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UNIVERSIDADE DO EXTREMO SUL CATARINENSE CURSO DE FARMCIA

SUMAYA RIBARSKI SCALCO

AVALIAO DA ATIVIDADE ANTI-INFLAMATRIA TPICA DO EXTRATO GLICLICO DE Calendula officinalis L. (ASTERACEAE) VISITADAS E PROTEGIDAS POR INSETOS.

CRICIMA, NOVEMBRO DE 2009. 1

UNIVERSIDADE DO EXTREMO SUL CATARINENSE CURSO DE FARMCIA

SUMAYA RIBARSKI SCALCO

AVALIAO DA ATIVIDADE ANTI-INFLAMATRIA TPICA DO EXTRATO GLICLICO DE Calendula officinalis L. (ASTERACEAE) VISITADAS E PROTEGIDAS POR INSETOS.

Projeto de Trabalho de Concluso de Curso, apresentado para obteno do grau de Farmacutica Generalista do Curso de Farmcia da Universidade do Extremo Sul Catarinense UNESC.

Orientador (a): Prof. Dr. Luciane Costa Campos Co- orientador: Prof. Giordana Maciel Drio

CRICIMA, NOVEMBRO DE 2009. 2

1 INTRODUO A Calendula officinalis L. (Asteraceae) uma planta originria do Egito, foi importada para a Europa no sc. XII e trazida para o Brasil no sc. XVIII, sendo cultivada como planta ornamental e medicinal (Apg II, 2003). Trata-se de uma planta herbcea anual, de 30-60 cm de altura que apresenta captulos florais largos com cerca de 4,0 cm de dimetro, terminais e solitrias. A colorao das ptalas varia do amarelo ao laranja, sendo as centrais tubulosas e as perifricas liguladas (Correa et al., 1984). As flores abrem ao nascer do sol e fecham ao entardecer, sendo que o florescimento ocorre normalmente a partir do final da primavera at o final do vero (Silva Junior, 2006). No Brasil a planta conhecida popularmente como Calndula, Calndula-hortense, Maravilha-dos-jardins ou malmequer (Corra, 2003). O uso medicinal dessa planta remonta poca da antiguidade (Alonso, 1998). Muitas propriedades farmacolgicas tm sido atribudas C. officinalis (calndula), dentre elas: colertica, anti-inflamatria, analgsica, antitumoral, bactericida, diurtica, cicatrizante, sedativa e

imunomoduladora (Blumenthal, 1998 p. 100; Franco, 1996; Brown, Dattner, 1998; Ramos et al., 1998, Zitterl-eglesser et al, 1997). As flores da calndula tm grande importncia na medicina popular da Europa e oeste da sia, onde so utilizadas para o tratamento de condies inflamatrias de rgos internos como lcera gstrica, dismenorria, em infeces urinrias, dentre outras. Tambm externamente utilizada para inflamaes na mucosa oral e farngea (Yoshikawa et al., 2001). Com a vasta vantagem de ser uma planta com efeitos anti-inflamatrios, no Brasil muito utilizada como medicamento, fazendo-se uso no tratamento de determinadas doenas. O ch das flores, quando ingerido, apresenta ao anti-espasmdica, expectorante, anti-abortiva e no tratamento de anemias nervosas. Externamente utilizado para combater inflamaes das vceras, feridas, chagas cancerosas, dor de garganta e ictercia, geralmente utiliza-se as ptalas maceradas em compressas de alcoolato para feridas abertas (Korbes, 1995; Michalak, 1997). 3

O extrato das flores da calndula nas formas farmacuticas de tintura, infuso e gel, creme e pomada so amplamente utilizados como anti-inflamatrio e cicatrizante para pele e mucosas (Dellaloggia et al.,1994, Zitterl-eglesser, et al 1997, Blumenthal, 1998 p.100 ). No Brasil o uso da Calndula est regulamentado pela RE n 89 de 16 de maro de 2004 da ANVISA como anti-inflamatrio e cicatrizante de uso tpico em doses dirias de 8,8 a 17,6 mg de flavonides (Brasil, 2004). Como a flor a parte mais utilizada tambm a mais estudada, sendo detectados nessas flavonides, leos essenciais com derivados oxigenados de sesquiterpenides e diversas saponinas. Como constituintes qumicos, so encontrados nas flores alguns triterpenos, terpenos oligoglicosdeos e flavonides glicosdeos (Blumenthal, 1998 p. 100; Bruneton, 1995; Who, 2001 p. 287). Tm sido demonstradas diferentes atividades anti-inflamatrias do extrato hidroalcolico de C. officinalis, sendo a capacidade antioxidante desta espcie um possvel mecanismo de ao para tais propriedades. Cordova et al. (2002) investigaram o extrato butanlico de C. officinalis contra a peroxidao lipdica de microssomas de fgado de rato e ao scavenger de radicais livres. Os resultados obtidos sugerem que a frao butanlica possui ao scavenger e atividade antioxidante significativas. Herold et al. (2003) investigaram o potencial efeito antioxidante de C. officinalis, confirmando sua ao scavenger a diversas espcies reativas de oxignio. Estas aes podem estar relacionadas propriedade anti-inflamatria de C. officinalis, podendo ser uma importante ferramenta para novos agentes anti-inflamatrios (Cordova et al., 2002; Herold et al., 2003). Vrios compostos com ao anti-inflamatria de C. officinalis j foram identificados. Dentre estes, os anis aromticos A, D e E de faradiol, o anel E de ambos arnidiol e calenduladiol tm sido alvo de vrios estudos de manipulao qumica seletiva para modificao da polaridade e afinidade gua (Akihisa et al., 1996). Ukiya et al. (2006) avaliaram a atividade anti-inflamatria de diversos compostos isolados de flores de C. officinalis, includo dez triterpenos glicosdeos. Os resultados obtidos pelos autores mostraram potente ao contra inflamao induzida por TPA em camundongos de nove dos dez 4

