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BILIRRUBINA TOTAL
INDICAO MDICA DO EXAME A determinao da bilirrubina em amostras de sangue til na avaliao de doenas hepatobiliares e hematolgicas que cursam com alterao no metabolismo da bilirrubina. Sua dosagem no lquido amnitico auxilia na avaliao da eritroblastose fetal. PRINCPIO A bilirrubina indireta da amostra desligada da albumina e solubilizada por ao de um acelerador e as bilirrubinas direta e indireta so medidas por formao de azobilirrubina com dicloroanilina diazotada. A cor formada proporcional concentrao de bilirrubina total na amostra. AMOSTRA Preparo do paciente Recomenda-se jejum mnimo de 8 horas. Tipos de amostra Usar soro ou plasma (Heparina, EDTA). Armazenamento e estabilidade da amostra Quando a amostra protegida da luz, o analito estvel 4 dias entre 2 8 C e 3 meses a 20 C negativos. Volume mnimo (Definir o volume mnimo a ser encaminhado para anlise) Volume ideal (Definir o volume ideal a ser encaminhado para anlise) Critrios para rejeio da amostra Presena de hemlise (ver Precaues e Cuidados Especiais). Fazer referncia ao manual ou POP de colheita, separao e distribuio de material. PRODUTO UTILIZADO Bili-T Liquiform, Catlogo 94 Labtest Diagnstica Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 Lagoa Santa, MG, 33400-000 ANVISA - 10009010086

Reagente 1 - Armazenar entre 2 8 C. Contm 2-fenoxietanol 0,8 mmmol/L e surfactante. Reagente 2 - Armazenar entre 2 8 C. Contm cido clordrico 30 mmol/L e dicloroanilina diazotada 1,0 mmol/L. Precaues e cuidados especiais 1. Os cuidados habituais de segurana devem ser aplicados na manipulao do reagente. Fazer referncia ao manual ou POP de segurana. 2. Os reagentes no abertos, quando armazenados nas condies indicadas so estveis at a data de expirao impressa no rtulo. Durante o manuseio, os reagentes esto sujeitos contaminao de natureza qumica e microbiana que podem provocar reduo da estabilidade. O laboratrio deve estabelecer a estabilidade em suas condies operacionais. EQUIPAMENTOS Procedimento manual 1- Banho-maria mantido temperatura constante (37 C). 2- Fotmetro capaz de medir com exatido a absorbncia entre 530 e 550 nm. 3- Pipetas para medir amostras e reagentes. 4- Cronmetro. 5- Calibradores da linha Calibra Labtest. Procedimento automatizado Indicar o nome, modelo e o local onde se encontra o equipamento analtico; fazer referncia ao manual ou POP de procedimentos do mesmo. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para medio dos ensaios. Enumerar as diferenas esperadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados.

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CONTROLE DA QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, nmero de catlogo), instrues de preparo e frequncia da utilizao dos mesmos. Limites de tolerncia Descrever o procedimento para definio dos limites de tolerncia, o sistema adotado para utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante de valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controles e/ou reagentes Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e de reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle da qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao manual ou POP de garantia da qualidade. PROCEDIMENTO Tomar 3 cubetas do fotmetro e proceder como a seguir: BRANCO TESTE Reagente 1 0,8 mL 0,8 mL Amostra --0,05 mL Calibrador ----gua deionizada 0,05 mL --CALIBRADOR 0,8 mL --0,05 mL ---

Homogeneizar e incubar em banho-maria a 37 C durante 5 minutos. O nvel da gua no banho deve ser superior ao nvel dos reagentes nos tubos de ensaio. Determinar somente as absorbncias do teste e calibrador em 546 nm (530 a 550 nm), acertando o zero com gua deionizada. Obtm-se a absorbncia A1. Reagente 2 BRANCO 0,2 mL TESTE 0,2 mL CALIBRADOR 0,2 mL

Homogeneizar e incubar em banho-maria a 37 C durante 5 minutos. Determinar as absorbncias do teste e calibrador em 546 nm (530 a 550 nm), acertando o zero com o branco. Obtm-se a absorbncia A2. A cor estvel por 30 minutos. Procedimento automatizado Fazer referncia ao manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico. Precaues e cuidados especiais 1. Para manusear e descartar reagentes e material biolgico, aplicar as normas estabelecidas de segurana. Fazer referncia ao manual ou POP de segurana. 2. A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. Fazer referncia ao manual ou POP de limpeza e verificao da qualidade da limpeza dos materiais. 3. A gua utilizada no laboratrio deve ter a qualidade adequada a cada aplicao. Assim, para preparar reagentes e usar nas medies, deve ter resistividade 1 megaohm ou condutividade 1 microsiemens e concentrao de silicatos <0,1 mg/L (gua tipo II). Para o enxge da vidraria a gua pode ser do tipo III, com resistividade 0,1 megaohms ou condutividade 10 microsiemens. No enxge final utilizar gua tipo II. Quando a coluna deionizadora est com sua capacidade saturada ocorre a produo de gua alcalina com liberao de vrios ons, silicatos e substncias com grande poder de oxidao ou reduo que deterioram os reagentes em poucos dias ou mesmo horas, alterando os resultados de modo imprevisvel. Assim, fundamental estabelecer um programa de controle da qualidade da gua. Fazer referncia ao manual ou POP de gua reagente. 4. As bilirrubinas conjugada (direta) e no conjugada (indireta) so oxidadas por ao da luz branca ou ultravioleta. Portanto, as amostras de sangue devem ser protegidas da exposio direta luz artificial ou solar logo aps a coleta. 5. A presena de hemoglobina (amostra hemolisada), em qualquer concentrao na amostra de indivduo adulto, interfere no resultado do teste. Hemlise discreta ( 50 mg/dL) no interfere significativamente em amostras de recm-nascidos..

