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Prctica 1: Uso de un microscopio compuesto y un estereoscopio.

Introduccin: El microscopio ha sido y sigue siendo el instrumento ms importante en el desarrollo de la biologa como ciencia. Los microscopios pticos magnifican la imagen y aumentan la capacidad para ver detalles que de otro modo no se podran percibir. El microscopio compuesto consiste en dos sistemas de lentes: el lente ocular y lente objetivo, estos montados en los extremos opuestos de un tubo cerrado. Los lentes objetivos estn compuestos de varios elementos pticos que crean una imagen real y aumentada del objeto examinado. Cuando se mira a travs del lente ocular se ve una imagen virtual aumentada de la imagen real. Algunos descubrimientos interesantes sobre la microscopia a lo largo de la historia son: 1674 Leeuwenhoek inform su descubrimiento de los protozoos. Nueve aos ms tarde observ bacterias por primera vez. 1838 Schleiden and Schwann propusieron la teora celular, afirmando que la clula nucleada es la unidad estructural y funcional de las plantas y animales. 1879 Flemming describi con gran claridad el comportamiento de los cromosomas durante la mitosis de las clulas animales. 1881 Retzius describi muchos tejidos animales con una precisin que todava no ha sido superada por ningn especialista de microscopia ptica. En las dos dcadas siguientes, tanto l como Cajal y otros histlogos disearon mtodos de tincin y establecieron las bases de la anatoma microscpica. 1882 Koch utiliz colorantes de anilina para teir microorganismos e identific las bacterias que causan la tuberculosis y el clera. En las dos dcadas siguientes otros bacterilogos como Klebs y Pasteur identificaron los agentes causantes de otras muchas enfermedades examinando al microscopio preparaciones teidas. Para poder manejar este instrumento eficientemente y mantenerlo en buena condicin, depende del conocimiento que usted tenga de l.

Fig. 1 Alumna utilizando un microscopio compuesto. Fig. 2 Alumnos utilizando un estereoscopio binocular.

Objetivos de la prctica: Conocer el uso y funcionamiento del microscopio compuesto y el estereoscopio. Aprender a manejar las partes mecnicas de los aparatos y as poder enfocar con precisin los materiales de origen biolgico de inters en el transcurso de las prcticas de laboratorio. Aprender a preparar placas temporales con material fresco. Practicar tcnicas sencillas que permitan apreciar el tamao y la forma de una variedad de clulas y microorganismos. Lista de materiales: - Estereoscopio - Lmpara de iluminacin - Frascos con agua destilada - Flores e insectos (aportados por el alumno) - Suspensin de levaduras - Granos de azcar

- Microscopio ptico compuesto - Porta y cubre-objetos - Goteros - Regla plstica - Granos de sal - Hoja de afeitar (Gillette)

Procedimientos: 1. Reconocimiento de las partes del microscopio y estereoscopio: Identifique las siguientes partes y rotule las ilustraciones del microscopio y estereoscopio. Estos son los instrumentos pticos a usar cada semana en el desarrollo de las prcticas de laboratorio de este curso. Las partes a identificar y entender su funcin son:

Parte o pieza: Base Brazo Tubo ocular Plataforma Revolver Condensador Diafragma Lentes oculares Lentes objetivos Tornillo macro mtrico Tornillo micro mtrico Fuente de luz

Su funcin o utilidad:

Fig.3 Esquema de un microscopio compuesto.

2. Indicaciones para usar un microscopio compuesto: Observe a travs del instrumento (lente ocular), y ajuste la fuente de luz de manera que se obtenga la mayor cantidad de luz. Coloque el lente objetivo de 4X en posicin de observacin dando vuelta al revolver. Para hacer esto gire el tornillo macro mtrico una o dos vueltas hacia arriba. Obtenga una placa o porta-objetos preparada (o preprese una) y centrarlo sobre el orificio de la plataforma. Mirando al instrumento lateralmente, gire con cuidado el tornillo macro mtrico hasta que el lente objetivo se halle aproximadamente a unos 4 6 mm por encima del porta-objetos.

Fig. 4 y 5 Alumnos ajustando de forma correcta (observando lateralmente el instrumento)

Para enfocar, vuelva a observar por el lente ocular y gire el tornillo para desplazar la plataforma siempre hacia abajo, hasta que el objeto aparezca claramente. No enfoque nunca moviendo la plataforma hacia arriba. Al usar el lente objetivo de 40X, se debe proceder con especial cuidado. Mirando a travs del microscopio es imposible apreciar a que distancia se halla el lente objetivo de la portaobjetos, y si se enfoca hacia arriba ste puede romperse.

Para cambiar el lente objetivo de 4X por el de 40X, debe usar el siguiente procedimiento: Enfoque con el lente objetivo de 4X en posicin de observacin. (Vase Fig. 5) Coloque el objeto a examinar exactamente en el centro del campo visual. Utilice el diafragma y condensador para adecuar la luz. Gire el revlver hasta que el lente objetivo de 40X quede en posicin de observacin. Ahora gire el tornillo micromtrico en sentido contrario a las agujas del reloj (para desplazar la plataforma hacia abajo, o en direccin hacia abajo) hasta conseguir una imagen clara de la muestra que intenta observar.

Recuerde que la regulacin de la luz es muy importante. Es malo usar demasiada luz y tambin muy poca. Cuando tiene el objeto bien enfocado, experimente con el diafragma hasta encontrar la apertura que suministra una cantidad de luz ptima para hacer sus observaciones.

Fig. 5 Fotografa de un microscopio compuesto.

