Mdulo 11.

CROMOSOMAS, CICLO CELULAR Y MITOSIS

Todas las clulas se forman por la divisin de clulas preexistentes. Cuando una clula se divide, su informacin gentica debe ser copiada y transmitida de manera precisa a cada clula hija a travs de una compleja serie de procesos. Resulta necesario recordar que actualmente el trmino cromosoma se aplica a la molcula de cido nucleico (ADN o ARN) que acta como depositaria de la informacin gentica en un virus, una bacteria, una clula eucaritica o un orgnulo . Pero la palabra cromosoma (del griego cuerpo coloreado) se utiliz originalmente en otro sentido, para referirse precisamente a los cuerpos densamente coloreados que podan visualizarse a travs del microscopio ptico en los ncleos de clulas eucariticas despus de la tincin de estas ltimas, que aparecen claramente definidos en el ncleo durante el perodo inmediatamente anterior a la divisin celular. Quizs por ello algunos bilogos insisten en reservar el trmino cromosoma para referirse exclusivamente al ordenamiento altamente estructurado del ADN de las clulas eucariticas en divisin. EL ADN DE LAS CLULAS EUCARIOTAS Una clula de levadura (un hongo) tiene cuatro veces ms ADN que una clula de Escherichia coli (una bacteria intestinal). Las clulas de Drosophila, la mosca de la fruta, sujeto clsico de los estudios genticos, tiene 25 veces ms ADN que la clula de E. coli. Cada una de las clulas humanas y de otros mamferos contiene alrededor de 600 veces ms ADN que una clula de E. coli, y las clulas de plantas y de animales anfibios todava ms. Recurdese que las molculas de ADN nuclear de todas las clulas eucariticas son lineales, no circulares. La longitud de todo el ADN de una nica clula humana es de 2 m, en comparacin con los 1,7 mm del ADN de E. coli 1. Como ya se ha mencionado, el material gentico de las clulas eucariotas se organiza en cromosomas, cuyo nmero diploide depende de la especie a la que pertenezca el organismo: la mosca de la fruta tiene 8 cromosomas, la abeja 16, el gato 38, el hombre 46 y la gallina 78. Como ya se ha visto, adems del ADN nuclear, las clulas eucariticas poseen cantidades muy pequeas de ADN en el interior de las mitocondrias y, en el caso de las clulas fotosintticas, tambin en el interior de los cloroplastos. El ADN mitocondrial es una molcula muy pequea (16.569 pares de bases en los humanos) y se presenta como una doble hebra circular. Codifica para los ARNt y ARNr mitocondriales y para unas pocas protenas mitocondriales, pero ms del 95% de las protenas de las mitocondrias estn codificadas por el ADN nuclear. Como ya ha sido mencionado, tanto las mitocondrias como los cloroplastos se dividen al dividirse la clula. CONDENSACIN DE LA CROMATINA. FORMACIN DE CROMOSOMAS En las clulas eucariticas que no se hallan en estado de divisin, el material cromosmico, denominado cromatina, es amorfo y aparece disperso y desordenado por la totalidad del ncleo. En algunas zonas la cromatina experimenta un grado de enrollamiento mayor que en otras regiones. Durante la interfase la cromatina as condensada recibe el nombre de heterocromatina, denominndose eucromatina a la menos condensada. Existe una relacin directa entre el grado de enrollamiento y la actividad transcripcional del ADN. La cromatina menos compactada es la que posee el ADN transcripcionalmente activo (aquel a partir del cual puede sintetizarse ARN) y representa alrededor del 10% del genoma. En cambio, la cromatina mas condensada (heterocromatina) est constituida por ADN inactivo. Algunas regiones heterocromticas se encuentran de manera constante de clula a clula, es decir como componentes estables del genoma que nunca se expresan. Este tipo de heterocromatina se denomina constitutiva. A esta categora pertenece la cromatina altamente condensada localizada en la
La longitud total del ADN contenido en el cuerpo humano, que consta en promedio de 10 14 clulas, es entonces de 2.1014 m, o 2.1011 kilmetros, lo que equivale a cinco millones de vueltas a la tierra o quinientos viajes de ida y vuelta al sol (!)
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regin del centrmero del cromosoma, formada por ADN altamente repetitivo (ADN satlite). Esta regin no codificante desempea un papel estructural en el traslado de los cromosomas durante la mitosis. Por otra parte, se denomina heterocromatina facultativa a la que se detecta en algunas clulas del organismo y en determinados momentos del desarrollo embrionario. Pertenece a este grupo la cromatina sexual del cromosoma X (o corpsculo de Barr) presente en las clulas epiteliales de la mujer y que representa la inactivacin de uno de los cromosomas X del par sexual. Cuando las clulas se preparan para dividirse, la cromatina se condensa y se estructura en cromosomas bien definidos, cuyo nmero exacto es especfico para cada especie. Los cromosomas contienen protena y ADN en cantidades aproximadamente iguales en trminos de masa En el esquema se representa un cromosoma mittico tpico en la metafase mittica. En este etapa de la divisin celular la cromatina alcanza el mximo grado de condensacin, permitiendo que los cromosomas lleguen a observarse como estructuras individuales. En cada cromosoma, las dos molculas hermanas resultantes de la replicacin del ADN se organizan en forma independiente constituyendo las cromtidas hermanas, las que se mantendrn unidas mediante el centrmero. De acuerdo a la posicin del centrmero, los cromosomas se clasifican en: 1) Metacntricos: poseen el centrmero en una posicin central, de modo que las longitudes de los brazos cromosmicos son equivalentes. 2) Submetacntricos: el centrmero se encuentra alejado del punto central, de modo que las cromtidas poseen un brazo corto y uno largo. 3) Acrocntricos: el centrmero se halla cerca de uno de los extremos del cromosoma, de modo tal que el brazo corto es muy pequeo. La siguiente figura representa un cariotipo humano, donde los cromosomas se ordenan de mayor a menor y se numeran correlativamente.

