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REGULACION GENICA Y TRANSDUCCION DE SEAL

INTRODUCCION La mayora de los seres vivientes poseen una informacin gentica, almacenada en forma de molculas de cido nucleico del tipo ARN o ADN. Esta informacin debe ser leda e interpretada, bien sea para duplicar su contenido y transmitirlo a una descendencia (replicacin) o para permitir la formacin de compuestos claves para la existencia y funcionalidad de la clula como lo son los ARN y las protenas. En el primer caso se favorece la inmortalizacin del legado gentico de una especie y en el segundo caso se pueden obtener productos cuyo procesamiento contribuye a la formacin de cidos nucleicos del tipo ARN (transcripcin) indispensables para la sntesis de protenas. Los dos mecanismos de lectura de la informacin gentica (replicacin y transcripcin) constituyen las dos opciones naturales conocidas hasta el momento para obtener informacin a partir de los cidos nuclecos. Estos cidos nuclecos cumplen la funcin de conservar la informacin gentica de muchos aos de evolucin transcurridos despus de la aparicin del primer ser vivo sobre nuestro planeta. La transcripcin permite leer e interpretar la informacin presente en el 10% del total del genoma humano, correspondiendo aprximadamente a unos 30.000 a 100.000 genes, los cuales estn siendo secuenciados por el Proyecto del Genoma Humano. La regulacin de los programas genticos est asociada con la seales que recibe la clula del medio extracelular, con las condiciones propias del medio que varn segn el tejido y ubicacin de las clulas y con los elementos propios de cada clula que le permiten reconocer estas seales externas, decodificarlas y emitir una respuesta. Este mecanismo de procesamiento de seales hasta la emisin de la respuesta se conoce como La Transduccin de Seal o Sealizacin celular.

LA TRANSCRIPCIN Y LA EXPRESION GENICA


La Transcripcin es un mecanismo que permite leer la informacin contenida en los genes. El producto de la transcripcin es siempre una molcula de ARN, la cual puede ser procesada para obtener una molcula de ARN funcional. Hasta la fecha se han descrito cinco tipos diferentes de ARNs: ARN ribosomal (ARNr), ARN de transferencia (ARNt), ARN heterogneo nuclear (ARNhn), ARN pequeo nuclear (ARNsn) y el ARN mensajero (ARNm). Cada uno de estos ARN posee una estructura particular y cumple funciones especficas. El ARNhn y el ARNm son molculas transitorias que permiten el flujo de informacin ADN---- protena. Las protenas constituyen, despus del agua la segunda molcula ms abundante en una clula viva, ellas son la base de la estructura y funcin celulares. En eucariotes la informacin para la sntesis de protenas codificada en los genes en forma de ADN, es transcrita a una forma ms sencilla de cido nucleco el ARNhn el cul despus de ser procesado en el ncleo constituye el ARNm. Tanto el paso de ADN a ARN (transcripcin) como el procesamiento del ARNhn son realizados por maquinarias enzimticas diferentes y especializadas. Una vez que el ARNm alcanza su madurez generalmente atraviesa la envoltura nuclear para ubicarse en el citoplasma en donde es abordado por la maquinaria enzimtica encargada de sintetizar las protenas. La informacin portada por el ARNm est codificada en un lenguaje de nucletidos, y es traducida a un lenguaje de amino cidos para concluir con la sntesis de protenas. Esto constituye la segunda etapa de la sntesis de protenas conocida como el mecanismo de traduccin. La replicacin, la transcripcin y la traduccin son procesos que requieren un conjunto de elementos que constituyen una maquinaria enzimtica especfica y diferente. Estos procesos tambin tienen sus propios mecanismos de regulacin funcionando a diferentes niveles.

El conocimiento del mecanismo de transcripcin y su regulacin, contribuye a la comprensin del funcionamiento celular y su relacin con la expresin de los diferentes programas genticos. El control gentico se puede realizar a diferentes niveles durante la transmisin de la informacin a partir de ADN, ARN y protena: - Previamente a la transcripcin - Durante la transcripcin - Posterior a la transcripcin en el procesamiento y maduracin del ARN - Transporte de los ARN funcionales - Degradacin de los ARN - Durante la traduccin - Maduracin y distribucin de las protenas - Funcionalidad y estabilidad de las protenas El control se hace necesario para evitar que la clula produzca continuamente molculas de ARN o de protenas innecesarias. En las clulas procariotas la transcripcin se lleva a cabo en el citoplasma celular y algunos de sus elementos son comunes a los requeridos por las clulas eucariotas. La transcripcin y la traduccin son dos procesos acoplados en procariotes, es decir, cuando aun no ha terminado la transcripcin de un gen procariota, la traduccin se inicia. En las clulas ecuariotas la transcripcin se lleva a cabo dentro del ncleo y los factores protecos que componen la maquinaria de transcripcin deben ser transportados del citoplasma (lugar de su sntesis) hacia el ncleo (lugar donde cumplen su funcin). Una clula eucariota puede sintetizar entre 10.000 y 20.000 protenas diferentes y adems puede cambiar la expresin de sus genes en respuesta a seales intra o extracelulares. 1. MAQUINARIA DE TRANSCRIPCION El proceso de transcripcin requiere de un conjunto de elementos los cuales estn agrupados bajo el nombre de maquinaria de transcripcin, algunos de ellos son considerados basales, es decir indispensables para el inicio de la transcripcin de la mayora de genes y otros son llamados especficos porque intervienen en la regulacin de genes o grupos de genes produciendo la activacin o represin de estos en los diferentes tejidos. Estos elementos basales o especficos se encuentran representados bien sea en secuencias presentes en los promotores de los genes o en protenas que reconocen estas secuencias o que de alguna manera intervienen en el inicio o regulacin de la transcripcin. Estos ltimos se conocen como factores de transcripcin Adicionalmente a estos factores de transcripcin basales y especficos se deben considerar las ARN polimerasas, las cuales estn constitudas generalmente por una serie de protenas asociadas formando un gran complejo. 1.1. ARN POLIMERASAS La transcripcin se inicia cuando un complejo de ARN polimerasa logra unirse sobre el promotor del gen a transcribir, caracterstica comn para las polimerasas procariticas y eucariticas. Posteriormente las dos hebras del ADN se separan formando un denominado complejo abierto. A partir de este momento el complejo basal de transcripcin permite la movilizacin de la ARN polimerasa a lo largo del gen, la cul va sintetizando una molcula de ARN a partir de la informacin contenida en una de las dos hebras del ADN. La hebra de ADN que es leda o en otras palabras que sirve como molde, se conoce como la hebra sin sentido o no codificante. Entonces la secuencia de cada molcula de ARN es igual a la secuencia de la hebra con sentido y complementaria a la secuencia de la hebra sin sentido, teniendo presente que en el ARN la Timina ha sido reemplazada por el Uracilo. Cuando la ARN polimerasa llega al final del gen y reconoce la seal stop o de terminacin libera la molcula de ARN recin sintetizada y se desprende del ADN. Los complejos de ARN polimerasas pueden llegar a pesar hasta 500 KDA o ms.

