Unidad IV Biorreactores

INSTITUTO TECNOLGICO SUPERIOR DE ACAYUCAN
INGENIERA BIOQUMICA
701-B
INGENIERA DE BIORREACTORES UNIDAD 4 OPERACIONES AUXILIARES
ING. RIKA DEL CARMEN REYES GMEZ
PRESENTAN:
SANTOS OSORIO OSCAR
LEDESMA MAYORAL UZZIEL
RODRGUEZ SANTIAGO JUAN
RODRGUEZ REYES VCTOR RANGEL
15 DE DICIEMBRE DEL 2012 ACAYUCAN, VERACRUZ
INGENIERIA DE BIORREACTORES
CONTENIDO
Objetivos .......................................................................................................................... 4 Introduccin.................................................................................................................. 5 4. Operaciones auxiliares ....................................................................................... 7 4.1 Esterilizacin.................................................................................................... 15 4.1.1 Del medio de cultivo contino. .................................................................... 16 4.1.2 Esterilizacin del aire ................................................................................... 19 4.2 Instrumentacin y control del biorreactor ...................................................... 21 4.2.1 Sensores fsicos y qumicos ....................................................................... 22 4.2.1.1 Sensores fsicos........................................................................................ 25 4.2.1.2 Sensores quimicos ................................................................................... 27 Conclusin.............................................................................................................. 37 Bibliografa ............................................................................................................. 38
ING. ERIKA REYES GOMEZ
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NDICE DE FIGURAS
Figura 1. Instrumentacin de un biorreactor. ......................................................... 22 Figura 1. Instrumentacin de un biorreactor. ......................................................... 22 Figura 4.2 Componentes de termmetro de resistencia. ....................................... 26 Figura 4.3 Tipos de termistores ............................................................................ 27 Figura 4.4 Componentes de electrodo de vidrio ................................................... 28 Figura 4.5 Sensor de medicin de oxgeno disuelto .............................................. 29 Figura 4.6 Rotmetro............................................................................................. 31 Figura 4.7 Tacometro ........................................................................................... 32 Figura 4.8 Medidor de nivel .................................................................................. 33 Figura 4.9 Medidor de presin............................................................................... 35 Figura 4.10 Medidor de gases .............................................................................. 36 Figura 4.11 Espectrmetro de masas................................................................... 36
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OBJETIVOS
Identificara los servicios auxiliares necesarios para la operacin de un biorreactor. Describir sus componentes y explicar su funcionamiento. Dar a conocer su aplicacin industrial.
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INTRODUCCIN
El equipo donde se realiza el proceso se denomina biorreactor o fermentador. El mismo provee todos los servicios que son necesarios para el cultivo, tales como mezclado, termostatizacin, suministro de oxgeno, entradas para adicin de nutrientes, control del pH, etc. Por otra parte, cuando se habla de sistemas de cultivo o, tambin, mtodos de cultivo, se hace referencia al modo de operar del biorreactor, esto es en forma continua, discontinua o semicontinua. Para un
componente cualquiera del cultivo, incluida la biomasa, se puede plantear el siguiente balance de materia en el biorreactor. Velocidad de Acumulacin = Velocidad de Ingreso Velocidad de Salida + Velocidad de Formacin Velocidad de Consumo
Segn sea el modo de operacin, es decir, continuo, discontinuo o semi-continuo, se tendrn unos trminos de la ecuacin u otros, as se plantearn los balances del proceso.
Para poder llevar a cabo una fermentacin con xito es imprescindible y obligatorio tener en todas las etapas cultivos libres de contaminantes, desde el cultivo preliminar hasta el fermentador de produccin. Por lo tanto, el fermentador y su equipamiento, as como el medio de cultivo deben estar estriles antes de la inoculacin. Adems, el aire que se suministra durante la fermentacin debe ser estril y no deben existir roturas mecnicas en el fermentador que podran permitir la entrada de microorganismos. Tambin se deben esterilizar los aditivos (antiespumantes), sin embargo los cidos y bases concentrados no es necesario esterilizarlos.
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Un biorreactor puede ser esterilizado, destruyendo los microorganismos, con algn agente letal como calor, radiacin o un producto qumico o bien separando los organismos viables mediante un procedimiento fsico como la filtracin.
Durante la fermentacin se deben observar dos puntos para asegurar la esterilidad:

Esterilidad en el medio de cultivo Esterilidad del aire que entra y sale
Para lo cual es necesaria una construccin apropiada del biorreactor que facilite la esterilizacin as como la prevencin de la contaminacin durante la fermentacin.
La importancia de la instrumentacin de un biorreactor radica en la necesidad de tener en los cultivos un control que permita optimizar el proceso. La estrategia de control comienza con la medicin de las variables que proveen un ambiente adecuado en un proceso de fermentacin. El diseo y construccin de los elementos necesarios para el monitoreo de las variables del biorreactor, requirieron conocimientos de las necesidades del biorreactor y su operacin especfica, as como de los circuitos electrnicos involucrados en los dispositivos de medicin.
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4. OPERACIONES AUXILIARES
Los servicios auxiliares necesarios en la operacin de un biorreactor incluyen aire comprimido, diversos gases comprimidos (nitrgeno, oxgeno, etc.), agua de enfriamiento (agua helada y agua de torre), agua para servicios varios, vapor de planta y energa elctrica.
Aire:
El aire tiene varios usos en un biorreactor, entre ellos por orden de importancia:
1. Proveer oxigeno al medio de cultivo. 2. Como fuerza motriz para la transferencia de momento y masa. 3. Como fuerza motriz para transferir lquidos de un recipiente a otro. 4. Para accionar instrumentacin de control de tipo neumtico. 5. Como medio de enfriamiento para los recipientes despus de la esterilizacin.
La eleccin de aire a utilizar del uso que se haga de l. El aire debe ser seco y libre de aceite. Adems, cuando se requiera que el proceso o producto no se afecte por la introduccin de microorganismos ajenos, contenidos en la corriente de aire, ser necesario que este sea estril.
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Vapor:
El vapor de planta es utilizado como el medio principal de calentamiento en miles de industrias, y para la generacin de energa elctrica como uso secundario. Adems el vapor limpio o puro se utiliza en el procesamiento de alimentos y medicinas, en la esterilizacin de productos y equipos, etc. Su uso generalizado se debe a las siguientes razones:
1. La generacin de vapor es una de las formas ms econmicas de generacin de energa. 2. El vapor puede controlarse de manera relativamente sencilla debido a que circula de una zona de alta presin a una de menor presin sin necesidad de otro equipo. 3. El vapor es fcil de producir, ya que se obtiene del agua que adems puede ser reutilizable. Un generador de vapor o caldera es aquel que transforma el agua en vapor aprovechando el calor generado por la combustin de un material combustible, teniendo como caracterstica principal que es un recipiente cerrado sujeto a una presin mayor a la atmosfrica.
Existen dos tipos de generadores de vapor:
1. Generadores de tubo de agua: En estos el agua circula al interior de una serie de tubos (serpentn), mientras que el calor se transfiere de la cmara de combustin hacia el interior de los tubos, as el agua contenida dentro de los tubos comienza a elevar su temperatura hasta evaporarse. Este es el tipo ms comn.
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2. Generadores de tubo de humo: En forma totalmente opuesta, en este tipo de generadores los gases de combustin circulan por los tubos, mientras que el agua se encuentra almacenada en la cmara exterior. Asi el calor se transfiere del interior de los tubos hacia el agua almacenada alrededor de estos.
La capacidad de un generador de vapor se mide bajo un estndar internacional llamado Caballo Caldera el cual es equivalente a generar a 15.65 kg/h de vapor con una temperatura de 100C a presin atmosfrica y que es alimentado con agua a 100C.
Las calderas generalmente vienen como paquetes en tamaos estandarizados que incluyen:
1. El tanque de condensados que se instala generalmente 2 m arriba de la bomba de alimentacin de agua al generador. 2. La bomba de agua que enva el agua a presin hacia el serpentn del generador. 3. El generador de vapor de tubos de agua por donde circulan en sentido contrario el agua y los gases de combustin, de tal manera que a medida que el agua avanza en su recorrido encuentra temperaturas ms altas, por lo que incrementa su temperatura hasta convertirse en vapor. los componentes bsicos del generador son: o Serpentn o Quemador-ventilador o Cmara de combustin
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4. El separador de vapor en donde por medios mecnicos se provoca el desprendimiento de pequeas partculas de agua (humedad) que arrastra el vapor. 5. La trampa de vapor que desaloja los condensados removidos del vapor y los enva de regreso al tanque de condensados para repetir nuevamente el ciclo. 6. Sistemas de control y de seguridad entre los que destacan: vlvulas de alivio y de seguridad, manmetros, control principal de temperatura con termopar, interruptores del termostato, interruptor de presin de vapor e interruptor del nivel de aceite.
El agua que entra a una caldera requiere de un acondicionamiento previo (ver tabla 1) para proteger los equipos contra la incrustacin, la corrosin y otras complicaciones. Por eso es necesario acoplar a este un sistema de acondicionamiento previo del agua que generalmente incluye un suavizador y un tanque de salmuera
El suavizador consiste en una columna empacada con una resina catinica depositada sobre un lecho de grava que le sirve de soporte y a la vez de filtro. En la resina se lleva a cabo el intercambio de los iones calcio y magnesio que son los responsables de la dureza del agua por iones de sodio que contiene la resina. El tanque de salmuera tiene como funcin regenerar la resina a fin de que recupere su capacidad de intercambio inico.
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. El sistema de distribucin de vapor se realiza por medio de tuberas, generalmente de acero al carbn de cdula 40, cuidando que las velocidades y cadas de presin estn comprendidas en los intervalos recomendados para el
dimensionamiento de las mismas. El vapor puro requerir de tuberas de acero inoxidable con acabado sanitario.
En adicin al sistema de distribucin de vapor debern preverse los sistemas de manejo de condensados, ya que estos pueden realizarse con un importante ahorro en el acondicionamiento del agua de alimentacin a la caldera y en la energa requerida para el calentamiento de la misma hasta el punto de ebullicin.
Agua de enfriamiento:
El agua como servicio auxiliar se utiliza como fluido de enfriamiento para el control de la temperatura del caldo de fermentacin en los biorreactores. Esta agua, a diferencia del agua de proceso, nunca entra en contacto con las materias primas o productos de la biorreaccin, ni con las superficies en contacto con estos, sino que circula a travs de las chaquetas o serpentines segn el diseo del biorreactor.
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Agua para servicios varios:
Este tipo de agua se utiliza para las operaciones de lavado y limpieza del biorreactor y del rea de procesado. Esta agua puede ser potable, debe estar libre de sedimentos, pero no requiere ningn tratamiento adicional.
