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Prof. Dr.

Wagner de JP

Bioqumica estrutural

Bioqumica de peptdeos e protenas


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- 2011

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Bioqumica estrutural

Biognese
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Introduo - Se retrocedssemos no tempo, veramos que as galxias estavam mais perto umas das outras. No principio do Universo, h cerca de 15 000 bilhes de anos, toda a matria existente nas galxias que hoje vemos deve ter estado concentrada num nico ponto, a singularidade. As mais recentes pesquisas sobre os primeiros instantes sugerem que os elementos que viriam a constituir o nosso Universo foram criados imediatamente aps esse primeiro instante - o BIG BANG -, no momento em que o
"Que obra de arte o homem: to nobre no raciocnio; to vrio na capacidade; em forma e movimento, to preciso e admirvel, na ao como um anjo; no entendimento como um deus; a beleza do mundo; o exemplo dos animais."
(Trecho da obra Hamlet, de William Shakespeare).

Universo comeava a sua expanso, explodindo a partir de um nico ponto. Desde ento, o Universo tem vindo a expandir-se ao longo do tempo pela imensido que hoje podemos observar. Os objetos mais distantes at agora observados - os quasares encontram-se a cerca de 10 000 milhes de anos-luz (1 ano-luz a distncia percorrida por um raio luminoso num ano velocidade de cerca de 300 000 Km/s).

No existem muitas certezas quanto ao futuro do Universo. Voltar a ceder sob o seu peso da sua prpria gravidade at ficar reduzido a um nico ponto ou continuar a sua expanso por toda a eternidade, tornando-se frio e vazio. , mort Algumas imagens do universo obtidas pelo telescpio Hubble
Nebulosa Eagle Nebulosa Helix Nebulosa de Carina

Nebulosa do caranguejo

Estrela V838

Galxia M100

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Cronologia do universo
Tempo Evento O Big Bang d origem ao universo. Antes do Big Bang existia zero
Big Bang

a singularidade, um ponto onde toda a massa e o tempo estavam condensados

10-43segundos

Fim do universo de Planck, Surge o Tempo, o Espao e a Energia

10-30segundos 10-9segundos

Fim da poca inflacionria, Expanso violenta seguida de intensa precipitao da energia na forma de partculas. Os quarks acabaram por se unir em brions de 3 quarks

Trajeto de subpartculas

(prtons, nutrons) e msons de dois quarks. Fim da poca de recombinao, As partculas se recombinam 3 minutos entre si dando origem a 20% de hlio e 80% de hidrognio do Universo, nesse ponto a Natureza se reduz s quatro foras (nuclear forte , nuclear fraca, eletromagntica e gravitacional). Somente quando o universo atingir 1 milho de anos a matria como conhecemos se estabilizar. Universo dos quasares, , Definem-se as estruturas atualmente conhecidas (quasares, protogalxias, galxias, aglomerados globulares, estrelas e etc....). Essa poca teve seu incio a 17 bilhes de anos atrs, pois os quasares so as estruturas do 1 bilho de anos Universo mais longnquas j observadas da Terra. A partir desse ponto o Universo se organiza e evolui cada vez mais. Nessa poca o nosso Sistema Solar tem sua formao dando origem ao nosso Sol, ao planeta Terra e seus demais constituintes. 3,5 bilhes de anos As formas de vida comeam a aparecer

Galxia espiral de Andrmeda

Molcula de DNA

Lucy, o autralopiteco

5 milhes de anos 360.000 anos 200.000 anos

Inicia-se o ramo evolutivo do homem. Os homindeos controlam o fogo Surge o Homo sapiens

Detalhe de A criao de Ado Michelangelo


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Protenas e peptdeos
Introduo - Os peptdios so constitudos por aminocidos
unidos entre si por meio de ligaes peptdicas. Quando existe a unio de dois aminocidos dizemos que se formou um dipeptdeo. A unio de trs aminocidos d origem a um tripeptdeos e seguindo esse raciocnio podemos ter tetrapeptdeos, pentapeptdeos e assim por diante. Quando muitos aminocidos so unidos dizemos que a estrutura um polipeptdio.

Hemoglobina, protena envolvida no transporte de oxignio.