Las ARN polimerasas de procariotas y eucariotas estn relacionadas evolutivamente y estn compuestas por un gran nmero de subunidades protecas diferentes. La ARN polimerasa de procariotas ms estudiada es la de E. Coli, la cul est constituda de 4 subunidades diferentes , , ', y asociadas en la llamada enzima mnima o ncleo Existen dos copias de y una sola copia de cada una de las otras subunidades. La subunidad sigma () juega un papel especfico en el inicio de la transcripcin reconociendo la secuencia del promotor. Una vez la polimerasa est ubicada sobre el promotor parte del complejo se disocia, entre los cuales se encuentra la subunidad sigma (), y una serie de factores adicionales cuya funcin es importante durante la elongacin se unen al complejo permitiendo la continuacin de la sntesis del ARN. En eucariotas se han descrito tres grandes complejos de diferentes ARN polimerasas que se encargan de transcribir tres grupos de genes diferentes. Estos complejos estn por 10 a 14 subunidades. Las enzimas ARN polimerasa I, ARN polimerasa II y ARN polimerasa III, las tres son estructuralmente similares y tienen subunidades comunes y nicas. Fueron inicialmente diferenciadas por su sensibilidad a la -amanitina, un veneno aislado del deadly toadstool Amanita phalloides. La actividad de la ARN pol I no es afectada por la adicin de -amanitina, la pol II es muy sensible y la pol III es moderadamente sensible a este veneno. La sensibilidad a la -amanitina se utiliza todava para diferenciar las polimerasas. En general se ha logrado establecer que la pol II transcribe los genes cuyos ARN normalmente es traducido en protenas y otra especie de ARN pequeo nuclear llamado ARNsn, el cul parece tener un papel importante en la maduracin del ARNm; estos genes se agrupan en Clase II. Pol I y Pol III sintetizan el ARN con funcin estructural y cataltica. La pol I sintetiza el ARN ribosomal y la pol III el ARN 5s ribosomal y el ARN de transferencia entre otros. Los genes transcritos por la ARN pol I y ARN pol III se identifican como genes Clase I y Clase III respectivamente. Una clula de mamfero puede contener tpicamente entre 20.000 y 40.000 molculas de cada una de las ARN polimerasas y su concentracin es regulada individualmente de acuerdo con la tasa de crecimiento celular. La ARN pol I est presente en mayor cantidad, la ARN pol II en cantidad intermedia y la pol III es prcticamente residual. Las ARN polimerasas activas transcripcionalmente tienen una apariencia globular con una molcula de ARN adherida. En los genes que poseen una alta frecuencia de transcripcin se observan varios complejos transcripcionales unidos uno tras otro portando las respectivas molculas de ARN en crecimiento. Una importante caracterstica que distingue las polimerasas de eucariotas de las polimerasas de procariotas es que las de eucariotas no se pueden unir directamente sobre un promotor e iniciar la transcripcin por si mismas como la polimerasa bacteriana purificada, estas requieren de la presencia de protenas adicionales que se unan al promotor y faciliten la unin del complejo iniciador de la transcripcin. Estas protenas corresponden a los llamados factores de transcripcin. 1.2. FACTORES DE TRANSCRIPCION Los factores de transcripcin corresponden a pptidos cuya accin es clave para el control de la expresin gnica a travs de la regulacin del inicio de la transcripcin. Los factores de transcripcin pueden ser identificados como basales, especficos de tejido y dependientes de seales extracelulares. Los basales son aquellos presentes en la mayora de las clulas de un organismo eucariota y sin los cuales la transcripcin no se puede iniciar, es decir estn presentes de manera continua en la clula. Son muy conservados evolutivamente y promueven la formacin de un complejo plurimolecular. Entre ellos podemos citar TFIID, TFIIH, TFIIA para la ARN pol II. Las otras ARN polimerasas tienen sus respectivos factores TFIIIA, TFIIIC, TFIA, etc.

