Finalidade .

Princpio .
Caractersticas do sistema .
Metodologia .
Reagentes
1. -
2. -
3. -
Sistema para a determinao da Hemoglobina Glicada
emamostra de sangue.
A resina de troca inica, carregada negativamente, exibe
uma afinidade por molculas com carga positiva. Em fora inica e pH
selecionados, a hemoglobina glicada (Hb-G) tem carga positiva menor
que a hemoglobina A e se liga mais fracamente resina. A aplicao do
tampo Hb-Rpida (n 1) promove a eluio da hemoglobina glicada,
ficando as outras hemoglobinas retidas na resina.
A medida espectrofotomtrica do eluato (Hb-G) e da hemoglobina total
(Hb-total) permite o clculo da percentagemde Hb-Gna amostra.
O sistema Hemoglobina Glicada
Labtest utiliza uma tcnica de microcromatografia para separao rpida
e segura da Hb-G, uma vez que o mtodo foi otimizado com a finalidade
de se obter os resultados em um tempo significativamente menor,
obtendo-se a eluio da Hb-Gemumtempo mdio de 15minutos.
A modificao introduzida agregou uma significativa robustez ao
sistema, fazendo com que as imprecises intra-ensaio e total sejam
menores que 2,0 e 5,0%, respectivamente, atendendo assim s
recomendaes de desempenho necessrias para que os resultados
possamter utilidade mdica.
Como a presena da frao lbil pr A c (aldimina) produz resultados
falsamente elevados, dificultando a interpretao clnica dos resultados,
essa frao eliminada pelos ons borato presentes no reagente
hemolisante.
Os resultados apresentam uma excelente correlao com a mdia das
glicemias medidas a longo prazo.
Trivelli modificado.
Contmtampo fosfato 36mmol/L, pH6,7e biocida no txico.
Contmcido brico 600mmol/L e azida sdica 14,6mmol/L.
Contmresina de troca inica equilibrada emtampo fosfato pH6,7.
No misturar reagentes de lotes diferentes.
Os reagentes no abertos, quando armazenados nas condies
indicadas, so estveis at a data de expirao impressa no rtulo.
[Somente para uso diagnstico in vitro.]
Tampo Hb-Rpida - Armazenar entre 15- 25C.
Hemolisante - Armazenar entre 15- 25C.
Colunas para cromatografia - Armazenar entre 15 - 25 C.
2
1
Durante o manuseio, os reagentes esto sujeitos a contaminaes de
natureza qumica e microbiana que podem provocar reduo da
estabilidade.
Os cuidados habituais de segurana devem ser aplicados na
manipulao de reagentes.
O Hemolisante contm azida sdica que toxica. Deve-se tomar cuidado
para evitar a ingesto e, no caso de contato com os olhos, deve-se lavar
imediatamente com grande quantidade de gua e procurar auxlio
mdico.
A azida pode formar compostos altamente explosivas comtubulaes de
chumbo e cobre. Portanto, utilizar grandes volumes de gua para
descartar o reagente.
Os reagentes no abertos, quando armazenados nas condies
indicadas, so estveis at a data de expirao impressa no rtulo.
Durante o manuseio, os reagentes esto sujeitos a contaminaes de
natureza qumica e microbiana que podem provocar reduo da
estabilidade.
Fotmetro capaz de medir, com exatido, a absorbncia entre 405 e
430nm.
Pipetas para medir amostras e reagentes.
Cronmetro.
Termmetro.
Quando a amostra colhida em
heparina pode-se obter resultado falsamente elevado.
Deve ser criado um Procedimento Operacional Padro (POP) que
estabelea procedimentos adequados para colheita, preparao e
armazenamento da amostra. Enfatizamos que os erros devidos amostra
podem ser muito maiores que os erros ocorridos durante o
procedimento analtico.
Usar sangue total colhido comEDTA. Utilizar os anticoagulantes Labtest -
Glistab (Ref. 29) ou Hemstab (Ref. 30). A hemoglobina glicada estvel
no sangue total por cinco dias entre 2- 8C.
Como nenhum teste conhecido pode assegurar que amostras de sangue
no transmitem infeces, todas elas devem ser consideradas como
potencialmente infectantes. Portanto, ao manuse-las deve-se seguir as
normas estabelecidas para biossegurana.
