Universidad de La Frontera Facultad de Medicina Departamento de Ciencias Bsicas

Informe de laboratorio n1
mediante procedimientos de tincin nuclear y citoplasmtica y anlisis microscpico

Caracterizacin de clulas sanguneas

Integrantes : Daniela Bastas A. Isabel Castro J. Juan Jos Espinoza S. Francisca Gonzalez M. Nicols Ortiz L. Darling Palma P. Carrera : Medicina Profesor : Dr. Marco Paredes H. Asignatura : Bioestructura I (MBA-104) Fecha de : 04 de junio del 2013 entrega

procedimientos de tincin nuclear y citoplasmtica y anlisis microscpico

Caracterizacin de clulas sanguneas mediante

autores

Daniela Bastas A. Isabel Castro J. Juan Jos Espinoza S. Francisca Gonzalez M. Nicols Ortiz L. Darling Palma P.

diseo y diagramacin Nicols Ortiz L. correccin tipogrfica, gramatical y de estilo Juan Jos Espinoza S.

Francisca Gonzalez M.
Nicols Ortiz L.

cubierta Nicols Ortiz L.

Texto compuesto en tipografa Minion Pro 12

Caracterizacin de clulas sanguneas mediante procedimientos de tincin nuclear y citoplasmtica y anlisis microscpico
Daniela Bastas1, Isabel Castro1, Juan Espinoza1, Francisca Gonzalez1, Nicols Ortiz1 & Darling Palma1 RESUMEN: La sangre es un tejido que cumple funciones muy importantes, y como tejido, est compuesto por diferentes clulas o fragmentos de ellas, que son los eritrocitos, plaquetas y leucocitos. El objetivo del presente estudio fue caracterizar estas clulas sanguneas, por lo que fue necesaria la sangre de algunos de los autores para preparar 5 frotis en los cuales se utilizaron dos tcnicas de tincin, la tincin de Giemsa y la de May Grnwald-Giemsa. El anlisis microscpico permiti encontrar la totalidad de las clulas sanguneas mencionadas, constatndose mucha similitud a las imgenes que aparecen en la literatura. Solo resto encontrar un eosinfilo en las muestras de tincin Giemsa, lo que se atribuy a su bajo porcentaje. Adems se encontraron blastos indiferenciados en ambas muestras y eritrocitos crenados y lisados en la tincin May Grnwald-Giemsa. INTRODUCCIN La sangre es un tejido conectivo especializado. Debido a que circula alrededor de todo el cuerpo es el vehculo ideal para el transporte de sustancias como nutrientes, transporte de productos de desecho, metabolitos y productos celulares, entre otros. Tambin contribuye a regular la temperatura corporal y a mantener el equilibrio acidobsico osmtico del cuerpo. Finalmente la sangre acta como una va de migracin entre los diversos compartimientos del tejido conectivo. Est compuesta por elementos figurados que representan aproximadamente el 50% de su volumen, dentro de los cuales se encuentran los eritrocitos, leucocitos y plaquetas, que estn suspendidas en un componente lquido (matriz celular) conocido como plasma (1,4). Eritrocitos Los eritrocitos o glbulos rojos son las clulas ms abundantes de la sangre, se encargan
1

de transportar el O2 y el CO2 desde y hacia los distintos tejidos del organismo. Se caracterizan por ser anucleadas y sin organelos, con forma similar a un disco en forma bicncava de 7.5 m de dimetro, 2.0 m de grosor en su regin ms ancha y en el centro, su regin ms delgada 1,0 m de grosor, siendo las clulas sanguneas. Se tien de rojo con la tincin de May Grnwald-Giemsa (MGG) (1,4).

Figura 1. Eritrocitos y plaquetas. Tincin de MGG, con un aumento de 1000x. (Recupera do de http://www.facmed.unam.mx/)

Estudiante de Medicina, Facultad de Medicina, Universidad de La Frontera, Temuco, Chile.

