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- El aislamiento es simple en fase septicmica. Muestras de hgado, bazo, corazn, sangre del corazn, ovario, saco de la yema, sinovia, ojo y cerebro (tortcolis), son requeridos para sembrar en medios selectivos y no selectivos. - En siembra de mdula sea se puede obtener cultivos puros. - Aislamiento desde intestino requieren medios selectivos con sulfapiridina o novobiocina, los ciegos son sitios dependientes para aislamiento. - Tratamientos con drogas salmonellas sensitivas, puede interferir con aislamiento en casos clnicos as como reactoras serolgicas. Identificacin: - Colonias pequeas, lisas, traslcidas a las 24 horas en medios slidos. En TSI, superficie roja, fondo amarillo, ennegrecido por H2S. En LI agar, prpura en la superficie o rojo en el fondo o neutro, ennegrecido por cido sulfhdrico. - No fermenta: lactosa, sucrosa, maltosa, dulcitol. - Fermenta con gas: dextrosa, manitol. - No produce indol, no hidrolisa urea, aglutina con antisuero D. - S. pullorum que fermenta maltosa hay que realizar prueba descarboxilacin ornitina. - Pruebas de determinacin rpida disponibles comercialmente como: ELISA, DNA, inmunodifusin, anticuerpos monoclonales, inmunofluorescencia, bioluminisencia y otras aplicaciones de biotecnologa moderna establecen sensibilidad y especificidad en menor tiempo. Histopatologa: - Hiperemia heptica, hemorragias, degeneracin focal y necrosis, acumulacin de leucocitos endoteliales que reemplazan a las clulas hepticas necrticas o degeneradas. Necrosis focal del miocardio.
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Diagnstico diferencial: - Tifoidea aviar, es ms grave en aves adultas. - Otras salmonellas, no tan graves como Pullorosis. - Aspergillosis, pulmn con granulomas. - MS, inflamacin en articulaciones. - Lesiones oculares y corazn, producidas por otros grmenes como coliformes, estafilococos, micrococos, S. paratficas. TRATAMIENTO: - Ningn frmaco o combinacin de los mismos puede eliminar la infeccin. - Algunos son eficaces para reducir la mortalidad: sulfonamidas, nitrofuranos (puede reducir el % de reactoras positivas por aglutinacin), cloranfenicol, clortetraciclina , kanamicina, colistina, neomicina, aminoglucsidos, apramicina, quinolonas. PREVENCIN Y CONTROL: - Parvadas libres, existe reglamento oficial para control de Pullorosis. - Portadoras, pruebas de aglutinacin en placa con sangre total, en placa con suero, tubo con suero. - Microaglutinacin, microantiglobulina. - Erradicacin, AAPA, 1965. - Bioseguridad para conservar lotes libres de pullorosis. - Reporte obligatorio de todos los diagnsticos, investigaciones epidemiolgicas, cuarentena.
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TABLA No. 1 Reacciones de cultivos de salmonella sobre medios de identificacin adicional. MEDIOS GALLINARUN PULLORUN PARATIFICAS ARIZONA _______________________________________________________________________________________________________________________________ DEXTROSA + + ++ _______________________________________________________________________________________________________________________________ LACTOSA _______________________________________________________________________________________________________________________________ SUCROSA _______________________________________________________________________________________________________________________________ MANITOL + + + + _______________________________________________________________________________________________________________________________ MALTOSA + + + _______________________________________________________________________________________________________________________________ DULCITOL + +_______________________________________________________________________________________________________________________________ MALONATO -+ _______________________________________________________________________________________________________________________________ UREASA _______________________________________________________________________________________________________________________________ ORNITINA + _______________________________________________________________________________________________________________________________ FLORURO DEK _______________________________________________________________________________________________________________________________ GELATINA (-) _______________________________________________________________________________________________________________________________ LISINA + + _______________________________________________________________________________________________________________________________ BETA GALACTOSIDAE + _______________________________________________________________________________________________________________________________ TARTRATO DE JORDAN + _______________________________________________________________________________________________________________________________ MOTILIDAD ++ _______________________________________________________________________________________________________________________________ INDOL No produce No produce
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- En aves jvenes es latente, desarrollo de Ac es muy pobre, hay estrs al iniciarse postura y bacteria se multiplica rpidamente. - Morbilidad 5-20%, mayor en pollitos que en aves adultas. - Mortalidad variable 10-50%, depende como adquiri enfermedad. SIGNOS: Pollitos y pavipollos: - En nacedoras pollitos muertos o moribundos. - Somnolencia, pobre crecimiento, debilidad, inapetencia. - Adherencia de material blanquecino alrededor de la cloaca rico en uratos por deshidratacin. - Disnea, boqueo, respiracin dificultosa. Aves en crecimiento y adultas: - Disminucin consumo de alimento. - Aves decadas, fiebre, palidez de crestas, aumento de mortalidad. - Barbillas plidas, diarrea verdosa amarillenta, baja de produccin, debilidad, renuentes a moverse. LESIONES: - En casos hiperagudos no se observan cambios macroscpicos.