Material necessrio e no fornecido
1.
2.
3.
4.
Influncias pr-analticas .
HEMOGLOBINA GLICADA
Instrues de Uso
Ref.: 17
MS 10009010016
01 Portugus - Ref.: 17
Precaues e cuidados especiais
1
2
3
Amostra
Para descartar os reagentes e o material biolgico sugerimos aplicar as
normas locais, estaduais ou federais de proteo ambiental.
Amostras lipmicas ou ictricas interferem na dosagem, fornecendo
resultados falsamente elevados.
Pipetar emumtubo 1,0 mL da amostra bemhomogeneizada. Marcar o
nvel de 1,0mL no tubo.
Centrifugar a 2000 rpm por 5 minutos. Retirar o plasma sem
ressuspender as hemcias.
Adicionar 3,0 mL de NaCl 150 mmol/L (0,85%). Centrifugar e remover
o sobrenadante semressuspender as hemcias.
Ressuspender as hemcias com 3,0 mL de NaCl 150 mmol/L
(0,85%). Centrifugar. Acertar o volume para a marca de 1,0 mL, retirando
o excesso de sobrenadante.
Homogeneizar beme utilizar para preparar o hemolisado.
Emumtubo 12 x 75 adicionar 0,4 mL de
Hemolisante (n 2) e 0,1 mL da amostra. Agitar fortemente por 20
segundos e esperar 5 minutos. Se a hemlise for incompleta (o lquido no
tubo se mostrar turvo), centrifugar e usar o sobrenadante.
Antes de iniciar a cromatografia assegurar-se que o hemolisado, o
tampo e as colunas estejam a mesma temperatura do ambiente. Nunca
realizar a cromatografia se o hemolisado, tampo e coluna estiverem em
temperaturas diferentes do ambiente no qual se realizar a cromatografia.
A presena de bolhas de ar no filtro ou na
resina interfere na drenagemdo tampo, aumentando o tempo de eluio
da hemoglobina glicada.
Retirar a tampa superior da coluna, introduzir o basto fazendo
movimentos giratrios descendentes e ascendentes para ressuspender a
resina. Remover imediatamente a tampa inferior, colocar a coluna emum
tubo de ensaio (alto o suficiente para que a ponta da coluna no toque o
lquido no tubo) e esperar que todo o lquido penetre na resina. Apartir da,
a coluna estar pronta para uso e a cromatografia dever ser iniciada
imediatamente. Jamais efetuar a cromatografia em temperatura inferior a
16Cou superior a 30C.
Adicionar 0,05 mL do hemolisado sobre a resina, de
modo que no haja ressuspenso da mesma, evitando a formao de
bolhas de ar.
Minimizao da ao de interferentes .
1.
2.
3.
4.
5.
Preparo do Hemolisado .
Preparo da coluna .
Cromatografia .
Este procedimento
dever ser aplicado somente quando a amostra estiver turva, lipmica
ou ictrica.
Medir a temperatura do lquido que drenou da coluna para correo do
resultado.
Esperar que todo o hemolisado penetre na resina.
Transferir a coluna para um tubo de ensaio limpo e seco (alto o suficiente
para que a ponta da coluna no toque o lquido no tubo), marcado com o
nmero "1" e adicionar lentamente, com a ponta da pipeta tocando a
parede da coluna, 3,5 mL de Tampo Hb-Rpida (n 1). Aeluio da Hb-G
se completa quando todo o tampo penetra na resina.
Desprezar a coluna.
Homogeneizar o contedo do tubo nmero "1" (Hb-G)
e us-lo para a colorimetria semqualquer tratamento adicional.
Para umtubo limpo e seco, marcado como nmero "2" (Hb-Total), pipetar
7,0mL de gua deionizada, adicionar 0,02mL do hemolisado e misturar.
Determinar as absorbncias dos tubos nmero "1" (Hb-G) e nmero "2"
(Hb-Total) em 415 nm ou filtro azul (405 a 430) acertando o zero com
gua destilada. Acor estvel quatro horas.
Ver linearidade.
