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Instituto Federal de Educao, Cincia e Tecnologia de Alagoas Departamento de Educao a Distncia Universidade Aberta do Brasil
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Introduo.................................................................................................................... 04 Captulo 1: Gentica de Transmisso: 1 e 2 Lei de Mendel.................. 13 Captulo 2: Gentica de Transmisso: Extenses do Mendelismo........ 52 Captulo 3: Gentica de Transmisso: Herana e Sexo.............................. 82 Captulo 4: Gentica de Transmisso: Ligao e Mapas Genticos.... 100 Captulo 5: Gentica Molecular: Estrutura dos cidos Nucleicos...... 118 Captulo 6: Gentica Molecular: Duplicao do DNA............................... 133 Captulo 7: Gentica Molecular: Transcrio.............................................. 140 Captulo 8: Gentica Molecular: Traduo................................................... 147 Captulo 9: Gentica Molecular: Mutao e Mecanismos de Reparo..162 Referncias................................................................................................................ 171

Muitas vezes, ouvimos falar: Fulano a cara do pai, olha o jeito de andar e de dormir, no nega que seu filho... Se observarmos o zigoto, de um animal e compararmos com outros de espcies diferentes, por exemplo, um camundongo e ns humanos, veremos que so muito parecidos, porm, as espcies adultas que surgem daquela nica clula so bem diferentes... Ns, organismos multicelulares, com clulas fisiolgicas e morfolgicas to diferentes, surgimos a partir de uma nica clula... Desde a pr-histria nos perguntamos por que nos parecemos com nossos pais? Como essas caractersticas so passadas de pais para filhos? Esse livro vem com o objetivo de esclarecer essas questes. Estudaremos como os gametas, clulas responsveis pelo processo de reproduo sexuada, contendo os cromossomos, transferem essas informaes para o novo ser, quais os mecanismos que permitem que essas caractersticas sejam passadas, de pais para filhos; em nvel bioqumico, que molculas so essas? E como elas conseguem essa faanha? 1. OBJETIVOS DA GENTICA A gentica a rea da biologia que se preocupa em explicar como as semelhanas e diferenas entre os seres vivos, e entre os pais e filhos, so transmitidas de uma gerao a outra, ou, em outras palavras, estuda a hereditariedade ou herana biolgica. Para que ocorra essa transmisso de caractersticas, necessrio que o material hereditrio (material gentico), ou o material que ser transmitido entre as geraes, seja passado atravs dos gametas, nico elo fsico entre as geraes. O que resulta na formao do zigoto.

O zigoto uma nica clula resultante da fertilizao do gameta feminino e masculino e carrega toda a informao para a formao do novo ser multicelular que apresenta: clulas, tecidos e rgos distintos, mas que interagem e funcionam de forma sincronizada e semelhante gerao anterior. Para que esse material gentico possa ser passado de uma gerao a outra e possa regular, na nova gerao, todas as etapas do desenvolvimento, necessrio que ele apresente uma srie de propriedades. 1) Capacidade de replicao: cada nova clula formada no organismo

tambm leva a informao contida no zigoto. E cada gerao, para se perpetuar, necessita formar um grande nmero de gametas para passar para as novas geraes, logo, necessrio que esse material seja capaz de produzir cpias dele mesmo (replicar ou duplicar). 2) Transferir e traduzir Informaes: o material gentico que vem

nos zigotos, alm de trazer informaes dos genitores, tem que ter mecanismos que traduzam essa informao em aes, que so capazes de controlar e gerenciar desde a formao do zigoto, at cada etapa do desenvolvimento, como o funcionamento de cada clula, as reaes bioqumicas entre as clulas, tecidos e rgos etc. 3) Capacidade de sofrer mutao: apesar de pais e filhos, ou

organismos de uma mesma espcie se assemelhar, ns somos todos diferentes, e muitas vezes essas pequenas diferenas podem ir se acumulando e passando para as geraes posteriores. O acmulo dessas diferenas pode permitir o surgimento de novas espcies. A capacidade que tem o material gentico de sofrer modificaes o que permite essa grande variedade entre a prole e entre as diferentes espcies e conseqentemente a evoluo.

2. OS TRS GRANDES MARCOS DA GENTICA A gentica tem pouco mais de 100 anos, mas os avanos cientficos e o desenvolvimento tecnolgico permitiram, em pouco tempo, um grande avano no conhecimento das principais formas de transmisso das caractersticas genticas, da estrutura qumica desse material gentico e, principalmente, de como esse material gentico controla e interfere na caracterstica herdada. Trs grandes eventos marcaram essa histria: 2.1. MENDEL E AS REGRAS DE HERANA Gregor Mendel, conhecido como o pai da gentica, foi o primeiro que, atravs da montagem de experimentos e anlise estatsticas dos dados em ervilhas, props padres de herana para caractersticas, tais como: forma da ervilha, cor do cotildone da semente, altura do p etc. Mendel chegou concluso de que cada caracterstica determinada por 2 fatores hereditrios (genes) e que, na hora de formar os gametas, s um dos fatores vai para os gametas, mas que, ao ocorrer fertilizao, esses fatores voltam a se reunir. Esses fatores ou genes podem apresentar formas (alelos) e contribuies diferentes para a expresso da caracterstica, por exemplo, a caracterstica cor do cotildone da semente pode ser; verde (determinado por um alelo) ou amarela (determinado por outro alelo). A relao, na planta, entre esses dois alelos que vai determinar qual a cor do cotildone que ser expressa. A coexistncia de alelos em uma planta no compromete, portanto, sua integridade, Mendel tambm descobriu que alelos de genes diferentes so herdados de forma independente uns dos outros. ( Veremos os estudos de Mendel no captulo 1). com Mendel que se inicia um dos nveis de anlise gentica, que chamamos de gentica clssica ou gentica de transmisso.

2.2. WATSON E CRICK: A ESTRUTURA DO DNA Aps a redescoberta dos trabalhos de Mendel, em 1900, a grande pergunta que no queria calar o que eram os fatores hereditrios ou genes? S na dcada de 50, experimentos feitos por Hershey e Chase mostram que, em bacterifagos, o material que penetra na bactria e capaz de formar um novo vrus o cido desoxirribonucleico, o DNA. Porm so Watson e Crick que conseguem explicar e montar um modelo da estrutura e como esse DNA capaz de produzir cpias dele mesmo para passar para a descendncia. (Captulos 5 e 6)

2.3. O PROJETO GENOMA HUMANO: SEQUENCIAMENTO DO DNA E CATALOGAO DOS GENES Os geneticistas, na primeira metade do sculo XX, sonhavam em identificar o material de que os genes so feitos, geneticista na segunda metade do sculo sonhavam com os modos de determinar as sequncias de bases nas molculas de DNA. Perto do final do sculo XX, j era possvel determinar as sequncias de bases de vrios organismos. Esse processo chamado sequenciamento do DNA e culminou, em 2001, com o sequenciamento do DNA humano, com uma mdia de 2,7 bilhes de pares de bases e de 20000 a 25000 genes. A coleo de genes sequenciados de um organismo forma o que chamamos de genoma. Foi tambm observado que o DNA de eucariotos e incluindo o DNA humano apresentam um grande nmero de sequncias de nucleotdeos que no expressam genes, ou seja, que no compem o genoma. Aps o sequenciamento, esses genes foram catalogados por localizao, estrutura e funo potencial. Os esforos hoje esto voltados para estudar, em nvel molecular, o modo como eles influenciam a grande variedade de caractersticas dos seres vivos. O enfoque da gentica baseado na anlise das sequncias de DNA que constituem um genoma chamado de genmica.

3. PRINCIPAIS ACONTECIMENTOS DA GENTICA NO SCULO XX Alm dos acontecimentos mais marcantes que vieram para mudar a cincia da gentica, sabemos que existiu uma srie de descobertas que entremeou esses eventos e que contribuu de forma decisiva para que eles acontecessem. Na tabela abaixo, relacionamos esses eventos.

ANO 1900

EVENTO As leis fundamentais da hereditariedade, descobertas por Mendel em 1865, so redescobertas independentemente por C. Correns, H. de Vries e E. von Tschermak.

1901

.H. de Vries adota o termo mutao para descrever mudanas na qualidade do material hereditrio.

1902-1909

W. Bateson cria os termos Gentica, homozigtico, heterozigtico, alelomorfo e epistasia, alm de uma nomenclatura para designar as geraes em experimentos genticos: P, F1, F2 etc.

1903

W. Sutton correlaciona as leis de Mendel com o comportamento dos cromossomos na meiose. Ele e T. Boveri, independentemente, sugerem que os fatores hereditrios deveriam estar nos cromossomos.

1906

W. Bateson e seus colaboradores E. R. Saunders e R. C. Punnett descrevem o primeiro caso de ligao gentica (linkage), em ervilhadoce, e de interao gentica na herana da forma da crista de galinceos.

1909

F. A. Janssens sugere que as figuras em forma de letra X observadas na meiose, resultantes da sobreposio de cromtides de cromossomos homlogos, seriam originadas pela troca de pedaos entre elas (permutao ou crossing-over). A. E. Garrod publica o livro Inborn Errors of Metabolism (Erros inatos do metabolismo), em que aparecem as primeiras discusses sobre gentica bioqumica. W. L. Johannsen enfatiza a distino entre a aparncia de um organismo e sua constituio gentica e cria o termo fentipo para designar a primeira e gentipo para a segunda. Ele cria tambm o termo gene para designar os fatores hereditrios. N. Nilsson Ehle elabora a hiptese de mltiplos fatores (genes aditivos) para explicar a herana quantitativa da cor da semente do trigo.

1911

T. H. Morgan descobre os primeiros genes com herana ligada ao sexo na mosca-do-vinagre Drosophila melanogaster, e sugere que eles estariam localizados no cromossomo sexual X, iniciando a consolidao da teoria cromossmica da herana.

1916-1917

E. Twort e F. H. DHerelle descobrem, independentemente, um vrus capaz de atacar e destruir bactrias (bacterifago).

1927

H. J. Muller, um ex-aluno de Morgan, trabalhando com Drosophila melanogaster, demonstra que raios X so indutores de mutao.

1928 1931

F. Griffith descobre a transformao bacteriana em pneumococos. C. Stern, trabalhando com Drosophila melanogaster, e H. S. Creighton e B. McClintock, com milho, fornecem as provas citolgicas da ocorrncia de permutao (crossing-over) na meiose.

1935

G. W. Beadle e B. Ephrussi, com base em seus estudos sobre a cor de olho em Drosophila, lanam a hiptese de que os genes atuam

controlando as reaes qumicas celulares por meio de enzimas. 1936 T. Dobzhansky publica o livro Genetics and the Origin of Species (Gentica e a origem das espcies), um marco na rea da Gentica evolutiva e na construo da moderna teoria evolucionista. 1939 E. L. Ellis e M. Delbrck iniciam os estudos com bacterifagos, marcando o comeo dos trabalhos genticos em vrus. 1941 G. W. Beadie e E. L. Tatum publicam o primeiro trabalho sobre gentica bioqumica no fungo Neurospora crassa, o qual consolidou a teoria um gene uma enzima. 1944 O. T. Avery, C. M. MacLeod e M. McCarty isolam o princpio transformante do pneumococo, mostrando tratar-se do cido desoxirribonucleico (DNA), substncia descoberta em 1869 por Miescher. 1950 J. V. Neel fornece provas de que a anemia falciforme (siclemia) condicionada pela verso recessiva (alelo recessivo) de um gene. B. McClintock prope a existncia de genes saltadores (transposons) para explicar certos casos de herana em milho, o que foi confirmado, 30 anos mais tarde, em diversos organismos. 1952 A. D. Hershey e M. Chase mostram que apenas o DNA do vrus bacterifago penetra na bactria durante a infeco e que isso suficiente para produzir novos vrus completos, sugerindo ser o DNA o material hereditrio viral. 1953 1. Watson e F. Crick propem a estrutura em dupla-hlice para a molcula de DNA. 1956 J. H. Tjio e A. Levan demonstram que os humanos tm 46 cromossomos em suas clulas (at ento, pensava-se que fossem 48).

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1958

M. Meselson e E. W. Stahl demonstram a duplicao semiconservativa do DNA.

1961

F. Crick, L. Barnett, S. Brenner e R. J. Watts-Tobin obtm fortes indcios de que a linguagem gentica baseia-se em sequncias de trs bases nitrogenadas na molcula de DNA. E. Jacob e J. Monod propem o modelo de regulao gnica em bactria e a existncia do RNA mensageiro, identificado logo depois. M. W. Nirenberg, H. Matthaei, 5. Ochoa e H. G. Khorana desvendam o cdigo gentico, estabelecendo a relao entre os 20 aminocidos que formam as protenas e 61 trincas de bases nitrogenadas do RNA mensageiro.

1974

C. A. Hutchinson, J. E. Newbold, S. S. Potter e M. A. Edgell demonstram a herana exclusivamente materna do DNA mitocondrial em hbridos entre cavalo e jumento.

1978

W. Arber, D. Nathans e H. O. Smith recebem o Prmio Nobel em Fisiologia ou Medicina pela descoberta das enzimas de restrio e sua aplicao em problemas de Gentica molecular.

1980

P. Berg, W. Gilbert e F. Sanger recebem o Prmio Nobel em Qumica. O primeiro por seus estudos sobre a bioqumica dos cidos nucleicos, que levaram ao desenvolvimento da tecnologia do DNA recombinante (Engenharia Gentica); os dois ltimos por sua contribuio no desenvolvimento de mtodos de sequenciamento do DNA.

1989

S. Altman e T. R. Cech recebem o Prmio Nobel em Qumica pela descoberta das ribozimas, molculas de RNA com atividade cataltica.

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1993

R. J. Roberts e P. A. Sharp recebem o Prmio Nobel em Fisiologia ou Medicina pela descoberta dos genes interrompidos (split genes) dos organismos eucariticos. K. B. MuIlis e M. Smith recebem o Prmio Nobel em Qumica. O primeiro pela inveno do mtodo PCR (reao da polimerase em cadeia) para multiplicao de segmentos especficos de DNA in vitro; o segundo pelo desenvolvimento da tcnica de mutaes dirigidas em stios especficos e seu emprego no estudo de protenas.

1995

Fleischmann e colaboradores publicam a primeira sequncia completa de bases nitrogenadas de um organismo de vida livre, a bactria Haemophilus influenzae.

1996

Mais de 600 cientistas, trabalhando em cooperao, completam o sequenciamento das bases nitrogenadas dos cromossomos de Saccharomyces cerevisiae, o primeiro genoma eucaritico completamente sequenciado.

1997

S. B. Prusiner recebe o Prmio Nobel em Fisiologia ou Medicina pela descoberta dos prons.

2000

anunciada a concluso do sequenciamento dos cerca de 3 bilhes de pares de bases que constituem o genoma humano.
Fonte: Amabis, Jos M.,Martho, Gilberto R., 2006.

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GENTICA DE TRANSMISSO:

1 E 2 LEI DE MENDEL

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GENTICA DE TRANSMISSO

1. LEI DA SEGREGAO DOS FATORES, 1 LEI DE MENDEL, OU LEI DA PUREZA DOS GAMETAS

Figura 1.1: vagem e flor da ervilha, primeiro vegetal utilizado nos estudos da gentica. Fonte: Snustad, D.Peter; Simmons, Michael J.,2008.

INTRODUO Apesar de h milhares de anos se tentar explicar como as caractersticas genticas so transmitidas, s no fim sculo XIX, obteve-se os primeiros resultados significativos a respeito de como essas caractersticas so passadas de pais para filhos, surgindo dessa forma o que hoje chamamos de gentica de transmisso. Nesse captulo, falaremos sobre os trabalhos de Mendel, sua metodologia e seus postulados, que serviram de ponto de partida para o entendimento dessa cincia. 1.1. QUEM FOI MENDEL! Gregor Johann Mendel nasceu em 1822, no vilarejo de Heinzendorf, antiga ustria e hoje Repblica Tcheca, filho de pais agricultores pobres, deve uma criao rural o que facilitou o seu conhecimento sobre os processos de cultivo de plantas, de criao de animais e seu amor pela natureza. A falta de condies
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financeiras para estudar fez com que Mendel aos 21 anos optasse por um monastrio catlico na cidade de Brnn (hoje, Brno) para dar continuidade aos seus estudos. Quatro anos mais tarde ordenou-se padre (1847), adotando o nome Gregor pela igreja. Durante, esses quatro anos, Mendel aprendeu cincias agrrias e tcnicas de polinizao. Entre 1851 e 1853 foi liberado por seus superiores do mosteiro, para cursar na Universidade de Viena o curso de Fsica, porm assistiu cursos adicionais de qumica, zoologia, botnica, fisiologia vegetal, paleontologia e de Matemtica, do qual, j tinha sido professor numa escola local, prxima ao mosteiro. Tambm se dedicou ao estudo de tcnicas de hibridizao em plantas e em especial em ervilhas. Em 1853, quando retornou ao Mosteiro, voltou as suas atividades de monge-professor, agora de fsica e cincias naturais e comeou em 1857, seus experimentos genticos com ervilha, concluindo-os em 1864. Em 1865 apresentou os seus resultados na Natural History Society local e no ano seguinte, publicou um relato detalhado nas publicaes da sociedade. Mendel, porm, ficou na obscuridade por 35 anos, no se sabe se por falta de entendimento do que publicou na poca, ou por que os interesses dos cientistas da poca estavam voltados para outras questes, como por exemplo, a evoluo.

Figura 1.2: Gregor Johann Mendel (1822 1884). Fonte Klug et. al.,2010

Em 1900, trs botnicos, Hugo de Vries na Holanda, Carl Correns na Alemanha e Eric Von TschermaK-Seysenegg na ustria de forma independente, trabalhando com hibridizao em outros vegetais descobriram ao pesquisarem a

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literatura cientfica, para corroborar com suas teorias sobre hereditariedade, que Mendel h 35 anos tinha chegado s mesmas concluses.

1.2. PORQUE MENDEL OBTEVE SUCESSO? Vrias foram as causas do sucesso de Mendel, a escolha do material, o seu alto grau de organizao cientfica na escolha da metodologia e seus conhecimentos estatsticos, como conhecedor e professor de matemtica por um determinado tempo. O material biolgico escolhido por Mendel foram variedades de plantas da espcie Pisum sativum (34 variedades, cedidas por horticultores da regio), tambm chamadas ervilhas-de-jardim ou ervilhas-de-cheiro (figura 1.3), dicotiledneas de fcil cultivo, podem ser plantadas em jardins experimentais, ou em vasos, em uma estufa. Por apresentarem suas ptalas em forma de quilhas (fechadas) so impedidas de realizarem fecundao cruzada de forma natural, sendo assim, hermafroditas e autofecundantes, o que facilita a obteno de linhagens puras para uma determinada caracterstica. Porm, acessvel para cruzamentos experimentais de hibridizao, originando hbridos frteis. Seu ciclo de vida curto, podendo originar vrias geraes, em pouco tempo. Apresentam, a cada gerao, um grande nmero de descendentes, o que facilita o estudo estatstico dos dados colhidos. Apresentam linhagens com caractersticas individuais bem contrastantes, tais como cor dos cotildones da semente que em uma linhagem verde e em outra linhagem amarela; altura do p de ervilha que poderia ser alto (em torno de 2,0 m de altura) ou baixo (em torno de 0,5 m de altura) e assim sucessivamente para as sete caractersticas estudas por ele(figura 1.4).

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Figura 1.3: Flor hermafrodita da ervilha, com identificao das ptalas fechadas em forma de quilha, isolando do meio esterno as estruturas reprodutora masculina e feminina da flor. Fonte: Amabis, Jos M.,Martho, Gilberto R., 2006.

Figura 1.4: As sete caractersticas estudadas por Mendel. Fonte: Griffiths et. al., 2009

Com relao metodologia, Mendel preocupou-se em trabalhar na observao de uma caracterstica por vez, anotando seus resultados e comparando-os com os das outras seis caractersticas estudadas, alm de obter, amostras significativas para a anlise estatstica dos dados, decorrncia do grande nmero de descendentes obtidos em cada gerao.

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1.3. UM EXEMPLO DO EXPERIMENTO DE MENDEL

Um dos experimentos realizado por Mendel foi o cruzamento entre uma variedade de ervilhas que durante vrias geraes s produzia, por autofecundao, sementes com cotildones amarelos, com uma variedade que s produzia cotildones verdes, sendo assim denominadas sementes puras, para essa caracterstica analisada. Em cada experimento Mendel retirava as anteras, estruturas vegetais onde se produz o gro de plen, de algumas das plantas com cotildones amarelos, ficando essas variedades s com a estrutura reprodutora feminina. Repetia o mesmo processo com as variedades de cotildones verdes. Como resultado em cada uma das variedades estudadas existiriam plantas somente com estruturas reprodutoras femininas e outras hermafroditas. Aps esse processo de castrao, Mendel esperava o amadurecimento reprodutivo das plantas femininas e realizava a fertilizao cruzada, retirando o plen das anteras das plantas de cotildones verdes e colocando nas plantas femininas de cotildones amarelos, do mesmo jeito, retirava o plen das de cotildones amarelos e fertilizava as femininas de cotildones verdes (figura 1.5), realizando cruzamentos recprocos, nos dois casos, os resultados obtidos foram os mesmos: os descendentes, todos nasceram com cotildones amarelos. Essas plantas resultantes da fertilizao cruzada foram denominadas hbridas.

Figura 1.5: Polinizao cruzada e autofecundao os dois tipos de cruzamentos usados por Mendel. Fonte: Griffiths et. al., 2009

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O passo seguinte foi deixar as plantas hbridas autofecundarem para se observar a descendncia. A caracterstica cotildone verde que havia desaparecido na gerao anterior (hbrida) voltou a aparecer numa proporo aproximada de uma semente de cotildone verde para cada trs com cotildone amarelo (fig. 1.6). Mendel chamou o 1 cruzamento entre linhagens puras de gerao parental, hoje chamada simplesmente gerao P, a prole desse 1 cruzamento, descendncia hbrida, gerao filial 1 ou F1 e os descendentes da autofecundao de F1, gerao filial 2, ou F2 e assim sucessivamente.

Figura 1.6: Representao esquemtica das geraes P, F1 e F2 do cruzamento monohbrido para a caracterstica cor do cotildone da semente Fonte: Amabis, Jos M.,Martho, Gilberto R., 2006.

Completando o experimento, Mendel pegou as sementes com cotildones verde da gerao F2 deixou germinar e autofecundar, obtendo em F3, sementes com cotildones verdes, j as sementes com cotildones amarelos da gerao F2, ao
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germinar e autofecundar gerou em 1/3 dos ps de ervilha somente sementes com cotildones amarelos e em outros 2/3, sementes com cotildones amarelos e verdes. Mendel repetiu esse experimento, denominado cruzamento mono-hbrido (pois s leva em considerao uma nica caracterstica ou carter por vez), com as outras seis caractersticas contrastantes da ervilha-de-jardim, obtendo sempre o mesmo resultado. Em F1, no hbrido, s uma das caractersticas aparecia; em F2, a proporo era sempre de aproximadamente 3 com a mesma caracterstica de F1 para 1 com a caracterstica que desaparecia em F1 (fig.1.7). Mendel tambm vez o cruzamento recproco entre as plantas hbridas, F1 com as plantas parentais de ervilhas de cotildones verdes, obtendo na prole a proporo de 1 ervilha de cotildone amarela, para uma ervilha de cotildone verde. Hoje esse cruzamento conhecido como cruzamento teste (fig. 1.8).

