AMINOACIDOS Y PROTEINAS I.

INTRODUCCIN: En el presente tema abordaremos aspectos generales sobre estructura y funcin de los aminocidos y las protenas en el organismo, as como de los medios de laboratorio para identificar a los mismos. Por la importancia y el papel que desempea las protenas, es necesario conocer la funcin de un grupo de ellas, como las protenas plasmticas, para tal efecto realizaremos una revisin general de las mismas. II. OBJETIVOS: Conocer y determinar las diferentes propiedades fsicas y qumicas de los aminocidos y protenas Evaluar mediante pruebas fsicas y qumicas la presencia de aminocidos y protenas en las diferentes muestras. Emplear tcnicas de reconocimiento de aminocidos y de protenas. III. FUNDAMENTO TEORICO: Las protenas son bipolmeros de alto peso molecular, conformadas por unidades monomricas bsicas, denominadas aminocidos, de los que 20 son biolgicamente importantes. La unin entre aminocidos se forma mediante la interaccin del grupo carboxilo de un aminocido con el grupo amino de otro para formar un enlace peptdico. Siendo as que la adicin secuencial de aminocidos origina un pptido y finalmente una protena. Las protenas forman estructuras de diversas complejidad que podemos resumir en las siguientes caractersticas biolgicas: Ejercen y tienen relacin estrecha entre estructura y funcin (las del msculo actan transluciendo energa mecnica). Disponen de flexibilidad importante de su estructura, de ah su diversidad infinita (hemoglobina, miosina , albmina, colgeno y todas en s).

Disponen de un mecanismo de formacin que posee fidelidad absoluta e inmutable para cada protena (esto quiere decir que cada protena tiene una funcin determinada en el organismo). Entre las caractersticas fsicas y qumicas de las protenas sealamos las siguientes :

La gran masa molecular de las protenas determina su carcter coloidal en soluciones acuosas, por lo que su dimetro en solucin es mayor a 0,001 um. Esta propiedad coloidal les confiere una gran afinidad hacia el agua, siendo por esto muy soluble en ella. Otras propiedades coloidales caractersticas de las protenas son: sus diluciones tienen aspecto opalescente; producen el fenmeno de Farady-Tyndall (ver difraccin); movimiento browniano (es el movimiento permanente y desordenado de las partculas de materia muy pequea (de micrmetros solamente) en el seo del agua y otros lquidos; se debe a los choques de las partculas con las molculas del lquido, las cuales segn la teora cintica de la materia, se hallan sometidas constantemente a la agitacin trmica); no son filtradas por ultrafiltracin; poseen presin osmtica, pueden ser separadas de otros compuestos por dilisis a travs de una membrana semipermeable.

La solubilidad proteica en agua, les permite formar sales en agua y disoluciones acuosas de sustancias polares. Esta propiedad esta ligada a la hidratacin de sus molculas, por esto, cualquier factor que altere esta propiedad provocar la disminucin de su solubilidad en agua y su consecuente precipitacin. Esto ltimo podra lograrse al agregar a una solucin acuosa proteica compuesta deshidratantes como alcohol, acetona, soluciones de sales neutras de metales alcalinos y otros compuestos que lograran la precipitacin proteica. Esta precipitacin (con sales alcalinas) no produce la desnaturalizacin de las protenas, es as, que este procedimiento es usado para separar protenas y mantener su actividad biolgica; l que no ocurre si se utiliza metales pesados (acetato de plomo). En resumen, la precipitacin de protenas, consiste en la prdida de sus propiedades

hidrfilas, adquiriendo caractersticas hidrfobas, con prdida de carga elctrica. Las protenas se comportan tambin, como electrlitos anfteros, es decir que poseen simultneamente caractersticas de cidos y bases; se debe tomar en cuenta que esta propiedad proteica deriva de sus bases estructurales, los aminocidos. Un grupo anftero, como un aminocido, puede disociar sus grupos amino y carboxlico de acuerdo al pH del medio, siendo as que en medio cido, una protena se cargar positivamente y en el medio alcalino ocurrir lo contrario. Esta propiedad de los aminocidos en la estructura proteca, es utilizada para la identificacin de las protenas por medio de la electroforesis o cromatografa (esta ltima para diferenciar aminocidos y protenas). Todas las reacciones para identificar aminocidos y protenas estn basadas en la presencia de grupos qumicos, en los enlaces o en sus propiedades fsico-qumicas. Las reacciones de reconocimiento pueden dividirse en dos grupos independientes: a. Reacciones de precipitacin: que a su vez, pueden subdividirse en dos grupos: Precipitacin de protenas sin desnaturalizacin, por ejemplo utilizando sulfato de amonio ((NH4)2SO4), cloruro de amonio (NH4Cl) o sulfato de sodio (Na2SO4) Precipitacin de protenas con desnaturalizacin que utilizan sales de metales pesados (sales de plomo, de cobre, de mercurio y otras), o la temperatura mayor a 80C, cidos inorgnicos y orgnicos b. Reacciones coloreadas: como la reaccin de Biuret, de la ninhidrina, del cido perico, la xantoproteca, la Millon y muchas otras. Estas reacciones permiten identificar a ciertos grupos de aminocidos de acuerdo a los grupos funcionales que contengan. En la prctica incidiremos en identificar aminocidos y protenas de diferentes soluciones proteicas, por medio de estas tcnicas sencillas, que no implican el uso de instrumentos sofisticados (hoy en da se disponen de tcnicas de

