UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

Facultad de Pesquera Departamento de acuicultura e industrias pesqueras

Nutricin y Alimentacin de Organismos Acuticos

DESCAPSULACIN DE CISTES DE ARTEMIA Y CONTEO DE

NAUPLIOS RECIN ECLOSIONADOS

PROFESORA

Ing. Jessie Vargas C

2011

I.

INTRODUCCION

Dentro del campo de la acuicultura, como ya se menciono anteriormente en la prctica pasada, el alimento natural es de suma importancia en este campo de estudio. Aqu podremos encontrar como alimento vivo a la Artemia sp. Adems los nauplios de Artemia constituyen el alimento ms utilizado en larvicultura de peces y crustceos. La disponibilidad de este tipo de alimento es el uno de los factores de gran importancia que tiene, ya que se le puede encontrar en grandes cantidades a lo largo de la lnea costera en lagos, lagunas hipersalinas y salinas solares. Y otro factor de importancia se debe a la capacidad de las hembras de poner huevos protegidos (encapsulados), disponiendo de un alimento vivo en condiciones atpicas de almacenamiento, transporte y conservacin. Existen muchos mtodos para la obtencin de quistes y tcnicas de decapsulacin reportadas por la bibliografa, ya que A. salina es objeto de estudios muy intensos Para poder hacer uso de este alimento, primero debemos de darle un tratamiento a los cistes de Artemia, siendo estas, cinco etapas fundamentales para la preparacin de quistes que son: colecta en zonas naturales o en cultivos intensivos, filtrado, lavado, secado, envasado y almacenado. En el presente informe se presentara una mayor informacin bibliogrfica acerca de estos procedimientos y la importancia de este alimento en etapas larvales.

II.

OBJETIVOS

Lograr en pequea escala la descapsulacin de cistes de Artemia para la obtencin de nauplios utilizando hipoclorito de sodio. Identificar los diferentes estados de desarrollo de los cistes desde su hidratacin hasta la liberacin del nauplios. Conocer las tcnicas de fijacin y conteo de nauplios de Artemia. III. REVISION LITERARIA

La Artemia salina es un crustcco que en estado adulto mide entre 1718 mm, posee un par de apndices prenciles, ojos pedunculados, 17 pares de apndices, una furca (rameada o bifurcada). La hembra adulta posee un ovisaco en el que incuba de 10 a 30 huevecillos generalmente y en condiciones ptimas hasta 70 huevecillos. Algunos autores reportan de 50200, segn la especie. Presenta un ciclo de vida sexual y asexual. Existen especies bisexuales y especies patenogenticas en ambas. Pueden presentarse dos alternativas de desarrollo del huevo: uno es el desarrollo de larvas (prenauplio, nauplio) o bien que en condiciones adversas se presente el fenmeno de Criptobiosis, en el cual se producen los quistes. Este fenmeno se debe a que la gstrula permanece en este estado en perodos de desecacin ambiental; esta gstrula enquistada en condiciones favorables se hidrata y contina su desarrollo hasta eclosionar el nauplio Esta capacidad de la Artemia de la formacin de huevos resistentes es lo que la ha hecho ser uno de los recursos de alimentacin en Acuacultura ms importantes, pues los quistes pueden conservar su variabilidad durante varios aos hasta que se dan las condiciones necesarias para la eclosin. reas de Distribucin A finales de los 60's la demanda de quistes de Artemia era insuficiente, por lo que se encareci. Debido a esta gran demanda se incrementaron las investigaciones sobre este organismo, principalmente por el Reference Center de la Universidad de Ghent, Blgica, en colaboracin con laboratorios de Estados Unidos e Inglaterra, explorndose varias zonas naturales de produccin de Artemia en Europa, Asia, Amrica y Australia (Sorgeloos, 1974). Aunque su distribucin es cosmoplita, la mayor abundancia ocurre en zonas tropicales y subtropicales. Existen dos categoras generales en cuanto a salinidad se refiere de las zonas de produccin natural de Artemia: Thalasso-halino donde la mayor concentracin de sales son de NaCl (menor nmero de localidades). Athalasso-halino con sales de Sulfatos, Carbonatos y Sales de Potasio (mayor nmero de localidades). Estas categoras son importantes, pues determinan las diferentes especies de Artemia.

