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GLUCOX 500

FINALIDADE Sistema enzimtico para determinao da glicose no soro, plasma e demais lquidos biolgicos. Somente para uso diagnstico in vitro.

BIOQUMICA CLNICA Kito Manual 1000 testes (20L amostra/2mL Reag. de Cor) 2000 testes (10L amostra/1mL Reag. de Cor) Automao 4800 testes Protocolos de automao encontram-se disponveis no site Doles ou atravs do Servio de Atendimento ao Consumidor. EQUIPAMENTOS E MATERIAIS NECESSRIOS NO FORNECIDOS Espectrofotmetro capaz de medir a absorvncia em 510nm fotocolormetro com filtro verde (490-540nm). Tubos de ensaio. Pipetas graduadas. Pipeta semiautomtica 20L. Frasco mbar com capacidade para 250mL. Banho maria (37 0C). Cronmetro. Ponteiras descartveis. gua deionizada ou destilada. Balo volumtrico de 250 mL. ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE DOS REAGENTES Tampo/enzimas: armazenar temperatura de 2-80C. Estvel at a data de vencimento indicada no rtulo do frasco, se obedecidas as condies de armazenamento. A soluo tampo/enzimas aps o preparo p e r m a n e c e e s t v e l p o r 6 m e s e s s o b refrigerao (2-80C). S o l u o p a d r o 1 0 0 m g / dL : a r m a z e n a r t e m p e r a t u r a d e 2 -8 0 C . E s t v e l a t a d a t a d e vencimento indicada no rtulo do frasco, se obedecidas as condies de armazenamento. CUIDADOS E PRECAUES COM O USO DOS REAGENTES Todos os reagentes so somente para uso diagnstico in vitro . Seu manuseio deve ser cuidadoso, evitandose contato com pele e mucosas. Em caso de contaminao acidental, lavar a parte afetada em gua corrente. O descarte do material utilizado dever s e r f e i t o o b e d e c e n d o - s e ao s c r i t r i o s d e biossegurana estabelecidos pelo laboratrio, de acordo com as normas locais, estaduais ou federais. Observar ainda a simbologia constante nos rtulos do produto: AMOSTRA Soro, plasma, lquor e outros lquidos biolgicos. A amostra dever ser colhida com o paciente em jejum, utilizando-se anticoagulante contendo fluoreto ( Anticoagulante Glicose Doles ). A separao do plasma dever ocorrer at duas horas aps a coleta. No plasma refrigerado (2-80C), a glicose permanece estvel por trs dias. Na ausncia de fluoreto, a glicose consumida pelo fenmeno da gliclise, a um ritmo de 5% por hora. Todas as amostras biolgicas devem ser consideradas como potencialmente infectantes.
Irritante

PRINCPIO Ao adicionar-se glicose em uma soluo tampo de fosfatos em pH 7,4, contendo Glicose Oxidase, Peroxidase, 4-Aminoantipirina (4-AAP) e pHidroxibenzoato, processam-se as seguintes reaes:
Glicose + O 2 + H2O 2H2O2 + 4AAP GOD cido Glucnico + H2O2 4-Antipirilquinomina + 4 H 2O

O produto formado pela oxidao de 4-Aminoantipirina (4- Antipirilquinimina) de colorao avermelhada e sua intensidade, diretamente proporcional concentrao de glicose na soluo. A cor avermelhada, formada pela reao, medida em espectrofotmetro ou fotocolormetro, com absoro mxima em 510nm, ou filtro verde. PARTICULARIDADES DO SISTEMA A dosagem da glicose sangunea o teste bioqumico mais realizado em laboratrio. Glucox um mtodo enzimtico colorimtrico, onde se usa uma enzima especfica para glicose: Glicose Oxidase. Sua simplicidade torna-o mtodo eleito para rotina de laboratrios, sendo ainda aplicvel aos diversos sistemas de automao. O reagente Doles para dosagem enzimtica da glicose apresenta-se em p. Sua reconstituio feita pela adio do contedo de um frasco ao volume especificado de gua. A omisso do fenol (produto custico) no reagente estende por longos perodos a sua estabilidade. METODOLOGIA Glicose Oxidase.

