PCR Introduo

Objetivo A tcnica do PCR , tem como objetivo amplificar o DNA. Materiais e Procedimento Materiais: Eppendorf 1,5 mL; 5L PCR buffer minus Mg2+; 1L dNTP; 1,5L 50mM MgCl2; 2,5L Primer; 4,0L DNA template; 14,5L Taq DNA polimerase; 50L gua destilada e autoclavada. Procedimento: 1. Inicialmente foi feito um mix com a quantidade de reagentes acima multiplicado pelo nmero de amostras, ou seja : 250L gua destilada e autoclavada; 25L PCR buffer minus Mg2+; 5L dNTP; 7,5L 50mM MgCl2; 12,5L Primer; 72,5L Taq DNA polimerase.

2. Foi colocada 4,0 L de DNA em um eppendorf de 0,5mL. 3. Logo aps foi adicionado 74,5 L do mix e colocado na termociclador durante 34 ciclos. 4. Aps o perodo dos 34 ciclos as amostras foram retiradas e passaram por um processo de eletroforese para visualizao das bandas de DNA.

Resultado e Discusso

Como pode ser visto no resultado no houve amplificao do DNA, devido alguns erros aleatrios, ao fim da utilizao do termociclador pde perceber-se que a tampa no estava fechada corretamente, como este mtodo depende da alterao cclica de temperaturas este deve permanecer completamente fechado. Outro erro percebido foi que as amostras de DNA permaneceram muito tempo em temperatura ambiente, podendo haver degradao das mesmas e por consequncia no h ampliao. As amostras fora do termociclador deveriam permanecer em baixa temperatura, devido sua alta sensibilidade.
Concluso

O objetivo de amplificar o DNA das amostras no foi alcanado em virtude da utilizao indevida do termociclador, por isso para que se obtenham os resultados esperados deve-se fazer a prtica com cautela.
Referencia Bibliogrfica http://www.alice.cnptia.embrapa.br/bitstream/doc/48295/1/LivroProtMolecular.pdf http://www.icb.ufmg.br/mor/pad-morf/pcr2.htm http://www.fea.br/Arquivos/Biotecnologia/Material%20Prof%C2%AA%20Cristina%20%20Biologia%20Celular/Principios_da_PCR.pdf