triterpenos. Este estudo incluiu quatro novos compostos triterpenos isolados que tambm mostraram efeito anti-inflamatrio, o calendulaglicosdeo A 6'-O-metil ster, calendulaglicosdeo A 6'-O-n-butil ster, calendulaglicosdeo B 6'-O-n-butil ster e calendulaglicosdeo C 6'-O-n-butil ster. Em estudo realizado por Neukirch et al. (2005), 13 desses terpenides manipulados presentes na C. officinalis foram avaliados sobre sua ao anti-inflamatria tpica por inibio de edema induzido por leo de crton em camundongos, sendo demonstrada atividade de alguns deles. Este resultado relevante para futuros estudos de relao estrutura-atividade. Trs triterpenos isolados de Calendula officinalis, -taraxasterol e dois monosteres de faradiol em doses de 0,24 e 0,48mg/orelha apresentaram atividade anti-edematognica frente ao modelo de orelha de camundongo induzido por leo de crton de at 86%, apresentando atividade antiinflamatria equivalente a indometacina (Zitterl-eglesser et al 1997). Outro estudo tambm avaliou a atividade anti-inflamatria das flores de calndula, sob aplicao tpica do extrato lipoflico em doses de 0,3 a 1,2 mg/orelha promovendo a reduo de at 71% de edema de orelha induzido por leo de crton. A frao triterpnica do mesmo extrato apresentou uma inibio de at 76% em doses de 0,15 e 1,2mg/ orelha sob as mesmas condies (Della-loggia et al., 1994). Tambm utilizando o edema de orelha de rato induzido por leo de crton, Parente et al. (2003) no encontrou indcios de atividade anti-inflamatria do extrato etanlico de calndula administrado por via oral nas doses de 0,1;0,3; e 1,0g/kg. Outro estudo mostrou que o extrato de flores da calndula administrados na dose de 100mg/kg por via oral apresentaram boa atividade inibitria frente a edema de pata em rato e infiltrao leucocitria induzidos por carragenina e prostaglandina E1, respectivamente (Shipochliev et al, 1981). Glicosdeos de isorhamnetina isolados das flores de calndula apresentaram atividade inibitria da lipooxigenase de fgado de rato in vitro. Entretanto a atividade anti-inflamatria da planta atribuda aos seus terpenos, sobretudo os monosteres de faradiol, devido a sua prevalncia nas flores (Della5

loggia et al., 1994, Akihisa et al., 1996). J Kloucheck-popova et al. (1982) demonstraram que a associao de pomada de calndula 5% com alantona apresentou efeito cicatrizante em feridas cutneas induzidas por cirurgia em ratos. A combinao estimulou a regenerao fisiolgica e a epitelizao atravs do aumento do metabolismo de glicoprotenas e fibras colgenas durante a regenerao tissular. Os terpenides so constituintes de leos volteis encontrados em plantas aromticas, sendo os monoterpenos os mais freqentes (90%). So substncias que exercem diferentes funes ecolgicas, como inibidores da germinao, na proteo contra predadores, na atrao de polinizadores, entre outras (Simes; Spitzer, 2003 p.473). A presena do aroma produzido pelos leos volteis pode estar envolvida na atrao de polinizadores, sendo que dentre os insetos as abelhas e borboletas so freqentemente atrados por aromas de diversas flores. Tambm encontram-se evidncias de que algumas plantas produzem leos volteis txicos como proteo contra predadores e infestantes (Simes; Spitzer, 2003, p.474). Muitos trabalhos apontam a existncia de diversas funes para leos volteis, especialmente relacionadas ao meio, sugerindo uma ampla variao de acordo com as variaes do meio. Segundo Silva et al. (1995), no processo de cultivo da espcie alguns fatores podem afetar de forma significativa a qualidade e a quantidade de princpios ativos produzidos pelas plantas, pois rotas metablicas podem ser ativadas e/ou inativadas, levando produo de diversos metablitos secundrios em cada situao. Da mesma forma, Valladares et al. (2002) apontam que mudanas na composio qumica de plantas podem ser induzidas em resposta a ataques por insetos herbvoros ou a visitas das flores. Segundo estes autores, as mudanas qumicas induzidas em plantas medicinais por insetos podem ser comuns e suas implicaes econmicas merecem a investigao. Diversos trabalhos apontam a grande importncia das Asteraceae no ecossistema, por serem altamente visitadas por insetos; esta caracterstica pode estar diretamente relacionada ao fato das flores

ficarem abertas, portanto expostas por um longo perodo de tempo, proporcionando assim abrigo e alimento (Proctor et al., 1996). Uma vez que a composio qumica das plantas varia com suas condies fisiolgicas, e que essas condies dependem da interao com insetos predadores ou visitantes florais, as atividades antioxidantes e/ou protetoras de DNA de plantas, entre elas a C. officinalis, podem apresentar resultados diferentes entre plantas com e sem a visitao desses animais. Sendo assim, diante do interesse comercial da calndula e visando a possvel influncia dos insetos visitantes florais e fitfagos na composio qumica da planta torna-se relevante o estudo da influncia dessa interao sobre a atividade farmacolgica da espcie, em especial sobre a atividade anti-inflamatria j descrita na literatura.

2. OBJETIVO 2.1 Geral: - Avaliar a atividade anti-inflamatria tpica do extrato gliclico de flores de Calendula officinalis L. protegidas e visitadas por insetos polinizadores e fitfagos em camundongos. 2.2 Especficos: - Avaliar comparativamente a propriedade anti-inflamatria do creme de extrato gliclico de C. officinalis protegidas e visitadas por insetos polinizadores e fitfagos atravs do modelo de edema induzido por leo de crton em camundongos.

3. METOLOGIA 3.1 Tipo de pesquisa 8

Pesquisa bsica, quantitativa, experimental. 3.2 Comit de tica Este projeto j foi submetido ao Comit de tica da UNESC, e sendo este aprovado pelo Comit, iniciar, ento, a pesquisa. 3.3 Obteno das amostras O material botnico, captulos de C. officinalis, ser coletado no municpio de Gro-Par (SC) com identificao da planta pela Professora Dra. Vanilde Citadine Zanette e posterior herborizao no Herbrio Pe. Dr. Raulino Reitz, da Universidade do Extremo Sul Catarinense UNESC. Sero coletados 3kg de captulos de plantas expostas visitao de insetos e 3kg de plantas protegidas. Para a proteo das plantas, ser preparado um canteiro e as plantas sero protegidas de visitas de insetos por meio de uma cobertura de sombrite e sero inspecionadas, diariamente, pelo proprietrio da rea, para evitar eventuais invases por insetos. 3.4. Preparao dos extratos gliclicos As flores secas e maceradas sero colocadas em um recipiente contendo o lquido extrator (gua destilada 50% e propilenoglicol 50%) deixando-se em repouso durante um perodo de 14 dias. Aps este perodo, com auxlio de funil e gaze, o extrato filtrado e concentrado em estufa numa temperatura de 45C. (Vanaclocha, 2003, p.157-158). Os extratos gliclicos sero de plantas protegidas e visitadas e sero armazenados em frascos hermeticamente fechados, num local fresco e ao abrigo da luz. 3.5 Preparao do creme