Los especficos de tejido se expresan de manera restringida en grupos de clulas pertenecientes a un tejido especfico, por ejemplo MyoD y Myogenina en clulas musculares. Los factores de transcripcin dependientes de seales pueden ser basales o especficos de tejido, estos se expresan en respuesta a seales extracelulares, es decir no estn en forma continua en la clula. Los genes que regulan tambin se expresan en tiempo y espacio muy especfico. Ej: los receptores nucleares para hormonas esteroideas o tiroideas. Los factores de transcripcin pueden actuar activando o reprimiendo la expresin de un gen o de un grupo de genes. El mecanismo de accin puede ser diferente para cada factor, entre los mecanismos ms estudiados estn: 1Unin sobre los complejos de iniciacin 2Eliminacin de un represor constitutivo 3Activacin por unin a un elemento especfico presente en el ADN 4Recrutamiento de inhibidores o de coactivadores de la transcripcin Estructuralmente los factores de transcripcin poseen en general uno o varios dominios de reconocimiento y unin a secuencias especficas presentes en el ADN, dominios de activacin de la transcripcin y de interaccin con otras protenas. Los dominios corresponden a regiones estructurales que forman parte de la estructura terciaria de la protena, y que se pueden encontrar, con una estructura espacial y una secuencia de aminocidos similares, en diferentes protenas cumpliendo una misma funcin en todas ellas. 1.2.1. Dominios de reconocimiento y unin al ADN mas frecuentes: El reconocimiento de secuencias especficas presentes en los promotores de los genes se lleva a cabo gracias a la posibilidad de variaciones locales en la estructura tridimensional del ADN, as como a la interaccin directa de la protena con las bases, sin necesidad de que se separen las hebras de la doble hlice. En la mayor parte de los casos, los numerosos contactos establecidos (de tipo inico, hidrofbico y puente de Hidrgeno), aunque individualmente dbiles, se combinan para dar una interaccin especfica y muy fuerte entre la secuencia de ADN y la protena. Esta interaccin tiene lugar generalmente en el surco mayor de la doble hlice. Un mismo dominio puede interaccionar simultneamente con diferentes puntos del ADN, induciendo en este un cambio conformacional que puede aproximar secuencias lejanas o incluso inducir la separacin local de las dos hebras del ADN favoreciendo el acceso de otras protenas. Tal es el caso del inicio de la transcripcin, donde los factores de transcripcin facilitan el acceso de la ARN polimerasa. 1.2.1.1.Hlice-Giro-Hlice (HGH) o (HTH) del ingls Helix-Turn-Helix: Primer dominio de unin al ADN bien estudiado. Formado por dos segmentos peptdicos de la forma hlice de estructura rgida y separados por una secuencia de aminocidos de estructura flexible, esta ltima permite que las dos hlices se aproximen. Una de las hlices (llamada hlice de reconocimiento) se encaja en el surco mayor del ADN de tal manera que una porcin de los aminocidos de la protena interaccionan mediante puentes de H con las bases nitrogenadas expuestas en ese surco. Se ha descrito en protenas reguladoras de la expresin gnica, tanto en virus como en procariotas y eucariotas. Es frecuente que una protena presente dos dominios HGH o que se asocien dos molculas (homo o hetero dmeros) que posean este dominio y que interaccionen simultneamente con el ADN contribuyendo a estabilizar la unin de la protena. Un ejemplo en bacterias lo constituye la protena receptora del AMPc, CPR o CAP, la cual se une en forma de homodmero sobre secuencias especficas del ADN bacteriano, desencadenando la expresin de los genes del opern lactosa. La unin del AMPc con la protena CAP aumenta en esta ltima su afinidad por el ADN. En virus se ha descrito la protena Cro del fago lambda, que interacciona a travs de su dominio HGH con el gen que codifica para la protena conocida como el represor del fago , bloqueando su expresin. 1.2.1.2.Hlice-Bucle-Hlice se abrevia HLH del ingls Helix-Loop-Helix: Tambin consta de dos segmentos en forma de hlice y de un pptido de unin ms largo que el de HGH, que le confiere una forma de bucle y da mayor flexibilidad a la estructura. Generalmente las protenas

con dominios HLH se asocian formando dmeros para interactuar con el ADN. Ej: c-myc, MyoD y otros factores de diferenciacin. 1.2.1.3.Homeodominio: puede considerarse como una ampliacin del motivo HGH, pero se diferencia por aparecer repetidamente y con estructura idntica en diferentes protenas. Posee una tercera hlice de la cual emerge una regin sin estructura secundaria definida que interacciona con el ADN. Este dominio est presente en las protenas que regulan el desarrollo embrionario, especialmente estudiadas en Drosophila. 1.2.1.4.Dedo de Zinc: elemento estructural formado por unos 30 aminocidos, de los cuales 2 cistenas y 2 histidinas aparecen en posiciones constantes relacionadas tetradricamente con un in de Zinc. Est constituido por dos hojas antiparalelas cada una con un residuo Cys , seguidas de un giro y de un hlice con la dos His. El plegamiento de la cadena peptdica en esta regin forma una estructura tridimensional alargada similar a un dedo, de ah su nombre. Es frecuente que una protena posea mltiples dominios en forma de dedo de zinc consecutivos. Ej: Humanos: receptor de estrgenos, Sp1 (3), TFIIIA, TFIIB(1), TDF (13), Ratn MK1 (7), Egr1(3). Drosophila: Kruppel (4), Glass (5). 1.2.1.5.Cremallera de leucina: (zipper leucin) regin de una protena cuya secuencia posee un residuo de leucinaa cada 7 aminocidos. Adopta una conformacin de hlice concentrndose a un lado los aminocidos hidrofbicos de tal manera que la Leucina se repite en la misma cara. Dos cadenas peptdicas de este tipo se asocian hidrofbicamente intercalando los residuos de leucina como si fueran dientes de una cremallera. En el otro extremo del dominio las dos hlices encajan en el surco mayor del ADN y presentan en la cara exterior abundantes aminocidos bsicos que interaccionan favorablemente con los fosfatos presentes en la doble hlice de ADN. Este dominio tambin se asemeja a una Y en la que el tallo correspondera a la cremallera de leucina y los brazos a los tramos de las hlices que contactan el ADN. Este dominio esta limitado por una secuencia de unin al DNA rica en lisinas y argininas. Ej: oncogenes c-jun, c-fos que forman homo y heterodmeros. 1.2.2. De activacin de la transcripcin Dominio rico en aminocidos glutaminas que permite la interaccin del factor de transcripcin con coactivadores o con factores basales de la transcripcin. Su estructura, puede contener mltiples sitios de fosforilacin. Esta regin es indispensable para que el factor de transcripcin contribuya a la activacin de los genes bajo su regulacin. 1.2.3. 1.2.4. De inhibicin de la transcripcin: Ej. Rb, Histonas deacetilasas. De interaccin con otros factores: Dominios con diferentes estructuras. Ej Caja MADS