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A leitura A1 do Teste e do Calibrador deve ser corrigida para o volume final da reao obtendo-se A 1cor. Teste A1cor = Teste A1 x 0,81 Calibrador A1cor = Calibrador A1 x 0,81 Para obter a absorbncia final subtrair o valor A1cor da absorbncia A2 do Teste e do Calibrador: Absorbncia do Teste = A2 - A1cor Absorbncia do Calibrador = A2 - A1cor Bilirrubina total = Absorbncia do Teste ------------------------------------- x CCal mg/dL Absorbncia do Calibrador

CCal: concentrao do calibrador RESULTADOS Unidade de medida mg/dL Converso de mg/dL para Unidade SI: mol/L = mg/dL x 17,1 Valores de referncia Soro: Bilirrubina total - at 1,2 mg/dL Bilirrubina direta - at 0,4 mg/dL Valores crticos Soro: > 15,0 mg/dL em recm-nascidos a termo. 10 - 15 mg/dL em recm-nascidos pr-termo. Incluir o procedimento a ser adotado diante de um resultado crtico . LIMITAES DO PROCEDIMENTO Linearidade O resultado da medio linear at 30 mg/dL. Para valores maiores que 30 mg/dL, diluir a amostra com NaCl 150 mmol/L (0,85%), realizar nova medio e multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluio. Sugerimos a verificao da linearidade metodolgica e fotomtrica no mnimo semestralmente utilizando amostras com valores at 30 mg/dL. Indicar o procedimento de diluio utilizado no laboratrio. Interferncias 1- Concentraes de triglicrides at 1500 mg/dL no produzem interferncias significativas. 2- A presena de hemoglobina (amostra hemolisada), em qualquer concentrao na amostra de indivduo adulto, interfere no resultado do teste. Hemlise discreta ( 50 mg/dL) no interfere significativamente em amostras de recm-nascidos. 3- Para uma reviso das fontes fisiopatolgicas e medicamentosas de interferncia nos resultados e na metodologia sugere-se consultar www.fxol.org/. SIGNIFICADO CLNICO Algumas doenas adquiridas e hereditrias e diversos medicamentos so capazes de afetar uma ou mais etapas envolvidas na produo, captao, armazenamento, metabolismo e excreo da bilirrubina. Dependendo do distrbio, a bilirrubina no-conjugada (indireta), a conjugada (direta) ou ambas (total), so as principais contribuintes da hiperbilirrubinemia. A forma mais comum de aumento da bilirrubina indireta aquela vista em recm-nascidos e referida como ictercia fisiolgica. Este aumento causado por uma produo aumentada de bilirrubina como resultado da hemlise das hemcias e da maturao incompleta dos mecanismos do metabolismo e excreo da bilirrubina. Em 5% dos neonatos, os valores de bilirrubina no-conjugada so maiores que 15 mg/dL e podem desencadear o quadro de encefalopatia bilirrubnica ( Kernicterus). A destruio prematura das hemcias anemia hemoltica e a eritropoiese ineficaz so importantes causas de hiperbilirrubinemia, com predomnio de bilirrubina no-conjugada, na ausncia de qualquer anormalidade heptica.

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Dentre as causas hereditrias de hiberbilirrubinemia no-conjugada, destacam-se as sndromes de Crigler-Najjar e de Gilbert que esto associadas deficincia da enzima uridina difosfato (UDP) glicuroniltransferase. A Sndrome de Gilbert mais comum e parece haver, tambm, defeito no transporte da bilirrubina atravs da membrana do hepatcito. As causas mais comuns de aumento da bilirrubina direta so as doenas hepatobiliares e obstruo da rvore biliar (colestase). Na realidade, ambas as bilirrubinas esto aumentadas e pode-se observar uma variao ampla das concentraes sricas de cada forma de bilirrubina. Hepatite e cirrose so exemplos de doenas que podem causar colestase intra-heptica. A colestase pode tambm ser induzida por medicamentos e hormnios esterides. A obstruo extra-heptica da rvore biliar devido a carcinoma ou fibrose de cabea do pncreas, carcinoma ou constries do canal biliar comum e coledocolitase, produzem concentraes sricas aumentadas de bilirrubina direta. REFERNCIAS 1. Doumas BT, Kwok-Cheung PP, Perry BW, et al. Clin. Chem. 1985; 31:1779-1789. 2. Perry BW, Doumas BT, Bayse DD, et al. Clin. Chem.1983;29:297-301. 3. Perlman FC, Lee RTY. Clin. Chem. 1974, 20:447-453 4. Poon R; Hinberg IH. Clin. Chem. 1985, 31:92-94. 5. Tietz. Textbook of Clinical Chemistry, Burtis CA.; Ashwood ER. eds, 2 edio, Philadelphia: WB. Saunders Co, 1994. 6. Sociedad Espaola de Bioqumica Clnica y Patologa Molecular, Base de Datos de Variacin Biolgica. Disponvel em:<http://www.seqc.es/article/articleview/330/1/170> (acesso em 08/2005). 7. Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Groth T. Clin Chem 1981;27:493-501. 8. Rand RN, di Pasqua A. Clin. Chem. 1962; 06:570-8. 9. Labtest: Dados de Arquivo. Nome Elaborado por: Aprovado por: Implantado por: Substitui POP: Revisado por: Revisado por: Revisado por: Desativado por: Razo: Nmero Cpias Destino Assinatura Data ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___