Figura 1: Ciclo de vida de la Artemia salina

Figura 2: Artemia salina

Artemia salina (Ivleva et al., 1973): A) Hembra, B) Cabeza de macho, C) Cabeza de hembra, 1. Ojo nauplio, 2. antenuelas, 3. antena, 4. apndice torxico, 5. saco ovigero, 6. segmento abdominal, 7. furca, 8. ojo pedunculado.

Figura 3: Estados Nauplio de Artemia salina

TABLA 1. ZONAS NATURALES DE PRODUCCION DE Artemia salina EN EL MUNDO (P. SORGELOOS, 1974) CONTINENTE NUMERO PRINCIPALES NUMERO DE TOTAL DE PAISES LOCALIDADES LOCALIDADES ASIA 19 EUROPA 77 ESPAA 37 AMERICA 37 U.S.A. 34 DEL NORTE MEXICO 9 AMERICA 11 *REGION 6 CENTRAL CARIBE AMERICA 19 ARGENTINA 7 DEL SUR** ASIA 19 URSS 15 AFRICA 18 Mxco (Baja California, Sonora, Sinaloa, Culiacn, S.L. Potos, Estado de Mxico, Hidalgo, Zacatecas, Yucatn). * (Bahamas, Puerto Rico, Santo Domingo, Martinica) ** (Argentina, Bolivia, Brasil, Colombia, Ecuador, etc.)

Alimentacin Se han encontrado en anlisis del contenido del tubo digestivo desde algas y detritus hasta granos de arena, lo que demuestra que es un organismo filtrador no selectivo, por lo que puede ingerir materiales contaminados. Ingiere partculas de 1.2 a 50 . S lo se alimenta de partculas, no de alimentos solubles. La Artemia no regula su nutricin (se alimenta las 24 h). Estos factores deben de considerarse para la adecuada seleccin de las especies silvestres, y para calcular la concentracin y la dieta adecuada para fines acuaculturales. En las poblaciones silvestres es difcil determinar el rendimiento mximo sostenible (RMS), ya que ste depende de los factores ambientales. Proceso de Eclosin El fenmeno de eclosin es un fenmeno qumico puro (intercambio inico), relacionado con la concentracin de glicerol que posee el embrin, a mayor produccin de glicerol hay mayor absorcin de agua; en etapas crticas de presin osmtica la membrana se rompe, y despus la concentracin de glicerol sbitamente baja a cero, el glicerol es liberado. Si bien se ha observado que en altas densidades de quistes la presencia de glicerol es importante, pues interviene en la sincrona de la eclosin (ya que no acta txicamente sobre las larvas). Es recomendable cambiar esta agua antes de que transcurran diez horas de la eclosin, ya que la presencia del glicerol incrementa las poblaciones bacterianas. Parmetros que permiten la eclosin de quistes

Temperatura ptima de eclosin de quistes: 25 a 30C. Salinidad: 5 ppm (lmite variable). A mayor S de 30 ppm, los quistes no alcanzan el perodo crtico de ruptura o eclosin, y en tal caso no se consigue sta. Decapsulacin: En la decapsulacin se controla el proceso de osmo-regulacin. Permitindose la decapsulacin es ms fcil conseguir la eclosin (en el anexo se incluye la tcnica de decapsulacin recomendada por P. Sorgeloos). pH: A un pH de 8.0 hay una buena eficiencia de eclosin. Debajo de ste la eclosin disminuye. Se recomienda el uso de 2 g de NaHOO3/1 para asegurar una mayor eclosin. Oxgeno: En el metabolismo de Carbohidratos de Artemia, la presencia de O2 es relevante. Para conseguir una eclosin eficiente se recomiendan altos niveles de O2 (condiciones anaerbicas afectan la eclosin y el metabolismo de Carbohidratos).

