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UNIVERSIDADE ESTADUAL DO OESTE DO PARAN CAMPUS DE MARECHAL CNDIDO RONDON CENTRO DE CINCIAS AGRRIAS CURSO DE ZOOTECNIA

RELATRIO DE AULA PRTICA N 2 TTULO: MTODOS DE CULTIVO

Docente: Emerson Chamb Discente: Claudinei Mainardes Josias Fornari Luana Lang Natielly Jaskowiak Vanessa Kaufert

MARECHAL CNDIDO RONDON PARAN 2013

Mtodos de cultivo
1. Introduo A aula prtica da matria de microbiologia foi realizada no dia 19 de setembro de 2013, a qual foi ministrada pela mestranda Jaqueline Wobeto juntamente com o professor Dr. Emerson Chamb. A aula consistiu em confeccionar placas dos diferentes mtodos de cultivo, as realizadas foram Estrias de isolamento, Pour Plate e Espalhamento em placa. 2. Objetivos O objetivo da aula prtica foi mostrar as tcnicas utilizadas para a confeco de placas dos diferentes mtodos de cultivo. 3. Material Dentre os materiais utilizados e apresentados em aula podemos citar: Erlenmeyer; Tubo de ensaio; Bico de Bunsen; Placas de Petri; Pipeta automtica; Ala de platina; Ala de Drigalski; Pina; Lmina; Lamnula; Balana Analtica; 4. Metodologia Em Microbiologia importante a esterilizao de meios, solues e material de vidro ou metal que se utiliza, pois tudo fonte de contaminao e consequentemente faz com que ocorram alteraes na amostra ou pesquisa que est se realizando. A assepsia extremamente importante na microbiologia. Entende-se por assepsia todas as condies, gestos e atitudes tendentes a manterem o estado de ausncia de microrganismos contaminantes no meio em que actua. Por isso a Mestranda Jaqueline Wobeto aconselhou-nos algumas tcnicas de assepsia tais como: Ao entrar no laboratrio a roupa deve ser sempre bem protegida por um jaleco; Antes de iniciar qualquer trabalho devemos lavar e desinfectar as mos, assim como tambm na sada. Jaqueline destacou a importncia dessa assepsia destacando que as mos so portadoras de microorganismos, por isso vrios laboratoristas devido ao contato das mos contaminadas com o organismo podem obter uma diarria, conjuntivite, ect., devido a mal esterilizao.

O acadmico com os cabelos longos deve mante-los amarrados, ainda mais quando o trabalho exige a utilizao do bico de Bunsen, de forma a no os queimar. Ela tambm ressaltou que o cabelo uma fonte de contaminao, por isso, toda vez que passar a mo no cabelo, mas no s neste, como tambm a pele do rosto; devemos esteriliz-las com lcool. Todos os materiais usados devem ser esterilizados, ou como no caso das alas serem flambados. A bancada do laboratrio deve ser esterilizada. Os acadmicos esfregaram a bancada com a bucha e o detergente, logo aps limpada com o pano e por fim esterilizada com lcool. Para que assim, possamos diminuir as fontes de contaminao. Entre outros mtodos de assepsia.

Aps destacar alguns mtodos de assepsia importantes, a mestranda nos mostrou alguns materiais e equipamentos utilizados no laboratrio de microbiologia e qual a funo desempenhada por cada um deles. Dentre todos os materiais podemos citar: Erlenmeyer e Bquer Usado para dissolver solues e misturas. Basto Serve para agitar/misturar as solues. Tubo de ensaio Recipiente de vidro e alongado, usado para experincia de pouco volume. Bico de Bunsen Chama de fogo/ queimador de gs. Placas de Petri um recipiente cilndrico, achatado que serve para colocar os meios de cultura slidos para obter o crescimento de microorganismos. Pipeta graduada e automtica Usado para transportar quantidades precisas de material liquido. Ala de platina uma ala de transferncia. Ala de Drigalski Usado para espalhar/distribuir o meio de cultura na placa. Pina utilizada para no pegar com a mo os objetos, para que evite a contaminao. Lmina Usada para quando no se consegue identificar o microorganismo na placa, ento retira-se a colnia e coloca-se na lmina para analisar em microscpico. Lamnula uma fina placa de vidro, que se coloca em cima do material na lmina para sua observao ao microscpio. Tubo de Durham Tubo de vidro, parecido com um tubo de ensaio s que em miniatura que servem para aprisionar o gs produzido pelos micro-organismos, em meio lquidos. Swabs Material parecido com um cotonete, porm maior. Usado para coletar amostras de micro-organismos, como por exemplo, superfcies de equipamentos, bebedouros, tetos de vacas, etc. Autoclave Equipamento destinado esterilizao de materiais e meios de cultura utilizados em microbiologia, por vapor de gua sob presso. Balana Analtica Para pesar com mais preciso.