Figura 2. Clulas sanguneas. (Texto y Atlas de Histologa, 2002) Plaquetas Las plaquetas son fragmentos de clulas madre de la mdula sea (megacariocitos). Al microscopio, se ven como pequeos valos, muchas veces forman grumos plaquetarios. Circulan durante alrededor de 10 das por el torrente sanguneo antes de finalizar su vida en el bazo. Tienen un rol fundamental dentro de procesos que evitan la hemorragia y la coagulacin dentro del vaso sanguneo. Una elevada cantidad de plaquetas en la sangre puede causar problemas de salud, debido a que una excesiva coagulacin sangunea puede provocar formacin de cogulos causantes de un accidente cerebro o cardiovascular. Por otro lado, la falta de plaquetas en la sangre puede dar lugar a hemorragia extensas (2). Leucocitos Los leucocitos o glbulos blancos, son clulas nucleadas de funcin defensiva, que no actan en el torrente sanguneo, sino que lo utilizan como medio de transporte para viajar de una regin del cuerpo a otra. Cuando los leucocitos llegan a su destino, migran entre las clulas endoteliales de los vasos sanguneos penetran en los espacios del tejido conectivo (diapdesis) y llevan a cabo su funcin. Dentro del torrente sanguneo y en los frotis los leucocitos son redondos. Un adulto normal posee una con-

centracin de glbulos blancos en la sangre de 6.000-10.000 por milmetro cbico (1,4). Los leucocitos se clasifican en dos grupos: Granulocitos o polimorfonucleares que contienen grnulos especficos en su citoplasma y un ncleo lobulado, dentro de los que se encuentran los neutrfilos, eosinfilos y basfilos. Por otro lado estn los agranulocitos o monomorfonucleares, que no presentan granulaciones y su ncleo es redondeado, donde se encuentran los monocitos y linfocitos (1). Los neutrfilos constituyen el mayor porcentaje de glbulos blancos (60-70%) y se caracterizan por presentar un ncleo formado por 2-5 lbulos (siendo 3 lo ms frecuente) unidos entre s a travs de finos puentes de cromatina, y por poseer un citoplasma cargado de granulaciones especficas poco afines a los colorantes. Su dimetro va desde los 9 a los 12 m en frotis (1). Su principal funcin es fagocitar y destruir a bacterias y participar en el inicio del proceso inflamatorio. Su gran cantidad de grnulos y lisosomas en su citoplasma con diferentes contenidos que les permiten realizar sus funciones especficas (3). Los eosinfilos representan entre el 2 y 3% del total de glbulos blancos, tienen 10 a 14 m de dimetro en la sangre, un ncleo bilobulado, con sus lbulos unidos por un puente de filamento delgado de cromatina y envoltura nuclear. Presenta grnulos de forma ovoide y de tamao medio. Se producen en la mdula sea. Estas clulas fagocitan y eliminan complejos de antgenos con anticuerpos que aparecen en casos de alergia. Tambin destruyen gusanos parsitos (3). Los basfilos son los menos abundantes, constituyendo menos del 1% del total de glbulos blancos, por lo que son difciles de encontrar. Constan de un ncleo voluminoso de forma

irregular, con aspecto de letra S. Tienen un dimetro de 8 a 10 m y contienen grnulos ms grandes que los dems granulocitos, los cuales tienden a ocultar el ncleo. Los basfilos inducen el proceso inflamatorio ya que secretan histamina, adems de heparina, con efecto anticoagulante (1). Los monocitos son las clulas ms grandes, miden 12 a 20 m. Son producidos en la mdula sea y liberados al torrente sanguneo. Tienen un solo ncleo grande ovoide, en forma de herradura, a veces lobulado, el cual se ve ms claro que el de los linfocitos, generalmente, ubicado excntricamente. Estn encargadas de la defensa contra agentes infecciosos y slo representan entre el 3 y 8% de los leucocitos. Su funcin principal es la fagocitosis. Luego de