2. ETAPAS DEL PROCESO DE TRANSCRIPCION Adems de las molculas que forman la maquinaria de transcripcin, los complejos de ARN polimerasas y los factores de transcripcin, para que se inicie la transcripcin se requiere de elementos presentes en la hebra molde del ADN que constituyen la unidad de transcripcin. Esta corresponde a una secuencia de ADN que se transcribe, ms secuencias consensus promotoras y terminadoras. El promotor contiene la informacin necesaria para que se ensamble la maquinaria de transcripcin y se de inicio al proceso. El terminador por el contrario facilita la disociacin del complejo transcripcional del ADN. La transcripcin transcurre en tres fases conocidas clsicamente como iniciacin, elongacin y terminacin. Entre procariotas y eucariotas hay una notable diferencia en cuanto a la organizacin y reconocimiento de las secuencias promotoras y terminadoras. En procariotas y en la mitocondria a partir de un mismo promotor se puede iniciar la transcripcin de varios genes contiguos mientras que en eucariotas a partir de un promotor se inicia generalmente la transcripcin de un solo gen. 2.1. INICIACION La iniciacin constituye la etapa ms compleja de la transcripcin y en la que tiene lugar la mayor parte de la regulacin. Implica la separacin local de la doble hebra de ADN en cercana de la regin promotora, donde se sintetiza una molcula corta de ARN (aprximadamente 10 nucletidos) y se forma la burbuja de transcripcin, la cul se va desplazando sobre el ADN

con el complejo de transcripcin. El proceso de iniciacin tpico en eucariotas se describe a partir de un promotor que posee una secuencia TATA pero no la secuencia del iniciador (TATA+ Inr-) para genes trascritos por la ARN polimerasa II. 2.1.1 Formacin del complejo de iniciacin: Se conocen hasta el momento dos modelos que tratan de explicar el mecanismo mediante el cual los factores de inicio de la transcripcin reconocen el promotor y se asocian a l, para posteriormente favorecer un cambio conformacional local del ADN y la formacin del complejo de iniciacin. - Modelo de la holoenzima: consiste en la formacin previa de un gran complejo u holoenzima constitudo por los factores de transcripcin (TFs) y la ARN polimerasa, una vez formado este complejo se une sobre el promotor en el sitio definido previamente por la unin de TFIID sobre el ADN. - Modelo escalonado: los TFs se van asociando uno a continuacin del otro sobre la regin promotora y en un cierto orden. Los factores van formando un complejo que facilita la unin del siguiente factor. Los TFs modifican localmente el ADN facilitando la entrada de la ARN polimerasa al complejo de iniciacin y su posterior unin sobre el ADN e inicio de la transcripcin (*ver figura 3). Segn este modelo el orden de unin de los componentes del complejo de iniciacin sobre un promotor sera: 1) TFIID el primero en unirse capaz de reconocer la caja TATA y unirse a ella, sin embargo en otros tipos de promotores parece actuar en ausencia de la caja TATA. Este factor define con la ARN polimerasa el sitio de inicio de la transcripcin. Tiene una masa aproximada de 800Kda y est formado por dos componentes: * Una molcula de TBP o protena de unin a TATA, que posee la capacidad de reconocer la secuencia TATA y unirse a esta a travs del surco menor del ADN provocando una flexin en esta molcula. * Varias molculas TAFs o factores asociados a TBP, diferentes entre s y variables segn el promotor. La cantidad de TAFs puede variar entre 9 y 12 por complejo TFIID. 2) TFIIA Se une corriente arriba del sitio de unin del factor TFIID y aparentemente estabiliza la unin TFIID-ADN, adems parece poseer una actividad antirepresora. 3) TFIIB junto con TFIIA permiten la unin de la ARN polimerasa la cual est asociada al factor TFIIF, se une corriente abajo del sitio de unin de TFIID. El factor TFIIF aumenta la afinidad de la ARN polimerasa por el promotor y estabiliza su interaccin con el ADN, tambin parece poseer una actividad helicasa. 4) TFIIE se une al complejo interaccionando con la ARN polimerasa II, recruta a TFIIH y modula su actividad helicasa y posiblemente favorece la desnaturalizacin del promotor. 5) TFIIH posee doble actividad enzimtica, puede actuar como helicasa y como quinasa. Como helicasa contribuye a la apertura de la doble hlice durante la transcripcin, y como quinasa fosforila el extremo carboxi-terminal de la ARN pol II. La fosforilacin por TFIIH induce un cambio conformacional de la protena induciendo su desplazamiento a lo largo del ADN y pasando a la etapa de transcripcin conocida como elongacin. Adems TFIIH parece intervenir durante la reparacin del ADN y mutaciones en el gen que lo codifica han sido identificadas en pacientes con Xeroderma Pigmentoso. Hasta este punto se forma el complejo de pre-iniciacin y se ensamblan los primeros 10 nucletidos de la molcula de ARN naciente. La posterior fosforilacin del CTD (dominio carboxi-terminal) de la ARN pol II induce su liberacin del complejo y avance sobre la molcula de ADN. 2.1.2. Desnaturalizacin del promotor: La formacin del complejo de iniciacin produce un cambio conformacional en la estructura del promotor que conduce al desenrrollamiento y desnaturalizacin local de la doble hebra de ADN, formndose la burbuja de transcripcin o complejo abierto. La apertura de la doble hebra est dirigida por la actividad helicasa de TFIIF y TFIIH con gasto energtico por hidrlisis de ATP. TFIIE estabiliza la regin desnaturalizada del promotor. 2.1.3. Formacin de los primeros enlaces fosfodister:

El primer enlace fosfodister se forma entre dos ribonucletidos en forma libre a partir de su forma tri-fosfato NTP. El primer ribonucletido trifosfato es generalmente el ATP y el segundo es el complementario al nucletido de la posicin +2 del ADN. En la formacin de este enlace se liberan dos tomos de Pi y de esta manera queda completamente formado el primer enlace fosfo-dister del extremo 5 del ARN naciente. Hasta la adicin del nucletido 10 el ARN permanece unido al ADN molde formando un hbrido temporal ARN-ADN, enseguida la ARN pol II se libera del promotor y contina la sntesis de ARN a partir de esta corta molcula de 10 nucletidos. 2.1.4. Liberacin del promotor Cuando la ARN pol II es fosforilada y la corta cadena de 10 nucletidos de ARN se forma se considera el punto de transicin de la etapa de iniciacin a la de elongacin de la transcripcin en eucariotas. En procariotas este punto se alcanza cuando la subunidad se disocia del complejo de iniciacin, quedando disponible para interaccionar con otra ARN pol e iniciar la transcripcin en un nuevo promotor o sobre el mismo pero posteriormente. La ARN pol sin el factor continua sintetizando la molcula de ARN correspondiente. 2.2. ELONGACION La burbuja de transcripcin se desplaza a lo largo del ADN por accin de la ARN pol. El complejo de elongacin est formado por la ARN pol, el ADN desnaturalizado y el ARN naciente. A medida que el complejo se desplaza por delante de la ARN pol se desnaturaliza el ADN por ruptura de los puentes de H y se genera un tensin por el efecto de superenrrollamiento de la doble hlice de ADN la cual es compensada por las topoisomerasas. La ARN pol adiciona los ribonucletidos siempre en el extremo 3 de la cadena de ARN naciente por lo tanto el sentido de crecimiento siempre es 5 --- 3. El segmento de ARN recin sintetizado queda temporalmente apareado formando un hbrido ARN-ADN dentro de la burbuja de transcripcin. A medida que se desplaza la ARN pol el ARN se libera de la burbuja y queda en su forma de hebra sencilla y sobre el ADN se produce el re-enrrollamiento asistido por las topoisomerasas una vez las dos hebras se vuelven a aparear. La etapa de elongacin es asistida por los factores de transcripcin generales de la elongacin (PTE), los cuales no han sido muy bien caracterizados pero se sabe que existen diferentes tipos, entre ellos PTEFb y SII que evitan la terminacin prematura de la elongacin, FIIF, SIII (elonguina) y ELL que suprimen las pausas transitorias y aumentan la velocidad de elongacin. 2.3. TERMINACION La longitud de la molcula de ARN naciente es ms grande a medida que el complejo transcripcional se aleja del promotor y se desplaza a lo largo del gen hasta alcanzar y reconocer la seal de terminacin ubicada generalmente al final del gen. 2.3.1. En eucariotas Se lleva a cabo por el reconocimiento de secuencias de terminacin an no completamente caracterizadas. Se produce una detencin de la ARN pol y la desestabilizacin del hbrido ARN-ADN, separndose los componentes del complejo de transcripcin y desfosforilndose la ARN pol, la cual queda disponible para la formacin de un nuevo complejo de iniciacin. 2.3.2. En Procariotas Se han descrito dos mecanismos diferentes uno dependiente de (rho) y otro independiente de . El primero se basa en la presencia sobre el ADN recin sintetizado de una secuencia de 5090 nts de longitud, rica en C y pobre en G, que interacta con el factor y el cual se desplaza sobre el ARN en sentido 3 hasta alcanzar el hbrido ARN-ADN provocando su desnaturalizacin y posterior liberacin del ARN. El factor posee una actividad ARN-ADN helicasa y una actividad ATPasa dependiente de ARN. El mecanismo independiente de se caracteriza por la presencia de una secuencia palindrmica sobre el ARN naciente que induce la formacin de una horquilla, la cual por un mecanismo an no conocido hace que el ARN se separe del complejo de transcripcin y se interrumpa la sntesis de ARN. 3. DESCRIPCION DEL PRODUCTO DE LA TRANSCRIPCION Los ARNs estn constitudos por nucletidos, como el ADN, pero se diferencian de estos en que la base nitrogenada Timina es reemplazada por Uracilo y el azcar que compone sus

