) e do tempo de duplicao da populao microbiana no estado estacionrio, em funo da taxa de diluio a que o quimiostato opera (D). (X)

(S0)

(S) (D)
Exemplo: Volume cultura = 5000 mL; Caudal atravs do quimiostato, F = 2500 mL/hora --- D = 0,5 h-1 Nota: alterao de F alterao da taxa de diluio, D

WASHOUT (quando D Dc

Dc taxa de diluio crtica)

Desvio ao modelo estabelecido para o quimiostato (X em funo de D):

Caso - limitao do crescimento pela fonte de C Microrganismos quimiorganotrficos hetrotrficos (p.ex., nutriente limitante S fonte de Carbono e de energia) uma parte significativa da energia produzida a partir de S desviada para gastos energticos de manuteno (Energia de Manuteno). Mensurvel quando a taxa de diluio a que o quimiostato opera muito baixa

(X)

(S0)

(S) (D)

Vantagens/aplicaes do crescimento microbiano em contnuo no quimiostato (versus crescimento descontnuo ou batch):

Populao microbiana na fase exponencial do crescimento durante perodos longos (semanas, meses) Culturas em crescimento exponencial com taxas especficas de crescimento diferentes (atravs da (simples) modificao da taxa de diluio til para estudos fisiolgicos) Produto com caractersticas constantes durante perodos de tempo longos

Maiores produtividades, e eliminao de tempos mortos

Vantagens na seleco de microrganismos que sejam mais competitivos na utilizao do nutriente limitante

Vantagens no estabelecimento de culturas de enriquecimento para isolamento de populaes microbianas especficas a partir de populaes mistas (por ex., amostras ambientais)

A afirmao (ou no) de um dado microrganismo face a outro (p.ex., se a populao for mista), depende da relao entre os coeficientes de Monod para os microrganismos em causa (depende em particular da constante de semi-saturao para o substrato S, KS, que inversamente proporcional eficincia com que o microrganismo utiliza o nutriente limitante).

EXEMPLO
Quimiostato a operar com D = A

Microrganismo A

Microrganismo B

S B = max B KsB + S

D = A = max A

maxA ~ maxB

KsA + S

Se KSB > KSA B < A B < D

S o microrganismo A permanece no quimiostato B no permanece no quimiostato (i.e. sofre washout)

Se KSB < KSA B > A B > D

B permanece no quimiostato, juntamente com A

Em cultura contnua, um microrganismo invasor (p.ex. contaminante ou mutante vivel) pode acumular no quimiostato, se for competitivo, isto , se utilizar o nutriente limitante eficientemente face estirpe microbiana original contaminao da cultura original. Mas, se no for competitivo, expulso do quimiostato.

NOTAS sobre crescimento microbiano

CRESCIMENTO MICROBIANO

O crescimento microbiano definido como o aumento coordenado de todos os constituintes celulares (por exemplo, cidos nucleicos, protenas, lpidos ). Este aumento est normalmente associado ao aumento do nmero de clulas em consequncia da multiplicao celular. definido como o crescimento duma populao de clulas dum microrganismo, ou seja, o aumento do nmero de clulas do microrganismo ao longo do tempo. normalmente quantificado em termos do aumento no tempo de: (i) n de clulas; (ii) densidade ptica da cultura; ou, (iii) massa celular (biomassa). Em certas condies, o aumento da massa pode no reflectir crescimento da populao, mas aumento de compostos de reserva (p.ex. glicognio, poli--hidroxibutirato, etc.) Grande parte dos microrganismos multiplica-se por fisso binria (p.ex. maior parte das bactrias) ou por gemulao (p.ex. maior parte das leveduras). Em consequncia do processo de multiplicao celular, uma clula dar origem a duas ao fim de um certo perodo de tempo que designado por tempo de gerao ou duplicao.

O tempo de duplicao (ou gerao) pode repetir-se vrias vezes, enquanto estiverem disponveis no meio de cultura nutrientes em quantidade suficiente para assegurarem os metabolismos catablico (bioenergtico) e anablico (biossntese) das clulas e enquanto as condies ambientais forem favorveis.

A durao do crescimento exponencial de bactrias em meio de cultura laboratorial depende da bactria em causa e pode ficar limitada por falta de nutrientes, privao de oxignio, acumulao de produtos txicos, ou outros factores.

