LABORATORIO DE BIOQUIMICA ENZIMAS Y EXTRACCION DE ADN

PROFESOR:

EDUARDO PASTRANA BONILLA

PRESENTADO POR:

JUAN MIGUEL BETTIN GONZALEZ GUSTAVO ADOLFO SANCHEZ PINTO SONIA MILENA COLLAZOS

UNIVERSIDAD SURCOLOMBIANA FACULTAD DE INGENIERIA NEIVA 2011

INTRODUCCION En la siguiente practica lo que se pretende es poner en manifiesto la presencia de la enzima catalasa en los tejidos animales y vegetales, verificar el proceso de desnaturalizacin de las enzimas por la accin de la temperatura y comprobar la accin hidrolitica de la amilasa. Dichos procesos nos ayudan a entender de manera mas completa las caractersticas principales de las enzimas. Por otro lado, en la segunda parte del laboratorio, se utilizan sencillas tcnicas para la extraccin del ADN de un tejido animal y gracias al aspecto observado, confirmar la estructura fibrilar que posee.

BASES TEORICAS ENZIMAS: Las enzimas son protenas altamente especializadas que tienen como funcin la catlisis o regulacin de la velocidad de las reacciones qumicas que se llevan a cabo en los seres vivos. Casi todas las reacciones qumicas de las clulas son catalizadas por enzimas, con la particularidad de que cada enzima solo cataliza una reaccin, por lo que existiran tantas enzimas como reacciones, y no se consumen en el proceso. Los catalizadores no biolgicos son inespecficos. Clases de Enzimas: El nombre de las enzimas es el del sustrato + el sufijo: -asa. Los nombres de las enzimas revelan la especificidad de su funcin: Oxido-reductasas: catalizan reacciones de oxido-reduccin, las que implican la ganancia (o reduccin) o prdida de electrones (u oxidacin). Las ms importantes son las deshidrogenasas y la oxidasa. Transferasas: transfieren grupos funcionales de una molcula a otra. Ej.: quinasas; transfieren fosfatos del ATP a otra molcula. Hidrolasas: rompen varios tipos de enlaces introduciendo radicales -H y -OH. Liasas: adicionan grupos funcionales a los dobles enlaces. Isomerasas: convierten los sustratos ismeros unos en otros. Ligasas o Sintasas: forman diversos tipos de enlaces aprovechando la energa de la ruptura del ATP. REGULACIN ENZIMTICA: El metabolismo consiste en una serie de reacciones catalizadas por enzimas, donde los productos de una reaccin se convierten en los reactivos de la siguiente, lo que se conoce como vas metablicas. Las clulas deben poder regular estas vas metablicas y lo hacen a travs de reguladores enzimticos. los inhibidores naturales regulan el metabolismo mientras que los artificiales son utilizados por la medicina, para destruir plagas, etc. Inhibicin reversible: pueden inhibidores competitivos, los que se unen a la enzima ingresando en el sitio activo, impidiendo as su enlace con el sustrato. Los inhibidores no competitivos se unen a la enzima en un lugar diferente al sitio activo cambiando la forma de la protena y por lo tanto la forma del sitio activo. Sus efectos son reversibles. Inhibicin irreversible: hay inhibidores que se unen covalentemente al sitio activo de una enzima, esta unin es permanente e inactiva a la enzima destruyendo su capacidad de unirse al sustrato. Ej: el DIPF reacciona con el aminocido serina del sitio activo de la enzima acetilcolinesterasa, inhibindola

irreversiblemente. Esta enzima participa en el mecanismo de propagacin de los impulsos nerviosos. El DIPF es conocido como gas nervioso, algunos ej. Son la SARINA (usado en el ataque terrorista en un subte en Tokio en 1995)y el MALATION (insecticida).

ADN: El ADN es la sustancia qumica donde se almacenan las instrucciones que dirigen el desarrollo de un huevo hasta formar un organismo adulto, que mantienen su funcionamiento y que permite la herencia. Es una molcula de longitud gigantesca, que est formada por agregacin de tres tipos de sustancias: azcares, llamados desoxirribosas, el cido fosfrico, y bases nitrogenadas de cuatro tipos, la adenina, la guanina, la timina y la citosina. Los azcares y los cidos fosfricos se unen lineal y alternativamente, formando dos largas cadenas que se enrollan en hlice. Las bases nitrogenadas se encuentran en el interior de esta doble hlice y forman una estructura similar a los peldaos de una escalera. Se unen a las cadenas mediante un enlace con los azcares. Cada peldao est formado por la unin de dos bases, formando los pares de bases anteriormente mencionados; pero estos emparejamientos slo pueden darse entre la adenina y la timina o entre la citosina y la guanina. Las secuencias -el orden en que se van poniendo- que forman adenina, timina, citosina y guanina a lo largo de la cadena de ADN es lo que determina las instrucciones biolgicas que contiene.