Energa elctrica:
La instalacin elctrica tiene como propsito proporcionar la energa para accionar bombas, comprensores, motores elctricos y otros equipos mecnicos,
instrumentos, tableros de control y alumbrado. El sistema se debe adecuar para entregar en el punto que se requiera la energa necesaria sin causar sobrecalentamiento o cambios de voltaje innecesarios.
Esto se logra a travs de lneas de alambrado que unen el generador con el punto donde se necesita la energa conectada todos los componentes y que se dividen en secciones segn el servicio y el rea dando lugar a los circuitos. El sistema elctrico bsico esta constituido por la fuente, el equipo de transformacin, los dispositivos de proteccin, las lneas de distribucin y los puntos de uso. Voltajes de distribucin:
La energa comparada o generada se suministra a voltajes muy altos y para usarse en la planta debe ser reducida al voltaje de utilizacin, para esto se
requiere el uso de subestaciones reductoras o transformadores. El voltaje de operacin recomendado por los fabricantes de motores y dems equipo elctrico aparece en la placa o en las instrucciones de operacin de dicho equipo.
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La especificacin tpica para motores elctricos y dems equipos accionados elctricamente es de 120 V, 240 V y algunos casos hasta 480 V, los instrumentos generalmente necesitan voltaje 12-24 V. Corriente:
La corriente puede ser de dos tipos: la corriente al terna (CA) que es peridica con pequeas oscilaciones, desde un valor mximo en un sentido hasta el mismo valor pero en sentido contrario, de tal manera que su intensidad media es nula; y la corriente continua o directa (DC CC) que proporciona un valor constante todo el tiempo, como la producida por dinamos, pilas y acumuladores. Dispositivos de proteccin:
Los circuitos y equipos deben ser protegidos por dispositivos que abran los circuitos para que la corriente no fluya en condiciones de sobrecarga o falla. Esto se hace por medio de interruptores. Mediante los transformadores se obtienen voltajes reducidos que alimentan los diferentes circuitos, cada uno de los cuales debe tener su interrupcin de desconexin. Equipo elctrico para reas peligrosas:
Cuando las materias primas o productos de la biorreaccin son potencialmente peligrosos, es decir, que emiten a la atmosfera grandes cantidades de partculas muy pequeas que pueden penetrar hacia los circuitos elctricos e iniciar una chispa (por ejemplos; polvos, solventes, etc.), tanto el equipo elctrico como los transformadores, mecanismos de distribucin y motores deben ser especificados a prueba de explosin.
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Conductores:
Del punto de suministro al punto de utilizacin (equipos, comprensores, bombas, etc.), la corriente elctrica distribuye por medio de conductores que pueden ser alambres, cordones o cables, los cuales pueden ser vistos como las arterias y venas por donde viaja la corriente:
o Hilo de alambre: Es un conductor constituido por nico alambre macizo, generalmente de cobre. o Cordn: Es un conductor constituido por varios hilos unidos elctricamente enrollados helicoidalmente alrededor de uno o varios hilos centrales. o Cable: Es un conductor formado por uno o varios hilos o cordones aislados elctricamente entre si. Segn el numero hilos o cordones que lleva un cable se denomina unipolar, bipolar, tripolar, etc.
Los cables son canalizados en las instalaciones dentro de tuberas metlicas o canales para protegerlos de agentes externos como la humedad, la corrosin los golpes, etc., que se sujetan al techo o paredes por medio de soportes. En algunos lugares se entierran dichas tuberas bajo el piso, aunque esto lo hace de difcil acceso y mantenimiento.
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4.1 ESTERILIZACIN
En todo proceso de fermentacin se requiere la esterilizacin de los equipos a usar para as evitar la contaminacin biolgica. La contaminacin biolgica es la invasin de microorganismos extraos, sin inters industrial, del proceso. Con ello se disminuye la productividad porque se da el crecimiento celular de la cepa productora tambin del contaminante biolgico. Adems si se opera en continuo el microorganismos extrao puede desplazar al de inters.
A parte de estos problemas, el contaminante biolgico puede degradar el producto final o producir la lisis celular. Se deben de usar inculos puros, esterilizar el medio de cultivo, el reactor, conductos, vlvulas, aditivos y corrientes del proceso. Se debe mantener las condiciones de esterilizacin durante el proceso de operacin.
El proceso de esterilizacin consiste en la eliminacin o destruccin de todos los microorganismos presentes capaces de competir con el organismo deseado. Sabiendo las caractersticas especficas del cultivo de inters se pueden encontrar las condiciones de operacin ms extremas que permitan desarrollarse a este cultivo y no a ningn otro microorganismos. Se suele jugar con la temperatura y con el pH. Este procedimiento sera de desinfeccin ms que de esterilizacin. La esterilizacin puede hacerse mediante calor hmedo o travs de la filtracin.
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4.1.1 DEL MEDIO DE CULTIVO CONTINO.
El medio nutritivo que se prepara inicialmente contiene una variedad de clulas vegetativas diferentes y de esporas que proceden de los constituyentes del medio, del agua y del recipiente. Estos microorganismos deben ser eliminados por un procedimiento adecuado antes de la inoculacin. Existen un conjunto de procedimientos para la esterilizacin, pero en la prctica, para instalaciones a gran escala, el calor es el principal mecanismo utilizado.
Un conjunto de factores influyen en el xito de la esterilizacin por calor: el nmero y tipo de microorganismos presentes, la composicin del medio de cultivo, el valor del pH y el tamao de las partculas en suspensin. Las clulas vegetativas son eliminadas rpidamente a temperaturas relativamente bajas, pero para la destruccin de las esporas se necesitan temperaturas de 121C.
La esterilizacin por filtracin se utiliza frecuentemente para todos los componentes de la solucin de nutrientes que son sensibles al calor y que seran por tanto desnaturalizados durante el proceso de esterilizacin por vapor utilizado normalmente en fermentacin industrial. Las vitaminas, los antibiticos o los componentes de la sangre son ejemplos de compuestos lbiles al calor que deben ser esterilizados por filtracin.
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Esterilizacin contina:
La esterilizacin continua se lleva a cabo normalmente en 30-120 segundos a 140 C. El calentamiento del medio de cultivo para la esterilizacin continua puede ser llevado a cabo mediante inyeccin de vapor o mediante intercambiadores de calor. La esterilizacin con inyeccin de vapor se hace inyectando vapor en la solucin de nutrientes. La temperatura se eleva rpidamente a 140 C y se mantiene durante 30-120 segundos.