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N de caractersticas 1

Gerao Parental(pura) ( P) Forma das sementes Lisa X Rugosa

Plantas F1 (hbrida)

Autofecundao de F1(hbridas)

Plantas F2 5474 lisas e 1850 rugosas= 7324(total) 6022com cotildones amarelo e 2001 com cotildones verdes= 8023 (total) 705 flores violetas e 224 flores brancas= 929 (total) 882 vagens infladas e 299 vagens comprimidas = 1181 (total) 428 vagens verdes e 152 vagens amarelas= 580 (total) 651 flores axilares e 207 flores terminais= 858 (total) 787 caule alto e 277 caule baixo = 1064(total)

Razo entre os tipos F2

Sementes lisas

Lisas X Lisas

2,96: 1

Cor dos cotildones Amarelo X Verde

Sementes com cotildones amarelo

Amarelo X Amarelo

3,01: 1

Cor da flor Violeta X branca

Flores violeta

Violeta X Violeta

3,15: 1

Textura das vagens Inflada X comprimida

Vagens infladas

Inflada X Inflada

2,95:1

Cor das vagens Verdes X Amarelas

Vagens verdes

Verde X Verde

2,82: 1

Posio das flores Axilar X Terminal

Flores axilares

Axilar X Axilar

3,14:1

Altura do caule Alto X baixo

Caule alto

Alto X Alto

2,84:1

Figura 1.7: Resultados dos cruzamentos Mendelianos nos quais os genitores diferem em uma caracterstica. Adaptada Fonte: Amabis, Jos M.,Martho, Gilberto R., 2006.

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Figura 1.8: Esquema da autofecundao de F1, hbrida, aparecendo na prole a proporo de 3: 1(esquerda) e o cruzamento teste entre F1, hbrida, e a planta de cotildones verdes dando a proporo de 1:1 (direita). Fonte: Griffiths et. al., 2009

1. 4. CONCLUSES DE MENDEL Aps anlise estatstica dos dados Mendel chegou s seguintes concluses: 1) Existem fatores unitrios particulados, que funcionam como unidades bsicas da hereditariedade (hoje chamamos genes) responsveis por cada uma das caractersticas estudadas e so transmitidas de gerao a gerao de forma inalterada atravs dos gametas; (Exemplo: Um fator determina a cor do cotildone verde e outro fator determina a cor do cotildone amarelo)

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2) Cada planta ou organismo individual possuem um par desses fatores, determinando a caracterstica; (Exemplo cor do cotildone) 3) Na hora de formar os gametas s um dos fatores ser encontrado nos gametas; 4) Na fertilizao aps o encontro do gameta masculino (presente no plen) com o gameta feminino (presente no pistilo) haver uma reconstituio do par de fatores. 5) Cada planta pura, para uma dada caracterstica possuir um par de fatores iguais; 6) A planta hbrida apresentar um fator de cada tipo na formao do par; 7) O fator que no aparece na gerao F1, e s volta a reaparecer na gerao F2 dito recessivo, e o fator que determina a caracterstica em F 1 dito dominante.

1.5.

CORRELAO

ENTRE

OS

POSTULADOS

DE

MENDEL

COMPORTAMENTO DOS CROMOSSOMOS NA MEIOSE

As redescobertas dos trabalhos de Mendel em 1900 por Hugo de Vries na Holanda, Carl Correns na Alemanha e Eric Von TschermaK-Seysenegg na Astria, e sua aceitao pelos cientistas originaram o levantamento de outras questes, tais como: onde se localizam,nas clulas, os fatores hereditrios ? Qual o mecanismo responsvel por sua segregao durante a formao dos gametas. Em 1902,Walter S. Sutton, trabalhando com a formao de gametas em gafanhoto e Theodor Bovari trabalhando de forma independente, com meiose, observaram uma grande semelhana entre o comportamento dos cromossomos na meiose e a segregao dos fatores hereditrios (genes) de Mendel, Sutton e Bovari propuseram assim a hiptese de que os fatores hereditrios de Mendel estavam localizados em cromossomos homlogos, de tal maneira que sua separao na meiose levaria segregao dos fatores.(fig. 1.9)
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Figura 1.9: Representao esquemtica da idia originalmente proposta por Walter S. Sutton e Bovari, em 1902, de que a segregao de um par de alelos resulta da separao dos cromossomos homlogos na meiose. A hiptese foi confirmada e passou a constituir um dos fundamentos da Gentica. Fonte: Amabis, Jos M.,Martho, Gilberto R., 2006.

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1.6. A TERMINOLOGIA GENTICA ATUAL

Hoje sabemos que os fatores hereditrios de Mendel so os genes, que podem ser representado simbolicamente de vrias formas, adotaremos inicialmente, de forma simples, a letra da caracterstica recessiva, na forma minscula, e em itlico, como smbolo representativo do trao recessivo (por exemplo: Na caracterstica cor do cotildone, v = fator ou gene que determina a caracterstica ou trao cotildone verde). O trao dominante da mesma caracterstica (cotildone amarelo) representado pela mesma letra, tambm em itlico, s que maiscula (V). Os fatores hereditrios alternativos que determinam traos diferentes dentro de uma mesma caracterstica (V e v) so denominados alelos. Logo cada planta apresenta dois alelos para uma dada caracterstica ( VV ou Vv ou vv). Esses pares de alelos representam o gentipo ou constituio gnica da planta para a caracterstica estudada. Os traos cotildones amarelos ou cotildones verdes, variaes dentro de uma mesma caracterstica e expresso fsica dos fatores hereditrios, ou genes, denominado fentipo. O fentipo cotildone amarelo dominante em relao ao fentipo cotildone verde, apresenta dois gentipos diferentes, assim representados: VV encontrado em plantas puras ou hoje chamadas homozigotas para essa caracterstica, pois s produzem um tipo de gameta V; e o gentipo Vv, encontrado em plantas hbridas ou heterozigotas, capaz de produzirem dois tipos de gametas V ou v. O fentipo recessivo, cotildone verde apresenta um nico gentipo vv originando um nico tipo de gameta v.(fig. 1.10)

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Figura 1.10: Esquema de um cruzamento mono-hbrido de ervilha-de-jardim, representando a caracterstica cor do cotildone Amarelo(V) e verde(v). Adaptada de Klug et. al., 2010.

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1.7. CRUZAMENTO TESTE

O cruzamento teste, feito por Mendel, cruza um fentipo dominante com um recessivo e serve para identificar se o fentipo dominante tem gentipo homozigoto ou heterozigoto, quando obtemos toda a prole do cruzamento com fentipo dominante, podemos chegar a concluso que o fentipo dominante homozigoto, j quando obtemos aproximadamente metade da prole com o fentipo dominante e a outra metade recessiva o gentipo do fentipo dominante heterozigoto.

1.8. OS QUADROS DE PUNNETT Reginald C. Punnett construiu um diagrama que facilita visualizao de um cruzamento, nesse diagrama representamos os gametas masculinos em uma coluna ou linha. Os gametas femininos, so representados dependendo dos masculinos: caso os masculinos estejam representados em uma coluna os femininos so representados em uma linha, mas se os masculinos foram representados em uma linha os femininos ficam em uma coluna. No diagrama tambm visualizamos como resultado do encontro gamtico o gentipo e fentipo dos descendentes. (fig. 1.11).

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Figura 1.11: Representao do Cruzamento-teste de uma s caracterstica utilizando o quadrado de Punnett: Em (a), a planta genitora Cotildone amarelo homozigota, mas, em (b), a genitora Cotildone amarelo heterozigota. O gentipo de cada planta alta da P1 pode ser determinado por meio do exame da prole, quando cada uma cruzada com a planta baixa homozigota. recessiva. Adaptada de Klug et. al., 2010.

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1.9. EXEMPLOS DE HERANA MONOGNICA OU MONO-HIBRIDISMO EM OUTROS ORGANISMOS 1.9.1.HERANA DO TIPO DE FOLHA EM COLEUS BLUMEI (CLEO) Na planta Coleus blumei, utilizada na ornamentao de jardins, a caracterstica que determina a forma da borda das folhas : crenada(levemente ondulada) ou lobadas (profundamente recortada) determinado por um par de genes. onde o gene que determina folha lobada dominante sobre o que determina folha crenada.(fig. 1.12)

Figura 1.12: Representao esquemtica entre plantas de Coleus blumei (foto) de folhas lobadas e folhas crenadas. Fonte: Amabis, Jos M.,Martho, Gilberto R., 2006.

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1.9.2. HERANA DO TIPO DE ASA EM DROSOPHILA MELANOGASTER A mosca Drosophila, tambm chamada mosca-do-vinagre ou mosca-dabanana tambm apresenta caractersticas determinadas por um nico par de genes, um exemplo o tipo das asas, onde os fentipos asa longa (ou selvagem) e asa vestigial (ou mutante), ao serem cruzados produzem em F 1 toda a prole com asas longas e em F2 mantm a proporo Mendeliana de 3/4 asas longa para 1/4 asa vestigial. (fig. 1.13)

Figura 1.13: Representao do cruzamento entre Drosophilas selvagens de asas longas e mutantes de asas vestigiais (na foto, aumento 17X). Fonte: Amabis, Jos M.,Martho, Gilberto R., 2006.

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1.9.3. HERANA DA SENSIBILIDADE AO PTC NA ESPCIE HUMANA

Uma herana com padro de herana monognica na espcie humana a sensibilidade ao PTC (droga denominada feniltiocarbamida, ou feniltiouria), pessoas que so sensveis ao PTC sentem um gosta amargo na boca quando so colocados em contato com solues de PTC, e outras pessoas nada sentem quando em contato com a droga. Sensibilidade ao PTC dominante em relao insensibilidade. (fig. 1.14)

Figura 1.14: Representao esquemtica do cruzamento entre uma mulher sensvel ao PTC e um homem insensvel ao PTC (Feniltiocarbamida). Adaptado de :Amabis, Jos M.,Martho, Gilberto R., 2006.

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1.10. HEREDOGRAMAS, GENEALOGIAS, RVORES GENEALGICAS OU PEDIGREE

Na espcie humana fica muito difcil determinar se um fentipo hereditrio ou no e qual o padro de herana de uma dada caracterstica, j que no possvel se fazer cruzamentos experimentais e a prole resultante muito pequena, para que se tenha uma boa anlise estatstica, alm disso, a possibilidade de se estudar o comportamento de um determinado trao por vrias geraes em uma famlia pouca provvel, j que, s vezes aquele trao s se manifesta na idade adulta, depois dos 40 anos. O meio tradicional para o estudo de determinadas caractersticas hereditrias em uma famlia a construo de uma rvore familiar ou heredograma, indicando a presena ou ausncia de um trao em questo para cada membro de cada gerao. As genealogias so representaes grficas convencionadas pelos geneticistas das relaes de parentesco entre os indivduos de uma famlia. (fig.1.15)

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Figura 1.15: Smbolos comumente empregados na representao grfica de genealogias. Fonte: Lima, Celso P.,1984

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1.10.1. ANLISE DE GENEALOGIAS

Os heredogramas nem sempre so precisos para diagnosticar o tipo de herana que estamos trabalhando, j que, o tamanho da amostra pequeno e a elaborao muitas vezes depende de informaes prestadas pelo probando ou propsito (isto , pelo indivduo afetado que atraiu a ateno dos pesquisadores), ou por seus parentes que muitas vezes no esto to interessados em colaborar de forma mais efetiva, ou ainda, a histria da famlia pode ser falseada porque o investigador muitas vezes se baseia em dados que depende da memria de quem os fornece. Para que se possa interpretar com menor chance de erro os dados necessrio muitas vezes analisar vrios genealogias referentes aquele fentipo que se est estudando. Alguns critrios que no so rgidos, mas, que ajudam na identificao de padres de herana quando analisamos heredogramas. Como se reconhece a herana autossmica (caracterstica monognica onde os genes encontram-se em cromossomos autossmicos) dominante (fig. 1.16) 1) A caracterstica ocorre igualmente em homens e mulheres; 2) Indivduos afetados so sempre filhos de casais em que pelo menos um dos cnjuges afetado; dessa forma, um casal normal nunca tem filhos afetados (a no ser por mutao que raro ou por penetrncia incompleta); 3) A caracterstica ocorre em todas as geraes sem pular nenhuma;

Figura 1.16: Heredograma representativo de uma caracterstica autossmica dominante. Fonte: Klug et. al.,2010

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Como se reconhece a herana autossmica recessiva (fig.1.17) 1) Os dois sexos so igualmente afetados; 2) Os indivduos afetados geralmente so filhos de pais normais; 3) Dentre os irmos do propsito, os indivduos afetados e normais distribuem-se na proporo de 3 normais para 1 afetado; 4) Os indivduos afetados geralmente resultam de cruzamentos

consangneos. Como se reconhece a herana recessiva ligada ao sexo (herana monognica onde os genes encontram-se numa poro do cromossomo sexual X que no tem homologia no Y) (fig.1.18) 1) Mulheres afetadas so muito mais raras do que homens afetados; 2) Homens afetados geralmente tm filhos normais; 3) Os indivduos afetados so filhos de mulheres normais que, por sua vez, so filhas de homens afetados; em outras palavras, a anomalia passa de av 4) para neto, atravs de suas filhas que so portadoras do gene.

Figura 1.17: Heredograma representativo de uma caracterstica autossmica recessiva. Fonte: Klug et. al.,2010

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Figura 1.18: Heredograma representativo de uma caracterstica ligada ao sexo recessiva. Fonte: Lima, Celso P.,1984.

Como se reconhece a herana dominante ligada ao sexo (fig. 1.19) 1) A caracterstica marcante deste tipo de herana o fato de que os homens afetados tm todas as suas filhas afetadas, embora nenhum de seus filhos o seja; 2) As mulheres heterozigotas transmitem as caractersticas metade de seus descendentes, sejam meninos ou meninas. 3) As mulheres afetadas homozigotas transmitem as caractersticas a todos os seus descendentes. 4) Este tipo de herana s pode ser reconhecido pela descendncia dos homens afetados; se no existir descendncia deles torna- se impossvel reconhecer este tipo de herana, visto que ela se assemelha herana autossmica dominante.

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Figura 1.19: Heredograma representativo de uma caracterstica ligada ao sexo dominante. Fonte: Lima, Celso P.,1984

1.11. A BASE MOLECULAR DA SEGREGAO E EXPRESSO MONOGNICA 1.11.1. COMO SURGEM OS ALELOS!

Quando falamos em alelos at agora no nos preocupamos com a estrutura e funo desses alelos somente como eles se segregam e se comportam em relao aos outros alelos. Mas, a nvel molecular como surgem os diferentes alelos? Esses alelos so resultantes de mutaes de alelos denominados selvagens, que se caracterizam por aparecer em maior freqncia na populao. Os alelos resultantes de alteraes no DNA do alelo selvagem so ditos, alelos mutantes. Existem vrios tipos de mutaes, (que sero estudadas em outro captulo), porm, as mutaes s so visveis quando elas alteram o gene, de tal forma, que como conseqncia altere o fentipo. Um novo fentipo resulta de uma mudana na atividade funcional do produto celular (protena) especificado pelo respectivo gene. Esses genes (ou alelos) mutantes podem ser em relao ao alelo selvagem dominante ou recessivo. Quando a mutao altera o alelo selvagem e ele diminui ou perde a funo essa mutao denominada mutao de perda de funo, se a perda for completa formado um alelo denominado alelo nulo e o fentipo determinado por esse alelo geralmente recessivo. Em outros casos, a mutao altera o alelo selvagem formando alelos mutantes com um aumento na atividade funcional em relao a atividade funcional
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do alelo selvagem , aumentando assim, a quantidade do produto gnico, nesse caso, denominamos a mutao de mutao de ganho de funo, e o fentipo resultante geralmente um fentipo dominante. Como j havia falado existem vrias formas de representao dos alelos, a primeira mais simples, usada por Mendel, onde se representa o fentipo dominante com a letra maiscula e em itlico, do fentipo recessivo e o recessivo com letra minscula e em itlico. Outra notao, determinada quando Morgan e Bridges estudavam cor do olho em Drosophila, que pode ser usada para representar o alelo selvagem e o alelo mutante a primeira letra ou a combinao de duas ou trs letras do trao mutante em maisculo ou minsculo, quando representa respectivamente fentipos mutantes dominantes e recessivos, acrescidos de um sinal sobrescrito + para representar o alelo selvagem ou simplesmente para simplificar, o sinal + para o alelo selvagem e o mutante com a letra inicial ou com a combinao de duas ou trs letras. Quando se est representando o gentipo utiliza-se uma barra separando os alelos de um mesmo locus em cromossomos homlogos. (fig. 1.20 a e b)

Tabela representando os gentipos e fentipos para a cor do corpo em Drosophila que apresenta o alelo mutante recessivo e fentipo bano e o alelo selvagem dominante e+ fentipo cor cinza. Fentipos Gentipos e+/e+ ou +/+ e+/e ou +/e e/e ou e/e Homozigoto cinza (tipo selvagem) Heterozigoto cinza (tipo selvagem) Homozigoto bano ( tipo mutante

Figura 1.20a: Representao de notao para designar gentipos e alelos selvagens e mutantes recessivo. Adaptada de Klug et.al., 2010

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Tabela representando os gentipos e fentipos para a forma da asa em Drosophila que apresenta o alelo mutante dominante Wr fentipo asa rugosa e o alelo selvagem dominante Wr+ fentipo asa lisa. Gentipos Fentipos Wr/Wr Wr/Wr+ Wr+/Wr+ Asa rugosa (tipo mutante) Asa rugosa (tipo mutante) Asa normal (tipo selvagem)

Figura 1.20b: Representao de notao para designar gentipos e alelos selvagens e mutantes dominantes. Adaptada de Klug et.al., 2010

2. 2 LEI DE MENDEL OU LEI DA SEGREGAO INDEPENDENTE

Mendel aps trabalhar na observao de uma caracterstica por vez comeou a fazer experimentos com plantas que diferiam em duas caractersticas. Ele cruzou a variedade de plantas que produziam sementes amarelas lisas, e que por autofecundao s originavam plantas com sementes amarelas lisas, portanto puras para as caractersticas cor e forma da semente, com a variedade de plantas verdes rugosas tambm puras para essas caractersticas com o objetivo de analisar como se comportavam as duas caractersticas ao mesmo tempo na hora de formar os gametas e a prole. Vamos usar as seguintes notaes nos cruzamentos para representar os gentipos que incluem dois pares de alelos que se encontram em cromossomos homlogos distintos para as caractersticas: cor do cotildone da semente; V (Amarela) e v (verde) e forma da semente; R (Lisa) e r (rugosa), logo o gentipo da planta com sementes amarela lisa pode ser assim representado VV RR e o da planta verde rugosa vv rr. Ao cruzar essas duas linhagens Mendel obteve em F1 todas as plantas com semente amarelas lisas, indicando que os dois traos, amarelo e liso so dominantes em relao verde e rugoso com o seguinte gentipo Vv Rr. Essas Plantas F1 ele deixou autofecundar e resultou em todas as possibilidades de combinaes nas propores; 9/16 plantas amarelas lisas, 1/16 plantas verdes

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rugosas, semelhantes aos fentipos parentais, 3/16 plantas amarelas rugosas e 3/16 plantas verde lisa. (fig. 1.21 e 1.22)

Figura 1.21: Os cruzamentos de Mendel entre ervilhas que produziram sementes amarelas e lisas e ervilhas que produziram sementes verdes e rugosas. Fonte: Snustad, D.Peter; Simmons, Michael J.,2008.

Mendel tambm usou o cruzamento teste (cruzamento do di-hbrido com o duplo recessivo) com o intuito de demonstrar que cada gameta do di-hbrido formado por um alelo do par V ou v e do par R ou r e que essas combinaes gamticas apareciam em uma mesma proporo, indicativo de segregao independente.(fig.1.23)

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Figura 1.22: Representao simblica dos resultados de um cruzamento entre uma variedade de ervilhas com sementes amarelas e lisas e uma variedade com sementes verdes e rugosas. Fonte: Snustad, D.Peter; Simmons, Michael J.,2008.

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Figura 1.23: Representao do cruzamento teste de plantas de ervilhas amarela lisa (F 1) com o duplo recessivo (verde rugosa). Adaptado de Snustad, D.Peter; Simmons, Michael J.,2008.

Mendel fez outras combinaes entre as sete caractersticas estudadas por ele, em todas elas obteve os mesmos resultados e com esses resultados Mendel chegou s seguintes concluses:z 1. Cada caracterstica controlada por um par de alelos que se segregam na hora de formar os gametas; 2. Cada um dos pares segrega (separa) de forma independente do outro 3. na hora de formar os gametas, logo a alelo V pode estar em um gameta junto com o alelo R ou com r e o alelo v pode vir em um gameta tanto junto com o alelo R ou com r, as chances desses encontros so as mesmas e essas combinaes so feitas de forma aleatria.
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Aps as concluses, Mendel enuncia o que chamamos 2 lei de Mendel ou Lei da segrega~o independente: Os alelos de genes diferentes segregam-se, ou distribuem-se, independentemente uns dos outros. Alm dos experimentos com uma caracterstica, cruzamentos monohbridos, ou duas caractersticas ao mesmo tempo, cruzamentos di-hbridos, Mendel fez experimentos com trs caractersticas ao mesmo tempo, cruzamento esse chamado tri-hbrido e observou que a segregao independente tambm aplicada nesses casos. Depois de 1900 quando os trabalhos de Mendel foram redescobertos, as leis de Mendel foram testadas em vrias outras plantas e animais, os resultados obtidos vieram para validar o trabalho de Mendel quase que de forma geral. A exceo lei de segregao independente quando os dois ou mais pares de alelos que determinam as caractersticas se encontram em um mesmo cromossomo homlogo.

2.1. A MEIOSE E A 2 LEI DE MENDEL

Sabemos que em um organismo diplide cada um dos pares de homlogos constitudo por cromossomos de origem paterna, proveniente do gameta masculino e o outro, de origem materna, proveniente do gameta feminino. As plantas de ervilhas possuem 14 cromossomos, ou seja, 7 pares de homlogos e Mendel fez experimentos com 7 caractersticas ou traos distintos. Os pares de alelos que determinam cada uma das caractersticas mendelianas se encontram distribudos nesses cromossomos. Cada uma das caractersticas estudada em um par de homlogos. Os cromossomos homlogos na meiose segregam-se independentemente levando junto os pares de alelos mendelianos. Estudos posteriores que analisaram outras caractersticas das plantas de ervilha, no conseguiram obter sempre os mesmos resultados de Mendel a concluso para isso que caractersticas que esto em um mesmo par de cromossomos homlogos segregam juntas na hora de formar os gametas (fig. 1.24)
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Figura 1.24 Representao esquemtica da segregao independente dos cromossomos homlogos na meiose, responsvel pela segregao independente dos genes situados em diferentes pares de homlogos. Em uma clula duplo-heterozigtica, h duas possibilidades para a migrao dos cromossomos, o que caracteriza a segregao independente. Fonte: Amabis, Jos M.,Martho, Gilberto R., 2006.