Ser produzido o creme Polawax de acordo com o autor Antunes Junior (2002). Este utilizado como base farmacolgica que age como um sistema de carreamento em preparaes magistrais, permitindo que uma larga variedade de substncias ativas seja rpida e convenientemente transportada para a pele. O Polawax uma cera emulsificante no-inica na forma de emulso leo em gua (O/A). Sua composio compreende: Polawax, Estearato de octila, lcool de lanolina, Propilenoglicol, propilparabeno, BHT e gua. 3.6 Animais Sero utilizados camundongos machos da linhagem CF1, adquiridos do FEPPS (Fundao Estadual de Produo e Pesquisa em Sade RS), com idade entre 2 a 3 meses e com massa corporal entre 35-40 gramas. Os animais sero mantidos a uma temperatura controlada (20 +/- 3C), com gua e comida ad libitum. Aps os experimentos os animais sero submetidos eutansia atravs de deslocamento da cervical. 3.7 Teste farmacolgico 3.7.1 Atividade anti-edema induzida por leo de crton Grupos de sete camundongos sero tratados com trs concentraes do extrato gliclico da C. officinalis visitada e protegida a serem determinados posteriormente. Estes sero anestesiados com Ketamina 80mg/kg (i.p.), e aps 30 minutos ser aplicado uma soluo contendo 75 g de leo de Crton dissolvidos em 15l de acetona irritante na superfcie interior da orelha esquerda e logo aps ser aplicado o creme contendo extrato gliclico de C. officinalis no local. No grupo padro ser aplicado o creme de indometacina, e no grupo controle apenas o leo e crton. As orelhas direitas no sero tratadas.

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Os animais sero sacrificados por deslocamento cervical aps 6 horas e ser realizada a remoo das orelhas tratadas e no-tratadas. A diferena de peso entre as duas orelhas ser tomada como medida da resposta anti-edema (Tubaro et al., 1985). 3.8 Anlise estatstica Os resultados sero analisados pelo teste de anlise de varincia ANOVA seguida do pos-hoc Student Newman Keuls.

3.9 Frmacos As drogas utilizadas nos experimentos sero adquiridas pelo Laboratrio de Etnofarmacologia da UNESC, sendo elas as seguintes: Ketamina, indometacina e leo de crton da SIGMA ALDRICH.

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A n l i s e r e s u l t a d o s X X T r m i n o d a e l a b o r a o d o T C C e d e f e s a X 5 . O R A M E N T O T a b e l a 1 :O r a m e n t o d o s g a s t o s c o m a p e s q u i s a . 4. CRONOGRAMA DAS ATIVIDADES DE PESQUISA M a t e r i a l d e c o n s u m o a l o r e s A n i m a i s e x p e r i m e n t a i s ( N = 5 6 ) V 0 l e o d e c r o n R $ 2 8 3 , 0 K e t a m i n a 9 6 C r e m e d n d m e t a c i n a R $ 1 6 , 0 P r o p i l e o g l i c o l 4 5 S l u o a c e t n a R $ 1 0 , 0 C r e m e p o l a w a x R $ 4 6 , 5 S e r i n g a s e a g u l h a s ,l u v a s ,p o n t e i r a s ,m s c a r a s . S R $ 1 5 0 , 0 u b t o t a l : 2 1 6 , 5 0 E s t e p r o j e t o e s t s e n d o f i n a n c i a d o p e l a s s e g u i n t e s a g n c i a s f i n a n c i a d o r a s : U N E S C ,C N P q . Tabela 1: Atividades realizadas no ano 2009.

Atividade Reviso bibliogrfica Coleta inflorescncias Preparao extratos Teste Anti-edematoso

mai jun jul ago set out nov X X X X X X X X X X X X X

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NORMAS DA REVISTA DE PUBLICAO Revista Brasileira de Farmacognosia

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Revista Brasileira de Farmacognosia Brazilian Journal of Fharmacognosy

Forma e preparao de manuscritos 1. NORMAS GERAIS 1.1 Todos os manuscritos submetidos devem ser inditos. A publicao simultnea de manuscritos descrevendo o mesmo trabalho em diferentes peridicos no aceitvel. Os direitos de publicao passam a ser da Revista Brasileira Farmacognosia, inclusive tradues; publicaes subseqentes so aceitas desde que citada a fonte. Artigos Originais (em portugus, ingls ou espanhol): refere-se a trabalhos inditos de pesquisa. Devem seguir a forma usual de apresentao, contendo Introduo, Material e Mtodos, Resultados e Discusso, etc, de acordo com as peculiaridades de cada trabalho. 1.2 A Revista Brasileira Farmacognosia recebe para publicao trabalhos cientficos originais, revises e divulgaes escritos em Portugus, Espanhol ou Ingls. O contedo dos trabalhos de total responsabilidade do(s) autor(es), e no reflete necessariamente a opinio do Editor Chefe ou dos membros do Conselho Editorial 1.3 A Revista Brasileira de Farmacognosia submeter todos os manuscritos recebidos anlise de consultores ad hoc, cujos nomes permanecero em sigilo e que tero a autoridade para decidir sobre a pertinncia de sua aceitao, podendo inclusive, reapresent-los ao(s) autor(es) com sugestes para que sejam feitas alteraes necessrias e/ou para que os mesmos sejam adequados s normas editoriais da revista. 1.4 Toda idia e concluso apresentadas nos trabalhos publicados so de total responsabilidade do(s) autor(es), e no reflete necessariamente a opinio do Editor Chefe ou dos membros do Conselho Editorial. 18

1.5 Todos artigos envolvendo estudos com humanos ou animais devero ter Pareceres dos Comits de tica de Pesquisa em Seres Humanos ou em Animais das instituies a que pertencem os autores, autorizando tais estudos. 1.6 Todo material vegetal utilizado na pesquisa descrita no trabalho deve ter a indicao do seu local de coleta (inclusive coordenadas obtidas por GPS, se possvel), o pas de origem, o responsvel pela identificao da espcie e a localizao da exsicata. Os autores devem estar preparados para fornecer evidncia documental de que a aprovao para a coleta foi concedida pela autoridade apropriada no pas de origem.