nucletidos es la ribosa, es decir est compuesto por ribonucletidos. Los ARN son menos estables que el ADN y su recambio celular es relativamente rpido relacionado con su concentracin. Los ARNs generalmente sufren una serie de modificaciones covalentes caractersticas, que forman parte de un proceso de maduracin que les permite alcanzar su funcionalidad. El proceso de maduracin ms conocido hasta el momento es el del ARNhn, el cul da origen al ARNm. El transcripto primario producto de la transcripcin de la ARN Pol II y que generalmente constituye la molcula transitoria para la sntesis de una protena corresponde al ARNhn. Su longitud puede oscilar entre 200pb y 30Kb y su longitud media es de 5Kb. Algunos son precursores del ARN mensajero. Se ubica en el nucleoplasma. El ARNhn porta una serie de secuencias correspondientes a los intrones y exones presentes en los genes. Parte de las modificaciones del ARNhn consiste en eliminar estas secuencias intrnicas y en adicionar secuencias a los extremos 5 y 3 de la molcula, que sirven de proteccin al ARNm recin formado, contra la accin de las ARNasas. Tambin pueden servir como secuencias de sealamiento molecular en el inicio, progresin y terminacin de la traduccin. Cuando el transcripto primario alcanza una longitud aproximada de 30 ribonucletidos, en su extremo 5se adiciona un nucletido de Guanina metilada, estructura conocida como el Capping. Aparentemente la funcin del 5Cap es servir como seal de inicio de la traduccin y como proteccin al ARNm de la degradacin. El extremo 3 del ARNhn sufre un proceso de corte de manera especfica y de adicin de un oligonucletido de poli Adenina (poly-A). La cola de poly-A es sintetizada por una ARN polimerasa diferente a las mencionadas y tiene un tamao aproximado entre 100 y 200 nucletidos. La secuencia seal presente en el ARNhn para la modificacin en el extremo 3 corresponde a la secuencia AAUAAA localizada entre 10 y 30 nucletidos corriente arriba del sitio de corte. La cola de poly-A parece jugar diferentes roles en el transporte del transcripto maduro hacia el citoplasma, mantenimiento de su estabilidad y como seal de reconocimiento por el ribosoma para una eficiente traduccin del ARNm. Adicionalmente la presencia de la cola poly-A facilita la purificacin del los ARNm, con la ayuda de columnas especiales que contienen fragmentos de poly-T unidos a un soporte slido. Los poly-T retienen nicamente los ARN que poseen la cola poly-A, enseguida los ARNm poly-A pueden ser eludos para recuperarlos y utilizarlos en estudios posteriores. Los transcriptos primarios de la Pol II se consideran altamente inestables y de reducida vida media. Ellos comprenden ms de la mitad de los ARN que estn siendo sintetizados en promedio, como producto de la transcripcin del ADN, en una clula. Y solo corresponden a una pequea fraccin de ARN nuclear y de ARN citoplasmtico, con respecto al ARN total presente en la clula. Unicamente los transcriptos maduros de la Pol II tienen el Cap5 y la cola de poly-A 3. Las enzimas que catalizan estas reacciones se unen selectivamente a la Pol II. Adicionalmente los ARNhn sufren un proceso de corte y enpalme de secuencias ubicadas al interior de la molcula (intrones), este proceso es conocido como el splicing del ARN y es realizado por un conjunto de enzimas nucleares que reconocen secuencias seal ubicadas dentro de los genes eucariticos. En 1977 se conoci que los genes eucariotas no eran continuos como los de las bacterias sino que estaban compuestos por dos tipos de secuencias los exones y los intrones. Este concepto surgi de la comparacin entre las secuencias de los ARNm y sus respectivas secuencias presentes en el ADN. Este hallazgo se realiz inicialmente en Adenovirus y posteriormente en genes de vertebrados de tipo ovoalbmina y -globina. Las secuencias presentes en el ADN y en el ARNhn pero ausentes en el ARNm fueron llamadas intrones y las presentes en las tres molculas correspondientes fueron llamadas exones. El tamao de los intrones puede variar entre 80 a 10.000 nucletidos o ms y es posible que las mutaciones que ocurren en ellos no afecten el producto final, la protena. Las secuencias ms conservadas al interior de los intrones corresponden a las seales de corte y empalme.