- Casos agudos, hinchazn, congestin, necrosis focal y agrandamiento del hgado, bazo y riones. - En etapas subagudas o crnicas el hgado es de color caf o bronceado e inflamado. - Focos grisceos en hgado, miocardio, pulmones y molleja. - Pericarditis, peritonitis, ovarios hemorrgicos, deformes, inflamacin catarral de intestinos, msculos de apariencia como cocido por la fiebre. - Pavos: lceras intestinales, corazn, hgado bazo agrandados. - reas de necrosis en el corazn y pulmones de color gris. Histopatologa: - Hepatitis parenquimatosa necrosante. - Miocardio con infartos, reas de necrosis fibrinoide y esclerosis. - Inflamacin y necrosis de varios rganos y tejidos. - Hiperplasia grave del SRE. DIAGNSTICO: - Definitivo requiere de aislamiento e identificacin. - Historia de la parvada, signos, lesiones sugieren diagnstico presuntivo.
42C 24 hrs.
ENRIQUECIMIENTO SECUNDARIO RETARDADO: TRANSFIERA 0.25 ml DE TODOS LOS CALDOS NEGATIVOS A 10 ml DE CALDO DE ENRIQUECIMIENTO FRESCO
37C 24 hrs.
INOCULACIN DE COLONIAS SOSPECHOSA A (TSI) TRIPLE AZCAR HIERRO Y A(LI) HIERRO LISINA AGAR.
37C 24 hrs.
REACCIONES T.S.I. Y L.I. UNO POSITIVO Y OTRO NEGATIVO PARA SALMONELLA REACCIN T.S.I. Y L.I. AMBOS POSITIVOS PARA SALMONELLA REACCIN T.S.I. Y L.I. AMBOS NEGATIVOS PARA SALMONELLA
DESCARTE
NEGATIVO
POSITIVO
DESCARTE
(APP USA)
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- Pruebas serolgicas orientan el diagnstico tentativo. - TA es infeccin sistmica, se puede aislar de casi todos los rganos viscerales. - Hgado, bazo, corazn, pulmones, ovarios, saco vitelino, mdula sea son rganos preferidos para su cultivo. - Para identificar la salmonella se usa mtodos bacteriolgicos y serolgicos. - Cultivos puros se deben inocular en medios especiales. - En TSI origina cultivo rojo con un extremo amarillo con produccin de gas y ennegrecimiento por generacin de sulfato de hidrgeno. Serologa: - Aglutinacin bacteriana. - HA y HA indirecta. - Antiglobulina HA. - En reproductoras se utiliza cepas standar de S. pullorum para prueba en tubo y placa. - Cepas variantes 1, 9, 12 2 de S. pullorum para antgenos polivalentes prueba en placa. - En aves comerciales y reproductoras para prueba en placa con sangre total se utiliza antgeno polivante K. TRATAMIENTO: - Numerosos medicamentos han sido utilizados en la prevencin y teraputica contra TA: sulfas, nitrofuranos y antibiticos como estreptomicina, cloromicetin, clortetraciclina, quinolonas, kanamicina, gentamicina, con problemas de resistencia bacteriana. PREVENCIN Y CONTROL: - Obtenga pollos y pavipollos de fuentes libres de pullorosis y tifoidea aviar. - Granjas deben recibir animales con excelente estado sanitario, desinfectadas, con suficiente vaco sanitario (despobladas), con equi-
po limpio, cama pH alcalino, desinfectada con formalina, cido creslico saponificado. - Alimento granulado minimiza introduccin de bacterias. - Evite introduccin de Salmonella de fuentes externas: aves silvestres, ratas, ratones, conejos, control de insectos, perros, gatos, visitas. - Utilice agua clorinada o potable con sistema de bebederos cerrados (niple). - Diagnstico oportuno, observacin clnica, necropsias, examen bacteriolgico. - Eliminacin adecuada de aves muertas. - Bioseguridad, desinfeccin, higiene y sanidad. - Programas de erradicacin por seleccin de reproductoras libres. Inmunizacin: - Cepa 9-R proporciona proteccin contra desafos de cepa virulenta. - Mejora proteccin si aves son pretratadas con biocarbonato de sodio o carbonato de magnesio 10 minutos antes de vacunacin oral. - La proteccin con 9-R involucra una respuesta celular. - Proteccin contra mortalidad pero no evita infeccin. - Aves vacunadas con 9-R pueden transmitir a travs del huevo y desarrollan anticuerpos que ocasionan reacciones en pruebas contra pullorosis y tifoidea. - Vacunas con protenas de membrana externa de S. gallinarum dan buena proteccin.
