BIOLOGIA DA SECREO DOS PRODUTOS NATURAIS Protocolo 1

Fixao de folhas de oliveira para incluso em parafina. Nota: alguns dos compostos utilizados so txicos, deve usar a hotte para os poder manipular. Material vegetal Folhas de oliveira Folhas de alfazema Material Glutaraldedo a 5% Tampo Fosfato 0,1 M pH 7,4 (o pH tem que ser acertado) Lamina de barbear lcool absoluto Xilol Parafinas gua destilada Procedimento: - Prepare as solues necessrias Glutaraldedo a 2,5% lcool a 50%; 70%; 96% e 100% Xilol:lcool (50:50 %) Xilol:Parafina (50:50 %) (facultativa) - Com a ajuda de uma lmina de barbear faa os cortes nas folhas e coloque o material na soluo de Glutaraldedo 2,5% em Tampo fosfato - mantenha o material 20 minutos na soluo anterior a 4C. - faa a desidratao do material mergulhando-o em solues de etanol sucessivamente mais concentradas: Com a ajuda de um pincel retira o material da soluo fixadora e faa uma lavagem de alguns minutos em tampo fosfato Transfira o material para a primeira soluo de lcool a 50%, mantenha-o nessa soluo 15 minutos Transfira o material para a soluo de lcool a 70% e mantenha-o ai por 30 minutos

Transfira as amostras para a soluo de lcool a 96% e mantenha-o ai 45 minutos Transfira as amostras para lcool a 100% e deixe ficar por 2h Transfira as amostras para lcool a 100% e deixe ficar por toda a noite a 4C. Aula seguinte: Incluso do material Utilize a soluo Xilol: lcool para mergulhar o material durante 45 minutos Transfira para Xilol puro por 1h Transfira para nova poro de Xilol por 2h Transfira para nova poro de Xilol por mais 3h (durante a noite em frascos muito bem vedados a 4C) Transferir para uma soluo de Xilol:Parafina (42C) 45 minutos Transferir para parafina (56C) 1h Transferir para parafina durante a noite na estufa Transferir para os moldes e deixar no frigorifico 30 minutos Talhar o bloco de modo a poder usa-los no microtemo