As unidades de aminocidos que formam um peptdeo passam a ser chamadas de resduos de aminocidos, pois h a ausncia de um hidrognio do grupamento amino e de uma hidroxila do grupamento carboxlico, que foi utilizada para gerar uma molcula de gua. O resduo de aminocido que possui o grupo amino livre chamado de resduo N-terminal enquanto que o resduo de aminocido que possui o grupo carboxila livre chamado de resduo C-terminal.

Ligaes peptdicas - A ligao peptdica uma ligao covalente formada entre o grupamento carboxila de
um aminocido e o grupamento amino de outro aminocido, com a formao de uma molcula de gua decorrente da perda de um hidrognio do grupamento amino e de uma hidroxila do grupamento carboxlico (Figura 11).

H N H

R1 C H
Aminocido 1

O H C OH H N

R2 C H

H
C OH

R1 N C H

O C N H

R2 C H C

O OH

Aminocido 2

H2O
Ligao peptdica

Figura 11 Ligao peptdica ligao covalente entre o grupo amino de um aminocido e o grupo carboxila de outro aminocido.

Peptdeos proticos - Os peptdios proticos so obtidos a partir da hidrlise de protenas, por ao


qumica ou enzimtica.

Peptdios naturais - Os peptdios naturais so encontrados no organismo e no precisam ser obtidos a partir
de uma protena.

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Aplicaes teraputicas de peptdeos Ocitocina - A ocitocina encontrada no mercado com os nomes comerciais de Orastinas (ampolas) e
Syntocinon (ampolas e sprais). Pertence classe dos estimulantes uterinos, estas substncias estimulam a contrao do miomtrio. So utilizadas para induzir o parto a termo e o aborto, para controlar ou prevenir hemorragias ps-parto ou ps-aborto e para avaliar a condio fetal em gravidez de alto risco. Os agentes ocitcicos so potencialmente perigosos e podem causar danos ou mesmo morte do feto e da me. E por essa razo devem ser administrados sob rigorosa superviso mdica. Hormnio neuro-hipofisrio, a ocitocina um octapeptdeo cclico biossintetizado no ncleo paraventricular do hipotlamo. A utilizao na indstria farmacutica preparada mediante fracionamento das glndulas hipofisrias posteriores de bovinos, sunos ou outros mamferos ou obtida por meio de sntese. A ocitocina estimula a contrao da musculatura lisa do tero por efeito indireto, aumentando a amplitude e durao das contraes uterinas, com a conseqente dilatao e esvaziamento do crvix. A resposta uterina aumenta paulatinamente durante a gravidez e atinge o seu auge no parto a termo. Exerce tambm fraco efeito antidiurtico. Em certas ocasies, a ocitocina utilizada para promover a ejeo do leite quando esse componente da lactao parece ser ineficiente em mes que amamentam.

Hormnio antidiurtico, vasopressina ou ADH - Hormnio liberado pela hipfise posterior em


condies de privao de gua. Trata-se de um potente vasopressor, com efeito, o termo vasopressina foi originalmente escolhido baseando-se em sua ao vasoconstritora. tambm um neurotransmissor e dentre aes no sistema nervoso central, parece desempenhar algum papel na secreo do hormnio adrenocorticotrfico (ACTH) e na regulao da circulao, temperatura e funes viscerais. O ADH tambm promove a liberao dos fatores de coagulao pelo endotlio vascular.

Insulina a insulina um hormnio polipeptdico constitudo de duas cadeias de aminocidos ligadas por
duas pontes dissulfeto intermoleculares. biossintetizada e armazenada nas clulas das ilhas pancreticas das quais liberada para desempenhas uma grande gama de funes fisiolgicas tais como: a) Ativao do sistema de transporte especfico para facilitar a entrada de glicose nos tecidos adiposo e muscular. b) Facilitar a entrada de aminocidos especficos no tecido muscular. c) Aumento da sntese protica. no tecido adiposo. e) Ativao de certas enzimas compreendidas em utilizao aumentada de glicose, glicognese e lipognese. d) Inibio da decomposio da gordura neutra em cidos graxos e preveno da liberao desses cidos