2. NORMAS PARA A ELABORAO DAS CONTRIBUIES 2.1 Os autores devem manter uma cpia (eletrnica e impressa) do manuscrito submetido, para o caso de possvel perda ou danos causados ao original enviado revista. 2.2 As Figuras (fotografias, grficos, desenhos, etc.) devero ser apresentadas em folhas separadas e numeradas consecutivamente em algarismos arbicos. As respectivas legendas devero ser claras, concisas, sem abreviaturas e localizadas abaixo das figuras. Suas respectivas posies no texto devero ser indicadas, preferentemente, logo aps sua citao no corpo do trabalho. No caso de fotografias ou desenhos feitos a mo livre, estes devero ser colocados em envelopes parte, em perfeito estado e devidamente identificados no verso, a lpis. 2.3 As Tabelas e os Quadros devero ser apresentados em folhas separadas e numerados consecutivamente em algarismos arbicos. As tabelas (dados numricos) no podem ser fechadas por linhas laterais. As respectivas legendas devero ser claras, concisas, sem abreviaturas e localizadas na parte superior dos mesmos. Devero ser indicados os locais aproximados no texto, onde as tabelas e os quadros sero intercalados, preferentemente, logo aps sua citao no corpo do trabalho. 3. FORMATAO DO TEXTO E CONTEDO DO TRABALHO 3.1 Os originais devero ser redigidos e digitados em folhas de papel tamanho A4 ou carta, espao duplo, fonte tipo Times New Roman, tamanho 12, com texto justificado, margem de 2cm em cada um dos quatro lados, e perfazendo o total de, no mximo, 15 e, no mnimo, 5 pginas, incluindo figuras, tabelas e quadros. 19

3.2 Ttulo e subttulo: Devero estar de acordo com o contedo do trabalho, levando em conta o mbito e objetivos da Revista. Estes devero estar escritos em caixa baixa, negritados, fonte tipo Times New Roman, tamanho 14. Para os trabalhos redigidos nas lnguas Portuguesa e Espanhola, providenciar tambm verso do ttulo para a lngua Inglesa, o qual acompanhar o Abstract. 3.3 Autores: Os nomes dos autores devem vir abaixo do ttulo, centralizados. O nome e os sobrenomes devem aparecer na ordem correta, sendo obrigatrio que o primeiro (nome) e o ltimo (sobrenome) apaream por extenso (ex. Carlos N.U. Silva ou Carlos N. Ubiratan Silva). No caso de vrios autores, seus nomes devero ser separados por vrgulas. 3.4 Filiao dos autores: Aps o nome de cada autor dever constar um nmero Arbico, sobrescrito, que indica sua instituio de procedncia e, dever aparecer logo abaixo da nominata dos autores, tambm centralizado e com endereos completos, inclusive o CEP da cidade. Deve-se assinalar o nome do autor principal com um asterisco sobrescrito, para o qual toda correspondncia dever ser enviada. O endereo eletrnico, telefone e fax do autor principal aparecero na primeira pgina do trabalho como uma nota de rodap. 3.5 Resumo em portugus: Dever apresentar concisamente o trabalho destacando as informaes de maior importncia, expondo metodologia, resultados e concluses. Permitir avaliar o interesse pelo artigo, prescindindo de sua leitura na ntegra. Dever-se- dar destaque ao Resumo como tpico do trabalho (mximo de 200 palavras). 3.6 Unitermos: Devero identificar/representar o contedo do artigo. Observar o limite mximo de 6 (seis). So importantes para levantamentos em banco de dados, com o objetivo de localizar e valorizar o artigo em questo. Devero vir separados por vrgula. 3.7 Abstract: Os trabalhos redigidos nas lnguas Portuguesa e Espanhola devem vir acompanhados tambm da verso do resumo para a lngua Inglesa. Evitar tradues literais. Quando no houver domnio deste idioma, consultar pessoas qualificadas. O Abstract deve ser encabeado por verso do ttulo na lngua inglesa. 3.8 Keywords: Unitermos em ingls. Tambm em nmero mximo de 6 (seis) e separados por vrgula. 3.9 Introduo: Dever estabelecer com clareza o objetivo do trabalho e sua relao com outros trabalhos na mesma rea. Extensas revises da literatura devero ser substitudas por referncias a 20

publicaes mais recentes, onde estas revises tenham sido apresentadas e estejam disponveis. 3.10 Material e Mtodos: A descrio dos materiais e dos mtodos usados dever ser breve, porm suficientemente clara para possibilitar a perfeita compreenso e a reproduo do trabalho. Processos e tcnicas j publicados, a menos que tenham sido extensamente modificados, devero ser referenciados por citao. 3.11 Resultados: Devero ser apresentados com o mnimo possvel de discusso ou interpretao pessoal e, sempre que possvel, ser acompanhados de tabelas e figuras adequadas. Os dados, quando pertinentes devero ser submetidos a uma anlise estatstica. 3.12 Discusso: Dever ser restrita ao significado dos dados obtidos e resultados alcanados, evitandose inferncias no baseadas nos mesmos. Opcionalmente, Resultados e Discusso podero ser apresentados num nico item. 3.13 Agradecimentos: Este item opcional e dever vir antes das Referncias Bibliogrficas. 4. REFERNCIAS A formatao das referncias deve ser padronizada em conformidade com as exigncias da revista, como mostrado abaixo: 4.1 Referncia dentro do texto: - No incio da citao: autor em caixa baixa, seguido do ano entre parnteses. Ex. Pereira (1999). - No final da citao: autor em caixa baixa e ano - ambos entre parnteses. Ex. (Silva, 1999) ou (Silva; Souza, 1998) ou (Silva; Souza; Dias, 2000) ou (Silva et al., 1999) ou (Silva et al., 1995a,b). - Citao textual: colocar, tambm, a pgina . Ex. (Silva, 1999, p.24) 4.2 As Referncias Bibliogrficas sero ordenadas alfabeticamente pelo sobrenome do primeiro autor, em caixa baixa e em ordem crescente de data de publicao. Deve-se levar em considerao as seguintes ocorrncias: 4.2.1 Revista: Ser utilizado a abreviatura do peridico, em itlico, definida no Chemical Abstracts 21

Service Source Index (ver http://www.cas.org/sent.html). Caso a abreviatura autorizada de um determinado peridico no puder ser localizado e no for bvio como o ttulo deve ser abreviado, deve-se citar o ttulo completo. - Vargas TOH 1996. Fatores climticos responsveis pela morte de borboletas na regio sul do Brasil. Rev Bras Assoc Entomol 11: 100-105.

