ESTRUCTURA EXTERNA DEL CROMOSOMA EUCARIOTICO

Dr. Misael Guevara P.

ESTRUCTURA EXTERNA
Forma, tamao y nmero cromosmico. Forma.- Observada en profase y metafase, se aprecia constituido por dos cromatidios (enrollamiento plectonmico ). Metacntrico Submetacntrico Subtelocntrico o acrocntrico Telocntrico,confirmaron su existencia Gimenez-Martn et al. (1965), Comings y Okada.

TAMAO
Durante la metafase mittica, clasificndose en largos y cortos (Swanson, 1960; White, 1973). Cromosomas largos (10 y 20 ): Monocotiledneas.

Trillium 30 , Lillium, Allium, Tradeschantia, Ortpteros y Anfibios.

Cromosomas cortos 3-5 : Dicotiledneas, la mayora de los animales, el hombre. Microcromosomas, presentes en algunas aves y reptiles.

Vicia faba

Homo sapiens sapiens

NUMERO
La mayora de las especies se caracterizan por tener clulas diplontes (2n) y diplohaplontes (n). En los animales el nmero es variado, hay organismos como Parascaris univalens, n=1y Parascaris equorum n= 2, que tienen est nmero en su lnea germinal, mientras que en la somtica presentan diferente nmero 2n= 60. En la hormiga australiana Myrmecia pilosula, presenta un solo cromosoma en los machos (haploide) y en las hembras dos (diploide). En la mayora de Lepidpteros como Lysandra atlntica, el nmero haploide n= 217-233.

EL CARIOTIPO
Complemento cromosmico (forma, nmero, tamao). Ordenamiento de los pares de homlogos en relacin a su tamao y forma. La representacin grfica simplificada del cariotipo constituye el idiograma
Idiograma con bandas G

HERRAMIENTAS
Valores de longitud relativa.- Relacin entre la longitud del cromosoma y la longitud del complemento haploide. ndice centromrico.- Longitud del brazo corto y la longitud total del mismo. Telocntrico.- ic = 0. Metacntrico.- ic = 0.5 Indice de brazo.- Relacin entre las longitudes de los brazos corto y largo del cromosoma. Telocntrico = 0 Metacntrico = 1

BANDEO CROMOSOMICO
Hasta 1968 las tcnicas citolgicas permitan detectar sobre los cromosomas metafsicos, las constricciones primarias (centrmero) y, en ocasiones, la secundaria. El primer paso en la diferenciacin de los cromosomas por bandeo transversal de los cromatidios se debi a la tcnica de fluorescencia, utilizando la mostaza de quinacrina y derivados.

Cariotipo de un hombre normal bandas G

QFG: Bandas Q por fluorecencia, usando quinacrina. GTC: Bandas G, por tratamiento enzimtico con tripsinma utilizando Giemsa. RFA: Bandas R por fluorecencia usando naranja de acridina. RHG: Bandas R, mediante desnaturalizacin trmica utilizando Giemsa. THG: Bandas T por desnaturalizacin trmica empleando Giemsa. CBG:Bandas C por hidrxido de bario, utilizando Giemsa.

TECNICAS DE BANDEO

Bandas Q,G,C,R,T y Feulgen

Tcnica de Fish de Aegilops speltoides

Translocaciones con bandas C

SIGNIFICADO DE LAS BANDAS

Bandas C.- Heterocromatina constitutiva (sin genes). Bandas G+ y Q+.- Ricas en A = T (20% de los genes humanos), sin genes constitucionales (house keeping genes). Bandas R.- genes constitucionales (house keeping genes). Las islas CpG, asociadas con el 50% de genes humanos, se pueden usar como marcadores cromosmicas usando las zonas de reconocimiento de las endonucleasas de restriccin sensibles a metilacin y son utilizadas en las tcnicas de FISH (pintado de cromosomas).

Los isocoros de BERNARDI (segmentos largos de ADN homogneos que por su composicin pueden subdividirse en un nmero pequeo de familias caracterizadas por su contenido GG). En los vertebrados los isocoros de sangre caliente se presentan entre 30% a 60%, se identificaron dos familias (L1y L2) de bajo contenido en GC, representan un 62% del genomio y tres ricas en GC (H1, H2 y H)( 22%, 9%, 3) respectivamente del genoma. En relacin con las bandas cromosmicas, se ha demostrado que los isocoros pobres en GC estn localizados en las bandas G, mientras que los ricos en GC estn localizados en las bandas R y en las bandas T.