TIFOIDEA AVIAR
Salmonella gallinarum, TSI, acidez en el fondo y alcalino en la flauta, produccin cido sulfhdrico.
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- Conjuntivitis, ceguera unilateral debido a la opacidad de la cornea y taco caseoso blanquecino que llena el globo ocular. - Artritis y cojeras unilaterales, depresin, indiferencia e inapetencia. - Irregularidades en los porcentajes de postura y diarreas intermitentes. LESIONES Aves jvenes: - Emaciacin, deshidratacin, yemas coaguladas, hgado congestionado, bazo hemorrgico o focos necrticos, riones congestionados y pericarditis con adherencias. - Enteritis hemorrgica que afecta al duodeno. - Tacos caseosos en ciegos. - Leucopenia heroflica grave. - Panoftalmia purulenta con hiperplasia corneal, afectndose conjuntiva, cornea y pupila. - Perihepatitis fibrinopurulenta. Aves adultas: - Inflamacin y congestin heptica, en bazo y riones. - Enteritis hemorrgica o necrtica, pericarditis, peritonitis - Oviductos con lesiones necrticas e hiperplsicas. - Ovarios con lesiones supurativas y necrticas. - En pavos puede existir padecimiento artrtico. - Ulceras necrticas en intestinos. DIAGNSTICO: - Historia de la parvada, signos clnicos, lesiones son bsicos para diagnstico presuntivo. - El definitivo requiere del aislamiento e identificacin del agente casual. - Aves infectadas excretan en heces al medio ambiente, contaminando cama, agua y alimento. La cama se debe muestrear en forma rutinaria. - En aves se asla la bacteria de rganos internos de aves moribundas o retrasadas. - La bacteria estimula la respuesta de anticuerpos en la sangre, por lo que la serologa es un recurso para identificar aves portadoras. - Hay que muestrear huevos frescos y embrionados para conocer si hay transmisin por esta va. - En estudios de prevalencia el muestreo de cama se realiza por hisopos de arrastre. - El medio de enriquecimiento ms utilizado es el tetrationato suplementado con 10 ml por litro de una solucin de verde brillante al 0.1% (TTVB). - Despus de 5-7 das de incubacin si el enriquecimiento primario es negativo, se puede transferir 0.5 a 1 ml de TTVB fresco e inocularse por 24 horas, esto aumenta la frecuencia de aislamiento en 81%. - Se usa tambin Salmosist, Rappaport, Vassiliadis, etc. con incubacin de 43C x 24-72 horas.