Cuando utiliza un microscopio monocular es importante aprender a mirar a travs del microscopio con ambos ojos abiertos, lo cual requiere prctica, pero a fin de cuentas, es mucho ms cmodo que tener un ojo abierto y el otro cerrado durante varios minutos de trabajo.

Fig. 6 Alumno observando a travs del microscopio con ambos ojos

3. Haciendo preparaciones temporales: Ahora est listo para comenzar a hacer observaciones con el microscopio, pero primero se necesita saber cmo hacer una preparacin temporal. Las siguientes instrucciones detallan el procedimiento correcto: Porta objetos Cubre objetos Muestra

Fig. 7 Montaje de una placa temporal.

Limpiar y secar completamente un porta-objetos y un cubre-objetos. Colocar en el centro del porta-objetos el material biolgico u objeto que va a observar. Aadir una gota de agua (u otra solucin cuando sea el caso) sobre el material colocado en la placa y aplanar o aplastar esto con el cubre-objetos. Dibuje cada muestra observada con el microscopio con el mayor realismo posible.

Algunos consejos en preparar muestras y usar el microscopio: No use demasiada agua en preparar su muestra. A veces durante la observacin de protozoarios y otros organismos vivos, ser necesario aadir ms agua a causa de la evaporacin. Siempre hay que colocar un cubre-objeto sobre muestras con agua u otro lquido. Debe de bajar lentamente el cubre-objeto sobre la muestra con cierto ngulo de inclinacin. Puede usar una aguja o pinzas para ayudar. Este procedimiento evita la formacin de burbujas de aire entre la porta y cubre-objeto. 4. Preparacin y observacin de una letra impresa: Tome o recorte de una hoja de papel peridico una letra mayscula y coloque sta sobre un porta-objetos. Luego coloque el cubre-objetos sobre la letra. Ahora, enfoque sobre la letra con el microscopio usando el objetivo de 10X. Habiendo observado atentamente conteste: Cul es la orientacin de la imagen de la letra vista a travs del microscopio? En qu sentido es diferente a su ubicacin en la placa a simple vista? Ahora mueva lentamente el tornillo de la plataforma en distintas direcciones. Habiendo observado atentamente conteste: Cundo usted mueve la plataforma con la placa, de la izquierda a la derecha, en qu direccin se mueve la letra vista a travs del microscopio? Luego mueva la placa, utilizando siempre el tornillo de la plataforma, hacia adelante y hacia atrs. Anote en qu direccin se mueve la letra cuando est observando a travs de los lentes del microscopio. 5. Estimacin de las dimensiones del campo visual: Coloque una regla de plstico sobre la plataforma del microscopio y enfoque hasta lograr ver las lneas que indican los centmetros, utilizando los lentes objetivos de 4X, l0X y 40X. Estime el dimetro del campo visual con cada uno de los lentes objetivos anotando su estimacin en mm.

Fig. 8 Regla plstica vista a travs de un microscopio.

Fig. 9 Montaje de una regla plstica utilizada para obtener el campo visual de un microscopio.

Examine con el microscopio otros materiales que tenga curiosidad de observar. Estime las dimensiones de este (os) material (es) observado (os), tomado como ejemplo los resultados del procedimiento anterior donde calcul las dimensiones del campo visual.

6. Preparacin una placa temporal con una muestra de suspensin de levadura: Agregue una gota de la suspensin de levaduras en un porta-objetos limpio y coloque el cubre-objetos encima. Ahora observe la levadura con los diferentes lentes objetivos del microscopio (4X, 10X y 40X). Haga una estimacin del nmero de clulas por mm2 del campo visual con cualquiera de los lentes objetivos.

7. El Estereoscopio: El estereoscpico (tambin llamado microscopio o lupa de diseccin) es un aparato con dos lentes oculares (binocular) y un lente objetivo que proveen una visin estereoscpica, sea, tridimensional. Puede usarse para observar objetos con luz reflejada o con luz transmitida.

Fig.10 fotografa de un estereoscopio.

Coloque una tira de papel impreso, de aproximadamente 10 cm de longitud y 1 cm de ancho sobre la plataforma del instrumento. Girando el tornillo, haga descender el cuerpo del estereoscopio altope. Ahora observando a travs de los lentes oculares, suba el cuerpo del instrumento hasta que obtenga una imagen ntida. A continuacin ajuste la iluminacin y la distancia de separacin entre los lentes oculares. Mueva la tira de papel impreso hacia adelante y hacia atrs. En qu direccin se mueve la imagen vista a travs del estereoscopio? Observe el filo de una hoja para afeitarse, los granos de azcar y sal, y las partes de una flor. Haga dibujos de cada una de las muestras observadas. Rotule la ilustracin a continuacin con las partes ms importantes del estereoscopio.

Fig. 11 Esquema de un estereoscopio.

8. Recomendaciones importantes: No golpear o arrastrar el aparato obre la mesa de trabajo. Use siempre ambas manos cuando traslade su microscopio o estereoscopio de un lugar a otro.

Fig. 12 Alumno sosteniendo de forma correcta el microscopio.

Inspeccionar siempre el microscopio antes de usarlo, cualquier irregularidad reprtela a su instructor del laboratorio. No desmontar ninguna pieza del microscopio. Usar siempre solo los microscopios disponibles en su mesa de trabajo y guardarlo en su sitio. Al terminar su prctica de laboratorio, deje desconectado el instrumento, limpio, seco y cubierto.

Fig. 13 Alumno guardando en un lugar seguro el microscopio.

9. Preguntas de investigacin: Quin invent el microscopio? Cul es la utilidad o funcionamiento de cada tipo de microscopio? En qu objetivo usted obtiene el campo visual de menor rea? De mayor rea?