O conhecimento dos valores de (taxa especifica de crescimento) e de g (tempo de duplicao) para um dado microrganismo permite: - prever como evoluir a concentrao de clulas ao longo do tempo de incubao num determinado meio de cultura e/ou em determinadas condies ambientais; - testar o efeito de uma determinada alterao das condies ambientais sobre o crescimento do microrganismo (p.ex. modificao do meio de cultura, da Temperatura, etc.) OBJECTIVOS ESSENCIAIS: seleccionar as condies de cultura ptimas para um dado microrganismo. estabelecer mtodos que permitam controlar o crescimento de microrganismos.

Contadores electrnicos
(ex. Contador coulter, citmetro de fluxo)

So instrumentos usados para contar partculas em suspenso. Possuem um pequeno orifcio onde estabelecida uma corrente elctrica por recurso a 2 elctrodos. Suspenso de clulas forada a passar pelo orifcio. A passagem de cada partcula (clula, esporo, etc.) causa uma diminuio momentnea da condutividade elctrica entre os elctrodos. Os perodos de interrupo da corrente elctrica so contados, sendo essa contagem uma medida do nmero de partculas presentes na suspenso.

Fcil e rpido No permite distinguir clulas viveis de mortas til para microrganismos grandes, mas no para a maior parte das bactrias

FASES DO CRESCIMENTO MICROBIANO EM DESCONTNUO Cultura batch sistema fechado (excepto troca de gases)
Fase de latencia No ocorre aumento mensurvel do nmero de clulas. Fase de adaptao ao novo meio (p.ex. sntese de novas enzimas) e a condies ambientais novas.
Durao da fase de latncia pode ser longa (vrias horas), quando esto presentes compostos txicos, substratos dificeis de metabolizar ou o inculo insuficiente (n de clulas viveis ou vitalidade das clulas insuficientes).

Fase exponencial Crescimento da populao com taxa (velocidade) constante. Durante esta fase, em que todos os nutrientes esto presentes em excesso, os microrganismo dividem-se e a populao cresce com uma taxa especfica de crescimento mxima. O valor desta taxa de crescimento depende do potencial gentico do microrganismo, da composio do meio de cultura e das condies de crescimento (temperatura, pH, disponibilidade de gua, etc.). Fase estacionria O crescimento da populao pra, devido a esgotamento de nutriente essencial ou acumulao de metabolito txico. Parte das clulas podem permanecer viveis durante algumas horas custa do consumo de materiais de reserva endgenos.
Algumas espcies bacterianas exibem, nesta fase de crescimento, a produo de endsporos.

Fase de morte Perda irreversvel da capacidade de diviso celular; ocorre o decrscimo progressivo no n de clulas viveis da populao.

NOTAS SOBRE CULTURA CONTNUA

QUIMIOSTATO opera por fornecimento do nutriente limitante do crescimento a uma taxa constante
(relacionada com o caudal de entrada do meio de cultura fresco), de modo que a densidade celular (biomassa) e a taxa especfica de crescimento do microrganismo se ajustam a este fornecimento. Meio de cultura fresco (esterilizado) fornecido contnuamente (caudal F), o qual contm, entre outros nutrientes, o nutriente limitante (concentrao S0). Simultneamente, parte da cultura removida, com o mesmo caudal F a que meio de cultura fresco entra. O efluente removido contm clulas do microrganismo (biomassa, X), assim como produto(s) sintetizado(s) pelas clulas. A concentrao de nutriente limitante sada (S) , em condies operacionais adequadas, muito baixa ou aproximadamente nula.

No estado estacionrio (no quimiostato):

a taxa especfica de crescimento do microrganismo () controlada pela taxa de diluio a que o quimiostato opera (D) (i.e. vlida a equao = D) e, consequentemente, pela razo entre o caudal (F) e o volume de cultura no recipiente (V)

possvel obter populaes microbianas em crescimento com taxas especficas

de crescimento diferentes atravs da alterao da taxa de diluio aplicada no quimiostato a densidade celular (biomassa, X) obtida no quimiostato controlada pela concentrao do nutriente limitante, sendo vlida a equao

X = Y (S0-S) onde Y o rendimento do crescimento para o substrato limitante e S representa a

concentrao residual do nutriente limitante no quimiostato. Modelo para o crescimento no quimiostato equao de Monod i.e., o valor da taxa de diluio, D, relaciona-se com a concentrao de nutriente limitante do crescimento com base na equao de Monod