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Como puede apreciarse, hay cromosomas grandes, medianos y pequeos. Al ordenar los cromosomas se constituyen 7 grupos, atendiendo no slo al tamao sino tambin a la forma de las parejas cromosmicas. A continuacin se describen los siete de cromosomas detectables en el cariotipo humano. Cromosomas grandes Grupo A, (cromosomas 1, 2 y 3), meta y submetacntricos Grupo B, (cromosomas 4, 5 y 6), submetacntricos Cromosomas medianos Grupo C, (cromosomas 7, 8, 9, 10, 11, 12 y adems el cromosoma X), submetacntricos Grupo D, (cromosomas 13, 14 y 15), acrocntricos Cromosomas pequeos Grupo E, (cromosomas 16, 17 y 18), submetacntricos Grupo F, (cromosomas 19 y 20), metacntricos Grupo G, (cromosomas 21 y 22 e Y), acrocntricos Por acuerdo los cromosomas sexuales X e Y se separan de sus grupos correspondientes y se ponen juntos aparte al final del cariotipo. Compactacin de la cromatina en la formacin de los cromosomas metafsicos El enrollamiento del ADN alrededor de un nucleosoma hace que aqul se compacte unas siete veces. El grado de compactacin final en el cromosoma es de aproximadamente 10.000 veces, lo que prueba que existen rdenes superiores de organizacin estructural. Si consideramos que toda la cromatina presente en una nica clula humana formara un filamento de aproximadamente 2 metros de largo, se hace imprescindible que se compacte a niveles importantes, ya que de lo contrario la segregacin del material gentico durante la divisin celular podra estar sujeta a muchos errores que no permitiran un reparto exactamente equitativo entre las clulas hijas. Para ilustrar como se alcanza la compactacin de la hlice de ADN, en el esquema se representa una de las cromtidas hermanas.

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CUNTOS GENES CONTIENE UN CROMOSOMA? Puede resultar interesante conocer cuntos genes tiene un cromosoma. En el caso de Escherichia coli, si un gen promedio tiene 1.050 pares de bases (bp), los 4,7 millones de pares de bases podran acomodar a unos 4.400 genes, de los cuales ya se conoce prcticamente la totalidad. Las bacterias suelen tener tan slo un cromosoma por clula y en casi todos los casos contiene nicamente una copia de cualquiera de los genes. Unos pocos genes, como los de los ARNr (ver Mdulo 7, nuclolo), estn repetidos varias veces. La organizacin de los genes en el ADN eucaritico es mucho ms compleja, tanto estructural como funcionalmente. Los estudios realizados en ratn dieron un resultado inesperado: un 10% de ADN del ratn consiste en segmentos cortos de menos de 10 pares de bases que se repiten millones de veces por clula. Estos son los segmentos conocidos como altamente repetitivos. Otro 20% son fragmentos de hasta unos pocos centenares de pares de bases y que se repiten un mnimo de unas mil veces, a los que se denomina moderadamente repetitivos. El resto, aproximadamente el 70% del ADN consiste en segmentos nicos y segmentos que slo se repiten unas pocas veces. Las secuencias nicas de los cromosomas eucariticos incluyen la mayora de los genes. Los bilogos estimaban que en el genoma humano haba unos 100.000 genes, pero los resultados anunciados el 21 octubre de 2004 en la revista Nature por los responsables del Proyecto Genoma Humano reducen ese nmero a 20.000 25.000 genes 2. Las secuencias altamente repetitivas se denominan ADN satlite, porque su composicin de bases permite separarlo del resto cuando se centrifugan muestras de ADN celular en gradiente de cloruro de cesio. No se cree que el ADN satlite codifique protenas o ARN. Una gran parte del ADN altamente repetitivo est asociado con dos estructuras importantes de los cromosomas eucariticos: los centrmeros y los telmeros. Cada cromosoma tiene un slo centrmero, que fija el cromosoma a los microtbulos del huso mittico, unin que resulta esencial para que se produzca la segregacin ordenada de los cromosomas a las clulas hijas durante la divisin celular. En eucariotas superiores se suele encontrar ADN satlite en la regin centromrica, que consiste en miles de copias en tndem (adyacentes y en la misma orientacin) de una o unas pocas secuencias cortas, de 5 a 10 pares de bases. Todava no se conoce la funcin exacta del ADN satlite en el centrmero. Los telmeros constituyen los extremos de los cromosomas eucariticos y contienen alrededor de 20 repeticiones de un hexanucletido (en humanos es GGGTTA).

Como se explic al ver la replicacin del ADN (mdulo 7), una de las hebras nuevas se sintetiza en forma continua hasta el final y la otra (rezagada) lo hace a travs de los fragmentos de Okazaki. En
International Human Genome Sequencing Consortium (2004) Finishing the euchromatic sequence of the human genome, Nature 431: 931-945 (October 21, 2004)
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este ltimo caso, al llegar al final de la hebra molde no hay posibilidad de sintetizar un cebador que permita fabricar el ltimo fragmento de Okazaki, con lo que no puede finalizar la sntesis de la hebra rezagada. Esto se resuelve a travs de una enzima especial, la telomerasa, que contiene adems de la protena enzimtica un trozo de ARN con la secuencia repetida del hexanucletido que se aparea a la hebra molde. Como la enzima tiene una actividad similar a la transcriptasa inversa, alarga la hebra molde de ADN a expensas del ARN que trae consigo. Cuando se ha alargado lo suficiente la hebra molde, ya se dispone de lugar para formar un cebador y la ADN polimerasa puede actuar en forma normal y completar la replicacin. Actividad telomersica, envejecimiento y cncer Las clulas germinales (reproductoras) de los vertebrados manifiestan actividad telomersica, pero no parece ocurrir lo mismo con la mayora de las clulas somticas, por lo que se ha observado que existe alguna relacin entre la edad de un individuo y la longitud de los telmeros de los cromosomas en las clulas somticas. La hiptesis del envejecimiento o de la inmortalidad celular gobernada por el telmero postula que la presencia de telomerasa activa en clulas germinales permite mantener telmeros largos y estables, pero que la enzima se encuentra reprimida en clulas somticas, ocasionando prdida del tamao del telmero en las clulas en divisin. En pacientes aquejados de progeria, el sndrome de envejecimiento prematuro, se observ que presentan un acortamiento significativo de los telmeros. Este hallazgo ha llevado a la hiptesis de que el tamao del telmero sirve como un reloj biolgico que regula el tiempo de vida de las clulas normales , siendo pieza fundamental para entender el envejecimiento prematuro. Tambin en portadores del Sndrome de Down se ha visto un envejecimiento prematuro, calculndose que pierden 133 pares de bases telomricas por ao, comparado con 41 en los controles normales. Por el contrario, las clulas tumorales, que tienen la capacidad de crecer indefinidamente, expresan telomerasa, y sus telmeros no se encogen progresivamente. De esta manera se ha descrito la presencia de actividad telomersica en numerosos tejidos tumorales, pero no en tejidos adyacentes normales o en neoplasias benignas. La presencia de telomerasa en diversos tipos de cncer humanos y su ausencia en muchas clulas normales, significa que la enzima puede ser un buen blanco de drogas antineoplsicas. Los agentes capaces de obstaculizar la telomerasa podran matar las clulas tumorales (haciendo que los telmeros desaparezcan) sin alterar el funcionamiento de muchas clulas normales. La mayora de las terapias anticncer actuales no solo alteran las clulas malignas, sino tambin las normales. Suelen ser, pues, bastante txicas. Adems, dado que se detecta telomerasa en muchos tipos de cncer, tales agentes podran intervenir contra tumores muy dispares. Esto est por ahora en el campo terico y en el de la investigacin bsica. CICLO CELULAR Las clulas se reproducen por duplicacin de su contenido y su divisin en dos clulas hijas, las cuales a su vez volvern a reproducirse. Estas divisiones celulares cclicas constituyen el modo fundamental por el cual todos los organismos vivientes se propagan. En especies unicelulares tales como las bacterias o las levaduras, cada divisin celular produce un organismo adicional. En los procariotas, la distribucin de duplicados exactos de la informacin hereditaria es relativamente simple. La mayor parte del material gentico est en forma de nica molcula circular de ADN, constituyendo el cromosoma de la clula, el cual se duplica antes de la divisin celular. Cada uno de los cromosomas hijos se ancla a la membrana celular en polos opuestos. La clula se alarga, separando los cromosomas. Cuando la clula alcanza aproximadamente el doble de su tamao original y los cromosomas estn separados, la membrana plasmtica se invagina y se forma una nueva pared, que al estrangularse separa a las dos clulas hijas. En las especies multicelulares se requieren muchas divisiones celulares para que se genere un nuevo individuo y que crezca, y tambin se necesitan divisiones celulares adicionales en el organismo adulto para reemplazar a las clulas que se han perdido por envejecimiento, dao o por muerte celular

