Dengue

Diagnostico de laboratorio
 Clasificación revisada
de dengue
Dengue ± signos de alarma
+ criterios:
Signos de alarma*
•Dolor espontáneo o a la
palpación del abdomen
• Vómitos persistentes
• Acumulación clínica de
líquidos
• Sangrado de mucosas
• Letargia o irritabilidad
• Hepatomegalia > 2cm
• Laboratorio: incremento
del hto. asociado a
disminución del conteo de
plaquetas
•Requiere monitoreo estricto e
• intervención médica
Dengue probable
Vive/ ha viajado a áreas
endémicas de dengue mas
fiebre y dos de los siguientes
- Náuseas /vómitos
- Exantema
- Dolor y malestar
- Prueba de torniquete (+)
- Leucopenia
-Y cualquier signo de
alarma
Laboratorio: Dengue confirmado
(de importancia cuando no
hay fuga capilar)
Dengue severo
Dengue severo
2. Fuga plasmática de gran
volumen que conduce a:
• Shock (SSD)
• Acumulación de líquidos con
SDRA
2. Hemorragia severa
clasificada por un médico
3. Falla severa de órganos
 Hígado: AST o ALT ≥ 1000
 SNC: trastornos de la
conciencia
 Corazón u otro órgano
2
 Dengue
Exámenes esenciales

• Hemograma completo
• Hematocrito
• Plaquetas
 Dengue
Exámenes complementarios
• Albúmina y proteínas séricas

• Aminotransferasas

• Eritrosedimentación

• NU y creatinina

• Examen general orina

 Dengue
Exámenes específicos
Diagnostico individual •Confirmación de casos
•Diagnostico diferencial
•Manejo clínico
Soporte de vigilancia •Detección temprana
•Circulación de cepas
•Estudios de incidencia
•Caracterización de cepas
 Dengue
Exámenes específicos
• Cultivo
• Biología molecular
• Serologia
• Hemaglutinación
• Inhibición de la hemaglutinación
• Inmunofluorescencia
 Dengue
Exámenes específicos
• Cultivo
• Los tres primeros días
• Diez mililitros de sangre total
• Colocar en hielo, refrigerar a menos 4°C
• Conservar a -20-70 °C
 Dengue laboratorio
Aislamiento viral
• Inoculación intratecal en ratón RN
• Inoculación cultivos celulares de mamíferos
• Inoculación intra toráxica de mosquitos adultos
• Inoculación en células de mosquitos
 Dengue laboratorio
Aislamiento viral
• Inoculación intracerebral en ratón
– Inconvenientes:
• Alto costo
• Tiempo largo para aislar
• Baja sensibilidad
 Dengue laboratorio
Aislamiento viral
• Cultivos celulares en mamíferos
– Con frecuencia pasos múltiples
• Inconvenientes
 Dengue laboratorio
Aislamiento viral
• Inoculación en mosquitos
• Mas sensible, menos usada
– A. aegypti
– A. albopictus
• Inmunofluorescencia indirecta (IFA)
 Dengue laboratorio
Aislamiento viral
• Cultivo células de mosquito (3 líneas)
• Línea celular C6/36
– Rápida
– Sensible
– Económica
– IFA
 Dengue laboratorio
Aislamiento viral
Ventajas cultivo en células de mosquito
– Alta sensibilidad
– Fáciles de mantener
– Crecen a temperatura ambiente
– Se mantienen por 14 días en el medio
 Dengue laboratorio
Aislamiento viral
• Inoculo intracerebral a ratón lactante
• Líneas celulares: BSC1, VERO, BHK-
21
• Células de cultivo de mosquito
– C6/36 A. albopictus
– AP61 A. pseudoscutellaris
 Dengue
Exámenes de laboratorio
Cultivo normal Efecto citopático
 Dengue
Exámenes de laboratorio
Biología molecular
– Diagnostico viral de dengue
– Identificación de serotipos
– Vigilancia molecular
– Caracterización genética
 Dengue
Exámenes de laboratorio
Biología molecular
• Reacción en cadena de Polimerasa (PCR)
– Demostración de infecciones concurrentes
– Diagnostico retrospectivo
– Clasificación rápida en genotipos y sub-
grupos geográficos
– Niveles de viremia
 Dengue
Exámenes de laboratorio
Muestras para serologia
• Inhibición de la hemaglutinación (IH)
• Inmunofluorescencia (IF)
• Inmunoensayo enzimático (ELISA)
– Sensibilidad ELISA de captura IgM: 90-97%
– Falsos positivos 2%
– Se elevan y duran mas en infección primaria
– En la infección secundaria se elevan menos y pueden
estar ausentes
 Dengue
Exámenes de laboratorio
• ELISA IgG identifican infección
primaria y secundaria por dengue
• Durante la infección 1ª : 7°-10° día
• Durante infección 2ª : elevados desde la
fase aguda y mucho mas en la
convalecencia
• ELISA: proteínas no estructurales 1
(NS1)
 Dengue
Exámenes de laboratorio
• ELISA de captura de IgM
– Sensibilidad: 92%
– Especificidad: 98%
– Coincidencia con IH: 94%
 Dengue
Exámenes de laboratorio
Muestras para serologia
• Primera desde el 5° día de la enfermedad
• Segunda 2-3 semanas despues de la
primera
• Enviar al laboratorio preferentemente a
-20°C o en su defecto a 4 °C
 Infección por Dengue
Comportamiento del virus, T°, y Acs.
6
VIREMIA
4 Log/ml
NS1Ag
2