Debido a la formacin de condensados la solucin nutritiva se diluye; para corregir esto la solucin caliente se bombea a travs de una vlvula de expansin a un vaporizador y el condensado se retira mediante bombas de vaco de forma que la solucin esterilizada de nutrientes tiene la misma concentracin despus del proceso de enfriamiento que antes. La desventaja de este proceso es la sensibilidad que presenta a cambios en la viscosidad del medio y a variaciones en la presin.
En el proceso continuo que utiliza intercambiadores de calor, la solucin de nutrientes, en el primer intercambiador de calor, se precalienta a 90-120 C durante 20-30 segundos por la solucin nutritiva previamente esterilizada que sale. Luego, en el segundo intercambiador de calor, se calienta indirectamente con vapor a 140 C. Esta temperatura se mantiene durante 30-120 segundos en una tubera de mantenimiento antes de que sea colocada en el primer intercambiador mediante enfriamiento preliminar y posteriormente en un tercer cambiador para refrigeracin a la temperatura del fermentador. La fase de enfriamiento es slo de 20-30 segundos.
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En el proceso que utiliza intercambiadores de calor el 90% del aporte de energa se recupera. La desventaja de este mtodo es que con algunas soluciones de nutrientes se forman sales insolubles (p. ej. fosfato clcico u oxalato clcico) y aparecen incrustaciones en el primer intercambiador de calor debido a las diferencias de temperatura entre la solucin de nutrientes esterilizada y la solucin fra que entra.
Si se produce una precipitacin, el coeficiente de transferencia de calor disminuye por lo que el sistema se debe detener y tratar con agentes que limpian (cido o base) y re-esterilizarlo. Esterilizando separadamente los componentes crticos de la solucin de nutrientes se mantiene constante el coeficiente de transferencia de calor por lo que el perodo til puede extenderse durante semanas.
Las soluciones que contienen almidn, que se hacen viscosas cuando se calientan, son difciles de utilizar en procesos de esterilizacin continua. Antes de la esterilizacin real debe llevarse a cabo una licuefaccin e hidrlisis parcial mediante cidos o amilasas. Adems, si hay partculas en suspensin en la solucin de nutrientes, los cortos tiempos de esterilizacin en el proceso continuo pueden ser insuficientes para que el calor permanezca completamente a travs de ellas. El tiempo de calentamiento para partculas de 1 mm es de 1 segundo; para partculas de 1 cm es de 100 segundos. Por consiguiente el tamao de las partculas debera estar restringido a 1-2 mm en procesos continuos de esterilizacin.
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4.1.2 ESTERILIZACIN DEL AIRE
La mayor parte de las fermentaciones industriales operan en condiciones de agitacin vigorosa y el aire que se suministra al fermentador debe ser esterilizado. El nmero de partculas y microorganismos en el aire vara en gran medida dependiendo de la localizacin de la planta, el movimiento del aire y el tratamiento previo del aire. Como media, el aire exterior tiene 10 - 100.000 partculas por m3 y 5 - 2.000 microorganismos por m3. De estos, el 50% son esporas de hongos y el 40% son bacterias G (-).
Los fermentadores funcionan generalmente con velocidades de aireacin de 0,5 1,0 vvm (volumen de aire/volumen de lquido por minuto). Un fermentador que tenga un volumen de trabajo de 50 m3 con una velocidad de aireacin de 1 vvm necesita 3.000 m3 de aire estril por hora. La importancia crtica de la esterilizacin del aire en la microbiologa industrial puede ser deducida a partir de estos valores.
Los mtodos existentes para la esterilizacin de los gases incluyen la filtracin, inyeccin de gas (ozono), depuracin de gas, radiacin (UV) y calor. De todos estos, solamente la filtracin y el calor son prcticos a escala industrial. Durante muchos aos el aire se esteriliz pasndolo sobre elementos calentados elctricamente, pero debido al alto coste de la electricidad a partir de la crisis del petrleo de los aos 70, este proceso ha sido reemplazado por la filtracin.
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Actualmente, en los sistemas industriales el aire se esteriliza por filtracin. En los sistemas ms antiguos se instalaban filtros en profundidad como los de lana de vidrio en los que las partculas son atrapadas por una combinacin de efectos fsicos (inercia, bloqueo, difusin, gravedad y atraccin electrosttica). Los dos ltimos mecanismos tienen un efecto mnimo sobre la eliminacin de las partculas. Las desventajas de los filtros de lana de vidrio incluyen el arrugamiento y la solidificacin durante la esterilizacin por vapor.
Actualmente estn siendo reemplazados por filtros de cartuchos que utilizan membranas plegadas. Las ventajas de estos filtros es que son sustancialmente ms pequeos, debido a la construccin de los cartuchos es fcil reemplazar los elementos filtrantes utilizados, al poseer una estructura membranosa (steres de celulosa, polisulfona o nylon) tienen un efecto de filtros absolutos. La desventaja de la mayor parte de los sistemas instalados actualmente es que no existen todava, para uso industrial, filtros absolutos para bacterifagos.
Los bacterifagos pueden ocasionar el fallo total de un sistema como por ejemplo en la produccin de cido glutmico por Corynebacterium glutamicum o al trabajar con Escherichia coli. El aire que sale del fermentador tambin debe ser esterilizado, sobre todo si se trabaja con organismos recombinantes. No slo como medida de seguridad, sino tambin para prevenir que las cepas industriales se liberen al medio ambiente y por lo tanto estn disponibles de una forma gratuita para los competidores. De nuevo, se utiliza la filtracin.
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4.2 INSTRUMENTACIN Y CONTROL DEL BIORREACTOR
La instrumentacin y control de un biorreactor requiere de sensores que midan las variables de un proceso fermentativo, y sistemas que ajusten el equipo a un punto ptimo de operacin. Idealmente, los sensores deben de estar en lnea, para medir las propiedades fsicas del cultivo, estos sensores deben ser esterilizables para asegurar la asepsia del proceso.
Sin embargo, no todas las mediciones pueden ser hechas en lnea, algunas medidas fuera de lnea, requieren de tomar muestras y analizarlas, lo cual consume tiempo y hace lenta la respuesta de control (biomasa, sustrato, metabolitos, etc.). En la Figura 1, podemos observar los principales instrumentos de medicin en un biorreactor.
Los sensores de propiedades fsicas pueden ser monitoreados continuamente, y son la temperatura, presin, poder de agitacin, velocidad de agitacin, viscosidad del medio, flujo y concentracin de gases y fluidos, espuma, volumen y masa.
Para la medicin de las propiedades qumicas se utilizan electrodos esterilizables al vapor, de pH, redox, oxgeno disuelto y CO2. El ms utilizado es el de pH, aunque no tiene utilidad para todas las fermentaciones, slo en las de tipo continuo donde se necesita mantener un valor estable de acidez o basicidad. Para ello, contamos con sensores de pH y oxgeno disuelto.
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Figura 1. Instrumentacin de un biorreactor.