No caso especial da revista citada no ser de fcil acesso, recomendado citar o seu nmero de Chemical Abstracts, como segue: - Qu W, Li J, Wang M 1991. Chemical studies on Helicteres isora L. Zhongguo Yaoke Daxue Xuebao 22: 203-206, apud Chemical Abstracts 116: 124855r. Numa citao de citao, colocar o nome das fontes em itlico. - Wax ET 1977. Antimicrobial activity of Brazilian medicinal plants. J Braz Biol Res 41: 77-82, apud Nat Prod Abs 23: 588-593, 1978. 4.2.2 Livro: - Costa AF 1996. Farmacognosia. Lisboa: Calouste Gulbenkian. 4.2.3 Captulo de livro: - Farias CRM, Ourinho EP 1999. Restaurao dentria. In: Goldaman, G.T. (org.) A nova odontologia. 5.ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, p.95-112. 4.2.4 Tese e Dissertao: - Lima N 1991. Influncia da ao dos raios solares na germinao do nabo selvagem. Campinas, 755p. Tese de Doutorado - Faculdade de Cincias Agrrias, Universidade Estadual de Campinas. - Romero MAV 1997. Estudo qumico de Brunfelsia hopeana Benth e do mecanismo de ao da escopoletina. Joo Pessoa, 119p. Dissertao de Mestrado - Programa de Ps-Graduao em Produtos naturais, Universidade Federal da Paraba. 22

4.2.5 Congressos: - Thomas G, Selak M, Henson PM 1996. Estudo da frao aquosa do extrato etanlico das folhas de Cissampelos sympodialis em neutrfilos humanos. XIV Simpsio de Plantas Medicinais do Brasil. Florianpolis, Brasil. Os trabalhos devero ser enviados, inicialmente, em trs cpias impressas, utilizando-se o programa Word for Windows. Quando da aceitao do trabalho, aps as devidas correes, devero ser enviados um CD contendo o arquivo do trabalho e uma cpia impressa. Toda correspondncia dever ser enviada ao Editor-Chefe da Revista. Na carta de encaminhamento solicitado a indicao de cinco provveis referees, de outras instituies, com seus endereos postais e eletrnicos. A qualificao do trabalho ser atestada por, no mnimo, dois consultores, indicados pela Editoria

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UNIVERSIDADE DO EXTREMO SUL CATARINENSE CURSO DE FARMCIA

SUMAYA RIBARSKI SCALCO

AVALIAO DA ATIVIDADE ANTI-INFLAMATRIA TPICA DO EXTRATO GLICLICO DE Calendula officinalis L. (ASTERACEAE) VISITADAS E PROTEGIDAS POR INSETOS.

CRICIMA, NOVEMBRO DE 2009. 24

UNIVERSIDADE DO EXTREMO SUL CATARINENSE CURSO DE FARMCIA

SUMAYA RIBARSKI SCALCO

AVALIAO DA ATIVIDADE ANTI-INFLAMATRIA TPICA DO EXTRATO GLICLICO DE Calendula officinalis L. (ASTERACEAE) VISITADAS E PROTEGIDAS POR INSETOS.

Trabalho de Concluso de Curso, apresentado para obteno do grau de Farmacutica Generalista do Curso de Farmcia da Universidade do Extremo Sul Catarinense - UNESC.

Orientador (a): Prof. Dr. Luciane Costa Campos Co- orientador: Prof. Giordana Maciel Drio

CRICIMA, NOVEMBRO DE 2009. 25

AVALIAO DA ATIVIDADE ANTI-INFLAMATRIA TPICA DO EXTRATO GLICLICO DE Calendula officinalis L. ( ASTERACEAE) VISITADAS E PROTEGIDAS POR INSETOS. EVALUATION OF ANTI-INFLAMMATORY ACTIVITY OF EXTRACT TOPICAL GLYCOL DE Calendula officinalis L. (ASTERACEAE) VISITED AND UNVISITED BY INSECTS.

Sumaya R. Scalco1*, Tamara S. Bosse1, Luciane C. Campos1,2.

1Laboratrio de Etnofarmacologia, GPEtno, Universidade do Extremo Sul Catarinense, Av. Universitria, 1105, Bloco S, CEP 88806-000, Cricima/SC, Brasil.
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Programa de Ps-Graduao em Cincias Ambientais, Universidade do Extremo Sul Catarinense, Av. Universitria, 1105, Bloco S, CEP 88806-000, Cricima/SC, Brasil.

*Endereo para correspondncia: Sumaya Ribarski Scalco Universidade do Extremo Sul Catarinense, Laboratrio de Etnofarmacologia, Bloco S sala 07 Av. Universitria n1105, CEP: 88806-000, Cricima SC, Brasil e-mail suh_maya@hotmail.com Telefone: (048) 34312643 ou (048) 99356424 Cricima/SC, Brasil 26

RESUMO Calendula officinalis L. (Asteraceae), utilizada para combater feridas, dor de garganta e inflamaes. As plantas produzem mais ou menos metablitos secundrios em presena de insetos. O objetivo desse estudo foi comparar a propriedade anti-inflamatria tpica do creme contendo extrato gliclico de flores de calndula protegidas e visitadas por insetos atravs do modelo de edema induzido por leo de crton. Camundongos machos (n=7) foram anestesiados com ketamina, e aps 30min. receberam nas orelhas esquerdas leo de crton, logo a seguir receberam o creme dos extratos gliclicos da planta protegida ou visitada por insetos nas concentraes de 5, 10 e 20%, indometacina 20% ou controle com apenas o leo. Aps 6 horas os animais foram mortos removendo-se as orelhas tratadas e no tratadas e a diferena de peso entre elas foi medida como a resposta anti-edema. Os resultados foram analisados por ANOVA/SNK. A partir dos resultados foi possvel observar que o extrato gliclico de C. officinalis apresenta atividade anti-inflamatria nas concentraes de 5 e 20%, semelhante a indometacina, no havendo diferena significativa na inibio de edema entre a planta visitada e protegida. Segure-se portanto que, nesse modelo, a visitao ou no de insetos no influenciou sobre a atividade anti-inflamatria da planta.

Palavras chaves: Calendula officinalis, atividade antiinflamatria, visitao de insetos, leo de crton, atividade anti-edema.

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ABSTRACT Calendula officinalis L. (Asteraceae) is used to treat injury, sore throat and inflammation. The plants produce more or less secondary metabolites in the presence of insects. The aim of this study was to compare the anti-inflammatory property of topical cream containing glycolic extract of calendula flowers protected and visited by insects, through the model of edema induced by croton oil. Male mice (n=7) were anesthetized with ketamine, and after 30 min. received croton oil in the right ears; immediately after the mice received the cream of the glycol plant extracts protected or visited by insects, in concentrations of 5, 10 and 20%, 20% indomethacin or control with only the oil. After 6 hours the animals were killed, treated and untreated ears were removed and the weight difference between them was measured as the anti-edema response. Results were analyzed by ANOVA/SNK. From the results it was observed that the glycolic extract of C. officinalis has anti-inflammatory activity at concentrations of 5 and 20%, similar to indomethacin, there was no significant difference in the inhibition of edema between the visited and protected plant. It is therefore suggested that in this model, the visitation by insects or not did not influence the anti-inflammatory activity of the plant.