POD

REAGENTES Tampo/enzimas: cada frasco contm, sob forma de p, 3,8g em mistura homognea dos seguintes itens: tampo fosfato, 4-Aminoantipirina, p-Hidroxibenzoato e as seguintes enzimas: Glicose Oxidase (3 KU) e Peroxidase (0,3KU). Soluo padro 100mg/dL: soluo aquosa contendo 100mg/dL de glicose. Ref. A Tampo/enzimas Soluo padro 100mg/dL Kito Tampo/enzimas Soluo padro 100mg/dL APRESENTAO

2 x 3,8g 1 x 3mL 8 x 3,8g 1 x 3mL

NMERO DE TESTES Ref. A Manual 250 testes (20L amostra/2mL Reag. de Cor) 500 testes (10L amostra/1mL Reag. de Cor) Automao 1200 testes

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PROCEDIMENTO TCNICO Seguir rigorosamente as instrues para o preparo do reagente de cor de uso. No colocar gua no frasco contendo o tampo enzimas. Preparo do reagente de cor para uso: Transferir todo o contedo de um frasco de tampo/ enzimas para um balo volumtrico de 250mL e completar o volume com gua destilada/ deionizada. Agitar levemente por inverso at a completa dissoluo. O reagente de cor uso, aps preparo, apresenta a seguinte formulao: tampo fosfato 0,1M, pH 7,4, 4-Aminoantipirina 1,25mmol, pHidroxibenzoato 10mmol com um mnimo de 12KU de Glicose Oxidase e 1,2KU de Peroxidase por litro. A soluo permanece estvel por 6 meses sob refrigerao (2-80C). Rotular 3 tubos de ensaio com B (branco), T (teste) e P (padro). Proceder como segue: Reagente de cor B T P

Amostra

Soluo padro

2,0mL -

2,0mL 20L

2,0mL 20 L -

A curva de calibrao demonstra a linearidade da reao at uma determinada concentrao, na qual pode ser determinado um fator de calibrao (F), de acordo com a Lei de Beer. A reao linear at 600mg/dL (ver curva acima). Obtendo-se valores mais elevaddos, dilui-se a amostra com soluo fisiolgica e procede-se nova dosagem. Multiplicar o valor encontrado pelo fator de diluio. O kit de Glucox 500 Doles possui padro no intervalo de linearidade da metodologia de Glicose Oxidase. O laboratrio deve realizar o ensaio com o padro que acompanha o kit e calcular seu fator de calibrao (F), a exemplo do demonstrado nos clculos abaixo. O fator deve ser refeito periodicamente e a cada lote do produto. Os padres utilizados na montagem da curva de calibrao foram preparados com produto de referncia D-Glucose Standard Reference Material procedncia NACIONAL INSTITUTE of 917a STANDARDS & TECHNOLOGY (NIST). CLCULOS Glicose (mg/dL) = Exemplo: Leitura Padro: 0,324 Teste: 0,280 0,280 Glicose (mg/dL) = 0,324 Como a reao corada segue estritamente a lei de Beer, basta que se determine um fator (F) para clculo dos resultados. x 100 = 86 absorvncia teste absorvncia padro x 100

Misturar por agitao e incubar por 10 minutos em banho-maria, a 370C. Retirar do banho-maria e fazer leitura das absorvncias em espectrofotmetro ou fotocolormetro, em 510nm ou filtro verde (490540), zerando o aparelho com o branco. A cor final da reao permanece estvel por 20 minutos, temperatura ambiente (20 - 30oC). CURVA DE CALIBRAO
2 .50 0

Padro Absorvncia
2 .00 0

Conc.
(mg/dL)

100 Fator (F)= absorvncia padro Glicose mg/dL= absorvncia teste x F Para obteno do fator, recomenda-se dosar em triplicata o padro, ler as absorvncias e tirar a mdia aritmtica das mesmas. Exemplo: Leituras: Padro: 0,323; 0325; 0,324 0,323 + 0,325 + 0,324 Mdia aritmtica = 3 100 Fator (F)= 0,324 Leitura do teste: 0,280 Glicose (mg/dL) = 0,280 x 308 = 86 = 308 = 0,324

absorvncia

1 .50 0 1 .00 0 0 .50 0 0 .00 0 0

concentrao (mg/dL)

2 00

4 00

6 00

8 00

1 2 3 4 5 6 7

0.000 0.161 0.324 0.805 1.300 1.940 2.200

0 50 100 250 400 600 800

Obs.: No utilizar esta curva para determinar o resultado de seu ensaio.

A curva de calibrao a representao grfica entre os valores das absorvncias com os valores das concentraes de um conjunto de solues padro. So necessrios trs passos para confeccion-la: (1) preparo das solues padro; (2) medio dos valores de absorvncia das solues padro, de acordo com o especificado no procedimento tcnico da presente instruo de uso, e (3) montagem de um grfico em papel especial, linear, onde so relacionados os valores de absorvncia com os de , conforem demonstrado na figura acima. As dosagens para montagem da curva foram feitas em um espectrofotmetro Ultrospec III, Pharmacia Biotec, comprimento de onde de 510nm e cubetas com passagem de luz de 10mm.