circular de 1 a 3 das por el torrente sanguneo, pasan a los tejidos unindose a las clulas endoteliales. Una vez all, se convierten en macrfagos para realizar la fagocitosis. En el proceso de inflamacin, los macrfagos activados sintetizan y liberan molculas que atraen monocitos a la zona. La actividad de los monocitos es regulada por diversas citoquinas. Al microscopio con tincin May Grnwald-Giemsa el ncleo se colorea rojo violeta y el citoplasma gris (1). Los linfocitos son los segundos leucocitos ms abundantes, siendo entre un 20 a un 30% del total. Forman una familia de clulas redondas, de distintos tamaos: pequeos (entre 6 y 8 m) y mayores (hasta 18 m de dimetro). Los pequeos corresponden al mayor porcentaje de linfocitos, son de ncleo esfrico y con una

Figura 3. Leucocitos en tincin de MGG, con un aumento de 1000x. A)Neutrfilo, B)Eosinfilo C) Basfilo, D)Monocito y E)Linfocito. (Texto y Atlas de Histologa, 2002)

escotadura en algunas ocasiones. Este ncleo se ve oscuro en las preparaciones debido a la disposicin de la cromatina. Su citoplasma es muy pequeo. Algunos viven das y otros aos. Existen distintos tipos de linfocitos, los B, los T y las clulas nulas, que a su vez se subdividen en otros, los cuales son identificables con tcnicas inmunolgicas. Los linfocitos T son las ms abundantes y las que ms viven, estn encargadas del sistema inmunitario de mediacin celular. Los B, en cambio, son y duran menos, y estn a cargo del sistema inmunitario de mediacin humoral, es decir, se diferencian en clulas plasmticas que producen anticuerpos. Entre las clulas nulas se encuentran las clulas madre circulantes y las asesinas naturales que sin intervencin de otras clulas pueden destruir clulas extraas o infectadas con virus. Son diferentes a los dems en que vuelven a la sangre luego de haber efectuado su funcin en los tejidos (1).

orgnicos que tienen alguna afinidad especfica por los materiales celulares. Dos tcnicas de tincin fueron utilizadas durante este laboratorio, estas fueron Giemsa y May Grnwald Giemsa (4). La tincin Giemsa es muy importante en microbiologa e histologa, ya que es utilizada habitualmente para la observacin de frotis sanguneos, cortes histolgicos y otros tipos de muestras biolgicas. Su misin es poner de manifiesto diferencias entre microorganismos celulares o estructuras que forman parte de ellos. Esta tincin tiene gran relevancia en hematologa, ya que el diagnstico de muchas enfermedades hematolgicas puede llevarse a cabo con tan solo observar las caractersticas morfolgicas de las clulas sanguneas. ste tinte es una coloracin compuesta, ya que est formado por varios colorantes. Los tintes neutros utilizados combinan el azul de metileno como tinte bsico y la eosina como tinte cido, lo que da una amplia gama de colores. El azul de metileno es un colorante metacromtico, de ah que muchas estructuras se tian de prpura y no de azul (4). La tincin May Grnwald-Giemsa consiste en una combinacin de dos coloraciones sucesivas y se basa en la afinidad de los elementos celulares por los colorantes cidos o bsicos. Ambos colorantes utilizados son inactivos, es el contacto del agua el que les da un poder colorante. sta tcnica de tincin es muy utilizada para la observacin de frotis sanguneos, ya que permite diferenciar los distintos tipos de clulas presentes y sus estructuras ms especficamente que la tcnica Giemsa, pues adems de teir los ncleos (caracterstica aportada por el azul de metileno presente en Giemsa), permite una clara diferenciacin entre leucocitos granulados (neutrfilos, basfilos y eosinfilos) y los no granulados (linfocitos y monocitos). Esto

Neutrfilos Linfocitos Monocitos Eosinfilos Basfilos

Figura 4. Proporciones de los leucocitos. Fundamentos de la tincin Las tcnicas de tincin o de coloracin son utilizadas en laboratorios durante observaciones de cortes histolgicos, para mejorar el contraste de la imagen vista al microscopio, destacando estructuras propias de cada tipo de clula. La mayora de los colorantes son compuestos

se debe a que la tincin May-Grnwald contiene eosina, colorante que detecta a los grnulos citoplasmticos y mejora la coloracin de los eritrocitos (4).