Keywords: Calendula officinalis, anti-inflammatory activity, insect visitation, croton oil, anti-edema activity

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Introduo

A Calendula officinalis L. (Asteraceae) uma planta originria do Egito, foi importada para a Europa no sc. XII e trazida para o Brasil no sc. XVIII, sendo cultivada como planta ornamental e medicinal (Apg II, 2003). Trata-se de uma planta herbcea anual, de 30-60 cm de altura que apresenta captulos florais largos, e a colorao das ptalas varia do amarelo ao laranja. As ptalas centrais das flores so tubulosas e as perifricas liguladas (Correa et al., 1984). As flores abrem ao nascer do sol e fecham ao entardecer, sendo que o florescimento ocorre normalmente a partir do final da primavera at o final do vero (Silva Junior, 2006). No Brasil a planta conhecida popularmente como Calndula, Calndula-hortense, Maravilha-dos-jardins ou malmequer (Corra, 2003). Muitas propriedades farmacolgicas tm sido atribudas C. officinalis (calndula), dentre elas: colertica, anti-inflamatria, analgsica, antitumoral, bactericida, diurtica, cicatrizante, sedativa e imunomoduladora (Blumethal, 1998, p.100; Franco, 1996; Brown, Dattner, 1998; Ramos et al., 1998, Zitterl-eglesser et al, 1997). As flores dessa planta tm grande importncia na medicina popular da Europa e oeste da sia, onde so utilizadas para o tratamento de condies inflamatrias de rgos internos como lcera gstrica, dismenorria, em infeces urinrias, dentre outras. Tambm externamente utilizada para inflamaes na mucosa oral e farngea (Yoshikawa et al., 2001). Com a vasta vantagem de ser uma planta com efeitos anti-inflamatrios, no Brasil na medicina popular muito utilizada como medicamento, fazendo-se uso no tratamento de determinadas doenas. O ch das flores, quando ingerido, apresenta ao anti-espasmdica, expectorante, anti-abortiva e melhora nas anemias nervosas; externamente utilizado para combater inflamaes das vceras, feridas, chagas cancerosas, dor de garganta e ictercia, geralmente utiliza-se as ptalas maceradas em compressas de alcoolato para feridas abertas (Korbes, 1995; Michalak, 1997). O extrato das flores da calndula nas formas farmacuticas de tintura, infuso e gel, creme e 29

pomada so amplamente utilizados como anti-inflamatrio e cicatrizante para pele e mucosas (Blumethal, 1998, p.100; Della-loggia et al.,1994, Zitterl-eglesser, et al 1997). No Brasil o uso da calndula est regulamentado pela RE n 89 de 16 de maro de 2004 da ANVISA como antiinflamatrio e cicatrizante de uso tpico em doses dirias de 8,8 a 17,6 mg de flavonides (Brasil, 2004). Como a flor a parte mais utilizada tambm a mais estudada, sendo detectados flavonides, leos essenciais com derivados oxigenados de sesquiterpenides e diversas saponinas. Como constituintes qumicos, so encontrados nas flores alguns triterpenos, terpenos oligoglicosdeos e flavonides glicosdeos (Blumethal, 1988, p.100; Bruneton, 1995; Who, 2001 p. 287). Vrios compostos com ao anti-inflamatria de C. officinalis j foram identificados. Dentre estes, os anis aromticos A, D e E de faradiol, o anel E de ambos arnidiol e calenduladiol tm sido alvo de vrios estudos de manipulao qumica seletiva para modificao da polaridade e afinidade gua (Akihisa et al., 1996). Em estudo realizado por Neukirch et al. (2005), 13 desses terpenides manipulados presentes na C. officinalis foram avaliados sobre sua ao anti-inflamatria tpica por inibio de edema induzido por leo de crton em camundongos, sendo demonstrada atividade de alguns deles. Ukiya et al. (2006) avaliaram a atividade anti-inflamatria de diversos compostos isolados de flores de C. officinalis, includo dez triterpenos glicosdeos. Os resultados obtidos pelos autores mostraram potente ao contra inflamao induzida por TPA em camundongos de nove dos dez triterpenos. Este estudo incluiu quatro novos compostos triterpenos isolados que tambm mostraram efeito anti-inflamatrio, o calendulaglicosdeo A 6'-O-metil ster, calendulaglicosdeo A 6'-O-n-butil ster, calendulaglicosdeo B 6'-O-n-butil ster e calendulaglicosdeo C 6'-O-n-butil ster. Os terpenides so constituintes de leos volteis encontrados em plantas aromticas, sendo os monoterpenos os mais freqentes (90%). So substncias que exercem diferentes funes ecolgicas, como inibidores da germinao, na proteo contra predadores, na atrao de polinizadores, entre 30

outras. A presena do aroma produzido pelos leos volteis pode estar envolvida na atrao de polinizadores, sendo que dentre os insetos as abelhas e borboletas so freqentemente atrados por aromas de diversas flores. Tambm encontram-se evidncias de que algumas plantas produzem leos volteis txicos como proteo contra predadores e infestantes (Simes; Spitzer, 2001, p.474-475). Muitos trabalhos apontam a existncia de diversas funes para leos volteis, especialmente relacionadas ao meio, sugerindo uma ampla variao de acordo com as variaes do meio. A associao entre plantas e insetos uma das interaes ecolgicas mais freqentes da natureza e atualmente essa relao tem importncia crucial para o conhecimento fundamental da biodiversidade terrestre (Schoonhovem, et al, 1998; Prado; Lewinsohn, 2004). A alimentao dos insetos provoca respostas de defesa em plantas infestadas, incluindo a emisso de compostos orgnicos volteis, que podem servir como sinais de defesa indireta. At o momento, a contribuio do tecido vegetal ferido durante o processo de alimentao na iniciao de respostas de defesa no est clara. Os possveis danos e mudanas na composio qumica da planta se assemelham fortemente ao processo de visitao e alimentao do inseto, representando uma ferramenta valiosa para analisar o papel dos sinais envolvidos na induo de reaes de defesa da planta contra os ataques (Mithofer et al, 2005). Artrpodes herbvoros, principalmente larvas de insetos, representam um grande desafio para as plantas em seu habitat natural, pois para a defesa contra insetos, as plantas adotam mecanismos de defesa representados por barreiras fsicas, tais como as cutculas, espinhos e tricomas, ou preexistente metablitos secundrios que so nocivas ou mesmo txicas ao inseto (Mithofer et al, 2005). Segundo Silva et al. (1995), no processo de cultivo de plantas medicinais alguns fatores podem afetar de forma significativa a qualidade e a quantidade de princpios ativos produzidos por elas, pois rotas metablicas podem ser ativadas e/ou inativadas, levando produo de diversos metablitos secundrios em cada situao. Da mesma forma, Valladares et al. (2002) apontam que mudanas na composio qumica de plantas podem ser induzidas em resposta a ataques por insetos herbvoros ou a 31