Aos pacientes obesos devem primeiramente ser tratados com restrio calrica, reduo do peso e exerccios fsicos. Nestes indivduos o agente hipoglicemiante constitui apenas suplemento quelas medidas. Sendo protena a insulina no pode ser administrada por via oral, uma vez que sofre digesto por

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proteases no trato gastrointestinal. Por essa razo administra-se injeo de insulina em pacientes diabticos, por exemplo. A insulina pode ser extrada de pncreas de bovinos, sunos, mistura de ambos ou obtida por um dos seguintes mtodos: a) Biossntese usando tecnologia de DNA recombinante.

b) Semi-sntese por converso enzimtica da insulina suna humana As insulinas convencionais so geralmente misturas de insulinas bovinas e sunas e as insulinas purificadas so geralmente de origem somente bovina ou somente suna.

Glucagon - O glucagon encontrado no mercado sob o nome comercial de Glucagon (Lilly). um


polipeptdeo de cadeia reta contendo 29 resduos de aminocidos produzidos pelas clulas da ilhas pancreticas. Sua funo consiste e controlara homeostase da glicose, aminocidos e provavelmente cidos graxos livres. Entretanto, em contraste com a insulina o glucagon apresenta intensa atividade glicogenoltica e gliconeognica. Em outras palavras ele promove a glicogenlise e a gliconeognese hepticas. Estimula a adenilato ciclase para produzir mais AMP cclico, que cataliza vrias reaes enzimticas. Disso resultam aumento das concentraes de glicose plasmtica, efeito relaxante sobre a musculatura lisa e efeito miocrdico inotrpico. Para que o glucagon exera seu efeito antihipoglicemiante so necessrios depsitos hepticos de glicognio. O glucagon comercializado no Brasil extrado do pncreas suno e bovino.

Antibiticos Antibiticos so frmacos mais utilizados comumente no combate infeces, mas nem todos
os antibiticos so peptdeos. Como exemplo de antibiticos peptdeos podemos citar a penicilina (Penicillium notatum) e a gramicidina (Bacillus brevis).

Protenas -As protenas so macromolculas que apresentam um alto peso molecular (acima de 10.000
daltons) e so constitudas por seqncias de aminocidos. O nome protena que dizer primeiro ou o mais importante, so de fato as molculas mais importantes das clulas e constituem mais da metade do peso seco de muitos organismos. As protenas so os instrumentos pelos quais expressa a informao gentica. Assim como existem milhares de genes no ncleo celular, cada um especificando uma caracterstica distintiva do organismo, existem, correspondentemente milhares de diferentes espcies de protenas nas clulas cada uma executando uma funo especfica determinada por seu gen. As propriedades de uma protena so determinadas pelo nmero e espcie de resduos de aminocidos bem como pela seqncia desses compostos na molcula. possvel conhecer a quantidade de resduos de aminocidos que uma protena apresenta a partir do seu peso molecular. Por exemplo, um aminocido possui em mdia um peso molecular de 128 daltons, libera 18 daltons e durante sua ligao peptdica com outro aminocido h a formao de gua que pesa 18 daltons. Assim, um resduo de aminocido pesa em mdia 110 daltons. Desse modo se uma protena apresenta peso molecular de 1200 daltons, ter 1200/110, ou seja, aproximadamente 109 resduos de aminocidos.

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Funes biolgicas das protenas - A seqncia de aminocidos determina as diferentes funes


biolgicas das protenas (tabela1). a) Enzimas Constituem a classe de protenas mais especializada e mais variada. So protenas com propriedade cataltica. b) Protenas transportadoras Ligam e transportam especificamente ons ou molculas no plasma ou ons e outras substncias do meio extra para o meio intracelular. Ex: lipoprotenas, hemoglobina, transportadores de membrana carreadores de glicose (gluts). c) Protenas nutrientes e de reserva As sementes de muitas plantas tm protenas de nutrientes necessrias para o crescimento do embrio da planta. Ex: protenas da semente do trigo, milho e arroz. A ovoalbumina,a principal protena presente na clara do ovo e a casena, a principal protena do leite so outros exemplos de protenas nutrientes (tabela 2).