IMPORTANCIA NUTRICIONAL DE ARTEMIA La Artemia es un excelente alimento vivo en la Acuacultura por sus caractersticas de desarrollo, su pequeo tamao de nauplio y metanauplio (adecuado para las larvas y juveniles de crustceos y peces) y fcil manejo, etc. El valor nutritivo de los nauplios recin eclosionados es muy alto; este valor decrece en ausencia de alimento. Si la Artemia (metanauplio y nauplio) es alimentada adecuadamente, podomos obtener un enriquecimiento de nutrientes esenciales en un sustrato de microalgas (vivas o secas), o en una mezcla artificial de nutrientes (lpidos, aminocidos, cidos grasos, etc.) (Tacon, 1987). Se ha calculado que se requiere entre un 2.5 a 5 g de la fuente, enriquecida para un milln de nauplios, y este enriquecimiento se logra en un perodo no menor de 6 h. En la Tabla 29 se presentan diferentes mezclas de nutrientes y mezclas enriquecidas que se utilizan para Artemia y rotferos. Los recursos nutricionales que posee Artemia (protenas, cidos grasos, etc.). Su composicin qumica y su concentracin varan de una cepa a otra, como se muestra en la Tabla 30. De estos nutrientes, las principales fuentes a considerar son los cidos grasos y aminocidos esenciales en los nauplios y metanauplios. Se ha mencionado ya en captulos anteriores, que la importancia de los llamados alimentos vivos (fitoplancton y zooplancton), radica en el aporte de cidos grasos y aminocidos esenciales que puedan brindar para el desarrollo larvario de peces y crustceos (Watanabe et al., 1983). En la Tabla 3 se muestra la composicin en cidos grasos de cuatro cepas de Artemia (nauplios recin eclosionados) de diferentes localidades. Para lavas de peces marinos, los nauplios de Artemia contienen una alta proporcin de cidos grasos esenciales de tipo W,(20:5W 3 y 22:6W 3) que son los ms nutritivos y que permiten el buen desarrollo y alta supervivencia de las larvas. Para especies de agua dulce, los nauplios de Artemia contienen una alta proporcin de los cidos grasos esenciales W 3 (18:2W 6 y 18:3W3) (Watanabe et al., 1983). La calidad nutricional de Artemia vara de un aislamiento a otro, de tal forma que en el mercado internacional alcanzan un alto valor aquellas cepas de Artemia cuyos quistes poseen concentraciones altas de aminocidos esenciales y cidos grasos. En Latinoamrica y el Caribe se reporta un gran nmero de localidades en donde se produce Artemia en forma natural en salinas y zonas estuarinas, de las que se conoce muy poco en relacin a su produccin, caracterizacin de la cepa (biologa bsica, anlisis proximal, ecologa), y potencialidad de industrializacin para ser utilizadas en Acuacultura. Es importante el desarrollo de trabajos de investigacin que permitan la explotacin de este importante recurso en los pases latinoamericanos y del Caribe.

TABLA 2. ANALISIS PROXIMAL Y MINERAL DE LA COMPOSICION DE HUEVOS Y NAUPLIOS DE Artemia DE TRES LOCALIDADES Huevos Artemia Nauplios de Artemia (recin eclosionados) Compuestos San S. Canada San S. Canada Francisco America Franciso America Humedad % 89.7 90.9 88.2 Protena % 54.4 51.5 47.5 6.1 6.5 6.8 Grasa % 6.4 10.5 4.8 2.0 1.6 2.1 Ceniza % 6.3 13.0 15.3 1.2 1.0 1.5 Ca mg/g 3.73 2.21 1.41 0.23 0.24 0.41 Mg " 2.80 2.53 5.59 0.44 0.20 0.68 P " 7.60 6.95 7.63 1.33 1.21 1.44 Na " 6.13 31.91 28.58 4.02 1.43 4.93 K " 5.73 5.34 7.12 1.08 0.96 1.16 Fe /g 1298 1277 1022 52.2 294.6 287.3 Zn " 91.2 96.0 61.4 16.1 21.1 24.1 Mn " 98.3 50.9 14.8 2.1 2.6 3.7 Cu " 10.6 9.1 15.9 0.6 1.1 1.9 * Watanabe et. al. (1983)

