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CINTICA ENZIMTICA DE LA FOSFATASA ALCALINA

INTRODUCCIN
p-nitrofenilfosfato+H2O +2H+ p-nitrofenol + HPO42-

MTODO.

REACTIVOS Suero de leche como fuente de enzima. p-nitrofenol 2x10-4 M p-nitrofenilfosfato de sodio 2x10-3 M

Amortiguadores 0.06 M Glicina OBJETIVOS. Realizar una curva patrn de p-nitrofenol. Determinar experimentalmente el progreso de la reaccin enzimtica. Determinar experimentalmente el pH ptimo para la actividad de la enzima. Determinar experimentalmente la temperatura ptima del ensayo de la actividad de la enzima. Determinar el efecto de la concentracin de sustrato en la velocidad de la enzima. Estudiar el efecto de un inhibidor. Calcular los valores de Energa de activacin, Vmax y km. Determinar el tipo de inhibicin y el efecto sobre la Vmax y la km Glicina Glicina Glicina TRIS TRIS TRIS Carbonatos Carbonatos Carbonatos

pH 9 9.6 10 10.4 7 8 9 10.4 10.8 11.5

NaOH 0.25 M HIPTESIS. Se determinara la actividad enzimtica de la fosfatasa alcalina en condiciones ptimas de pH, temperatura, concentracin de sustrato, con lo que alcanzara su mxima velocidad enzimtica y se observara que al adicionar un inhibidor enzimtico la actividad enzimtica tendera a disminuir con el paso del tiempo. Molibdato de sodio 50 mM. Se realiz el trabajo experimental indicado por el protocolo enviado por la profesora M. en C. Luz del Carmen Castellanos Romn donde: Se realiz una curva patrn de p-nitrofenol

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Se realiz Realizar a diferentes tiempos la reaccin enzimtica. Se realizaron ensayos de actividad enzimtica con diferente amortiguadores de pH, utilizando como blancos glicina pH 9, Tris pH 7, carbonatos pH 10.4 Se realizaron ensayos de actividad enzimtica a diferentes temperaturas con el tiempo y el amortiguador elegido en el ensayo anterior. Se realizaron ensayos de actividad enzimtica a diferentes concentraciones de sustrato, con el tiempo, el amortiguador y la temperatura elegidos en los ensayos anteriores. Se realiz el experimento anterior adicionando el inhibidor.

RESULTADOS

Grafico 1. Curva patrn de p-nitrofenol. Con la ecuacin de la recta obtenida se podr determinar la concnetracion del producto obtenido en la reaccin enzimtica

Grafico 2. Proceso de la reaccin enzimtica a diferentes tiempos

Grafico 3. Actividad en presencia de glicina como amortiguador

Grafico 4. determinacin ce la energa de activacin

Ea= falta calculo y resultado obtenido Y graficas d einhibidor y sustrato