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CKMB

FINALIDADE Sistema para determinao de CKMB no soro ou plasma. Somente para uso diagnstico in vitro. PRINCPIO A enzima CK total um dmero formado pela unio de 2 monmeros ou subunidades da CK. A juno dos dois monmeros CKM e CKB geram a formao de 3 dmeros de CK: CKBB, CKMM e CKMB. A CKBB encontrada no crebro sendo, praticamente, inexistente no sangue perifrico. A CKMM especfica da musculatura estriada do organismo, (msculos perifricos e corao) predominando nos msculos perifricos. A CKMB encontrada na musculatura cardaca. O reagente Doles para CK-MB contm um anticorpo anti-monmero CKM, que bloqueia as fraes MM de CKM e frao M de CKMB. Resta livre o monmero CK-B. A atividade da CK-B determinada pelas seguintes reaes:

BIOQUMICA CLNICA

METODOLOGIA Cintica UV Imunoinibio. REAGENTES Reagente 1: Imidazol pH 6,7 125mmol/L, D-Glicose 25mmol/L, N-Acetyl-LCysteine 25mmol/L, Acetato de Magnsio 12.5mmol/L, NADP 2.52mmol/L, EDTA 2.02mmol/L e Hexokinase >/=6800U/L. Reagente 2: ADP 15.2mmol/L, A M P 2 5 m m o l / L , d i -A d e n o s i n e - 5 pentaphosphate 103mmol/L, Glucose-6phosphate dehydrogenase >/= 8800U/L, Creatine phosphate 250mmol/L. APRESENTAO CK-MB 30 Reagente 1 Reagente 2 CK-MB 50 Reagente 1 Reagente 2

15 x 1,80mL 15 x 0,45mL 5 x 8mL 5 x 2mL

NMERO DE TESTES CK-MB 30 Manual Automao (*)

30 testes 150 testes

CK-MB 50 Manual 50 testes 250 testes 1. Fosfocreatina + ADP + CK-B Creatina Automao (*) + ATP 2. ATP + Glicose + HK ADP + Glicose- (*) A quantidade de testes na automao varivel de acordo com 6-Fosfato 3. Glicose-6-Fosfato + NADP + Glicose-6- o equipamento. Fosfato Desidrogenase 6-Fosfogluconato Protocolos de automao encontramse disponveis no site Doles ou + NADPH + H atravs do Servio de Atendimento ao Consumidor. A velocidade de formao de NADPH determinada fotometricamente, sendo EQUIPAMENTOS E MATERIAIS diretamente proporcional concentrao NECESSRIOS NO FORNECIDOS de CK-B na amostra ensaiada, at os Fotmetro com leituras em 340nm, limites de linearidade. cubeta termostatizvel (37C), com Existindo em quantidade equimoleculares, 10mm de passagem de luz e banda o valor CKB equivale a 50% de CKMB. espectral de 8nm ou menos; A atividade enzimtica encontrada Pipetas graduadas; multiplicada por 2 representa a atividade Pipeta semiautomtica; Ponteiras descartveis; de CKMB.
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ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE DOS REAGENTES Reagente 1: armazenar temperatura de 2-8C. Estvel at a data de vencimento indicada no rtulo do frasco, obedecidas as condies de armazenamento. Reagente 2: armazenar temperatura de 2-8C. Estvel at a data de vencimento indicada no rtulo do frasco, obedecidas as condies de armazenamento. Reagente de Trabalho: armazenar protegido da luz temperatura de 2-8C. Estvel por 2 semanas, obedecidas as condies de armazenamento.

Realizao do teste: 1.Transferir 1mL do reagente de trabalho para um tubo de ensaio e deix-lo por alguns minutos temperatura de 37C. 2.Adicionar 50mL da amostra ao reagente de trabalho e homogeneizar com ligeira agitao. 3.Transferir a soluo para cubeta termostatizada a 37C (por aspirao em equipamentos dotados de cubeta de fluxo), comprimento de onda de 340nm. 4.Esperar 180 segundos. 5.Fazer a leitura inicial (A inicial), disparando simultaneamente o cronmetro. Anotar o achado. 6.Repetir a leitura (A final) 300 segundos CUIDADOS E PRECAUES COM O USO aps a primeira leitura. DOS REAGENTES 7.Anotar o achado. O r e a g e n t e s s o m e n t e p a ra u s o diagnstico in vitro. Seu manuseio deve CLCULO ser cuidadoso, evitando-se contato com pele e mucosas. Em caso de contaminao CK-MB U/L = (A final - A inicial) x 1333 acidental, lavar a parte afetada em gua corrente. O descarte do material utilizado Exemplo: = 0,262 dever ser feito obedecendo-se os critrios Leitura inicial (A inicial) = 0,335 de biossegurana estabelecidos pelo Leitura final (A final) laboratrio, de acordo com as normas CK-MB U/L =(0,335 - 0,262) x 1333 = 97 locais, estaduais ou federais. DETERMINAO DO FATOR
Observar a simbologia constante nos rtulos do produto:

Irritante

Fator =

1 x 6,3

1,05 x 0,05

1 x 1000 x 2 = 1333 5

AMOSTRA Soro livre de hemlise ou plasma (heparina). A enzima permanece estvel no soro por 7 dias, se mantida temperatura de 2-8C e protegida da luz. Todas as amostras biolgicas devem ser consideradas como potencialmente infectantes.