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3. APLICAES DOS PRINCPIOS DE MENDEL

Se a base gentica de uma caracterstica conhecida, os princpios de Mendel podem ser usados para prever o resultado dos cruzamentos. Existem trs procedimentos analticos que so parte das pesquisas genticas cotidianas e so utilizados para se fazer a anlise de propores fenotpicas. Essa anlise pode ser feitas por dois caminhos ou prevendo os gentipos dos genitores a partir das propores fenotpicas da prole, ou as propores fenotpicas da prole tendo-se o conhecimento dos gentipos dos genitores. 3.1. O QUADRADO DE PUNNETT O mtodo utilizado at agora o quadrado de Punnett, representados na figura 2.3 e 2.4, muito til em situaes que envolvem 1 ou 2 pares de genes, pois d uma visualizao dos gametas formados pelos genitores e a representao de todos os encontros gamticos possveis na formao da prole, resultando nos gentipos. Podendo-se chegar s propores fenotpicas quando se sabe a relao de dominncia entre os alelos que compem os gentipos. Porm se torna muito trabalhoso usarmos esse mtodo quando passamos a ter 3 ou mais pares de alelos determinando trs ou mais caractersticas ao mesmo tempo. Com 3 pares de alelos, resultantes do cruzamentos de 2 linhagens uma homozigota dominante com uma homozigota recessiva, teramos um tri-hbrido em F1. Esse F1 produziria 8 tipos diferentes de gametas(fig. 1.25) que se for cruzado com outro igual a ele tambm formar 8 diferentes tipos de gametas, gerando 8X8 = 64 gentipos, no quadrado de Punnett.

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Figura 1.25: Representao esquemtica da segregao independente de 3 pares de alelos originando os oito tipos de gametas. Adaptada de Amabis, Jos M.,Martho, Gilberto R., 2006.

3.2. O MTODO DA LINHA BIFURCADA

Caracteriza-se por representar os fentipos ou gentipos resultantes do cruzamento de cada uma das caractersticas estudadas em linhas que se bifurcam, em cada elo da bifurcao colocam-se os fentipos ou gentipos de um dos cruzamentos. (fig. 1.26a e 1.26b)

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Cruzamento:

Vv Rr Bb

Vv Rr

Bb

Segregao de gene Segregao do Segregao do Fentipo combinados de para cor do cotildone gene para forma gene para cor da todos os trs genes da semente casca da semente da semente 3 Cinzas 3 Lisas 1 Branca 3 Altas 1 Rugosa 1 Branca 3 Cinzas 3 Lisas 1 Baixa 1 Branca 3 Cinzas 1 Rugosa 1 Branca 1 baixa,rugosa,branca 3 baixas,lisas,brancas 3 baixas,rugosas,cinzas 3 altas,rugosas,brancas 9 baixas,lisas,cinzas 3 Cinzas 9 altas, lisas, brancas 9 altas,rugosas,cinzas 27 altas, lisas, cinzas

Figura 1.26a: O mtodo da linha difurcada para prever o resultado de um cruzamento envolvendo 3 genes que se distribuem independentemente em ervilhas. A proporo fenotpica dada pelo produto de cada cruzamento individualmente. Adaptado de Snustad, D.Peter; Simmons, Michael J.,2008.

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Cruzamento:
Segregao de gene para cor do cotildone da semente

Vv Rr

Vv Rr
Proporo dos Gentipos combinados de 2 pares de genes. 1 VV RR 2 VV Rr 1 VV rr

Segregao do gene para forma da semente 1 RR

1 VV

2 Rr 1 rr

1 RR 2 Vv 2 Rr 1 rr

2 Vv RR 4 Vv Rr 2 Vv rr

1 RR 1 vv 2 Rr 1 rr

1 vv RR 2 vv Rr 1 vv rr

Figura 1.26b: O mtodo da linha difurcada para prever o resultado de um cruzamento envolvendo 2 genes que se distribuem independentemente em ervilhas. A proporo genotpica dada pelo produto de cada cruzamento individualmente. Adaptado de Snustad, D.Peter; Simmons, Michael J.,2008.

Observando as figuras acima vamos perceber que quando montamos a linha bifurcada para os gentipos fica bem mais difcil manejar. Levando em conta s duas caractersticas di-hbridas, j obtemos 3n onde n igual ao nmero de caractersticas heterozigotas e 3 o nmero de gentipos distintos em cada cruzamento mono-hbrido, caso tenhamos 3 pares de genes (cruzamento trihbrido) teramos 33= 27 gentipos diferentes.

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3.3. O MTODO MATEMTICO

Um mtodo alternativo ao quadrado de Punnett e o da linha bifurcada, e mais rpido, baseado no princpio da probabilidade. Probabilidade a chance de um determinado evento ocorrer, entre dois ou mais eventos possveis. Por exemplo, qual a probabilidade de em um nascimento obtermos um menino? O nmero de eventos possveis (minha amostra) so dois a criana ou menino ou menina. Logo a probabilidade de que seja menino 1 em 2 ou 1/2. Eventos aleatrios so eventos que tm a mesma chance de ocorrer quando comparados com outros eventos possveis dentro de uma probabilidade. Eventos independentes so eventos em que a ocorrncia de um evento no afeta a probabilidade do outro evento ocorrer. Exemplo: o nascimento de cada filho um evento independente j que nascimento do 1 no afeta ou no interfere no nascimento do 2 e assim sucessivamente, ou em um cruzamento entre um casal de heterozigotos, a probabilidade da mulher produzir gametas no interfere na probabilidade do homem tambm produzir. Eventos mutuamente exclusivos so eventos que quando um ocorre o outro no pode ocorrer ao mesmo tempo. Um bom exemplo dentro da gentica para isso o nascimento de uma criana, ela no pode ser ao mesmo tempo menina e menino. Ou ele menina ou ela menino. Logo esses eventos so mutuamente exclusivos. Em estatstica existem 2 regras bsicas que so necessrias para a resoluo dos exerccios para clculo das propores genotpicas e fenotpicas da prole, so elas a regra dos produtos (ou regra do e) e a regra da soma (ou regra do ou). A regra do produto diz: A probabilidade de dois eventos independentes ocorrerem juntos (ao mesmo tempo) igual ao produto das probabilidades de cada um deles. Exemplo: Uma mulher teve 2 crianas, qual a probabilidade que a primeira seja menina e o segunda seja menino? Em cada nascimento a probabilidade de ser menino ou de ser menina a mesma, 1/2, e o nascimento de cada filho um evento independente j que nascimento do 1 no afeta ou no

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interfere no nascimento do 2. Logo a probabilidade da mulher ter o 1 menina e o 2 menino igual ao produto das probabilidades individuais (1/2X1/2=1/4) A regra da soma diz: A probabilidade de dois eventos mutuamente exclusivos ocorrerem igual a soma das probabilidades de cada um ocorrer. Exemplo; Qual a probabilidade de em um nascimento nascer uma menina ou um menino? A probabilidade a soma das probabilidades individuais (P(menino=1/2))+ (P(menina=1/2)) = (1/2 + 1/2)= 1. 3.3.1. USANDO AS REGRAS DE PROBABILIDADE PARA REALIZAR

CRUZAMENTOS. 1. Em um cruzamento monognico, qual a probabilidade de obtermos indivduos heterozigotos do cruzamento de um casal de heterozigotos com gentipos Aa?

Cruzamento:

Aa A 1/2

Aa a 1/2 aA

Proporo genotpica 1/4 AA

Proporo fentpica 1/4+2/4 = 3/4 A_ Fentipo dominante

A 1/2 a 1/2

AA

1/2x1/2=1/4 1/2x1/2=1/4 Aa aa

1/4 + 1/4 Aa= 2/4 1/4 = aa 1/4 = aa Fentipo recessivo

1/2x1/2=1/4 1/2x1/2=1/4

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2. Do cruzamento de duas plantas com gentipos Aa BB Cc Dd Ee X Aa Bb Cc dd Ee qual a probabilidade de obtermos na prole um descendente com o seguinte gentipo: aa Bb Cc Dd ee Resposta: Como cada caracterstica segrega independente (so eventos independentes); j que estamos considerando que se encontram em cromossomos homlogos diferentes; Dd X dd e poderemos achar a probabilidade individual em cada cruzamento Aa X Aa. BB X Bb, Cc X Cc, Ee X Ee e depois multiplicar cada uma das probabilidades. Aa X Aa = 1/4 aa; BB X Bb = 1/2 Bb; Cc X Cc = 1/2 Cc; Dd X dd = 1/2 Dd; Ee X Ee = 1/4 ee. P( aa Bb Cc Dd ee)= P(aa)XP(Bb)XP(Cc)XP(Dd)XP(ee)= 1/4X1/2X1/2X1/2X1/4= 1/128

3.3.2 QUANTOS GENTIPOS DISTINTOS UM CRUZAMENTO PRODUZ?

As regras de probabilidades podem ser facilmente utilizadas para prever quantos gentipos ou fentipos diferentes podem surgir na prole de linhagens parentais complexas com quatro cinco ou mais pares de genes. Exemplo: No cruzamento de tetra-hbrido quantos gentipos e quantos fentipos diferentes podem ter? Cruzamento tetra-hbrido: Aa Bb Cc Dd X Aa Bb Cc Dd. Cada cruzamento individual gera 3 gentipos diferentes AA, Aa, aa e dois fentipos diferentes o dominante e o recessivo.podemos utilizar a frmula 3n onde n o nmero de caractersticas individuais, ou seja o nmero de gentipos diferentes : 34 = 81; j o nmero de fentipos 2n= 24 = 16. Em um cruzamento teste Aa Bb Cc Dd X aa bb cc dd; cada cruzamento individual produz 2 tipos de gentipos o Aa e o aa e tambm dois tipos de fentipos o dominante e o recessivo, nesse caso a mesma frmula pode ser usada tanto para calcular o gentipo quanto o fentipo 2 n = 24 = 16

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GENTICA DE TRANSMISSO: EXTENSES DO MENDELISMO

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EXTENSES DO MENDELISMO

INTRODUO Os experimentos de Mendel estabeleceram que os genes existem em formas alternativas (alelos). Na simplificao Mendeliana, para cada caracterstica s existiam dois alelos: o dominante que contribua de forma definitiva para produzir o fentipo, e o recessivo que s se expressava na ausncia do dominante. Hoje sabemos que cada gene pode apresentar vrias formas allicas na natureza (que surgem por mutao) e que essas vrias formas podem apresentar efeitos diferentes sobre o fentipo. Evidentemente cada indivduo diploide s pode apresentar dois desses alelos, j que esses alelos se encontram na mesma posio (locus) nos pares de cromossomos homlogos.

1. ALTERAES NAS PROPORES FENOTPICAS MENDELIANA 1. 1. DOMINNCIA INCOMPLETA Na dominncia completa, o alelo dominante se tiver o mesmo efeito fenotpico em dose dupla (AA) ou simples (Aa), e o organismo para essa caracterstica s apresenta dois fentipos distintos, o dominante e o recessivo, ( representado pelo gentipo aa). No estudo da caracterstica cor da flor em bocade-leo, Antirrhinum majus, foram observados trs fentipos diferentes: o vermelho, o branco e o rosa. Ao ser realizado o cruzamento entre plantas de cor vermelha(R1R1) e branca(R2R2), todos os descendentes F1 nasceram com uma cor intermediria, rosa(R1R2). Ao cruzar as plantas de flores rosa (F 1) nasceram em F2: 1/4 de plantas de flores vermelha; 2/4 plantas de flores rosa e 1/4 de plantas de flores brancas, semelhante com a proporo genotpica de 1/4 R 1R1; 2/4 R1R2 e 1/4 R2R2 obtida. A explicao para essa alterao na proporo fenotpica em relao proporo obtida por Mendel que o alelo FV daria como produto gnico final uma certa quantidade de pigmento, se ele aparece em dose dupla (F VFV = fentipo vermelho), ele produzir duas vezes mais pigmento do que quando ele aparece em dose simples (FVFB = fentipo rosa), j o FBFB no produz pigmento,
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resultando na cor branca. Esse tipo de herana no invalida a 1 lei de Mendel, mas apresenta uma proporo fenotpica diferente da obtida por ele em F 2, e como o fentipo do heterozigoto intermedirio entre os dos homozigotos, foi denominado de dominncia incompleta. (fig. 2.1).

Figura 2.1: Dominncia incompleta mostrada na cor da flor boca-de-leo. Fonte: Klug et al.; 2010.

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1.2. CODOMINNCIA Outra exceo ao princpio de dominncia completa surge quando um heterozigoto apresenta caracterstica encontrada em cada um dos homozigotos associados, produzindo dois produtos gnicos detectveis; nesse caso, a expresso conjunta dos dois alelos no heterozigoto denominada codominncia. Um exemplo desse tipo de herana a do grupo sanguneo do sistema MN, descoberto por Karl Landsteiner e Philip Levin, controlado por alelos presentes no cromossomo 4, indivduos homozigotos para o alelo L M, produzem uma molcula glicoprotica na superfcie dos eritrcitos que um antgeno natural, apresentando, dessa forma, o fentipo grupo sanguneo M; os que apresentam somente alelos LN j produzem um outro tipo de glicoprotena na superfcie das hemcias que tambm funcionam como antgeno natural e o fentipo grupo sanguneo N; j o heterozigoto, que apresenta tanta o alelo L M, quanto o alelo LN produzem os dois tipos de glicoprotenas e o fentipo grupo sanguneo MN. Como previsto, um cruzamento entre dois genitores heterozigotos MN pode produzir filhos com os trs tipos de fentipos, M, MN e N, na proporo de 1:2:1, semelhante proporo genotpica. Como no existe dominncia completa entre os alelos, a notao gentica mais utilizada a de representar os alelos com a mesma letra maiscula e sobrescrito a letra dos alelos alternativos. (fig.2.2).

Figura 2.2: Exemplo de codominncia

Tabela representando os gentipos e fentipos para a caracterstica sistema sanguneo MN Gentipos LM LM LM LN LNLN Fentipos Grupo sanguneo M Grupo sanguneo MN Grupo sanguneo N

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1.3. ALELOS MLTIPLOS OU POLIALELIA O conceito mendeliano de que os genes existem em no mais que dois estados allicos foi modificado quando se descobriu que a sequncia de DNA, que determina um gene, pode sofrer inmeras mutaes, em pontos diferentes, originando diversos tipos de alelos. Esses diversos alelos s podem ser identificados em um estudo gentico populacional, j que nos organismos diploides cada indivduo s herda 2 alelos, presentes em um mesmo locus nos cromossomos homlogos. Quando na populao existem mais de dois estados allicos de um mesmo gene, estamos falando de alelos mltiplos ou polialelia. Um dos exemplos clssicos de polialelia a cor da pelagem em coelhos, que apresenta 4 formas allicas, cuja notao utilizada c determina pelagem albina (todo branco), ch, pelagem himalaia (corpo branco e as extremidades pretas, patas, focinho e orelhas), cch, pelagem chinchila (pelagem branca com a ponta dos pelos preta, o que d uma ideia de conjunto acinzentado) e c+, pelagem selvagem (pelo colorido por todo o corpo, normalmente castanho). O estudo de diversos cruzamentos na populao de coelhos permitiu determinar a relao de dominncia entre os diversos alelos. dominncia. (fig.2.3) c+ > cch > ch > c, o sinal > indicando

Figura 2.3: Exemplo de alelos mltiplos em coelhos

Tabela representando os diversos gentipos e fentipos para a caracterstica cor da pelagem em coelhos. Gentipos c+c+, c+cch , c+ch, , c+c cchcch, cchch, , cchc chch, chc cc Fentipos Pelagem tipo selvagem Pelagem tipo chinchila Pelagem tipo himalaia Pelagem branca ou albina

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Outro exemplo de alelos mltiplos o sistema sanguneo ABO em humanos, descoberto por Landsteiner, no incio da dcada de 1900, e caracterizado pela presena de antgenos na superfcie dos eritrcitos. Com trs alelos alternativos de um gene, IA, IB e IO, a designao I representa isoaglutinognio, outro termo para antgeno, localizados em um locus do cromossomo 9. Mais uma vez lembrando que apesar de na populao encontrarmos trs tipos de alelos para a determinao do sistema sanguneo ABO, cada indivduo s capaz de herdar dois desses alelos, um que vem no cromossomo 9 de origem paterna e outro que vem no cromossomo 9 de origem materna. O fentipo ABO de qualquer indivduo averiguado mediante mistura de uma amostra de sangue com um antissoro que contm anticorpos anti-A ou anti-B. Se o antgeno estiver presente na superfcie dos eritrcitos da pessoa, reagir com o anticorpo correspondente e causar agregao, ou aglutinao, dessas clulas sanguneas. Quando o indivduo testado desse modo, ser revelado um entre quatro fentipos, se o indivduo tiver o antgeno A ele ser do grupo sanguneo A, caso tenha o antgeno B, ele ser do grupo sanguneo B, se tiver ambos os antgenos, A e B, ele ser do grupo sanguneo AB, e caso no seja detectado nenhum dos dois antgenos, ele ser do grupo sanguneo O. Com relao aos gentipos, aps estudos em muitas famlias diferentes, chegou-se concluso de que, entre os trs alelos encontrados na populao, os alelos IA e IB apresentam uma relao de codominncia, e os alelos IA e IB com o alelo IO uma relao de dominncia, podendo ser encontrados os seguintes gentipos e fentipos na populao, ver tabela abaixo na figura 2.4. O conhecimento sobre os grupos sanguneos humanos tem vrias aplicaes. Uma das mais importantes testar a compatibilidade das transfuses de sangue. Outra aplicao envolve os casos de investigao de paternidade, em que os recm-nascidos so inadvertidamente trocados no hospital, ou quando incerto se um homem especfico o pai de uma criana. Um exame dos grupos sanguneos ABO, assim como de outros antgenos hereditrios, dos genitores e da criana, pode ajudar a excluir a paternidade ou a maternidade, mas jamais prova a paternidade ou maternidade.
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Figura 2.4: Exemplo de alelos mltiplos em humanos

Tabela representando os gentipos e fentipos para a caracterstica sistema sanguneo ABO Gentipos IAIA, IAIO IBIB, IBIO IAIB IOIO Fentipos Grupo sanguneo A Grupo sanguneo B Grupo sanguneo AB Grupo sanguneo O

1.3.1. MECANISMOS BIOQUMICOS PARA FORMAO DOS ANTGENOS A E B Os antgenos A e B so carboidratos que se ligam a molculas de lipdeos(cidos graxos) na superfcie externa da membrana celular dos eritrcitos. Tanto o antgeno A como o antgeno B tm como substncia precursora uma substncia denominada substncia H ou antgeno H, constitudo por trs molculas de carboidrato; galactose(Gal), N-acetilglicosamina (AcGluNH) e fucose ligadas quimicamente. A especificidade dos antgenos A e B dada pela ligao qumica na poro terminal da substncia H de mais um grupamento carboidrato. O produto gnico do alelo IA uma enzima que adiciona substncia H o carboidrato N-acetilglicosamina (AcGluNH). O alelo IB tem como produto uma enzima modificada que s consegue adicionar a poro terminal da substncia H uma galactose(Gal). Indivduos IAIB adicionam ou um ou outro na poro terminal, e podemos encontrar, nesse caso, tanto substncia H acrescida de acetilglicosamina (AcGluNH), formando o antgeno A, ou acrescida de galactose(Gal), formando o antgeno B nas superfcies dos eritrcitos. O alelo IO apresenta uma mutao que no permite que seu produto gnico acrescente
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nenhum carboidrato na poro terminal da substncia H, sendo encontrada, em indivduos de fentipo O, somente a substncia H.(fig. 2.5)

Figura 2.5: Mecanismo bioqumico para formao dos antgenos A e B, a partir da substncia H, com a participao dos genes IA e IB e FUT1 na formao das enzimas envolvidas. Fonte: Klug et al.; 2010.

1.3.2. O FENTIPO BOMBAIM Em 1952, uma situao muito rara propiciou informaes sobre a base gentica da substncia H. Uma mulher, em Bombaim, ndia, ao necessitar de uma transfuso, fez uma tipagem sangunea e diagnosticou-se que ela no possua nenhum dos antgenos, A ou B sendo, portanto, do grupo sanguneo O. Porm ao se fazer a rvore genealgica dela, observou-se que um dos pais era do grupo AB e ela
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tinha doado a dois filhos o alelo IB, o que era inconsistente com a tipagem sangunea. Posteriormente, demonstrou-se que a mulher era homozigota para uma mutao recessiva rara em um gene denominado FUT1(codificador da enzima fucosil-transferase), responsvel pela ligao qumica na poro terminal da substncia H, da fucose. A substncia H incompleta (sem fucose) no reconhecida pelas enzimas produzidas pelos genes IA e IB , no podendo formar os antgenos A ou B e apresentando-se funcionalmente como do grupo O. Os filhos que herdaram o alelo IB so heterozigotos para o gene FUT1, logo formam a substncia H e consequentemente os antgenos B. 1.4. GENES LETAIS Um alelo que capaz de causar a morte de um organismo chamado de alelo letal. Muitos produtos gnicos so essenciais ao desenvolvimento normal e sobrevivncia de um organismo. Quando os genes que os produzem mutam, pode resultar na morte prematura do organismo, dependendo da fase do desenvolvimento (embrionrio, primeira infncia ou adulto) em que seu produto gnico vai ser necessrio. Quando, para ocorrer a morte do indivduo, so necessrios dois alelos mutantes, chamamos a letalidade de recessiva, mas se um nico alelo mutante j determinar a morte do indivduo, chamamos a letalidade de dominante. Existem alelos que podem determinar mais de uma caracterstica, j que seus produtos podem interferir em mais de uma via metablica, quando isso ocorre, chamamos o processo de pleiotropia Um exemplo de genes letais um gene pleiotrpico que participa da determinao da cor da pelagem em camundongo e da sobrevida. O alelo AY determina pelagem amarela, quando em heterozigose, enquanto o alelo A determina pelagem aguti(cinzenta), quando em homozigose, porm o gentipo AYAY mata ainda no perodo embrionrio, no sendo encontrados camundongos amarelos homozigotos. Logo o comportamento do alelo AY em relao sobrevivncia de letal recessivo, j que so necessrios 2 alelos iguais para
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causar a morte do camundongo, enquanto que, em relao cor da pelagem, ele comporta-se como um alelo dominante. A letalidade tambm altera as propores fenotpicas e genotpicas mendelianas, j que alguns embries morrem antes do nascimento, mudando assim a proporo de nascidos vivos. Na figura 2.6, esto representados alguns cruzamentos e as propores fenotpicas e genotpicas resultantes desses cruzamentos.

