INTRODUCCION

Las reacciones qumicas que se dan en los seres vivos no podran tener lugar sin la presencia de los enzimas. Estas macromolculas, que generalmente son protenas, catalizan las reacciones bioqumicas, permitiendo que los sustratos se conviertan en los productos que necesita la clula. Como todo catalizador, los enzimas no se consumen en las reacciones que catalizan, pero a diferencia de otros catalizadores de naturaleza inorgnica, las reacciones que catalizan son muy especficas: slo interaccionan con determinados sustratos, y slo facilitan el curso de determinadas reacciones. Los enzimas son catalizadores muy potentes y eficaces, qumicamente son protenas Como catalizadores, los enzimas actan en pequea cantidad y se recuperan indefinidamente. No llevan a cabo reacciones que sean energticamente desfavorables, no modifican el sentido de los equilibrios qumicos, sino que aceleran su consecucin. Las enzimas son grandes protenas que aceleran las reacciones qumicas. En su estructura globular, se entrelazan y se pliegan una o ms cadenas polipeptdicas, que aportan un pequeo grupo de aminocidos para formar el sitio activo, o lugar donde se adhiere el sustrato, y donde se realiza la reaccin. Una enzima y un sustrato no llegan a adherirse si sus formas no encajan con exactitud. La accin enzimtica se caracteriza por la formacin de un complejo que representa el estado de transicin. El sustrato se une al enzima a travs de numerosas interacciones dbiles como son: puentes de hidrgeno, hidrfobas, etc, en un lugar especfico, el centro activo. Este centro es una pequea porcin del enzima, constituido por una serie de aminocidos que interaccionan con el sustrato. Con su accin, regulan la velocidad de muchas reacciones qumicas implicadas en este proceso. El nombre de enzima, que fue propuesto en 1867 por el fisilogo alemn Wilhelm Khne (1837-1900), deriva de la frase griega en zyme, que significa 'en fermento'.

EXPERIENCIA N 4 ACTIVIDAD ENZIMATICA OBJETIVOS Observar que el oxgeno desplace al agua, dependiendo del material vegetal que se emplee Diferenciar si una reaccin es rpida o lenta. Establecer una relacin desplazamiento tiempo, segn el material a emplearse. Identificar la accin del perxido de hidrgeno sobre la peroxidasa y catalasa. Familiarizarse con las propiedades de los enzimas y observar la actividad de la catalasa y peroxidasa. FUNDAMENTO TEORICO Las enzimas son catalizadores biolgicos que permiten que las reacciones metablicas ocurran a gran velocidad en condiciones compatibles con la vida. En las clulas, la actividad secuencial de muchas enzimas permite que las molculas se degraden, o bien se formen molculas de mayor tamao a partir de molculas sencillas. Desde el punto de vista qumico, las enzimas son protenas globulares, algunas de ellas con estructura cuaternaria. Para cumplir su funcin requieren conservar su estructura nativa, en particular se destaca una regin conocida como sitio activo, que es responsable de catalizar la reaccin. Las enzimas se clasifican de acuerdo al tipo de reaccin que catalizan Las enzimas pertenecen a seis grupos que aparecen a continuacin: 1. Oxidoreductasas, actan en reacciones de oxidoreduccin y se las llama tambin deshidrogenasas. 2. Transferasas, transfieren grupos funcionales de un compuesto a otro. Las quinasas representan un grupo especializado que transfiere grupos fosfato. 3. Hidrolasas, rompen un enlace adicionando una molcula de agua. 4. Liasas, rompen enlaces por mecanismos distintos a la hidrlisis o la oxidacin. Las decarboxilasas y aldolasas son ejemplos de liasas. 5. Isomerasas, catalizan reacciones de interconversin de ismeros. 6. Ligasas, unen molculas utilizando energa proveniente del ATP. Tambin se llaman sintetasas. El nombre de cada enzima hace referencia al sustrato y al tipo de reaccin que cataliza. La denominacin sistemtica de una enzima se realiza segn reglas nomenclaturales mediante cuatro nmeros precedidos de la abreviatura E.C. (Enzymatic Code). Propiedades generales de las enzimas 1. Son los catalizadores de las reacciones qumicas de los sistemas biolgicos 2. Tienen gran poder cataltico 3. Poseen un elevado grado de especificidad de sustrato 4. Funcionan en soluciones acuosas en condiciones suaves de pH y temperatura 5. La mayora de las enzimas son protenas La funcin depende de la integridad de la conformacin proteica nativa Existen enzimas que son protenas simples y otras que requieren componentes qumicos adicionales: Las enzimas se clasifican segn la reaccin catalizada.

