Tinciones Especiales

TINCIONES ESPECIALES: Tincin de Giemsa.
El mayor campo de aplicacin posiblemente sea en extensiones secadas al aire en citologa clnica como por ejemplo en puncion aspiracin de tiroides (Fig. 9a). Tambin en hematopatologa bien sobre frotis o en cortes histolgicos para demostracin de varios elementos hematolinfoides, incluyendo clulas cebadas (Fig. 9b).
Fig. 9a [ampliar]
Como se ha dicho se puede usar para evidenciar Helicobacter Pylori en el moco superficial de la mucosa gstrica.
Fig. 9b [ampliar]
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TINCIONES ESPECIALES: Fibras elsticas.

Las tcnicas de tipo Weigert son bastante especficas para elastina. Se suele utilizar con contraste de fondo de tincin de colgena con van Gieson u otras tinciones tricrmicas como tricrmico de Gomori. Son muy eficaces en patologa vascular para demostracin de ensanchamiento y fibrosis de la ntima (Fig. 10a); para evidenciar proliferacin de las elsticas en casos de hipertensin o roturas o duplicaciones de las capas elsticas como en las vasculitis (Fig 10b). Tambin son tiles en tumores de partes blandas como el elastofibroma (Fig. 10c).
Fig. 10a [ampliar]
Fig. 10b [ampliar]
Fig. 10c [ampliar]
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TINCIONES ESPECIALES: Tinciones para calcio.
Tinciones para calcio (von Kossa); se usa sobre todo en patologa metablica sea sobre cortes histolgicos sin decalcificar (Fig. 8)
Fig. 8 [ampliar]
TINCIONES ESPECIALES: Tinciones para hemosiderina (Perls).

Tinciones para hemosiderina (Perls) especialmente til en patologa heptica para la demostracin de acmulos de hemosiderina en los hepatocitos en distintas situaciones o en casos extremos de hemosiderosis como por ejemplo en la enfermedad gentica hemocromatosis (Fig. 7).
Fig. 7 [ampliar]
TINCIONES ESPECIALES: Tinciones tricrmicas.

El principal valor de este tipo de tincin es la evaluacin del tipo y cantidad del material extracelular. Las tres estructuras titulares demostradas por los tres colorantes que componen la tincin son: ncleo, citoplasma y colgena extracelular. Las ms conocidas son las de Masson, van Gieson y Gomori (Fig. 6a). En patologa heptica son muy tiles este tipo de tinciones para destacar la cantidad y distribucin de la fibrosis y demostracin de ndulos en la cirrosis (Fig. 6b).
Fig. 6a [ampliar]
Fig. 6b [ampliar]
TINCIONES ESPECIALES: Tincin de reticulina.
Estas tinciones evidencian las fibras de reticulina y material de membrana basal. Las fibras de reticulina consisten en fibras finas constituidas principalmente por colgeno tipo III, mientras que las membranas basales contienen en gran parte colgeno tipo IV y laminina junto con proteoglicanos que son los responsables de la tincin con sales de plata y PAS. Tradicionalmente, antes de la llegada de la inmunohistoqumica, la aplicacin ms importante de estas tcnicas (tal como la tcnica de Gomori) era la distincin entre carcinomas y sarcomas basndose en la distinta distribucin de las fibras de reticulina segn englobaran grupos de clulas (carcinoma) o rodearan individualmente cada clula (sarcomas). Otra aplicacin tradicional era la demostracin de microinvasin incipiente del estroma por carcinomas in situ. En todas estas aplicaciones en patologa tumoral estas tcnicas han sido sustitudas con gran ventaja por las tcnicas inmunohistoqumicas. Hoy en da se sigue utilizndo la tincin de las fibras de reticulina en patologa heptica para evidenciar la desorganizacin arquitectural trabecular y en estudios de mdula sea para poner de manifiesto mielofibrosis incipiente (fibrosis reticulnica) (Fig. 5) negativa en fases iniciales para tincin de colgen.
.
Fig. 3 [ampliar]

Serie elaborada por el Dr. Toms Castiella Muruzabal
TINCIONES ESPECIALES: Tinciones argentafines y argirfilas.