Figura 2.6: Exemplos de cruzamentos com alelo letal onde se percebe alteraes nas propores fenotpicas e genotpicas. Fonte: Klug et al.; 2010.

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O fentipo sem cauda Manx em gatos tambm produzido por um alelo que letal no estado homozigoto. Uma nica dose do alelo Manx, ML, interfere gravemente no desenvolvimento da coluna dorsal, resultando na falta de cauda no heterozigoto MLM. Mas, no homozigoto MLML, a dupla dose do gene produz uma anomalia to extrema no desenvolvimento da coluna, que o embrio no sobrevive. Os alelos para cor da pelagem em camundongos e para o fentipo sem cauda Manx sendo genes pleiotrpicos apresentam fentipos visveis em heterozigose, mas a maioria dos letais recessivos so silenciosos no heterozigoto. Em tal situao, a letalidade recessiva diagnosticada observando a morte de 25% da prole em algum estgio do desenvolvimento. Um exemplo de gene letal dominante o da doena de Huntington, que se caracteriza pela degenerao motora e nervosa, em humanos. Causada pelo alelo autossmico dominante H, essa doena s se manifesta nos heterozigotos (Hh) na idade adulta, permitindo assim que esses indivduos cheguem idade reprodutiva e transmitam seus genes para os descendentes. Genes letais dominantes so raros na populao, quando causam morte antes da idade reprodutiva, pois no permitem a perpetuao do alelo.

1.5. PENETRNCIA E EXPRESSIVIDADE A herana monognica estudada at agora produz mutantes e selvagens que produzem claras propores mendelianas. Em tais casos, podemos usar o fentipo para distinguir os gentipos mutantes e selvagens com quase 100% de certeza. Mas existem muitos casos em que, mesmo o gentipo estando presente, o fentipo no expresso. Sabemos, hoje, que a expresso do fentipo no s depende do gentipo e sim da interao desse gentipo com o meio interno celular, inclusive com a possibilidade de interao com outros genes no caracterizados, com efeitos epistticos ou supressores, como tambm com o meio externo.

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Definimos Penetrncia como a porcentagem de indivduos com um determinado alelo que exibem o fentipo associado a esse alelo. Nos casos em que um determinado alelo est presente e expressa com 100% de certeza o fentipo, dizemos que a penetrncia completa. Mas quando um determinado alelo, como o da polidactilia postaxial (herana autossmica dominante caracterizada por um dedo extranumerrio prximo ao quinto dedo da mo ou do p) est presente, mas o fentipo s expresso em 64,9% dos indivduos, segundo estudo populacional na frica, a penetrncia dita incompleta, e a penetrncia desse alelo de 64,9%, ou seja, 35,1% apesar de terem o gentipo para polidactilia, no apresentam o fentipo. Outra medida para descrever a gama de expresso fenotpica a chamada de expressividade. A expressividade mede o grau em que determinado alelo expresso em nvel fenotpico; isto , a expressividade mede a intensidade do fentipo. Por exemplo, em ces da raa beagles, o alelo dominante, S, determina pelagem homognea, sem manchas, decorrente da distribuio homognea dos melancitos. O alelo recessivo, s, determina uma distribuio heterognea dos melancitos durante o desenvolvimento embrionrio. Animais com gentipo SS ou Ss, apresentam pelagem sem manchas, entretanto os com gentipos ss, apresentam pelo menos 10 tipos diferentes de padro de manchas( fentipo variegado), indo desde quase sem manchas at uniformemente pigmentados, como o do gentipo dominante. Alelos que produzem fentipos to variados em seus portadores, fala-se em expressividade gnica varivel. (fig. 2.7)

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Figura 2.7: Representao esquemtica. Em ces da raa beagle podem-se distinguir 10 padres de pelagem (ver no esquema, 1 a 10) devidos expressividade varivel do alelo que condiciona a variegao da pelagem (Baseado em Griffiths, A. J. F e cols., 1998). Fonte: Amabis, Jos M.,Martho, Gilberto R., 2006.

1.6. INTERAES GNICAS NO ALLICAS Caracteriza-se pela interao entre dois ou mais alelos, presentes no mesmo ou em cromossomos homlogos diferentes, determinando uma mesma caracterstica. A anlise da proporo fenotpica entre os descendentes de um cruzamento, alm de informar quantos genes esto envolvidos na formao da caracterstica pode tambm revelar o tipo de interao entre eles. 1.6.1. INTERAO GNICA SIMPLES Algumas das primeiras evidncias de que uma caracterstica pode ser influenciada por mais de um gene foram obtidas por Bateson e Punnett, em 1905, de experimentos de cruzamentos em galinhas. Tipos diferentes de galinhas domsticas tm formas de cristas diferentes. As da raa Wyandottes tm cristas rosa, as Brahmas tm cristas ervilhas, do cruzamento de Wyandottes e Brahmas (cristas rosa e ervilha); apareceu outro tipo de crista denominada noz, e do cruzamento de duas aves noz, obteveram-se quatro tipos de fentipos: os trs j
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conhecidos, crista rosa, ervilha, noz e outro fentipo chamado de crista simples em galinhas da raa leghorns, pela proporo fenotpica da descendncia, crista simples representado pelo gentipo duplo-recessivo.( fig. 2.8) Bateson e Punnett descobriram que o tipo de crista determinado pela interao de dois pares de alelos que se segregam independentemente. Usando a notao E e e para representar os alelos do par que determina a forma crista ervilha; a notao R e r a forma da crista rosa; e E_ expressando que o gentipo pode ser EE ou Ee o mesmo aplicvel para o R_, representamos os gentipos da seguinte forma: O gentipo E_ rr, determinaria o fentipo crista ervilha; o gentipo ee R_ o fentipo crista rosa; E_ R_, resultante do cruzamento de aves de crista ervilha com crista rosa, o fentipo crista noz; e o gentipo ee rr o fentipo crista simples.(fig.2.8)

Figura 2.8: Formas das cristas de galinha de raas diferentes. (a) Rosa, Wyandottes; (b) Ervilha, Brahmas; (c) noz, hbrida do cruzamento entre galinhas com cristas rosa e ervilha; (d) simples, Leghorns.Fonte: Snustad, D.Peter; Simmons, Michael J.,2008.

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Gametas F1

Wyandotte (rosa) ee RR eR Hbrido Ee Rr

Brahma (ervilha) EE rr Er Hbrido Ee Rr

Gametas masculinos ER F2 Gametas femininos ER Er EE RR EE Rr Er EE Rr EE rr eR Ee RR Ee Rr er Ee Rr Ee rr

eR er

Ee RR Ee Rr

Ee Rr Ee rr

ee RR ee Rr

ee Rr ee rr

Figura 2.9: O experimeto de Bateson e Punnett sobre a forma das cristas em galinhas. O entrecruzamento na F1 produz quatro tipos de fentipos, cada um destacado por uma cor diferente no quadrado de Punnett, em uma proporo 9:3:3:1

Outro exemplo de interao gnica simples o que ocorre com a cor da plumagem em periquitos australianos, esses periquitos apresentam um grande gama de cores, determinadas por dezenas de genes. No entanto, na determinao das cores bsicas da plumagem dessas aves verde, azul, amarela e branca - esto envolvidos somente dois pares de alelos, o par A e a e o par B e b, que se segregam independentemente. Periquitos homozigticos recessivos apresentam gentipo aa bb e um fentipo branco para a plumagem; Periquitos aa B_ so amarelos; j os A_ bb so azuis e os A_ B_ so verdes. O cruzamento de periquitos verdes heterozigotos produz os 4 tipos de fentipos na proporo de 9/16 verde: 3/16 amarelo: 3/16 azul e 1/16 branco.

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Tanto o alelo A como o alelo B produzem pigmentos. O alelo A produz o pigmento melanina (um pigmento escuro) que, devido disperso da luz na superfcie da pena, contra o fundo escuro de melanina no centro da pena, aparece como azul. O alelo B produz um pigmento amarelo chamado psitacina, que se deposita na pena. Os alelos a e b so formas alteradas e no produzem, respectivamente, melanina e psitacina, dando um fentipo branco. Quando os alelos A e B esto constituindo um mesmo gentipo, a cor da plumagem verde, essa cor resulta da mistura do efeito visual azul, causado pela presena de melanina, e do amarelo, causado pela presena do pigmento psitacina.(fig 2.10)

Figura 2.10: Esquemas de cortes transversais das penas de periquitos para mostrar como a presena e a distribuio dos pigmentos melanina e psitacina determinam a cor da plumagem. (Baseado em Campbell, N. A. e cols., 1994).Fonte: Amabis, Jos M.,Martho, Gilberto R., 2006.

1.6.2. EPISTASIA um exemplo de interao onde o efeito de um gene ou de um par de genes dissimula ou modifica o efeito de outro gene ou de outro par gnico. s vezes, os genes envolvidos influem na mesma caracterstica fenotpica de modo antagonista, o que leva dissimulao. Em outros casos, entretanto, os genes envolvidos exercem sua influncia reciprocamente, de maneira complementar ou cooperativa.
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A epistasia pode ser recessiva, quando o par de alelos localizados em um locus impede ou suprime a expresso, do par de alelos, em outro locus. O par que tem o efeito supressor dito episttico e o par suprimido dito hiposttico. Um exemplo de epistasia recessiva, a que j nos referimos, a do fentipo Bombaim, o gene H quando em homozigose recessiva suprime a expresso dos genes IA ou IB, apresentando o portador desse gentipo, fentipo do grupo sanguneo O.(fig.2.5 e 2.11)

F1

G. sanguneo AB Hh IAIB

G. sanguneo AB Hh IAIB

Gametas masculinos F2 H IA Gametas femininos H IB h IA h IB HI


A

HI

h IA HH IAIA Hh IAIB hh IAIA hhIAIB

h IB Hh IAIB HhIBIB hh IAIB hhIBIB

HH IAIA HH IAIB Hh IAIA Hh IAIB

HH IAIB HHIBIB Hh IAIB Hh IBIB

Proporo Fenotpica: 6/16 G.S.AB; 3/16 G.S. B; 3/16 G.S.A; 4/16 G.S. O
Figura 2. 11: Representao do cruzamento de indivduos do grupo sanguneo AB, heterozigotos para os genes H, com conseqente surgimento do fentipo Grupo sanguneo O (G.S. O).

Outro exemplo de epistasia recessiva o da cor da pelagem em camundongos. O gene A produz um pigmento que funciona como precursor dos alelos P que determina cor aguti (base do pelo preto com ponta amarela), e do alelo p que determina cor preta, o gene a alterado e no origina esse precursor.
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Quando o gentipo do camundongo A_P_ ou A_ pp os camundongos so aguti ou pretos, respectivamente. Mas se o gene for aaP_ ou aapp o fentipo albino.(fig.2.12a e b)

Figura 2.12a: Representao esquemtica da seqncia de reaes bioqumicas que levam sntese do pigmento melanina no plo de camundongos aguti, preto e albino. Cada transformao qumica controlada por uma enzima, fabricada por um gene especfico. Fonte: Amabis, Jos M.,Martho, Gilberto R., 2006.

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Figura 2.12b: Representao esquemtica do cruzamento de camundongos em que a cor da pelagem resulta da epistasia recessiva. No cruzamento entre animais duplo-heterozigticos surge a proporo 9: 3 : 4, caracterstica desse tipo de epistasia. Fonte: Amabis, Jos M.,Martho, Gilberto R., 2006.

Quando um nico alelo de um par j impede ou suprime o par de alelos de outro locus, falamos em epistasia dominante. O exemplo de epistasia dominante o da cor do fruto em abobrinhas, o alelo A impede ou suprime a expresso, enquanto o alelo a permite a expresso dos alelos B e b, que se encontram em outro locus gnico, e determinam a cor amarela
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e cor verde respectivamente. Como esses alelos segregam independentemente a proporo em F2 do cruzamento de duas plantas de abobrinhas brancas heterozigotas de 12 brancas para 3 amarelas para uma verde.(fig. 2.13)

P Gametas F1

Abobrinha branca AA BB AB Aa Bb

Abobrinha verde aa bb ab Aa Bb

X Gametas

F2 AB Gametas Ab aB ab

AB AA BB AA Bb Aa BB Aa Bb

Ab AA Bb AA bb Aa Bb Aa bb

aB Aa BB Aa Bb aa BB aa Bb

ab Aa Bb Aa bb aa Bb aa bb

Proporo fenotpica: 12/16 abobrinha branca; 3/16 abobrinha amarela; 1/16 abobrinha verde
Figura 2.13: Quadrado de Punnett representativo de um cruzamento de plantas de abobrinhas em que a determinao da cor da abobrinha resultante de epistasia dominante, originando uma proporo fenotpica modificada de 12: 3: 1.

A cor da plumagem em galinhas tambm exemplifica a interao episttica dominante, os pares de alelos que participam so denominados I e i, e o outro par C e c. A presena de I j suprime ou impede a expresso do C ou c. (fig 2.14)

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Figura 2.14: Representao esquemtica do cruzamento de galinceos para colorao das penas, resultante de epistasia dominante, originando uma proporo fenotpica modificada de 13: 3, Essa proporo difere do esperado para a epistasia dominante pois o gentipo ii cc tambm branco pois os alelos hipostticos cc no produzem pigmentos. Fonte: Amabis, Jos M.,Martho, Gilberto R., 2006.

1.6.3. INTERAO GNICA COMPLEMENTAR (GENES DUPLOS RECESSIVOS) Bateson e Punnett, descobriram em ervilha-doce (Lathyrus odoratus) ao cruzar duas plantas de flores brancas homozigotas que a F 1 obtida eram todas de flores prpuras, e o resultado da F 2 foi de 9 prpuras para sete brancas, indicando que ocorre segregao independente de dois pares de alelos, assim denominados: em um locus B e b e no outro locus A e a. A explicao para esse resultado que a cor da flor da ervilha dada pela interao complementar de dois alelos, se o os dois alelos A e B estiverem presentes o pigmento ser produzido e a flor ser prpura, caso falte um dos dois aa B_, A_ bb ou aa bb a planta
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apresentar flor branca, os alelos recessivos aa ou bb dissimulam o expresso do alelo dominante do outro locus . (fig. 2.15 e 2.16)

Gene A

Gene B

MOLCULA PRECURSORA (INCOLOR) A_

PRODUTO INTERMEDIRIO (INCOLOR) B_

PRODUTO FINAL (PRPURA)

Figura 2.15: Representao esquemtica da seqncia de reaes bioqumicas que levam sntese do pigmento prpura. Cada transformao qumica controlada por uma enzima, fabricada por um gene especfico. So necessrios ao dois alelos A e B para produo do pigmento. Interao gnica complementar( genes duplos recessivos)

1.6.4. GENES DUPLOS COM EFEITO CUMULATIVO Em abobrinha (Cucurbita pepo) a forma do fruto tambm um exemplo de interao determinada por dois pares de alelos que se segregam independentemente. O fruto apresenta os fentipos discoide, alongado e esfrico. E representaremos os alelos de um locus com as letras A e a e o outro par de alelos com as letras B e b. Quando cruzamos uma planta de fruto discide com uma de fruto alongado, todos os descendentes em F 1 apresentam fruto discoide, mas na gerao F2, resultantes do cruzamento de F1, aparecem plantas com fentipo do tipo esfrico, diferente dos outros dois j apresentados. A explicao para esse resultado que a presena dos dois alelos A e B determinam o fentipo discoide, enquanto a ausncia dos dois determina o fentipo alongado, porm se s um dos alelos A ou B esto presentes o fentipo esfrico. Os genes A e B influenciam igualmente na determinao dos fentipos. (fig.2.17)

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Figura 2.16: Representao esquemtica de cruzamento entre duas linhagens de ervilhadoce. Nessas linhagens, a colorao das flores depende da interao de dois pares de alelos que se segregam independentemente. (Interao genes duplos recessivos ou interao gnica complementar). Fonte: Amabis, Jos M.,Martho, Gilberto R., 2006.

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P Gametas F1

Abobrinha discoide AA BB AB Discoide Aa Bb

Abobrinha alongados aa bb ab Discoide Aa Bb

Gametas F2 AB Gametas Ab aB ab AB AA BB AA Bb Aa BB Aa Bb Ab AA Bb AA bb Aa Bb Aa bb aB Aa BB Aa Bb aa BB aa Bb ab Aa Bb Aa bb aa Bb aa bb
Fonte:Klug et. al.,2010

Proporo fenotpica: 9/16 abobrinha fruto discoide; 6/16 abobrinha fruto esfrico; 1/16 abobrinha fruto alongados
Figura 2.17: Quadrado de Punnett representativo de um cruzamento de plantas de abobrinhas em que a determinao da forma do fruto resultante de genes duplos de efeitos cumulativos, originando uma proporo fenotpica modificada de 9:6:1.

Alm dessas interaes gnicas j mencionadas existem outras que modificam as propores fenotpicas de um cruzamento di-hbrido, representadas na tabela abaixo.(fig.2.18)

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Tipos de Interao A_ B_ Interao gnica simples Epistasia dominante Epistasia recessiva Genes duplos com efeito cumulativo Genes duplos dominantes Genes duplos recessivos Interao dominante e recessiva 9 13 9 9 9 12

Gentipos A_ bb 3 aa B_ 3 3 3 6 4 1 aabb 1 1

15 7 3

Figura 2.18: Tabela representativa dos principais tipos de interaes gnicas, onde se encontra relacionado os possveis gentipos com as propores fenotpicas do cruzamento de dois duploheterozigotos

1.7. HERANA QUANTITATIVA OU POLIGNICA

At agora a maior parte dos nossos exemplos sobre variaes fenotpicas eram tipos que podiam ser classificados em categorias diversas e separadas: as caractersticas das ervilhas de Mendel eram bem contrastantes, cor do cotildone verde ou amarelo, textura da semente da ervilha, lisa ou rugosa, mesmo nos casos de dominncia incompleta, os fentipos eram bem pontuais, no exemplo da flor boca-de-leo, ela apresenta fentipos, branco, rosa e vermelho; o grupo sanguneo ABO, pode ser A, B, AB, O. Cada uma das caractersticas citadas apresenta gentipos distintos que determinam fentipos distintos. Quando isso ocorre, falamos que essas caractersticas apresentam variao descontnua. Embora
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fenmenos como penetrncia, expressividade varivel, pleiotropia e epistasia possam confundir um pouco a relao gentipo-fentipo. Na herana quantitativa, ns vamos estudar caractersticas que apresentam uma variedade contnua de fentipos, essa variedade contnua pode ser medida e descrita em termos quantitativos, onde cada gentipo contribui com uma pequena parcela para determinar o fentipo, logo esses fentipos so resultantes da contribuio aditiva de dois, trs ou um grande nmero de genes, por isso o nome dado a esse estudo herana quantitativa ou polignica. So exemplos de herana polignica ou quantitativa a cor da pele, a altura, ou o peso na espcie humana, a produo de leite ou de carne no gado, a produtividade das colheitas e o contedo proteico das sementes. Na herana quantitativa, o gentipo estabelece os limites quantitativos na fertilizao, mas os fentipos sofrem grande influncia do ambiente, por exemplo, a altura humana parte geneticamente determinada, mas se a pessoa tem uma boa alimentao, pratica esportes etc. pode atingir, dentro de uma determinada faixa de variao da altura gentica, a maior altura. Os fentipos que resultam da ao gnica e de influncias ambientais, s vezes, so denominados caractersticas complexas ou multifatoriais. Alm das caractersticas quantitativas contnuas, em que a variao fenotpica pode situar-se em qualquer ponto de uma variedade de medidas, h duas outras classes de caractersticas polignicas: Caractersticas mersticas so aquelas em que os fentipos so descritos por nmeros inteiros. Exemplo: o nmero de sementes por vagem, ou o nmero de ovos postos por uma galinha, em um ano. So caractersticas quantitativas, mas no tm uma infinidade de fentipos: Por exemplo, a vagem pode conter 2 ou 4 ou 6 sementes, mas no 5,75. Caractersticas com limiar so caractersticas polignicas, mas que apresentam s poucos tipos de fentipos distintos na populao. Sofrem grande influncia dos fatores ambientais, sendo, portanto, caractersticas multifatoriais. So de grande interesse dos geneticistas humanos, pois um grande nmero de doenas apresenta esse padro de herana. Exemplo: a diabetes tipo II, a esquizofrenia, o transtorno afetivo bipolar etc. Em humanos, a evidncia de que
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tais caractersticas so influenciadas por fatores genticos vem de comparaes entre parentes, especialmente gmeos. 1.7.1. AS CARACTERSTICAS QUANTITATIVAS PODEM SER EXPLICADAS EM TERMOS MENDELIANOS No incio da dcada de 1900, a explicao da variao fenotpica contnua, em termos mendelianos, causou muita controvrsia, mas Bateson e Gudny Yule propuseram a hiptese dos fatores mltiplos ou genes mltiplos, na qual muitos genes, cada um comportando-se mendelianamente, contribuam para o fentipo de forma cumulativa ou quantitativa. Essa hiptese foi sustentada pelos resultados experimentais, publicados pelo trabalho com a caracterstica cor do gro de trigo desenvolvido por Hermann Nilsson-Ehle. Nilsson-Ehle iniciou seu trabalho cruzando plantas de trigo de gro vermelho escuro com plantas de trigo de gros branco, obtendo em F 1 todas as plantas com uma cor intermediria (vermelha), o que inicialmente o fez suspeitar de dominncia incompleta entre dois alelos de um mesmo locus, mas ao cruzar as plantas F1, obteve em F2 15/16 plantas com gro que variavam em tons de vermelho, podendo ser distinguidos at 4 tons de vermelho, e o 1/16 branco, sugerindo que era uma herana com dois pares de alelos que se segregavam independentemente. Cada par tinha um alelo que contribua de forma aditiva para compor o fentipo gro vermelho, e outro que no adicionava nada na formao do fentipo. Representando os alelos como A e a e B e b, os que apresentavam fentipo gro vermelho escuro possuam um gentipo com o mximo de genes aditivos AA BB, j os que eram brancos, apresentavam seu gentipo sem nenhum gene aditivo, aa bb. F2 ento ficou com cinco classes fenotpicas, a primeira representada por 4 alelos aditivo, AA BB, e fentipo vermelho escuro; a segunda por 3 alelos aditivos, Aa BB ou AA Bb e fentipo vermelho mdio; a terceira com 2 alelos aditivos, AA bb, aa BB, Aa Bb e fentipo vermelho; a quarta com 1 alelo aditivo, Aa bb ou aa Bb e fentipo vermelho claro e a quinta e ltima classe com 0 alelos aditivo e fentipo gro branco. (fig.2.19)
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Figura 2.19: Representao esquemtica do cruzamento entre plantas de trigo produtoras de gro vermelhos-escuro e brancos. A proporo obtida na gerao F2 mostra tratar-se de um caso de herana quantitativa ou polignica. Fonte: Amabis, Jos M.,Martho, Gilberto R., 2006.