visitas das flores. Segundo estes autores, as mudanas qumicas induzidas em plantas medicinais por insetos podem ser comuns e suas implicaes econmicas merecem a investigao. Diversos trabalhos apontam a grande importncia das Asteraceae no ecossistema, por serem altamente visitadas por insetos; esta caracterstica pode estar diretamente relacionada ao fato das flores ficarem abertas, portanto expostas por um longo perodo de tempo, proporcionando assim abrigo e alimento (Proctor et al., 1996, Krug, 2007). Uma vez que a composio qumica das plantas varia com suas condies fisiolgicas, e que essas condies dependem da interao com insetos predadores ou visitantes florais, entre elas a C. officinalis, pode apresentar resultados diferentes entre plantas com e sem a visitao desses animais. Sendo assim, diante do interesse comercial da calndula o presente estudo avaliou comparativamente a propriedade anti-inflamatria do creme de extrato gliclico de C. officinalis protegidas e visitadas por insetos polinizadores ou fitfagos atravs do modelo de edema induzido por leo de crton em camundongos. Metodologia Obteno das amostras O material botnico, captulos de C. officinalis, foi coletado no municpio de Gro-Par (SC) com identificao da planta pela Professora Dra. Vanilde Citadine Zanette e posterior herborizao no Herbrio Pe. Dr. Raulino Reitz, da Universidade do Extremo Sul Catarinense UNESC. Sendo coletados 3kg de captulos de plantas expostas visitao de insetos e 3kg de plantas protegidas. Para a proteo das plantas, foi preparado um canteiro e as plantas foram protegidas de visitas de insetos por meio de uma cobertura de sombrite e inspecionadas diariamente para evitar eventuais invases por insetos. Preparao dos extratos gliclicos e creme 32

As flores secas e maceradas foram colocadas em um recipiente contendo o lquido extrator (gua destilada 50% e propilenoglicol 50%) deixando-se em repouso durante um perodo de 14 dias. Aps este perodo, o extrato foi filtrado e concentrado em estufa numa temperatura de 45C. (Vanaclocha, 2003, p.157-158). Os extratos gliclicos das plantas visitadas e protegidas foram adicionados no creme Polawax, que foi produzido de acordo com o autor (Antunes Junior, 2002, p.6667) apresentando-se uma mistura aninica na forma de emulso leo em gua (O/A), contendo Polawax, Estearato de octila, lcool de lanolina, Propilenoglicol, propilparabeno, BHT e gua, utilizado como base para o carreamento dos ativos presentes no extrato. Animais Foram utilizados camundongos machos da linhagem CF1, adquiridos do FEPPS (Fundao Estadual de Produo e Pesquisa em Sade RS), com idade entre 2 a 3 meses e com massa corporal entre 35-40 gramas. Os animais foram mantidos a uma temperatura controlada (20 +/- 3C), com gua e comida ad libitum. Atividade anti-edema induzida por leo de crton Grupos de 7 camundongos foram anestesiados com Ketamina 80mg/kg (i.p.), e aps 30 minutos foi aplicado uma soluo contendo 75 g de leo de Crton dissolvidos em 15l de acetona irritante na superfcie interior da orelha esquerda e logo aps foi aplicado em seis grupos os cremes contendo extratos gliclicos de C. officinalis visitadas e protegidas nas concentraes de 5, 10 e 20% (Apparenza, 2007) no local. No grupo padro foi aplicado o creme de indometacina 20% e no grupo controle apenas o leo de crton. Totalizando oito grupos de animais. As orelhas direitas no foram tratadas.

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Aps 6 horas os animais foram mortos por deslocamento cervical e foi realizada a remoo das orelhas tratadas e no-tratadas. A diferena de peso entre as orelhas foi tomada como medida da resposta anti-edema (Tubaro et al., 1985). Anlise estatstica Os resultados foram analisados pelo teste de anlise de varincia ANOVA seguida do post-hoc Student Newman Keuls.

Resultados Os resultados obtidos nesse estudo mostram ao anti-inflamatria dos extratos de C. officinalis no modelo de edema de orelha. As concentraes de 5 e 20% de ambos os extratos inibiram significativamente o edema de orelha de forma semelhante indometacina (Figura1). Entretanto, no houve diferena significativa entre os extratos de plantas visitadas e protegidas, sendo que na concentrao de 5% a inibio foi de 14,85% e 17,72% e na concentrao de 20% foi de 23,3%% e 28,4%% para visitadas e protegidas respectivamente. A indometacina mostrou inibio de 21,96% (Figura 2). A concentrao de 10% no apresentou efeito na inibio de edema

Discusso Os dados preliminares apresentados neste estudo indicam que as C. officinalis apresenta atividade anti-inflamatria tpica. As concentraes de 5 e 20% dos extratos gliclicos testados foram capazes de reduzir o edema de orelha induzido pelo leo de crton em camundongos, aps aplicao tpica, mostrando atividade semelhante da indometacina, um anti-inflamatrio no-esteroidal (AINE).

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A inflamao induzida pelo leo de crton pode estar relacionada com a concomitante liberao de histamina, serotonina e cininas e numa segunda fase correlacionada com a produo elevada de prostaglandinas, derivados do oxignio de radicais livres, e infiltrao de neutrfilos no local (Noguera et al, 2004) (Rang et al., 2007, p. 263-264). Visto que um processo edematoso apresenta vasodilatao arteriolar e venular, com aumento da presso hidrosttica na microcirculao e fuga de lquido para o interstcio (Rang et al., 2007, p. 264). Assim a ao anti-inflamatria tpica do extrato gliclico de folhas de C. officinalis pode relacionar-se ao mesmo mecanismo dos anti-inflamatrios no-esteroidais, tendo a indometacina sua ao anti-inflamatria decorrente da inibio da sntese de prostaglandinas vasodilatadoras, efetuada mediante a inativao das cicloxigenases constitutiva (COX1) e induzvel (COX2) nas clulas inflamatrias (Rang et al., 2007, p.280-281). A administrao tpica de C. officinalis apresentou resposta anti-edematognica aps a aplicao do creme de calndula com efeito continuado de at 6 horas. Della Loggia et al. (1994) avaliaram a atividade anti-inflamatria das flores de calndula com aplicao tpica do extrato lipoflico em doses de 0,3 a 1,2 mg/orelha, o que promoveu a reduo de at 71% de edema de orelha induzido por leo de crton. A frao triterpnica do mesmo extrato apresentou uma inibio de at 76% em doses de 0,15 e 1,2mg/ orelha sob as mesmas condies. Em outro estudo Zitterl-eglesser et al (1997) comprovaram atividade anti-edematognica frente ao modelo de orelha de camundongo induzido por leo de crton de at 86% com trs triterpenos isolados de C. officinalis, o -taraxasterol e dois monosteres de faradiol em doses de 0,24 e 0,48mg/orelha, apresentando atividade anti-inflamatria equivalente a indometacina. No presente estudo, a concentrao de 20% apresentou maior inibio de edema quando comparada com a concentrao de 5%, devido provavelmente a uma maior quantidade de substncias ativas. A planta protegida apresentou uma pequena diferena na porcentagem de inibio, apresentando