EXPRESSO DOS RESULTADOS EM UNIDADES S.I. Glicose (mmol/L) = Glicose (mg/dL) x 0,0555

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CONTROLE DA QUALIDADE DO SISTEMA 1. A limpeza e a secagem adequada do material a ser utilizado so de fundamental importncia para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. 2. A gua utilizada na limpeza do material, no preparo dos reagentes e na dosagem, deve ser de boa qualidade. 3. Colunas deionizadoras saturadas liberam ons diversos, aminas e agentes oxidantes, que deterioram os reagentes. 4. As pipetagens devem ser precisas. 5. O nvel da gua do banho maria deve ser superior ao nvel dos reagentes nos tubos de ensaio. A temperatura (37 o C) deve ser rigorosamente observada. 6. O uso de soro controle de referncia deve ser uma prtica rotineira do laboratrio. Recomenda-se utilizar um soro controle com valor na faixa de normalidade (soro controle N - Doles) e outro soro controle de valor elevado (soro controle P - Doles). VALORES DE REFERNCIA recomendado que cada laboratrio estabelea sua prpria faixa de valores de referncia na populao atendida. Como orientao, sugerimos os seguintes valores: Plasma: (jejum de 8 horas) 70 - 99 mg/dL Lquor: 40 - 70 mg/dL

LIMITAES DO SISTEMA Para se obter timo desempenho do sistema, necessrio que o procedimento tcnico seja rigorosamente seguido conforme instrues de uso. Qualquer alterao poder levar a resultados errneos. A cafena pode elevar os nveis de glicose. Algumas drogas como: antidepressivos tricclicos, bloqueadores beta adrenrgicos, corticosteroides, diurticos, estrgenos, glucagon, isoniazida, fenotiazinas, fenitona e salicilatos, podem elevar o nvel de glicose. Algumas drogas como: acetominofeno, lcool, esterides anabolizantes, insulina e inibidores da MAO, podem reduzir os nveis de glicose. Quando detectada hiperglicemia, recomenda-se investigao mais criteriosa, atravs de: dosagem de hemoglobina glicosilada, glicemia ps-prandial e, a critrio mdico, prova de tolerncia oral glicose.

Deficincia de insulina (insulino dependentes). H destruio de mais de 90% das clulas b das ilhotas de Langherans. Presena de anticorpos anti-insulina e antiilhotas de Langherans. Viroses e toxinas qumicas so os provveis agentes causais. Ocorre geralmente em jovens (abaixo dos 30 anos) e representa, aproximadamente, 10% dos diabticos. As complicaes so freqentes. Diabetes mellitus tipo 2 (NIDDM- diabetes mellitus no dependente de insulina). Nveis variados de insulina. Ausncia de anticorpos antiinsulina e anti-ilhotas. Em geral os pacientes so obesos, com a presena de componente familiar. Incidncia maior a partir dos 40 anos. Considere-se ainda: Diabetes mellitus secundria: sndrome diabtica secundria pancreatite, sndrome de Cushing, feocromocitoma, insuficincia heptica grave, terapia por corticoides, etc.. Diabetes mellitus gestacional: diabetes que se exterioriza durante a gravidez. Tolerncia de glicose alterada: glicemia basal entre 110 e 140 mg/dL, com alteraes de curva glicmica, ainda no conclusiva, de diabetes. Grupos de risco: pacientes com hiperglicemia transitria, espontnea ou secundria a estmulos. Irmo monozigtico de portador de diabetes tipo 2. Pessoas com histrico familiar de diabetes. Obesos e membros de grupos raciais ou tnicos com alta incidncia de diabetes. A hipoglicemia tem como causas principais: o excesso de insulina pancretica, hipotiroidismo, insuficincia supra renal, alcoolismo, uso no controlado de hipoglicemiantes orais, sendo ainda encontrada nas insuficincias hepticas graves.

CARACTERSTICAS DE DESEMPENHO Foram realizados 41 testes em amostras cujo teor de glicose se situava no intervalo de 65 a 486mg/dL. Esses ensaios foram realizados em paralelo com uma metodologia de referncia (glicose oxidase). A comparao da Glucox 500 (Y) com a metodologia mencionada (X) deu origem seguinte equao de regresso linear: Y= 1,02X - 0,46, sendo o coeficiente de correlao 0,99. Adio de glicose a 10 soros com nveis de glicemia oscilando entre 50 e 360mg/dL, mostraram ndice de recuperao entre 97,5 e 102%. O erro da mdia foi de 0,76%. Repetitividade: foram realizadas 20 dosagens sucessivas, com 3 amostras, obtendo-se os seguintes resultados:
Amostra 1 Amostra 2 Amostra 3