6,3 = absoro molar de NADPH+ (um mmol de NADPH+ em um mililitro de soluo, cubeta 10mm dimetro interno, 340nm tem uma absorvncia de 6,3). 1,05 = volume total da reao em mL 0,05 = volume de soro em mL 5 = fator de correo de D5 para D1 1000 = fator / transformao de mililitro PROCEDIMENTO TCNICO em litro. Preparo do Reagente de Trabalho: = fator de converso de CKB em Incorporar o reagente 2 ao frasco do 2 CKMB. reagente 1.
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LINEARIDADE A reao linear at uma concentrao de 500 U/L. Sendo a concentrao de CK-MB na amostra > 500 U/L diluir a amostra com soluo fisiolgica e repetir o teste. Multiplicar o valor encontrado pelo fator de diluio. LIMITAES DO SISTEMA Para se obter timo desempenho do sistema, necessrio que o procedimento tcnico seja rigorosamente seguido conforme instrues de uso. Alteraes no procedimento tcnico podem levar a resultados errneos.

do CK-MB possuem relao direta com a rea infartada. Outras situaes que no o infarto o miocrdio, que proporcionam o aumento da CK-MB, dentre estes podemos citar: miocardites, cardiomiopatias, cirurgias cardacas. CARACTERSTICAS DE DESEMPENHO Foram realizados em uma populao com teor varivel do analito. O mtodo foi comparado com um kit de marca comercial de mesma metodologia. Foram obtidos os seguintes resultados: Coeficiente de correlao (r) = 0,99 E q u a o d e Re g r e s s o L i n e a r = y=1,0183x + 0,308

CONTROLE DA QUALIDADE DO Repetitividade SISTEMA Amostra 1 1.A limpeza e a secagem adequada do material a ser utilizado so de fundamental Concentrao (U/L) 25 importncia para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados Coeficiente de variao (%) 9,8 corretos. 2.As pipetagens devem ser precisas. Reprodutibilidade: 3.O uso de soro controle de referncia deve Amostra 1 ser uma prtica rotineira do laboratrio. Recomenda-se utilizar um soro controle Concentrao (U/L) 25 com valor na faixa de normalidade e outro Coeficiente de variao (%) 10,4 soro controle de valor elevado. VALORES DE REFERNCIA recomendado que cada laboratrio estabelea sua prpria faixa de valores de referncia na populao atendida. Como orientao, sugerimos os seguintes valores: CK-MB (37C):0 -24U/L SIGNIFICADO CLNICO A determinao da isoenzima CK-MB um dos parmetros de referncia para determinao da leso miocrdica. O aumento inicial ocorre entre 3 a 8 horas aps o incio dos sintomas, com pice entre 12 a 24 horas e com retorno a normalidade entre 48 e 72horas. Os valores encontrados na determinao
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Amostra 2

74 2,6

Amostra 2

66 4,6

Especificidade: O mtodo especfico para determinao de CK-MB. A presena de anti-corpo policlonal CK-M suficiente para inibir at 2000U/L de CK-MM. Sensibilidade: O mtodo possui ainda capacidade de deteco situado no intervalo entre o limite de quantificao e o limite de linearidade: 1 a 500U/L. Substncias interferentes: No utilizar amostras hemolisadas. Nenhuma interferncia foi observada em amostras com teor de glicose de at 700mg/dL, Hemoglobina at 600mg/dL e Triglicrides at 700mg/dL. Ver limitaes do sistema.
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BIBLIOGRAFIA CONSULTADA 1. Abbot B et al. Creatinine kinase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984: 1112-116. 2. Gerhardt W et al. Creatine kinase B-Subunit activity in serum after immunohinhibition of MSubunit activity. Clin Chem 1979;(25/7): 1274-1280. 3. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995. 4. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001. 5. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999. 6. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995. 7. Mathieu M. et coll. Recommandation pour la mesure de la concentration catalytique de la cratinine kinase dans la srum humain. Ann. Biol. Clin.,40, (1482), 87. 8. Doles: Dados de Arquivo. TERMOS E CONDIES DE GARANTIA DA QUALIDADE DO PRODUTO As garantias do fabricante ao consumidor seguem estritamente as relacionadas na Lei no 8.078, de 11 de setembro de 1.990 - Cdigo de Defesa do Consumidor. Os reagentes que compem este sistema para diagnstico so garantidos na sua performance, reprodutibilidade e qualidade at a data de vencimento. Todos os produtos que apresentarem problemas tcnicos comprovados sero substitudos, sem nus para o consumidor. Doles Reagentes e Equipamentos para Laboratrios Ltda.

CNPJ: 01.085.513/0001-05 Rodovia BR 153, Km 493, Conjunto Palmares CEP: 74.775-027 Goinia - GO - Brasil e-mail: doles@doles.com.br www.doles.com.br M.S.: n 10231810103 Reviso: 02 (08/2010)

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