AUTOMATIZACIN DEL ANLISIS GENTICO

El cariotipado automtico implica: Captura de la imagen.- en pixeles (valor de intensidad) se almacenan en el CPU (datos para el anlisis). Segmentacin.- Aislamiento de los valores del cromosoma respecto a su entorno. Medicin.- Se realiza aplicando formulas matemticas al conjunto de pixeles. Clasificacin.- Se hace aplicando un tratamiento estadstico. Modelo.- Interpretacin de la imagen digitalizada.

CITOGENETICA DE FLUJO
Permite separar y purificar cromosomas especficas en pequeas cantidades (Gray, 1989). El anlisis en cromosomas humanos utiliza dos fluorocromos Hoechst 33258 con especifidad AT y cromicina con especificidad en GC (Gray et.al.1979). Los cromosomas con la doble tincin pueden ser separados por su contenido de ADN y por la proporcin de sus bases. Esto puede servir para construir bibliotecas de ADN especficos de un cromosoma determinado, o para la tcnica de FISH.

PINTADO CROMOSOMICO

ELECTROFORESIS
Cariotipado electrofortico.- Utilizando electroforesis en gel en campo pulsado (PFGE) (separa cromosomas completos en organismos unicelulares) p.e Sacharomyces cerevisae. As como la electroforesis convencional en gel de agarosa, permite separar hasta un lmite superior de 20 Kb, la PFGE, puede alcanzar lmites de hasta 6 a 12 Mb (megabases), incluyendo por tanto, el tamao de los cromosomas de organismos unicelulares como algunos hongos y protozoarios.

Secuenciade pasosparala Electroforesis

HIBRIDACIN IN SITU
Tcnicas de hibridacin in situ (ISH) de cidos nucleicos introducidas por Ritosa y Spiegelman (1965), Gall y Pardue (!969), sirven para localizar sobre los cromosomas la informacin correspondiente en ADN o ARN; utilizadas como sondas marcadoras radioactivamente. Posteriormente el marcaje radioactivo de la sonda fue sustituido por un marcaje no radioactivo como biotina y la bigoxigenina, dando lugar a la hibridacin in situ con fluorescencia (FISH).

ESTRUCTURA INTERNA DEL CROMOSOMA EUCARIOTICO

DIFERENCIACIONES ESTRUCTURALES
Diferenciacin lateral.- En citologa clsica el cromonema se define como la fibra espiral izada que constituye el cromosoma telofsico o anafsico tardo de la mitosis y considera tres postulados: 1. El cromonema se transforma en el armazn o estructura reticular del nucleo. 2. Hay una identidad individual entre las fibras cromticas de la profase y las de la telofase anterior. 3. Se produce una divisin longitudinal de la fibra durante la profase (Wilson, 1925). Postulados que hoy han sido enriquecidos.

Con referencia a la diferenciacin lateral se plantea lo siguiente: Teoria monofibrilar, supone que el cromatidio es la ultima unidad indivisible del cromosoma. Teoria polifibrilar.- Supone que el cromatidio est constituido por dos subcromatidios y estos a su vez por medios subcromatidios (Bajer, 1965; Gimenez- Martin et al), 1963. La citologa molecular, asi como la microscopia electrnica demostraron la teora monofibrilar (Callan, 1967; Coming and Okada, 1973; Du praw, 1970, entre otros, que es la que se acepta en forma universal.

DIFERENCIACIN LONGITUDINAL
Refereido a estructuras distribuidas a lo largo del cromosoma. Telmeros.- denominados as por Muller (1938), se refiere al extremo de los cromosomas, sellndolos. Las ideas iniciales de Muller y Herkowitz, acerca de lo indispensable de stos para la estabilidad cromosmica fue corroborada por estudios realizados por Roberts (1975) en delecciones del cromosoma X de Drosophila melanogaster.

ESTRUCTURA MOLECULAR DE LOS TELMEROS

Los telmeros son complejos de ADN terminal y protenas, necesarios para la estabilidad cromosmica. Evitan la unin de los extremos cromosmicos, as como que sean atacados por exonucleasas. Johnson et al (1984), defini al telmero como cada uno de los trminos de una molcula lineal de ADN celular necesaria para la replicacin completa de la molcula, seguida por la resolucin y segregacin apropiada de las molculas replicantes.