41
40
T° ( °C)
39
38
37

20480
Anticuerpos
5100
IgM IgG
120
20
Días
-2 -1 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 21 23 25 28
 Comportamiento de los marcadores
para el diagnóstico
6
VIREMIA
log/ml,
4
NS1 Ag
2

IgM Ac
640

120
HI
20
antibodies
1rio
20480

5100
HI
120
Antibodies
20 2rio

Días
-2 -1 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 21 23 25 28
 Infección por dengue: respuesta inmune

Infección
Infección
primaria
Secundaria

IgG
virus virus

NS1
NS1
IgM
20nm
IgM

-2 0 5 14 60 (6m)

tiempo en días (meses)

 Dengue. Interpretación de resultados
de laboratorio (1)
Laboratorio Clasificación de caso
Títulos de Ac. elevados Probable
Seroconversión Confirmado
(cuadruplicación de valores)
Aislamiento (+) Confirmado
Pruebas de antigenos (+)
PCR (+)
 Dengue. Interpretación de
resultados frente a la infección (2)
Laboratorio Muestra Clasificación de
caso
Títulos de Ac. Una sola muestra Probable
elevados suero o plasma
IgM positiva
Seroconversión Muestra pareada suero Confirmado
Cuadruplicación de o plasma
los títulos
Aislamiento (+) Muestra en la fase Confirmado
Prueba de Ag. (+) aguda o crónica de la
infección (suero, tejido,
PCR (+)
LCR, sangre total)
 Interpretación de resultados de laboratorio
frente a la infección (3)
Laboratorio Muestra Clasificaci Ventajas y desventajas
ón de casos
Serología • Una sola muestra Probable Ventajas:
•Título de anticuerpos (suero o plasma) 2. Toma de muestra fácil
• Anticuerpos IgM (+) 3. Identifica la circulación de agentes
infecciosos recientes
Desventajas:
5. No confirma la infección actual
•Seroconversión •Muestra pareada Confirmado Ventajas:
• Cuadruplicación de titulo (suero o plasma) 2. Confirmación del caso
de anticuerpos Desventajas:
4. Rechazo de parte del paciente
5. Costo elevado (toma de muestra y
pruebas de laboratorio)
6. Requiere mas tiempo
• Pruebas de antígeno (+) •Muestras en la Confirmado Ventajas:
• Aislamiento viral (+) fase aguda o 2. Confirmación del caso
• PCR (+) crónica de la 3. Genotipificación, vacunas, pruebas, etc.
infección (suero,
tejidos, LCR, Desventajas:
sangre total) 5. Costo elevado (pruebas de laboratorio)
Proteínas Virus del dengue
Muchas gracias