S D= D = max Ks + S

S=

D. KS max - D

Notas sobre as representaes grficas da concentrao de biomassa (X), da concentrao de nutriente limitante (S) e do tempo de duplicao da populao microbiana no estado estacionrio, em funo da taxa de diluio a que o quimiostato opera (D).
A densidade celular (biomassa, X) igual, para uma gama larga de taxas de diluio a que o quimiostato pode operar (consequentemente, a concentrao residual de nutriente limitante, S, no quimiostato mantida com um valor baixo, uma vez que este nutriente est a ser consumido pelas clulas da cultura em crescimento) ;

Apesar da concentrao de biomassa permanecer constante, a taxa especfica de crescimento pode variar com a variao da taxa de diluio que aplicada no quimiostato (porque = D); quanto maior a taxa de diluio, maior a taxa de crescimento da populao (e, inversamente, menor o tempo de duplicao ou gerao).

A gama de valores de taxa de diluio, D, a que o quimiostato pode operar limitada. O valor limite a taxa de diluio crtica (Dc). Para valores muito altos da taxa de diluio (D Dc), o crescimento celular no consegue compensar a diluio da cultura, e a populao de clulas sai do quimiostato (Wash-out lavagem do quimiostato) ; consequentemente, nessas condies, a concentrao de nutriente limitante aumenta, porque no consumido ; quando D Dc S=S0) A taxa de diluio torna-se crtica e ocorre o Wash-out quando a taxa de diluio a que o quimiostato opera ultrapassa a taxa especfica mxima de crescimento da populao microbiana (mx)

Cultura contnua permite estabelecer condies selectivas para o enriquecimento de amostras ambientais (populaes mistas) em microrganismos especficos Por exemplo: microganismos capazes de metabolizar eficientemente nutrientes txicos ou dificilmente metabolizveis (comparativamente a outros microrganismos presentes numa amostra ambiental, p.ex. solo, gua, esgoto, etc.)
P.ex. til para o isolamento de microrganismos capazes de biodegradar hidrocarbonetos do petrleo, benzeno, fenol, cido benzico, pesticidas ou outros compostos orgnicos, a partir de solo (populao mista).
(nestes casos, o quimiostato inoculado com a amostra ambiental; o meio de cultura fresco contm o composto em causa como substrato limitante para crescimento e fornecido contnuamente com taxa de diluio adequada; nestas condies, prolifera(m) preferencialmente o(s) microrganismo(s) que seja(m) capaz(es) de metabolizar eficientemente o composto em causa; outros microrganismos que no tenham essa capacidade (p.ex, com < D) eventualmente presentes na amostra ambiental, sofrero washout, sendo expulsos do quimiostato)

Em cultura contnua, mediante a seleco de taxa(s) de diluio adequada(s), possvel seleccionar uma populao de clulas dum microrganismo nico, que seja muito competitivo e metabolize muito eficientemente um composto orgnico face a outros microrganismos menos competitivos eventualmente presentes numa populao mista inicial.
Pelo contrrio, em cultura descontnua/batch, todos os microrganismos, mais ou menos competitivos na utilizao do composto orgnico, permanecem no meio de cultura cultura batch menos eficiente quando se pretende seleccionar microrganismos muito eficientes na utilizao do composto em causa como substrato para crescimento.

Se ocorrer: 1 Contaminao da cultura

Em cultura contnua, necessrio manter condies de esterilidade durante perodos longos. A adio contnua de meio fresco e o arejamento aumentam a probabilidade de ocorrer contaminao da cultura. Contudo, condies especiais, tais como temperaturas elevadas, valores de pH extremos e substratos pouco usuais podem reduzir a probabilidade de ocorrer contaminao da cultura.

Degenerescncia da cultura

Durante a multiplicao celular dum certo microrganismo pode ocorrer uma mutao expontnea, e surgir um mutante vivel na cultura.

Consequncias
Em cultura contnua, um microrganismo invasor (contaminante ou mutante vivel) acumula no quimiostato se for competitivo, isto , se utilizar o nutriente limitante eficientemente face estirpe microbiana original contaminao da cultura original. Mas, se no for competitivo, expulso do quimiostato. Na cultura bacth, todo o contaminante (ou, mutante vivel) capaz de utilizar o nutriente limitante acumula no meio de cultura, juntamente com o microrganismo que se pretende cultivar contaminao da cultura original.