Han sido desplazadas por las tcnicas inmunohistoqumicas. Son tinciones de plata. La reaccin argentafn depende de la presencia en el tejido de una sustancia que reduce las sales de plata. Una de las ms generalizadas es la de Masson-Fontana. Se utiliza para demostracin de pigmento de melanina. En la reaccin argirfila se aade un agente externo para reducir la plata; una de las ms conocidas es la tincin de Grimelius. Estas tcnicas se utilizan en la demostracin de clulas neuroendocrinas (Fig. 3) y de los tumores derivados se ellas.
Fig. 3 [ampliar]
TINCIONES ESPECIALES: Tinciones para microorganismos

Incluyen tcnicas de tincin de micobacterias cido-alcohol resistentes (Ziehl-Neelsen) (Fig. 2a) Tinciones para bacterias gram-positivas, como por ejemplo en la listeriosis (Fig. 2b) y gramnegativas (tincin de Gram).
Fig. 2a [ampliar]
Tcnicas de plata para hongos (Grocott) (Fig. 2c); como ya se ha dicho tincin de PAS para hongos, amebas y tricomonas. Tcnicas de tincin para helicobacter pylori Warthin-Starry (Fig. 2d) o Giemsa (Fig. 2e).
Fig. 2b [ampliar]
Fig. 2c [ampliar]
Fig. 2d [ampliar]
Fig. 2e [ampliar]
TINCIONES ESPECIALES: PAS
PAS (periodic acidShiff).Esta tincin es realmente muy til. Esta tcnica tie de color violeta las mucosustancias neutras; tie las clulas caliciformes intestinales utilizndose por ejemplo para poner en evidencia la metaplasia intestinal en el esfago de Barret (Fig. 1a). Se utiliza tambin para
Fig. 1a [ampliar]
Fig. 1b [ampliar]
Fig. 1c [ampliar]
Fig. 1 d [ampliar]
demostracin de produccin de mucina por las clulas tumorales de una neoplasia epitelial poco diferenciada (que no forma glndulas) permitiendo su tipificacin como carcinoma como por ejemplo en el carcinoma difuso de clulas en anillo de sello gstrico (Fig. 1b). Tambin es til para la demostracin de glucgeno (de manera especfica si se combina con un control con digestin previa de los cortes histolgicos con diastasa); tie membranas basales; pone de manifiesto de manera evidente la mayor parte de hongos (Fig. 1c) y parsitos; se utiliza en la demostracin de material
Hematoxilina-eosina
La hematoxilina es un colorante catinico mientras que la eosina es un colorante aninico perteneciente a los xantenos. Se teirn los ncleos de azul, citoplasmas en rosa, msculo en tonos rojizos a rosados fucsia, glbulos rojos en naranja o rojo y la fibrina en rosa intenso.
1-Desparafinado.
Estufa durante 30 min. a 60. Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.
5- Lavar en H2O-2min.
2- Hidratacin.
Alcohol absoluto-5min. Alcohol 96-5min. Alcohol 70-5min.
6-Eosina alcohlica1min. 7-Deshidratar.
3- Lavar en H2O destilada. 4- Hematoxilina-5min.
Alcohol de 70 Alcohol de 96. Alcohol absoluto. Xilol.
8- Montaje.
Giemsa
La tcnica radica en la disociacin controlada de las sales de eosinato que ocurre al insolubilizar la mezcla del giemsa por disolucin en H2O destilada; la eosina as liberada colorea el componente extracelular y determinadas extructuras acidfilas; y los derivados de azur, las estructuras de carcter basfilo. La cromatina nuclear adopta una tincin azul violeta. 1- Desparafinar.
Estufa durante 30 min. a 60C Sumergimos en xilol durnate 10 o 15 min.
7- Alcohol de 96- 2-3 pases rpidos. 8- Alcohol isoproplico -3 min.
2- Hidratacin.
Alcohol absoluto-5min. Alcohol 96 -5min. Alcohol 70 -5min.