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programada (apoptosis). En las clulas eucariticas, el problema de dividir exactamente el material gentico es mucho ms complejo que en las procariticas. Una clula eucaritica tpica contiene aproximadamente mil veces ms ADN que una procaritica; este ADN es lineal y forma cromosomas diferentes. Adems, como vimos, contienen una variedad de organelas que tambin deben ser repartidas entre las clulas hijas. Las clulas eucariticas que se dividen pasan a travs de una secuencia regular y repetitiva de crecimiento y divisin denominada ciclo celular. El ciclo celular se divide en dos fases principales: interfase y divisin. Esta ltima su vez esta constituida por la mitosis (o fase M) y la citocinesis. Antes de que una clula pueda comenzar la mitosis y dividirse efectivamente, la clula debe preparase. Estos procesos preparatorios ocurren durante la interfase, en la cual se distinguen tres etapas: las fases G1, S y G2. Los detalles del ciclo pueden cambiar de acuerdo al tipo celular, pero ciertas caractersticas son universales. Primeramente, el ADN debe ser cuidadosamente replicado (duplicado) y los cromosomas as replicados deben ser segregados en dos clulas separadas. La mayora de las clulas tambin duplican su masa y sus organelos citoplasmticos en cada ciclo celular. Se ha revelado que existe un sistema de control del ciclo celular que lo coordina como un todo. Las protenas que controlan este sistema aparecieron hace ms de mil millones de aos y se han mantenido muy conservadas durante la evolucin, de modo tal que muchas de ellas funcionan perfectamente cuando son transferidas, por ejemplo, de una clula humana a una clula de levadura. La duracin del ciclo celular vara mucho de un tipo celular a otro. Los ciclos celulares ms cortos de los eucariotas (ms cortos an que los de las bacterias) son los que tienen lugar en las clulas embrionarias inmediatamente despus de la fertilizacin, proceso en el que la clula no crece sino que convierte una clula de dimensiones excepcionales (la gameta femenina y, consecuentemente, tambin la cigota) en un conjunto de clulas cada vez ms pequeas. En estos ciclos no hay crecimiento, las fases G1 y G2 se han reducido drsticamente y el tiempo total del ciclo es de 8 a 60 minutos, mitad del cual la clula est en fase M y la otra mitad en fase S. Como contraejemplo tenemos el ciclo de una clula heptica de mamfero, el cual puede durar un ao.

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Usualmente, el perodo ms largo del ciclo celular es el que transcurre entre una fase M y la siguiente: la interfase. Bajo el microscopio la interfase aparece como una etapa sin eventos notables en el que la clula simplemente crece en tamao. Pero la aplicacin de diferentes tcnicas bioqumicas revelan que la interfase es un estadio de mucha actividad para la clula, durante el cual est ocurriendo una elaborada preparacin para la divisin celular. En particular, la replicacin del ADN ocurre durante una etapa especfica de la interfase, la denominada fase S, momento en el cual muchas de las histonas y otras protenas asociadas al ADN tambin son sintetizadas. El intervalo entre la finalizacin de la mitosis y el comienzo de la fase S se denomina fase G1 (del ingls gap, brecha) y el tiempo que media entre fase S y el comienzo de la mitosis es denominada fase G2. La fase G1 es un perodo de alta actividad bioqumica. La clula aumenta de tamao e incrementa la cantidad de protenas (enzimas y microtbulos para el huso mittico), ribosomas, mitocondrias y del resto de estructuras celulares. Las estructuras membranosas derivaran del retculo endoplsmico, que se renueva y aumenta de tamao. En las clulas que poseen centrolos, estos constituyentes celulares comienzan a separarse y a duplicarse en esta etapa, originndose a partir de cada miembro del par original un centrolo hijo ms pequeo. Durante la fase G 1 la clula evala su ambiente y su tamao y cuando las condiciones son adecuadas recin comienza a replicar su ADN (fase S) y completar el ciclo. Si la clula detecta que las condiciones para la replicacin del ADN no estn dadas, subsisten en un estado especializado de descanso, a menudo llamado G 0,en el cual pueden permanecer por das, semanas o an aos antes de reiniciar la proliferacin. La fase G2, que sigue al perodo S y precede a la divisin, provee una brecha de seguridad, asegurando que la replicacin del ADN haya sido completa antes de comenzar la mitosis y adems ocurren los preparativos finales para que esta ocurra. La cromatina recin duplicada y dispersa en el ncleo comienza a condensarse. La duplicacin del par de centrolos se completa y los dos pares maduros resultantes se ubican justo por fuera de la envoltura nuclear y, en cada par, los centrolos se ubicarn uno perpendicular al otro. Tambin durante este perodo comienza el ensamblaje del huso mittico, necesario para separacin de los cromosomas durante la mitosis. De las distintas fases del ciclo la ms espectacular es la mitosis, que conforma el proceso de divisin nuclear. La envoltura nuclear se desorganiza, el contenido del ncleo se condensa en cromosomas visibles y los microtbulos se reorganizan para formar el huso mittico (que intervendr en la separacin de los cromosomas). Sistema de control del ciclo celular Si bien el control del ciclo celular sigue pautas generales compartidas por la mayora de las clulas eucariotas, existen variaciones en los distintos grupos de organismos. Como ejemplo, tomaremos una visin simplificada del control del ciclo celular de vertebrados. El sistema de control del ciclo celular es un dispositivo bioqumico que opera cclicamente y que est constituido por un conjunto de protenas que interactan entre s y que inducen y coordinan los procesos esenciales de avance que duplican y dividen el contenido celular. En el ciclo existen frenos que detienen el ciclo en puntos especficos de control. En ellos la clula evala el estado del ciclo, determinando que el proceso contine o se demore hasta que el paso previo se haya completado correctamente. Los puntos de control operan generalmente al finalizar la fase G1 (exactamente antes que se inicie la fase S) o al finalizar la fase G 2 (antes de que se inicie la mitosis). Al finalizar G 1 la propia clula revisa que se haya crecido lo suficiente y que el ambiente sea favorable, en tanto que en el punto de control al finalizar G 2, lo que importa es evaluar que el ADN est totalmente replicado. En la mayora de las clulas eucariotas el punto de control ms importante se halla al finalizar G1, y se conoce como punto R. Una vez que las clulas sobrepasan el punto R, estn obligadas a completar el resto de las etapas del ciclo y dividirse. El paso a travs del punto R depende de la integracin del conjunto de seales externas e internas que la clula recibe. Los controladores principales son un pequeo nmero de proten-quinasas heterodimricas que contienen una subunidad regulatoria (ciclina) y una subunidad cataltica (quinasa dependiente de ciclina, Cdk). Estas quinasas regulan las actividades de mltiples protenas involucradas