Ilustracin 1Figura 1. Instrumentacin de un biorreactor. Ilustracin 2 Figura 1. Instrumentacin de un biorreactor.
4.2.1 SENSORES FSICOS Y QUMICOS

Para llevar a cabo durante la fermentacin medidas para el anlisis de datos y el control del proceso se han desarrollado sensores especiales para biorreactores que difieren en cierto modo de los de las industrias qumicas:
1) Todos los sensores localizados en el rea estril deben ser esterilizables. 2) Algunos sensores deben estar especficamente adaptados a las necesidades bioqumicas.
Los parmetros fsicos y qumicos que se indican en la Tabla 2 pueden ser medidos directamente en muchas plantas piloto o fermentadores de produccin o pueden ser medidos in situ en el laboratorio.
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Tabla 2. Parmetros que pueden ser medidos en un proceso de fermentacin. Parmetros fsicos Temperatura Parmetros Qumicos pH Parmetros biolgicos Productos biolgicamente activos Presin Oxgeno disuelto Actividad enzimtica
Consumo de potencia
O2 y CO2 en los gases de salida Potencial redox
Contenido en DNA y RNA
Viscosidad
Contenido en NADH2 y ATP Contenido en protena
Velocidad de flujo (aire Concentracin de y lquido) sustrato
Turbidez
Concentracin de producto
Peso del fermentador
Fuerza inica
Los parmetros biolgicos que se indican deben ser medidos fuera del fermentador, con la excepcin de la medida del NADH2 que puede ser medido in situ por mtodos fluorescentes. Existen interesantes novedades en el campo de los electrodos enzimticos, los denominados biosensores. Tales sensores, sin embargo, no pueden ser esterilizados.
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Un procedimiento normal es determinar en el aire que entra y que sale el O 2 y el CO2 por separado mediante las propiedades paramagnticas del O 2 y el espectro de absorcin en infrarrojos del CO 2. Los sensores para medir estos gases estn bien desarrollados y funcionan con pocas interrupciones.
Es fcil encontrar equipos para la medida precisa del pH. Existen combinaciones de electrodos (electrodos de cristal, electrodo de referencia y compensador de temperatura en una sola mitad) capaces de soportar las temperaturas de esterilizacin y las tensiones mecnicas o debidas a la presin. El tiempo de respuestas y la sensibilidad de estos electrodos es satisfactoria para los requerimientos normales de los fermentadores.
Uso de ordenadores
Los ordenadores pueden facilitar el control y anlisis de un conjunto de funciones en los procesos de fermentacin:
Optimizacin mediante ordenador. Los ordenadores se utilizan en el salto de escala y evalan los parmetros de la fermentacin y miden los efectos de parmetros individuales sobre el comportamiento metablico de los cultivos.
Control mediante ordenador. Los ordenadores pueden controlar los procesos de fermentacin. El control in situ de la fermentacin se utiliza ampliamente por muchas compaas a escala de produccin.
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La aplicacin de ordenadores en biotecnologa se utilizan primariamente para la adquisicin de:
a) Adquisicin de datos b) Anlisis de datos c) Desarrollos de modelos de fermentacin
4.2.1.1 SENSORES FSICOS
Temperatura
Es un parmetro de regulacin importante para el proceso ya que muchos microorganismos tienen un determinado intervalo de temperatura y la energa calorfica es rpidamente absorbida por la clula. Los termmetros de resistencia y los termistores son los que se encuentran en la mayora de las instalaciones.
Termmetros de resistencia
Se suelen designar con sus siglas inglesas RTD (Resistance Temperature Detector). Se basan en el principio de que la resistencia de los metales incrementa con la temperatura. Cuando la corriente pasa a travs del rollo, un cambio de voltaje se produce y ste a su vez, se relaciona con la temperatura. Los termmetros de resistencia industriales se construyen siempre de platino, cobre o nquel.
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Figura 4.2 Componentes de termmetro de resistencia.