- Los medios slidos selectivos son XLT4, agar verde brillante suplementados con Novobiocina, SS agar, BPLS, Bismuto sulfito sdico 20 mcg (XLT4N y AVBN). - S. enteritidis es muy variable, en una placa de agar se puede aislar colonias lisas y rigurosas, algunas cepas pertenecientes a los fagos 7, 23, 30 autoaglutinan en solucin salina y solucin de acriflavina. - Pruebas bioqumicas las descritas por Cox y Williams, utiliza TSI y LIA y 6 azcares (dextrosa, sucrosa, lactosa, manitol, maltosa, dulcitol) y un medio semislido para motilidad. Con este esquema se puede diferenciar salmonella de otros gneros como Citrobacter, Proteus, Edwarsiella, E. coli, Klebsiella, Pseudomonas, Serratia y Shigella. - Con cultivos positivos al antisuero 1, 9, 12 o monofactor 9, se realizan pruebas de aglutinacin con antisueros flagelares para determinar la especie S. enteritidis aglutina antisuero flagelar g y flagelar m y negativo a los antisueros s,t y q. - Se puede usar anticuerpos monoclonales 1G10 y 4H3, los cuales pueden ser utilizados por medio de aglutinacin en placa, ELISA o flurescencia. - La fagotipificacin, utiliza 10 diferentes fagos que permite identificar 27 fagotipos distintos de S. enteritidis. - Nuevas tcnicas comerciales que permiten tener resultados negativos en 2 das, inmuensayo con enzimas asociadas (ELISA), sondas de ADN radioactivas o colorimtricas y tcnicas de inmunodifusin e inmovilizacin con anticuerpos. - Se est desarrollando pruebas como PCR que tendr un resultado negativo en 1 da o menos. Control de paratifoidea aviar: - Examen bacteriolgico de galpones de crianza antes de iniciar nueva crianza. - Examen bacteriolgico de las reproductoras y sus progenies. - Examen de bacteria de los pollitos al iniciar crianza. - Examen de lote antes del traslado a produccin. - Desinfeccin del huevo frtil. - Control de roedores. - Desecho racional de la cama y control de insectos. - Monitoreo constante de planta de alimentos. - Aditivos alimenticios, cidos orgnicos y probiticos. - Uso de cultivos no definidos de exclusin competitiva. - Vacunacin con bacterias autgenas. - Irradiacin y fosfato trisdico en pollos faenados. - Manejo de incubadora. - Uso de antibacterianos. - Control de trfico. - Educacin y capacitacin de personal. - Bioseguridad. (Dr. Hctor Cervantes Peterson Farms).
PARATIFOIDEA AVIAR
Diarrea acuosa.
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cultivos, se enriquece en caldo peptonado y se siembra en agar almidn dextrosa, agar sangre, MacConkey, gelosa sangre, agar nutritivo. - Tubos de base caldo rojo fenol con 1% de glucosa, lactosa, sucrosa,manitol y maltosa, son inoculados y se incuban por 18-24 horas. - Inoculacin de animales, conejos, hamsters o ratones, mueren 2448 horas. - Inoculacin en barbillas de aves susceptibles. Diagnstico diferencial: - Sobreaguda con envenenamientos, Newcastle. - Aguda y crnica con Coriza infecciosa, Tifoidea, Erisipela, Clamidiosis. TRATAMIENTO: - Debe iniciarse con prontitud, sulfas, antibiticos como estreptomicina, penicilina, oxitetraciclina, novobiocina, cloranfenicol, quinolonas.
PREVENCIN Y CONTROL: - Eliminar reservorios y prevenir acceso a las aves de los vectores o portadores. - No se deben criar diferentes especies de aves juntas. Inmunizacin: - Solo en reas prevalentes. - Vacuna cepa de la Universidad de Clempson (CU) para el agua de bebida, cepa PM-1 y cepa M-9. - Bacterinas comerciales y vacunas y bacterinas locales.