El splicing es realizado por pequeas molculas de ARNsn asociadas a protenas nucleares, estos complejos son conocidos como RNPsn (ribonucleoprotenas nucleares pequeas) o snurps y estn compuestos por al menos 8 tipos diferentes de protenas, las cuales corresponden a las protenas ms abundantes en el ncleo despus de las histonas. Algunas de estas protenas son comunes a varios snurps y otras son nicas de un tipo especfico. El peso molecular de los snurps puede alcanzar los 250.000 Daltons. Las pequeas molculas de ARN que forman los RNPsn han sido designados como U1, U2, , U12. El estudio de los snurps ha avanzado gracias al estudio del suero de pacientes padeciendo la enfermedad autoinmune conocida con el nombre de Lupus Eritematoso Sistmico, quienes portan anticuerpos que reconocen una o ms de sus propias protenas estructurales de los snRNP. Por ejemplo se ha detectado en ciertos pacientes la presencia en suero de un anticuerpo que se une a las protenas U1, U2, U5 y a los complejos snRNP conteniendo a U4/U6. Todos estos elementos forman un gran complejo conocido como spliceosoma. Se cree que cada uno de los componentes del spliceosoma tiene una funcin especfica an no dilucidada para todos. Por ejemplo se sabe que el snRNP U1 se une al sitio 5 de inicio del splicing guiado por una secuencia consensus, presente en su componente de ARN, complementaria a una secuencia de nueve nucletidos presente en el ARNhn. Esta secuencia de inicio es conocida como el sitio aceptor del splicing y al final del intron en su extremo 3 se ha identificado otra secuencia la cual ha sido llamada el sitio aceptor del splicing. Las secuencias intrnicas y exnicas forman una estructura tridimensional especfica necesaria al proceso de splicing. Un error durante el proceso de splicing o en la conformacin de esta estructura terciaria podra traer como consecuencia la no sntesis de la protena correspondiente o la sntesis de una protena con alteraciones estructurales y funcionales. Un grupo de enfermedades genticas humanas conocidas como Talasemias se caracterizan por niveles anormales de hemoglobina. Esta alteracin ha sido asociada con mutaciones en el gen que codifica para la globina y que en una buena proporcin conducen a la alteracin en el proceso de splicing de los transcriptos primarios. Algunas de estas mutaciones inactivan el sitio de splicing y an as el proceso se da a pesar de obtener patrones anormales de splicing que conducen a la sntesis de protenas con alteraciones estructurales y funcionales. En otros casos se ha observado aparicin o desaparicin de sitios de splicing, indicando que este es un proceso flexible que puede ser muy til durante el proceso de evolucin. Mecanismos de control especializados pueden modificar el proceso de splicing para que a partir de un mismo gen se puedan producir diferentes ARNm y posteriormente diferentes protenas de una manera controlada. Una vez el splicing es completado los ARNm son reconocidos por protenas receptoras presentes en el complejo de poro de la membrana nuclear y posteriormente son transportados activamente hacia el citoplasma donde son abordados por la maquinaria de traduccin conduciendo a la sntesis proteca. Si la maquinaria de splicing es alterada de tal manera que no realice su funcin, los ARN que requieran ser procesados son retenidos en el ncleo, mientras aquellos que no requieren ser procesados a travs del splicing son transportados normalmente hacia el citosol. El tamao de las molculas de ARNm est relacionado con el de la protena que se sintetiza a partir de la informacin que porta. Y su secuencia es complementaria a una sola hebra del ADN original (la hebra con sentido). Algunas de las protenas ms abundantes en ciertos tipos celulares diferenciados, tales como la hemoglobina en los glbulos rojos y la mioglobina en las clulas musculares son sintetizadas a partir de genes presentes en forma de copia simple por genoma haploide, en lugar de tener mltiples copias gnicas que permitan obtener por transcripcin mltiples molculas de ARNm. Esto se puede explicar debido a que cada una de las molculas de ARNm transcriptas son traducidas en ms de 10 millones de molculas de protena por minuto. Por otro lado se obtienen cantidades similares de los ARNr componentes de los ribosomas, pero en este caso los genes que codifican para los ARNr son los que estn representados en mltiples copias, por ejemplo para E. Coli se han descrito 7 copias, en clulas de Xenopus cerca de 600 y en una clula humana se pueden encontrar alrededor de 200 copias de genes para el ARNr por genoma haploide. Estos genes estn reunidos en pequeos grupos ubicados en 5 cromosomas

diferentes y generalmente se encuentran uno enseguida del otro (en tndem) separados por una corta secuencia de ADN llamada spacer, la cual no es transcrita. Los genes del ARNr son transcriptos por la ARN pol I, obtenindose un transcrito identificado como ARNr 45S con cerca de 13.000 nucletidos de longitud. La maduracin de este transcrito consiste en un clivaje para producir un ARNr 28S aprximadamente de 5.000 nucletidos, un ARN 18S de 2.000 nucletidos y el ARN 5.8S de 160 nucletidos. La ARN pol III transcribe otra molcula importante para la formacin del ribosoma, el ARNr 5S. Los genes que codifican para el ARNr 5S tienen una longitud aprximada de 120 pb y tambin estn ubicados en tndem. Una vez producidos los ARNr son inmediatamente empaquetados en el nucleolo por las protenas que integran los ribosomas (ribonucleoprotenas) y que se encuentran altamente concentradas en esta estructura. El ARN tambin constituye el genoma de algunos virus como por ejemplo los virus tumorales, en otros virus el ARN puede encontrarse en forma de doble hebra doble, tales como poliovirus y reovirus.

TRANSDUCCION DE SEAL
Las vas de transduccin de seal constituyen el mecanismo a travs del cual las seales extracelulares pueden inducir una respuesta celular, que puede pasar por la activacin o inactivacin de un conjunto de genes, sin que su presencia fsica al interior de la clula sea indispensable. La membrana celular tiene incorporada en su estructura protenas que cumplen la funcin de receptores para muchas de las seales extracelulares que entran en contacto con ella. Todas las clulas no tienen los mismos receptores, estos varan segn el tipo celular. Cuando el ligando se une al receptor ocurre el primer paso de activacin de los componentes de las diferentes vas de transduccin de seal. El resto de componentes se activan sucesivamente en cadena. Una clula eucaritica puede tener diferentes opciones: puede proliferar, diferenciarse, estar en reposo o morirse. Las seales extracelulares junto con la activacin y/o inactivacin de diferentes programas genticos conducen a la clula hacia una de las opciones mencionadas. Un programa gentico consiste en un grupo de genes que contienen la informacin necesaria para que la clula pueda desempear correctamente su funcin en el marco de una de las cuatro posibles opciones. La respuesta celular producida por una va de transduccin de seal puede ser la activacin o inactivacin de productos intermediarios, tales como los factores de transcripcin que actan posteriormente activando o inhibiendo genes, y otras protenas que participan en procesos regulatorios a nivel del citoplasma. La activacin de un factor de transcripcin generalmente es el resultado de una modificacin de su estructura qumica que puede favorecer su transporte hacia el interior del ncleo, en caso de que se trate de un factor presente en el citoplasma, si el factor de transcripcin es nuclear hasta all puede llegar la accin de las vas de transduccin para modificarlo de tal manera que pueda ejercer su funcin sobre la modulacin de la transcripcin de un programa gentico que determina el devenir de la clula. La respuesta final a una seal extracelular puede ser tambin la produccin de otra molcula que al ser secretada puede actuar como seal extracecular para otras clulas o para la misma que la ha producido. El mensaje transmitido al interior de una clula a travs de la va de transduccin de seal puede ser amplificado o atenuado al interior de la clula que lo recibe. Si la seal extracelular tiene una accin sobre clulas cercanas a la clula que produce la seal se dice que se trata de una comunicacin paracrina, la cual en las clulas nerviosas recibe el nombre de sinapsis. Si las clulas blanco se encuentran a una mayor distancia y la seal debe viajar por los vasos sanguneos o linfticos se dice que la comunicacin es endocrina, como por ejemplo el de la mayora de hormonas. Los elementos que integran las vas de transduccin de seal son: 1. Clula que produce la seal