d) Protenas contrteis ou de movimento Algumas protenas dotam as clulas e organismos com a capacidade de contrair-se, mudar de forma ou mover-se. Ex: actina e miosina que so protenas contrteis presentes nas clulas musculares e tambm em muitas clulas no musculares. Um outro exemplo a tubulina, protena com a qual os microtbulos so constitudos. Os microtbulos so componentes importantes de flagelos e clios capazes de propelir as clulas que os possuem. e) Protenas estruturais Muitas protenas servem como filamentos, cabos ou lminas para dar proteo ou firmeza a estruturas biolgicas. Ex: colgeno que compe a maior parte das cartilagens e tendes que exibe grandes resistncias a tenses; elastina, uma protena capaz de ditender-se em duas dimenses, presente nos ligamentos; queratina, protena insolvel que compe cabelos, unhas e penas das aves; fibrona, protena que compe os fios da teia de aranha e das fibras da seda. f) Protenas de defesa H tambm classes de protenas que defendem os organismos contra a invaso de microrganismos ou contra leses. As imunoglobulinas ou anticorpos dos vertebrados so protenas especializadas sintetizadas por linfcitos, que podem reconhecer, precipitar ou neutralizar bactrias e vrus invasores ou protenas estranhas de outras espcies. Ex: fibrinognio e trombina, que so protenas coaguladoras do sangue prevenindo a perda de sangue quando o sistema vascular injuriado. Venenos de serpentes, toxina de bactrias e protenas txicas de plantas tambm parecem ter funes de defesa. g) Protenas reguladoras Alguma protenas ajudam a regular a atividade celular ou fisiolgica. Ex: hormnios com a insulina, GH, ADH, ocitocina, calcitonina. h) Outras protenas Existem outras protenas cujas funes so de difcil classificao. Ex: monolena, protena de uma planta africana tem sabor intensamente doce. Est sendo estudada como possvel adoante de alimentos, atxica e de baixssimo valor calrico para humanos. O plasma sanguneo de alguns peixes da Antrtida apresenta protenas anticongelantes que protegem o sangue do congelamento. A insero das asas de alguns insetos no trax de alguns insetos feita com a protena resilina, a qual tem propriedades elsticas quase perfeitas.
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Composio de aminocidos - Nem todos os aminocidos participam necessariamente de uma protena,


mas a maioria desses compostos contm na molcula grande proporo de um mesmo aminocido. Alguns aminocidos so encontrados em poucas protenas, porm em concentraes elevadas. o caso da hidroxiprolina, pouco distribuda na natureza, mas constituindo ao redor de 12% da estrutura do colgeno. De fato os 20 aminocidos nunca ocorrem em quantidades iguais nas protenas. Em um dado tipo de protena alguns aminocidos podem ocorrer uma nica vez por molcula enquanto que outros ocorrem de forma numerosa.

Classificao das protenas de acordo com a sua forma - As protenas tambm podem ser divididas
em duas grandes classes com base em sua forma e certas caractersticas fsicas. Nas protenas globulares a cadeia ou cadeias polipeptdica (as) est (o) fortemente enroladas em uma forma globular ou esfrica. As protenas globulares usualmente so solveis em sistemas aquosos e se difundem facilmente e por essa razo a maioria tem funo mvel ou dinmica. Ex: enzimas, hemoglobina, anticorpos, protenas de reserva nutritiva.

Formas das protenas

As protenas fibrosas so molculas insolveis em gua, compridas e filamentosas, com a cadeia polipeptdica estendida ao longo de um eixo ao invs de enrolada em forma globular. A maioria das protenas fibrosas tem funo estrutural ou protetora. Ex: queratina da pele, fibrona da seda, colgeno dos tendes, actina e miosina.

Principais grupos de protenas - As protenas podem ainda ser classificadas em: protenas simples,
protenas conjugadas e protenas derivadas, sendo que somente os dois primeiros grupos podem ser encontrados na natureza. Protenas simples So substncias das quais por hidrlise total resultam aminocidos como os nicos produtos. As protenas simples so classificadas de acordo com sua solubilidade em: Albuminas A propriedade que distingue a albumina de todas as outras protenas a sua solubilidade em

gua; so tambm solveis em solues fracamente cidas ou alcalinas; coagulam pela ao do calor. Ex. de albuminas : clara do ovo (ovoalbumina), do leite (lactoalbumina) e de ervilhas (legumitina). Globulinas Glutetinas So praticamente insolveis em gua. Ex: legumina (de ervilhas). So protenas encontradas somente em vegetais. So insolveis em gua e solventes neutros, mas

solveis em solues diludas de cidos e bases. Ex. do trigo (glutetinina).