CLERA AVIAR
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SIGNOS: Pollitos (pollos hmedos / pastosos; onfalitis). Olor desagradable, sacos vitelinos decolorados y de consistencia acuosa. Ombligos abiertos, hmedos e inflamados. Peritonitis, infecciones de las articulaciones. La mortalidad se presenta en la primera semana de vida. Mortalidad tarda en embriones. Aves en crecimiento y adultas: E. coli es por lo general agente infeccioso secundario, pero puede convertirse en primario, mortalidad variable y depende de factores desencadenantes. Problemas respiratorios, enteritis, cojeras, inflamacin de las articulaciones. Inflamacin de la cabeza, celulitis, infecciones oculares. Disminucin de produccin de huevos y nacimientos. LESIONES: Onfalitis, pericarditis, perihepatitis, peritonitis, salpinguitis, sinovitis o tenosinovitis, enteritis, coligranuloma, hgado verdoso, necrosis multifocal heptica. DIAGNSTICO: Presuntivo por signos clnicos y lesiones. Aislamiento. Debe sembrarse el material infectado en medios de agar de levine con eosina y azul de metileno ( EMB) e donde las colonias son oscuras y con brillo metlico, agar MacConkey las colonias son rosadas(
lactosa positiva) de 1-2 mm de dimetro, agar Tergitol 7 en donde las colonias son amarillas, agar sangre con colonias blanquecinas de 13 mm. Subcultivos en TSI, en donde la flauta y el fondo son amarillos con produccin de gas, no produce H2S. Diagnstico diferencial: De otras bacterias que causen septicemia, inflamacin fibrinopurulenta de sacos areos, pericardio, articulaciones y otras vsceras, sta incluyen: micoplasmosis, salmonellosis, pasteurellosis, erisipelas, clamidiosis y estafilococosis. Tratamiento: El E. coli puede ser sensible a muchos tipos de antibacterianos: sulfonamidas, espectinomicina, tetraciclinas, nitrofuranos, neomicina, ampicilina, cloranfenicol, quinolonas, gentamicina, estreptomicina. La quimioterapia tiene xito cuando se administra en fase temprana de infeccin. Infecciones crnicas son resistentes a los tratamientos. Infecciones respiratorias son difciles de tratar, debido al aporte inadecuado de sangre a la mucosa. Frecuentemente se presenta resistencia a las drogas con cepas de E. coli.
COLIBACILOSIS
Colisepticemia.
Peritonitis.
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Sinusitis con exudado caseoso, conjuntivitis, edema subcutneo en cara y barbillas, neumona, aerosaculitis. Lesiones microscpicas: En cavidad nasal, senos infraorbitarios y trquea hay desprendimiento, desintegracin e hiperplasia del epitelio mucoso y glandular, edema e hiperemia con infiltracin heterfila en la lmina propia de la membrana mucosa. En el aparato respiratorio inferior se observ bronconeumona catarral aguda con infiltracin de heterfilos. DIAGNSTICO: Presuntivo, en base a la historia de la parvada, signos y lesiones. Exudado de seno o cultivo debe ser inoculado en 2-3 pollos normales por ruta intraseno, si presenta coriza 24-48 horas es prueba diagnstica. Inoculacin en embriones de 5-7 das, va saco de la yema. Aislamiento: tomar 2-3 pollos en estado agudo, cauterizar la piel sobre los ojos , hacer incisin dentro de seno infraorbitario, insertar profundamente torunda de algodn estril en donde los organismos se encuentran puros, rayar caja de agar sangre con torunda y cruzar el cultivo con estafilococo ( nodriza) incubar a 37 C en anaerobiosis, a las 20 horas hay colonias como gotas de roco junto a nodriza. Otras pruebas: aglutinacin en placa, AGP, HI, PCR.
PREVENCIN Y CONTROL: Uso de bacterinas para reducir prdidas econmicas, no eliman enfermedad solo disminuyen severidad., 2 dosis es mejor que una , dan mayor proteccin las inactivadas con timerosal que las inactivadas con formalina, la inoculacin en el muslo es ms efectiva que la aplicada en pechuga, o subcutnea en el cuello., el ttulo mnimo 108 UFC/ml. Bacterinas y exposicin controlada, se utiliza 1 o 2 bacterinas , ms una infeccin con cepa autctona. TRATAMIENTO: Uso de antibiticos en agua de bebida o alimento, seleccionar el antimicrobiano con pruebas de sensidiscos o mnima concentracin inhibitoria. Debe existir en la sangre y en los tejidos niveles altos de concentracin de antibiticos 2 a 4 veces la CMI, para producir respuesta teraputica.