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2. Molcula seal 3. Receptor especfico 4. Va de Transduccin 5. Respuesta Cualquier clula capaz de producir una molcula que al ser secretada induzca una respuesta en otra clula se puede considerar como productora de seales, como por ejemplo una neurona productora de neurotransmisores, un linfocito T que produce citoquinas una clula glandular productora de hormonas, etc. La molcula seal se clasifica segn su distribucin en neurotransmisores (sistema nervioso), hormonas (sistema endocrino) o mediadores qumicos locales (pptido natriurtico) y segn su naturaleza qumica se clasifican en: Hidrfobas e Hidroflicas. Las hidrfobas tienen la particularidad de atravesar la membrana celular para asociarse con su receptor que puede estar presente en la membrana nuclear o en el citoplasma. Como ejemplo se puede mencionar las hormonas esteroideas y tiroideas, la vitamina D, los retinoides y eicosanides, el Oxido ntrico a pesar de no poseer un receptor intracelular tambin tiene la capacidad de atravesar la membrana celular. Las hidroflicas generalmente no entran al citoplasma sino que transmiten su mensaje a travs de receptores ubicados en la membrana celular y posteriormente en algunos casos el complejo ligandoreceptor es endocitado y eventualmente reciclado o destrudo. Como ejemplo de estas molculas se puede citar las hormonas peptidicas como la insulina, las glucopeptidicas como el glucagn, los neurotransmisores como el glutamato, etc. Este tipo de molculas seal a diferencia de las hidrofbicas generalmente median respuestas celulares de corta duracin y permanecen muy poco en el torrente sanguneo. Los receptores que captan las seales hidroflicas se localizan generalmente en la membrana celular y aquellos que captan las hidrofbicas se localizan en el citoplasma o en la membrana nuclear. Los receptores de membrana celular pueden estar asociados a una protena G, a un canal inico o tener una actividad tirosina quinasa. Las protenas G se caracterizan por poseer una actividad GTPasa, pueden ser monomricas o heterotrmericas, algunas de las monomricas han sido catalogadas como oncogenes porque mutaciones en el gen que codifica para ellas con frecuencia se han asociado a procesos cancerosos. Las protenas G monomricas se encuentran en cercana de la membrana celular y pueden ser activadas por otras protena asociadas a los receptores, muchas de ellas han sido reconocidas como oncogenes, ej: Ras, Raf, Rho, etc. Las heterotrimricas estn compuestas por tres subunidades: la subunidad que le permite asociarse a la molcula de GTP, la subunidad posee una funcin especial en las clulas nerviosas para la captacin de las imgenes en el ojo, y la subunidad mantiene unida la protena G a la porcin citoplasmtica de la membrana celular. Los receptores asociadas a canales inicos, pueden estar formando parte del complejo proteco que integra un canal inico, la molcula seal que los activa puede ser un neurotransmisor que induce la apertura o cierre del canal alterando la permeabilidad de membrana y excitabilidad de la clula que lo posee. Los receptores catalticos poseen en su dominio intracitoplasmtico, una actividad tirosinaquinasa asociada a ellos, de tal manera que al ser activados por la molcula seal este dominio es fosforilado y da inicio a una reaccin de fosforilacin en cascada de diferentes protenas. La ltima protena de la cascada en ser activada pude permanecer en el citoplasma y actuar sobre otros factores o puede ser transportada al interir del ncleo donde midificar la estructura de factores de transcripcin, a travs de mecanismos de fosforilacin principalmente.Los principales ejemplos de este tipo de receptores catalticos lo constituyen los receptores de factores de crecimiento o el receptor de la insulina. Los receptores para la mayora de molculas seal hidrofbicas capaces de atravezar la membrana celular se ubican en el citoplasma o en la membrana nuclear. Es all donde se unen a los ligandos correspondientes y en forma de complejo son transportados al sitio de accin que puede ser por ejemplo regiones especficas sobre al ADN. Estos complejos pueden actuar como factores de transcripcin. La activacin en cadena de diferentes protenas es lo que constituye una va de transduccin de seal, algunas de ellas necesitan de la activacin de molculas llamadas mediadores que constituyen un punto clave en la cascada de activacin. Los mediadores pueden tener mltiples

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acciones como por ejemplo el AMPc que interviene en la modulacin del citoesqueleto, activacin de protenas quinasas del RE, activacin de factores de transcripcin y metabolismo del glicgeno. Otros mediadores son el Ca++, el Dialcilglicerol (DAG), el xido ntrico (ON) etc. La regulacin de la actividad de las vas de transduccin de seal depende principalmente de la presencia de la molcula seal y disponibilidad de receptores. De igual manera durante la activacin en cascada tambin se estn activando la funcin de los mecanismos de inactivacin que van a actuar posteriormente en la va de transduccin de seal.

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