A
Hemoglobina Glicada (%) = x 100
5x A
ou
A
x 20
A
A =Absorbncia do tubo 1 (Hb-G)
A =Absorbncia do tubo 2 (Hb-Total)
A =0,310 A =0,560
0,310
Hb-G(%) = x 100=11,1
5x 0,560
ou
0,310
Hb-G(%) = x 20=11,1
0,560
A cromatografia deve ser realizada a
22 C. Se for realizada emtemperatura diferente, corrigir o resultado para
a temperatura de 22 C, multiplicando o resultado encontrado pelo fator
de correo correspondente temperatura de trabalho.
Colorimetria .
Clculo .
Exemplo
Efeito da temperatura .
1
2
1
2
1
2
1 2
Ver o efeito da temperatura para correo do resultado.
02
Interferncias
Portugus - Ref.: 17
Procedimento
Exemplo
Controle interno da qualidade .
Valores de referncia .
Limitaes do procedimento .
Hb-Gencontrada =11,1%
Temperatura de trabalho =20C
Fator de Correo =1,05
Hb-Gcorrigida =11,1x 1,05=11,7%
O sistema Hemoglobina Glicada Labtest linear at 30%. Valor superior a
30%no foi relatado na literatura.
Estes valores devem ser usados apenas
como orientao. Recomenda-se que cada laboratrio estabelea, na
populao atendida, sua prpria faixa de valores de referncia.
Hb Glicada: 5,3a 8,0%.
A presena de hemoglobina F na
amostra leva obteno de resultados falsamente elevados, enquanto a
presena das hemoglobinas S e C produz resultados falsamente
diminudos. Aanemia ferropriva produz resultados falsamente elevados.
Em todas as condies onde a meia-vida das hemcias est modificada,
podemocorrer alteraes nos valores da hemoglobina glicada.
Jamais efetuar a cromatografia em temperatura inferior a 16 C ou
superior a 30C.
O laboratrio deve manter um
programa de controle da qualidade que defina claramente os
regulamentos aplicveis, objetivos, procedimentos, critrios para
especificaes da qualidade e limites de controle, aes corretivas e
registro das atividades. Materiais de controle devem ser utilizados para
avaliar a impreciso e/ou desvios da calibrao. Sugere-se procurar
atender como limites mximos de controle as especificaes propostas
por NGSP para coeficiente de variao <5% e erro total 0,85 pontos
percentuais.
11 4

03 Portugus - Ref.: 17
Linearidade
Caractersticas do desempenho
Exatido .
Especificidade .
Efeitos da diluio da matriz .
Significado clnico .
13
Em duas amostras com concentraes de Hemoglobina
Glicada iguais a 6,6 e 1,5% foram adicionadas quantidades diferentes do
analito, obtendo-se recuperaes entre 98 e 103%. O erro sistemtico
proporcional mdio obtido emumvalor de 9,0%foi igual a 0,1%.
Omtodo proposto foi comparado comummtodo
similar utilizando 70 amostras com valores situados entre 4,8 e 17%.
A comparao resultou na equao da regresso: y = 0,315 + 1,006x e
um coeficiente de correlao (r) igual a 0,984. O erro sistemtico total
(constante e proporcional) verificado no limite de deciso (10%) foi igual
a 0,38%. Como as amostras foram selecionadas aleatoriamente em
pacientes de ambulatrio e pacientes hospitalizados, pode-se inferir que
o mtodo temuma especificidade metodolgica adequada.
Uma amostra com valor igual a
12,8% foi utilizada para avaliar a resposta do sistema nas diluies da
matriz com NaCl 150 mmol/L (0,85%). Usando fatores de diluio que
variaramde 1,2a 2,0foramencontradas recuperaes entre 90e 105%.
Um nmero importante de trabalhos confirma
a utilidade da determinao da Hb-G na avaliao do estado de controle
da glicemia empacientes diabticos e est definitivamente provado que a
elevao da Hb-G influenciada somente por fatores ligados ao diabetes.
Portanto, a Hb-G se eleva com a deteriorao da tolerncia glicose e
com todos os fatores de risco como idade, obesidade, histria familiar e
histria de recm-nascido de grande peso.
O grau de glicosilao diretamente proporcional ao valor da glicemia e
sua durao varia tambm de paciente a paciente. Pequenas elevaes
dos valores da glicose emreduzidos intervalos de tempo no so capazes
de produzir modificaes significativas na Hb-G.