La secuencia telomrica humana 5CCCTAA3', de la hlice rica en C puede producir una estructura cuadruplexa por el apareamiento de la citosina protonada C:C+ (Ahmed et al; 1994).
ORGANISMOS SECUENCIA REPETIDA (HLICE RICA EN G)

Tetrahymena Paramecium Oxytricha Plasmodium Trypanosoma Dytiostelum Arabidopsis Homo

5TTGGGG3' 5TT(T/G)GGG3' 5TTTTGGG/G3' 5TT(TC)AGGG3' 5TTAGGG3' 5TG1-83' 5TTTAGGG3' 5TTAGGG3'

REPLICACION DEL ADN TELOMRICO

Durante este proceso la hlice rica en G es sintetizada por la telomerasa, sta es una es una ribonucleoproteina cuyo componente de ARN contiene una secuencia complementaria a la de la secuencia repetida telomrica, pudiendo actuar como una terminal transferasa /Blackburn, 1992; Lee et al, 1993, Morin, 1989).

CROMMEROS
Se definen como partculas discretas de cromatina ordenadas linealmente a lo largo del cromosoma (Wilson, 1925). En algunas especies se presenta un patrn cromomrico paquitnico caracterstico. Adquieren nombres especficos `por la ubicacincrommeros centromricos, en los cromosomas politnicos se denominan bandas y cromiolos en los plumulados.

CENTRMERO
La constriccin primaria o centrmero, es la regin que se asocia a las fibras del huso en la mitosis y meiosis. En esta zona el cinetocoro es la zona especfica del centrmero que se asocia con los micotbulos, aparece en el microscopio como una constriccin acromtica (heteropicnosis negativa).

TIPOS DE CENTRMEROS
Centrmero localizado .- Cinetocoro en una sola posicin. Centrmero difuso.-Cuando las fibras del huso se puede asociar a toda extensin cromosmica (en plantas del gnero Luzula, y algunas algas y hongos. Cromosomas holocinticos.- mltiples centrmeros. Cromosomas policntricos.- mltiples centrmeros, uno al lado del otro Ascaris megalocephala.

Lagowski y col (1973) en Oncopeltus fasciatus, encontraron secuencias de ADN repetitivo de secuencia corta y distribuidas a lo largo de los cromosomas con centrmeros difusos. Los cromosomas pueden ser: Monocntricos Dicntricos.- Consecuencia de una translocacin recproca. Como consecuencia de la rotura cromosmica, misdivisin: Telocntricos. Isocromosomas. Univalentes en anillo. Neocentrmero.

CROMOSOMAS ARTIFICIALES.
Conocidos y aislados los fragmentos de ADN que constituyen los centrmeros y los telmeros, se han podido construir los cromosomas artificiales., Murray y Szostak (1983, 1985b), usando un plasmidio, un marcador de ADN centromrico y Saccharomyces. La tcnica ha permitido construir bibliotecas de ADN de gran tamao en diversos organismos.

ORGANIZADOR NUCLEOLAR
Algunos cromosomas, presentan adems constriccin secundaria conocida como regin organizadora nucleolar (NOR), Mc Clinctock 1934.

Contribuye activamente a la formacin de nucleolo, y es heteropicntica negativa. De ubicacin subterminal en el brazo correspondiente, lo que origina un fragmento conocido como SAT.

En el hombre los cromosomas 13,14,25,21 y 22 son organizadores nucleolares.

Los genes codifican ADN ribosomal (ADNr), este varia de un organismo para otro. En eucariontes forman nichos Clusters (Ritossa) y Spiegelman, 1965). Entre las copias sucesivas se presentan zonas espaciadoras que no se replican y que constituyen elementos reguladores.

Metafase mittica de un varn con bandas G

GENES DE HISTONAS DE LA MOSCA DE LA FRUTA

COMPETENCIA NUCLEOLAR
El nucleolo, fue analizado con mtodos de tincin argntica diferencial en animales(Goodspasture and Bloom, 1975; y en plantas (Hyzume et al., 1980).

Nucleolos en Allium cepa

Coloracin argntica

Se define por competencia nucleolar al hecho que no todos los nucleolos son funcionalmente activos, la expresin citolgica dela competencia es la anfiplastia que fue visualizada cistolgicamente en hbridos interespecficos.

ANFIPLASTIA
El procedimiento consiste en: Conocer cuantos NORs activos estn presentes en las clulas e identificar los cromosomas SAT (Coloracin argntica y bandeo C). El anlisis se realiza en los alopoliploides o en los hbridos inter especficos. La tcnica resulta til para analizar la potencialidad nucleolar. (Lacadena et al, 1988; Giraldez et al, 1979).

Especie

Genomio A B D R HV E

Cromosoma SAT 1A, 5A 1B, 6B 5D, (7D) 1R 5HV , 6HV 5E, 6E

Triticum monococcum Aegilops speltoides Aegilops squarrosa Secale cereale Hordeum vulgare Agropyron elongatum

Aegilops umbellulata

IU, 5U

Cromosomas SAT en Triticum portadores de NOR

Bienvenidas las preguntas