identificacin de aminocidos y protenas altamente especializadas, como diversas formas de cromatografa automatizada, secuenciacin de protenas, electroforesis y otras que pueden ser consultadas en libros de

especializacin). Las protenas son sustancias anfteras que pueden reaccionar con H2O de una de estas 2 maneras: Protena - COO- + H2O NH3+ Protena - COOH + OHNH3+

Protena - COO- + H2O NH3+

Protena - COOH + H3O NH2+

Segn el nmero relativo de grupos carboxilo y amino libres en la molcula, la protena en solucin dar reaccin cida o bsica. En otras palabras, algunas molculas de protena en solucin acuosa se cargan positivamente y otras se cargan negativamente. Para hacer una protena elctricamente neutra, en solucin acuosa es necesario generalmente aadir una pequea cantidad de cido o base de Bronsted. El pH en el que una protena determinada es elctricamente neutra se conoce como punto isoelctrico de esa protena. Todas las protenas son menos solubles en el punto isoelctrico y, algunas, como la casena, la metaprotena, son insolubles. Para la hidrlisis cida de una protena en los aminocidos que la componen Se requiere una emisin de flujo muy prolongada. Son macromolculas construidas a base de aminocidos, unidos por enlace Peptdico as:

R |

R | H

R | NH2 - C - H + NH |

R | C | COOH

NH2 - C - H + H N H - C H + H2O | COOH | H2O

CO

Enlace peptdico

Las protenas contienen C, H, O, N, casi siempre S, a menudo P y a pequeas cantidades de metales como MN, Fe, Mg, etc. Actualmente hay ms de 26 aminocidos reconocidos, de estos unos 10 se designa como aminocidos esenciales, ya que no pueden ser sintetizados por el organismo, sino que son: Arginina, histidina, leucina, isoleucina, lisina, metionina, fenilalanina, triptofano, treonina, valina varan algo, segn la especie animal. Tanto aminocidos como protenas tienen carcter anftero, propiedad que deriva de la presencia de los grupos cidos (carboxilo: -COOH); y bsicos (amino: -NH2), simultneamente en la molcula, cuya interaccin intramolecular cido-base origina una forma bipolar: Zwitterion. Cualquier variacin del pH del medio dar lugar a que predomine una de las cargas, de aqu que se puede comportar como cido base, segn el pH del medio, as: R | NH2 - C - H H | COOH Anin | COOZwitterion | COOH Catin R | (+) R | C -

NaOH + H3N - C - H + HCL NH3 -

Las protenas pueden ser desdobladas para crear formas intermedias de tamao y diferentes propiedades, y esto se logra por medio de cidos, bases, enzimas: los productos de la degradacin proteica, en orden decreciente de tamao y complejidad son: Protenas proteasas peptonas polipticos - ppticos aminocidos amoniaco nitrgeno elemental. Las desnaturalizacin de protenas esta relacionada con cualquier modificacin de su estructura, sin rompimiento del enlace peptdico. Esta se puede lograr con el calor, sustancias qumicas, alcoholes, bases, etc. Las reacciones cromticas son reacciones coloreadas de reconocimiento de las protenas, generalmente de las protenas conjugadas que presentan ciertos aminocidos especficos. Por ejemplo: la reaccin Xantoproteica: sirve para reconocer ncleos aromticos.

