Mutagnesis

En gentica se denomina mutagnesis a la produccin de mutaciones sobre ADN, clonado o no. De realizarse in vitro, dicha alteracin puede realizarse al azar (mutagnesis al azar), sobre cualquier secuencia, o bien de forma dirigida (mutagnesis dirigida) sobre una secuencia conocida y en la posicin de inters. En el caso de realizarse in vivo, sobre organismos y no sobre ADN clonado por tanto, se realiza a gran escala y sin conocimiento de secuencia, empleando para ello sustancias denominadas mutgenos. Mutagnesis es aquella modificacin del material gentico que resulta estable y transmisible a las clulas hijas que surgen de la mitosis 1 . Las lesiones generadas por estos agentes mutagnicos pueden resultar en modificaciones de las caractersticas hereditarias o la inactivacin del ADN. Cuando el ADN afectado corresponde a clulas de la lnea germinal se relacionan con la aparicin de enfermedades hereditarias, mientras que las mutaciones que se dan en las clulas somaticas estn relacionadas con enfermedades degenerativas y procesos carcinognicos 2 . La mutagnesis tiene como objetivo analizar las mutaciones inducidas por agentes fsicos, qumicos y biolgicos, analizar sus interacciones y mecanismos de accin 3 . La razn para aislar y caracterizar una mutacin es poder saber sus consecuencias, es decir su fenotipo. En otras palabras las propiedades de una funcin normal puede ser aprendida por medio de las consecuencias de la perturbacin o la eliminacin de un solo gen o un elemento gentico 4 Los mutgenos segn lo establecido en 1983 por la comisin internacin para la proteccin contra mutgenos y carcingenos, son aquellos agentes que tienen afinidad para interactuar con el ADN, es decir agentes que ocasionan dao al material gentico y componentes asociados en dosis subtxicas 3 .
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1 Historia 2 Tipos de mutagnesis 3 Agentes mutagnicos 4 Referencias

Historia [editar]
Las investigaciones sobre mutaciones se iniciaron en 1927 con los trabajos de Mller acerca de los efectos de los rayos X sobre Drosophila melanogaster. Posteriormente, fueron observados los efectos mutagnicos de los rayos X sobre las plantas, as como la mutagenicidad de la luz ultravioleta. No

obstante, la primera evidencia inequvoca de un caso de mutagnesis qumica se da en el ao 1942, cuando Auerbach y Robson demostraron los efectos txicos del gas mostaza sobre Drosophila 1 . El desarrollo ocurrido en el rea de Gentica molecular a partir de los trabajos de Watson y Crick, donde el 1953 elucidaron la estructura tridimensional del ADN, el cdigo gentico y la sntesis de protenas, permitieron investigar acerca de los mecanismos de la mutagensis. Entonces se entendi que un simple cambio de una base podra dar lugar a la aparicin de un nuevo fenotipo y, por ello, se comenz a investigar intensamente sobre los efectos de los productos qumicos en el ADN. Hacia finales de la dcada de los sesenta se tiene el convencimiento de que el ser humano est expuesto a un gran nmero de compuestos qumicos, que pueden tener un efecto mutagnico, que pueden ser un peligro para la salud y la de los descendientes 1 . Ames en 1979 introdujo el ensayo de mutagenicidad en Salmonella typhimurium, e identific varios contaminantes qumicos capaces de causar mutaciones en bacterias y cncer en mamferos. Finalmente se vio que aparte de los agente fsicos y qumicos, tambin los agentes biolgicos como virus, bacterias y parsitos generan mutgenos cuando ocasionan infecciones crnicas 3 . Principalmente fueron dos factores los que impulsaron el rpido desarrollo de la mutagnesis en la dcada de los setenta: Primero, disponer de bacterias genticamente definidas con mutaciones en genes particulares, y segundo, el empleo de sistemas de activacin metablica in vitro, que permiti la obtencin de metabolitos electroflicos reactivos con el ADN 1 . La mutagnesis ha sido usada en diferentes campos de las ciencias, los bioqumicos han usado las mutaciones para probar la relacin entre la estructura y actividad de las protenas, bilogos celulares usan este medio para definir el rol de protenas particulares y el ensamblaje de la protena en la clula, bilogos del desarrollo para determinar la lgica y el orden particular de eventos moleculares durante la diferenciacin y morfognesis, y neurobilogos para entender la manera en que la red neural es formada y cuales son sus funciones 4 .

