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Relatrio da Aula Prtica de Gentica Florestal Prof: Monica Gusmo Aluno: Emilio Emerson A.

da Silva n: 20102028 Turma: Eng Florestal B2 Data:18/12/2012

Extrao DNA vegetal 1. Macerar o material (folha ou outra parte da planta) em 1,600 ml de Wash buffer; 2. Macerar com auxlio do cadilho e pistilo at o material ficar fibroso; 3. Transferir para eppendorf de 2,0 ml; 4. Centrifugar a 4 C por 10 min a 13000 RPM; 5. Descartar sobrenadante; 6. Adicionar 800 ul de tampo CTAB (detergente); 7. Vortexar at o material homogeneizar com o tampo; 8. Levar as amostras ao banho-maria por 20 min; 9. Adicionar 800 ul de clorofrmio-lcool-Isoamlico; 10. Vortexar para homogeneizar; 11. Centrifugar a 4 C por 10 min a 13000 RPM; 12. Retirar o sobrenadante com auxlio de uma micropipeta, transferindo para outro tubo; 13. Adicionar 800 ul de clorofrmio-lcool-Isoamlico; 14. Vortexar para homogeneizar; 15. Centrifugar a 4 C por 10 min a 13000 RPM; 16. Retirar o sobrenadante com auxlio de uma micropipeta, transferindo para outro tubo de 1.5 ml; 17. Adicionar 70 ul de acetato de amnio 0,7M e 700 ul de lcool isoproplico; 18. Centrifugar a 4 C por 5 min a 13000 RPM; 19. Observar a formao do DNA no fundo do tubo; 20. Descartar o lcool; 21. Acrescentar 1 ml de lcool a 70%; 22. Centrifugar a 4 C por 2 min a 13000 RPM; 23. Descartar o lcool; 24. Deixar o DNA secar por 1 hora; 25. Ressuspender o DNA com gua ultrpura ou TE. Posteriormente correr as amostras em gel de agarose para quantificar e ver a qualidade do DNA.