UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA FACULTAD DE MEDICINA DEPARTAMENTO DE FISIOLOGA Y BIOQUMICA MANUAL DE LABORATORIO HEMOSTASIA NORMAS PARA EL INGRESO AL LABORATORIO: Leer

la gua de laboratorio, siempre habr quiz antes de empezar. Elementos de proteccin personal (bata limpia y planchada, guantes). Cabello recogido tanto para hombres como mujeres. Calzado cubierto y ropa cubierta (no usar faldas ni pantaln corto). No es permitido, comer, tomar agua, ni fumar en del laboratorio. Las maletas deben colocarse en la parte trasera del laboratorio. No realice procedimientos que no le hayan sido autorizados por el profesor a cargo. Recuerde que el material contaminado debe ser depositado en las canecas rojas. El material cortopunzante debe ser depositado en el guardin dispuesto en la parte de atrs.

LABORATORIO DE HEMATOLOGA II (HEMOSTASIA) El mecanismo hemosttico est diseado para detener la hemorragia en vasos que presentan dao en su integridad. El proceso es rpido y localizado y no afecta la fluidez de la sangre en circulacin. La hemostasia comprende una interaccin integrada compleja de: 1) vasos sanguneos, 2) plaquetas y 3) factores de la coagulacin y 4) la fibrinlisis. Para las pruebas de coagulacin, el anticoagulante utilizado es el Citrato de sodio al 3.25%, el cual tiene como principio la precipitacin del calcio. TIEMPO DE SANGRA OBJETIVO Evaluar la hemostasia primaria, involucrando el recuento de plaquetas y su funcin. Esta prueba es utilizada como: Prueba prequirrgica para evaluar los trastornos hemorrgicos relacionados con las plaquetas y su valor predictivo positivo es bueno. Prueba de tamizaje de las diferentes trombopatas: Enfermedad de von Willebrand, Trombastenia de Glanzmann y Sndrome de Bernard Soulier. Control de los medicamentos antiagregantes.

FUNDAMENTO Al lesionar pequeos vasos la hemorragia provocada es determinada por la liberacin sustancias vasoconstrictoras y por la agregacin plaquetaria que tapona la lesin.

MATERIALES Lanceta desechable Papel filtro Cronmetro Algodn Alcohol Portaobjetos

METODOLOGA Seleccin del sitio de puncin: Se selecciona la parte anterior, aproximadamente 5 cm por debajo del pliegue antecubital. del brazo, este no debe estar paralizado ni con edema. Debe evitarse lesionar grandes vasos, as como las reas callosas y cicatrizadas. Si es necesario, se debe afeitar el lugar de incisin seleccionado. Colocar el tensimetro sobre la porcin superior del brazo del paciente. Desinfectar el lugar de la incisin Subir el tensimetro a 40 mmHg durante 30 segundos antes de hacer la incisin Colocar la lanceta en la zona elegida, asegurndose de que est en contacto con la piel. Si la prueba se realiza con lanceta, se deben hacer tres punciones y los extremos de la lanceta deben quedar marcados en la piel, para garantizar que penetr completamente. Cada 30 segundos absorba la sangre que fluye, con papel de filtro #1 (rasgado), sin tocar el tapn que se est formando. En caso de que la sangre que fluya sea muy abundante, puede absorber con mayor frecuencia. Detenga el cronmetro una vez que el sangrado de haya detenido completamente. Si despus de 15 minutos contina la hemorragia se hace un vendaje con gasa estril y seca, el resultado se reporta mayor de 15 minutos. Retire el tensimetro y limpie el rea de incisin.

VALOR DE REFERENCIA: El valor normal es de 3 a 6 minutos. Interpretacin: La prueba se encuentra alterada en: Trombocitopenia: Hay una correlacin inversa entre el nmero de plaquetas y la prolongacin del tiempo. El tiempo de sangra se encuentra alterado cuando el nmero de plaquetas est por debajo de 100.000/ mm 3 Trombopatas: Por lo general, el tiempo es de ms de 15 minutos en: Enfermedad de Von Willebrand, Trombastenia de Glanzmann, Sndrome de Bernard Soulier etc. Est alterado en desrdenes vasculares primarios: vasculitis, Sindrome de Cushing, Amiloidosis, desrdenes del tejido conectivo y Ehlers Danlos. En algunas ocasiones con el uso de medicamentos antiagregantes (aspirina) se puede alterar.

PRUEBA DE TORNIQUETE: METODO DE RUMPEL LEEDE

OBJETIVO Determinar la fragilidad capilar del paciente. FUNDAMENTO Determina la fragilidad capilar, al aumentar la presin sangunea. La obstruccin del flujo venoso por el aumento de la presin puede producir la ruptura de pequeos vasos y la aparicin de petequias. MATERIALES Tensimetro. Cronmetro. METODOLOGIA Antes de iniciar la prueba se debe observar cuidadosamente el antebrazo, para comprobar si hay petequias, de haberlas, se deber encerrar en un crculo, y determinar si aparecieron nuevas o aumentaron de tamao. Se coloca el Tensimetro en el brazo del paciente y se lleva a 80mmHg mantenindolo as por 5 minutos. Transcurrido este tiempo se retira, se esperan otros 5 minutos y se observa la aparicin de petequias en el antebrazo y en la mano. El resultado se da por cruces de 1 4 dependiendo del nmero de petequias: + Mas de 10 petequias en el antebrazo. ++ Mas de 20 petequias en el antebrazo. +++ Mas de 40 petequias en el antebrazo y el dorso de la mano. ++++ Incontables petequias.