Quando pacientes diabticos em estado de descontrole metablico so
submetidos a tratamento e passam a apresentar valores da glicemia em
nveis timos, observa-se uma reduo progressiva da Hb-Gque atinge o
ponto de equilbrio depois de 6 - 8 semanas. Assim, o conceito de que
uma determinao da Hb-Greflete os nveis glicmicos da sexta ou oitava
semana precedente ao teste est definitivamente comprovado.
Um resultado da Hb-G prximo do valor superior de referncia indica que
o paciente diabtico tem estado sob controle metablico adequado por
vrias semanas e exclui uma perda temporria do controle durante o
perodo avaliado.
Mdia
6,7
11,2
DP
0,11
0,20
CV (%)
1,6
1,8
N
20
20 Amostra 2
Amostra 1
Repetitividade - impreciso intra-ensaio
Mdia
6,2
10,6
DP
0,22
0,39
CV (%)
3,3
3,5
N
20
20 Amostra 2
Amostra 1
Reprodutibilidade - impreciso total
1,16
1,13
1,10
1,08
1,05
1,03
1,00
0,98
0,95
0,93
0,90
0,88
0,86
0,84
0,82
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
Temperatura de
Trabalho (C)
Fator de
Correo
Os estudos da cintica da glicosilao da hemoglobina tmdemonstrado
que quando h perda do controle glicmico, os valores da Hb-G
comeam a se elevar logo na primeira semana de descontrole e a
velocidade do aumento muito maior que a velocidade de queda quando
umpaciente diabtico colocado emnveis desejveis de glicemia.
Portanto, um resultado elevado da Hb-G pode significar um controle
metablico inadequado ou umestado de controle adequado onde a Hb-G
ainda no atingiu o ponto de equilbrio.
Estudos recentes do DCCT (Diabetes Control and Clinical Trial)
demonstraram que a morbidade ou a mortalidade do diabetes esto
diminudos quando ocorre um controle adequado da glicemia, e que a
dosagem da Hb-G muito importante para informar o estado de controle
da glicemia.
Existem muitas dvidas sobre os nveis de controle metablico
adequados relacionados aos valores da Hb-G. bastante razovel admitir
que os valores da Hb-G em diabticos bem controlados devem estar o
mais prximo possvel dos valores de referncia. Entretanto, as tentativas
de obter estes valores esbarram em uma complicao bastante grave: a
hipoglicemia.
A tabela abaixo mostra um sumrio de alguns dos valores alvo
recomendados como a glicemia (mg/dL) e a Hb-G (%). Os nveis
metablicos alvo foram definidos como timos, aceitveis e
comprometidos e os valores da Hb-G so expressos em termos
percentuais do limite superior de referncia do mtodo (LSR). Assim, em
um mtodo com LSR igual a 8,0%, um diabtico com nveis timos de
Hb-G ter resultados menores que 8,8%, enquanto um valor maior que
11,2%significa umestado metablico comprometido.
A limpeza e secagem adequadas do material utilizado so fatores
fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados
corretos.
O laboratrio clnico tem como objetivo fornecer resultados exatos e
precisos. A utilizao de gua de qualidade inadequada uma causa
potencial de erros analticos. A gua deionizada ou destilada utilizada no
laboratrio deve ter a qualidade adequada a cada aplicao. Assim, para
preparar reagentes, usar nas medies e para uso no enxge final da
vidraria, deve ter resistividade 1 megaohm.cm ou condutividade
1 microsiemens/cm e concentrao de silicatos <0,1 mg/L. Quando a
coluna deionizadora est com sua capacidade saturada ocorre produo
de gua alcalina com liberao de vrios ons, silicatos e substncias
com grande poder de oxidao ou reduo que deterioram os reagentes
em poucos dias ou mesmo horas, alterando os resultados de modo
imprevisvel. Assim, fundamental estabelecer umprograma de controle
da qualidade da gua.
Observaes
1.
2.