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en la replicacin del DNA y mitosis mediante la fosforilacin de sitios reguladores especficos, activando algunos e inhibiendo otros para as coordinar sus actividades. Las concentraciones de las ciclinas aumentan y disminuyen a medida que las clulas progresan en el ciclo cellular. Las Cdks (subunidades catalticas de las quinasas) no tienen actividad a no ser que estn asociadas a las ciclinas (subunidades regulatorias). Cada Cdk puede asociarse a varias ciclinas, y es la ciclina la que le determina qu protenas en particular va a fosforilar la Cdk. La siguiente figura esquematiza el rol de las tres clases principales de complejos Cdk-ciclina: G1, de fase S y mitticos. Cuando las clulas se estimulan para dividirse, los complejos ciclina-Cdk de G1 se expresan primero y preparan la clula para la fase S, activando la transcripcin de los genes involucrados en la sntesis de DNA y los genes de las cilinas y Cdks de fase S. Las Cdk-ciclinas de fase S son necesarias para iniciar la replicacin del DNA, y las Cdk-ciclinas M estimulan los acontecimientos de la mitosis. Dos complejos que inducen a la degradacin de protenas SCF y APC (en anaranjado) inducen la degradacin de inhibidores de fase S (paso 5), securina (paso 8) y ciclinas mitticas (paso 9). La protelisis de los inhibidores de fase S activa los complejos Cdk-ciclina de fase S, que promueven la duplicacin cromosmica. La protelisis de la securina resulta en la degradacin de los complejos proteicos que unen a las cromtidas hermanas en la metafase, o sea que se inicia la anafase. La degradacin de las ciclinas mitticas permite que ocurra la citocinesis. Estos procesos proteolticos hacen a la irreversibilidad del ciclo cellular.

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APC-Cdh1

8
APC-Cdc20

TELOFASE Y CITOCINESIS ANAFASE

1 G1 temprana G1 mediatardia 2
Ciclina G1CDK

R
7
Ciclina mitotica-CDK

G2 S
Inhibidor
Ciclina de Fase S-CDK

METAFASE

SCF 6
Ciclina de Fase S-CDK

REPLICACION DEL DNA

Los procesos que se describen en el esquema son: 1) Los complejos de pre-replicacin del DNA se organizan a nivel del origen de replicacin. 2) La ciclina G1-Cdk inactiva a Cdh1, que permite la acumulacin de ciclinas de fase S y mitticas 3) La ciclina G1-Cdk activa la expresin de los componentes del complejo ciclina de fase S-Cdk 4) La ciclina G1-Cdk fosforila al inhibidor de fase S

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5) 6) 7) 8) 9)

SCF promueve la degradacin del inhibidor fosforilado de ciclina de fase S-Cdk. El complejo ciclina de fase S-Cdk activa los complejos de pre-replicacin La ciclina mittica-Cdk activa los eventos tempranos de la mitosis APC promueve la degradacin de securina APC promueve la degradacin de las ciclinas mitticas.

Los eventos que conducen a la divisin de la clula son los siguientes: la ciclina mittica (ciclina M) se acumula gradualmente durante la fase G 2 y se une a la Cdk para formar un complejo Cdk-ciclinaM (Cdk-M) Este complejo es al principio inactivo, pero a travs de la accin de otras enzimas que lo fosforilan y defosforilan, es convertido en su forma activa. Como puede verse en la figura, la secuencia implica dos fosforilaciones sucesivas llevadas a cabo por quinasas: una inhibitoria y otra activante. Para que el complejo pueda ser activo hace falta una fosfatasa que separe el fosfato del sitio inhibitorio.
Fosfatasa inactiva

Ciclina M

Fosfato inhibidor Quinasa activadora de Cdk

RETROALIMENTACION POSITIVA

Fosfato activador Cdk1 Cdk-M inactiva Quinasa inhibidora de Cdk Cdk-M inactiva Cdk-M activa

Este complejo fosforila ciertas protenas especficas, induciendo los cambios que conducen a la mitosis. Entre ellos pueden mencionarse la condensacin de los cromosomas (desencadenada por fosforilacin de las histonas H1), la desorganizacin de la envoltura nuclear (inducida por la fosforilacin de protenas de la lmina nuclear) y la organizacin de los microtbulos del huso mittico. Cdk-M es desactivado rpidamente por APC, que promueve la degradacin de la ciclina mittica en el lmite entre la metafase y la anafase, permitiendo a la clula abandonar el ciclo mittico. Aunque los mecanismos an no se conocen en detalle, parece claro que Cdk-M induce directa o indirectamente la fosforilacin de muchas protenas y que el escape de la mitosis se producir como consecuencia de la desfosforilacin de las mismas. Gran parte del conocimiento que se posee acerca del sistema de control del ciclo celular proviene del estudio del ciclo celular que sufren los estadios iniciales de los embriones de Xenopus, una especie de rana cuyo vulo (y la cigota resultante) poseen un tamao enorme: casi un milmetro de dimetro (con 100.000 veces ms citoplasma que las clulas promedio del cuerpo de un individuo adulto). As se ha podido comprobar que la ciclina se acumula durante la interfase y su concentracin es mxima durante la mitosis, para desaparecer bruscamente en la transicin metafase-anafase. Como ya se ha mencionado, en un organismo unicelular cada divisin celular genera un nuevo individuo. La seleccin natural favorecer a las clulas que ms rpidamente se dividen y crecen y que mejor sobreviven en circunstancias adversas. Su proliferacin estar restringida slo por la disponibilidad de nutrientes y las ocasionales demandas de reproduccin sexual. En cambio, en las especies pluricelulares la seleccin natural no actuar sobre la clula individual sino sobre el organismo como un todo. Para producir y mantener la intrincada organizacin del cuerpo de un organismo pluricelular, las clulas debern obedecer estrictos controles que limiten su libre proliferacin. La mayor parte de las clulas del organismo no se dividen todo el tiempo, sino que estn en estado de reposo, cumpliendo con