No se deben contar las que aparecieron en el sitio donde se coloc el Tensimetro, ni en el pliegue del brazo, ya que estas se presentan por continuidad. VALOR DE REFERENCIA: Hasta 10 petequias en el antebrazo. FRAGILIDAD CAPILAR AUMENTADA: Se asocia a deficiencia de vitamina C, trombocitopenia, prpura de Schelein Henoc, prpura senil, diabetes, sepsis, hiperesplenismo.

TIEMPO DE COAGULACIN SANGRE TOTAL UTILIDAD Evaluar el sistema intrnseco de coagulacin FUNDAMENTO El contacto de la sangre venosa con una superficie extraa (vidrio) produce la activacin del factor XII que a su vez activa el factor XI as sucesivamente hasta la formacin del cogulo de fibrina. MATERIALES Jeringa Tubo de sangra sin anticoaugulante Bao mara a 37C Cronmetro Sangre Algodn Alcohol Torniquete PROCEDIMIENTO Inmediatamente despus del sangrado se activa el cronometro, se mantendr en la mano para mantener la temperatura corporal, posterior a ello se gira el tubo a 90 grados suavemente cada 30 segundos y se debe observar detenidamente hasta que se forme completamente el cogulo. El valor normal es de 6 a 15 minutos. Un resultado menor indica, una tcnica defectuosa. Un valor mayor de 15 minutos indica un defecto severo en alguno de los factores, exceptuando el factor VII o XII. Puede indicar tambin presencia de un anticoagulante circulante.

RETRACCIN DEL COGULO UTILIDAD Evaluar la funcin plaquetaria y la estructura de la fibrina en la induccin de la retraccin del cogulo. . FUNDAMENTO El cogulo formado en un tubo de vidrio se retrae por accin de las plaquetas y la fibrina.

PROCEDIMIENTO La sangre utilizada en el procedimiento anterior la dejamos en el bao mara y observamos el tubo cada 15 minutos sin agitarla. Transcurrida una hora, se observa la separacin del cogulo de las paredes del tubo, con la presencia de suero alrededor del cogulo. La retraccin o separacin debe ser total en

12 horas, el cogulo formado debe persistir por 72 horas. El resultado se reporta. Normal: Si hay retraccin. Negativa: Si no se observa retraccin. La retraccin depende del nmero de plaquetas y su funcin. Es negativo en las trombocitopenias y trombopata.

DESFIBRINACIN DE LA SANGRE OBJETIVO Promover la coagulacin de la sangre total, dando como resultado la formacin de fibrina

FUNDAMENTO La sangre total es un conjunto de clulas y plasma. En el plasma encontramos los factores de la coagulacin, los cuales al ser activados dan como resultado la formacin de fibrina que ser atrapada en los palillos. MATERIALES

Jeringa Agujas Alcohol Algodn Cpsula de porcelana. Palillos.

PROCEDIMIENTO

Tomar 2 cm de sangre venosa en una cpsula de porcelana Agitar con los palillos juntos impidiendo que se coagule la sangre, se obtendr un cogulo adherido a los palillos el cual debe lavarse y observar cuidadosamente su forma y contextura. Examinar la sangre que queda en el recipiente.

TIEMPO DE PROTROMBINA (TP) OBJETIVO Medir el tiempo requerido para la formacin del cogulo de fibrina, despus de agregar tromboplastina tisular y cloruro de calcio a un plasma citratado pobre en plaquetas. Los factores que evala el TP son: El FVII (que es el que se activa con la tromboplastina tisular) Los factores comunes (FX, FV, FII y Fibringeno)

 Es la prueba ideal para el control de la anticoagulacin con anticoagulantes orales, en este caso se debe reportar con el INR. FUNDAMENTO Un exceso del extracto tisular y calcio, agregados al plasma reaccionan con los otros factores (V, VII, X y fibrinogeno) para formar un compuesto activo, que convierte la protrombina en trombina y el fibringeno en fibrina. MATERIALES

Alcohol Algodn Agujas Tubos tapa azul (citrato al 3.25%) Tubos de ensayo Pipetas pasteur de 0.2 y 0.1 ml Bao de mara a 37C Cronmetro Tromboplastina tisular que contiene calcio