Ilustracin 3Figura 4.2 Componentes de termmetro de resistencia.
Termistores Son resistores variables con la temperatura, pero no estn basados en conductores como las RTD, sino en semiconductores. Si su coeficiente de temperatura es negativo NTC (negative temperature coefficient), mientras que si es positivo, se denominan PTC. Son semiconductores los cuales exhiben un incremento en su conductividad con la temperatura.
De la misma forma que los termmetros de resistencia, los termistores no guardan una relacin lineal entre la resistencia y la temperatura, pero si se adecuan a los pequeos cambios de temperatura que exhiben las fermentaciones, sta relacin puede considerarse lineal. Los termistores se fabrican con xidos de nquel, manganeso, hierro, cobalto, cobre, magnesio y titanio.
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Figura 4.3 Tipos de termistores

Ilustracin 4 Figura 4.3 Tipos de termistores
4.2.1.2 SENSORES QUIMICOS

pH
El electrodo de vidrio es el elemento detector primario de las mediciones de pH. El principio de medicin se basa en el desarrollo de un potencial en la membrana de vidrio sensible al pH, como resultado de la diferencia en la actividad del ion hidrgeno en la muestra y una solucin estndar de referencia (solucin de cloruro de potasio) contenida dentro del electrodo. El potencial del electrodo proporciona un voltaje que se expresa como pH.
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Figura 4.4 Componentes de electrodo de vidrio

Ilustracin 5Figura 4.4 Componentes de electrodo de vidrio
Medicin de oxgeno disuelto
Los sensores de medicin de oxgeno disuelto (OD) consisten bsicamente de una camisa de acero inoxidable o de cristal que contiene dos electrodos y un electrolito adecuado. Para separar los electrodos y los electrolitos del caldo de fermentacin, el sensor est cubierto por una membrana.
El oxgeno difunde a travs de la membrana y se reduce en el ctodo, que est polarizado negativamente con respecto al nodo. Esto produce una corriente que puede ser traducida como concentracin de oxgeno. Habitualmente se recurre al uso de sondas de tipo polarigrfica y galvnica. La diferencia entre ellas es que stas ltimas son ms baratas. Las sondas polarigrficas pueden ser fraccionablemente ms rpidas y tener una vida til ms larga. Realmente las sondas OD no miden la concentracin de oxgeno disuelto, sino la actividad o la presin parcial del oxgeno.
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Por esta razn las sondas OD son frecuentemente calibradas para leer el porcentaje de saturacin utilizando aire y nitrgeno libre de oxgeno como los puntos de 0-100% de calibracin. Es posible sin embargo relacionar la presin parcial del oxgeno con la concentracin de oxgeno disuelto utilizando la Ley de Henry, ya que la solubilidad del oxgeno en los caldos de fermentacin es muy baja.
Figura 4.5 Sensor de medicin de oxgeno disuelto