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su funcin especfica. A diferencia de los organismos unicelulares, la existencia o no de nutrientes no es un factor limitante de la divisin: la clula que debe dividirse o crecer luego de la divisin recibe seales especficas de otras clulas, bajo la forma de factores de crecimiento que se unen a receptores especficos en la membrana celular y estimulan la proliferacin celular 3. Otro factor que influye sobre el ciclo celular es el nmero de veces que una clula se ha dividido anteriormente. Las clulas provenientes de un tejido embrionario y puestas en cultivo se dividen alrededor de 50 veces. Luego entran en G 0, fase de la cual nunca salen. Cuanto mayor edad tiene el organismo del cual se toman las clulas, menor ser el nmero de veces que las clulas se dividirn en cultivo. A este fenmeno se lo conoce como senescencia o envejecimiento. Esta restriccin en el nmero de divisiones se correlaciona con el acortamiento de los telmeros a lo largo de los sucesivos ciclos celulares. Esto no ocurre en algunas clulas como las clulas germinales, algunas clulas sanguneas y en las clulas cancerosas, ya que poseen la enzima telomerasa, que como se ha visto, sintetiza las secuencias telomricas que se pierden. MITOSIS: EL MECANISMO DE LA DIVISIN CELULAR A nivel molecular, la fase M (o fase de divisin del ciclo celular) se inicia a travs de una cascada de fosforilaciones de protenas desencadenada por la activacin del Cdk-M, actuando como inductor de la mitosis, mientras que finaliza por la desfosforilacin de las protenas. Las fosforilaciones que ocurren durante la fase M son responsables de los muchos cambios morfolgicos que acompaan a la mitosis: los cromosomas se condensan, la envoltura celular se desorganiza, el retculo endoplsmico y el aparato de Golgi se fragmentan, la clula pierde su adhesin a otras clulas y a la matriz extracelular y el citoesqueleto es transformado para realizar el conjunto de movimientos altamente organizados que conducen a la segregacin de los cromosomas y la particin de la clula. La primera manifestacin visible de una mitosis inminente es la condensacin cromosmica, que es consecuencia de una extensiva fosforilacin de las molculas de histona H1 (hasta seis molculas de fosfato por molcula de protena). La condensacin cromosmica es el preludio de dos distintos procesos: la mitosis (segregacin de los cromosomas y la formacin de dos ncleos en lugar de uno) y la citocinesis (la particin de una clula en dos). En cada uno de estos procesos intervienen dos componentes del citoesqueleto: los microtbulos constituyen el huso mittico que ordenar la segregacin de los cromosomas y los filamentos de actina formarn (con la miosina II) el anillo contrctil que determinar la separacin de las dos clulas hijas. Como ya se ha visto, el principal centro organizador de los microtbulos en los animales es el centrosoma o centro celular, una estructura nubosa pobremente definida, formada por material pericentriolar (la matriz centrosomal) que est asociado a un par de centrolos. Antes que una clula se divida debe duplicar su centrosoma para proporcionar uno a cada una de las clulas hijas. De hecho, centrosomas duplicados resultan necesarios para crear las dos clulas hijas, ya que los centrosomas forman los polos del huso mittico. En las clulas animales, los centrosomas estn constituidos por un par de centrolos, mientras que en las clulas vegetales los centrolos no existen. Dado que en las clulas vegetales hay formacin del huso, esto indicara que, ms que los centrolos, el verdadero centro organizador de microtbulos se encuentra en la matriz pericentriolar del centrosoma. El proceso de duplicacin y separacin del centrosoma es conocido como ciclo centrosomal: Durante la interfase los centrolos y otros componentes del centrosoma se dividen pero permanecen unidos como un slo componente en un extremo del ncleo; a medida que comienza la mitosis, cada complejo se separa en dos y cada par de centrolos forma parte de un centro organizador de los microtbulos separado, del que irradia un conjunto de microtbulos que constituyen el ster. Cada ster se mover luego hacia los lados opuestos del ncleo para formar los dos polos del huso mittico. Una vez
3

Entre ellos se pueden mencionar el PDGF ( platelet-derived growth factor), una protena presente en las plaquetas que estimula la cicatrizacin de heridas, o el factor de crecimiento epidrmico (EGF, epidermal growth factor); ambos son poco especficos, ya que actan sobre distintos tipos celulares, pero hay factores de crecimiento especficos, como la eritropoyetina, que estimula la produccin de precursores de glbulos rojos. Sin embargo debe tenerse en cuenta que los resultados mencionados provienen de experiencias en clulas aisladas (cultivos celulares), ya que en el organismo entero la proliferacin celular depende de la combinacin de una serie de factores de crecimiento, ms que de uno solo de ellos .

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que la mitosis termina, cada clula hija recibir un centrosoma (que proviene de uno de los polos del huso mittico) conjuntamente con su juego de cromosomas. Etapas de la mitosis La fase M del ciclo celular se acostumbra a dividir en 6 etapas, constituyendo las cinco primeras la mitosis y la ltima, que se superpone al fin de la mitosis, la citocinesis. Los cinco estadios de la mitosis: profase, prometafase, metafase, anafase y telofase, ocurren en un orden secuencial estricto, en tanto que la citocinesis comienza durante la anafase y se extiende hasta que finaliza el ciclo. 1. PROFASE La transicin de la fase G2 a la fase M del ciclo celular no es un evento netamente establecido. La cromatina, que es difusa en la interfase, se condensa lentamente, iniciando la formacin de cromosomas bien definidos. Cada cromosoma se ha duplicado durante la fase S precedente, por lo que cada uno estar formado por dos cromtidas hermanas, las que estarn conectadas por sus centrmeros. Estos ltimos se vuelven claramente visibles debido a que se les asocian dos placas proteicas, ubicadas hacia los lados de las cromtidas, llamadas cinetocoros. La ubicacin correcta de los cinetocoros est dada por la secuencia de ADN del centrmero; los centrmeros de los cromosomas de mamferos contienen secuencias de ADN repetitivas (ADN satlite). Hacia el final de la profase, los microtbulos citoplasmticos que durante la interfase formaban parte del citoesqueleto se desensamblan y comienzan a formar el principal componente del aparato mittico: el huso mittico. Esta es una estructura bipolar compuesta de microtbulos y protenas asociadas. El huso se organiza inicialmente por fuera del ncleo (encerrndolo en una especie de jaula de microtbulos), a partir de los dos centrosomas que provienen de la divisin del centrosoma original. Durante la profase, los pares de centrolos se separan. 2. PROMETAFASE Esta etapa se inicia abruptamente con la rpida fosforilacin de la lmina nuclear, lo que provoca la desorganizacin de la envoltura nuclear, con lo que los microtbulos ganan acceso a los cromosomas. La envoltura nuclear se desensambla en vesculas membranosas que resultan microscpicamente indistinguibles de los trozos del retculo endoplsmico; estas vesculas se mantienen visibles alrededor del huso durante toda la mitosis. El huso mittico, que se encontraba a un lado del ncleo, puede ahora ocupar la regin central de la clula. Algunos microtbulos del huso, los microtbulos cinetocricos, se conectan a los cromosomas unindose a los cinetocoros; regularmente se unen de 30 a 40 microtbulos por cinetocoro. Los microtbulos que no se asocien a los cromosomas constituyen los microtbulos polares, en tanto que los que los microtbulos ms cortos y que quedan fuera del huso se llaman microtbulos astrales. Los microtbulos del cinetocoro ejercen tensin sobre los cromosomas, que comienzan a moverse buscando su correcta ubicacin. 3. METAFASE Los microtbulos del cinetocoro alinean a los cromosomas en un plano medio, perpendicular al huso y a igual distancia de cada uno de los polos . Cada cromosoma es mantenido en tensin ubicndose en el centro de la clula, formando la placa metafsica. De este modo los cinetocoros de cada cromtida se ubican apuntado uno a cada polo. A pesar de su aparente estabilidad, los microtbulos del huso estn intercambiando unidades de tubulina del citoplasma, pero dado que los microtbulos polares y los del cinetocoro mantienen un largo constante durante la metafase, existe un exacto equilibrio entre las