Se fizermos um grfico da distribuio da cor do gro em trigo, ou da estatura, ou da cor da pele em humanos etc. observaremos que todas essas caractersticas quantitativas apresentam uma mesma curva de distribuio, que chamamos de curva de distribuio normal, ou curva em forma de sino. (fig. 2.20)

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6/16

4/16

1/16 Vermelho Vermelho Vermelho Vermelho escuro mdio claro Branco

Figura 2.20: Representao esquemtica de um grfico de distribuio normal da herana polignica da cor do gro de trigo , determinada por 2 pares de alelos que se segregam independentemente , com efeito aditivo

1.7.2. CALCULANDO O NMERO DE POLIGENES Para estimar o nmero de genes (quantos pares de alelos) envolvidos na determinao de uma caracterstica quantitativa, pode-se usar a frmula 1/4n = relao entre os indivduos F2 que expressam um dos dois fentipos extremos. Ou 1/2n relao entre os indivduos F2 que expressam um dos dois fentipos extremos, nesse caso obteremos o nmero de alelos envolvidos na herana quantitativa (fig. 2.21). Quando o nmero de poligenes pequeno, s vezes, mais fcil usar a equao (2n+1) = nmero observado de categorias fenotpicas distintas. Do cruzamento onde os dois genitores so heterozigotos para todos os genes, pode-se determinar a proporo fenotpica de cada uma das classes fenotpicas formadas, usando-se o tringulo de Pascal. Vamos supor que desejamos saber a proporo fenotpica obtida no cruzamento entre dois hbridos para trs pares de genes de efeito cumulativo. Sabemos, pela frmula, que o nmero de fentipos ser sete. Construmos um tringulo com sete linhas. Na primeira, colocamos o nmero 1. Os nmeros das linhas comeam sempre por 1, e os nmeros seguintes so obtidos somando o nmero imediatamente acima com o
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que est esquerda dele (quando no houver nmero acima ou esquerda, considera-se zero). Todas as linhas terminam novamente com o nmero 1: 1 1 1 1 1 1 1 1 2 3 4 5 6 1 3 6 10 15 1 4 10 20 1 5 15 1 6 1

Na stima linha podemos ver que a proporo fenotpica para trs pares de genes na herana quantitativa (no cruzamento de dois indivduos heterozigotos) 1 : 6: 15 : 20 : 15 : 6 : 1.

Determinao do nmero de poligenes(n) envolvidos em uma caracterstica quantitativa


n Indivduos que expressam um dos fentipos extremos Classes fenotpicas distintas

1 2 3 4 5

1/41 = 1/4 1/42 = 1/16 1/43 = 1/64 1/44 =1/256 1/45 = 1/1024

3 5 7 9 11

Figura 2.21: Representao na tabela do nmero de classes fenotpicas , e do nmero de genes envolvidos em uma caracterstica quantitativa.Fonte: Klug et. al., 2010

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GENTICA DE TRANSMISSO:

HERANA E SEXO

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HERANA E SEXO

INTRODUO Todos os casos que voc estudou em gentica, at agora, tinham uma coisa em comum: as caractersticas de um indivduo sempre dependiam dos genes que ele herdava, independentemente de terem sido transmitidos pelo pai ou pela me. Analisemos o conhecido caso do albinismo: pai normal (AA) e me albina (aa) tm sempre descendentes normais (Aa). Tambm me normal (AA) e pai albino (aa) geram crianas normais (Aa). No importa qual dos progenitores, pai ou me, tenha transmitido o gene A; em qualquer caso, ele condicionar produo de melanina e pigmentao normal nos filhos. Nesse tipo de herana, alm disso, h outro fato: a criana que recebe um gene dominante, no importando se um menino ou uma menina, manifestar aquele carter. A caracterstica no tem preferncia por um dos sexos. H casos, no entanto, em que a herana da caracterstica parece depender tanto do sexo do progenitor, que transmite o gene, quanto do sexo da criana que recebe o gene. H, na espcie humana, uma caracterstica chamada daltonismo, em que a pessoa se confunde na percepo de certas cores, muitas vezes do verde com o vermelho. Quando um homem daltnico se casa com uma mulher normal, na famlia da qual no h casos de daltonismo, todas as crianas, meninos e meninas, nascem com viso normal. No entanto, quando uma mulher daltnica se casa com um homem normal, todas as meninas, filhas do casal, nascem normais, porm todos os meninos nascem daltnicos. Nesse caso, portanto, parece fazer diferena no apenas o sexo de quem transmite o gene para o daltonismo, mas tambm o sexo de quem recebe o gene. Alm disso, percebe-se que existem muito mais homens daltnicos do que mulheres daltnicas, diferentemente do caso do albinismo, que se distribui mais ou menos da mesma forma nos dois sexos.

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Foi demonstrado, na dcada de 1910, que os genes se localizam nos cromossomos, filamentos existentes nos ncleos das clulas. Quando se tentou entender casos de herana como o daltonismo, procurou-se, ao microscpico, por uma diferena entre os cromossomos de homens e os de mulheres que pudessem justificar a diferena no modo de transmisso da caracterstica. Descobriu-se, finalmente, que surgiu a suspeita de que a herana do daltonismo pudesse ser explicada por esse par de cromossomos diferentes, que foram chamados de cromossomos sexuais, enquanto os demais cromossomos eram chamados de autossomos. Os demais tipos de genes, como o do albinismo, ficariam nos autossomos. No decorrer desse captulo, voc entender como o daltonismo e outras heranas semelhantes relacionadas com os cromossomos sexuais so transmitidas de pais para filhos. 1. CROMOSSOMOS SEXUAIS Em condies normais, qualquer clula diploide humana contm 23 pares de cromossomos homlogos, isto , 2n = 46. Dos 46 cromossomos, 23 so de origem paterna e 23, de origem materna. Desses cromossomos, 44 so autossomos, que no tm implicao com o sexo, e 2 so os cromossomos sexuais, tambm conhecidos como heterossomos, os quais participam da determinao do sexo do indivduo. Os cromossomos autossmicos so os relacionados s caractersticas comuns aos dois sexos, enquanto os sexuais so os responsveis pelas caractersticas prprias de cada sexo. A formao de rgos somticos, tais como fgado, bao, o estmago e outros, deve-se a genes localizados nos autossomos, visto que esses rgos existem nos dois sexos. O conjunto haploide de autossomos de uma clula representado pela letra A. Por outro lado, a formao dos rgos reprodutores, testculos e ovrios, caractersticos de cada sexo, condicionada por genes localizados nos cromossomos sexuais e so representados, de modo geral, por X e Y. O cromossomo Y exclusivo do sexo masculino. O cromossomo X existe

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na mulher em dose dupla, enquanto no homem ele se encontra em dose simples. Assim, temos: Homens: 44 autossomos + 2 sexuais (44A + XY) Mulheres: 44 autossomos + 2 sexuais (44A + XX)

Figura3.1: Microscopia Eletrnica do cromossomo X e Y. Diferena de tamanho de cada cromossomo. Fonte:http://www.sobiologia.com.br/co nteudos/Genetica/herancaesexo.php

O cromossomo Y mais curto e possui menos genes que o cromossomo X, alm de conter uma poro encurtada, em que existem genes exclusivos do sexo masculino. Observe na figura acima que uma parte do cromossomo X no possui alelos em Y, isto , entre os dois cromossomos h uma regio no-homloga.

Figura 3.2: Representao esquemtica dos cromossomos X e Y, indicando as regies homlogas. (cores fantasia) Fonte: Csar e Sezar, 2005.

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Observe o esquema acima: lado a lado, observamos a representao de um cromossomo X, maior, e de um cromossomo Y, menor. Primeira informao importante: nesses cromossomos, na hora da meiose, ocorre pareamento somente da poro representada em amarelo no esquema; por isso, eles so considerados parcialmente homlogos. Os genes localizados na regio do cromossomo X, representada em vermelho, so exclusivos do X, no existindo no Y; assim, para os caracteres condicionados por esses genes, as mulheres possuem dois exemplares do gene, enquanto os homens apresentam apenas um exemplar do gene, localizado no nico X que eles tm. Esses genes determinam a herana ligada ao X ou herana ligada ao sexo. A regio do cromossomo Y, representada em azul, contm genes exclusivos do Y e que sero encontrados somente nos homens. Os genes dessa regio condicionam assim a herana ligada ao Y, herana holndrica ou herana restrita ao sexo, caracterstica exclusiva dos indivduos de sexo masculino. Por fim, as regies do X e do Y, representadas em amarelo, so homlogas. Isso quer dizer que tanto o macho quanto a fmea possuem dois genes para caractersticas determinadas por essa regio. Fala-se em herana parcialmente ligada ao sexo, que idntica, quanto aos resultados herana autossmica.

2. DETERMINAO GENTICA DO SEXO Existem dois grandes grupos de mecanismos de determinao do sexo em animais: o grupo que envolve apenas os cromossomos sexuais, do qual fazem parte os sistemas XY, X0, ZW e Z0, e o grupo que no envolve os cromossomos sexuais, interferindo nesse caso outros fatores, como os ambientais (temperatura, por exemplo).

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2.1. O SISTEMA XY Em algumas espcies animais, incluindo a humana, a constituio gentica dos indivduos do sexo masculino representada por 2AXY e a dos gametas por eles produzidos, AX e AY; na fmea, cuja constituio gentica indicada por 2AXX, produzem-se apenas gametas AX. No homem, a constituio gentica representada por 44XY e a dos gametas por ele produzidos, 22X e 22Y; na mulher 44XX e os gametas, 22X.

Figura 3.3: Representao esquemtica do Sistema XY Fonte: http://www.sobiologia.com.br/conteudos /Genetica/herancaesexo.php

2.2. MECANISMO DE COMPENSAO DE DOSE Em 1949, o pesquisador ingls Murray Barr descobriu que h uma diferena entre os ncleos interfsicos das clulas masculinas e femininas: na periferia dos ncleos das clulas femininas dos mamferos existe uma massa de cromatina que no existe nas clulas masculinas. Essa cromatina possibilita identificar o sexo
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celular dos indivduos pelo simples exame dos ncleos interfsicos: a ela d-se o nome de cromatina sexual ou corpsculo de Barr. A partir da dcada de 1960, evidncias permitiram que a pesquisadora inglesa Mary Lyon levantasse a hiptese de que cada corpsculo de Barr fosse um cromossomo X que, na clula interfsica, se espirala e se torna inativo, dessa forma esse corpsculo cora-se mais intensamente que todos os demais cromossomos, que se encontram ativos e na forma desespiralada de fios de cromatina. Segundo a hiptese de Lyon, a inativao atinge ao acaso qualquer um dos dois cromossomos X da mulher, seja o proveniente do espermatozoide ou do vulo dos progenitores. Alguns autores acreditam que a inativao de um cromossomo X da mulher seria uma forma de igualar a quantidade de genes nos dois sexos. A esse mecanismo chamam de compensao de dose. Como a inativao ocorre ao acaso e em uma fase do desenvolvimento na qual o nmero de clulas relativamente pequeno, de se esperar que metade das clulas de uma mulher tenha ativo o X de origem paterna, enquanto que a outra metade tenha o X de origem materna em funcionamento. Por isso, diz-se que as mulheres s~o mosaicos, pois quanto aos cromossomos sexuais apresentam dois tipos de clulas. A determinao do sexo nuclear (presena do corpsculo de Barr) tem sido utilizada em jogos olmpicos, quando h dvidas quanto ao sexo do indivduo.

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Figura 3.4: Compare quanto presena do corpsculo de Barr nas clulas masculinas (acima) e femininas (abaixo). Fonte: http://www.sobiologia.com.br/conteudos/ Genetica/herancaesexo.php

2.3. O SISTEMA X0 Em algumas espcies, principalmente em insetos, o macho no tem o cromossomo Y, somente o X; a fmea continua portadora do par cromossmico sexual X. Pela ausncia do cromossomo sexual Y, chamamos a esse sistema de sistema X0. As fmeas so representadas por 2A + XX (homogamticas) e os machos 2A + X0 (heterogamticos).

2.4. O SISTEMA ZW Em muitas aves (inclusive os nossos conhecidos galos e galinhas), borboletas e alguns peixes, a composio cromossmica do sexo oposta que acabamos de estudar: o sexo homogamtico o masculino, enquanto as fmeas so heterogamticas. Tambm a simbologia utilizada, nesse caso, para no causar confuso com o sistema XY, diferente: os cromossomos sexuais dos machos so representados por ZZ, enquanto nas fmeas os cromossomos sexuais so representados por ZW.
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2.5. O SISTEMA Z0 Uma variante do ZW o sistema Z0. As fmeas continuam sendo o sexo heterogamtico, porm apresentam apenas um cromossomo Z; assim, elas fazem vulos com e vulos sem o cromossomo Z, enquanto os machos sempre produzem espermatozoides com um cromossomo Z. Esse sistema existe em galinhas domsticas e em rpteis.

Figura 3.5: Esquema de alguns casos de determinao do sexo. Fonte: http://www.sobiologia.com.br/cont eudos/Genetica/herancaesexo.php

2.6. ABELHAS E PARTENOGNESE Nas abelhas, a determinao sexual difere acentuadamente da que at agora foi estudada. Nesses insetos, o sexo no depende da presena de cromossomos sexuais, e sim da ploidia. Assim, os machos (zanges) so sempre haploides,
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enquanto as fmeas so diploides. A rainha a nica fmea frtil da colmeia e, por meiose, produz centenas de vulos, muitos dos quais sero fecundados. vulos fecundados originam zigotos que se desenvolvem em fmeas. Se na fase larval, essas fmeas receberem uma alimentao especial, transformar-se-o em novas rainhas. Caso contrrio, desenvolver-se-o em operrias, que so estreis. Os vulos no fecundados desenvolvem-se por mitose em machos haploides. Esse processo chamado de partenognese (do grego, partheno = virgem, gnesis = origem), ou seja, considerado um processo de desenvolvimento de vulos no-fertilizados em indivduos adultos haploides.

2.7. DETERMINAO DO SEXO EM PLANTAS Grande parte das plantas produz flores hermafroditas, que contm tanto estruturas reprodutoras masculinas como femininas. Plantas desse tipo so monoicas (do grego mono, um, e oikos, casa), termo que significa uma casa para dois sexos. Outras espcies tm sexos separados, com plantas que produzem flores masculinas e plantas que produzem flores femininas. Essas espcies so denominadas dioicas (do grego di, duas, e oikos, casa), termo que significa duas casas, uma para cada sexo.

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Nas plantas diicas, os sexos so determinados de forma semelhante dos animais. O espinafre e o cnhamo, por exemplo, tm sistema XY de determinao do sexo; j o morando segue o sistema ZW.

2.8. ORGANISMOS QUE NO TM SISTEMA DE DETERMINAO DO SEXO Os organismos monoicos (hermafroditas) no apresentam qualquer sistema de determinao cromossmica ou gentica de sexo. Todos os indivduos da espcie tm, basicamente, o mesmo caritipo. Esse o caso da maioria das plantas e de animais como minhocas, caramujos e caracis.

3. HERANA LIGADA AO SEXO Habitualmente, classificam-se os casos de herana relacionada com o sexo de acordo com a posio ocupada pelos genes, nos cromossomos sexuais. Para tanto, vamos dividi-los em regies. A poro homloga do cromossomo X possui genes que tm

correspondncia com os genes da poro homloga do cromossomo Y. Portanto, h genes alelos entre X e Y, nessas regies. Os genes da poro heterloga do cromossomo X no encontram correspondncia com os genes da poro heterloga do cromossomo Y. Logo, no h genes alelos nessas regies, quando um cromossomo X se emparelha com um cromossomo Y.
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Herana ligada ao sexo aquela determinada por genes localizados na regio heterloga do cromossomo X. Como as mulheres possuem dois cromossomos X, elas tm duas dessas regies. J os homens, como possuem apenas um cromossomo X (pois so XY), tm apenas um de cada gene. Um gene recessivo presente no cromossomo X de um homem ir se manifestar, uma vez que no h um alelo dominante que impea a sua expresso. O fato de a mulher apresentar dois cromossomos X permite concluir que ela sempre portadora de genes ligados ao sexo em dose dupla, formando pares de alelos. J o homem, por apresentar apenas um cromossomo X, tem esses genes sempre em dose simples. No que se refere a esses caracteres ligados ao sexo, costuma-se dizer que a mulher pode ser homozigota ou heterozigota, enquanto o homem ser sempre hemizigoto. Nos humanos, os principais exemplos de herana ligada ao sexo so: 3.1. DALTONISMO O daltonismo tem esse nome por ter sido descrito por John Dalton, consagrado qumico ingls, nascido em 1776 e falecido em 1844. Em 1794, ele descreveu a cegueira parcial para cores, usando o seu prprio exemplo e o de seu irmo, ambos daltnicos. Trata-se da incapacidade relativa na distino de certas cores que, na sua forma clssica, geralmente cria confuso entre o verde e o vermelho. um distrbio causado por um gene recessivo localizado na poro heterloga do cromossomo X, o gene Xd, enquanto o seu alelo dominante XD determina a viso normal. A mulher de gentipo XDXd, embora possua um gene para o daltonismo, no manifesta a doena, pois se trata de um gene recessivo. Ela chamada de portadora do gene para o daltonismo. O homem de gentipo XdY, apesar de ter o gene Xd em dose simples, manifesta a doena pela ausncia do alelo dominante capaz de impedir a expresso do gene recessivo.
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O homem XdY no nem homozigoto ou heterozigoto: hemizigoto recessivo, pois do par de genes ele s possui um. O homem de gentipo XDY hemizigoto dominante.

Se voc consegue distinguir perfeitamente o nmero 74 entre as bolinhas da figura acima, ento voc no daltnico.

3.2. HEMOFILIA um distrbio da coagulao sangunea, em que falta o fator VIII, uma das protenas envolvidas no processo, encontrado no plasma das pessoas normais. As pessoas hemoflicas tm uma tendncia a apresentarem hemorragias graves depois de traumatismos banais, como um pequeno ferimento ou uma extrao dentria. O tratamento da hemofilia consiste na administrao do fator VIII purificado, ou de derivados de sangue em que ele pode ser encontrado (transfuses de sangue ou de plasma). Pelo uso frequente de sangue e de derivados, os pacientes hemoflicos apresentam uma elevada incidncia de AIDS e de hepatite tipo B, doenas transmitidas atravs dessas vias. A hemofilia atinge cerca de 300.000 pessoas. condicionada por um gene recessivo, representado por h, localizado no cromossomo X. pouco frequente o nascimento de mulheres hemoflicas, j que a mulher, para apresentar a doena,
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deve ser descendente de um hmen doente (X hY) e de uma mulher portadora (XHXh) ou hemoflica (XhXh). Como esse tipo de cruzamento extremamente raro, acredita-se que praticamente inexistiriam mulheres hemoflicas. No entanto, j foram relatados casos de hemoflicas, contrariando assim a noo popular de que essas mulheres morreriam por hemorragia, aps a primeira menstruao (a interrupo do fluxo menstrual deve-se contrao dos vasos sanguneos do endomtrio, e no coagulao do sangue).

Figura 3.6: Hemofilia dois possveis tipos de casamento, A e B. Fonte: Csar e Sezar, 2005.

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3.3. HERANA LIGADA AO SEXO EM DROSFILA Em 1910, Morgan estudou um macho de drosfila portador de olho branco, originado de uma mutao do olho selvagem, que tem cor marrom avermelhada. O cruzamento desse macho de olho branco (white) com fmeas de olho selvagem originou, na gerao F1, apenas descendentes de olho selvagem. O cruzamento de machos e fmeas da gerao F1 resultou em uma gerao F2 constituda por fmeas de olho selvagem, machos de olho selvagem e machos de olho branco. A proporo de moscas de olho selvagem e moscas de olho branco foi de aproximadamente 3:1, o que permitiu concluir que a caracterstica olho branco era hereditria e recessiva. Morgan voltou sua ateno para o fato de no ter nascido nenhuma fmea de olho branco na gerao F2. Isso indicava que a caracterstica em questo tinha alguma relao com o sexo dos indivduos. Na sequncia dos experimentos, Morgan cruzou machos de olho branco com as suas prprias filhas, que eram heterozigotas em relao cor do olho. Desse cruzamento, surgiram fmeas e machos de olho selvagem, e fmeas e machos de olho branco, na proporo 1:1:1:1. Esse resultado mostrou que o carter olho branco podia aparecer tambm nas fmeas. Como explicar, ento, a ausncia de fmeas de olho branco na gerao F2 do primeiro cruzamento? Em 1911, Morgan concluiu que os resultados dos cruzamentos envolvendo o loco da cor do olho, em drosfila, podiam ser explicados admitindo-se que ele estivesse localizado no cromossomo X. O macho de olho branco original teria fornecido seu cromossomo X, portador do alelo recessivo mutante w (Xw), a todas as filhas que receberam seu outro cromossomo X das mes, portadoras do alelo selvagem W (XW). As fmeas da gerao F1 seriam, portanto, heterozigotas XWXw. J os machos de F1 receberam o cromossomo X das fmeas selvagens puras (X W). Sua constituio gnica seria, portanto, X WY. A hiptese de Morgan foi confirmada pela anlise de outros genes de drosfila, cuja herana seguia o mesmo padro. Alm disso, permitiu tambm explicar a herana de genes relacionados com o sexo em outras espcies.
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Figura 3.7: Esquema de herana ligada ao sexo em drosfila. Fonte: http://www.sobiologia.com.br/conteudos/Genetica/herancaesexo.php

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4. HERANA RESTRITA AO SEXO O cromossomo Y possui alguns genes que lhe so exclusivos, na poro encurvada que no homloga ao X. Esses genes, tambm conhecidos como genes holndricos, caracterizam a chamada herana restrita ao sexo. No h duvidas de que a masculinizao est ligada ao cromossomo Y. Um gene que tem um papel importante nesse fato o TDF (iniciais de testisdetermining factor), tambm chamado de SRY (iniciais de sex-determining region of Y chromossome), que codifica o fator determinante de testculos. O gene TDF j foi identificado e est localizado na regio no-homloga do cromossomo Y. Tradicionalmente, a hipertricose, ou seja, presena de pelos no pavilho auditivo dos homens, era citada como um exemplo de herana restrita ao sexo. No entanto, a evidncia de que a hipertricose deve-se a uma herana ligada ao Y est sendo considerada inconclusiva, pois, em algumas famlias estudadas, os pais com hiperticose tiveram filhos homens com e sem pelos nas bordas das orelhas. Na herana restrita ao sexo verdadeira: Todo homem afetado filho de um homem tambm afetado; todos os seus filhos sero afetados, e as filhas sero normais.

5. HERANA INFLUENCIADA PELO SEXO Nessa categoria, incluem-se as caractersticas determinadas por genes localizados nos cromossomos autossomos cuja expresso , de alguma forma, influenciada pelo sexo do portador. Nesse grupo, h diversas modalidades de herana, das quais ressaltaremos a mais conhecida, a dominncia influenciada pelo sexo, herana em que, dentro do par de genes autossmicos, um deles dominante nos homens e recessivo nas mulheres, e o inverso ocorre com o seu alelo. Na espcie humana, temos o caso da calvcie.