3- Lavar en H2O destilada. 9 - Alcohol isoproplico -3 min. 4- Solucin Giemsa al 20 %- 45 10- Xilol. min. 5 -Lavar con agua corriente 5 11- Montar. 10min. 6-Alcohol 70 - 2-3 pases rpidos
Tricromico de Masson
Es una tcnica para la coloracin de fibras colgenas y elsticas. Se observan tres colores distintos; tejido conjuntivo de verde,
tejido muscular de verde pardo, eritrocitos de rojizo, ncleos azul negro y citoplasma y fibras musculares rosa. 1-Desparafinado.
7- cido fosfomolbdico 5 min. 8- cido fosfomolbdico 5 min. 9- Verde luz 5-7 min. 10-Deshidratar.
Alcohol de 70 Alcohol de 96. Xilol.
2- Hidratacin.
3- Lavar en H2O destilada. 4- Hematoxilina de Weigert 5 min. 5- Lavar con agua corriente 10 min. 6- Fucsina de Ponceau 5 min.
11- Montaje.
Tincin para reticulina
1-Desparafinado.
11- Lavar con agua destilada 1-2 pases. 12- Formol al 10 % -5 min.
2- Hidratacin.
13- Lavar con agua destilada 1-2 pases. 4- Permanganato potsico al 1% 14- Cloruro de oro al 0.2%-2 -1 min. min. 5- Lavar con agua destilada 1-2 15 Lavar con agua destilada 1-2 pases pases. 6- Metabisulfito potsico al 2% - 16 Metabisulfito potsico al 2%1 min. 2 min. 7- Lavar con agua destilada 1-2 17- Tiosulfato sdico al 2%-- 1 pases min. 8 - Alumbre frrico al 2% - 2 18- Lavar con agua corriente 5 min. min. 3- Lavar en H2O destilada. 19-Deshidratar. 9- Lavar con agua destilada -1-2 Alcohol de 70 Alcohol de 96. pases. Alcohol absoluto.
Xilol.
10- Reactivo de Wilder - 2 min. 20- Montaje. RESULTADOS: Reticulina: negro. Ncleos: grisceo. Colgena: prpura grisceo.
PAS
Se usa como tcnica de rutina para observar las membranas basales que separan el tejido epitelial del corin. Tie los ncleos de color azul, el glucgeno de color prpura y el material PAS + (polisacridos simples, mucopolisacridos neutros, mucoprotenas, glucoprotenas y glucolpidos) rojo rosa.
SOLUCIONES: 1 .- cido peridico al 0.5 % 3.- cido sulfuroso : 2.- Hematoxilina de Mayer 4.- Reactivo de Shiff
- Metabisulfito sdico al 10 % ------------------6 - Fucsina bsica -----------------------------------1 gr. ml. - cido hidroclrico 1N al 10 % ----------------5 ml - Metabisulfito sdico anhidro ------------------1 gr.
- Agua destilada ----------------------------------- 200 - Agua destilada --------------------------------100 ml ml - cido hidroclrico 1 N -------------------------20 ml Hervir el agua destilada, aadir la fucsina bsica, agitar y enfriar a 50C. Filtrar y aadir cido hidroclrico, enfriar a 25C Aadir metabisulfito sdico. sta solucin est lista para usarse cuando se torna casi incolora, lo cual puede llevar hasta 2 das, en un lugar oscuro.
TCNICA: 1.- Desparafinar e hidratar. 2.- cido peridico al 5 % --------------5 min. 3.- Lavar en agua corriente--------------5 min. 4.- Reactivo de Shiff --------------------- 15 min. 5.- Bisulfito sdico al 2 % ------------------5 min. 6.- Lavar en agua corriente --------------5 min. 7.- Hematoxilina de Mayer ------------ 10 min. 8.- Lavar con agua corriente -----------5 min. 9.- Deshidratar. 10.- Aclarar con xilol. 11.- Montar.
Elstica de Van Gieson
Es una tcnica para la coloracin de fibras colgenas y elsticas. El colgeno parece que capta un colorante cido. Tie el colgeno de rojo, ncleos y fibras elsticas de negro y citoplasma de amarillo.
SOLUCIONES:
1.- Hematoxilina de Verhoeff:

- Hematoxilina alcohlica: Hematoxilina ------------------------------------10 gr.
2.- Solucin de Picrofucsina:

- Fucsina cida al 1 % ----------------------------1.3 ml
- cido pcrico a saturacin ---------------------- 9.7 Alcohol96 -------------------------------------100 ml ml
- Cloruro frrico al 10 %:
Cloruro frrico ----------------------------------10 gr. Agua destilada ----------------------------------100 ml - Yoduro potsico al 10 %: Yoduro potsico --------------------------------10 gr. Agua destilada ----------------------------------100 ml - Alcohol 50
TCNICA: 1.- Desparafinar e hidratar 2.- Hematoxilina de Verhoeff ---------30 min. 6.- Picrofucsina -------------------1 pase 7.- Deshidratar
3.- Lavar 8.- Aclara con xilol ------------------------------------1 pase 4.- Cloruro frrico al 1 % ---------------1 pase 5.- Lavado en agua corriente ---------1 pase 9.- Montar
Azul Alcian
SOLUCIN:
Azul alcian---------- 1 gr. Acido actico------- 3 c.c Agua destilada----- 97 c.c
TCNICA
1-. Desparafinar.
Estufa durante 30 min. a 60C Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.
5- Lavar con agua corriente 10 min. 6 - Azul alcian al 2% - 10 min. 7-Deshidratar.

2- Hidratacin.
3- Lavar en H2O destilada. 4-. Hematoxilina de Harris 10 min.
8- Montaje.
Grocott
Para la tincin de hongos (candida, aspergillus). 1-Desparafinado.
10- Lavar con agua destilada 6 pases. 11- Cloruro de oro al 0.2 % - 2-5 min.
2- Hidratacin.
12 Lavar con agua destilada 5 min. 4- Solucin de cido crmico al 13- Tiosulfato sdico al 2% - 2-5 4% - 1 hora min. 5- Lavar en agua corriente 5 14- Lavar con agua corriente min. 15- Solucin verde luz al 1% 6 Bisulfito sdico al 1% - 1 min. 30-40 seg. 7- Lavar agua corriente 5 min. 16-Deshidratar. 3- Lavar en H2O destilada
Alcohol de 96. Alcohol absoluto. Xilol.
8- Lavar con agua destilada 3-4 17- Montaje. pases 9- Solucin argntica de trabajo:
En estufa 60--------------------------------- 1 hora En microondas (descongelacin) -------- 1-2 min.
Hierro coloidal
1-Desparafinado.
7- Mezcla ferrocianuroclorhdrico 20 min. 8- Lavar con agua corriente -5 min. 9- Lavar en agua destilada 3-4 pases.
2- Hidratacin.
3- Lavar en H2O destilada.
4- Solucin actica 3 min.
10- Si se desea se puede contrastar con:

Van Gieson 10 min. Rojo neutro 10 min.
11-Deshidratar. 5 - Solucin de trabajo de Hierro Alcohol de 70 Alcohol de 96. coloidal 1 hora. Alcohol absoluto.
Xilol.
6- Solucin actica 4 lavados ( 3 12- Montaje. min./lavado )
Mucicarmin de Mayer
Las mucinas o mucoprotenas son protenas con H.C. en una proporcin superior al 4 %. La tcnica del mucicarmn de Mayer sirve para identificar globalmente las mucinas, pero no reconoce su naturaleza bioqumica. 1-Desparafinado.
6 - Solucin diluida de mucicarmn ( 1:4 ) 30 min. 7 - Lavar con agua corriente 10 min. 8-Deshidratar.
2- Hidratacin.
3- Lavar en H2O destilada. 4- Teir con Hematoxilina de Weigert 10 min. 5 - Lavar con agua corriente 3 min.
9- Montaje.
Hemalumbre de Mayer
1-Desparafinado.
5-Lavar con agua corriente 5 min. 6 Contracolorear ( si se quiere ) con hematoxilina-eosina u otro colorante. 7-Deshidratar.
2- Hidratacin.
4- Colorear con hemalumbre de 8- Montaje. Mayer de 5 -10 min.
Orceina
ORCEINA (fibras elsticas, virus, hepatitis, cobre) 1-Desparafinado.
7- Solucin de Orcena --1:30 h. en estufa.
2- Hidratacin.
8 - Lavar en agua corriente y dejar secar.
9 - Alcohol clorhdrico al 1% ---1 pase 4- Permanganato potsico ----10 10- Deshidratar a partir de min. alcohol absoluto. 3- Lavar en H2O destilada 5 - cido oxlico al 2 % - 1 pase 11- Xilol 6- Lavar en agua corriente 12- Montar
Perls
1-Desparafinado.
Estufa durante 30 min. a 60.
6 - Hematoxilina de Mayer -10 min.
Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.
2- Hidratacin.
7- Lavar en agua corriente hasta que vire. 8- Eosina 1 pase. 9-Deshidratar.

3- Lavar en H2O destilada. 4 - Reactivo de perls 30 min. 5 - Lavar con agua corriente 5 min.
10- Montaje.
RESULTADOS: Hierro: azul.
Rojo congo
1-Desparafinado.
7- Lavar en agua corriente - 5 min. 8- Yoduro potsico --3-4 min. 9- Lavar con agua corriente. 10-Deshidratar.
2- Hidratacin.
3- Lavar en H2O destilada. 4- Hematoxilina de Carazzi o de Weigert 10 min.
5- Lavar en agua corriente - 10 11- Montaje. min. 6- Solucin Rojo Congo - 10 min.
(en el momento del uso se cogen 8 ml de rojo congo y se mezclan con 2 ml de glicerina. Filtrar)
Plata metenamina o Hexamina
1-Desparafinado.
9- Tiosulfato sdico o hiposulfito sdico 5 min. 10- Lavar en agua destilada. 11- Hematoxilina de Mayer 10 min. 12- Lavar en agua corriente
2- Hidratacin.
3- Lavar en H2O destilada. 4- cido per ydico al 0.5 % - 15 min. 5- Solucin de Ag-Metenamina:
. En estufa - 60 min. (controlar la tincin hasta que alcance un color tabaco y comprobar al microscopio que se han teido los glomrulos) .En microondas - 1-2 min. (descongelacin)
13- Eosina - 3 min.
14-Deshidratar. 6-Lavar en agua corriente 7- Cloruro de oro al 0.2 % -- 2 min. 8- Lavar en agua destilada.
15- Montaje.
Sudan III
1-Desparafinado.
5- Lavar con agua corriente. 6- Hematoxilina o carmn (para el contraste)--5-10 min. 7- Lavar en agua corriente 5 min. 8- Montaje en glicerina levulosa, gelatina, etc.
2- Hidratacin.
3- Lavar en H2O destilada. 4 Sudan III + 40 gotas de rojo escarlata - 24 horas.
RESULTADO: Las grasas neutras se tien.
Violeta de Cresilo
1- Desparafinado.
Estufa durante 30 min.a 60. Sumergimos en xilol durante 10-15 min.
4- Violeta de cresilo 0.1% entre 20-30 min. 5- Lavar en agua corriente. 6- Montar en medio acuoso.
2-Deshidratacin.
Alcohol absoluto durante 5 min. Alcohol 96 5 min. Alcohol 70 5 min.
Hematoxilina - Eosina Giemsa Gram Tricromico de Masson Tincin para reticulina P.A.S. Elstica de Van Gieson Azul Alcian Grocott
Hierro coloidal Mucicarmin de Mayer Hemalumbre de Mayer Orceina Perls Rojo congo Plata metenamina o Hexamina Sudan III Violeta de Cresilo

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