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16/03/2010 1FLUORIMETRIA Profa. Daniele Michelin LUMINESCNCIA .Molculasquesolevadasaoestadoexcitadonopodemnelepermaneceredevemnecessariamentereto rnaraoestadofundamental,perdendooexcedentedeenergia.

Colisocomoutrasespcies Relaxamentovibracional Emissodeumfton

LUMINESCNCIA Eletroluminescncia:energiacinticadeeltronsouonsaceleradosporumcampoeltricotransferidaa mosoumolculaspresentesemumgsprovocandoaemissodeumftonpelostomosoumolculasexcitados. Quemiluminescncia:reaoqumicaproduzumaespcieexcitadaqueemiteftonderadiaoparaatingiroe fundamental,maisestveledemenorenergia. Fotoluminescncia:quandoftonssoabsorvidospormolculaspromovendo-asaumestadoexcitado.Aor etornaraoestadofundamental,asmolculasemitemradiao. .Fluorescncia .Fosforecncia

FOTOLUMINESCNCIA .Fluorescncia:emissodeumftonporumaespciequeatingiuoestadoexcitadopormeiodeabsoroderadi aoeletromagntica,ouseja,absorodeumfton. .Fosforescncia:excitaoprovocadaporradiaoeletromagntica,pormaemissoderadiaocontinuaa aohavercessado.

Amaiordiferenaentrefluorescnciaefosforescnciaotempoentreaabsorodaenergiaeaemissodofto sendoquequandoointervalodetempocurto,oprocessochamadofluorescnciaequandootempolongo, oprocessochama-sefosforescncia. FLUORESCNCIA EM COMPOSTOS ORGNICOS COMPOSTO ORGNICO FLUORESCNCIA .Duplas conjugadas .Rigidez .Pares de eltrons n em heterotomos -conjugao MCj03970740000[1]

16/03/2010 2 .Fluorescncia:transiodoprimeiroestadoexcitadoparaoestadofundamental. Presenadeconjugao:reduzadiferenadeenergiaentreoestadofundamentaleoprimeiroestadoexcit adoeconferemaiorestabilidadeaoestadoexcitado. Rigidezmolecular:reduzainteraodamolculacomomeioemqueseencontraeaprobabilidadededesat ivaoporprocessonoemissivos. Substituintesquedoameltronsaumentamafluorescncia. Gruposqueretirameltronsdiminuemoueliminamfluorescncia.

FLUORESCNCIA EM COMPOSTOS ORGNICOS COMPOSTOS FLUORESCENTES .Rigidez,svezes,conseguidapormeiodecomplexaocomummetaldetransio. .Afluorescnciapodeserobtidapormeiodaformaodequelatoscommetais(Mg, Zn) .Compostosno-fluorescentespodem, muitasvezes,serderivadosquimicamenteetornadosfluorescentescomumreagentefluorognic o. VARIVEIS QUE AFETAM A FLUORESCNCIA EXISTNCIA / INTENSIDADE DA FLUORESCNCIAEstrutura da molcula: .Duplas conjugadas .Rigidez .Pares de eltrons n em heterotomos conjugao Ambiente: .Temperatura .Solvente .phdomeio .Presenadeimpurezas .Concentraodaespciefluorescente INSTRUMENTO .FLUORMETRO: mede a fluorescncia Fonte (lmpada de xennio, hidrognio, deutrio) Monocromador (filtros, primas ou redes) Cubeta (quartzo ou silica fundida) Detector (faixa visvel tubo fotomultiplicador)

TIPOS DE INSTRUMENTOS .FLUORMETRO Fotofluormetro Espectrofluormetro

16/03/2010 3QUANTIFICAO DE COMPOSTOS POR FLUORESCNCIA A intensidade da fluorescncia proporcional concentrao da espcie fluorescente. Determinao da concentraoQUANTIFICAO DE COMPOSTOS POR FLUORESCNCIA .Mediesrelativasaopadrocomfluorescnciamaisintensa. .Emsoluesdiludas: F = k.b.c .k=constantedeproporcionalidade .b=espessuradacubeta .c=concentraodaespciefluorescente

A curva padro uma reta em concentraes baixasQUANTIFICAO DE COMPOSTOS POR FLUORESCNCIA .Presenadeapenasumaespciefluorescente(padreseamostras). .Naescolhadocomprimentodeondadeexcitaoeemissoconsiderarosolvente. Melhores limites de deteco (mximo) Condies experimentais QUANTIFICAO DE COMPOSTOS POR FLUORESCNCIA .Oanalitopodesofrerdecomposiopelaradiaodafonte. .Tempodeexposio .Fluorescnciadascubetas APLICAES .Determinaodeconstituintesdealimentos(traos) .Vitaminas .Frmacos .Contaminantes

16/03/2010 4 ALTA SENSIBILIDADE (partes por trilho) ALTA ESPECIFICIDADE(fluorescncia)http://tbn1.google.com/images?q=tbn:PrhpT_cEXuj_GM:ht tp://caqi.iqsc.usp.br/files/2009/02/l2d.jpg http://tbn2.google.com/images?q=tbn:gmrC76jK6yYCaM:http://www.engormix.com/image s/P_products/vicam_flurimetro.jpg http://tbn0.google.com/images?q=tbn:0sfokTiyT51MeM:http://bifi.unizar.es/infrast ructures/biochemistry/img/fluorimetro.jpg ESPECTROFLUORMETRO