Referncias
Informaes ao consumidor
1. Bunn HF et al. BiochemBiophys Res Commum1975; 67:103-109.
2. Daneman D. The Endocrinologist 1994; 4:33-44.
3. Gabbay KHet al. J Clin Endocrinol Metab 1977; 44:859-864
5. Koenig RJ et al. Diabetes 1976; 25:230-232.
6. Koenig RJ et al. NewEngl. J Med 1976; 295:417-419.
7. Paulsen EP. Metabolism1973; 22:269-271.
8. Rahbar S. Clin ChimActa 1968; 22:296-298.
9. Schellekens APMet al. Clin Chem1981; 27:94-99.
10. Schnek AG and Schroeder WA. J Am Chem Soc 1961; 83:1472-
1478.
12. Trivelli LA, Ranney H, Lai HT. NewEngl J Med 1971; 284:353-357.
13. Labtest: Dados de Arquivo.
garante o desempenho deste produto dentro das
especificaes at a data de expirao indicada nos rtulos, desde que os
cuidados de utilizao e armazenamento indicados nos rtulos e nestas
instrues sejamseguidos corretamente.
[Termos e Condies de Garantia]
A Labtest Diagnstica
4. Guidelines and Recommendations for Laboratory Analysis in the
Diagnosis and Management of Diabetes Mellitus. Sacks DB, Bruns, DE,
Goldstein DE, Maclaren NK, McDonald JM, Parrott M. Clin Chem
2002:48:436-472.
11. Summary of NGSP Certification Categories. Disponvel em:
<http://www.ngsp.org/prog/index.html>(acesso em01/2008).
04 Portugus - Ref.: 17
timo
72 - 126
90 - 180
<1,1xLSR
Aceitvel
180
216
1,4xLSR
Comprometido
>180
>216
>1,4xLSR
Parmetro
Glicose Ps-prandial
Hb Glicada
Glicose Pr-prandial
Nveis Metablicos
Apresentao
Produto Referncia Contedo
17 1 x 12 mL
1 x 100 mL
1
Hemoglobina Glicada
25 Unidades
2
3
CNPJ: 16.516.296 / 0001 - 38
Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 - Vista Alegre - CEP 33400-000
Lagoa Santa . Minas Gerais Brasil - www.labtest.com.br
Labtest Diagnstica S.A.
Servio de Apoio ao Cliente 0800 031 34 11 (Ligao Gratuita)
e-mail: sac@labtest.com.br
05 Portugus - Ref.: 17
Reviso: Abril, 2009
Ref.: 170309
Copyright by Labtest Diagnstica S.A.
Reproduo sob prvia autorizao
06 Portugus - Ref.: 17
Smbolos utilizados com produtos diagnsticos in vitro
Smbolos usados con productos diagnsticos in vitro
Symbols used with ivd devices
Representante Autorizado na Comunidade Europeia
Representante autorizado en la Comunidad Europea
Authorized Representative in the European Community
Contedo suficiente para < n > testes
C
C
ontenido suficiente para < n > tests
ontains sufficient for < n > tests
Data limite de utilizao (aaaa-mm-dd ou mm/aaaa)
Estable hasta
Use by
(aaaa-mm-dd o mm/aaaa)
(yyyy-mm-dd or mm/yyyy)
Limite de temperatura (conservar a)
Temperatura limite
Temperature limitation
(conservar a)
(store at)
Material Calibrador
Material Calibrador
Calibrator Material
Material Calibrador
Material Calibrador
Calibrator Material
Consultar instrues de uso
Consultar instrucciones de uso
Consult instructions for use
Adies ou alteraes significativas
Cambios o suplementos significativos
Significant additions or changes
Liofilizado
Liofilizado
Lyophilized
Produto diagnstico in vitro
Dispositivo de diagnstico in vitro
In vitro diagnostic device
Nmero do catlogo
Nmero de catlogo
Catalog Number
Ref.: 170309
Corrosivo
Corrosivo
Corrosive
Controle negativo
Control negativo
Negative control
Controle positivo
Control positivo
Positive control
Controle
Control
Control
Controle
Control
Control
Marca CE
Marcado CE
CE Mark
Txico
Txico
Poison
Reagente
Reactivo
Reagent
Nmero do lote
Denominacin de lote
Batch code
Risco biolgico
Riesgo biolgico
Biological risk
Fabricado por
Elaborado por
Manufactured by