Figura 5. Megacariocito en tincin MGG, con un aumento de 1000x. El color violeta rojizo de los ncleos del megacariocito y de las clulas que lo rodean. El color se debe a la unin del azur I con los radicales fosfato del ADN (5) (Perea-Sasian J, 2003). Fundamentos de la microscopa ptica Los conocimientos actuales sobre estructuras celulares han sido posibles gracias al uso del microscopio (del griego mikrs: pequeo y skopin: observar), ya que permite observar elementos de tamaos muy pequeos y detalles estructurales diminutos, que resultan imposible identificarlos a simple vista. Existen diversos tipos de microscopios y en este estudio se utiliz el microscopio ptico, tambin llamado microscopio de campo claro o microscopio fotnico, utiliza un haz de luz blanca que atraviesa la muestra biolgica, siempre que sta sea lo bastante fina. Cada detalle estructural se va visualizando debido a las diferencias de absorcin de la luz en las diferentes partes de la muestra biolgica. Este microscopio es adecuado para preparados coloreados (tincin). La imagen que forma es una imagen virtual, invertida y aumentada (6). Posee un sistema mecnico, un sistema ptico y un sistema de

iluminacin. El sistema mecnico es una pieza fija, cuyas partes importantes son una base o pie permite el apoyo del microscopio y normalmente alberga el sistema de iluminacin, un brazo o columna que soporta al sistema ptico, al cabezal portaoculares, al revlver portaobjetivos y al anclaje de la platina, una platina donde se coloca el preparado para su observacin por medio de un dispositivo de sostn y contiene un orificio central por donde pasa el haz de luz. Inferiormente, posee un sistema de fijacin del condensador. Por ltimo poseen tornillos de enfoque, hay de dos tipos, el tornillo macromtrico que permite un enfoque rpido (aproxima el enfoque), y el tornillo micromtrico que se utiliza para definir dicho enfoque (7). El sistema ptico es un cuerpo tubular donde van insertos los oculares y los objetivos. Posee tres sistemas separados de lentes (7). El lente condensador es el que se ubica entre la fuente de luz y el preparado. Su funcin es concentrar los rayos de luz de la fuente de iluminacin del microscopio en un punto o foco. Permite ajustar la cantidad de luz que llega a la muestra a travs de un diafragma. Los lentes objetivos son lentes primarias de aumento, se encuentran cerca del objeto en observacin. Estn colocados sobre un sistema

Figura 6. Microscopio ptico y sus elementos.

revlver. Pueden ser de tres tipos diferentes y el objetivo de 100x requiere aceite de inmersin, que es utilizado para disminuir la refraccin de la luz, pues esta pasa desde el aire al vidrio y luego a un medio oleoso con bajo coeficiente de refraccin, similar al del vidrio, sin mayores desviaciones, logrndose una clara imagen. Y por ltimo los lentes oculares que estn cercanos al ojo del observador, aumentan la imagen real proyectada por el objetivo (7). El sistema de iluminacin est compuesto por la fuente de luz, los filtros y el condensador con el diafragma (7).

Dada la importancia de las clulas ya mencionadas, el objetivo del presente estudio es caracterizar las clulas sanguneas tratadas con la tincin de May Grunwald-Giemsa (MGG) y tincin de Giemsa (8). MATERIAL Y MTODO Preparacin de frotis de sangre Se utilizaron 5 gotas de sangre extrada de 4 miembros del equipo, para lo que fue necesario

Figura 7. Materiales utilizados en la preparacin de los frotis de sangre. A) Povidona yodada, B) Algodn, C) Lancetas estriles, D) Portaobjetos, E) Marcador permanente, F) Sangre humana, G) Toallas de papel, H) Caja desechos cortopunzantes e I) Contenedor de materiales de desecho.