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Gentipos CC CC CC

Fentipos Homem Calvo Calvo No-calvo Mulher Calva No-calva No-calva

Outras formas de herana autossmica influenciada pelo sexo so a penetrncia influenciada pelo sexo e a expressividade influenciada pelo sexo. Na espcie humana, a ocorrncia de ms formaes de vias urinrias apresenta uma penetrncia muito maior entre os homens do que entre as mulheres. Elas, portanto, ainda que possuam o gentipo causador da anormalidade, podem no vir a manifest-la. A expressividade tambm pode ser influenciada pelo sexo. Um exemplo bem conhecido o do lbio leporino, falha de fechamento dos lbios. Entre os meninos, a doena assume intensidade maior que nas meninas, nas quais os defeitos geralmente so mais discretos. Basicamente, h duas evidncias que permitem suspeitar de um caso de herana relacionada com o sexo: 1. quando o cruzamento de um macho afetado com uma fmea no afetada gera uma descendncia diferente do cruzamento entre um macho no afetado com uma fmea afetada; 2. quando a proporo fenotpica entre os descendentes do sexo masculino forem nitidamente diferentes da proporo nos descendentes do sexo feminino.

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GENTICA DE TRANSMISSO: LIGAO E MAPAS GENTICOS

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LIGAO, CROSSING-OVER E MAPEAMENTO GENTICO EM EUCARIONTES INTRODUO Neste captulo, vamos falar um pouco de caractersticas genticas, onde a 2 lei de Mendel ou lei da segregao independente no pode ser aplicada. Como j vimos anteriormente, apesar de algumas caractersticas no apresentarem as propores mendelianas do di-hibridismo (interao gnica), os pares de alelos que compem essas caractersticas segregam-se, na hora de formar os gametas, de forma independente. Isso acontece porque esses pares de alelos se encontram em pares de cromossomo homlogos distintos, quando ocorre a meiose, processo de formao de gametas. Na realidade, os pares de cromossomos homlogos distintos que se separam de forma independente levando junto os alelos que neles esto distribudos. Porm cada par de cromossomos homlogos possui uma grande quantidade de genes e esses genes na hora de formar os gametas vo juntos com os cromossomos homlogos, como se fosse uma nica unidade (fig.4.1).

Figura 4.1: Representao esquemtica da meiose. No lado direito, distribuio independente: dois genes em dois pares de cromossomos homlogos diferentes. No lado esquerdo, ligao: dois genes em um nico par de homlogos; sem ocorrncia de troca ou crossing-over. Fonte: Klug et. al., 2010.

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1. LIGAO, RECOMBINAO E CROSSING-OVER Sutton e Boveri foram os primeiros, em 1903, a levantar a hiptese de que cada cromossomo era constitudo por mais de um gene ou fator heredit|rio e que esses cromossomos no momento de formar os gametas levavam junto os genes. Ento, se os dois pares de alelos que determinam duas caractersticas distintas se encontrarem em um mesmo par de cromossomos homlogos, esses alelos, na hora da formao dos gametas, iro juntos no mesmo cromossomo, no segregando independentemente. Pares de alelos que determinam caractersticas diferentes, mas se encontram em um mesmo par de cromossomos homlogos so ditos em ligao ou denominados genes ligados. Morgan e colaboradores foram os primeiros a demonstrarem que o cromossomo X em Drosophila possua vrios genes. Em seus estudos, foi o descobridor do fenmeno de ligao no cromossomo X, investigando numerosas mutaes de Drosophila, localizadas nesse cromossomo. Inicialmente, seus cruzamentos levavam em considerao uma nica caracterstica, mas quando comeou a fazer cruzamentos experimentais, considerando duas caractersticas ligadas ao cromossomo X, percebeu que os resultados obtidos em F 2 eram bem diferentes daqueles obtidos, quando ocorria segregao independente, mas tambm no era um resultado esperado para genes que estavam em um mesmo cromossomo. Se os genes estavam localizados em um mesmo cromossomo, deveriam ser transmitidos juntos e como consequncia s seriam formados dois tipos de gametas, os semelhantes aos parentais. (Cada par de homlogos tem um cromossomo de origem materna e um de origem paterna, por isso, gametas que contm um desses cromossomos so ditos parentais). Morgan estudou inicialmente as caractersticas: cor do corpo (amarelo e cinza) e cor dos olhos (brancos e vermelhos), ao cruzar uma fmea mutante de olhos vermelhos e corpo amarelo, (XbaXba) com um macho selvagem, olhos vermelhos e corpo cinza (XBAY), obteve em F 1 todo as fmeas de olhos vermelhos e corpo cinza (XBAXba) e todos os machos de olhos brancos e corpo cinza ( XbaY). Ao
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realizar o cruzamento das fmeas F1 (XBAXba) com machos F1 (XbaY) a grande maioria da prole em F2 mostrava o fentipo parental, olhos vermelhos e corpo cinza e olhos brancos e corpo amarelo, mas menos de 1% do total de moscas nasceram com os olhos brancos e corpo cinza e olhos vermelhos e corpo amarelo (tendo sido chamados de recombinantes por apresentarem uma mistura dos fentipos parentais). Depois desses resultados, Morgan e colaboradores realizaram outros cruzamentos com genes ligados ao X, observando sempre o mesmo padro bsico, ou seja, uma proporo fenotpica parental alta e uma proporo de recombinantes baixa, mas sem um padro definido com relao s propores fenotpicas (fig. 4.2).

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Figura 4.2: Resultados de F1 e F2 do cruzamento A que envolve as mutaes amarelo (a) e branco (b) com o tipo selvagem , dados como foram compilados por Sturtevant. No cruzamento A, 0,5% das moscas de F2 (machos e fmeas) demonstram fentipos recombinantes. Fonte: Klug et.al., 2010.

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As questes levantadas aps esses resultados foram: O que leva a formao dos recombinantes? E por que eles aparecem em cada cruzamento em uma proporo diferente? Baseados em indcios citogenticos, do pareamento dos cromossomos homlogos na prfase I da meiose, observados por Janssens e outros, e do enrolamento entre esses homlogos e surgimento de quiasmas(fig.4.3) intersees em forma de X, cujos pontos de sobreposio so evidentes, Morgan props que esses quiasmas poderiam representar os pontos de trocas genticas (crossing-over). Logo, os recombinantes que surgem so resultados dessa troca fsica de pedaos entre crom|tides homlogas.

Figura 4.3: Foto onde aparecem vrios quiasmas. Tiradas durante meiose em testculos de gafanhotos. (John Cabisco/Visuais Unlimited). Fonte: Griffiths et. al.,2009

A segunda pergunta foi explicada por Morgan da seguinte forma: se dois genes esto muito prximos um do outro, tero menos espao fsico entre eles para permitir quebra e troca de pedaos (crossing-over), assim a possibilidade do surgimento de recombinantes ser menor, ou at no haver recombinantes; entretanto se os genes esto mais distantes tero mais espao fsico entre eles e uma maior chance de que ocorra quebra e crossing-over ou permuta, originando uma maior possibilidade de recombinantes. (fig.4.4)
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Figura 4.4: Dois exemplos de uma permutao nica entre duas cromtides no irms e dos gametas produzidos subsequentemente. Em (a) a troca no altera o arranjo de ligao entre os alelos dos dois genes; formam-se somente gametas parentais e a troca no detectada. Em (b) a troca separa os alelos, resultando em gametas recombinantes, que so detectveis. Fonte: Klug et. al., 2010.

Dessa forma Sturtevant, colaborador de Morgan, fez o primeiro mapa gentico, do cromossomo X, tomando como base a taxa de recombinao ou de crossing-over entre os genes. A distncia relativa entre os genes dada pela taxa de crossing-over ou permuta entre eles. Outro exemplo de genes ligados estudados por Morgan foi o que afetava a cor dos olhos (pr, prpura, e pr+, vermelho) e o tamanho da asa (vg, vestigial, e vg+, normal) em Drosophila. Como essas caractersticas so autossmicas, no foi necessria a representao dos cromossomos sexuais. Os alelos selvagens pr+ e vg+ so dominantes e Morgan realizou cruzamentos para obter di-hbridos e cruz-los com um duplo recessivo (cruzamento teste). O cruzamento teste importante, pois o genitor testador contribui com gametas levando apenas os alelos recessivos, os fentipos da prole revelam diretamente os alelos contribudos pelos gametas di-hbridos. Assim, a anlise pode se concentrar na meiose em um genitor (o di-hbrido) e, essencialmente esquecer a meiose no outro (o testador). Em contraste, em um F1 autofecundado, existem dois conjuntos de meiose a considerar na anlise da prole: um no genitor masculino e um no feminino.

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Os cruzamentos de Morgan esto representados a seguir: (existem vrias notaes usadas para representar os genes ligados algumas delas so aqui apresentadas: pr+ vg+/ pr vg ou pr+ vg+//pr vg.)

P Gametas Di-hbrido de F1 Cruzamento Teste

pr vg/ pr vg pr vg

pr+ vg+/ pr+ vg+ pr+ vg+

pr+ vg+/ pr vg pr+ vg+/ pr vg X pr vg/ pr vg

Gametas pr vg 1 2 3 4 pr+ vg+ pr vg pr+ vg pr vg+ pr+ vg+/ pr vg pr vg / pr vg pr+ vg/ pr vg pr vg+/ pr vg 1339 1195 151 154 2839

Obviamente, esses nmeros desviam-se drasticamente da previso mendeliana de uma proporo 1:1:1:1. As duas primeiras combinaes de alelos est~o em grande maioria indicando claramente que est~o associadas ou ligadas. E descendem dos gametas parentais. Os que aparecem em menor quantidade (3 e 4 combinaes) so resultantes da quebra e troca de pedaos (crossing-over) e so ditos recombinantes.

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2. COMO CALCULAR A TAXA DE CROSSING-OVER OU PERMUTA Considerando os dados do cruzamento teste acima, feito por Morgan, podemos calcular a taxa de crossing-over entre os genes pr+ e vg+. O primeiro passo identificar quais os fentipos que resultam de gametas recombinantes no di-hbrido, no caso, os que aparecem em menor nmero. Nesse exemplo formaramse dois fentipos recombinantes o que tem 151 descendentes ( pr+ vg/ pr vg) e o que tem 154 (pr vg+/ pr vg) descendentes no total de: 151 + 154 = 305 descendentes recombinantes. O segundo passo calcular a frequncia de recombinao, que ser o nmero total de recombinantes dividido pelo nmero total de descendentes: 305 / 2839 0,11. Multiplicando-se essa frequncia por 100, teremos a taxa de crossing-over ou permuta igual a 11%. As frequncias de recombinantes para diferentes genes ligados variam de O a 50%, dependendo de sua proximidade. Quanto mais distantes esto os genes, mais proximamente suas frequncias de recombinantes aproximam-se de 50%,e, em tais casos, no podemos decidir se os genes esto ligados ou esto em cromossomos diferentes. Um nico crossing gera dois produtos recombinantes recprocos, o que explica por que as classes recombinantes so, em geral, aproximadamente iguais em frequncia. E, por conseguinte, os parentais tambm devem ter iguais frequncias. 3. OS ARRANJOS CIS E TRANS DOS GENES LIGADOS O trabalho de Morgan mostrou que os genes ligados em um di-hbrido podem estar presentes em duas conformaes bsicas. Em uma, os dois alelos dominantes ou selvagens se encontram em um cromossomo; e os dois alelos recessivos ou mutantes, no outro. Esse arranjo chamado conformao cis. Na outra, eles esto em homlogos diferentes. Esse arranjo chamado conformao trans. (fig. 4.5)

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Figura 4.5: Representao esquemtica de duas clulas uma em conformao cis e outra em conformao trans.

A identificao, se os dois genes ligados esto em posio cis ou trans, pode ser feita analisando nos descendentes de um cruzamento teste (fig.4.6 a e b).

Cruzamento A B / a b teste

ab/ab

Gametas masculinos ab AB Gametas Femininos ab Ab aB A B/a b a b/a b A b/a b a B/ab 40% 40% 10% 10% Recombinantes Parentais

Figura 4.6a: Representao de um cruzamento teste, onde os parentais encontram-se em conformao cis.

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Cruzamento A b / a B teste

ab/ab

Gametas masculinos ab Ab Gametas Femininos aB AB ab A b/a b a B/a b A B/a b a b/ab 40% 40% 10% 10% Recombinantes Parentais

Figura 4.6b: Representao de um cruzamento teste, onde os parentais encontram-se em conformao trans.

3. CONSTRUINDO MAPAS GENTICOS POR FREQUNCIA DE RECOMBINAO 3.1. TESTE DE DOIS PONTOS Como j havamos falado, quanto maior a distncia fsica entre dois genes, maior a possibilidade de quebra e troca de pedaos entre os cromossomos e, consequentemente, maior a possibilidade de gametas recombinantes. J quando dois genes esto muito prximos, a taxa de recombinao entre eles quase zero e no teremos recombinantes. A distncia entre dois genes diretamente proporcional taxa de recombinao ou crossing-over, logo, como a taxa de crossing entre os genes pr+ e vg+ igual a 11%, a dist}ncia entre os genes pr+ e vg+ igual a 11 UR( ou unidades de recombinao). Outra unidade usada para expressar a distncia entre dois genes o centimorgan ou morgandeo e a unidade de mapa gentico u.m.. Cada u.m., UR ou cM ou morgandeo corresponde a 1% da taxa de recombinao. Esse mtodo produz um mapa linear correspondente linearidade cromossmica?

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Sturtevant previu que, em um mapa linear, se 5 UR. separam os genes A e , B, enquanto 3UR. separam A e C, ento a distncia que separa B e C deve ser de 8UR. ou 2UR.. Sturtevant viu que sua previso era correta. Em outras palavras, sua anlise sugeriu fortemente que os genes esto dispostos em alguma ordem linear, tornando as distncias aditivas. A representao grfica de um mapa mostrada na figura 4.7:
Figura 4.7: Uma regio cromossmica contendo trs genes ligados. Como as distncias de mapa so aditivas, o clculo das distncias AB e A-C nos deixa com duas possibilidades mostradas para a distncia B-C. Fonte: Griffiths et. al.,2009

Logo, para se poder construir o mapa gnico entre os genes A, B e C usando o teste de dois pontos (determinao da distncia usando um cruzamento teste com um di-hbrido) seria necessrio o conhecimento tambm da distncia (= taxa de recombinao entre os genes) entre os genes B e C. Caso a distncia entre os genes B e C fosse de 8UR a sequncia dos genes seria CAB caso a freqncia entre B e C fosse de 2UR teramos a sequncia de ACB.

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3.2. TESTE DE TRS PONTOS Quando o mapeamento feito levando-se em conta as taxas de recombinao em um cruzamento teste com um tri-hbrido, chamamos esse teste de trs pontos. Vamos calcular a distncia e a sequncia de 3 genes usando como exemplo o experimento feito por Bridges e Olbrycht., que cruzaram machos tipo selvagem de Drosophila com fmeas homozigotas para trs mutaes recessivas - cerdas scute (sc), olhos echinus (ec) e asas crossveinless (cv). Em F1, nasceram fmeas heterozigotas para as trs caractersticas, (elas herdaram um cromossomo X do macho com as trs caractersticas selvagem e um dos cromossomos X da fmea com as trs caractersticas mutantes recessivas) e machos hemizigotos recessivos (na herana ligada ao cromossomo X o macho s herda um cromossomo X, o da fmea, nesse caso, recessiva para as trs caractersticas). Assim o entrecruzamento entre machos e fmeas F1 equivale a um cruzamento teste. Entrecruzando fmeas F 1 com machos F1 obtiveram em F2 oito tipos de fentipos diferentes, todos expressando os gametas produzidos pela fmea, sendo dois deles semelhantes aos fentipos parentais e seis deles recombinantes. Os parentais como sempre aparecem em uma proporo bem maior. Os recombinantes em uma proporo bem menor, cada um representando um tipo diferente de cromossomo com crossing. (fig.4.8) Para entender quais crossings estavam envolvidos na produo de cada tipo de recombinante, devemos primeiro determinar como os genes so ordenados no cromossomo.

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Figura 4.8: Cruzamento de trs pontos de Bridges e Olbrycht com os genes ligados ao X sc (cerdas scute), ec (olhos echinus) e cv (asas crossveinless) em Drosophila. Fonte: Snustad, D.Peter; Simmons, Michael J.,2008.

3.2.1. DETERMINAO DA ORDEM DE GENES Existem trs possveis ordens de genes: 1. sceccv 2. ecsccv 3. eccvsc Outras possibilidades, tais como cv ev sc, so as mesmas que uma dessas, pois as pontas esquerda e direita do cromossomo no podem ser distinguidas. Ento, como determinar a ordem? A sequncia dos procedimentos o seguinte: 1. definimos os recombinantes; que so seis, 4 com maior freqncia e 2 com menor freqncia; 2. definimos os que apresentam crossing duplo; no caso, os que aparecem com menor frequncia, j que necessrio que
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ocorram dois crossing ao mesmo tempo, o que resulta probabilidade de ocorrer o 1 e o 2(P(1) x P(2));

na

3. observamos nos duplos recombinantes, qual dos trs genes apresenta uma mudana em relao aos parentais; por exemplo: os parentais so, nesse caso, sc ec cv e o outro sc+ ec+ cv+ , os duplos recombinantes, sc ec+ cv e o outro sc+ ec cv+, o gene nos recombinantes que mudou de lugar em relao aos parentais foi o gene ec+, logo, o gene do meio o ec+; 4. a ordem correta do gene sc ec cv. 3.2.2. Calculando a distncia Tendo estabelecido a ordem dos genes, podemos agora calcular as distncias entre os genes adjacentes (fig.4.10). 1st. Escolhemos dois genes adjacentes, sc e ec e identificamos as classes recombinantes entre eles. (sc ec+ cv+), (sc+ ec cv), (sc ec+ cv) e (sc+ ec cv+). 2. Somamos os nmeros de descendentes de cada fentipo recombinante selecionado e dividimos pelo nmero total de descendentes achando assim a frequncia de recombinao entre os dois genes(163+130+1+1=295)/ 3248=0,091). 3. Achada a frequncia, multiplicamos por 100 para achar a distncia entre os dois genes. (0,091x100= 9,1centiMorgan). 4. O mesmo processo repetido entre os genes ec e cv e achamos a frequncia de 0,105 que multiplicado por 100 d uma distncia de 10,5 centiMorgan(cM). A distncia entre os dois genes extremos, sc cv , pode ser calculada somando-se as distncias entre cada um dos pares adjacentes: 9,1+10,5=19,6cM. Dessa forma, o mapa pode ser assim representado (fig. 4.9):

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Figura 4.9: Mapa de Bridges e Olbrycht de sete genes ligados ao X em Drosophila. As distncias so dadas em centiMorgans. Incluindo a representao dos trs genes calculados no problema. Fonte: Snustad, D.Peter; Simmons, Michael J.,2008.

Tambm podemos obter esta estimativa calculando o nmero mdio de crossings entre estes genes: Parentais: (1158+1455)= 2613/3248=0,805 Recombinantes com 1 s crossing:163+130+192+148= 633/3248=0,195 x (1) = 0,195. Recombinantes com 2 crossing: 1+1= 2/3248= 0,0006 x (2)= 0,0012. Logo: parentais +recombinantes com 1 crossing + recombinantes com 2 crossing = 0,196

Figura 4.10: Clculo das distncias de mapa gentico dos dados de Bridges e Olbrycht. A distncia entre cada par de genes obtida estimando-se o nmero mdio de crossings.Fonte: Snustad, D.Peter; Simmons, Michael J.,2008.

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3.2.3. INTERFERNCIA E COEFICIENTE DE COINCIDNCIA

Um teste de trs pontos tem uma vantagem importante em relao a um teste de dois pontos: ele permite a deteco de crossings duplos, permitindo-nos determinar se as trocas em regies adjacentes so independentes umas das outras. Por exemplo, um crossing na regio entre sc e ec ocorre independentemente de um crossing na regio entre ec e cv ? Ou um crossing inibe a ocorrncia de outro prximo? Para responder a tais perguntas, devemos calcular a frequncia esperada de crossings duplos, com base na ideia de independncia. Podemos fazer isso multiplicando as frequncias de crossing de duas regies cromossmicas adjacentes. Por exemplo, entre os genes sc e ec no mapa de Bridges e Olbrycht, a frequncia de crossing era (163 + 130 + 1 + 1)/3.248 = 0,091, e, entre ec e cv , ela era (192 + 148 + 1 + 1)/3.248 = 0,105. Se for suposta independncia (aplica-se a regra do produto das probabilidades), a frequncia esperada de crossings duplos no intervalo entre sc e cv seria portanto de 0,09 1 x 0,105 = 0,0095. Podemos agora comparar essa frequncia com a frequncia observada, que foi de 2/3.248 = 0,0006. Crossings duplos entre sc e cv foram muito menos frequentes do que o esperado. Esse resultado sugere que um crossing inibiu a ocorrncia de outro prximo, um fenmeno chamado interferncia. A intensidade da interferncia geralmente medida pelo coeficiente de coincidncia, c, que a proporo entre a frequncia observada de crossings duplos e a frequncia esperada: c = Frequncia observada de crossings duplos/ frequncia esperada de crossings duplos = 0,0006 / 0,0095 = 0,063 O nvel de interferncia, simbolizado por I, calculado como I = 1 - c = 1 0,063 = 0,937. Como nesse exemplo o coeficiente de coincidncia prximo de zero, seu menor valor possvel, a interferncia foi muito forte (I prximo de 1). No outro extremo, um coeficiente de coincidncia igual a um significaria nenhuma interferncia; isto , significaria que os crossings ocorreram independentemente uns dos outros.

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Muitos estudos mostraram que a interferncia forte em distncias de mapa menores que 20 cM; assim, crossings duplos raramente ocorrem em curtas regies cromossmicas. Entretanto, em regies grandes, a interferncia enfraquece a ponto de crossings ocorrerem mais ou menos independentemente. A fora da interferncia , portanto, uma funo da distncia de mapa.

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ESTRUTURAS DOS CIDOS NUCLEICOS

GENTICA MOLECULAR:

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ESTRUTURA DOS CIDOS NUCLEICOS

INTRODUO Vimos que diversos genes esto distribudos ao longo das molculas de DNA que constituem os cromossomos de um organismo. Cada cromossomo , por sua vez, formado por uma nica molcula de DNA, associada a protenas. Assim, a molcula de DNA a resposta do enigma da vida! Iremos, neste captulo, estudar a estrutura dos cidos nucleicos buscando compreender como molculas qumicas guardam informaes biolgicas to valiosas.