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unidades de tubulina que se incorporan en los extremos plus (la zona de la placa metafsica) y las que se eliminan en los extremos minus (los polos).

4. ANAFASE La anafase es gatillada por el comienzo de la degradacin de la ciclina y la consecuente inactivacin de Cdk-M. Esto conduce a la separacin de ambas cromtidas hermanas, que se mantenan unidas entre s y al centrmero por la cohesina, que se libera sbitamente al comienzo de la anafase, permitiendo que cada cromtida (ahora un cromosoma) sea llevada hacia cada uno de los polos. En este movimiento de los cromosomas hijos hacia los polos intervienen dos procesos distintos, a tal punto que se los ha denominado anafase A y anafase B. La anafase A es el producto del acortamiento de los microtbulos del cinetocoro, cuya accin provoca la segregacin de cada uno de los cromosomas que llevan unidos hacia el respectivo polo. La anafase B es responsabilidad de los microtbulos polares, que al alargarse provocan el alejamiento de ambos polos. La anafase A depende de protenas motoras del cinetocoro, mientras que la B depende de protenas motoras de los polos y del centro del huso. Durante la anafase A los microtbulos del cinetocoro se van acortando por despolimerizacin de las unidades de tubulina, proceso que ocurre fundamentalmente en la proximidad de los polos, aunque tambin existe despolimerizacin (aunque mucho menor) en el extremo cinetocrico. A la anafase B contribuyen dos fuerzas diferentes, que operan sobre los microtbulos polares y sobre los microtbulos astrales. En el primer caso se ha comprobado que los antibiticos que inhiben las protenas motoras tipo cinesina hacen que el movimiento de los microtbulos resulte bloqueado; dado que las protenas motoras mantenan estables los extremos de microtbulos polares opuestos. La accin de estas protenas motoras es probablemente lo que origina que el par de microtbulos polares unidos por las protenas motor se alarguen por la accin de stas. El otro fenmeno que contribuye a la separacin de los polos es que los microtbulos astrales seran atrados

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hacia la membrana plasmtica por protenas motoras asociadas a ella, lo que dara por resultado que los polos tambin se alejen entre s. Al finalizar la anafase, los cromosomas ya se encuentran en los extremos de las clulas, vecinos a los polos. 5. TELOFASE En la etapa final de la mitosis ( telos = fin). Alrededor de cada grupo de cromosomas se tienen que regenerar sendas membranas nucleares para que se pueden reconstituir los ncleos de cada una de las clulas hijas. Para ello se tienen que ordenar los tres componentes de la envoltura nuclear: las membranas interna y externa (esta ltima asociada al retculo endoplsmico), la lmina nuclear y los poros nucleares. Al comienzo de la telofase, las vesculas generadas durante la desorganizacin de la envoltura nuclear se asocian con la superficie de los cromosomas individuales y se van fusionando para reconstituir las membranas nucleares, que parcialmente agrupan algunos cromosomas antes de coalescer en una nica membrana que encierra la totalidad de los cromosomas segregados (ver Mdulo 7). Durante este proceso los poros nucleares se reensamblan y las laminas desfosforiladas se asocian para reconstituir la lmina nuclear. La descondensacin de la cromatina se cree que ocurre como consecuencia de la desfosforilacin de la histona H1. 6. CITOCINESIS Durante la citocinesis el citoplasma se divide por un proceso de estrangulamiento de la clula, usualmente en el plano medio, en el lugar que haba ocupado la placa metafsica. Aunque la divisin nuclear y la citoplasmtica estn generalmente asociadas, son eventos independientes, ya que en algunas circunstancias la mitosis no es seguida por la citocinesis. El embrin temprano de la mosca Drosophila, por ejemplo, lleva a cabo 13 ciclos de divisiones nucleares sin que ocurra la divisin citoplasmtica, formando una nica clula que contiene alrededor de 6.000 ncleos ordenados en una monocapa cercana a la superficie. Posteriormente se originan clulas uninucleadas como consecuencia de la condensacin de porciones de citoplasma alrededor de cada ncleo, con la consiguiente formacin de una membrana plasmtica individual. La etapa de ncleos libres es tambin frecuente en diversos tipos de especies vegetales. En una clula tpica, sin embargo, la citocinesis acompaa a la mitosis, comenzando en la anafase, continuando en la telofase y alcanzando su definicin a medida que se inicia la interfase. Normalmente, el huso mittico determina dnde ocurrir el estrangulamiento que dar lugar a la citocinesis. El primer indicio lo da un plegamiento, con la consecuente formacin de un surco, en el plano de la placa metafsica, durante la anafase. Diversas experiencias han demostrado que el plano se forma an cuando no est presente el huso mittico y que son los microtbulos del huso los que establecen la seal para que se inicie la citocinesis, probablemente mediada por el ion Ca 2+ y a travs de la cual se alinean filamentos de actina y de miosina-II para iniciar el proceso. El estrangulamiento que inicia la citocinesis es llevado a cabo por la contraccin de un anillo formado principalmente de una asociacin de filamentos de actina y de miosina-II, que constituyen el anillo contrctil, dispositivo que se ensambla en la anafase temprana. Durante una divisin celular normal el anillo no se engrosa a medida que el surco se profundiza, sugiriendo que progresivamente se va produciendo una prdida de ambos tipos de filamentos y finalmente desaparece cuando el estrangulamiento termina, ya que la membrana plasmtica forma el cuerpo medio, que persiste como un tapn entre las dos clulas hijas. El cuerpo medio est constituido por un conjunto de microtbulos polares densamente empaquetados con material de la matriz extracelular. El proceso de citocinesis requiere la reorganizacin de los filamentos de actina y miosina para permitir la organizacin del anillo contrctil. Tambin se afectan otras funciones, tales como la adhesin, ya que las clulas que se mantenan estiradas y planas durante la interfase tienden a redondearse cuando entran en la fase M. Se piensa que las protenas de adhesin transmembrana y/o las que las conectan con los componentes del citoesqueleto en los contactos celulares son afectadas como consecuencia de procesos de fosforilacin. Cabe recordar que existen algunos casos (generalmente en los estadios embrionarios iniciales) en los que la mitosis y la subsiguiente citocinesis no dan lugar a clulas equivalentes en forma y tamao. Este es un hecho frecuente en clulas embrionales, cuando la divisin origina clulas destinadas a formar