Aps apresentados os materiais e equipamentos, os acadmicos prepararam um meio de cultura, existem vrios, mas o preparado em aula foi o meio de cultura PCA para micro-organismos. E este foi feito da seguinte maneira: 1) Cada meio de cultura possui o seu mtodo de preparar; cada mtodo tem a sua receita. Assim o primeiro passo que os acadmicos tiveram que fazer, foi calcular a quantidade necessria do meio de cultura PCA para 100 ml de gua destilada. Para descobrir, utilizamos a bsica regra de trs: No rtulo do meio de cultura PCA constava que para cada 23,5g deveria se utilizar 1000 ml de gua destilada. 23,5 g de PCA ------ 1000 ml de gua destilada X g de PCA -------- 100 ml de gua destilada 23,5 X 100 / 1000 = X: 2,35 g Logo, para 100 ml de gua destilada deveremos usar 2,35g de meio de cultura PCA. 2) Aps descobrir a quantidade exata do meio de cultura PCA para 100ml; foi pesado na balana analtica 2,35g de PCA 3) Em um bquer foi colocado 100 ml de gua destilada e acrescentado 2,35g de meio de cultura PCA. Esta soluo deve ser agitada, para isso utilizamos um basto de vidro para agitar at que a soluo fique totalmente diluda. A soluo foi colocada em uma garrafinha de vidro (chocomilk). No laboratrio de microbiologia da Unioeste de Marechal Cndido Rondon, foi adotada as garrafinhas de vidro do achocolatado chocomilk em vez de usar o bquer. Estas foram lavadas e esterilizadas para o uso. A primeira justificativa para o uso dessas garrafinhas, que a utilizao de garrafinhas ou bquer dar os mesmos resultados, por os ambos ter a funo de um copo. Foi adotada essa tcnica devido ao nmero pequeno de bquer existentes na faculdade, assim garrafinhas de chocomilk so de baixo custo e fceis de serem adquiridas. Mesmo que a soluo aparentemente ficou totalmente diluda, com o passar dos segundos, esta comeou a decantar e formar grumos no fundo. Por tal razo, esta foi colocada em um forno micro-ondas para aquecer e assim formar uma soluo homognea. Ao colocar a garrafinha no forno micro-ondas leva-se em torno de 4 minutos para terminar esta etapa; porm de minuto em minuto deve-se abrir o forno micro-ondas e retirar a garrafinha de vidro e agitar. Somente deve-se parar com esse processo quando ferver e no conter mais grumos. 4) Aps esses processos a garrafinha vai para o aparelho autoclaveequipamento destinado esterilizao de materiais e meios de cultura utilizados em microbiologia, por vapor de gua sob presso. O meio de cultura permanece por 15 minutos nesse equipamento. Mestranda Jaqueline, salientou novamente nessa etapa que cada meio de cultura tem o seu meio de preparo, e h meios que no precisam de

autoclavagem, por isso na hora de preparar um meio de cultura sempre ler antes a bula. Quando desligamos a autoclave, devemos esperar at que saia toda a presso contida dentro (mesmo funcionamento de uma panela de presso) para ento abri-la. Retirada da autoclave o meio de cultura PCA ser esfriado e este se tornara slido. 5. Resultados e discusso Os resultados ocorrem de forma como o esperado, obtivemos uma soluo homognea de 100 ml de gua destilada com 2,35g de meio de cultura PCA. Tudo ocorreu da forma programada, sem nenhum acidente laboratorial. 6. Concluso A aula prtica experimental teve como o objetivo principal o ensino aos acadmicos das metodologias, materiais e equipamentos utilizados em um laboratrio de Microbiologia; como tambm o preparo de um meio de cultura PCA. Creio eu, que este objetivo foi alando com sucesso.

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