Figura 8. Materiales utilizados para realizar la tincin Giemsa en los frotis de sangre. A) Alcohol 96%, B) Solucin Giemsa y C) Recipiente plstico con agua potable.

Figura 9. Materiales utilizados para realizar la tincin May Grnwald-Giemsa en los frotis de sangre. A) Solucin May Grnwald, B) Solucin Giemsa y C) Recipiente plstico con agua potable.

Figura 10. Materiales utilizados para realizar anlisis microscpico de los frotis de sangre. A) Microscpico ptico, B) Aceite de inmersin, C) Cmara digital y D) ter de petrleo.

desinfectar el dedo con un algodn con povidona yodada y pincharlo con una lanceta estril, que posteriormente fue depositada en un contenedor de material cortopunzante. Cada uno deposit una gota de sangre en el centro de un portaobjeto propio y luego esta se esparci utilizando otro portaobjeto desde la mitad de portaobjeto hacia abajo, dejando una fina pelcula de sangre. Luego se dejaron secar los frotis al aire por 5 minutos aproximadamente, mas algunos tuvieron que dejarse por ms tiempo, por un mayor grueso del frotis (8). Preparacin de las muestras con tincin de Giemsa Para la tincin de Giemsa se sumergieron 3 de los frotis en alcohol 96% durante 2 minutos

para la fijacin de la muestra. Se retiraron los frotis del alcohol y se sumergieron en solucin de Giemsa y se dejaron incubar las muestras durante 10 minutos a temperatura ambiente. Luego se sumergieron varias veces en un recipiente con agua potable y se dejaron secar las preparaciones al aire por 10 minutos, estando listas las muestras . Preparacin de las muestras con tincin de May-Grnwald-Giemsa Para la tincin de MGG los frotis secos se sumergen inmediatamente en la solucin MayGrnwald y se dej incubar por 10 minutos. Luego se retiraron las preparaciones y se sumergieron en solucin Giemsa por 10 minutos. Finalmente se elimin el exceso de colorante

Figura 11. Procedimiento en la preparacin de los frotis de sangre. A) Se pinch el dedo con la lanceta estril, previamente desinfectado con povidona. B) Despus depositada la gota de sangre en un portaobejeto, esta se esparci utilizando otro. C) El frotis se dej secar por 5 minutos.

Figura 12. Procedimientos realizados en la tincin Giemsa en los frotis de sangre. A) Se sumergi el frotis por 2 minutos en el alcohol, B) Se sumergi por 10 minutos en la solucin Giemsa y C) Se quit el exceso de colorante en el recipiente plstico con agua potable y se dej secar.

Figura 13. Procedimientos realizados en la tincin May Grnwald-Giemsa en los frotis de sangre. A) El frotis se sumergi por 5 minutos en solucin May Grnwald, B) Luego se sumergi por 10 minutos en solucin Giemsa y C) Se elimin el exceso de colorante en el recipiente plstico con agua potable y se dej secar. sumergiendo varias veces el portaobjetos en un recipiente con agua. Anlisis microscpico de las preparaciones Posteriormente se analizaron en el microscopio ptico aumentando la imagen 100x, 400x y 1000x. Para el uso del microscopio se puso cada muestra en la platina y se sujet con las pinzas metlicas. Se comenz utilizando el objetivo 10x, acercando con el macromtrico al mximo la preparacin con la lente del objetivo, este procedimiento se hizo mirando directamente el objetivo y la muestra para no correr riesgo de que el objetivo choque con la preparacin. Luego mirando por los oculares se separ lentamente la muestra del objetivo con el macromtrico hasta observar algo ntido y despus se us el micromtrico para volver ms ntida la imagen. Se pas al objetivo 40x girando el revlver y se gir el micromtrico para obtener un mejor enfoque y nitidez. Se gir el revlver entre el objetivo 40x y 100x y se agreg el aceite de inmersin en el crculo de la luz de la preparacin. Luego se gir el revlver para poner el objetivo 100x y se utiliz el micromtrico para un enfoque ntido. Se tomaron fotografas acoplando manualmente una cmara digital al ocular del microscpio. Finalmente se limpi el objetivo 100x con un algodn embebido en ter de petrleo para retirar los restos de aceite. RESULTADOS El anlisis microscpico de los frotis de sangre con los objetivos de 10x, 40x y 100x, muestran principalmente glbulos rojos. Los leucocitos se aprecian claramente slo cuando son aumentados 1000 veces. En las ambas tinciones aparecieron las clulas sanguineas mencionadas anteriormente practicamente en su totalidad (eritrocitos, plaquetas, eosinfilos, basfilos, neutrfilos, monocitos y linfocitos).