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diferentes partes del cuerpo (en este caso se considera que las clulas estn polarizadas y la distribucin diferencial de los compuestos presentes en el citoplasma define la zona donde tiene lugar la citocinesis). CITOCINESIS EN CLULAS DE PLANTAS SUPERIORES La mayor parte de las clulas vegetales estn constituidas por clulas dotadas de una pared celular rgida de naturaleza predominantemente celulsica. En este caso, en lugar de producirse el estrangulamiento de la clula por formacin de un anillo contrctil a nivel de la superficie celular, el citoplasma de las clulas vegetales es particionado por la construccin de una nueva pared celular en el interior de la clula. La nueva pared que se forma para dividir los citoplasmas de las clulas hijas se denomina placa celular y comienza con la organizacin de los microtbulos polares en el centro del plano medio, formando una estructura denominada fragmoplasto. Las vesculas derivadas del desorganizado aparato de Golgi comienzan a acercase al fragmoplasto por transporte a lo largo de los microtbulos polares, hasta que llegan a la zona del fragmoplasto, donde comienzan a coalescer para formar la placa celular temprana. Los polisacridos contenidos en dichas vesculas (pectinas y hemicelulosas) forman el material de la pared primaria de ambas clulas. La placa comienza entonces a extenderse en todos sus puntos hacia la periferia (de igual modo que las ondas que se producen cuando se arroja una piedra a un estanque) hasta que se alcanza la conexin con la vieja pared celular. El huso mittico por s mismo no parece suficiente como para determinar la posicin de la placa celular. El primer signo visible de la ubicacin de la misma est dado por un proceso que ocurre en la interfase, exactamente despus de la desorganizacin de los microtbulos en la interfase y previo a la formacin del huso, antes que comience la profase. En este momento aparece en la zona media de la clula, exactamente debajo de la membrana plasmtica, un anillo de microtbulos al que se denomina banda de preprofase. Esta banda se va estrechando a medida que avanza la mitosis y desaparece antes que comience la metafase. Se sabe ahora que la banda de preprofase contiene numerosos filamentos de actina, adems de microtbulos, que parecen disponerse en la zona media y constituyen una especie de memoria de la ubicacin que tendr la placa celular. Durante la citocinesis, a medida que el fragmoplasto crece centrfugamente, los bordes del mismo estn conectados a los filamentos de actina. DIVISIN CELULAR EN ORGANISMOS UNICELULARES En las clulas procariticas, la divisin del ADN y del citoplasma estn acoplados en forma directa. Cuando el ADN se replica, las dos copias del cromosoma se unen a regiones especializadas de la membrana plasmtica, que son gradualmente separadas como consecuencia del crecimiento de la

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membrana entre ellas. La fisin (producida por estrangulamiento de la clula) tiene lugar entre los dos sitios de unin, con lo que cada clula hija recibe un cromosoma. Con la evolucin de los eucariotes el genoma creci en complejidad y aument el nmero y tamao de los cromosomas, lo que oblig a elaborar mecanismos ms complejos de separacin. Sin embargo, el aparato mittico pudo no haber evolucionado enseguida, ya que en eucariotes primitivos, como en el dinoflagelado Cryphtecodinium cohnii, la mitosis an depende de un mecanismo de unin a la membrana: la envoltura nuclear no desaparece y los microtbulos pasan a travs de la zona que ocupa el ncleo porque en la envoltura nuclear se forman varios canales que les permiten atravesarla, pero sin entrar en contacto con los cromosomas. El cinetocoro en esta especie parece estar integrado con la membrana nuclear. Un caso ms avanzado de huso mittico, aunque todava extranuclear, tiene lugar en hipermastigotes, protozoos que viven en el intestino de algunos gusanos. Aqu se forma un huso central nico que pasa a travs de un tnel, dejando tambin la envoltura nuclear intacta; los cromosomas estn unidos por sus cinetocoros a distintas partes de la membrana nuclear, la que interacta con los polos del huso va los microtbulos del cinetocoro. Un estado ms avanzado an se encuentra en las levaduras y diatomeas (algas unicelulares) que forman los husos mitticos en el interior de la membrana nuclear. Aqu ya los cromosomas estn unidos por sus cinetocoros a los microtbulos del cinetocoro y los cromosomas son segregados de manera similar a la que ocurre en los mamferos, excepto que el proceso ocurre totalmente dentro del ncleo celular. APOPTOSIS En la formacin de un individuo, la muerte celular programada o apoptosis es tan importante como la divisin celular. En los vertebrados, por apoptosis se regula el nmero de neuronas durante el desarrollo del sistema nervioso, se eliminan linfocitos que no realizan correctamente su funcin y se moldean las formas de un rgano en desarrollo, eliminando determinadas clulas. Como ejemplo, las clulas de la cola de los renacuajos durante la metamorfosis se eliminan por este proceso. Las clulas sintetizan las protenas que forman parte de la maquinaria apopttica, las cuales sern fundamentalmente proteasas. Estas enzimas normalmente permanecen inactivas en la clula, respondiendo a mecanismos de control estrictos. Estos son los responsables de activar la apoptosis en momentos particulares de la vida de la clula, respondiendo a seales internas o externas. Las clulas que entran en apoptosis se achican, las membranas se ondulan y se forman burbujas en su superficie; la cromatina se condensa y se fragmenta; luego las clulas se dividen en numerosas vesculas, los cuerpos apoptticos, los que sern fagocitados por las clulas vecinas. Cuando una clula muere por dao o envenenamiento (necrosis), normalmente se hincha y lisa, liberando los contenidos celulares y desencadenando un proceso inflamatorio. A diferencia de la necrosis, la apoptosis es un tipo de muerte activa o programada, que requiere un gasto de energa y es un proceso ordenado en el que no se desarrolla un proceso inflamatorio. CONTROL DE LA PROLIFERACIN CELULAR Y EL CNCER El cncer se inicia cuando una clula escapa a los controles normales de divisin y muerte celular programada y comienza a proliferar en forma descontrolada. Esto puede dar lugar a la formacin de una masa de clulas denominada tumor. Una caracterstica clave de las clulas cancerosas es que, a diferencia de las normales, tienen la capacidad de emigrar, invadir otros tejidos y establecer nuevas colonias. Este proceso se denomina metstasis y cuando un tumor adquiere esta capacidad pasa a ser maligno. El cncer es el resultado de una serie de modificaciones accidentales en el material gentico que trae como consecuencia una divisin celular descontrolada. CUESTIONARIO 1. Defina qu entiende por cromosoma, explique cmo est conformado y describa su morfologa vista al microscopio ptico.