1. CIDOS NUCLEICOS Em 1869, o pesquisador Johann Friedrich Miescher isolou, pela primeira vez, do ncleo de clulas, molculas grandes que chamou de nuclenas. Posteriormente, comprovada a natureza cida das nuclenas ,estas passaram a ser denominadas cidos nucleicos. No incio do sculo XX, foram identificados dois tipos de cidos nucleicos: o cido desoxirribonucleico (DNA) - presente apenas nos ncleos das clulas - e o cido ribonucleico (RNA) encontrado tanto no ncleo como no citoplasma. Em 1912, Phoebus Levine e Walter Jacobs concluram que o componente bsico dos cidos nucleicos eram polmeros de nucleotdeos que, por si s, so molculas complexas formadas por: um acar; uma base e um cido fosfrico.
Figura 5.1: Johann Friedrich Miescher (1844-1895). Fonte: http://www.fml.tuebingen.mpg.de/fml/miescher.htm/

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1.1. NUCLEOTDEO

Os nucleotdeos so unidades bsicas formadoras dos cidos nucleicos. No DNA, o acar do nucleotdeo uma pentose denominada 2desoxirribose. A denomina~o 2desoxirribose indica que a estrutura padr~o da ribose foi alterada atravs da substituio do grupamento hidroxila (-OH) ligado ao tomo de carbono 2 por um hidrognio (-H). Assim, no RNA, o acar uma ribose.

Figura 5.2: Estrutura da ribose presente no RNA e desoxiribose presente no DNA. Fonte:http://medicina.med.up.pt/bcm/trabalhos/2 005/Interac%87%C6o%20DNA%20prot/DNA.htm

importante saber que a numerao dos carbonos utilizada para indicar quais posies no acar, outros componentes do nucleotdeo so ligados. Os nmeros s~o chamados de um linha, dois linha e assim por diante, para distinguir os tomos de carbono no acar dos tomos de carbono e nitrognio na base nitrogenada.

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As bases nitrogenadas so estruturas de anel simples - pirimidina - ou duplo, - purina - ligadas ao carbono 1 do acar. No DNA, as purinas, adenina ( A) e guanina (G) e as pirimidinas, citosina (C) e timina (T), podem ser ligadas nessa posio. Quando uma das bases est ligada ribose, o nucleosdeo resultante reflete o nome da base. Os nucleosdeos so formados quando uma base se liga a um acar. Este, por sua vez, convertido a nucleotdeo atravs da ligao de um grupamento cido fosfrico ao carbono 5 do acar. At trs grupamentos fosfato independentes podem ser ligados por meio da ligao anidro, rica em energia.

Figura 5.3: Estrutura dos quatro nucleotdeos do DNA. Fonte: Griffiths et al., 2008.

Alm de serem os blocos de construo doa cidos nucleicos, os nucleotdeos desempenham funes, como: molcula energtica (ATP, GTP, etc.), coenzima (coenzima A, nicotinamina adenina de nucleotdeo (NAD+) e a flavina

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mononucleotdeo (FMN) e na transmisso de sinais qumicos como segundo mensageiros.

Figura 5.4: Representao esquemtica da funo do cAMP (Adenosina Monofosfato cclica) como segundo mensageiro. Fonte: Ucko, 1992.

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1.2. POLINUCLEOTDIOS

Para que os nucleotdeos formem um cido nucleico, ou polinucleotdeo, forma-se uma liga~o dister fosfato entre o carbono 3 de um nucleotdeo com o carbono 5 de outro. O RNA na clula normalmente consiste de uma cadeia polinucleotdica nica formada por acares interligados a grupos fosfato com diferentes bases emergindo da cadeia.

Figura 5.5: Representao esquemtica da funo do cAMP (Adenosina Monofosfato cclica) como segundo mensageiro. Fonte: Ucko, 1992.

Uma descoberta importante para a elucidao da organizao estrutural do DNA o fato de que ela no existe como uma cadeia nica, mas como cadeias duplas complementares, ligadas entre si por ligaes de hidrognio entre bases complementares. As bases pricas e pirimdicas de cada cadeia polinucleotdica localizam-se dentro da dupla hlice, em planos paralelos entre si, e perpendiculares ao eixo da hlice. Devido a sua forma molecular das bases
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nitrogenadas, a adenina pode interagir somente com a timina (ou uracila) e a guanina interage apenas com a citosina, constituindo assim o pareamento de bases. Dessa forma, se a sequncia de pares de bases de um filamento for conhecida, automaticamente se conhece a outra.

Figura 5.6: Modelo simplificado da estrutura helicoidal do DNA. (a) Os bastes representam pares de bases, e as fitas representam os arcabouos acar-fosfato das duas cadeias de polaridade inversa. (b) Um diagrama qumico preciso da dupla hlice de DNA, desenrolado para mostrar os arcabouos acar-fosfato (azul) e degraus de pares de bases. Os arcabouos correm em sentidos opostos; as pontas 5 e 3 so denominadas pela orientao dos tomos de carbono 5 e 3 dos anis de acar. Cada par de bases tem uma base purina, adenina (A) ou guanina (G), e uma base pirimidnica, timina (T) ou citosina (C), conectadas por ligaes de hidrognio (linhas tracejadas). Fonte: Griffiths et al., 2008.

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As duas fitas da hlice de DNA ocorrem em sentido antiparelelo e se enrolam em forma de uma hlice dextro-orientada, isto , se as ligaes dister fosfato v~o do carbono 5 de um nucleotdeo ao 3 do nucleotdeo seguinte (5 3) na primeira fita, v~o de 3 a 5 (3 5) na outra cadeia. Em consequncia disso, em cada extremidade da molcula, uma das cadeias polinucleotdica termina em 3 e a outra em 5. A distncia entre as bases em uma molcula de DNA de 0,34 nm, e cada volta completa da hlice contm 10 nucleotdeos. A dupla hlice estabilizada por interaes hidrofbicas entre os anis aromticos planos das bases, que esto orientados no centro da hlice. Nessa estrutura, a desoxirribose e o cido fosfrico localizam-se na periferia da molcula em contato com a gua intracelular. Os grupos fosfricos, com carga negativa, permitem a interao do DNA com protenas bsicas e outras molculas eletricamente positivas.

Figura 5.7: Diferentes representaes da dupla hlice de DNA. O diagrama em fita (a) destaca o empilhamento de pares de bases, enquanto o modelo compactado (b) mostra os sulcos maior e menor. Fonte: Griffiths et al., 2008.

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A hlice pode ser desnaturada pelo calor, alteraes no pH ou por agentes qumicos como a ureia e a formamida. A desnaturao pelo rompimento da ligao de hidrognio ocorre inicialmente nas ligaes A-T, sendo as ligaes C-G mais resistentes, por estarem unidas por trs ligaes de hidrognio.

Figura 5.8: Complementariedade das bases. Duas ligaes de hidrognio entre a Adedina e a Timina e Trs Ligaes de hidrognio entre a Guanina e a Citosina. Fonte: Harper, 2006.

Devido ao tamanho e complexidade da molcula de DNA, esta encontra-se altamente condensada dentro da clula. No genoma humano, essas cadeias polinucleotdicas possuem centenas de milhes de nucleotdeos variando de 50 milhes de pares de base, no cromossomo 21, at 250 milhes de pares de base no cromossomo 1.

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2. O CIDO RIBUNUCLEICO (RNA)

Os ribonucleotdeos contm as bases adenina, guanina, citosina e a base pirimidina uracil (U) em vez de timina presente nas molculas de DNA. A uracila forma ligaes de hidrognio com a adenina da mesma forma como faz a timina. Porm, as bases de U so capazes de se ligar s bases de G. As duas ligaes de hidrognio que podem formar-se entre U e G so mais fracas do que as que se formam entre U e A. A capacidade de U ligar-se tanto com a A quanto com a G um fator importante que permite ao RNA formar estruturas extensas e complexas, muitas das quais vitais aos processos biolgicos.

Figura5.9: Estrutura dos quatro nucleotdeos do RNA. Fonte: Griffiths et al., 2008.

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Em todos os organismos procariotas e eucariotas, so descritas trs principais classes de molculas de cido ribonucleico: o RNA mensageiro (mRNA), o RNA de transferncia ou transportador (tRNA) e o RNA ribossmico (rRNA). Entre estes as molculas de mRNAs so as mais heterogneas em tamanho e estabilidade. Os mRNAs transmitem a informao gentica armazenada na sequncia de nucleotdeos de um gene do DNA cromossomal para a sntese de protenas, servindo como um modelo no qual uma sequncia especfica de aminocidos polimerizado para formar uma molcula de protena especfica, o produto final do gene.

Figura 5.10: Principais molculas de RNA. O rRNA e o tRNA so os produtos finais da expresso de seus genes; o mRNA sofre o segundo estgio da expresso gnica chamado traduo. Fonte: Brown, 1998.

A ligao do cdigo gentico dos genes e o cdigo de aminocidos das protenas esto ligados, molecularmente, atravs do cido ribonucleico (RNA). O DNA dirige a sntese e a sequncia do RNA, O RNA dirige a sntese e a sequncia dos polipeptideos e especifica as protenas que esto envolvidas na sntese e no metabolismo do DNA e do RNA. Esse fluxo de informao chamado dogma central proposto por Francis Crick, em 1958, em sua conferncia intitulada On Protein Synthesis, apresentada { Sociedade de Biologia Experimental.

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Figura 5.11: Estrutura em fita simples da molcula de RNA. Fonte: Harper, 2006.

O tRNA uma pea chave envolvida na traduo do mRNA. produzido por genes que se concentram em regies especficas dos cromossomos e variam em tamanho entre 74 e 95 nucleotdeos. As molculas de tRNA so adaptadores para a traduo das informaes na sequncia dos nucleotdeos do mRNA em aminocidos especficos, capturando aminocidos livres na clula e conduzindo-os at os ribossomos, onde sero incorporados nas protenas que estiverem sendo sintetizadas.

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Figura 5.12: Sntese e processamento do tRNA. Fonte: http://www.ewa.cz/pages1/813.htm

A sntese e o processamento da molcula de tRNA podem ser descritos em quatro etapas:

1. Inicialmente, o tRNA transcrito pela RNA polimerase III. O produto de transcrio, o pr-tRNA, contm sequncias de RNA complementar, nas extremidades 5 'e 3'. Essas sequncias adicionais so removidas do transcrito durante o processamento. Os nucleotdeos adicionais extremidade 5' so removidos por um RNA incomum, contendo enzima ribonuclease P (RNase P).

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2. Alguns precursores tRNA contm um ntron localizado na regio do anticdon. Esses ntrons so separados durante o processamento do tRNA.

3. Todos os tRNAs maduros contm o CCA trinucleotide em suas extremidades 3'. Essas trs bases no so codificadas pelo gene tRNA. Em vez disso, esses nucleotdeos so adicionados durante o processamento do pr-transcrio tRNA. O fim da enzima responsvel pela adio da CCA-tRNA transferase nucleotidil.

4. tRNAs maduros podem conter at 10% de outras bases do que o habitual adenina (A), guanina (G), citidina (C) e uracila (U). Essas modificaes da base so introduzidos no tRNA, na fase de processamento final. A funo biolgica da maioria das bases desconhecida, o processo de traduo parece normal em mutantes e faltam s enzimas responsveis pela modificao das bases.

J um ribossomo uma estrutura nucleoproteica citoplasmtica que atua como a maquinaria para a sntese de protenas a partir dos moldes de mRNA. Os genes para rRNA ficam concentrados nas regies dos cromossomos nas quais se formam os nuclolos. Nos ribossomos, as molculas de mRNA e tRNA interagem para traduzir uma informao especfica da protena - molcula transcrita a partir de um gene. Durante a sntese proteica, muitos ribossomos so associados com uma molcula de mRNA em um conjunto chamado de polissomos.

2. IMPORTNCIA MDICA DOS NUCLEOTDEOS

Anlogos sintticos das purinas, pirimidinas, nucleosdeos, nucleotdeos possuem inmeras aplicaes na medicina clnica. Seus efeitos txicos refletem tanto a inibio de enzimas essenciais para a sntese de cidos nucleicos ou sua incorporao em cidos nuclicos com consequente rompimento da base de emparelhamento. Oncologistas empregam 5-fluoro-ou 5-iodouracil, 3deoxiuridina, 6-tioguanina e 6-mercaptopurina, 5 - ou 6-azauridine, 5 - ou 6azacytidine, e 8-azaguanina, que so incorporada no DNA antes da diviso celular, no tratamento de vrios tipos de cncer. O alopurinol, um anlogo das purinas,
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usado no tratamento da hiperuricemia e gota, devido a sua ao inibitria na biossntese de purinas e sobre a atividade da xantina oxidase. Por outro lado, a azatioprina, metabolizada a 6-mercaptopurina, empregada durante o transplante de rgos, para suprimir a rejeio imunolgica.

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GENTICA MOLECULAR:

DUPLICAO DO DNA

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DUPLICAO DO DNA

INTRODUO

A estrutura da molcula de DNA permite a transferncia da informao gentica de uma clula para as clulas filhas e de uma gerao para a seguinte. O DNA das diversas espcies difere principalmente na sequncia das bases nitrogenadas. Uma sequncia pequena contendo doze nucleotdeos de comprimento pode gerar 412 = 16777216 sequncias diferentes. Assim, o mecanismo de duplicao ou replicao do DNA, que iremos observar neste captulo, extremamente eficiente, o que garante a integridade do material gentico.

1. DUPLICAO

O mecanismo pelo qual uma molcula de cido desoxirribonucleico (DNA) faz uma cpia de si mesmo denominado duplicao. O arranjo estrutural da molcula de DNA permite a sua duplicao pela separao dos dois filamentos moldes original, seguidos pela sntese de novos filamentos complementares cpias. Estes filamentos consistem em uma fita da hlice original e uma fita nova, complementar primeira no processo denominado duplicao semiconservativa. A duplicao do DNA assincrnica em todos os cromossomos, ou mesmo dentro de um nico cromossomo. A sntese do DNA ocorre ao longo de cada cromossomo iniciando em centenas a milhares de regies, denominadas origens de replicao, em tempos diferentes da fase S do ciclo celular. A replicao extremamente complexa e envolve 20 ou mais enzimas alm de outros fatores que constituem o sistema DNA replicase.

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Figura 6.1: Modelo semiconservativo da replicao do DNA proposto por Watson e Crick. Os filamentos parentais, mostrados em azul, servem como moldes para a polimerizao. Os filamentos recm-polimerizados, mostrados em amarelo, tm sequncias de bases que so complementares a seus respectivos moldes. Fonte: Griffiths et al., 2008.

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O primeiro passo para a replicao do DNA comea com o reconhecimento de um ponto de iniciao e desdobramento da dupla hlice realizado pelas enzimas denominadas topoisomerases. Como os dois, filamentos originais esto firmemente ligados por ligao de hidrognio, faz-se necessria a ao das protenas SSP (single strand proteins), que mantm os filamentos separados enquanto se processa a replicao. A DNA-polimerase polimeriza os nucleotdeos sequencialmente para formar uma nova fita de DNA. Porm, essa enzima no consegue iniciar a sntese das novas fitas de DNA sem o auxlio de um iniciador (primer) de RNA, porque ela s capaz de adicionar nucleotdeos a um polinucleotdeo preexistente no sentido 5 3, o que significa que os filamentos molde precisam ser lidos no sentido 5 3.

Figura 6.2: Representao do primer de RNA sintetizado a partir do molde de DNA. Fonte: Harpe, 2006.

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Os primers da fita descontnua (leagging) so sintetizados pela ao de uma RNA-polimerase especial, a primase, enquanto os primers do DNA contnuo (leading) so produzidos pela RNA polimerase que normalmente sintetiza RNA na transcrio. Ambas as enzimas utilizam como molde os filamentos de DNA separados nas origens de replicao. Nos dois casos, a DNA polimerase forma um filamento de DNA que contm um pequeno seguimento de RNA, removidos posteriormente das molculas de DNA recm sintetizadas. A teoria de que o DNA descontnuo 3 5 era sintetizado em pedaos foi constatada pela biloga molecular Tuneko Okazaki em estudos realizado em colaborao com Reiji Okazaki, em 1968. Identificaram trechos curtos de DNA entre 100 e 1000 nucleotdeos de comprimentos associados sua replicao os fragmentos de Okazaki. No filamento descontnuo, a DNA polimerase sintetiza o DNA at certa distncia antes de encontrar o primer na ponta 5 do fragmento de Okazaki seguinte. A ligao dos fragmentos ocorre pela ligao fosfodister catalisada pela enzima DNA ligase.
Figura 6.3: TuKeno Okazaki. Fonte:http://mujeresdeciencias.blogia.com/200 7/082801-tuneko-okazaki-1933-.php

Apesar de sua complexidade, a replicao do DNA altamente precisa. Estima-se que ocorre apenas um erro na replicao de 10 9 pares de bases. Essa preciso devido especificidade da DNA polimerase que capaz de conferir s bases a medida que as adiciona ao filamento de DNA. Essa enzima confere as bases adicionadas e remove imediatamente uma base errada, antes que a sntese do filamento continue. Alm da DNA polimerase, o processo de replicao envolve a participao de vrias enzimas e cofatores:

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DNA helicase: so enzimas que se ligam fita simples de DNA, prximo zona de replicao e se movem na direo da fita dupla, forando as fitas se separarem e provocando um desenrolamento. Assim que as fitas se abrem, as protenas desestabilizadoras se ligam fita simples;

Protena de ligao do DNA de fita simples - single strand binding protein: Essas protenas, denominadas de protenas desestabilizadoras da hlice, ligam-se fita simples de DNA, mantendo-as separadas;

DNA topoisomerase: um problema de superdobramento ocorre medida que as fitas se separam. As enzimas DNA topoisomerase so responsveis pelo mecanismo para remover o superdobramento;

Primase: a enzima responsvel por sintetizar primer. As DNA polimerases no conseguem iniciar a sntese de uma fita complementar de DNA atravs de um molde completamente composto de fita simples. Elas necessitam de oligonucleotdeo iniciador, denominado primer, que na realidade uma regio curta de aproximadamente 10 nucleotdeos de comprimento, com um grupo hidroxila livre no carbono-3, que serve como primeiro aceptor de um nucleotdeo;

DNA ligase: a enzima responsvel por realizar a juno entre os fragmentos de DNA (fragmentos de Okazaki) sintetizados na fita atrasada; entre outras protenas.

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Figura 6.4: Representao molecular de forquilha de replicao. A topoisomerase e a helicase desenrolam e abrem a dupla hlice na preparao para a replicao do DNA. Quando a dupla hlice est desenrolada, as protenas de ligao a um s filamento impedem que a dupla hlice se reconstitua. A ilustrao uma representao do chamado modelo trombone (denominada por sua semelhana a um trombone devido ala do filamento de replicao descontnua) mostrando como os dois cernes catalticos do replissomo so vistos interagindo para coordenar os vrios eventos da replicao dos filamentos leading e lagging. Fonte: Griffiths et al., 2008.

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GENTICA MOLECULAR:

TRANSCRIO

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TRANSCRIO

INTRODUO

O que difere os polinucleotdeos das diferentes espcies a ordem em que as bases esto arranjadas em cada fita de DNA. A descoberta de que os genes formam um cdigo gentico foi um dos mais importantes acontecimentos cientficos da poca. Em 1958, Francis Crick postulou que a informao biolgica contida no DNA de um gene primeiramente transferida ao RNA e depois protena. Sendo o fluxo de informao unidirecional, as protenas no podem por si s orientar a sntese de RNA, e o RNA no pode orientar a sntese de DNA, com exceo de alguns vrus de RNA. Iremos neste captulo compreender como as informaes armazenadas na molcula de DNA so transcritas na clula.

1. GENE

Um gene um seguimento de uma molcula de DNA que contm o local de incio e fim da sntese de uma molcula de RNA. Sequncias de pares de bases nitrogenadas que indicam o incio dos genes so denominadas regies promotoras; as que indicam o fim dos genes, sequncias de trmino de transcrio. A maioria dos genes interrompida por uma ou mais regies no codificantes. Essas sequncias intercalares, denominadas ntrons, so inicialmente transcritas em RNA no ncleo, mas no esto presentes no RNA mensageiro (RNAm) no citoplasma. Assim, apenas as sequncias codificantes, os xons, carregam a informao da sequncia de aminocidos de uma protena.

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Figura 7.1: Representao esquemtica do DNA de organismos superiores. As regies que codificam protenas (xons) esto separadas por (ntrons) por regies que no esto presentes no mRNA final. Fonte Ucko, 1992.

Os ntrons esto presentes no apenas em genes que codificam protenas, mas tambm em alguns genes de rRNA e at mesmo genes tRNA, sendo removidos durante o processo de transcrio do mRNA. A remoo de ntrons e unio dos xons denominada splicing. O nmero e o tamanho dos ntrons variam de gene para gene e de espcie para espcie. Por exemplo, o tamanho mdio de um intron em mamferos de cerca de 2000 nucletidos, enquanto que em mdia o tamanho do exon de cerca de 200 nucleotdeos. Assim, a maior porcentagem do DNA em mamferos codifica introns; exons, no. Um exemplo clssico em seres humanos o do gene da distrofia muscular de Duchenne que possui 79 exons e 78 introns, distribudos por 2,5 milhes de pares de bases. Entretando, quando unidos os xons, o mRNA resultante apresenta 14.000 nucleotdeos entre 2,5 milhes de pares de base no codificantes.

1.1.

snRNA

Aps a descoberta de xons e ntrons, os cientistas voltaram sua ateno para o mecanismo de splicing do RNA. O processamento splicing uma operao complexa realizada pelos spliceossomos, que so conjuntos de protenas e molculas de snRNA (pequenos RNAs nucleares). Essa maquinaria enzimtica reconhece sinais no RNA nascente que especificam os locais de corte. Os ntrons
142

quase sempre comeam com GU e terminam com AG, que precedido por um trecho rico em pirimidinas.

1.2. iRNA

A descoberta do mecanismo conhecido como RNA de interferncia, que permite silenciar genes com precis~o, rendeu aos bilogos norte -americanos Andrew Fire e Craig Mello o Prmio Nobel de Medicina de 2006. O iRNA funciona como mecanismo de defesa contra vrus que tm cdigo gentico em forma de fitas duplas de RNA. Alm de atuar no controle da expresso gentica, trata-se de uma importante ferramenta de pesquisa que poder dar origem a novos tratamentos para condies ligadas a caractersticas genticas.

2. A TRANSCRIO

A transcrio de genes codificantes pela RNA polimerase iniciada anteriormente ao gene, na regio promotora pequena sequncia de nucleotdeos reconhecida pela polimerase II (como por exemplo, o TATA boxe 5TATAAAT-3) situada geralmente cerca de 25 nucleotdeos antes da sequncia a ser transcrita. Existem vrios tipos diferentes de promotor encontrados no genoma humano, com diferentes propriedades regulatrias que especificam o padro de desenvolvimento, bem como os nveis de expresso de um determinado gene em tecidos diferentes. A sntese do transcrito prim|rio de mRNA ocorre no sentido 5 3, enquanto o filamento do gene transcrito lido no sentido 3 5 com rela~o { estrutura desoxirribose fosfodister. Durante o processo de alongamento da transcrio, a RNA polimerase percorre a molcula de DNA desenrolando a dupla hlice, enquanto liga sequencialmente ribonucleotdeos { extremidade 3 da molcula crescente de RNA.