Figura 14. Anlisis de los frotis en el microscopio.

Figura 15. A) y C) Corresponden a la muestra 3 de tincin Giemsa, con un aumento de 100x y 1000x respectivamente. B) Corresponde a la muestra 1 de tincin May Grnwald-Giemsa con un aumento de 400x.

Figura 16. Muestras con tincin de Giemsa con un aumento de 1000x. A) Corresponde a un neutrfilo de la muestra 3, B) a plaquetas de la muestra 3, C) a un basfilo de la muestra 3, D) a un monocito de la muestra 2 y E) a un linfocito de la muestra 2. En la tincin Giemsa, en las muestras 1 y 2 , los glbulos rojos se muestran relativamente aglutinados, mientras que en la muestra 3 se ven ntidamente, motivo por el cual se presentan fotografas obtenidas mayoritariamente de esta muestra. La nica clula no encontrada fue un eosinfilo. Por otro lado en las dos muestras de tincin May Grnwald-Giemsa se observan claramente todas las clulas sanguneas que fueron mencionadas anteriormente. Adems se encontraron eritrositos crenados y lisados y un blasto indiferenciado.

Figura 17. Muestras con tincin de May Grnwald-Giemsa con un aumento de 1000x. A) Corresponde a un neutrfilo de la muestra 2, B) a un eosinfilo de la muestra 1, C) a un basfilo de la muestra 1, D) a un monocito de la muestra 2, E) a un linfocito de la muestra 2 y F) a plaquetas de la muestra 2.

Figura 18. Muestra 2 de tincin de May Grnwald-Giemsa. A) Corresponde a un eritrocito crenado con aumentro de 1000x, B) a un eritrocito lisado con aumentro de 1000x y C) a un blasto indiferenciado con aumentro de 400x. DISCUSIN DE RESULTADOS El uso del microscopio es un importante factor para el correcto estudio de los componentes de clulas y tejidos (en este caso en 5 muestras de sangre), debido a que por el tamao que poseen, requiere el uso de instrumentos que permitan ampliar muchas veces ms la imagen de las estructuras que los constituyen. Mediante el anlisis microscpico, se pudo caracterizar la morfologa de clulas sanguneas (leucoci-

tos, plaquetas y eritrocitos) gracias a dos tipos de tinciones realizadas en el experimento, la tincin Giemsa y la tincin May GrnwaldGiemsa. Durante el desarrollo de las actividades del laboratorio, se realiz cada procedimiento como lo indican las instrucciones. A pesar de esto, algunos pasos no resultaron como se describa en el mtodo. Una de las principales causas, pudo ser el factor de que estudiantes no experimentados trabajaran con tinciones por primera vez; esto posiblemente alter el resultado esperado, pudiendo haber un desfase en el tiempo de tincin. Otra de las causas pudo ser el factor de la temperatura, ya sea del agua o del aire en el tiempo de secado o quizs un error al esparcir los frotis en los portaobjetos. Para una buena visualizacin de los leucocitos en una tincin de frotis de sangre, es necesario que este no sea excesivamente grueso ni delgado. Al extender manualmente la gota de sangre en el portaobjetos se pueden distribuir de forma irregular los leucocitos. En el caso de que el frotis sea muy grueso, se dificulta la observacin de los eritrocitos, y la diferenciacin de los monocitos y linfocitos. En el caso de que sea muy delgado, la mayora de neutrfilos, basfilos, eosinfilos y monocitos podan ser hallados en las reas perifricas. En el caso de la muestra 1 de tincin Giemsa, se puede apreciar una aglutinacin de los eritrocitos debido a un error en el esparcimiento de la gota de sangre, que dio como resultado un frotis muy grueso que provoc que los glbulos rojos no se pudieran diferenciar claramente. En la muestra 2 y 3 no se observ aglutinacin de los eritrocitos tan exagerada como en la muestra 1, y fue posible una mejor observacin de los glbulos rojos en comparacin a la otra muestra. En la muestra 1 de tincin May Grnwald-Giemsa exista un sector de la muestra