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2. Qu diferencias existen entre la heterocromatina y la eucromatina? A qu se denomina heterocromatina constitutiva y facultativa? 3. Qu diferencias puede sealar entre los cromosomas metacntricos, submetacntricos y acrocntricos? 4. De acuerdo a los resultados del Proyecto Genoma Humano, cuntos genes existen en el ADN de la especie humana? 5. Cules son las fases del ciclo celular, qu ocurre en cada una de ellas y cmo estn reguladas por la clula? 6. En un mismo organismo, todas las clulas se dividen al mismo tiempo? Es igual la duracin del ciclo celular en los distintos tipos celulares? 7. En un organismo pluricelular todas las clulas se dividen al mismo tiempo? Fundamente su respuesta. 8. Describa las caractersticas de los complejos Cdk-ciclinas y cmo es que actan en la regulacin del ciclo celular. 9. Qu es el la Cdk-M y cmo acta? 10. Existe alguna relacin entre el envejecimiento celular (senescencia) y el nmero de divisiones celulares que ha sufrido una clula? 11. Las fosforilaciones que ocurren durante la fase M son responsables de los cambios que se producen durante la mitosis. Podra mencionar algunos de ellos? 12. Qu tipos de divisin celular conoce? En qu se asemejan y en qu difieren? 13. En qu etapas se divide, para su estudio, a la mitosis y qu sucede en cada una de ellas? 14. Cul es la posicin de los cromosomas en la placa metafsica? Cul es la trascendencia de este hecho en el destino final de las cromtidas hermanas de cada cromosoma? 15. Qu funcin cumplen los distintos elementos del citoesqueleto durante la mitosis? Qu sucede si su funcionamiento se ve interrumpido? 16. En qu difieren las mitosis de los animales y las plantas? 17. Explique el concepto de proliferacin celular y apoptosis. Qu factores pueden inducirlos? BIBLIOGRAFA RECOMENDADA ALBERTS B., BRAY D., LEWIS J., RAFF M., ROBERTS K., WATSON J.D.:Biologa Molecular de La Clula.Editorial Omega, 4ta Ed. 2004. ALBERTS, B., D. BRAY, A. JOHNSON, J. LEWIS, M. RAFF, K.ROBERTS Y PETER WALTER (1998) Essential Cell Biology, Garland Publishing, Inc. New York & London. COOPER, G.M. La Clula. 2 edicin. Marbn Libros, S.L., Espaa. 2002. CURTIS, H. Y S. BARNES: Biologa. Editorial Panamericana, 6ta Edicin en Espaol 2000. DE ROBERTIS (H), HIB Y PONZIO: Biologa Celular y Molecular de De Robertis. Editorial El Ateneo, 13re Edic. 2000. LEHNINGER, A.L., D.L. NELSON Y M.M. COX (2003) Principios de Bioqumica, 3a edicin (traducido de la tercera edicin inglesa. 2000) Ediciones Omega, Barcelona. LODISH, H., A. BERK, P. MATSUDAIRA, C.A. KAISER, M. KRIEGER, M.P.SCOTT, S.L. ZIPURSKY, & J. DARNELL. Biologa Celular y Molecular, Editorial Mdica Panamericana, 2005.

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Mdulo 11. TRABAJO EXPERIMENTAL

Protocolo de Experiencias. Observacin de cromosomas metafsicos en preparaciones de mdula sea de ratn. Heterocromatina facultativa: cromatina sexual del cromosoma X. Observacin del corpsculo de Davidson: en neutrfilos polimorfonucleares de sangre de mujer coloreados con May Grunwald- Giemsa. Observacin del corpsculo de Barr en clulas descamativas del epitelio bucal de mujer, coloreados con Feulgen. Observacin de las distintas etapas de la Mitosis en preparaciones fijadas y coloreadas por diversas tcnicas. a) En tejidos vegetales: Corte longitudinal de raz de cebolla (Allium cepa) teido con hematoxilina. Aplastado (squash) de meristema radicular de cebolla (Allium cepa) y ajo (Allium sativum) teidos por coloracin de Feulgen. b) En tejidos animales: cortes de huevos de Ascaris teidos con Hematoxilina frrica. Observacin de las fases de la mitosis en meristema radicular de cebolla por el mtodo de aplastamiento (squash): 1. Se colocan bulbos de cebolla en agua hasta que las races crezcan a un tamao adecuado y se corta la porcin terminal de las races (trozos de 2,5 cm. de largo). 2. Fijacin: colocar las races en fijador de Carnoy (tres partes de etanol absoluto y una parte de cido actico glacial) durante 3 horas. Renovar el fijador, donde permanecen hasta el momento de ser utilizadas. 3. Coloracin: colorear las races en 1ml de carmn-actico a bao mara (sin llegar a ebullicin), 3 min. 4. Aplastado (squash): colocar el trozo de raz sobre una superficie lisa, cortar los 2mm. terminales y colocarlo sobre un portaobjetos. Agregarle una gota de cido actico 45% y machacar en ella el material de la raz. Cubrir con un cubreobjetos. Aplastar suavemente entre papeles de filtro para eliminar el exceso de lquido. Endomitosis: Observacin de cromosomas politnicos en aplastado de glndulas salivales de larva de Drosophila (mosca de la fruta). Estos cromosomas han sufrido mltiples replicaciones sin que haya habido divisin celular y ello da como resultado la disposicin colineal de ms de mil copias de cada molcula de ADN. El gran tamao de estos cromosomas facilita la visibilidad de distintas zonas, que al ser tratados con distintos colorantes permite teir selectivamente algunas regiones con mayor intensidad que otras, produciendo un bandeo caracterstico. An se desconoce la base molecular de la regularidad de las bandas cromosmicas, pero son muy tiles para distinguir cromosomas de tamao y forma similares.