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Estrutura das protenas - A estrutura das protenas estudada em quatro nveis hierrquicos: primria
(Figura 12), secundria, terciria e quaternria.

Estrutura primria a estrutura primria de uma protena se refere seqncia dos aminocidos na sua cadeia peptdica, sem levar em considerao outros tipos de ligaes como interaes causadas por foras de Van der Walls, ou pontes de hidrognio. A estrutura primria a nica que pode ser determinada por meio de reaes qumicas, mas as dificuldades apresentadas por essas reaes fizeram com que at hoje, apenas algumas protenas tivesse sua estrutura primria completamente elucidada. AS FORAS QUE MANTM A ESTRUTURA PRIMRIA SO AS LIGAES
COVALENTES ENTRE OS GRUPAMENTOS AMINA E CARBOXILA DOS AMINOCIDOS (ligaes peptdicas).

Estrutura secundria Na estrutura secundria as cadeias peptdicas enrolam sobre si podendo buscando conformaes de menor energia livre. Desse modo as protenas podem adquirir duas conformaes
Figura 12 estrutura protica primria. Fonte: Marieb, E.N Human anatomy & Physiology, Fouth edition, Benjamin Cummings, 1998.

bsicas (Figura 13 letras B e C). A primeira estrutura a ser a ser descrita a -hlice um tipo de conformao na qual todos os grupamentos NH das ligaes peptdicas esto unidos aos grupos C=O por meio de pontes de hidrognio. A -hlice tem 3,6 aminocidos por volta.

A ala fechada que inclui o nitrognio do N-H, a cadeia peptdica, o oxignio da carbonila e o hidrognio da ponte contem 13 tomos. E por essa razo a -hlice conhecida como hlice 3,613. O passo da hlice apresenta cerca de 1,5 angstrons. At 80% de uma protena pode ser em -hlice. AS FORAS QUE MATM A
ESTRUTURA SECUNDRIA SO: AS FORAS QUE ESTO PRESENTES NA ESTRUTURA PRIMRIA JUNTAMENTE COM INTERAES ELETROSTTICAS.

B C

Figura 13 -Estruturas primria (A) e secundria (B e C ). Fonte: Marieb, E.N Human anatomy & Physiology, Fouth edition, Benjamin Cummings, 1998.
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Conformao em folha -pregueada

A segunda classe de estrutura secundria a ser descrita foi chamada

de folha -pregueada (figura 3 letra C). Neste caso grupamentos N-H e C=O de aminocidos bem distantes na cadeia peptdica, ou mesmo em uma diferente cadeia peptdica, formam pontes de hidrognio.
AS FORAS QUE MANTM A ESTRUTURA SECUNDRIA SO LIGAES NO COVALENTES TAIS COMO AS PONTES DE HIDROGNIO, LIGAES INICAS OU ELETROSTTICAS QUE SO O RESULTADO DA FORA DE ATRAO ENTRE GRUPOS IONIZADOS DE CARGAS CONTRRIAS.

Estrutura terciria A estrutura terciria de uma protena refere-se ao arranjo tridimensional dos tomos da molcula no espao. Ela conseqente de dobras e enovelamentos que as cadeias polipeptdicas sofrem, resultando em uma estrutura complexa e mais compacta para as protenas (Figura 14). A ESTABILIZAO
DESSA ESTRUTURA ATRIBUDA A LIGAES COVALENTES COMO, POR EXEMPLO, PONTES DISSULFETO S-S QUE SE ESTABELECEM ENTRE OS GRUPOS S-H DE PROTENAS RICAS EM AMINOCIDOS CONTENDO ENXOFRE EM SUA COMPOSIO (CISTENA, POR EXEMPLO) E, MESMO AS LIGAES INICAS CAUSADAS PELA ATRAO QUE EXERCEM ENTRE SI, CADEIAS LATERAIS CARREGADAS POSITIVA E NEGATIVAMENTE E INTERAES ELETROSTTICAS .