en que el frotis result muy grueso, por lo que se observ tambin una aglutinacin, que no afect en mayor grado la observacin. En la muestra 2, en cambio, al esparcir la sangre, el frotis result muy delgado, por lo que fue dificultoso encontrar los leucocitos en el centro del portaobjetos, hallndose mayoritariamente en los extremos de la muestra. Con la solucin de tincin Giemsa, los eritrocitos se tien de color rosa, las plaquetas de color violeta, los neutrfilos (ncleo de color azul violeta, citoplasma rosa y grnulos de color violeta rojizo), los eosinfilos (citoplasma de color rosa con grnulos rojo anaranjado), los basfilos (ncleo de color prpura y granulacin de color azul oscuro), los monocitos y linfocitos (ncleo de color azul violeta, citoplasma azul, ms claro en linfocitos que en el monocito). La mezcla de la solucin de tincin de MayGrnwald con la de Giemsa, proporciona una mayor visin y eficacia para valorar las diferentes muestras sanguneas, dando como resultado que los eritrocitos se tien de color entre rosado y beige, las plaquetas de color violeta, los neutrfilos (ncleo de color azul a prpura, citoplasma de violeta a marrn plido y grnulos de color violeta a marrn), los eosinfilos (citoplasma de color violeta a marrn plido con grnulos anaranjados), los basfilos (ncleo de color azul a prpura y grnulos de color azul a negro) y los linfocitos (ncleo de color prpura y citoplasma azul). En la muestra 1 sometida a tincin Giemsa, los eritrocitos se tieron de color azul, debido al elevado grosor en la extensin del frotis de sangre o posiblemente debido al exceso de tincin. Este ltimo ya sea debido a que la tincin Giemsa no fue retirada completamente durante el lavado o a que la muestra se expuso por un tiempo muy prolongado a la solucin de coloracin Giemsa. En las dems muestras

de ambas tinciones, no se encontraron mayores diferencias en los colores de los leucocitos, slo en algunos sectores se podan apreciar pequeos lugares en que el colorante se concentraba, pero no era relevante en la observacin de las clulas.

la hora del anlisis, es por esto que sin herramientas como por ejemplo el microscopio ptico, sera imposible comprender la estructura celular como se conoce actualmente. Por otra parte, se puso en evidencia la importancia que tiene el conocer previamente los tipos de clulas sanguneas con las que se trabajar y sus caractersticas morfolgicas, pues al efectuar las tcnicas de tinciones es necesario saber distinguir entre sus formas nucleares y/o sus granulaciones como conocimiento base que permite una aplicacin adecuada del procedimiento. Este procedimiento fue seguido de acuerdo a las etapas indicadas, de esta forma: Utilizando tincin Giemsa, se distinguieron las formas nucleares de los leucocitos, para poder diferenciarlos gracias a que esta tincin posee azul de metileno, un colorante que tie la cromatina del ncleo, en contraste, la tincin May Grnwald-Giemsa nos brind un anlisis ms especfico ya que posee un colorante que marca los grnulos citoplasmticos de los leucocitos, la eosina. A raz de esto, en el trabajo se fue capaz de diferenciar entre leucocitos granulados (neutrfilos, basfilos y eosinfilos) y no granulados (linfocitos y monocitos). Recopilando los datos hasta entonces adquiridos, se pudo establecer una concordancia entre los conocimientos previos y los aprendidos en la actividad, en efecto: se comprobaron diversas de las caractersticas presentes en las clulas, as, evidentemente los eritrocitos son las clulas ms abundantes de la sangre y las plaquetas fueron observadas como pequeos grupos de valos. En cuanto a los leucocitos, al ser el encargado de fagocitar bacterias, el ms abundante fue el neutrfilo, a diferencia de basfilos y eosinfilos, los cuales son escasos a raz de su especificidad acentuada en inflamaciones y alergias respectivamente. Sumados a estos, se pudo evidenciar el gran tamao de los monoci-