PROCEDIMIENTO RECONOCIMIENTO DE LA CATALASA:

COLOCAR EN UN TUBO DE ENSAYO UNOS TROCITOS DE HIGADO

AADIR 5 MILILITROS DE AGUA OXIGENADA

SE OBSERVARA UN INTENSO BURBUJEO DEBIDO AL DESPRENDIMIENTO DE OXIGENO

DESNATURALIZACION DE LA CATALASA :

COLOCAR EN UN TUBO DE ENSAYO VARIOS TROCITOS DE HIGADO

AADIR AGUA PARA HERVIR LA MUESTRA. HERVIR DURANTE UNOS MINUTOS

DESPUES DE ESTE TIEMPO, RETIRAR EL AGUA SOBRANTE.

AADIR EL AGUA OXIGENADA Y OBSERVAR EL RESULTADO

HIDRLISIS DEL ALMIDON:

PONER EN UNA GRADILLA 4 TUBOS DE ENSAYO, Y AADIR EN CADA TUBO 5 Ml DE UNA SOLUCION DILUIDA DE ALMIDON

A LOS TUBOS 3 Y 4 AADIR UNA PEQUEA CANTIDAD DE SALIVA. EN EL TUBO 1 HAZ LA REACCION DE FEHLING Y EN EL 2 LA REACCION DE LUGOL

DESPUES DE 15min EN EL TUBO 3 Y 4 CON SALIVA HACER LA REACCION DE FEHLING Y LUGOL RESPECTIVAMENTE

EXTRACCION DEL ADN:

TRITURAR MEDIO HIGADO DE POLLO EN UN MORTERO CON AYUDA DE ARENA. LUEGO AADIR 50 cc DE AGUAY REMOVER HATSTA HACER UNA PAPILLA

FILTRAR VARIAS VECES SOBRE UNA TELA. MEDIR EL VOLUMEN FILTRADO CON UNA PROBETA

AADIR AL FILTRADO UN VOLUMEN IGUAL DE CLORURO SODICO 2M. LUEGO AADIRLE DETERGENTE. AADIR 50 cc DE ALCOHOL. INTRODUCIR UNA VARILLA DE VIDRIO E IR REMOVIENDO EN LA MISMA DIRECCION

RESULTADOS RECONOCIMIENTO DE LA CATALASA: Se observo un intenso burbujeo instantneo debido al desprendimiento de oxigeno tanto en el hgado como en el tomate. HIGADO

DESNATURALIZACION DE LA CATALASA: Luego de hervir el hgado y el tomate, al adicionar el agua oxigenada no produjo ninguna reaccin, puesto que se llevo a cabo un proceso de desnaturalizacin. HIGADO

HIDRLISIS DEL ALMIDON: Despues de la reaccin nos damos cuenta que en los tubos con saliva la reaccin de fehling y de fenol fueron de color verde y transparente respectivamente, y por otro lado los tubos sin saliva en las reacciones de fehling y del fenol fueron de color azul y un color grisaseo respectivamente. Saliva sin saliva

EXTRACCION DEL ADN: Luego de realizar el procedimiento, sobre la varilla se fueron adhiriendo unas fibras blancas, visibles a simple vista, lo cual son el resultado de la agrupacin de muchas fibras de ADN.

ANALISIS DE RESULTADOS

De acuerdo con los resultados obtenidos en la prctica, se ponen en manifiesto la presencia de diferentes enzimas tanto en tejidos vegetales como animales, asi logrando saber en qu momento, estas inician sus procesos, y adems saber que lo hacen ante la presencia de ciertas sustancias.

BIBLIOGRAFIA Anlisis qumico H. Harris Laitinen, Herbert A. Laitinen http://es.wikipedia.org Chang, R. Quimica. Megraw-Hili, Mexico, 1994