Ilustracin 6Figura 4.5 Sensor de medicin de oxgeno disuelto
Nivel de espuma
La formacin de espuma representa un problema serio en las fermentaciones ya que se fomenta la contaminacin mermando el rendimiento u obstaculizando filtros. Comnmente muchos medios de cultivo fomentan la formacin de espuma, principalmente en los cultivos aerobios por la produccin de agentes espumantes como protenas, polisacridos y cidos grasos. El control puede realizarse por mtodos mecnicos, qumicos o una combinacin de los dos.
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Mtodos mecnicos
Consisten de adaptaciones de disco rotatorios montados sobre el eje principal de agitacin. Estos dispositivos aseguran una buena eliminacin de espuma, con la desventaja de que consumen elevadas cantidades de energa, lo cual se refleja en un incremento en los costos de produccin. Mtodos qumicos
Se realizan con la ayuda de agente antiespumantes los cuales pueden ser suministrados de forma automtica. Algunos antiespumantes son metabolizados por los microorganismos, por lo cual pueden ser considerados como una fuente de carbono adicional.
Nivel de agitacin
Son comunes los rotmetros los cuales determinan las revoluciones por minuto mediante mecanismos de induccin, generacin de voltaje, sensores de luz o fuerzas magnticas (tacmetros elctricos). stos permiten una medicin directa de las seales para alimentar los instrumentos registradores o controladores de panel. El tacmetro elctrico se emplea un transductor que produce una seal analgica o digital como conversin de la velocidad de giro de la mquina.
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Figura 4.6Tacmetro
Ilustracin 7Figura 4.5 Sensor de medicin de oxgeno disuelto
Flujo de aire
En fermentaciones aerobias el aire es transportado a travs del fermentador para suministrar oxgeno y tambin para remover CO2, lo cual de otro modo podra afectar la actividad enzimtica. En reactores de columna de burbujeo, promueve la mezcla del medio de cultivo. Normalmente las velocidades de flujo de aire se encuentran en el rango de 0.5-1.5 vvm (volmenes de air por volumen de reactor por minuto.
La medicin de flujo de gas, incluye el suministro de aire al fermentador, para la toma de muestras de gas para el anlisis y para el suministro de gas de amoniaco en el control de pH. Los instrumentos ms usados para la medicin de flujo son los rotmetros u los medidores trmicos de flujo de masa. En los rotmetros la velocidad de flujo e determina por medio de un flotador que se mueve libremente en el interior de un tubo graduado, creciente y montado verticalmente.
Los medidores de flujo de aire msico determinan el flujo de gas detectando las diferencias de temperatura a lo largo de un dispositivo calefactor colocado en el paso del gas.
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El principio de este medidor de flujo radica en que el calor transferido es directamente proporcional a la cantidad del flujo msico.
Figura 4.7 Rotmetro

Ilustracin 8Figura 4.6 Rotmetro
Medidor de nivel
Los indicadores de nivel pueden ser de nivel de vidrio y medidores de presin diferencial. En los indicadores de nivel de vidrio se instala en forma de que el lquido se comunique con el indicador de vidrio paralelo al reactor. En los medidores de presin diferencial, una celda de presin diferencial se puede usar como transmisor de nivel, ya que el nivel del lquido se refleja como una presin equivalente a la altura del lquido asociado con la densidad de este.
Otra forma de conocer el nivel del lquido, es por medio de un sensor del nivel del lquido, que mide la capacidad del condensador formado por un electrodo sumergido en el lquido y en las paredes del tanque. La capacitancia registrada depende linealmente del nivel del lquido.
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Figura 4.8 Medidor de Nivel

Ilustracin 9Figura 4.6 Rotmetro
Presin
Las variaciones excesivas de presin no solo pueden provocar prdidas de producto sino que tambin dao a l equipo y al personal de operacin. El biorreactor suele someterse a presiones de esterilizacin con el fin de prevenir posibles riesgos de contaminacin por residuos remanentes.
Algunas veces el medio de cultivo se esteriliza en el interior del birreactor, por lo cual es indispensable el control de la presin, con el fin de evitar el deterioro de los componentes del medio de cultivo. Para el control de la presin suelen usarse manmetros de presin o de Bourdon.
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Figura 4.9 Medidor de Presin
Anlisis del gas de salida
El gas que abandona el reactor contiene diversos tipos de gases, dependiendo del tipo de reaccin. En reacciones biolgicas, los principales gases presentes en el gas de salida con CO2 y O2. La determinacin de las concentraciones de estos gases es un indicativo de la actividad metablica presente en el interior del reactor durante la reaccin. La diferencia del contenido de oxgeno a la entrada en la corriente de salida es igual a la cantidad de oxgeno transferido al sistema.
El contenido de oxgeno se puede determinar por medio de analizadores de gas de tipo paramagnticos. Los analizadores ms populares son los de viento magntico (termomagntico) y el de deflexin (magnetodinmico). Las molculas paramagnticas tales como el oxgeno presentan electrones no apareados los cuales giran alrededor del ncleo. Cuando un flujo magntico es aplicado, los tomos tienen a orientarse en la direccin del campo.
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La medicin de CO2 se puede realizar con analizadores de infrarrojos, los cuales consisten en una fuente de luz, una seccin ptica y el sensor principal.
Figura 4.10 Analizador de Gases