Tipos de mutagnesis [editar]

La mutgenesis se puede dividir en dos tipos principalmente, al azar o dirigida.

tem de lista de vietas Mutagnesis aleatoria: Son mutaciones puntuales introducidas en posiciones aleatorias en un gen de inters, tpicamente a travs de PCR utilizando una polimerasa de ADN propensa a errores con agentes mutagnicos5 .

tem de lista de vietas Mutagnesis dirigida: Mtodo de eleccin para la alteracin de un gen o secuencia de vectores en un lugar determinado, las mutaciones puntuales, inserciones o deleciones

se introducen con la incorporacin primers que contienen la modificacin deseada con una ADN polimerada en una reaccin de amplificacin5 .

Agentes mutagnicos [editar]

Radiaciones Las investigaciones sobre las radiaciones han tomado la atencin de los cientficos desde fines del siglo XIX. La primera evidencia de que un agente externo poda aumentar el nmero de mutaciones fue en 1927 por Hermann Mller, quien demostr los efectos mutagnicos de los rayos X en la mosca de la fruta (Drosophila melanogaster). Todas las radiaciones pueden ser agentes mutagnicos con tal de que posean energa suficiente para entrar en contacto con el ADN. Los rayos csmicos que llegan del espacio, formados por una mezcla de protones y de fotones de muy alta energa, son responsables de muchas mutaciones de las que denominamos espontneas. Tanto la luz ultravioleta (UV) como las radiaciones ionizantes se han utilizado en estudios de mutagnesis en bacterias; aunque los mecanismos de mutagnesis son bastante diferentes para cada tipo de radiacin. Uno de los agentes mutagnicos ms efectivos en bacterias es la radiacin UV de longitud de onda corta. La longitud de onda efectiva para la mutagnesis est comprendida entre los 200 y 300 nm. El mecanismo ms importante de la accin de la luz UV es la formacin de dmeros (timina-timina; timina-citosina; citosinacitosina) entre pirimidinas adyacentes, lo que incrementa enormemente la probabilidad de que durante la replicacin, la polimerasa de ADN inserte un nucletido incorrecto 6 . Las radiaciones ionizantes son formas de radiacin ms potente, e incluyen rayos de longitud de onda corta, como los rayos X, emisiones de elementos radioactivos, y rayos . Estas radiaciones causan la ionizacin del agua y de otras sustancias; producindose indirectamente efectos mutagnicos debido a esta ionizacin. Entre los derivados qumicos formados por la radiacin ionizante se encuentran los radicales libres, siendo el ms importante el radical hidroxilo (OH). Los radicales libres reaccionan en la clula con macromolculas, como el ADN, y las alteran produciendo rupturas que dan lugar a rearreglos cromosmicos6 . La tasa de mutaciones inducidas depende de la dosis de y de la frecuencia de aplicacin. Es decir, el efecto de un mutgeno es mucho ms perjudicial si una misma dosis de radiacin alta es administrada todo en una sola vez que si se administra a lo largo del tiempo radiaciones bajas. Esto es debido a que, en el primer caso, los mecanismos de reparacin del ADN se encuentran saturados. Igualmente, los tejidos irradiados son ms o menos sensibles segn su tasa de replicacin que tengan6 . Agentes qumicos La genetista escocesa Charlotte Auerbach fue la primera en demostrar, en la dcada de 1960, el peligro que representaba la utilizacin de un agente qumico (el gas mostaza) para las personas, debido a su

fuerte actividad mutagnica. Hoy en da, se conocen varios productos qumicos que son mutagnicos, clasificndose segn su modo de accin en: 1. Anlogos de bases: Se incorporan en el ADN (durante la replicacin) en lugar de las bases correspondientes, debido a su alta similaridad. Cuando uno de estos anlogos de bases se incorpora en el ADN, la replicacin sigue normalmente, aunque a veces ocurren errores de lectura que resultan en la incorporacin de bases errneas. Algunos ejemplos de estos agentes son, la 6-amino purina que se incorpora en el ADN en lugar de las bases oficiales (A, T, G y C), lo que provoca transversiones o transiciones en las futuras replicaciones del ADN6 . 2. Agentes intercalantes: Son molculas planas que se insertan entre dos pares de bases del ADN, separndolas entre s. Durante la replicacin, esta conformacin anormal puede conducir a microinserciones o microdelecciones, originando mutaciones por corrimiento de lectura. Ejemplos de estos agentes intercalantes son el naranja de acridina, el bromuro de etidio, la proflavina y el 4,5',8-trimetilpsoraleno (TMP)6 . 3. Agentes que reaccionan con el ADN: Son agentes qumicos que reaccionan directamente con el ADN que no se est replicando, ocasionando cambios qumicos en las bases al momento de la replicacin. Entre ellos se encuentra el cido nitroso (HNO2), la hidroxilamina (NH2OH) y los agentes alquilantes6 .