Ttulo: Separao de lpidos por cromatografia em camada fina (TLC).

Objectivos: Compreender o princpio bsico da tcnica cromatogrfica; Descrever o procedimento para a extraco de lpidos pelo mtodo de Folch; Identificar as diferentes classes de lpidos no cromatograma; Discutir as diferentes classes de lpidos e suas propriedades. Solues: Soluo A: clorofrmio: metanol (2:1); Soluo B: n-hexano: ter dietico: 1 gota de cido actico glacial Extraco de Lpidos pelo mtodo de Folch 1. Separar a gema do ovo para um copo de 150 mL; 2. Misturar com soluo A; 3. Colocar o copo dentro de um copo de 1litro e adicionar gua pelos lados no copo de1litro, figura 1; 4. Deixar repousar de lado durante a noite; 5. Remover o copo de 150mL; 6. Remover a fase aquosa, com o auxlio de uma pipeta de Pasteur; 7. Filtrar a fase orgnica (filtrado clorofrmio:lpidos; papel de filtro metanol:gua:protenas); 8. Evaporar o clorofrmio em banho maria; 9. Dissolver o resduo do copo em 1mL de clorofrmio e manter num frasco fechado.

Fig.1) Ilustrao de um dos pontos do processo de extraco de lpidos. Separao de classes lipdicas por TLC

1. Preparar 5mL do sistema de solventes, soluo B; 2. Colocar numa cuba cromatogrfica 2,5mL de soluo B e deixar a atmosfera da cuba saturar; 3. Aplicar os extractos lipdicos e amostras padro na placa de cromatografia, segundo a figura 1, com o auxlio de uma vareta de vidro; 4. Deixar o local de aplicao secar; 5. Colocar a placa na cuba cromatogrfica tendo em ateno se a linha de aplicao est acima do solvente; 6. Retirar a placa e secar quando a frente de solvente estiver prxima do topo da placa; 7. Proceder revelao utilizando como agente revelador o Iodo.

Fig. 2) Placas cromatogrficas (a) indica como proceder para aplicar as amostras; (b) indica os resultados possveis aps revelao.