PEROXIDASA Las peroxidasas son un tipo de enzimas muy extendidas en toda la escala filogentica. Pertenecen a la categora de las oxidorreductasas y segn el Comit de Nomenclatura de la Unin Internacional de Bioqumica y Biologa Molecular se clasifican con los nmeros EC 1.11. Catalizan reacciones bisustrato de carcter redox, utilizando un perxido como oxidante (a lo que deben su nombre) y un segundo sustrato de caractersticas reductoras que es oxidado por el perxido. En vegetales, es de destacar a la peroxidasa del rbano (horseradish peroxidase o HRP), que tiene grandes aplicaciones en tcnicas inmunoqumicas y de diagnstico clnico debido a su gran estabilidad, facilidad de conjugacin con las inmunoglobulinas y sencillez para detectarla por mtodos colorimtricos utilizando un gran nmero de reactivos. En animales, existen peroxidasas con una funcin predominantemente defensiva en la saliva, la leche o los leucocitos, donde se aprovecha el carcter oxidante con fines germicidas y bactericidas del perxido que se genera de forma endgena mediante otras reacciones (glucosa oxidasa, amino cido oxidasa etc.). No todas las peroxidasas son defensivas, y por ejemplo una peroxidasa (yoduro peroxidasa) es tambin la responsable de la sntesis de las hormonas tiroideas, oxidando en este caso el yoduro a yodo para que ste se adicione a algunos de los anillos fenlicos de los residuos de tirosina de la tiroglobulina. Otras peroxidasas, como la glutationa peroxidasa, estn ampliamente distribuida en diversos tejidos con fines diferentes, pero relacionados con una funcin antioxidante. Prcticamente todas las peroxidasas son hemoprotenas (excepcin notable es la glutationa peroxidasa, que es una selenoprotena) y tienen como sustrato comn el H2O2 o perxido de hidrgeno. La gran afinidad por este sustrato hace que se pueda unir al hierro del grupo hemo por los dos planos del centro activo, el superior y el inferior, dando lugar a una inhibicin por exceso de sustrato ya que cuando ambas posiciones estn ocupadas por el perxido de hidrgeno no es posible la unin del otro sustrato. Respecto a ese otro sustrato, su naturaleza y estructura qumica puede ser muy distinta, tanto si nos referimos a los oxidados "in vivo" como si lo hacemos a los que se emplean "in vitro" con objeto de detectar esta actividad enzimtica. Entre ellos se incluyen fenoles, aminas aromticas, molculas orgnicas complejas como el ABTS (ver prctica de Reflotrn para determinacin de parmetros sanguneos en tiras secas), o el ioduro y la glutationa antes citados. Esta pobre especificidad para el sustrato reductor hace que la afinidad sea tambin pequea. La peroxidasa, EC 1.11.1.7, es una enzima que cataliza la oxidacin de un amplio nmero de sustratos orgnicos e inorgnicos, utilizando el poder oxidante del perxido de hidrgeno. Donante + H2O2 Esta enzima utiliza como cofactor el grupo hemo. Es utilizada ampliamente en bioqumica clnica. As, los ensayos para la determinacin y cuantificacin de metabolitos como glucosa, cido rico, colesterol o triglicridos en fluidos biolgicos usan peroxidasa como enzima acoplada. Tambin se utiliza en inmunoensayos para la deteccin de virus tan conocidos como el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) Donante oxidado + H2O