Informaes sobre os critrios para diagnstico de diabetes podem ser obtidas no site da Sociedade Brasileira de Diabetes: www.diabetes.org.br. SIGNIFICADO CLNICO A dosagem da glicose sangunea o teste bioqumico mais realizado em laboratrio. Suas alteraes no so simples marcadores de doena, mas o reflexo de profundas alteraes no meio ambiente biolgico. A quantificao da glicose no sangue reflete apenas o ponto de equilbrio momentneo entre sua produo, utilizao e estocagem. O Diabetes representa um grupo de distrbios metablicos onde a glicose, mal utilizada, resulta em hiperglicemia. Os nmeros que indicam a incidncia de diabetes no Brasil so desconhecidos, mas admite-se que 5% da nossa populao seja portadora de diabetes em seus diversos nveis. Atualmente, distingue-se no diabetes duas variedades principais: Diabetes mellitus tipo 1 (IDDM- diabetes mellitus, insulino dependente).

Concentrao (mg/dL) Desvio padro Coeficiente de variao (%)

42,41 0,63 1,49

115,31 0,90 0,78

242,91 2,54 1,05

Reprodutibilidade: foram realizadas 20 dosagens, durante 20 dias consecutivos, obtendo-se os seguintes resultados:
Amostra 1 Amostra 2 Amostra 3

Concentrao (mg/dL) Desvio padro Coeficiente de variao (%)

47,38 1,49 3,14

118,59 1,49 1,25

259,05 3,65 1,41

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Especificidade: o mtodo da glicose oxidase especfico para glicose, no reagindo com outros acares como lactose, galactose, frutose ou com substncias redutoras provenientes do metabolismo de medicamentos. Sensibilidade: a absorvncia encontrada, de 0,0035, corresponde a 1mg/dL de concentrao de glicose, quando medida em espectrofotmetro, em 510nm. A sensibilidade do sistema est diretamente relacionada com a do aparelho utilizado no laboratrio. Diluio da matriz: estudos sucessivos de diluio da matriz mostraram que no h interferncia na sensibilidade diagnstica da presente metodologia de glicose oxidase. Substncias interferentes: soros lipmicos, hemolizados e ictricos podem causar resultados falsamente elevados. Nesses casos, recomendado que seja feito um branco da amostra (2,0mL do reagente de cor + 20L do soro, leitura imediata). O uso de soros pode provocar valores falsamente diminudos de glicose, quando no so separados em tempo hbil. Tal fato deve-se presena de enzimas glicolticas, degradantes da glicose. Para evitar tal ocorrncia, recomenda-se a utilizao de plasma colhido com fluoreto, o que ir impedir o fenmeno da gliclise. Certas drogas e outras substncias podem afetar os valores da glicose (ver em limitaes do sistema). Para controle de interferncias, recomendado que o paciente seja questionado quanto ao uso de medicamentos. BIBLIOGRAFIA CONSULTADA Trinder, P.: Ann. clin. biochem., 6-24, 1969. D. Barham e P. Trinder: Analyst 97, 1972. Jacobs D.S.: Kasten B.L.: Dematt W.R., Walfson W.L: Labortory test handbook, 2a ed, 113, 1990. Pagana, K.D.: Mosbys diagnostic and laboratory test reference, 379 - 381, 1992 Cockayne, Susan: Clinical chemistry: Concepts and applications, 156-158, 1993. Tibrcio, H.M.: Controle interno da qualidade analtica, 1aed. maro/1995 Henry, John Bernard: Clinical diagnosis and management by laboratory methods, 19a ed, 194-207,423-426,1996. Doles: dados de arquivo TERMOS E CONDIES DE GARANTIA DA QUALIDADE DO PRODUTO As garantias do fabricante ao consumidor seguem estritamente as relacionadas na Lei no 8.078, de 11 de setembro de 1.990 - Cdigo de Defesa do Consumidor. Todos os reagentes que compem este sistema para diagnstico so garantidos na sua performance, reprodutibilidade e qualidade at a data de vencimento dos mesmos, se obedecidas as condies abaixo: 1.O usurio do sistema seguir, rigorosamente, o procedimento tcnico. 2.As condies de armazenamento devero estar de acordo com o estabelecido nas instrues de uso. 3.Os materiais necessrios e no fornecidos devero estar em boas condies tcnicas.

Todos os produtos que apresentarem problemas tcnicos comprovados sero substitudos, sem nus para o consumidor. Elaborado e fabricado por: Doles Reagentes e Equipamentos para Laboratrios Ltda. CNPJ: 01.085.513/0001-05 Rodovia BR 153, Km 1273, Lt.07, Chcara Retiro Caixa Postal 1051 CEP: 74001-970 Goinia - GO - Brasil e-mail: doles@doles.com.br M.S.: no 10231810011 Reviso: 13
(06/2009)

Sistema da Qualidade certificado desde 1999

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