III.- MATERIALES

Mechero Bunsen Vaso de precipitados Tubo de ensayo Gradilla Pinzas Piceta

Reactivos

Muestra Problema( clara de huevo , leche evaporada ). NaOH CuSO4 HNO3 Reactivo Milln ( HNO3 + Hg0 ) AgNO3 Acido Actico

Acido Nitrico

PARTE EXPERIMENTAL
REACCION CON LOS METALES PESADOS En un tubo de ensayo se agrega albmina y luego se le echa AgNO3 a otro tubo de ensayo albmina y CuSO4 de esta forma observamos si se forma algun ppdo. Si esto ocurre entonces se trata de una protena.

a) Con el sulfato de Cobre , CuSO4 - ALBUMINA

CH2 CH COOH NH2

+ CuSO4

CH2 CH-COO NH2

Celeste lechoso - CASEINA

COOH H2N C R2 H + CuSO4

COOH2N C - H R2 Celeste lechoso Cu + SO42-

b) Con el Nitrato de Plata, AgNO3 - ALBUMINA

CH2 CH - COOH + AgNO3 NH2

CH2 CH COONH3

- CASEINA COOH H2N C H R2 + AgNO3 COOH2N C H R2 Ag

blanco

NO3-

REACCION DE BIURET ( REACCION DE FEHLING ) Es la formacin de compuestos coloreados de violeta de las protenas en medio fuerte alcalino de las sales de Cu la reaccin empleada mediante ROONH2 , R CS NH2 , en un tubo colocar 2 ml de albumina + 3ml de NaOH + gota a gota CuSO4 hasta dar ppdo. Violeta. - CON ALBUMINA

CH2 CH COOH NH2

NaOH

CuSO4

CH2 CH H2N Cu

OC-O + Na2SO4 + H2O

CO O

M2N C CH2

- CASEINA COOH H2N C H R2 + NaOH + CuSO4

R2 CH H2N Cu

O = CO + Na2SO4 + H2O

CO - O (morado)

NH2 CH R2-

REACCION DE XANTOPROTEICA A cada uno de los tubos se le agrega cido ntrico e hidrxido de sodio y notamos Lo siguiente.

- ALBMINA : da una coloracin amarilla al ppdo.

NaOH CH2 CH COOH + HNO3 NH2 NO2

- CASEINA : da una coloracin amarillenta al ppdo. NO2 NaOH H2N C H + HNO3 R2 OH

REACCION DE MILLON A cada uno de los tubos se le agrega el reactivo MILLON que es ( Hg0 + HNO3) - ALBUMINA Hg CH2 CH - COOH NH2 + C Hg NH2OH

CH2 CH C6H5 NH2 (Rosado)

NO2-

NO3-

- CASEINA

Hg H2N C H + O Hg ( rojo) NH2OH R2 Hg

IV.CONCLUSIONES:

Cuando se hierve la solucin de una protena con otra sea nitrato y nitrito mercrico, se forma un cogulo o una coloracin rojo pardo. Se debe al grupo fenlico.

Cuando las protenas se tratan por cidos ntrico concentrado dan una coloracin amarilla que pasa a naranja por adiccin de amoniaco. Se debe a los ncleos aromticos que se nitran formando cidos pcrico y despus de amonio por el amoniaco.

Es la coloracin amarilla que se produce en la piel en contacto con HNO3 Si a la solucin de la protena se agrega unas gotas de solucin de sulfato de cobre, aparece una coloracin violeta, la dan las protenas y polipptidos, pero no los aminocidos y los dipptidos y se debe a la presencia de los enlaces peptdico.

Los reactivos de los alcaloides dan precipitado con la mayora de las protenas. Debido a su carcter anftero, las protenas reaccionan con los cidos y con las bases. Los cidos proteicos y alcali proteicos son insolubles en agua y en solucin de sales neutras y se disocian en los cidos y en las bases diluidas, pero precipitan en medio neutro. Las protenas recuperadas resultan desnaturalizadas.

La prueba de zona se realiza para observar la formacin del anillo. No hay aminocidos lquidos. Tiene elevado punto de fusin (mayor de 260C). Son solubles en H2O y es solvente polar. A diferencia de los aminos y cidos carboxlicos, los aminocidos son slidos cristalinos no voltiles que se relativamente elevadas. funden con descomposicin a temperaturas

Son insolubles en disolventes no polares, como ter de petrleo, benceno o ter.

Sus soluciones acuosas se comportan como soluciones de sustancias de elevado momento bipolar.

Las constantes de acidez y basicidad son extremadamente pequeas para grupos COOH y NH2

V. RECOMENDACIONES: Observar el cambio de coloracin en cada prueba realizada.

Utilizar la campana extractora en el momento de realizar las pruebas para evitar inhalar gases txicos.

VI. BIBLIOGRAFA: Qumica Orgnica Qumica Orgnica Bioqumica G. Devore, Muoz MENA Morrison y Boyd Stryer, L. 2da. Edicin. San Francisco California.