causante del sida o el herpesvirus. La peroxidasa tambin se utiliza como biocatalizador para la generacin de productos de inters biotecnolgico e industrial como resinas fenlicas, adhesivos, antioxidantes, antiestticos y protectores de radiacin magntica, colorantes alimentarios y componentes bioactivos de detergentes. Los genes de las peroxidasas humanas expresan una cadena ligera y una cadena larga. La enzimas activas son un h El ser humano tambin sintetiza la mieloperoxidasa. Esta enzima se utiliza en el sistema inmunitario con funciones bactericidas. Aplicaciones La peroxidasa se emplea para el tratamiento industrial de aguas contaminadas: por ejemplo, los fenoles pueden eliminarse mediante su polimerizacin catalizada mediante la peroxidasa de Armoracia rusticana. En caballo, la actividad promedio de la enzima mieloperoxidasa en sinovia est relacionada con la presencia de artritis sptica, por lo que puede emplearse como marcador. En investigacin, es muy usada para el marcaje de anticuerpos en tcnicas como el Western blot o ELISA. De esta forma se detecta la presencia de la enzima (del anticuerpo y, en ltimo trmino, del antgeno) mediante la deteccin de la reaccin qumica que cataliza. CATALASA Muchas reacciones qumicas ocurren muy lentamente a temperatura ambiente. En un laboratorio, una reaccin puede acelerarse calentando los reactivos, pero esto no es posible en las clulas. Por ello, las reacciones celulares son aceleradas mediante las enzimas. Las enzimas son los catalizadores biolgicos que facilitan las reacciones qumicas que tienen lugar en los seres vivos. Sin ellas las reacciones qumicas seran tan lentas que la vida se detendra.

La catalasa es una enzima perteneciente a la categora de las oxidorreductasas que cataliza la descomposicin del perxido de hidrgeno (H202) en oxgeno y agua. Esta enzima utiliza como cofactor al grupo hemo y al manganeso. El perxido de hidrgeno es un residuo del metabolismo celular de muchos organismos vivos y tiene entre otras una funcin protectora contra microorganismos patgenos, principalmente anaerobios, pero dada su toxicidad debe transformarse rpidamente en compuestos menos peligrosos. Esta funcin la efecta esta enzima que cataliza su descomposicin en agua y oxgeno. Adems la catalasa se usa en la industria textil para la eliminacin del perxido de hidrgeno, as como en menor medida se emplea en la limpieza de lentes de contacto que se han esterilizado en una solucin de perxido de hidrgeno. La ausencia congnita de catalasa es causante de una acatalasemia (o acatalasia), la enfermedad de Takahara que se manifiesta por la ausencia de actividad de la catalasa en los glbulos rojos y con severas infecciones

gangrenosas de la boca, pudiendo producir la prdida de los dientes y graves destrucciones de los maxilares y regiones blandas que los cubre. Enfermedad congnita del Japn (2 de 100.00 habitantes sufren de este trastorno). El mecanismo completo de la catalasa no se conoce, aun as la reaccin qumica se produce en dos etapas: H2O2 + Fe(III)-E H2O + O=Fe(IV)-E H2O2 + O=Fe(IV)-E H2O + Fe(III)-E + O2 Donde Fe-E representa el ncleo de hierro del grupo hemo unido a la enzima que actun como cofactores. La enzima se presenta en forma de homotetrmero y se localiza en los peroxisomas. Esta enzima puede actuar como una peroxidasa para muchas sustancias orgnicas, especialmente para el etanol que acta como donante de hidrgeno. Las enzimas de muchos microorganismos, como el Penicillium simplicissimum, que exhiben actividad de catalasa y peroxidasa, son frecuentemente llamadas catalasas-peroxidasas.

MATERIALES Y PROCEDIMIENTO MATERIALES 2 pomos mermeleros 1 pipeta Pasteur descartable Probeta 2 sondas 2 jeringas de 20 cc 100 ml de agua oxigenada 2 tubos de ensayo 20 x 200 Hojas de geranio Hojas de acelga Mortero Balanza electrnica PROCEDIMIENTO Pesar de 10 a 20 g del vegetal a usar. Moler con el piln en el mortero. Simultneamente graduar la cinta Masking tape y pegarla sobre los tubos de ensayo. Llenar el frasco mermelero con agua. Unir la sonda con la jeringa. El otro extremo de la sonda introducirlo en el tubo de ensayo y llenarlo con agua hasta el ras. Tapar con el dedo el tubo de ensayo y con mucho cuidado introducirlo al pomo mermelero cuidando que el agua del tubo no sea desplazada por oxgeno. Introducir en el mbolo de la jeringa 2 a 3 g del machacado inicial y agregar 3 ml de agua oxigenada. Tapar suavemente. Inmediatamente tomar el tiempo. Observar como la accin del vegetal y el agua oxigenada desplaza al agua del tubo de ensayo. Medir la distancia desplazada y hallar el volumen.