Ilustracin 10Figura 4.9 Analizador de Gases
Espectrmetros de masa
Se basan en la separacin de las molculas ionizadas en el vaco. La separacin basada en la relacin de masa a carga se consigue en instrumentos magnticos o de cuadrapolo. Potencialmente los espectrmetros de masas pueden ser utilizados tanto para el anlisis continuo de gases en lnea como de lquidos. Para el anlisis de lquidos, una sonda que soporte una fuerte membrana permeable, se inserta en el caldo de fermentacin y las sustancias disueltas como el O2 y el CO2 y cualquier lquido de suficiente volatilidad son arrastradas fuera de la solucin aplicando vaci. Los espectrmetros de masas pueden ser utilizados para el anlisis
simultneamente de cualquier componente de la fase gaseosa; sin embargo en las fermentaciones est restringido tradicionalmente a oxgeno y bixido de carbono como un sofisticado analizador de gases.
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La principal desventaja del espectrmetro de masas es su elevado consto, alrededor de diez veces ms que la de cualquier analizador de gas. Pero el espectrmetro de masas es ms verstil, ya que puede medir tambin N2, NH3, metanol y etanol simultneamente, as como dar informacin cuantitativa y cualitativa sobre el intercambio de O 2 y CO2. Mediante el uso de membranas permeables a los gases es posible medir los gases disueltos en el medio nutritivo. Se han desarrollado instrumentos que analizan hasta 8 gases simultneamente en la fermentacin.
Figura 4.11 Espectrmetro de masas

Ilustracin 11Figura 4.10 Espectrmetro de masas
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CONCLUSIN
En un biorreactor es donde se realiza el proceso en donde provee los servicios necesarios para los cultivos y hace referencia su modo de operacin ya se de forma continua o discontinua. En todo proceso se requiere la esterilizacin de los equipos a utilizar, para as evitar que haya contaminacin hacia mis medios. En donde la esterilizacin consiste en la eliminacin o destruccin de todos los microorganismos presentes en el medio. La esterilizacin puede hacerse mediante calor hmedo o a travs de una filtracin.
Un buen manejo de los biorreactores depende de gran parte de su instrumentacin y control, que estas a su ves son ayudados por sensores que ayudan a encontrar las variables dentro de un proceso fermentativo. Dentro de los sensores fsicos podemos encontrar lo que son la temperatura, presin, viscosidad, etc. Dentro de los sensores qumicos son el pH, la fuerza inica
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BIBLIOGRAFA
G:\Instrumentacin y control del proceso for Bases de Microbiologa Industrial.mht. G:\Esterilizacin.mht. G:\Pagina nueva 5.htm
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INSTITUTO TECNOLGICO SUPERIOR DE ACAYUCAN

INGENIERA DE BIORREACTORES UNIDAD 4 OPERACIONES AUXILIARES

ING. RIKA DEL CARMEN REYES GMEZ

LEDESMA MAYORAL UZZIEL

RODRGUEZ SANTIAGO JUAN

RODRGUEZ REYES VCTOR RANGEL

15 DE DICIEMBRE DEL 2012 ACAYUCAN, VERACRUZ

ING. ERIKA REYES GOMEZ

ING. ERIKA REYES GOMEZ

ING. ERIKA REYES GOMEZ

ING. ERIKA REYES GOMEZ

Durante la fermentacin se deben observar dos puntos para asegurar la esterilidad:

ING. ERIKA REYES GOMEZ

ING. ERIKA REYES GOMEZ

Existen dos tipos de generadores de vapor:

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ING. ERIKA REYES GOMEZ

ING. ERIKA REYES GOMEZ

Agua para servicios varios:

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4.1.1 DEL MEDIO DE CULTIVO CONTINO.

ING. ERIKA REYES GOMEZ

ING. ERIKA REYES GOMEZ

ING. ERIKA REYES GOMEZ

4.1.2 ESTERILIZACIN DEL AIRE

ING. ERIKA REYES GOMEZ

ING. ERIKA REYES GOMEZ

4.2 INSTRUMENTACIN Y CONTROL DEL BIORREACTOR

ING. ERIKA REYES GOMEZ

Figura 1. Instrumentacin de un biorreactor.

4.2.1 SENSORES FSICOS Y QUMICOS

ING. ERIKA REYES GOMEZ

O2 y CO2 en los gases de salida Potencial redox

Contenido en DNA y RNA

Contenido en NADH2 y ATP Contenido en protena

Velocidad de flujo (aire Concentracin de y lquido) sustrato

Peso del fermentador

ING. ERIKA REYES GOMEZ

ING. ERIKA REYES GOMEZ

La aplicacin de ordenadores en biotecnologa se utilizan primariamente para la adquisicin de:

a) Adquisicin de datos b) Anlisis de datos c) Desarrollos de modelos de fermentacin

4.2.1.1 SENSORES FSICOS

ING. ERIKA REYES GOMEZ

Figura 4.2 Componentes de termmetro de resistencia.

ING. ERIKA REYES GOMEZ

Figura 4.3 Tipos de termistores

4.2.1.2 SENSORES QUIMICOS

ING. ERIKA REYES GOMEZ

Figura 4.4 Componentes de electrodo de vidrio

Medicin de oxgeno disuelto

ING. ERIKA REYES GOMEZ

Figura 4.5 Sensor de medicin de oxgeno disuelto

ING. ERIKA REYES GOMEZ

ING. ERIKA REYES GOMEZ

Figura 4.7 Rotmetro

ING. ERIKA REYES GOMEZ

Figura 4.8 Medidor de Nivel

ING. ERIKA REYES GOMEZ

Figura 4.9 Medidor de Presin

Anlisis del gas de salida

ING. ERIKA REYES GOMEZ