Estrutura

quaternria

estrutura

quaternria a disposio de subunidades proticas em protenas complexas formadas por B A duas ou mais dessas subunidades (Figura 14).
AS FORAS QUE ATUAM NA ESTRUTURA QUATERNRIA SO TODAS AS FORAS PRESENTES NAS ESTRUTURAS ANTERIORES MAIS AS FORAS DE VAN DE WALLS, ATRAES ELETROSTTICAS. Por exemplo, a

molcula de hemoglobina composta por quatro -hlice cadeias polipeptdicas, duas delas denominadas e duas . A separao e a associao das subunidades suscetvel de ocorrer espontaneamente. A molcula de
Figura 14 Estruturas proticas secundria (A) e terciria (B). Note que a estrutura terceria apresenta em s a estrutura secundria. Fonte: Marieb, E.N Human anatomy & Physiology, Fouth edition, Benjamin Cummings, 1998.

hemoglobina ode dissocia-se por ao da uria, em duas metades (duas e duas ). Quando se retira a uria do meio, as metades se associam formando molculas funcionais completas. Na estrutura quaternria das protenas esto envolvidas as mesmas ligaes presentes nas estruturas secundria e terciria com exceo das ligaes covalentes.

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Desnaturao protica - Quando uma soluo de protenas, como a albumina do ovo, aquecida
lentamente at 60 ou 70 C, a mesma torna-se gradualmente leitosa e logo forma um cogulo. Isto muito comum e ocorre quando ferve-se um ovo na gua. A clara do ovo, que contm a albumina, coagula pelo aquecimento em um slido branco. Depois que o calor coagulou a clara ela no sofre redissoluo pelo resfriamento nem forma outra vez uma soluo lmpida como a original. Portanto, o aquecimento transformou a ovoalbumina e, aparentemente, de forma irreversvel. Esse efeito do aquecimento ocorre virtualmente com todas as protenas globulares, no importando seu tamanho ou funo biolgica, embora a temperatura exata para provoca-lo possa variar. A mudana provocada pelo calor em uma protena conhecida como desnaturao. Uma protena em seu estado natural chamada de protena nativa; depois da mudana ou transformao por alguma agente desnaturante chamada de protena desnaturada (Figura 15). H uma segunda e importante conseqncia da desnaturao de uma protena, ela, quase sempre, perde sua atividade biolgica caracterstica.

Agentes desnaturantes - A desnaturao de protenas pode ser provocada no apenas pelo calor, mas
tambm por valores extremos de pH; por solventes orgnicos miscveis com a gua (etanol e acetona); por solutos como a uria; pela exposio da protena a detergentes ou simplesmente pela agitao vigorosa de uma soluo protica at a formao de espuma. Cada uma das formas citadas como causa de desnaturao pode ser considerada como tratamento suave. De fato, testes mostram que quando as protenas sofrem desnaturao, no ocorre rompimento das ligaes covalentes do esqueleto da cadeia polipeptdica. Assim a seqncia de aminocidos caracterstica da protena conserva-se ainda intacta depois da desnaturao. Contudo, a atividade biolgica da maioria das protenas perdida quando ocorre desnaturao. Desse modo obrigatrio concluir que a atividade biolgica das protenas depende de algo mais alm da simples seqncia de aminocidos. Isto verdadeiro uma vez que as protenas tm nveis estruturais acima e alm da estrutura primria. Em resumo as cadeias polipetdicas da protena nativa dobram-se sucessivas vezes sobre si mesmas adquirindo uma configurao tridimensional caracterstica para cada tipo de protena. Quando uma protena desnaturada esse arranjo tridimensional das cadeias polipeptdicas rompido e ela se desenrola em estruturas diversas, adquiridas ao acaso, sem, entretanto sofrer qualquer dano no esqueleto da estrutura covalente.

Figura 15 - Representao da perda estrutural sofrida pela protena quando submetida a agentes desnaturante. Em A forma nativa e em B, forma desnaturada.

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