RESULTADOS Volumen de agua desplazada: Para hallar el volumen de agua desplazada se considerar: r= 0.9 cm El tubo de ensayo se compone de dos superficies Volumen de casquete: Volumen del cilindro:

Donde H= altura que recorre el agua en el interior del cilindro S= rea de la base cilndrica h= altura del centro a la curva del sector esfrico.

Desplazamiento del agua utilizando agua oxigenada y acelga: Tiempo: 80 seg.

Desplazamiento del agua utilizando agua oxigenada y geranio: Tiempo:10 min.

Resultados de las mesas adyacentes: Mesa 3: acelga Tiempo: 90 seg.

Mesa 5: geranio Tiempo:15 min

ANALISIS DE RESULTADOS

En estas reacciones pudimos evidenciar la actividad enzimtica y la cuantificamos a travs del volumen de oxigeno desprendido por dicha reaccin.

volumen desplazado de agua utilizando acelga (cc)

4 3 2 1 0 mesa 4 mesa 3

Como se puede observar el volumen desplazado de agua tanto para la mesa 4(nuestra) y la mesa 3 es similar, este volumen representa el oxgeno que es liberado en esta reaccin. Es una reaccin semi violenta comparada con la albahaca y la alfalfa. La accin de la peroxidasa fue instantnea.

volumen de desplazamiento de agua utilizando geranio (cc)

1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 mesa4 mesa 5

Aqu se observa que no hubo desplazamiento de agua, es decir el perxido de hidrogeno no tuvo influencia sobre el machacado de geranio, no genero oxgeno. Podra decirse que el geranio tiene cantidades muy reducidas de peroxidasa. CONCLUSIONES Las enzimas son biocatalizadores que sirven para acelerar los procesos, son sustancias de naturaleza proteica que catalizan reacciones qumicas siempre que sea termodinmicamente posible. La importancia de una enzima es que aceleran las reacciones, en los vegetales las enzimas constituyen el principal catalizador de las reacciones indeseables del pardea miento de tipo enzimtico lo cual hace que las frutas o vegetales maduren mucho ms rpido. El oxgeno desplazo a la acelga en un tiempo breve, pero al geranio no lo desplazo debido a que el geranio no tiene cantidades considerables de peroxidasa y catalasa. La acelga es uno de los vegetales con mayor porcentaje de catalasa.

ANEXOS

Pesado y machacado del material

Desplazamiento del agua

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS Solomon Berg Martin. 2001. BIOLOGIA. Editorial Mc Graw Hill. Quinta edicin.1263 pgs. Claude A. Villee. 1993. BIOLOGIA. Editorial Mc Graw Hill. Sptima edicin. 875 pgs. Audesirk Audesirk Bayers. 2008. BIOLOGIA, LA VIDA EN LA TIERRA. Editorial Pearson. Octava edicin. 975 pgs. Raymond Oram. 2007. BIOLOGIA, SISTEMAS VIVOS. Editorial Mc Graw Hill. ltima edicin. 966 pgs. Referencias de internet: http://recursostic.educacion.es/ciencias/biosfera/web/profesor/practicas/Actividad_e nzimatica.pdf http://cienciadictos.blogspot.com/2010/04/que-es-una-holoenzima-que-es-una.html http://espanol.answers.yahoo.com/question/index?qid=20071214151904AAv3R9k http://es.wikipedia.org/wiki/Catalasa http://es.wikipedia.org/wiki/Peroxidasa http://html.rincondelvago.com/experimentos-en-biologia-celular.html http://www.uned.es/pea-nutricion-y-dietetica-I/guia/guianutr/enzimas.htm