PROCEDIMIENTO

Extraer 4.7 ml de sangre en un tubo de tapa azul o hasta que se agote completamente el vacio. Esto permite mantener la relacin 9:1 (Sangre: anticoagulante). Centrifugar 10 minutos a 3.000 r.p.m. para obtener plasma pobre en plaquetas y separar el plasma. En un tubo se colocar 0.2 ml de tromboplastina tisular e incubar a 37 C durante 60 segundos Adicionar 0.1 ml de plasma y poner en marcha el cronmetro. Se inclina el tubo hasta la mitad para poder observar los hilos de fibrina y la formacin del cogulo, cuando se inicia formacin de los hilos, se detiene el cronmetro y se lee el tiempo. INTERPRETACIN La tromboplastina tisular que se utiliza para las pruebas de laboratorio es un extracto de pulmn o cerebro ms calcio. La prueba se debe realizar por duplicado, el valor normal es de 10 a 15 segundos aproximadamente, pero cada laboratorio tendr sus propios valores de referencia. El tiempo de protrombina mide principalmente la actividad del complejo protrombinico. La va extrnseca recibe ste nombre porque requiere la presencia del factor tisular presente en los tejidos extravasculares. El factor tisular en presencia del calcio activa al factor VII, pero tambin puede ser estimulada, por clulas endoteliales y los leucocitos.

TIEMPO TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA (TTPa) OBJETIVO

Medir el tiempo requerido para la formacin del cogulo de fibrina, despus de agregar un activador de contacto (slica coloidal) a un plasma citratado pobre en plaquetas. Los factores que evala el TTP son: Factores XII, XI, IX y VIII Los factores comunes (FX, FV, FII y Fibringeno) Es la prueba para la monitorizacin de pacientes bajo terapia anticoagulante con heparina

FUNDAMENTO Medir el tiempo de coagulacin del plasma en presencia de una tromboplastina parcial activada, la cual sustituye la accin del factor 3 plaquetario, necesario para la formacin del coagulo de fibrina. . MATERIALES

Alcohol Algodn Agujas Tubos tapa azul (citrato al 3.25%) Tubos de ensayo Pipetas pasteur de 0.2 y 0.1 ml Bao de mara a 37C Cronmetro Reactivo para medir tiempo parcial de tromboplastina (cefalina) Calcio 0.025 M

PROCEDIMIENTO

Extraer 4.7 ml de sangre en un tubo de tapa azul o hasta que se agote completamente el vacio. Esto permite mantener la relacin 9:1 (Sangre: anticoagulante). Centrifugar 10 minutos a 3.000 r.p.m. para obtener plasma pobre en plaquetas y separar el plasma. Tomar 0.1 ml de plasma y adicionar 0.1 ml de tromboplastina parcial e incubar por 5 minutos exactos a 37C Agregar 0.1 ml de cloruro de calcio 0.025 M previamente incubado y poner en marcha el cronmetro. Inclinar el tubo hasta que aparezcan los hilos de fibrina y se forme el cogulo. Se detiene el cronmetro en el momento que aparezcan los hilos de fibrina y se anota el tiempo. INTERPRETACIN La prueba se debe realizar por duplicado, el valor normal es de 28-32 segundos aproximadamente, pero cada laboratorio tendr sus propios valores de referencia. El TTPa evala la va intrnseca, esta va es ms lenta que la extrnseca, se inicia con la activacin del factor XII en el momento en que la sangre entra en

contacto con el endotelio lesionado y esta activacin participan la precalicrena, e ciningeno de alto peso molecular, el colgeno y el F3P.

TIEMPO DE TROMBINA (TT)

OBJETIVO Medir el tiempo requerido para la formacin del cogulo de fibrina, despus de agregar trombina a un plasma citratado pobre en plaquetas. El tiempo de trombina mide la calidad y cantidad del fibringeno

FUNDAMENTO El fibringeno, se convierte en fibrina, gracias a a la trombina mediante dos pasos, en el primer paso la trombina fija el fibringeno para formar monmeros de fibrina, luego estos se agregan para formar polmeros insolubles de fibrina.

MATERIALES

Alcohol Algodn Agujas Tubos tapa azul (citrato al 3.25%) Tubos de ensayo Pipetas pasteur de 0.2 y 0.1 ml Bao de mara a 37C Cronmetro Trombina Solucin Salina

PROCEDIMIENTO

Extraer 4.7 ml de sangre en un tubo de tapa azul o hasta que se agote completamente el vacio. Esto permite mantener la relacin 9:1 (Sangre: anticoagulante). Centrifugar 10 minutos a 3.000 r.p.m. para obtener plasma pobre en plaquetas y separar el plasma. Tomar 0.2 ml de plasma control y adicionar 0.2 ml de trombina con solucin salina hasta que el tiempo se encuentre en el intervalo de referencia (16-22 segundos). Tomar 0.2 ml de plasma problema y adicionar 0.2 ml de trombina ajustada. Inclinar y agitar el tubo hasta que aparezcan los hilos de fibrina y se forme el cogulo. Se detiene el cronmetro en el momento que aparezcan los hilos de fibrina y se anota el tiempo. INTERPRETACIN

La prueba se debe realizar por duplicado, el valor normal es de 16-22 segundos aproximadamente, pero cada laboratorio tendr sus propios valores de referencia. El valor del TT pueden ser alterados por: Afibrinogenemia Hipofibrinogenemia Disfibrinogenemia Anticoagulacin con heparina En presencia de productos de degradacin de fibringeno y/o fibrina Hipergammaglobulinemias