CORIZA INFECCIOSA
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- En pavos, la sinusitis se debe diferenciar de clera aviar, ornitosis, MS. Deficiencia de vitamina A, influenza, criptosporidiosis. DIAGNSTICO: - Presuntivo en basa a la historia, signos clnicos, lesiones. - Definitivo en base a aislamiento e identificacin: hisopos traqueales, exudado de sacos areos, senos infraorbitarios y pulmones en medios de crecimiento, Frey, caldo PPLO o caldo infusin cerebro-corazn suplementado con 10-15% de suero porcino o equino, glucosa, extracto de levadura, cistena, NAD para MS, acetato de talium, penicilina, rojo de fenol. - Los cultivos son incubados en 5-7 das a 37C, se pueden hacer 2 o 3 pases seriados cuando el indicador a cambiado de color. - El cultivo se puede identificar en frotis coloreado por Giemsa para demostrar pequeos organismos cocoides. - Siembra de placas de agar con cultivos positivos a 37C por 5-7 das con atmsfera muy hmeda, las colonias son muy pequeas de 0.1 a 1 mm con el centro elevado. - Se inoculan embriones de pollo de 7 das en saco vitelino con exudado de pollos afectados, el inculo debe ser libre de contaminacin bacteriana, la muerte del embrin se produce entre 5 a 8 das, a veces se necesita pases seriados. - Pruebas serolgicas, aglutinacin (HA) e inhibicin de la hemoaglutinacin (HI), reactores se confirman por aislamiento. ELISA prueba sensitiva y especfica, pero puede ocurrir reacciones no especficas. - Cepas MG de baja virulencia produce pobre respuestas de anticuerpos y aislamiento es difcil. - PCR, prueba rpida y sensitiva, pero requiere de aislamientos puros. PvpA, mgc1 (gapA), genes de lipoprotena, seguido de RFLP. - Estudios de cepas de MG por RFLP Y RAPD (DNA polimrfico amplificado al azar), identifican cepas especficas. - Estudios con Western blots y anticuerpos monoclonales muestran un alto grado de variabilidad en la expresin de antgenos de superficie en cepas de MG. (Clones de MS con hemoaglutinacin negativa son menos virulentos). - Inmunofluorescencia directa, AGP, procedimientos de hibridacin ADN-ADN, pruebas de inhibicin de crecimiento con discos impregnados con suero hiperinmune. - En la prueba de aglutinacin en placa (PAP) se mezcla una gota de suero 0.02 ml y una gota de antgeno teido 0.03 ml, sobre una placa de vidrio, una reaccin positiva aglutina al antgeno en 2 minutos, se
prueba 10% del lote o un mnimo de 300 aves, es prueba sensitiva pero de baja especificidad dando falsos positivos relacionados con el suero en el medio de cultivo o por el uso de vacunas inactivadas. Hispatologa: - Marcado engrosamiento de la membrana mucosa respiratoria con inflamacin de clulas mononucleares e hiperplasia de las glndulas mucosas. - En pulmones hay reas neumnicas y cambios linfofoliculares, tambin lesiones granulomatosas. - En trquea hay exfoliacin de clulas epiteliales ciliadas. - En pollos y pavos cuando se complica con E. coli hay neumona y salpingitis. TRATAMIENTO: - El uso de antimicrobianos reducen la severidad de la enfermedad respiratoria pero no evitan la infeccin. - Se prefieren drogas antimicoplasmicidas: tilosina, tiamulina, quinolonas, MG es sensible a estreptomicina, oxi y clortetraciclinas, eritromicina, lincomicina, espectinomicina. - Existen cepas que son resistentes a los antibiticos, se recomienda realizar antibiogramas antes de iniciar tratamiento. - Tcnicas de inyeccin de antibiticos en embriones, inmersin de huevos con solucin de antibiticos, calentamiento de huevos frtiles, ya no se utilizan. PREVENCIN Y CONTROL: - Adquirir pollos y pavos de reproductoras libres de micoplasmas, conservar lotes libres de infeccin con estricto aislamiento y programas de monitoreo. - Utilizacin de bacterinas que protegen contra aerosaculitis y prdidas de postura. - Vacunas vivas, incluyen cepa F, cepa 6/85 de Intervet y ts-11 de Select Laboratorio. - Cepa F exhibe moderada virulencia para pollos y es virulenta para pavos, coloniza de manera eficiente el tracto respiratorio y ofrece buena proteccin contra la baja de postura. - Las cepas 6/85 y ts-11 son avirulentas, ofrecen buena proteccin contra el desafo.
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DERMATITIS GANGRENOSA
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ENTERITIS NECRTICA
lceras en intestino.