TABLA 3. COMPOSICION DE ACIDOS GRASOS (%) DE NAUPLIOS (RECIEN ECLOSIONADOS) DE Artemia EN CUATRO LOCALIDADES ACIDOS RAC Baha Canad China Francia GRASOS de San Pablo 14:0 1.79 0.43 0.83 1.80 1.73 14:1 2.92 2.26 1.67 2.24 3.03 16:0 12.70 7.79 9.99 11.40 11.90 16:17 16.78 5.24 9.03 19.06 11.34 16:34/17:18 4:33 2.44 1.47 2.54 2.20 18:0 4.07 3.08 5.12 3.99 4.21 18:19 30.37 29.15 28.24 26.81 24.73 18:26* 9.62 4.60 7.95 4.68 6.14 18:33* 2.55 33.59 19.87 7.38 20.90 18:43 nd 4.88 1.60 1.26 2.04 20:26/20:36 0.20 0.24 0.44 0.15 1.13 20:33/20:46 5.82 1.48 4.21 3.34 2.45 20:53** 8.45 1.68 9.52 15.35 8.01

IV.

MATERIALES Y METODOS

MATERIALES 2 gr. de cistes de Artemia. Beakers, pipetas y recipientes graduados. Botellas de plstico de 2 litros. Placas Petri. Hipoclorito de sodio (leja comercial). Malla de 86 . Equipo de iluminacin. Estereoscopio. Pizetas, baguetas, esptula. Aireadores y manguerillas de aireacin. Agua salobre (agua de mar). Cmara de Sedwick Rafter. Lugol.

METODOLOGIA. A. DESCAPSULACION. 1. Hidratacin de los cistes. 2 gr. de cistes de Artemia en agua 15 con aireacin constante por una hora aproximadamente. 2. Preparacin de solucin descapsuladora. Requerimientos de cloro activo. 0.5 gr. de Cl activo por cada gr. de cistes Se trabajara con 2 gramos de cistes de Artemia, por lo tanto el requerimiento de Cl activo es de 1 gr. Segn la etiqueta del frasco de hipoclorito de sodio (leja), contiene 5.25 gr. de Cl activo en 100 ml de solucin, por lo que para nuestro requerimiento de 1 gr. de cloro activo tendremos que pipetear aproximadamente 19ml de hipoclorito de sodio (leja). Colocar los cistes en la solucin descapsuladora preparada con aireacin por un lapso de 10 minutos. Verificar la temperatura, la descapsulacin es una reaccin exotrmica, por lo cual habr generacin de calor y la temperatura debe ser siempre menor a 40C, si se presenta una mayor temperatura, adicionar hielo. Observar la descapsulacin durante el tiempo requerido. El cambio de color de los cistes variara de color caf, a gris y finalmente a anaranjado que ser el color del embrin. Cuando la proporcin de color de los cistes anaranjados sea mayor a los cistes de color blanco, detener la aireacin y traspasar los cistes a una malla. Seguidamente se lava con abundante agua hasta que el olor a leja desaparezca del todo el olor fuerte a leja (Fig. 4)

Figura 4: Lavado de cistes.

 Cosechar los embriones rpidamente. B. INCUBACION. Colocar los cistes descapsulados a incubar, en un volumen de agua conocido (1L) con 15 de salinidad y constante aireacin (Fig. 5).

Figura 5: Incubacin de nauplios.

Colocar una fuente de luz a 20 cm. Esperar la eclosin en las prximas 24 horas. C. OBSERVACION DE LOS ESTADIOS DE DESARROLLO. Tomar una muestra de 1 ml. y diluirla en 10 ml de agua. Homogenizar y de aqu tomar una 4 sub-muestras de 1 ml. cada una. Homogenizar y de aqu tomar una 4 sub-muestras de 1 ml. cada una. Aplicar lugol a cada una de las sub-muestras. Realizar el conteo de nauplios en los 3 estadios naupliares. Luego de realizar el conteo en una placa de Sedwick Rafter, sumar todo lo contado y dividirlo entre 4. Multiplicarlo por 10 y esto nos dar la cantidad estimada de nauplios en 1 ml. Multiplicar por 1000 para totalizar la cantidad de nauplios que se encontraran en 1L.

