UPC II Microbiologia

Aula prtica 1 2011/2012

03-10-2011

Maria Jos Correia mariacorrei@gmail.com

Sumrio P1:

Apresentao sucinta do programa das aulas laboratoriais; Segurana no Laboratrio Noes de desinfeo, assepsia e esterilizao Introduo microscopia

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Programa:
Data
3/10

Tema
O laboratrio de Microbiologia (Equipamentos Materiais e Cuidados)

10/10
17/10 24/10 31/10 e 07/11 14/11

Meios de cultura e cultivo de microrganismos (Preparao dos meios para a aula seguinte)
Recolha e processamento de amostras (Recolha pelos alunos de uma amostra do biofilme oral e sua inoculao nos meios apropriados). Observao direta de microrganismos (Colorao de Gram das amostras do biofilme oral. Identificao de microrganismos por cultura e testes bioqumicos miniaturizados para identificao de streptococci. Inclui realizao de um antibiograma com o microrganismo identificado. Ficha de avaliao. Apresentao dos trabalho.

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Segurana no laboratrio:

Atitudes:

Usar o senso comum (a maioria dos acidentes de laboratrio comea com algo simples); Estar consciente conhecer os reagentes antes de os usar (ler os rtulos tomar as medidas necessrias); Estar protegido conhecer as prticas e equipamentos que podem aumentar a proteo (mscaras, luvas, etc.).
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Segurana no laboratrio:

Regras gerais:

Nunca trabalhar sozinho! Nunca COMER, BEBER, FUMAR, aplicar lentes de contacto ou cosmticos! Nunca cheirar solues ou reagentes Nunca pipetar com a boca Lavar imediatamente a pele aps contacto com culturas/qumicos

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Segurana no laboratrio:
especialmente perigoso correr ou brincar em ambientes laboratoriais

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Segurana no laboratrio:

Bancada:

As bancadas de trabalho devem ser mantidas organizadas e limpas Identificar todo o material utilizando para isso marcadores de vidro apropriados Manter os bicos de Bunsen e as lamparinas acesas apenas enquanto so necessrios Os lixos devem ser perfeitamente identificados O material de vidro estalado ou partido deve ser imediatamente rejeitado Colocar as pipetas de vidro sujas em contentores de plstico devidamente identificados para esse fim
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Segurana no laboratrio:

Proteo pessoal:

Usar bata e manter os cabelos compridos apanhados; No usar sapatos abertos, chinelos, sandlias; Usar a hotte sempre que necessrio; Quando abandonar o laboratrio retirar a bata e lavar todas as zonas de pele que possam ter estado expostas a substncias txicas/patognicas.

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Instrues gerais:

Ler os protocolos antes de cada aula prtica Desinfetar as mos e a bancada No incio da aula examinar/registar os resultados das experincias realizadas na aula anterior Seguir atentamente as instrues fornecidas pelo docente antes de executar o trabalho proposto Depois de terminar o trabalho de cada aula arrumar a bancada onde trabalhou. Colocar o lixo e o material inoculado nos locais apropriados Desinfetar a bancada (lcool) e lavar as mos com sabonete antes de deixar o laboratrio
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Assepsia

ausncia de microrganismos

Manuteno das condies de assepsia:

limpar e desinfetar a bancada de trabalho lavar e desinfetar as mos no incio e fim da aula usar bata limpa (sempre) esterilizar o material a utilizar trabalhar chama ou na cmara de fluxo laminar

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Tcnicas de esterilizao

Principais agentes anti-microbianos

Mtodos fsicos Calor Radiaes Filtros Mtodos qumicos desinfetante antissticos

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Esterilizao pelo calor

Calor seco

Oxidao e desnaturao das protenas Combusto da matria orgnica Aplicaes:

Materiais resistentes a altas temperaturas (ansas, vidros no calibrados, etc.)

Equipamento

Estufas a 160-180C (2 horas) Equipamento de incinerao ou queima direta

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Esterilizao pelo calor

Calor hmido

Coagulao das protenas; destruio de clulas vegetativas e esporos Aplicaes:

Meios de cultura e solues aquosas Materiais pouco resistentes ao calor (plsticos resistentes, etc.)