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uma inibio maior que a planta visitada. Porm, essa diferena no foi estatisticamente significativa para afirmar que houve diferena nos compostos qumicos da planta visitada e protegida. Os metablitos secundrios da planta podem estar relacionados com a resposta anti-edema encontrada no presente estudo. Segundo a literatura, as flores de C. officinalis apresentam saponinas que podem estar envolvidas na propriedade anti-inflamatria comprovada no estudo. As saponinas podem apresentar atividade anti-inflamatria, podendo alcanar uma concentrao de 6%, segundo os autores (Shenkel, Gosmann, Athayde, 2003, p.730). Os leos volteis, importantes compostos presentes na C. officinalis, contribuem para as suas propriedades teraputicas, como j comprovado em outros estudos, em especial os triterpenos (Hamburger et al, 2003). Plantas que contm nos leos volteis os azulenos tambm lhe so conferidas propriedades anti-inflamatrias (Spitzer, Simes, 2003, p.488). Em estudos de Della-loggia et al. (1994) e Akihisa et al. (1996), glicosdeos de isorhamnetina foram isolados das flores de calndula, apresentando atividade inibitria da lipooxigenase de fgado de rato in vitro. Entretanto a atividade anti-inflamatria da planta foi atribuda aos seus terpenos, sobretudo os monosteres de faradiol, devido a sua prevalncia nas flores. Outro tipo de metablitos secundrios de grande importncia presentes na C. officinalis so os flavonides, apresentando-se em diversas classes em abundncia nas plantas. Dentre elas as chalconas, responsveis por produzir a cor amarela da planta, sendo que esta cor est implicada na polinizao como atrao de insetos ou pssaros. Outra classe, so os biflavonides encontrados em abundncia, sendo responsveis por aes farmacolgicas da planta, entre elas a atividade anti-inflamatria, servindo tambm como alimento dissuasivo para insetos (Zuanazzi, 2002, p.585-595). No presente estudo a ao anti-inflamatria observada pode estar diretamente relacionada com os flavonides e os leos volteis. Entretanto, sua presena pode no interferir sobre a diferena entre a ao anti-inflamatria das plantas que receberam a visitao de insetos com as protegidas. Pode-se

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afirmar, portanto que a visitao de polinizadores pode no estar relacionada com a potncia da sua propriedade anti-inflamatria. Em estudos recentes sobre a calndula Braga et al (2009), demonstraram uma de suas propriedades antioxidantes envolvidos no seu efeito anti-inflamatrio. Assim como Cordova et al. (2002) e Herold et al. (2003) que investigaram o extrato butanlico de C. officinalis contra a peroxidao lipdica de microssomas de fgado de rato e ao scavenger de radicais livres, com os resultados obtidos tambm sugeriram que a frao butanlica possui ao scavenger e atividade antioxidante significativas. Embora exista a indicao de que compostos produzidos por plantas atuem tanto na atrao de polinizadores como na proteo contra a fitofagia (Martins et al., 1994, Simes et al., 2003), tal relao no foi comprovada por Leite et al. (2005) em estudo de artrpodes associados a calndula em Minas Gerais, ao menos para os flavonides. Estes autores relatam que no houve relao entre o teor de flavonides e o nmero de insetos na calndula. Leite et al. (op cit.) relatam, ainda, maior preferncia dos pulges pelas hastes florais e captulos em detrimento das folhas de calndula. Apesar da famla Asteraceae ter mostrado em diversos estudos ser a mais importante em relao visitao de insetos (Gonalves; Melo, 2005, Krug, 2007) pela abundncia de espcies, morfologia floral e pelo tipo de inflorescncia que facilita a acessibilidade de visitantes florais (Faria-Mucci, et al 2003), neste estudo a visitao de insetos no influenciaram na atividade dos metablitos secundrios da planta. Sendo assim, uma possvel explicao por no ter ocorrido diferena sobre a atividade antiinflamatria entre a planta visitada e protegida, pode ser devido a visitao de insetos no ser suficiente para alterar significativamente os metablitos secundrios da planta. Mesmo que estes metablitos sejam responsveis pela atividade farmacolgica e pela atrao de polinizadores, as duas aes podem no estar relacionadas. Outra hiptese a de que pode ter ocorrido uma pequena visitao de

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polinizadores nas plantas que permaneceram expostas, no sendo o suficiente para ocorrer uma alterao na quantidade dos seus compostos, no diferindo assim na sua atividade farmacolgica.

Concluso Os resultados obtidos apresentaram evidncia experimental da ao anti-inflamatria tpica dos extratos gliclicos de C. officinalis. O estudo ento refora a ao anti-inflamatria da planta. Mas a correlao entre a planta exposta e protegida da visitao de insetos no mostrou diferena significativa na inibio do edema. Mesmo que leos volteis, flavonides das inflorescncias sejam apontadas como os constituintes que apresentam a funo da atrao de animais com finalidade de polinizao, a relao entre a quantidade destes compostos no foi significativa entre a planta visitada e protegida, a ponto de alterar sua atividade anti-inflamatria. Sugere-se, portanto que, nesse modelo, a visitao ou no de insetos no influenciou sobre a atividade anti-inflamatria da planta.

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80 * Peso (mg) 60 * * * * 40
C. visitada C. protegida

20

0
5% 10 % 20 % in a C on tr ol e In do m et ac le o C al en du la

Tratamentos

C al en du la

Figura 1: Efeito do creme contendo extrato gliclico de C. officinalis visitada e protegida de insetos nas concentraes de 5, 10 e 20% sobre a induo de edema de orelha induzido por leo de crton. *=P<0,05 diferena significativa nas concentraes de 5 e 20%. Os dados esto expressos em mdia + DP, ANOVA/SNK.

C al en du la

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% de inibio do edema

C. protegida 20% Tratamentos C. visitada 20% C. protegida 5% C. visitada 5% indometacina 0 5 10 15 17,72 14,85 23,3

28,4

*
21,96 20

*
25 30

% de inibio

Figura 2: Efeito dos cremes contendo extratos gliclicos de C. officinalis visitada e protegida de insetos nas concentraes de 5 e 20% na inibio do edema de orelha induzido por leo de crton. *=P<0,05 diferena significativa nas concentraes de 5%, com inibio de 14,85% e 17,72% e na concentrao de 20%, com porcentagem de inibio de 23,3%% e 28,4%, para a planta visitada e protegida respectivamente. A indometacina apresentou inibio de 21,96%.

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