V.

CALCULOS Y RESULTADOS

Un representante de la mesa 3, el compaero Luis Bardales realizando el conteo de las artemias e identificandolas por estadios con la cmara de sedwick rafter. Y se obtuvo los siguientes resultados:

Figura 6. Conteo de Artemias.

TABLA 4. Conteo por estadio N de conteo 1 2 3 4 Total Promedio Redondeo E-1 2 3 4 3 12 3 3 E-2 11 13 12 13 49 12.25 12 E-3 2 3 1 4 10 2.5 3

Se hizo 4 conteos de nauplios, en los cuales se contabilizo la cantidad de nauplios que hay en cada estadio E1, E2 Y E3; seguidamente se obtuvo un promedio de estas cantidades, luego se redondeo esta cantidad y se le multiplico por 10 debido a que estaba diluido en una solucin de 10ml. 30 nauplios E1 ---------- 1ml X -----------800ml X= 24000 nauplios E1 120 nauplios E2-------1 ml Y ---------800ml Y= 96000 nauplios E2 30 nauplios E3 ---------1ml Z -----------800ml Z= 24000 nauplios E3

Figura 7. Aireacin de la sol. Descap.

Figura 8. Incubacin de los cistes.

VI.

DISCUSIONES Dados los resultados en la tabla anterior, se puede observar el conteo realizado en los tres estadios posteriores al proceso de incubacin y descapsulacin de Artemia salina. Segn lo observado en el conteo de los tres estados, se obtuvo para estado 1 (E1), 24000 individuos en 800 ml, estado 2 (E2), 96000 individuos en 800 ml, y estado 3 (E3), 24000 individuos en 800 ml. Cabe recalcar que hubo un derramamiento de agua, por lo cual estamos considerando 800 ml de solucin. En los resultados obtenidos se puede comprobar que a medida que pase el tiempo de incubacin de los cistes (ya transcurrido de 15 a 20 horas) es ms notorio su desarrollo larval siendo los ms abundantes en la observacin los embriones que han dejado definitivamente la cscara y el cual cuelga hacia abajo de la cscara conocido como estado E-2, posiblemente debido al tiempo expuesto al cloro. Es posible que los cistes no eclosionaron totalmente debido a que no estuvieron cerca de la temperatura ptima de eclosin de quistes: 25 a 30C. La deficiencia de oxgeno puede ser otro factor que impidi la eclosin de los cistes. Puesto que en el metabolismo de Carbohidratos de Artemia, la presencia de O2 es relevante. Para conseguir una eclosin eficiente se recomiendan altos niveles de O2 (condiciones anaerbicas afectan la eclosin y el metabolismo de Carbohidratos.)

VII.

CONCLUSIONES Se puede concluir que la mayor cantidad de cistes en estadio E2 se debi al exposicin de cloro, ya que mientras ms tiempo transcurre en l se puede dar un mayor desarrollo de los nauplios. Se pudo observar que los cistes de Artemia se desarrollaron hasta el estadio E3 debido a que estuvieron por un tiempo en condiciones optimas de oxigeno, que facilito el desarrollo de los nauplios de Artemia.

VIII.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS Artemia, descapsulacin, incubacin Setiembre 2009, Galicia. http://www.drpez.net/panel/showthread.php?t=368580 Metodo para descapsular Artemia. Setiembre 2010. Granada http://www.elacuario.es/foro/acuariofilia-general/9507-metodo-paradescapsular-artemia.html

Mtodo de descapsulacin de nauplios de Artemia sp. para la alimentacin de camarones peneidos. Cecilia Vanegas Prez y Cecilia Robles Mendoza La produccin de alimento vivo y su importancia en la acuicultura. Una diagnosis. FAO Italia. http://www.fao.org/docrep/field/003/ab473s/AB473S04.htm

Descapsular Artemia salina tcnicas y equipos acuarifilos. Abril 2011 http://www.aquanovel.com/artemia.htm