TIPOS DE FIJADORES

Existen multitud de fijadores en los manuales de tcnicas histolgicas. Aqu slo trataremos aquellos que consideramos de uso ms comn para la observacin de tejidos al microscopio, es decir, aquellos que mejor preserven la estructura celular. Los fijadores lquidos qumicos son los ms frecuentemente empleados, bien con un solo tipo de sustancia fijadora o con mezclas de varias de ellas.

EL ALCOHOL ABSOLUTO. LA ACETONA FRIA . EL FORMALDEHIDO. EL GLUTARALDEHIDO. EL ACIDO ACETICO. EL TETROXIDO DE OSMIO. EL ACIDO PICRICO. EL DICROMATO DE POTASIO. EL CLORURO DE MERCURIO. EL ACIDO CROMICO.

Fija por deshidratacin y se usa entre el 95 y 99 %. Es un buen elemento para preservar molculas, como ciertas enzimas, propiedades antignicas, glucgeno, pigmentos y para las extensiones citolgicas. Debido a que deshidrata, a la vez que fija, se puede usar tambin como un conservante de las muestras. Tiene inconvenientes como el endurecimiento y la retraccin de los tejidos.

Es preferida cuando se efectan ciertos estudios histoqumicos para enzimas, especialmente lipasas y fosfatasas. No se usa como fijador de rutina porque causa distorsin nuclear y compresin del citoplasma, adems no preserva el glucgeno.

La formalina neutra al 10% estabilizada esta considerada como el mejor fijador general para todos los espsmenes patolgicos porque preserva el nmero ms grande de estructuras, requiere un perodo de fijacin relativamente corto, puede ser usada para conservar tejidos a largo plazo sin endurecer el tejido.

. Forma puentes entre las molculas de los tejidos. Se usa a una proporcin de entre el 0,5 y el 3 %. Tiene una alta capacidad para preservar la estructura celular, por lo que es el fijador de referencia para observacin de ultraestructuras celulares con el microscopio electrnico.

Forma puentes entre molculas. Se emplea al 1 % en soluciones tamponadas. Es buen fijador de la ultraestructura de la clula por lo que se emplea habitualmente para las observaciones con el microscopio electrnico. Es un buen fijador para grasas y membranas celulares.

La fijacin la produce porque las sales del tipo picrato coagulan con las protenas de los tejidos. Se suele usar el 2 % de una solucin saturada de cido pcrico. Preserva bien la estructura celular, no produce retracciones cuando el tiempo de fijacin es ptimo, preserva bien glucgeno y lpidos. Es un buen fijador para tinciones generales puesto que favorece la unin de los colorantes. Hay que eliminarlo completamente antes de proceder a la inclusin en ceras como la parafina.

Su proceso de fijacin consiste en cambiar el estado coloidal de las protenas. Se utiliza a una concentracin que vara entre el 1 y el 5 %. Es el fijador ideal para cidos nuclecos y nucleoprotenas. Como inconvenientes cabe destacar la destruccin de las mitocondrias y mala fijacin de membranas y citoplasma. Se suele usar en combinacin con otros fijadores.

Para resumir, la formalina neutra estabilizada con fosfatos de sodio es el fijador mas verstil y practico, su formula: Formaldehido al 37%..........................100.0 ml. Agua destilada..900.0 ml. Fosfato de sodio, monobsico.4.0 g. Fosfato de sodio, dibsico.6.5 g. Metanol20 ml.

Los tres pasos del procesamiento de tejidos son: deshidratacin, aclaramiento, e infiltracin. Pasos secuenciales designados para remover toda el agua que se pueda extraer del tejido y reemplazarla con un medio que solidifique y nos permita realizar cortes de los tejidos.

Para la deshidratacin se prefieren los alcoholes etlico e isoproplico, los cuales no estn en la lista de sustancias controladas . El uso de alcoholes graduados que vayan de la concentracin mas baja hasta la mas alta es de rutina. El uso de procesadores automticos perfeccionan el procesamiento, utilizando calor, vacio, presin y agitacin.

El xileno es agente aclarante mas utilizado. Es generalmente usado para la inclusin ruti naria en parafina. Otros medios de inclusin como la celoidina y procesamientos en plstico tambin son utilizados con los mismos solventes.

Formol al 10% buferado 1 hora. Formol al 10% buferado 1 hora. Alcohol 8O, 1 hora. Alcohol 99, 1 hora. Alcohol absoluto I, 1 horas. Alcohol absoluto II, 1 horas. Alcohol absoluto III, 1 horas. Alcohol absoluto IV, 1 hora. Xilol I, 1 hora. Xilol II,1 1/2 hora. Parafina I, 1 1/2 horas. Parafina II, 1 horas.

El horno microondas (HM) fue introducido en Anatoma Patolgica en los aos 80, siendo utilizado en varios procesos dentro del laboratorio. Se realiz la comparacin de algunos parmetros histolgicos, histoqumicos e inmunohistoqumicos, en muestras de tejido normal, procesados paralelamente de manera convencional y en HM. Se seleccionaron muestras en duplicado de diversos tejidos; se procesaron convencionalmente (PC) en un procesador automtico y en HM utilizando un protocolo estandarizado previamente

. Se realizaron tinciones histolgicas e histoqumicas (H-E, PAS y Azul Alcian) e inmunohistoqumicas (CD45, CD3, CD20 Citoqueratinas AE1/AE3, 5/18, 20, S-100, Receptores de Estrgeno y Progesterona). Las tcnicas se escogieron segn tipo de tejido. Se evalu la calidad de los preparados (tincin nuclear, tincin citoplasmtica y calidad general), la intensidad de las tinciones histolgicas, histoqumicas e inmunohistoqumica de marcadores escogidos.

 El

HM posibilit la entrega de la lmina histolgica en un tiempo mucho menor que el PC, disminuyendo el tiempo de procesamiento de 12 a 1 hora.

La histologa de hueso requiere de la remocin de sales de calcio sin alterar los detalles celulares. Fijar los tejidos en formalina al 10% neutra estabilizada por lo menos 5 das. Se realizan secciones adecuadas al tamao del cassette, seguidamente se colocan los especmenes en un recipiente con solucin diaria de acido clorhdrico-acido frmico al 8% si no son tan duras y al 16% sin son huesos muy duros.

SOLUCION MATRIZ DE FORMOL-ACETATO DE SODIO(SOLUCION A). Formaldehido al 37%.............................10 ml. Acetato de sodio.2.0 g. Agua corriente..90 ml

SOLUCION DIARIA DE FORMOL-GLICEROL Solucin acetato de sodio-formol90 ml. Glicerina (glicerol)10 ml. Colocar los tejidos en solucin no mas de 8 horas para no tener efectos adversos. Procesar los tejidos en la forma normal usual.

Feliz

fin de semana!