Equipamento/tcnicas:

Autoclave (atmosfera de vapor de gua sob presso) Pasteurizao (aquecimento do produto por um perodo de tempo que varia com produto a pasteurizar e a temperatura utilizada) Tindalizao (aquecimento a 65-100C durante 30-60 min, intercalado com incubao a 35C ciclos que podem repetir-se at 3 dias)

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Esterilizao por filtrao

Prescott, Microbiology, 5th edition

Remoo de microrganismos em membranas filtrantes com poro nominal inferior s dimenses bacterianas (0,2 m) Aplicaes: Produtos termo lbeis, volteis ou sensveis a altas presses (ex: antibiticos e vitaminas) Equipamento/tcnicas: Filtrao com funil (grandes volumes) Filtrao com seringa (pequenos volumes) Filtrao de ar em cmaras de fluxo laminar
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Esterilizao por radiaes

Raios X e :

Poder ionizante e elevado poder de penetrao - para objectos volumosos

Raios UV:

Menor energia, radiao pouco penetrante usada para esterilizao de superfcies

Ultra-sons (radiao de alta frequncia)

Destruio mecnica de clulas

Raios catdicos (feixes de electres de intensidade e velocidade elevadas):

Esterilizao de material cirrgico

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Esterilizao por agentes qumicos

Agentes bactericidas ou bacteriostticos (s eliminam as formas vegetativas e no as formas esporuladas)

Sabes, sais biliares e fenis (alterao da tenso superficial) Cloro (oxidao de compostos celulares) lcoois (desnaturao de protenas e solubilizao de lpidos)

Detergentes germicidas: misturas comerciais de vrios agentes bactericidas e bacteriostticos

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Introduo microscopia
Prescott, Microbiology, 5th edition

Microscpio tico
Ocular Tubo Revlver Objetiva Coluna Platina

instrumento usado para ampliar constitudo por uma parte mecnica e uma parte tica

Diafragma Condensador Fonte de luz P Parafuso Micromtrico Parafuso Macromtrico

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Microscpio tico - Parte mecnica

P ou Base suporta/estabiliza o microscpio Brao ou Coluna pea fixa base, serve de suporte a outros constituintes Tubo ou Canho suporta os sistemas de lentes da extremidade superior Platina pea paralela base, onde colocada a preparao a observar,

do microscpio.

possuindo no centro um orifcio que permite a passagem dos raios luminosos concentrados pelo condensador.

Parafuso Macromtrico engrenagem indispensvel para fazer a focagem.

Parafuso Micromtrico elemento que permite movimentos de amplitude

Revlver pea giratria adaptada zona inferior do tubo que suporta as

reduzida para completar a focagem.

objetivas de diferentes ampliaes (ex: 10x, 40x, 100x)

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Microscpio tico - Parte tica

Sistema de Oculares e Sistema de Objetivas o conjunto de lentes

que permitem a ampliao do objecto (a ampliao dada ao microscpio igual ao produto da ampliao da objetiva pela ampliao da ocular)

Fonte Luminosa

lmpada (iluminao artificial), espelho que reflita a luz solar (iluminao natural).

Condensador conjunto de lentes convergentes que distribui

regularmente, sobre o campo visual do microscpio, a luz emitida pela fonte luminosa.

Diafragma regula a intensidade luminosa no campo visual do

microscpio

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Utilizao do microscpio

Ligar a lmpada Ajustar distncia interpupilar (oculares) Colocar a lmina na platina e focar em objetiva 10x Ampliar a imagem, retificar focagem e observar Utilizar leo de imerso (1 gota) apenas para a objetiva 100x Limpar a objetiva com soluo apropriada Quando terminar observao:

Regular a luz para o mnimo e desligar a lmpada Voltar sempre para a objetiva de menor ampliao Cobrir o microscpio

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Objetivos P1:

O aluno deve ser capaz de:

seguir todas as regras de segurana referidas; definir desinfeo, assepsia e esterilizao; enumerar os principais processos de esterilizao de material e meios de cultura; descrever as situaes especficas em que deve ser utilizado um determinado mtodo de esterilizao; descrever o modo de atuao dos mtodos de esterilizao; utilizar o microscpio da forma mais correta.

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