Figura 18. Muestra 1 de tincin de Giemsa. Existe aglutinamiento de los eritrocitos, el frotis tiene un grosor elevado y probablemente tiene una sobretincin. A pesar de estos errores mnimos durante el proceso del experimento, como resultado, localizamos casi en su totalidad a las clulas sanguneas solicitadas: eritrocitos, plaquetas, linfocitos, monocitos, neutrfilos, basfilos y eosinfilos. Slo nos rest encontrar un eosinfilo en las muestras de tincin Giemsa, atribuible a su baja cantidad (entre el 1 a 3% de los leucocitos). Demostrando que las tinciones resultaron de manera efectiva y que nos permitieron una correcta visualizacin de las clulas. CONCLUSIN Los mtodos utilizados en laboratorio nos permitieron de un modo prctico conocer y aprender sobre las estructuras microscpicas que son tan importantes para la vida, lo que nos hace valorar an ms los instrumentos del laboratorio como pilares fundamentales a

tos; los llamativos ncleos redondeados de los linfocitos, entre otras variadas observaciones. Situndonos en el contexto de laboratorio, fuimos capaces de analizar la informacin adquirida teniendo como base la aplicacin de los fundamentos conceptuales de la metodologa cientfica, adems de describir y diferenciar las estructuras celulares normales y algunas particularidades relevantes de anormalidad funcional a nivel celular. En el desarrollo de esta actividad, se foment la capacidad para trabajar e integrar de manera efectiva el equipos de trabajo, valorando en todo momento la importancia de la colaboracin colectiva para efectuar cada procedimiento bajo un ambiente adecuado y para posteriormente poder comunicar estos conocimientos adquiridos de forma oral y escrita. En resumen, podemos concluir que a travs de la implementacin utilizada, el adecuado seguimiento de los procedimientos y sobre todo la disposicin del trabajo organizado y en equipo, aprendimos tanto en el mbito acadmico como formativo, considerando lo provechoso que resulta una actividad como esta en nuestra proyeccin como futuros profesionales de la salud.

3. Caneiro J, Junqueira L. Histologa bsica, Texto y atlas. 5ta ed. Espaa : Masson; 2001 4. Vives JL, Aguilar JL. Manual de Tecnicas de laboratorio en Hematologa. 3ra ed. Espaa : Masson; 2006 5. Perea-Sasian J. Cien aos del colorante de Giemsa. Biomd.2003;21(1):5-18 6. Esteban F, Montuega L, Calvo A. Tcnicas en Histologa y Biologa celular. 1ra ed. Espaa : Elsevier; 2009 7. Negroni M. Microbiologa estomatolgica: Fundamentos y gua prctica. 2da ed. Espaa : Editorial Panamericana; 2009

8. Paredes M. Gua de Actividades Experimentales N1: Anlisis morfolgico de clulas sanguineas por medio de tincin nuclear y citoplasmtica. Universidad de la Frontera. Temuco. Chile. 2013

REFERENCIAS 1. Gartner LP. Texto Atlas de Histologa. 2da ed. Mexico : McGraw-Hill; 2002 2. Garca MM, Coma AC. Caractersticas estructurales y funcionales de las plaquetas. Rev Cubana Angiol y Cir Vasc.2000;1(2):132-141