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Como o RNA sintetizado corresponde tanto em polaridade quanto em sequncia de bases (substituindo Timina por Uracila) ao filamento 5 3, essa fita de DNA no transcrita denominada codificante ou com sentido. J o filamento 3 5 transcrito denominado n~o-codificante ou sem sentido. A transcrio continua incluindo ntrons e xons do gene, alm da posio no cromossomo que eventualmente corresponde { ponta 3 do mRNA.

Figura 7.2: A sequncia de mRNA complementar ao filamento-molde de DNA do qual ele transcrito e, portanto, corresponde sequncia no molde (exceto em que o RNA tem U onde o DNA tem T). Essa sequncia do gene para a enzima 3-galactosidase. Fonte: Griffiths et al., 2008.

O transcrito primrio de RNA processado pela adio de uma estrutura qumica cap na ponta 5 do RNA e uma clivagem na ponta 3 em um ponto especfico, ao final da informao codificante. Essa clivagem seguida pela adio de uma cauda poliA na ponta 3 do RNA. O cap - 7-metilguanosina que est ligado ao ribonucleosdeo atravs de uma ponte contendo 3 fosfatos. Est envolvido no reconhecimento do mRNA pela maquinria de traduo, alm de estabilizar o mRNA, impedindo o ataque de 5'-exonucleases.

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Figura7.3: Representao esquemtica da estrutura cap (metilguanosina) e das protenas nucleares (CBP80 e CBP20) envolvidas no complexo de ligao cap durante a transcrio do mRNA. Fonte: http://www.ewa.cz/pages1/813_soubory/end.gif

A cauda poliA parece aumentar a estabilidade do RNA poliadenilato resultante. O ponto de poliadenilao especificado em parte pela sequncia AAUAAA, ou por uma sequncia semelhante a esta, em geral encontrada na parte 3 no traduzida do RNA transcrito. Essas modificaes ps transcricionais ocorrem no ncleo, assim como o processamento do RNA. O mRNA transportado ento para o citoplasma, onde ocorre a traduo.

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Figura 7.4: Representao esquemtica do complexo de poliadenilao. Fonte: http://www.ewa.cz/pages1/813_soubory/end.gif

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GENTICA MOLECULAR:

TRADUO

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TRADUO

INTRODUO

A informao gentica armazenada no DNA por meio de um cdigo, no qual a sequncia de bases adjacentes determina a sequncia de aminocidos no polipeptdeo codificado. A sntese de protenas ocorre nos ribossomos, complexos macromoleculares constitudos por RNA ribossmico (18S e 28S) associados a protenas ribossomiais. Mas para que a informao contida nos nucleotdeos seja traduzida em uma protena especfica, a clula necessita decifrar o cdigo gentico presente no mRNA. Assim, neste captulo iremos compreender o mecanismo de traduo e como ocorrem as mudanas ps-traducionais.

1. O CDIGO GENTICO

A chave para a traduo um cdigo que relaciona aminocidos especficos combinao de trs bases adjacentes ao longo do mRNA. Por sua vez, o cdigo gentico consiste em um conjunto de trs nucleotdeos (trinca) que indicam um aminocido X. Um cdigo de trs letras de quatro diferentes bases ( Adenina; Timina; Citosina; e Guanina) pode reproduzir 64 aminocidos. Como existem 20 aminocidos presentes nas protenas dos seres humanos e 64 possveis cdons, a maioria dos aminocidos especificada por mais de um cdon. Por isso o cdigo gentico dito como degenerado. Por exemplo, a base na terceira posio da trinca pode ser uma purina (A ou G), ou uma pirimidina (T ou C) ou, em alguns casos, qualquer uma das quatro bases sem alterar a mensagem codificada.

148

Figura 8.1: O cdigo gentico designa os aminocidos especificados por cada cdon. Fonte: Ucko, 1992.

Os cdons, UGA, UAA ou UAG, so denominados finalizadores ou sem sentido porque marcam o trmino da traduo da molcula de mRNA. Por outro lado, a traduo sempre iniciada em um cdon AUG que especifica o aminocido metionina. Porm, normalmente esse aminocido (amino-terminal, pois o primeiro a ser adicionado cadeia polipeptdica) removido antes que a sntese da protena seja completada. Apenas os aminocidos metionina e triptofano so especificados apenas por um nico cdon.

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2. A FUNO DO tRNA

H pelo menos 20 tipos de molculas de tRNA em cada clula, correspondentes a cada um dos 20 aminocidos necessrios para a sntese de protenas. Embora os tRNA apresentem sequncias nucleotdicas especificas, essas molculas possuem muitas caractersticas em comum. A estrutura primria, isto , a sequncia de nucleotdeos de todas as molculas de tRNA gera uma estrutura secundria em duas dimenses como um trevo.

Figura 8.2: Representao esquemtica da sntese do tRNA. Fonte: Brown, 1998.

150

Como o cdigo do mRNA escrito em grupos de trs nucleotdeos, a traduo se efetua graas ao tRNA capaz de "ler" o cdigo do mRNA. As molculas de tRNAs possuem um grupo de trs nucleotdeos chamado "anticdon", constituda por sete nucleotdeos. Eles so complementares a um cdon do mRNA correspondente a um aminocido transportado pelo tRNA. Como a degenerao do cdigo gentico reside principalmente no ltimo nucleotdeo do cdigo em trincas, sugere-se que o pareamento entre este ltimo e o nucleotdeo correspondente do anticdon no estritamente uma regra.

Figura 8.3: Representao esquemtica das molculas individuais de tRNA especficas para aminocidos diferentes. Fonte: Brown, 1998.

Como no h afinidade de cidos nucleicos presentes nas molculas do tRNA para os grupos funcionais especficos de aminocidos, o reconhecimento dessa molcula ocorre por meio de uma protena capaz de distinguir tanto o tRNA quanto o aminocido especfico. O processo de reconhecimento e ligao de cada um dos 20 aminocidos realizado por um grupo de enzimas denominado aminoacil-tRNA sintetase. Durante o processo de reconhecimento, formado um intermedirio ativado de aminoacil-AMP que, em seguida, reconhece um tRNA
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especfico. Esse processo extremamente preciso, sendo a taxa de erro inferior a 10-4. O aminocido permanece ligado ao seu tRNA especfico em uma ligao ster at que polimerizado em uma posio especfica - 3 - na sntese de um polipeptdeo.

Figura 8.4: Representao da reao envolvida na aminoacilao de um tRNA. Fonte: Brown,1998.

2.

OS RIBOSSOMAS

Os ribossomas foram originalmente caracterizados por sua taxa de sedimentao e, por essa razo, seus nomes so derivados de seus coeficientes de sedimenta~o em Svedberg (S) unidade, o que uma indicao do tamanho molecular dessas estruturas macromoleculares. Em procariontes as subunidades pequena e grande so designadas 30S e 50S, respectivamente, que quando associadas formam uma partcula 70S. Ao contrrio, em eucariontes as subunidades pequena e grande so denominadas 40S e 60S, formando o ribossomo

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80S. Embora os ribossomas eucariticos sejam maiores e mais numerosos, os componentes e as etapas de sntese proteica so universalmente semelhantes.

(a)

(b)

Figura 8.5: Um ribossomo contm uma subunidade grande e outra pequena. Cada subunidade contm rRNA de tamanhos variados e um conjunto de protenas. Existem duas principais molculas de rRNA em todos os ribossomos. (a) Ribossoma procarioto; (b) Ribossoma eucarioto. Fonte: Griffiths et al., 2008.

Os ribossomas so o local onde o mRNA e aminoacil-tRNA se renem durante a traduo da mensagem gentica em todos os tipos de clulas. Alm de fornecer o suporte estrutural para o processo de decodificao, o ribossomo se contm no centro cataltico responsvel pela formao da ligao peptdica, o chamado centro peptidil transferase. Os ribossomas foram descobertos no incio dos anos 1940, mas seu papel na sntese de protenas logo se tornou aparente, mais de uma dcada depois. O nome "ribossomo" foi dado a essas molculas em 1958.

153

4. TRADUO Uma vez no citoplasma da clula, o mRNA produzido a partir do DNA reconhecido pelo ribossoma que se liga a sua extremidade 5. A subu nidade pequena do ribossomo (40S nos eucariontes) ento se move ao longo do mRNA at alcanar um cdon iniciador e comear a traduo. O cdon iniciador a primeira trinca AUG que a subunidade pequena encontra, medida que "escaneia" a molcula de mRNA.

Figura 8.6: Representao esquemtica do incio da traduo em eucariontes. O complexo de iniciao forma-se na ponta 5 do mRNA e o percorre no sentido de 3 procura de um cdon de incio. O reconhecimento do cdigo de incio dispara a montagem do ribossomo completo e a dissociao dos fatores de iniciao (no mostrados). A hidrlise de ATP fornece energia para ativar o processo de varredura. Fonte: Griffiths et al., 2008.

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Formado o complexo de iniciao, a subunidade grande do ribossoma pode se fixar. Para tanto, uma molcula de ATP hidrolisada, liberando a energia necessria para a sntese do polipeptdeo. Dessa unio, resultam dois stios de ligao: as molculas de tRNA um stio peptidil amino terminal ocupado no momento pelo tRNAmet cdon de iniciao; e o stio aminoacil aminoterminal posicionado sobre o segundo cdon.

Figura 8.7: Representao esquemtica da etapa de alongamento. Um complexo ternrio consiste em um aminoacil-tRNA ligado a um fator EF-Tu que se liga ao stio A. Aps seu aminocido juntar-se cadeia polipeptdica em crescimento, um fator EF-G liga-se ao stio A enquanto empurra os tRNA e seus cdons de mRNA para os stios E e P. Fonte: Griffiths et al., 2008.

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Ambos os stios do ribossoma esto ocupados tRNAs aminoacilados, e os dois aminocidos esto em contato direto. A etapa posterior a formao de uma ligao peptdica entre o grupamento carboxila da metionina e o grupamento amino do segundo aminocido. Essa reao catalisada pela peptidiltransferase. O ribossomo ento desliza ao longo do mRNA atravs de trs nucleotdeos, de modo que o tRNA ligado a um aminocido entre no stio peptidil, liberando o tRNAmet, permitindo que o stio Aminoacil fique livre. O terceiro tRNA aminoacilado entra no stio aminoacil, e o ciclo de alongamento da cadeia polipeptdica ento repetido. Durante a sntese proteica, mais de 80 ribossomas movem-se pela molcula de mRNA ao mesmo tempo, estando cada um em um estgio diferente, formando um complexo denominado polissoma.

Figura 8.8: Representao esquemtica do processamento seqencial da molcula de mRNA durante a traduo. Fonte: http://www.sobiologia.com.br/conteudos/Citologia2/AcNucleico9.php

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A finalizao da traduo ocorre quando um cdon finalizador (UAA, UAG ou UGA) entra no stio aminoacil. Em seguida, fatores de liberao clivam o polipeptdeo completo, em um processo que envolve o gasto de energia na forma de GTP, e as subunidades 40 S e 60 S se disossiam.

Figura 8.9: Representao esquemtica do termina da traduo. A traduo terminada quando os fatores de liberao reconhecem os cdons de fim no stio Aminoacil (A) do ribossomo. Fonte: Griffiths et al., 2008.

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5. MUDANAS PS TRADUCIONAIS

A maioria das protenas passa por modificaes ps transducionais. A estrutura tridimensional especfica de cada protena determinada pela prpria sequncia de aminocidos. Duas ou mais cadeias polipeptdicas, codificadas pelo mesmo gene ou por genes distintos, podem se combinar para formar um nico complexo proteico final.

Figura8.10: Formao da estrutura quaternria da hemoglobina. A molcula de hemoglobina um tetrmero formado por duas cadeias de alfa-globina e duas cadeias de beta-globina ligadas por interaes no covalente. Fonte: http://www.biocristalografia.df.ibilce.unesp.br/xtal/texto_hb.php

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Os produtos proteicos tambm podem ser modificados quimicamente. Mais de 300 modificaes podem ocorrer nos amincidos das cadeias polipeptdicas, aps a sua traduo. Duas das alteraes mais comuns so a fosforilao e ubiquitinao.

5.1. FOSFORILAO Um grupo de enzimas denominadas quinases capaz de ligar grupos fosfato aos grupos hidroxila dos aminocidos serina, treonina e tirosina, enquanto que as enzimas chamadas fosfatases removem esses grupos fosfato das protenas. Como a adio e remoo de grupos fosfato atuam como um interruptor reversvel no controle de uma variedade de eventos celulares, incluindo a ativao e/ou inativao de enzimas especficas.

Figura 8.11: Fosforilao e desfosforilao de protenas. As protenas podem ser ativadas pela ligao enzimtica de grupos fosfato aos grupos laterais de seus aminocidos e inativar a remoo desses grupos fosfato. Fonte: Griffiths et al., 2008.

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5.2. UBIQUITINAO O mecanismo de ubiquitinao envolve a adio de uma protena denominada ubiquitina ao resduo de lisina de uma protena alvo, que ser posteriormente degradada em um complexo denominado proteasomo. A ubiquitina uma protena que contm 76 aminocidos, presente nos organismos eucariontes, estando altamente conservada em plantas e animais. As principais classes de protenas que so metabolizadas por ubiquitinao apresentam uma meia vida curta, como as que participam do ciclo celular, ou so protenas danificadas ou transformadas.

Figura 8.12: Ubiquitinao. FIG. 9.23 So mostradas as principais etapas na degradao de protenas mediada pela ubiquitina. A ubiquitina primeiro conjugada a outra protena e, ento, degradada pelo proteassomo. A ubiquitina e os oligopeptdeos so ento reciclados. Fonte: Griffiths et al., 2008.

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6. DESTINO DAS PROTENAS Em eucariotos, as protenas so sintetizadas nos ribossomos localizados no citoplasma. No entanto, algumas dessas protenas acabam no ncleo, em organelas como as mitocndrias, e outras ainda ancoradas membrana interna ou externa, ou secretadas em vesculas. O direcionamento das protenas ocorre por meio uma sequncia curta peptdeo lder na sua extremidade amino -terminal. Por exemplo, protenas de membrana apresentam, geralmente, um peptdeo lider de 15 a 25 aminocidos, que as direciona para os canais na membrana do retculo endoplasmtico onde a sequncia final clivada por uma peptidase. A partir do retculo endoplasmtico, a protena direcionada para seu destino final.

Figura 8.13: Representao da incorporao de sequncias de sinal que marcam as protenas que sero secretadas pela clula. Fonte: Griffiths et al., 2008.

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MUTAO E MECANISMO DE REPARO

GENTICA MOLECULAR:

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MUTAO E MECANISMO DE REPARO

INTRODUO

A molcula de DNA serve como um modelo para a transcrio das informaes em RNA e para a replicao da informao em molculas de DNA filha. Mesmo sendo altamente especfico, o processo de replicao gera erros que, em sua maioria, so corrigidos pela DNA polimerase, porm alguns erros no so detectados. Alm disso, o DNA pode ser danificado ou alterado de uma maneira que afeta sua sequncia de bases.

1. MUTAO Uma mutao uma alterao na sequncia de nucleotdeos de uma molcula de DNA, que pode ocorrer dentro de um gene ou em regies intergnicas. Se uma mutao ocorre em uma regio intergnica, ela provavelmente ser silenciosa e no ter efeito na clula. Entretanto, se uma mutao ocorre em um gene, ela pode alterar o produto gnico e gerar uma alterao observvel no organismo: isso chamado de uma mudana no fentipo. O fentipo de um organismo um conjunto de caractersticas observveis, em contrapartida, o gentipo sua constituio gnica. Um organismo que apresenta o fentipo usual para a espcie chamado tipo selvagem; um organismo cujo fentipo foi alterado por mutao chamado mutante.

163

Figura 9.1: Representao do gene. Fonte: Brown, 1998.

1.1. TIPOS DE MUTAES 1.1.1. MUTAO NA SEQUNCIA DE NUCLEOTDEOS DO DNA 1.1.1.1. MUTAO PONTUAL

Trata-se da substituio de um nucleotdeo por outro. Ela pode causar a substituio de um aminocido por outro na sequncia polipeptdica. Pode ainda ser classificada como mutao pontual de transio, se a substituio for de uma
164

purina e/ou pirimidina por outra (Adenina Guanina; Guanina Adenina; Timina Citosina; Citosina Timina), ou mutao pontual de transverso, se a alterao for de uma purina para uma pirimidina ou vice-versa.

1.1.1.2.

MUTAO POR INSERO OU DELEO

Mutaes graves envolvem a insero ou deleo de um par de nucleotdeos ou mesmo de grandes trechos de DNA. Estas so conhecidas como mutao por "deslocamento", uma vez que elas fazem que o DNA seja lido incorretamente. Esse tipo de mutao geralmente letal porque resulta na sntese de protena completamente diferente.

1.1.1.3.

MUTAO POR INVERSO

Esse tipo de mutao ocorre pela exciso de uma parte da dupla hlice seguida de sua reinsero na mesma posio, mas em orientao inversa. 1.2. MUTAO EM UM GENE Seja pontual, de insero, deleo ou inverso, uma mutao ser silenciosa, se ocorrer em uma regio intergncia. Mas, quando ocorre em uma sequncia codificante do DNA, pode gerar diferentes consequncias: 1.2.1. MUTAO SILENCIOSA Ocorrer quando a mutao pontual se der no nucleotdeo da terceira posio de um cdon que, devido redundncia do cdigo gentico, dificilmente ir alterar o aminocido codificado no local da mutao.

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1.2.2. MUTAO DE SENTIDO TROCADO Trata-se tambm de uma mutao pontual, porm com a alterao do aminocido codificado, por ocorrer principalmente no primeiro ou segundo nucleotdeo de um cdon. Se a mutao afetar um aminocido essencial para a estrutura ou funo da protena, esta ser inativada, levando a um fentipo mutante. 1.2.3. MUTAO SEM SENTIDO Essa uma mutao de ponto que altera o cdon original para um cdon finalizador, resultando em um gene que codifica um polipeptdeo incompleto. Na maioria dos casos, a mutao altera a atividade da protena, resultando em um fentipo mutante. 1.2.4. MUDANA NA MATRIZ DE LEITURA Ocorre pela insero ou deleo de bases que levam leitura incorreta dos cdons adiante da mutao, produzindo, geralmente, um fentipo mutante.

1.3. AGENTES MUTAGNICOS Danos causados ao DNA por agentes fsicos e qumicos podem ser classificados em quatro tipos: I. Alterao de uma nica base (por exemplo: pela desaminao da adenina em hipoxantina ou desaminao da citosina em uracil); II. Alterao de duas bases (por exemplo: luz UV que pode causar a dimerizao de pirimidinas adjacentes); III. Ruptura dos filamentos de DNA (por exemplo: na oxidao por radicais livres); IV. Ligao cruzada (por exemplo: entre molculas de DNA e protenas, como as histonas). Mutaes podem tambm resultar de meios artificiais, como as causadas por radiaes ionizantes, como raios X ou gama. Quanto maior a dosagem, maior a
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probabilidade de ocorrer uma mutao gentica. Os raios csmicos e outras radiaes podem causar leses diretas no DNA, como modificao das bases, ou ruptura dos filamentos e, indiretamente, induzindo a produo de ons superxidos. O DNA sofre a ao de agentes qumicos produzidos pela prpria clula. Calcula-se que os ons H+ e a alterao trmica sejam responsveis pela perda de aproximadamente 10000 bases pricas por dia, em cada clula do organismo humano. Entretanto, para proteger seu DNA entre outras molculas, as clulas desenvolveram vrios sistemas de proteo. Os ons superxidos, por exemplo, so inativados pela ao da superxido dismutase. Os ons H+ so neutralizados pelos reguladores cido-base, enquanto que as oxidaes intracelulares so reduzidas pela ao do NADPH2, glutation e pela vitamina E. A presena do pigmento melanina nas clulas da epiderme constitui em um mecanismo de defesa contra os raios ultravioleta, capazes de danificar a estrutura do DNA. Certas substncias conhecidas como agentes qumicos mutagnicos que incluem agentes alquilantes tais como os compostos do tipo ClCH2CH2N(R)CH2CH2Cl (onde R o radical alquila), um "gs mostarda" nitrogenado usado durante a guerra, pode reagir nitrognio das bases do DNA. O cido nitroso, HNO2, remove grupos amina (transformando, por exemplo, citidina em uridina). Molculas com estruturas semelhantes s das bases, como 5-bromouracila, um anlogo sinttico da timina, podem tornar-se parte da molcula do DNA, mas no formaro pontes de hidrognio da maneira como o fazem as bases que esto sendo substitudas. Uma doena dita de origem gentica pode resultar da alterao na sequncia de aminocidos de uma protena, decorrente de uma mutao no DNA. O erro quando hereditrio transmitido de pais para filhos. Doenas moleculares tendem a aparecer em grupos raciais particulares, por causa dos casamentos entre pessoas do mesmo grupo. Na anemia falciforme, que ocorre principalmente entre os negros, ocorre uma mutao pontual pela substituio da timina pela adenina, que gera a substituio do cido glutmico pela valina,

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num certo ponto da traduo. Curiosamente, portadores de anemia falciforme so imunes malria, doena que aflige os pases subdesenvolvidos.

2. MECANISMO DE REPARO

A manuteno da integridade da informao da molcula de DNA de extrema importncia para a sobrevivncia de um organismo em particular, bem como para a sobrevivncia da espcie. O reparo do DNA realizado de modo geral em duas fases: a primeira, especfica para cada tipo de mutao, consiste na identificao da mutao e da remoo por meio de endonucleases do seguimento alterado; na segunda fase, o seguimento removido substitudo pela sequncia correta de nucleotdeos. O reparo por exciso de bases envolve enzimas que so capazes de reconhecer danos comuns, a exemplo da desaminao (remoo do grupo -NH2) da citosina, que ocorre espontaneamente na presena de gua, gerando uma uracila. Enzimas denominadas uracila DNA glicosilases removem a uracila presente na molcula de DNA clivando a ligao glicosdica da base com o acar, resultando em um stio apurnico. Posteriormente, uma endonuclease corta o polinucleotdeo adjacente posio danificada, uma fosfodiesterase remove o nucleotdeo sem base, uma DNA polimerase preenche o espao e por fim a DNA ligase une o filamento reparado.

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Figura 9.2: Reparo por exciso de base. Fonte: Brown, 1998.

Por outro lado, o reparo por exciso de nucleotdeos mais comum entre a maioria dos organismos, sendo iniciado por uma enzima capaz de originar quebras unifilamentares na molcula de DNA. Em seguida, O seguimento contendo o nucleotdeo danificado removido, juntamente com algumas bases adjacentes. O espao vazio preenchido por uma DNA polimerase, sendo o reparo concludo pela ao da DNA ligase.

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Figura 9.3: Reparo por exciso de nucleotdeo. Fonte: Brown, 1998.

Durante o processo de replicao do DNA, ocorre um mecanismo de reparo de mau pareamento das bases, que ir identificar e corrigir o erro na fita recmsintetizada, e no no filamento parental.

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